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서필 공
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1 Polymer(Korea), Vol. 37, No. 3, pp ISSN X(Print) ISSN (Online) 경피전달을위한커큐민젤의창상치유효과 김진 김만종 이기영 *, 전남대학교신화학소재공학과, * 전남대학교응용화학공학부 & 촉매연구소 (2012년 12월 26일접수, 2013년 1월 7일수정, 2013년 1월 8일채택 ) Wound Healing Effect of Curcumin Gel for Transdermal Delivery Jin Kim, Man Jong Kim, and Ki-Young Lee*, Department of Advanced Chemicals and Engineering, Chonnam National University, Gwangju , Korea *Faculty of Applied Chemical Engineering & The Research Institute for Catalysis, Chonnam National University, Gwangju , Korea (Received December 26, 2012; Revised January 7, 2013; Accepted January 8, 2013) 초록 : 이연구의목적은 curcumin 함유젤을쥐의손상된등부위조직에적용하여경피전달에따른창상치유효과를관찰하였다. 카보머 934 와프로필렌글리콜을이용하여 curcumin 함량이 1% 인젤을제조하였다. Curcumin 자체의항산화능과함유젤의세포독성, 항염증의효과를평가하였다. 1,1-Diphenyl-2-picryl hydrazyl(dpph) 로관찰한자유라디칼소거능은 12.5 ppm 농도에서 50% 저해능을관찰하였다. Curcumin 젤은 RAW 세포에서 lipopolysaccharide(lps) 로유도한 nitric oxide(no) 생성이억제되는것을확인했다. In vivo 동물실험에서 curcumin 젤의처치그룹이 curcumin 이함유되지않은젤과비교했을때창상부위의재상피화의경향이확연히증가된것을실험기간동안관찰할수있었다. 이연구는결과적으로 curcumin 젤은상처치료의증진을도와주는것을알수있었다. Abstract: The aim of this study was to investigate the effect of trasdermal delivery of the curcumin gel on healing of the rats dorsum wounds. Carbopol 934 and propylene glycol were used to prepare gels containing 1% curcumin. Curcumin gel was evaluated for various properties such as antioxidant, cell viability, anti-inflammatory, in vivo wound healing. The free radical scavenging activity using 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl (DPPH) was 50% at 12.5 ppm concentration. Inhibition of nitric oxide (NO) production in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated RAW cells by curcumin gel. In the curcumin gel-treated group, the re-epithelialization in wounds was significantly increased compared to the control group throughout the experimental period. These results suggested that curcumin may be helpful for the promotion of wound healing. Keywords: curcumin, cosmeceuticals, transdermal delivery, re-epithelialization. 서 피부는인체를보호하는기능을갖는기관으로피부가손상을입게되면위험한상황에노출된다. 외부에서가해진힘에의한외상, 피부질환에의한피부손상, 화상들과같은피부의결손이형성되면빠른피부조직재생과재생된조직의흔적을최소화하기위해많은노력을한다. 따라서손상된피부조직이부작용없이복구되도록신속한치료가필요하며적절한상처치료제를이용한상처치료가필수적이다. 많은의약품의발달로창상등의상처치료제의연구가활발히이루 론 To whom correspondence should be addressed. kilee@chonnam.ac.kr 어지고있다. 1 하지만, 산화적손상으로조직복구와상처치유를목적으로사용되는화학합성물질이많이개발되어있지만내성에의한부작용으로장기적인적용이불가능하여기존화학합성물질을대신할수있는천연물치료제개발이활발히진행중이다. 2,3 피부손상의치료를위해서사용되는기존합성화합물을대신하여부작용없이사용할수있는천연물소재로알려진병풀 (Centella asiatica) 의주요성분인 asiaticoside 가함유된마데카솔피부연고제와고대부터화상및상처치료제로알려진알로에베라젤그리고부작용을줄이면서창상치유를촉진시키는프로폴리스등천연소재물질이함유된젤, 연고제제가상용화되어판매되고있다. 4-6 울금 (Curcuma longa) 의주요성분인 curcumin 은향신료로 387

2 388 김진 김만종 이기영 많이쓰이며, 오랫동안항산화, 항염증, 해독작용등의다양한생리활성이있는것으로알려져있어그기능적가치가더욱높아지고있다. 7 국내에서는오혜인등에의해울금에함유된 curcumin 의성분및효능이연구되었으며, 울금추출물의플라보노이드와폴리페놀의함량증가에따라항염증효과와밀접한관계를보고하였다. 8 하지만, curcumin 은물에용해되지않는난용성성질과강한맛과색, 독특한향을가지고있어식품, 의약품, 화장품에활용하기위해서는해결해야할문제점들이있다. 국외에서의선행연구는경피전달을용이하게하기위해나노캡슐화한 curcumin 을하이드로젤형태로제조하여실험을진행하였고상처부위의콜라겐이빠르게형성되는것을보고하였다. 9 이러한 curcumin 이상처치료에효과적으로작용하기위해서 curcumin 의나노입자화, 하이드로젤화등이필요하다. 본연구에서는무독성이며, 경피전달을위한젤제형에 curcumin 의상처치료효과를확인하기위해젤제형에 curcumin 을첨가하여 curcumin 젤의생리활성을관찰하고도포가능한형태로제형화하여피부손상치료제및약품, 화장품소재재료의활용가능성을관찰하였다. 실 시약. 본실험에사용한 curcumin과항산화능및항염증측정실험에사용된 1-1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH), tannic acid, gallic acid, folin-ciocalteu phenol reagent 및 Griess 시약등은 Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA) 에서구입하였다. 세포독성측정에사용된대식세포의일종인 RAW 264.7세포는 Korean Cell Line Bank (KCLB) 에서구입하여실험에이용하였다. 세포배양액인 Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM), fetal bovine serum (FBS), penicillin-streptomycin 등의세포배양용시약들은 Invitrogen (Gibco TM, Carlsbad, CA, USA) 사에서구입하였다. Curcumin의생리활성정량. 총폴리페놀함량은 1mg/mL 로고정농도로제조하여희석한시료용액 3mL에 folinciocalteu phenol tragent 시약 1mL를가하고, 포화용액 Na 2 CO 3 1mL를가하여혼합한후 1시간실온에서방치하고, 700 nm에서흡광도를측정한후, 표준물질인 tannic acid와 gallic acid로미리작성한표준곡선의흡광도값을비교하여폴리페놀함량을산출하였다. 10 총플라보노이드의함량은증류수에녹인시료용액 1mL에 diethylene glycol 10 ml 및 NaOH 1 ml를가하고잘혼합한후 1시간실온에서반응시킨후 510 nm에서흡광도를측정하였다. 이때검정곡선은 qurcetin을이용하여산출하였다. 또한항산화효과를측정하기위한전자공여능을측정하였다. 11 각시료용액 2mL에 0.2 mm의 DPPH 1 ml 넣고교반한후 30분간암실에서방 험 Table 1. Compositions of Gel Formulations (Total volume: 100 ml) Ingredients Formulations Curcumin (%, w/w) 1 Carbopol 934 (%, w/w) 2 Propylene glycol 2 ml Ethanol 5 ml Triethanolamin q.s to neutralize the gel base Water q.s *q.s: Quantum satis, quantum sufficit. 치한후 517 nm에서흡광도를측정하였다. 전자공여능은시료용액의첨가군과무첨가군의흡광도감소율로나타내었다. 12 Curcumin이첨가된젤제조. Curcumin 젤의제조는기존의연구된제조법을변형하여제조하였다. Curcumin 분말을 Table 1에서같은조성에첨가하여젤제형을실험에이용하였다. 13 세포독성측정. 세포생존율측정은 14 MTT assay 방법에따라측정하였다. Curcumin이첨가된젤을세포배양액 (DMEM, Dulbecco's modified Eagle's medium, Gibco) 에 6.25, 12.5, 25, 50, 100 ppm의농도로넣고 37 o C에서 24시간이상배양하여용출액을제조하였다. MTT assay법은 MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide) 시약이세포내로흡수된후미토콘드리아의 succinate dehydrogenase에의해 formazan을형성한다. 96 well plate에각 well 당 RAW 세포 cells/well를분주하고 24 시간후다양한농도로제조한 curcumin을함유한 DMEM 배양액으로갈아준후 24시간동안 37 o C, 5% CO 2 조건에서배양하였다. Well 당 20 µl의 MTT 용액을첨가하여 37 o C, 5% CO 2 조건에서 4시간동안반응시킨후, 배양액을버리고 DMSO 100 µl씩넣어 formazan을용해한후, ELISA 측정기 (ELX 808, Biotek Instruments, Vermont, USA) 를이용하여 570 nm에서측정하였다. 일산화질소생성량측정. 일산화질소 (NO) 생성량을측정하기위해 NO 농도는배양내의 nitrite 농도를측정하였다. 48 well plate에 RAW 264.7세포가 cell/well이되도록분주한후 12시간배양하였다. 다양한농도의 curcumin 젤을지질다당체 (lipopolysaccharide, LPS) (100 ng/ml) 와함께처리하여 24시간배양한후, 세포배양액을얻어배양액중에함유된 NO의양은 Griess 시약을이용하여측정하였다. 각실험은독립적으로 3회반복실행하여평균치를구하였다. 실험동물. 체중 180~220 g의 6주령 sprague-dawley (SD) 종수컷흰쥐를 ( 주 ) 오리엔트바이오 (Seongnam, Korea) 에서구입하여 25±1 o C, 습도 50±10% 을유지하고명암은주야 12시간으로자동조절하였다. 또한사료와물은자유롭게섭취하 폴리머, 제 37 권제 3 호, 2013 년

3 경피전달을위한커큐민젤의창상치유효과 389 도록하였으며, 모든실험동물은 1 주동안동물실환경에적응시킨후, 실험에사용하였다. 동물실험은전남대학교용봉캠퍼스동물실험윤리위원회에적합함을승인받고 (CNU IACUC-YB ) 실험하였다. 창상실험. 실험대상 SD 쥐를마취전 24 시간동안절식시켰고, 물은공급하였다. 모든실험군에서창상유발한시간전졸레틸과럼푼을 1:2 비율로혼합하여 0.1 cc/kg 사용하여근육주사로마취시킨후, 전기제모기로백서의등부위털을제거하였다. 등부위에 10% povidine-iodine 과 70% ethanol 을각각도포하여소독한뒤, 등부위에소독된수술용가위를이용하여직경 2cm 2cm 의크기로진피층을포함한전층결손창상을유발하였다. Curcumin 함유젤의창상치유효과를측정하기위해 curcumin 이들어있지않은대조군젤과 curcumin 이함유된젤을처치한실험군은각각 5 마리에약 3mL 씩경과일에따라 4 차례도포하였다. 이후젤의손실을방지하기위해멸균된거즈 (Tegaderm; 3M Health Care, USA) 를덮고, 그위에탄력밴드 (Coban; 3M Health Care, USA) 로움직임에지장이없도록감아주었다. 육안적상처변화의관찰. 상처치료의진행과정을관찰하기위해창상유발시작점부터 5 일간격으로 digital camera (CAMEDIATM, Olympus Co., Tokyo, Japan) 를이용하여각군별로일정거리에서촬영하여상처의변화를육안적으로관찰하였다. 또한객관적인지표로나타내기위하여 digital calliper Mitutoyo Co., Kawasaki, Japan) 창상의면적을측정하였다. 창상치유율은창상부의면적변화를선행연구에서 3,15 제시한방법으로계산하였다. 창상치유율 (%) = 100 W o U i W o 기간별치료점유율 (%) = 100 U b U i W o : 창상유발직후창상부면적 U i : 측정일창상부면적 U b : 이전측정일창상부 조직학적검사. 창상유발후 20 일경과한후실험동물은보건복지부고시제 88-9 호의실험동물관리지침서등에관한기준에명시된향정신성약의과잉투여에의한방법에따라 ethyl ether 를이용하여조직검사용실험동물을안락사시켰다. 원형창상전체가포함된조직을채취하고, 10% 중성 formalin 용액에 24 시간고정한후, 창상중앙을통과하는절 W o 편을취하여탈수시킨후파라핀블록에포매하였다. 조직을조직절편기를이용하여절단한다음 polylysine 으로코팅된슬라이드에붙여파라핀제거및함수과정을거친후 Hematoxylin-Eosin (H & E) 염색을실시하였다. 통계처리. 모든실험결과는평균값 (mean) 과표준편차 (standard deviation, SD) 로표시하였다. 대조군과실험군사이의통계학적유의성검정은 Student's t-test 로비교하였으며 p 가 0.05 이하인것만유의한것으로하였다. 결과및토론 총폴리페놀및항산화능. 천연물내의폴리페놀은한분자내에 2 개이상의 phenolic hydroxyl 을가진방향족화합물이며항암, 항염증의효과를지니고있는항산화성생리활성물질이다. 특히 vitamin C 와같은항산화물질의경우상처부위재생에필수적인콜라겐합성을유도하여상처재생에꼭필요한요소이다. 3,9,15 실험에사용한 curcumin 의총폴리페놀함량을구하기위해 tannic acid 와 gallic acid 로제조된표준물질을기준으로함량을계산하였다. 실험에사용된 curcumin 의총폴리페놀함량은표준물질에따라 330±0.024, 450±0.018 mg/g 인것을확인하였다. 플라보노이드또한 qurcetin 을표준물질로하여측정한결과 370±0.004 mg/g 였다. 폴리페놀과폴라보노이드의함량이높을수록항산화능이높으며항염증및피부재생에효과적인것으로알려져있다. 16 Curcumim 젤제조시 1g 의 curcumin 내에함유되어있는폴리페놀과플라보노이드의함량을알수있다. 전자공여작용은분자내라디칼을가지고있는 DPPH 를이용하여다른자유라디칼들과결합하면안정한 complex 를만들지만항산화활성이있는물질과결합되면라디칼이소거되는원리로비색정량하여 6.25, 12.5, 25, 50, 100 ppm 의농도로측정해본결과 12.5 ppm 농도에서항산화능의생리활성을 50% 감소시키는저해물질의농도 (inhibitory concentration, IC 50 ) 값을나타냈다 (Table 2). 세포독성및항염증실험. MTT assay 를이용하여관찰한 curcumin 함유젤의세포독성평가는모든농도에서 80% 이상으로독성이없는것으로볼수있음을 Figure 1 에서확인할수있다. 실험결과각농도의물질처리에서세포가모두 80% 이상의생존율을보여본실험에이용된젤은세포독성이없는생체소재로활용이가능하며, 다양한생체재료로의응용도예측할수있다. NO 는대식세포등의면역세 Table 2. Antioxidant Activity, Flavonoid and Phenolics Contents of Curcumin Sample Tannic acid Phenolic contents (mg/g) Gallic acid Flavonoid contents (mg/g) Electron donating ability IC 50 (ppm) Curcumin 330± ± ± All values are mean ±SD of triplicate determinations. Polymer(Korea), Vol. 37, No. 3, 2013

390 김진 김만종 이기영 Figure 1. Effect of curcumin gel on the cell viability of RAW 264.5 cells. Data presented as means±s.d. of three independent experiments. Figure 2.

4 390 김진 김만종 이기영 Figure 1. Effect of curcumin gel on the cell viability of RAW cells. Data presented as means±s.d. of three independent experiments. Figure 2. Inhibition of LPS-induced NO production by curcumin gel. Data presented as means±s.d. of three independent experiments. 포로부터생성되어혈관을확장시키거나암조직의성장을억제하고, 바이러스나세균들의증식을저해하거나직접사멸시키는등인체면역염증반응에있어서중요한역할을하지만과잉배출시만성염증질환악화등의문제점이발생되기도한다. 지질다당체로산화적스트레스를유발시킨 RAW 세포에서생성되어배양액중으로유리된 NO 의농도를 NO -2 의형태로 Griess 시약으로정량화했다. NO 가매우불안정하며 NO -2 형태로즉시변환되기때문에 LPS 를처리한군은 LPS 를처리하지않은군보다 NO 생성이 50 배가량증가되었으며, 이러한 LPS 로산화적스트레스를유발시킨연구는많이보고된바있다. 8,17 산화적스트레스유발상황에서 curcumin 은 NO 의생성을농도의존적으로억제하였고, 이때 curcumin 함유젤의 IC 50 값은 43.27±1.25 ppm 으로나타났다 (Figure 2). 산화적스트레스유발상황에서 curcumin 의 NO 생성억제작용은 curcumin 의항산화, 항염증효과에기인한것으로상처치유와세포재생에밀접한관련이있을것으로기대된다. 젤의점도. Patel 등의 13 방법에따라, curcumin 분말 1% 가함유된젤과아무런물질이첨가되지않은대조군젤을조제하였는데젤화제로카보머 940 을넣을때, 거의점성이없었으므로트리에탄올아민 1.3 ml 을가하여 ph 7 을조정하여산도와점도를유지시켜실험에사용하였다. 제조된젤의점도는대조군젤은 cps 이고, curcumin 함유젤은 cps 로일반알로에베라젤의점도 cps 와비교했을때큰차이는없었다. 피부조직의광학현미경적관찰. Figure 3(a) 는창상유발당일에서창상유발후 20 일경과시점까지창상유발군의대조군 (control group) 과 curcumin 함유젤을처치한실험군 (experimental group) 에서선택한동일개체의창상부분을 5 일간격으로촬영하여상처치료과정중 curcumin 처리에의한효력을평가하기위해 SD 쥐의등쪽피부에창상을유발후, 이과정에서일어나는피부조직의변화를관찰하였다. 상처에 curcumin 의도포로인해창상치료과정이활발해짐을관찰할수있었다. Curcumin 을처리한군에서절개된상처의표피화와수축이더빨라졌고창상면적에있어서도대조군인 curcunim 이첨가되지않은도포군과비교하여확연하게줄어들었다. Figure 3(b) 는 SD 쥐피부의 H&E 염색후대조군과실험군을관찰하였다. 실험군은대조군에비해상피층의표면두께가균일하며표층이빠르게형성되어있으며, 대조군에비해염증정도가적은것을관찰할수있었다. 창상치유율의변화는 Figure 3(c) 와같이측정되었다. 창상치유율은창상유발후 5 일째실험군 26.28±1.03%, 대조군 ±0.64%, 10 일째에실험군 46.67±1.46%, 대조군 38.21±0.66%, 15 일째에실험군 81.4±0.47, 대조군 70.21±0.91%, 20 일째에실험군 90.19±0.35, 대조군은 81.4±1.24% 로측정되었다. 창상유발후 5 일째부터실험종료까지창상치유율은실험군이대조군보다유의성있게높았다 (p<0.05). 이현성등의 3 선행연구에서비타민 C 가다량함유되어있는백년초 (Opuntia ficusindica) 추출물을처리한연구는창상수축이 50% 에도달하는기간이 8 일째였다. Curcumin 함유젤또한 10 일째에 46.67±1.46% 창상수축을확인하였다. 또한기간별치료점유율변화는 Figure 3(d) 와같이측정되었다. 0 일에서 5 일사이실험군은 26.28±1.03%, 대조군 13.57±0.64% 이며, 5 일에서 10 일사이에실험군은 29.66±0.95, 대조군 17.35±1.04 로측정되었다. 창상유발당일에는모든창상유발군에서혈액과삼출및염증이분비되고, 이러한급성염증성변화는창상유발후 10 일까지지속되었다. 특히창상유발 5 일경과후대조군의창상에서는염증성삼출액의양이많아이물질이상처에자주부착되었다. 이에반에 curcumin 함유젤을처치한군에서는염증반응이억제되어부종과삼출액분비가감소되었다. 폴리머, 제 37 권제 3 호, 2013 년

5 경피전달을위한커큐민젤의창상치유효과 391 Figure 3. Comparisons of wound size and scar size changes between the control group and the experimental group (treated-curcumin gel) at the 0, 5, 10, 15 and 20 days after curcumin gel treatment in which continuous clinical observation were made in the same rats: (a) macroscopic appearance of wound on control, experimental treated-rats on 20 day post-wounding; (b) microscopic findings of the skin in rats. 20 days after control group and experimental group application; (c) wound healing rate (repaired wound size) in the experimental group and the control group; (d) occupational rate of wound healing in the experimental group and the control group (*; p<0.05, **; p<0.01). 창상유발 13 일경과후부터는더이상의삼출액분비가없었으며, 상처면적이감소하면서상처가회복하기시작하였다. 상피의재생정도는실험군이대조군에비해다수관찰되었으며, 대조군으로상피는성숙되지않은반면, 실험군의상피는빠르게성숙되어각화층이관찰되었으며 Sidhu 등의 7 보고처럼 curcumin 은 fibronectin 과 factor-β1 의성장을유도하고세포사를줄여주어 re-epithelialization 의향상을유도하여상처치유력을확인한결과를발표하였다. 이러한결과를종합하여 curcumin 을함유시킨젤은창상에치료효과가있는것을관찰할수있었다. 결 본연구는경피전달이용이한 curcumin 함유젤의상처치료제에대한활용가능성을관찰하였다. Curcumin 젤의생리학적특성을관찰하기위해 DPPH 자유라디칼소거능과세포독성및지질다당체로유발시킨일산화질소의소거능에대한연구를진행하였다. 또한외과적인창상을유도하여 SD 쥐에서의 curcumin 함유젤의효능을관찰하였다. 론 Curcumin 의항산화활성검증에서는 12.5 ppm 에서약 50% DPPH 라디칼소거능을보였으며, 총폴리페놀함량을구하기위해 tannic acid 와 gallic acid 을표준물질로함량을계산하였다. 표준물질에따라 330±0.024, 450±0.018 mg/g 인것을확인하였다. 플라보노이드또한 qurcetin 을표준물질로하여측정해본결과 370±0.004 mg/g 으로나타났다. MTT assay 로관찰한농도별 curcumin 함유젤의세포독성은 80% 이상의세포생존율을보였으며, LPS 로활성화된 RAW264.7 세포에서 NO 발생을관찰한결과 curcumin 함유젤을농도별로처리하여 24 시간배양한후관찰결과 NO 의생성량이유의하게억제되는것을확인할수있었다. Curcumin 의창상에대한치유력측정에서는실험군인 curcumin 함유젤의처리군이 0 일에서 5 일사이에실험군은 26.28±1.03%, 대조군은 13.57± 0.64% 로나타났다. 20 일을경과했을때실험군은상피가대조군에비해성숙되어, 창상치유목적으로 curcumin 을사용하게되면, 창상폐쇄기간을앞당기고, 세포의재생에도움을주어창상치유에효과적으로이용가능함을알수있었다. 본연구는위와같은결과를근거로 curcumin 은다양한생리활성성분을가진천연물로젤제형에함유시킨 curcumim Polymer(Korea), Vol. 37, No. 3, 2013

6 392 김진 김만종 이기영 젤은미백개선및피부상처치료에효과가있는화장품치료제 (cosmeceutical) 와창상치료제의소재로활용이가능할것으로사료된다. 감사의글 : 본연구는교육과학기술부와한국연구재단의지역혁신인력양성사업에의해지원되었으며이에감사드립니다. 참고문헌 1. G. Sun, X. Zhang, Y. I. Shen, R. Sebastian, L. E. Dickinson, K. Fox-Talbot, M. Reinblatt, C. Steenbergen, J. W. Harmon, and S. Gerecht, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 108, (2011). 2. J. Kim, Y. M. Kim, D. W. Kim, and K. Y. Lee, J. Exp. Biomed. Sci., 18, 175 (2012). 3. H. S. Lee, J. T. Cheong, H. J. Park, T. K. Shin, J. H. Kim, and J. M. Lee, J. Vet. Clin., 22, 43 (2005). 4. M. Blonska, J. Bronikowska, G. Pietsz, Z. P. Czuba, S. Scheller, and W. Krol, J. Ethnopharmacol, 91, 25 (2004). 5. B. G. Campling, J. Pym, H. M. Baker, S. P. Cole, and Y. M. Lam, Br. J. Canc., 63, 75 (1991). 6. W. F. Chiou, C. J. Chou, and C. F. Chen, Life Sci., 69, 625 (2001). 7. G. S. Sidhu, A. K. Singh, and D. Thaloor, Wound Repair Regen., 6, 167 (1998). 8. H. I. Oh, H. B. Park, M. S. Ju, S. Y. Jung, and M. S. Oh, The Korea Association of Herbology, 25, 83 (2010). 9. R. Li, X. Qiao, Q. Li, R. He, M. Ye, X. Lin, and D. Guo, J. Chrom. B., 879, 2751(2011). 10. O. Folin and W. Denis, J. Biol. Chem., 12, 239 (1912). 11. M. S. Blois, Nature, 181, 1199 (1958). 12. R. G. Woisky and A. Salatino, J. Apicul. Res., 37, 99 (1998). 13. N. A. Patel, M. Patel, and R. P. Patel, J. Pharm., 1, 15 (2011). 14. B. G. Lee, S. H. Kim, O. P. Zee, K. R. Lee, H. Y. Lee, J. W. Han, and H. W. Lee, Eur. J. Pharmacol., 406, 301 (2000). 15. K. T. Hwang, O. K. Kweon, H. M. Woo, D. Y. Kim, and T. C. Nam, J. Vet. Sci., 39, 645 (1999). 16. R. T. Narendhirakannan, J. G. Nirmala, A. Caroline, S. Lincy, M. Saj, and D. Durai, Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine, 12, 1245 (2012). 17. A. M. Rasik and A. Shukla, Int. J. Exp. Path., 81, 257 (2001). 폴리머, 제 37 권제 3 호, 2013 년

Journal of Life Science 2011, Vol. 21. No μ μ

Journal of Life Science 2011 Vol. 21. No. 8. 1120~1126 ISSN : 1225-9918 DOI : http://dx.doi.org/10.5352/jls.2011.21.8.1120 μ μ μ α β Journal of Life Science 2011, Vol. 21. No. 8 1121 μ μ 1122 생명과학회지 2011,