The Korean Journal of Pathology 2007; 41: 난소상피암에서현미부수체불안정성분석 설미영 1,2 최경운 1 김지연 1 강현정 1 신동훈 1 김익두 1 최효선 3 서순정 3 부산대학교의학전문대학원 1 병리학교실 2 의학연구소, 3 이

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창훈 견
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1 The Korean Journal of Pathology 27; 41: 38-6 난소상피암에서현미부수체불안정성분석 설미영 1,2 최경운 1 김지연 1 강현정 1 신동훈 1 김익두 1 최효선 3 서순정 3 부산대학교의학전문대학원 1 병리학교실 2 의학연구소, 3 이수앱지스 Analysis of Microsatellite Instability in Ovarian Epithelial Cancer Mee Young Sol 1,2, Kyung Un Choi 1, Jee Yeon Kim 1, Hyun Jeong Kang 1, Dong Hoon Shin 1, Ik Doo Kim 1, Hyo Seon Choi 3 and Soon Jung Seo 3 Department of 1 Pathology and 2 Medical Research Institute, School of Medicine, Pusan National University, Busan; 3 ISU ABXIS CO. LTD, Seoul, Korea 접수 : 27 년 4 월 13 일게재승인 : 27 년 1 월 29 일 책임저자 : 최경운우 부산시서구아미동 1 가 1 부산대학교의학전문대학원병리학교실전화 : Fax: kuchoi@pusan.ac.kr * 본논문은 25 년도부산대학교의학연구소연구비 (25-16) 에의하여연구되었음. Background : The aim of this study was to clarify the incidence and role of microsatellite instability (MSI) in sporadic ovarian epithelial cancers (OEC). We investigated the MSI status and mismatch repair (MMR) protein expression in OEC. Methods : MSI was examined by fluorescence-based polymerase chain reaction using five NCI panel markers (BAT25, BAT26, D2S123, D5S346 and D17S25) in 46 cases of OEC. Immunohistochemistry (IHC) for hmlh1 and hmsh2 was performed. Results : Seven cases (15.2%) exhibited high-frequency MSI (MSI- H), one exhibited low-frequency MSI (MSI-L), and the remaining 38 demonstrated microsatellite stability (MSS). MSI-H in OEC was not associated with histologic grade, FIGO stage, tumor size, mitoses or histologic type. Loss of expression of either hmlh1 or hmsh2 was observed in 4 of the 7 (59.3%) MSI-H cases, whereas 4 of the 39 (1.3%) MSI-L or MSS tumors revealed loss of expression of MMR proteins. The sensitivity and specificity of immunohistochemistry for hmlh1 and hmsh2 were 57.1% and 89.7%. Conclusions : Our data suggest that a genetic defect in the MMR system might play a role in the carcinogenesis of a minor subset of sporadic OEC however, immunohistochemical testing for hmlh1 and hmsh2 cannot accurately determine microsatellite instability status in OEC. Key Words : Microsatellite instability; Ovarian neoplasm; hmlh1; hmsh2; Immunohistochemistry 현미부수체불안정성 (microsatellite instability, MSI) 은 DNA 불일치복구유전자 (mismatch repair system, MMR) 의이상으로야기되며, 유전성비용종대장암 (hereditary nonpolyposis colorectal cancer, HNPCC) 과관련된종양에서흔히발견된다. 1,2 MMR의손상은주로대표적인 MMR 유전자인 hmlh1 또는 hmsh2에 germline mutation이발생하거나 promoter methylation으로인한 epigenetic silencing에의해유전자가불활성화됨으로써일어난다. MSI는여러종류의암에서연구되어 MSI 를가진종양의임상병리학적특징및예후와의관련성뿐아니라, 암종발생 (carcinogenesis) 과정에도기여하는것으로보고되고있다. 3 미국국립암연구소 (national Cancer Institute, NCI) 에서는 1997년에두개의 mononucleotide와세개의 dinucleotide 로이루어진다섯개의현미부수체표지자를제시하였는데, 두개이상의표지자에서불안정성을보이면 high-frequency MSI (MSI-H) 로하고, 한개의표지자에서만불안정성을보이면 lowfrequency MSI (MSI-L) 로, 모두불안정성을보이지않으면 microsatellite stable (MSS) 로정의하였다. 2 가장많이알려진대장암에서의연구를살펴보면, 대장암에서 MSI는 HNPCC에서는 9% 까지그리고산발성대장암에서는약 2% 에서관찰되어대장암발생과정에기여하는중요한요소중하나로생각된다. 또한 HNPCC의경우 MSI를보이는암종이그렇지않은암종에비해좋은예후를가지는데, 이러한경향은산발성대장암의경우다양하게보고된다. 1-5 위암의경우 15-3% 에서 MSI 가보고되는데 MSI 가보이는선암이좋은예후를보이는경향이있다. 6 자궁내막암은 HNPCC와관련되어발생하는경우 75% 에서 MSI를나타내고, 비가족성자궁내막암의경우 2-25% 에서 MSI를보이는데, 대개자궁내막형암종에해당하고 MSI 표현형자궁내막암이좀더나은예후를보인다고한다. 7,8 그러나, 전립선암은오히려 MSI 를보이는예에서고등급의암종을보이고림프절전이도더많이나타나서 9 MSI 는종양마다각기다른빈도 38

2 난소상피암에서현미부수체불안정성 381 와역할을하는것으로추측해볼수있다. 난소상피암에서 MSI의빈도와역할은매우다양하게보고된다. 7,1-25 산발성난소상피암에서 MSI 빈도는 -53% 로보고되는데, 난소상피암에서현미부수체불안정성을분석한국내연구는없다. 본연구는산발성난소암종의파라핀포매조직을이용하여미국국립암연구소에서추천하는표준현미부수체다섯개유전자자리를조사하여현미부수체불안정성의빈도를조사하고 hmlh1과 hmsh2 단백발현과의관계를분석하였다. 재료와방법연구재료 2년 1월부터 26년 12월까지부산대학교병원에서수술로절제한난소상피암중 DNA 보존상태가양호한 46예를대상으로하였다. 증례의연령분포는 17세부터 72세 ( 평균 48.1세 ) 였다. 헤마톡실린에오신염색표본들을 WHO 분류에따라분류한결과장액성 13예, 점액성 13예, 자궁내막성 5예, 투명세포 13예그리고미분화암종이 2예였다. Silverberg 종양등급체계에 26 의하여난소상피암의조직학적등급 (histologic grade) 을 I, II, III으로구분하였는데, 저등급 (G1) 14예, 중등급 (G2) 27예, 고등급 (G3) 5예였고, FIGO 병기는 I기 27예, II기 6예, III기가 9예그리고 IV기가 4예였다. 각증례의대표적인파라핀포매괴 ( 종양세포가 75% 이상을차지 ) 를선택하여제작한슬라이드로면역조직화학염색을시행하였고, 현미부수체불안정성분석을위한 DNA 추출에이용하였다. 정상 DNA 추출은수술시함께얻어진비종양조직 ( 자궁, 난관, 또는반대편난소 ) 을사용하였다. DNA 추출과 MSI 분석은이수앱지스에의뢰하였다. DNA 추출및현미부수체불안정성분석 종양조직과정상조직을각각 1.5 ml microcentrifuge tube에넣은후 QIAamp DNA mini kit (QIAGEN, Hilden, Germany) 를사용하여 DNA를추출하였다. 단백질제거를위해 18 L 의 ATL buffer와 2 L의 proteinase K를넣고 56 에서완전히녹을때까지반응시킨후 AL buffer 2 L를넣고 7 에서 1분간반응시켰다. 2 L 1% 에탄올을첨가하여섞은후 QIAamp spin column (QIAGEN, Hilden, Germany) 에넣어 1분간원심분리 (8, rpm) 하였다. Column에 5 L의 AW1 buffer를넣고 1분간원심분리 (8, rpm) 후, 다시 AW2 buffer 5 L를넣어 3분간원심분리 (13, rpm) 하였다. Column 을깨끗한 1.5 ml microcentrifuge tube로옮기고, AE buffer 2 L를넣어 1분간반응후 1분간원심분리 (8, rpm) 하여 DNA 를분리하였다. 분리된 DNA 는 ND-1 Spectrophotometer (NanoDrop, Wilmington, USA) 을이용하여정량하였다. MSI 분석은미국국립암연구소에서권장하는다섯개의현미부수체표지자 (microsatellite marker; BAT26, D5S346, BAT 25, D17S25, D2S123) 를형광표지시발체를이용한중합효소연쇄반응을통하여측정하였다. 초기변성과정은 95 에서 15분간시행하고, 94 에서 1분, 58 에서 1분, 72 에서 1분으로총 3주기시행한후, 최종증폭과정을 72 에서 5분간시행하였다. 반응이끝난시료에 GeneScan 5 ROX size standard (Applied Biosystems, Foster, CA, USA) 와 Hi-Di Formamide (Applied Biosystems, Foster, CA, USA) 1 L을섞은후 95 에서 5분간반응시키고얼음에넣어차갑게하였다. 위시료를 31 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, Foster, CA, USA) 에서 fragment analysis를시행하였다. 면역조직화학염색 4 m 두께의절편을얻어탈파라핀한후여러농도로희석한알코올로씻어냈다..1 M citrate buffer (ph 6.) 에넣고가압증기멸균기에서 12 로 1분간가열하여항원성을증가시켰다. 내인성과산화효소가작용하지않도록 3% 과산화수소수를이용하여 3분간처리하였다. 면역조직화학염색은 Vectastain ABC elite kit (Vector laboratories, Burlingame, CA, USA) 를사용하였다. 먼저 5% 정상염소혈청으로비특이적인항원-항체반응을억제한후, 1차항체인 hmlh1 (G168-15; BD biosciences, San Jose, CA, USA) 과 hmsh2 (25D12; NeoMarkers, Fremont, CA, USA) 를 1:1으로희석하여사용하였다. 발색은 Diaminobenzidine (DAB) 로하였으며대조염색은 Mayer 헤마톡실린을이용하였다. 세포의핵에갈색으로염색될때양성으로판정하였는데, 종양세포에서양성세포가발견되지않을때 hmlh1과 hmsh2의발현이소실된것으로정의하였다. 슬라이드에함께포함된종양세포주변의림프구또는간질세포를내부양성대조군으로하였다. 통계학적분석통계학적처리는 SPSS version 1. (SPSS Inc., Chicago, USA) 통계프로그램을이용하여 Pearson 2 검정을하였고유의수준은 p<.5로정하였다. 면역조직화학염색소견의민감도, 특이도, 양성예측도및음성예측도를구하였다. 민감도는 MSI-H 예중면역조직화학염색결과음성인예의비율로, 특이도는 MSS 또는 MSI-L 인예들중면역조직화학염색결과양성인예의비율로하였으며, 양성예측도는면역조직화학염색이음성인예들중 MSI-H 인경우의비율로, 음성예측도는면역조직화학염색이양성인예들중 MSS 또는 MSI-L 인예들의비율로하였다.

382 설미영 최경운 김지연외 5 인 BAT26 D5S346 BAT25 D17S25 D2S123 BAT26 D5S346 BAT25 D17S25 D2S123 2 1 6 4 2 6 4 2 4, 3, 2, 1, 6,4 4,8 3,2 1,6 6,4 4,8 3,2 1,6 BAT26 D5S346 BAT25 D17S25 D2S123 Interpretation yes

Association of clinicopathological variables with MSI N MSI-H (%) MSS/MSI-L (%) p value (n=7) (n=39) Histologic grade I 14 2 (14.3) 12 (85.7) II 27 5 (18.5)

3 382 설미영 최경운 김지연외 5 인 BAT26 D5S346 BAT25 D17S25 D2S123 BAT26 D5S346 BAT25 D17S25 D2S , 3, 2, 1, 6,4 4,8 3,2 1,6 6,4 4,8 3,2 1,6 BAT26 D5S346 BAT25 D17S25 D2S123 Interpretation yes no yes yes yes MSI-high Fig. 1. MSI analysis electropherograms of MSI-high mucinous adenocarcinoma. Table 1. Association of clinicopathological variables with MSI N MSI-H (%) MSS/MSI-L (%) p value (n=7) (n=39) Histologic grade I 14 2 (14.3) 12 (85.7) II 27 5 (18.5) 22 (81.5).676 III 5 () 5 (1) FIGO stage I, II (early) 33 3 (9.1) 3 (9.1) III, IV (advanced) 13 4 (3.8) 9 (69.2).68 Tumor size < (13.6) 19 (86.4) (16.7) 2 (83.3).551 Mitoses (1HPF) (14.3) 18 (85.7) (17.6) 14 (82.4) (12.5) 7 (87.5) Histologic type Serous 13 3 (23.1) 1 (76.9) Mucinous 13 2 (15.4) 11 (84.6) Endometrioid 5 1 (2.) 4 (8.).741 Clear cell 13 1 (7.7) 12 (92.3) Undifferentiated 2 () 2 (1) MSI-H, high-frequency microsatellite instability; MSI-L, low-frequency microsatellite instability; MSS, microsatellite stable. 결 전체난소상피암 46예중 MSI-H를보인예는 7예 (15.2%), MSI-L를보인예는 1예 (2.2%) 그리고나머지 38예 (82.6%) 에서 MSS를보였다 (Fig. 1, 2). MSI 및 MSS의평균연령은 47.8세와 47.7세로거의차이가없었고, 4세미만의젊은연령의분포가 MSI에서 1예 (14.3%), MSS에서 9예 (23.1%) 로 MSS에서많았지만, 통계학적으로유의하지는않았다 (p=.52). 난소상피암의조직학적등급에따라살펴보면, 저등급에서 MSI가 2예 (14.3%), 중등급에서 5예 (18.5%), 고등급에서는 MSI를보인예가없었다 (p=.676). 조기병기 (early stage, FIGO stage I 과 BAT26 D5S346 BAT25 D17S25 D2S123 Interpretation no no no no no MSS Fig. 2. MSI analysis electropherograms of MS-stable clear cell carcinoma. Table 2. Sensivity, specificity, positive predictive value and negative predictive value of immunohistochemiscal staining for determining MSI status Marker Sensitivity Specificity (%) (%) Positive Negative predictive predictive value (%) value (%) hmlh hmsh hmlh1+hmsh Sensitivity, negative IHC results/total number of MSI-H tumors; Specificity, positive IHC results/total number of MSI-L/MSS tumors; Positive predictive value, number of MSI-H tumors/negative IHC results; Negative predictive value, number of MSI-L and MSS/positive ICH results. and II) 인경우 33예중 3예 (9.1%) 에서 MSI를보였고, 진행병기 (advanced stage, FIGO stage III and IV) 인경우 13예중 4예 (3.8%) 에서 MSI를보였다 (p=.68). 난소상피암의크기가 1 cm 미만인경우 3예 (13.6%), 1 cm 이상인경우 4예 (16.7 %) 에서 MSI를보였다 (p=.551). 조직학적유형이장액성인경우 3예 (23.1%), 비장액성인경우 4예 (12.1%) 에서 MSI를보여장액성인경우 MSI의빈도가높았으나통계학적으로유의하지않았다 (p=.385) (Table 1). hmlh1과 hmsh2 면역조직화학염색결과 hmlh1 또는 hmsh2 면역염색성이음성인경우는모두 8예 (17.4%) 였고, 나머지 38예는 hmlh1과 hmsh2 둘다양성을보였다 (Fig. 3, 4). hmlh1가음성인경우는 7예였고, hmsh2가음성인경우는 4 예였다. hmlh1/hmsh2 음성인 8예중 4예가 MSI-H를보였고, 나머지 4예는 MSI-L/MSS였다. hmlh1이음성인 7예중 3예가 MSI-H였고 hmsh2가음성인 4예중에서는 3예가 MSI- H를보였다. 따라서, MSI-H 검출에대한 hmlh1/hmsh2 면역조직화학염색의민감도는 57.1%, 특이도는 89.7%, 양성예측도는 5%, 음성예측도는 92.1% 였다. hmlh1과 hmsh2 각각에대해서는민감도가 42.9% 로동일하였고, 특이도는 89.7% 와 97.4% 였다 (Table 2).

난소상피암에서현미부수체불안정성 383 A B Fig. 3. Immunohistochemical staining for hmlh1 and hmsh2 in serous carcinoma showing MSI-H.

Tumor shows positive nuclear staining for hmlh1 (A) and hmsh2 (B) ( 4). 고찰난소상피의종양은조직학적유형뿐아니라생물학적행태 (biologic behavior) 도양성, 경계성그리고악성으로나뉘어져다양한양상을보인다.

27 Type I 종양은경계성종양에서단계적으로발생하는저등급의종양들로저등급의장액성암종과함께점액성, 자궁내막성, 투명세포암종그리고악성브레너종양 (malignant Brenner tumor) 까지포함한다.

한편, type II 종양은고등급장액성암종, 미분화암종및 malignant mixed mesodermal tumor를포함하는데, 이들종양의경우양성그리고경계성종양과는무관하게새로 (de novo) 발생한다는기전 으로설명되면서 p53 돌연변이가관여한다고알려져있다.

4 난소상피암에서현미부수체불안정성 383 A B Fig. 3. Immunohistochemical staining for hmlh1 and hmsh2 in serous carcinoma showing MSI-H. Tumor shows loss of expression of hmlh1 (A) and hmsh2 (B) ( 4). A B Fig. 4. Immunohistochemical staining for hmlh1 and hmsh2 in mucinous carcinoma showing MSS. Tumor shows positive nuclear staining for hmlh1 (A) and hmsh2 (B) ( 4). 고찰난소상피의종양은조직학적유형뿐아니라생물학적행태 (biologic behavior) 도양성, 경계성그리고악성으로나뉘어져다양한양상을보인다. 종양발생과정을설명하는분자생물학적기전또한여러가지경로로제시되고있는데, 최근에는난소상피에서기원하는종양의발생과정이크게두가지로제시되고있다. 27 Type I 종양은경계성종양에서단계적으로발생하는저등급의종양들로저등급의장액성암종과함께점액성, 자궁내막성, 투명세포암종그리고악성브레너종양 (malignant Brenner tumor) 까지포함한다. 이들종양발생에관여하는분자생물학적변화는 KRAS 및 BRAF 돌연변이, -catenin 및 PTEN 돌연변이그리고현미부수체불안정성이다. 한편, type II 종양은고등급장액성암종, 미분화암종및 malignant mixed mesodermal tumor를포함하는데, 이들종양의경우양성그리고경계성종양과는무관하게새로 (de novo) 발생한다는기전 으로설명되면서 p53 돌연변이가관여한다고알려져있다. MSI는많은상피암에서드물지않게발견되는변화로 DNA MMR 유전자에결함을보인다. MMR 기전의주요한여섯개의 MMR 유전자로서, hmlh1, hmsh2, PMS1, PMS2, hmsh3, hmsh6를들수있는데이중 hmlh1과 hmsh2가가장중요하며가장흔한변화를보인다. 3 DNA MMR 기전의결함은최근종양발생기전을설명하는데중요한기전으로자리잡고있는데, 유전자의불일치를복구하는데결함을보이는세포는세포신호전달체계에이상이발생하여정상적인세포자멸사또는성장정지가일어나지못하게된다. 28 또한 MSI-H 표현형종양과 MSI-L/MSS 표현형종양은서로다른종양발생기전을보일뿐아니라대장암, 위암, 자궁내막암등에서임상양상의차이가보고되고있다. 3-9 난소상피암에서 MSI 의빈도는 3-5% 정도로다양하게보고된다. 7,1-25 자궁내막암과는달리가족성으로발생한경우와산발성난소상피암에서 MSI의빈도는의미있게차이를보이지않

5 384 설미영 최경운 김지연외 5 인 고, 2 여러가지조직학적유형중자궁내막형에서비교적높은빈도를나타내지만, 15,21,22,24 장액성암종의경우에는드물게나타난다고보고되었다. 19 Fugita 등 21 의연구에의하면전체난소상피암에서 17% 의 MSI를보이나자궁내막형의경우 5% 에서 MSI 를보였다. 그러나조직학적유형과 MSI 간의상관관계가없다는보고도있다. 2 이렇게다양한 MSI 빈도는연구에포함된다양한연구대상의규모, 연구에포함된종양의조직학적유형의이질성, 사용된현미부수체표지자의다양성, 서로다른 MSI 평가기준의사용및 MSI 검출을위한실험방법의불일치등에서기인하였다고볼수있다. 최근에는미국국립암연구소에서다섯개의표준화된현미부수체표지자를권고하였는데, 2 난소상피암에서다섯개의 NCI 표지자를이용한연구에서는대체로 11-2% 의빈도로 MSI-H가보고된다 ,15-17 Sood 등의표준화된 NCI 표지자를이용한최초의연구에서는 19예의난소암중 12예 (11%) 가 MSI-H를보였다. 17 본연구에서는다섯개 NCI 표지자를이용하여평가한결과난소상피암의 15.2% 에서 MSI-H 가발견되어기존의연구결과와다르지않았고, 조직학적유형에따른차이는보이지않았다. 난소상피암에서 MSI 표현형의임상양상에대한연구는많지않지만그결과또한일치하지않는다. 일부연구자들은 MSI를보이는난소상피암의경우조기병기를보인다고했고, 7,22 최근 Dellas 등은 MSI-H 표현형난소상피암이 MSI-L/MSS 표현형에비해종양의분화도가나쁘고진행된병기를보인다고하여상반된결론을보여준다. 한편일부연구에서는 MSI 유무와종양의조직학적등급, 임상적병기및예후와관련성이없다고하였다. 11 본연구의경우진행병기의난소상피암과조기병기의난소상피암에서각각 3.7% 와 13.6% 의 MSI-H를보여진행병기의난소상피암이좀더흔히 MSI-H를보이는경향이있었으나통계학적으로유의성이없었고, 다른임상병리학적인자들과 MSI-H의상관관계를찾을수없었다. 그러나본연구를포함하여이제까지의연구들은모두큰규모의연구가아니었고다양한연구방법에근거하였다는점을고려할때향후연구규모의확대와표준화된연구방법을만들어축적된데이터를바탕으로 MSI 표현형난소상피암의빈도와임상양상에대한결론을이끌어내야할것이다. MMR 결함은특히대장암의경우유전적소인의가능성을평가하는데유용할뿐아니라 MSI-H 표현형대장암의경우항암치료에저항성을보일수있어 4 최근분자병리연구분야와함께임상영역에서 MMR 결함의평가방법에관심이커지고있다. MMR 단백질에대한면역조직화학염색이 MMR 결함을평가하는데유용한방법으로알려져있는데, 대장암의경우 hmlh1 과 hmsh2 면역조직화학염색이높은민감도와특이도를보여서상대적으로값이비싸고많은시간을요구하는 MSI 에대한분자병리학적검사를대신하여 MSI-H를찾아내는데유용한선별검사로서보고되고있다. 4,29 난소상피암에서는 Liu 등 13 이 hmlh1 과 hmsh2 면역조직화학염색을시행한결과 6% 의민감도와 96.6% 의특이도를보였고, Cai 등 11 의보고에서는 67.7% 와 94.4 % 의민감도와특이도를보여서대장암에비해낮았으며, 이들면역조직화학염색만으로는 MSI status를모두인지할수없었다. 본연구에서도 57.1% 의민감도, 89.7% 의특이도, 5% 의양성예측도및 92.1% 의음성예측도를보여난소상피암에서 hmlh1 과 hmsh2 면역조직화학염색을 MMR 결함을예측하는선별검사로사용하는데어렵다는결론을내렸다. 그러나최근 Rosen 등 3 이 hmlh1과 hmsh2 면역조직화학염색이 87% 의민감도와 1% 의특이도를보여난소암에서 MSI를알아내는데매우정확한검사임을주장하였다. 이들의연구는 322예의난소암에서먼저 hmlh1과 hmsh2 면역조직화학염색을시행한후면역염색이음성인 7예에서 MSI 를평가한결과모두 MSI-H를보였다는점에근거하였는데, 이연구에서는난소암에서의 MSI의빈도가 2% 로기존의연구들과차이를보였다. Cai 등 11 의연구에서 MSI-H 인난소투명세포암종 6예중 4예만이 hmlh1 또는 hmsh2 면역염색성이음성이었던점과본연구에서도 MSI- H인난소상피암 7예중 4예만이음성이었던점을고려한다면 MSI 평가에대한 hmlh1과 hmsh2 면역조직화학염색의정확도는연구대상의확대와 hmlh1 또는 hmsh2 외의다른 MMR 단백질의면역조직화학염색의시행등을통하여좀더연구되어야하겠다. 아직까지난소암에서 MSI 빈도와역할에대한연구결과는정립되어있지못하다. 무엇보다도 MSI 검출을위한현미부수체표지자를적절하게제시하고표준화하는것이중요하다. 최근의 NCI 표지자를이용한연구들로인해많은정보가주어지지만, 아직난소암에서적절한현미부수체표지자는다양하게주장되고있다. Sood 등도다섯개의 NCI 표지자외에 NME1 을추가하면난소상피암에서 MSI status를좀더적절하게평가할수있을것이라고제안하였고, 17 난소투명세포암종의경우 NCI 표지자인 mononucleotide 또는 dinucleotide repeat 현미부수체표지자외에 trinucleotide 현미부수체표지자에서더흔히불안정성을보이며, 이러한경우 MSH3의이상과관련있다는보고가있다. 1 Tetranucleotide repeats의변화 (EMAST, elevated microsatellite alterations at selected tetranucleotides) 도장액성암종의 13% 에서보고되었는데, 모두진행성병기를보여예후와의관련성을시사하고있다. 25 이러한변화는대장암의경우 EMAST가 1.3% 정도에서보고되는것과비교된다. 본연구는국내난소상피암증례를대상으로 NCI 현미부수체표지자를이용하여 MSI 를평가해본결과 46예중 7예 (15.2%) 에서 MSI-H, 1예 (2.2%) 에서 MSI-L 그리고나머지 38예 (82.6%) 에서 MSS를보였다. MSI-H 를보이는난소상피암과 MSI-L/ MSS를보이는난소상피암예들간에종양의병기, 조직학적등급, 종양의크기및세포분열지수등을포함한임상병리학적인자들의유의한차이는없었다. 대표적인 MMR 단백인 hmlh1 및 hmsh2 면역조직화학염색을시행한결과 MSI-H 난소상피암 7예중 4예 (57.1%) 에서음성면역염색성을보였고, MSI-L/ MSS 난소상피암 39예중 35예 (89.7%) 에서양성면역염색성

6 난소상피암에서현미부수체불안정성 385 을보여서 hmlh1 및 hmsh2 단백발현과 MSI-H 유무가상당한일치도를보이지만, 난소상피암의 MSI-H 유무를알기위한선별검사로는좀더검토가필요할것으로판단된다. 참고문헌 1. Thibodeau SN, Bren G, Schaid D. Microsatellite instability in cancer of the proximal colon. Science 1993; 26: Boland CR, Thibodeau SN, Hamilton SR, et al. A national cancer institute workshop on microsatellite instability for cancer detection and familial predisposition: Development of international criteria for the determination of microsatellite instability in colorectal cancer. Cancer Res 1998; 58: Lanza G, Gafa R, Maestri I, Santini A, Matteuzzi M, Cavazzini L. Immunohistochemical pattern of MLH1/MSH2 expression is related to clinical and pathological features in colorectal adenocarcinomas with microsatellite instability. Mod Pathol 22; 15: Cawkwell L, Gray S, Murgatroyd H, et al. Choice of management strategy for colorectal cancer based on a diagnostic immunohistochemical test for defective mismatch repair. Gut 1999; 45: Cha HJ, Woo DK, Kim SH, Kim YI, Park JG, Kim WH. Microsatellite instability in colorectal carcinomas. Korean J Pathol 21; 35: Chiaravalli AM, Cornaggia M, Furlan D, et al. The role of histological investigation in prognostic evaluation of advanced gastric cancer. analysis of histological structure and molecular changes compared with invasive pattern and stage. Virchows Arch 21; 439: Catasus L, Bussaglia E, Rodrguez I, et al. Molecular genetic alterations in endometrioid carcinomas of the ovary: Similar frequency of betacatenin abnormalities but lower rate of microsatellite instability and PTEN alterations than in uterine endometrioid carcinomas. Hum Pathol 24; 35: Maxwell GL, Risinger JI, Alvarez AA, Barrett JC, Berchuck A. Favorable survival associated with microsatellite instability in endometrioid endometrial cancers. Obstet Gynecol 21; 97: Velasco A, Hewitt SM, Albert PS, et al. Differential expression of the mismatch repair gene hmsh2 in malignant prostate tissue is associated with cancer recurrence. Cancer 22; 94: Ueda H, Watanabe Y, Nakai H, Hemmi H, Koi M, Hoshiai H. Microsatellite status and immunohistochemical features of ovarian clearcell carcinoma. Anticancer Res 25; 25: Cai KQ, Albarracin C, Rosen D, et al. Microsatellite instability and alteration of the expression of hmlh1 and hmsh2 in ovarian clear cell carcinoma. Hum Pathol 24; 35: Dellas A, Puhl A, Schraml P, et al. Molecular and clinicopathological analysis of ovarian carcinomas with and without microsatellite instability. Anticancer Res 24; 24: Liu J, Albarracin CT, Chang KH, et al. Microsatellite instability and expression of hmlh1 and hmsh2 proteins in ovarian endometrioid cancer. Mod Pathol 24; 17: Pal T, Sutphen R, Sellers T. Mismatch repair gene expression defects contribute to microsatellite instability in ovarian carcinoma. Cancer 24; 1: Geisler JP, Goodheart MJ, Sood AK, Holmes RJ, Hatterman-Zogg MA, Buller RE. Mismatch repair gene expression defects contribute to microsatellite instability in ovarian carcinoma. Cancer 23; 98: Gras E, Catasus L, Arguelles R, et al. Microsatellite instability, MLH- 1 promoter hypermethylation, and frameshift mutations at coding mononucleotide repeat microsatellites in ovarian tumors. Cancer 21; 92: Sood AK, Holmes R, Hendrix MJ, Buller RE. Application of the national cancer institute international criteria for determination of microsatellite instability in ovarian cancer. Cancer Res 21; 61: Allen HJ, DiCioccio RA, Hohmann P, Piver MS, Tworek H. Microsatellite instability in ovarian and other pelvic carcinomas. Cancer Genet Cytogenet 2; 117: Haas CJ, Diebold J, Hirschmann A, Rohrbach H, Schmid S, Lohrs U. Microsatellite analysis in serous tumors of the ovary. Int J Gynecol Pathol 1999; 18: Arzimanoglou II, Lallas T, Osborne M, Barber H, Gilbert F. Microsatellite instability differences between familial and sporadic ovarian cancers. Carcinogenesis 1996; 17: Fujita M, Enomoto T, Yoshino K, et al. Microsatellite instability and alterations in the hmsh2 gene in human ovarian cancer. Int J Cancer 1995; 64: King BL, Carcangiu ML, Carter D, et al. Microsatellite instability in ovarian neoplasms. Br J Cancer 1995; 72: Ohwada M, Suzuki M, Saga Y, Sato I. DNA replication errors are frequent in mucinous cystadenocarcinoma of the ovary. Cancer Genet Cytogenet 2; 117: Codegoni AM, Bertoni F, Colella G, et al. Microsatellite instability and frameshift mutations in genes involved in cell cycle progression or apoptosis in ovarian cancer. Oncol Res 1999; 11: Singer G, Kallinowski T, Hartmann A, et al. Different types of microsatellite instability in ovarian carcinoma. Int J Cancer 24; 112: Silverberg SG. Histopathologic grading of ovarian carcinoma: a review and proposal. Int J Gynecol Pathol 2; 19: Shih I, Kurman RJ. Ovarian tumorigenesis: a proposed model based on morphological and molecular genetic analysis. Am J Pathol 24; 164: Hardman RA, Afshari CA, Barrett JC. Involvement of mammalian MLH1 in the apoptotic response to peroxide-induced oxidative stress.

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