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1 ORIGINAL ARTICLE Pediatr Infect Vaccine Vol.24, pissn No.3, eissn Pediatr Infect Vaccine 2017;24: DOI: 우리나라성인에서 Haemophilus influenzae type b 에대한항체평가 이지현 1,2 ᆞ 김한울 2 ᆞ 이소영 2 ᆞ 김경효 1,2 이화여자대학교의과대학소아과학교실 1, 이화여자대학교의과대학의과학연구소백신효능연구센터 2 Evaluation of Antibodies Against Haemophilus influenzae Type b in Korean Adults Ji Hyen Lee 1,2, Han Wool Kim 2, Soyoung Lee 2, Kyung-Hyo Kim 1,2 1 Department of Pediatrics and 2 Center for Vaccine Evaluation and Study, Medical Research Institute, Ewha Womans University School of Medicine, Seoul, the Republic of Korea Purpose: After the introduction of Haemophilus influenzae type b (Hib) vaccine in 1995 in Korea, it was included in the national immunization program in In the post-hib vaccine era, some studies in other countries reported that invasive Hib disease affects adults, especially the elderly and immunocompromised persons, more often than it affects children. To evaluate disease susceptibility, quantitative and qualitative analysis of anti-polyribosylribitol phosphate (PRP) antibodies were carried out in Korean adults aged 20 to 85 years. Methods: Sera were collected from 39 healthy adults (20 to 50 years of age) and from 30 elderly adults (75 to 85 years of age) who did not have immune-compromising conditions. The concentration of anti-prp immunoglobulin G (IgG) and serum bactericidal indices (SBIs) were measured by enzyme-linked immunosorbent assay and serum bactericidal assay. Results: Geometric mean concentrations of anti-prp IgG and geometric mean SBIs were 0.88 µg/ml (95% confidence interval [CI], 0.17 to 3.85) and 354 (95% CI, 50 to 2,499) in young adults and 1.67 µg/ml (95% CI, 0.53 to 5.24) and 449 (95% CI, 146 to 1,376) in elderly adults, respectively. When the threshold of seropositivity for anti-prp IgG was applied as 0.15 or 1.0 µg/ml, which is the protective antibody level in children, seropositive rates were 87.2% or 53.8% in young adults and 100% or 60% in elderly adults. The seropositivity rates of the SBI (SBI 4) were 82.1% and 100% in the groups, respectively. Conclusions: Most subjects in the adult and elderly adult groups display immunity to Hib based on quantitative and qualitative antibody levels, but not all. Because high immunization and low Hib circulation rates may reduce the natural Hib immunity in the population, monitoring Hib immunity as well as disease are needed continuously. Key Words: Haemophilus influenzae type b; Antibodies; Adult; Aged 서론 접수 : 2017 년 3 월 3 일수정 : 2017 년 5 월 30 일승인 : 2017 년 6 월 10 일 책임저자 : 김경효이화여자대학교의과대학소아과학교실 Tel: 02) , Fax: 02) kaykim@ewha.ac.kr 헤모필루스인플루엔자 (Haemophilus influenzae) 는그람음성간구균 (coccobacilli) 으로피막 (capsule) 항원성에따라 a형부터 f형까지 6가지가있으며 59개월이하의소아에서흔히발생하므로이들연령에게백신접종을추천한다 1). 영아와소아의침습감염은백신이사용되기전에는 b형 (H. influenzae type b [Hib]) 이침습질환의 95% 를 125

2 이지현외 3 인 : 우리나라성인에서 Haemophilus influenzae type b 에대한항체평가 차지하며 b형피막다당은 polyribosylribitol pho sphate (PRP) 로구성되어있다 2). 1970년대 PRP를사용하여제조된백신은항원의특성상 T 림프구비의존항원 (T-cell independent antigen) 이어서 2세미만에게접종시면역이유도되지않아침습감염에가장취약한이들연령군에게접종할수없었으나 1980년대에 T 림프구의존항원 (T-cell dependent antigen) 으로작용할수있는몇가지 PRP-단백결합백신 (PRP-protein conjugate vaccine) 들이개발되어우리나라에도 1990년대에도입되었다. 이들백신들은영아에게도면역원성, 효능및효과가우수하여백신도입후전세계적으로 Hib 침습질환발생이크게감소하였다 3,4). 그러나최근보고에의하면아프리카에서가장처음백신이도입된 Gambia에서백신도입후소아및청소년에서발생이증가하고 5,6), 영국에서도소아및성인에서백신도입직후 Hib 감염이감소하였다가다시유행발생을보고하였다 7). 그원인을규명하기위해 Hib의혈청역학연구들이진행되었으며, 질병발생감소로인한자연부스팅효과감소를원인으로추정하고있다. 그리고노인인구에서암, 당뇨등과같은질환으로면역이떨어져있는사람에게침습적세균감염의감염보고가늘고있으며 8-10), 이에따라백신접종등이권고되고있다. 따라서, 국내에서도 Hib 백신도입으로 Hib 감염이감소하나, 더이른시기에백신을도입했던외국의사례를비추어볼때, 국내에서의 Hib 질환증가가능성및노인집단의면역저하자증가에따른침습세균감염의증가가능성을염두에두어야한다. 따라서, 성인및노인에게서의면역저하자의침습세균질환발생감시와혈청역학에관한모니터링이필요하여, 본연구에서는우리나라의건강한성인과노인혈청에서항-PRP 면역글로불린 G (immunoglobulin G [IgG]) 농도와기능을측정하여혈역학적감시의기초자료를마련하고자진행하였다. 방법 1. 대상본연구는 Hib 백신접종여부와관계없이 20세이상 50세이하의건강한성인 39명 ( 성인군 ) 과면역저하가없는 75세이상의노인 30명 ( 노인군 ) 에서수집한혈청을대상으로하였다. 대상자들은모두혈청수집시최근 7일동안항생제를사용하지않은경우로항체기능측정에적절하였다. 혈청수집시각대상자의서면동의를받았 으며, 본연구는대상혈청선정과연구방법등을포함하여이화여자대학교목동병원기관생명윤리심의위원회의승인을받았다 ( 승인번호 : EUMC ). 또한, 헬싱키선언에명시된인체유래물연구와관련된윤리원칙에따라혈청을분석하였다. 2. 항-PRP IgG 측정을위한효소결합면역흡착측정법항-PRP IgG 측정을위한효소결합면역흡착측정법 (enzyme-linked immunosorbent assay [ELISA]) 의표적항원으로 PRP (National Institute for Biological Standards and Control, Hertfordshire, UK) 를사용하였다. 그밖의시료와방법은이미보고된방법에의하여시행하였다 11). 표준혈청인 Lot 1983은미국 Center for Biologics Evaluation and Research, Food and Drug Administration (FDA) (Silver Spring, MD, USA) 에서공급받았다. 정도관리혈청 (quality control sera) 은이화여자대학교의과대학의과학연구소백신효능연구센터에서제조하여사용하였다. 항원인 PRP를살균된 1급물 (LiChrosolv, Merck Millipore, Darmstadt, Germany) 로 1 μg/ml가되도록희석하여준비하였다. PRP 항원을 96 well의평평한바닥 (flat bottom) 의중등도결합 (medium binding) polystyrene 평판 (Corning & Costar, Corning, NY, USA) 에 50 μl씩넣고 37 에서 90분간습기가있는상자에넣어코팅 (coating) 시켰다. 항원이코팅된평판은 30초동안 0.01% 의 Brij 35가포함된 ph 7.2의 Tris 완충용액 (Tris buffered solution) 으로흠뻑적신후같은용액으로 5회세척하였다. 표준혈청과정도관리혈청및실험혈청검체는실험템플릿에따라각각 50 μl씩주입하였다. 공백 (blank) well은비특이배경결합 (background binding) 을평가하기위하여항원은넣지않고항체완충액을 50 μl씩주입하였다. 이를실온에서 1시간동안반응시키고앞에서와동일한방법으로세척후, 50 μl의희석된 goat anti-human IgG alkaline phosphatase conjugate (Southern Biotech, Birmingham, AL, USA) 를주입하였다. 다시 1시간동안실온에서반응시킨후동일한방법으로세척하였다. 그후 1 mg/ml 농도의 p-nitrophenyl phosphate (Sigma, St. Louis, MO, USA) 기질용액을각 well 당 100 μl씩넣고실온에서 1 시간반응시켰다. 각 well에 3 M의 NaOH를 50 μl씩첨가하여발색반응을정지시킨후 405 nm와 690 nm에서흡광도를측정하였다. 3. Hib에대한혈청살상능역가측정혈청내 Hib에대한혈청살상능역가 (serum bactericidal 126

3 Pediatr Infect Vaccine Vol.24, No.3, 2017 index [SBI]) 측정은미국질병통제센터의방법 12) 을보완한방법으로본백신효능연구센터에서시행하였다 4). 시험에사용된 Hib 세균은 Eagan 주 (strain) 로미국 Center for Biologics Evaluation and Research, FDA의 Dr. Carl Frasch로부터공급받았다. SBI 측정을위한혈청은 56 에 30분간두어보체를불활성화시킨후사용하였다. 시험에사용된희석완충액 (dilution buffer) 은 0.14 mm의 CaCl2 와 0.5 mm의 MgSO4 가포함된인산완충용액을사용하였다. 96 well의둥근바닥 (round bottom) polystyrene 평판에 10 μl의혈청을넣고 3배씩단계희석하였다. 각 well에 20 μl의 Hib 균 1,000개집락형성단위 (colony forming unit [CFU]) 를첨가하여이산화탄소배양기 (CO2 incubator) 에넣어 37, 5% CO2에서 15분간반응시켰다. 반응후각 well에 25 μl 의아기토끼보체 (baby rabbit complement, Pelfreeze, Browndeer, WI, USA) 와 25 μl의희석완충액을첨가하여 CO2 배양기에넣어 37, 5% CO2에서 60분간반응시켰다. 최종반응액 5 μl를 nicotinamide adenine dinudeotide (Sigma, St. Louis, MO, USA) 와헤민 (hemin) (Sigma, St. Louis, MO, USA) 이포함된 brain heart infusion (BHI, Difco, Franklin Lakes, NJ, USA) 을한천평판에도포하고액체가다흡수되면 25 μg/ml의 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (Sigma, St. Louis, MO, USA) 가포함된액체상태의 BHI 한천을위에부어응고될때까지기다렸다. 평판을 CO2 배양기에넣어 37, 5% CO2 에서 16시간동안배양한뒤살아남은세균 CFU를세어항체가없는 well에비해 50% 의 CFU 감소를보이는혈청희석배수를 SBI로정하였다. 희석되지않은혈청에서항체가없는 well에남은 CFU의 50% 가죽는경우, SBI는본분석시스템에서 4이다. 결과의분석은 UAB OPSOTITER 3.0 (UAB, Birmingham, AL, USA) 을사용하며이는 SBI를분석하기위하여만들어진 Excel (Microsoft, Redmond, WA, USA) 을기반으로한세트로지시 (instruction), 원자료 (raw data), 보고 (report) 의 3개의데이터시트 (data sheet) 로구성되어있다. 지시데이터시트는 UAB OPSOTITER 3.0에대한일반적인설명, 틀의사용방법과평판의설계를보여주고, 원자료데이터시트에는측정정보, 가변측정변수, 검체정보, 원자료 (CFU/ 지점 ) 를입력하는곳이다. 보고데이터시트는결과기록으로원자료데이터시트에입력했던측정정보와 CFU/ 지점을바탕으로 SBI가검체별로나타난다. 4. 통계분석 항 -PRP IgG 항체가및 SBI 에대한기하평균및 95% 신 뢰구간을구하였다. 기하평균의두연령군간비교는로그 변환값을이용하여 Student t-test 를하였다. 항체양성률 은소아에서자연면역에의한방어항체가인 0.15 μg/ml 및백신접종후방어력항체가인 1.0 μg/ml 를기준으로 12) 그이상의항체가를보이는개체의수와백분율을구하 고, SBI 의항체양성률은 SBI 4 이상인개체수와백분율 을구하였으며, 두연령군간의비교는 chi-square 또는 Fisher s exact test 로분석하였다. 각양성률의 95% 신뢰 구간은 Clopper-Pearson confidence interval 로결정하였 다. 항 -PRP IgG 항체와 SBI 간상관관계 (r) 는로그변환 값을이용하여피어슨의상관관계 (Pearson correlation) 로분석하였다. 유의수준은 P<0.05 로하였다. 결과 본연구에서사용된혈청의인구학적정보는 Table 1 에나타내었다. 성인군의연령평균값은 31.6 세, 중앙값은 33.0 세, 노인군의연령평균값은 79.0 세, 중앙값은 78.0 세 이었다. 성별은남자가성인군은 22 명 (56.4%), 노인군은 16 명 (53.3%) 으로두군간에차이는없었다. 성인군에서는 기저질환을가진사람이없었으며, 노인군에서는면역반응 Table 1. Demographic Characteristics of the Subjects Characteristic Age (yr) Adult group aged years (n=39) Elderly group aged 75 years (n=30) P-value Mean <0.001 Median Range Sex Male 22 (56.4) 16 (53.3) NS Female 17 (43.6) 14 (46.7) Underlying conditions Diabetes 0 1 (3.3) NS Cardiac disease 0 11 (36.7) <0.001 Lung disease 0 0 Cirrhosis 0 0 Two or more* 0 4 (13.3) <0.05 Values are presented as number (%). *Subjects with two or more of the following underlying conditions: diabetes, cardiac disease, lung disease, and cirrhosis. Abbreviation: NS, not significant. 127

4 이지현외 3 인 : 우리나라성인에서 Haemophilus influenzae type b 에대한항체평가 에영향을주지않고잘조절되고있는당뇨 1 명 (3.3%), 심 혈관질환 11 명 (36.7%), 당뇨, 심혈관질환, 폐질환, 간경 화등 2 개이상의질환을보인경우가 4 명 (13.3%) 이었다. 각연령군의항 -PRP IgG 항체가및 SBI 의분포는 Fig. Table 2. Geometric Mean Concentrations/Indices and Seropositive Rates of Anti-PRP IgG Levels and Serum Bactericidal Indices in Adult and Elderly Groups Variable Anti-PRP IgG Adult group aged years (n=39) Elderly group aged 75 years (n=30) P-value GMC (μg/ml) 0.88 ( ) 1.67 ( ) <0.05 Seropositive rate (%) SBI 0.15 μg/ml 87.2 ( ) ( ) NS 1.0 μg/ml 53.8 ( ) 60.0 ( ) NS GMI 354 (50 2,499) 449 (146 1,376) NS Seropositive rate (%) ( ) ( ) <0.05 Values are presented as 95% confidence interval. Abbreviations: PRP, polyribosylribitol phosphate; IgG, immunoglobulin G; GMC, geometric mean concentration; NS, not significant; SBI, serum bactericidal indices; GMI, geometric mean indices. 1에나타내었다. 항-PRP IgG 항체가의기하평균농도는성인군에서 0.88 μg/ml, 노인군에서 1.67 μg/ml로노인군이성인군에비해기하평균항체가가의미있게높았다 (Table 2, Fig. 1). 항-PRP IgG 항체가가 0.15 μg/ml 이상은성인군에서 87.2%, 노인군에서 100% 이었고항-PRP IgG 항체가가 1.00 μg/ml 이상은성인군에서 53.8%, 노인군에서 60.0% 로각농도에서두군간의미있는차이는없었다. SBI의기하평균은성인군에서 354, 노인군에서는 449로, 노인군이성인군에비해더높았으나, 의미있는차이는없었다. SBI 4 이상은, 성인군 82.1%, 노인군 100% 로, 노인군이성인군에비해의미있게높았다. 항-PRP IgG 항체가와 SBI는전연령군에서유의한선형상관관계를보이긴하였으나 r 값은 0.32로낮았다. 노인군 (r=0.36) 과성인군 (r=0.42) 의개별분석시에도마찬가지였다 (Fig. 2). 고찰 침습 Hib 감염에대한항-PRP IgG 항체의혈청내최소방어농도는 μg/ml이다 13). 핀란드에서백신을 Concentration of anti-prp IgG (µg/ml) 100,000 10,000 1, Adults group Elderly group 100,000 10,000 1, Serum bacterial index ELISA Anti-Hib Ab SBA Fig. 1. Anti-polyribosylribitol phosphate (PRP) immunoglobulin G (IgG) concentrations and serum bactericidal indices in healthy adult (n=39) and elderly (n=30). Black bars are geometric means and 95% confidence intervals and long horizontal lines represent anti-prp IgG of 0.15 µg/ml and serum bactericidal index of 4. Abbreviations: ELISA, enzyme-linked immunosorbent assay; SBA, serum bactericidal assay; Hib Ab, Haemophilus influenzae type b antibody. 128

5 Pediatr Infect Vaccine Vol.24, No.3, 2017 접종하지않은사람들이 PRP 에대한자연생성항체가가 0.15 μg/ml 이상이면수막염등침습감염에대한예방효 능이있는것으로보고되어 14) 혈청내 0.15 μg/ml 이상의 항체를가질경우단기방어가가능하고, 장기적방어를 위해서는 1.0 μg/ml 이상이필요하다고여겨진다. 그런데 대부분의소아는백신을접종받지않더라도 5 세가되면 PRP 에대한자연생성항체 (naturally acquired antibody) 를가지게되므로 Hib 백신은건강한 5 세이상소아에게 는접종을권유하지않는다. 본연구에서는일부국가에서보인 Hib 질환의발생증 가와관련하여국내에서의상황을알기위해일부건강한 성인들과노인들의항 -PRP 항체가와항체기능을측정한 결과연구대상노인군전부와대부분의성인들은 Hib 감 염에대해방어할수있는적절한면역을보유하고있음 을알수있었다 년아프리카에서가장처음 Hib 백신이도입된 Gambia 의경우, 백신도입되기전, 침습적 Hib 감염의발 SBI 10,000 1, Concentration of anti-prp IgG (µg/ml) Adults group Elderly group Fig. 2. Analysis of healthy adult (n=39) and elderly (n=30) sera to look for correlations between levels of anti-polyribosylribitol phosphate (PRP) immunoglobulin G (IgG) (X axis) and serum bactericidal index (Y axis). The correlation between anti-prp IgG levels to serum bactericidal indices (SBIs) was moderately linear correlation (r=0.32, P=0.007) in all subjects (n=69). The results were the same when analyzed separately in only adult group (r=0.42, P=0.009). However, the correlation between anti-prp IgG levels to SBIs was no correlation (r= 0.36, P=0.052) in elderly group. The vertical dashed lines represent the protective anti-prp IgG of 0.15 or 1 µg/ml, respectively and the horizontal dotted line represent serum bactericidal index 4. 생률은 250/100,000 명이었다 년백신도입후 2007 년부터 2010 년까지 5 세이하에서 5/100,000 명빈도로 잘조절되었다. 그러나, 2011 년부터 2013 년사이에높은 백신접종률에도불구하고 Hib 감염이증가하여 2013 년 2 59 개월에서 25/100,000 명, 2 11 개월에서 90/100,000 명의빈도로보고되었다고하였다 5). 다른연구에서는 5 세부터 37 세에이르는 427 명을대상으로혈청의항 -PRP IgG 농도를조사하였으며, 항체양성률을 1.0 μg/ml 기준 으로하였을때 5 세부터 37 세까지 56% 70% 으로낮게 측정되었다 6). 따라서이연구에서는성인연령에서도침 습 Hib 감염의발생이일어날수있음을인지하고관련역 학등에대해지속적으로연구가필요하다고하였다. 연구 자들은이와같은현상이지역이나인종의문제인지혹은 발생을일으킨 Hib 균의유전적변이때문인지에대한연 구가더필요하다고하였다 5). 한편영국에서는 Hib 감염의재출현과관련된요인을 감시하기위해학생들에게서 Hib 보균율을연구하였는데 6 16 세에서 4.2% 가보균하고있었다 13). 그러나 385 명 의성인에서의보균율은 0% 이었으며성인들에서항 -PRP 항체가의기하평균은 0.47 μg/ml (95% CI, μg/ml) 이었다. 영국에서는 2002 년부터 2003 년까지소아에서침습 Hib 감염이증가하면서, 15 세이상청소년과성 인에서도침습 Hib 감염의증가가함께나타났다 7). 유행 기간동안 세및 65 세이상의연령에서많았으며, 소아에서도같은기간동안 Hib 감염이유행하였다. 이 러한 세의성인에서혈청내항 -PRP 항체농도는 Hib 감염의약한증가추세를보인 년기간보 다이른 년기간동안감소추세를보였다. 더 욱이, 성인 Hib 감염의경우집안의소아들과자주접촉하 게되는부모와조부모연령대인 30 세와 65 세에서두번 의정점을보였다. 따라서, 연구자들은성인 Hib 감염의 증가는소아의감염증가양상과관련이있으며, 이는백 신으로얻어진군집면역과낮은 Hib 균의순환이소아및 성인에서자연면역획득기회를줄인것으로보았고백신 이일단도입되면성인이나더높은연령에서의질병의 역학에예측하지못했던영향을줄수있다고하였다. 또한, 2012 년에 Nix 등 15) 도, Hib 백신도입이후소아보 다는성인, 노인및면역저하자가더감염에취약하다는 다른연구들을토대로, 만성신부전, 2 형당뇨, 만성폐쇄성 폐질환, 다발골수종환자를대상으로항 -PRP 항체농도 및기능을측정하였다. 그결과, 다발골수종환자중 70%, 만성신부전환자중 58% 는 Hib 에대해측정가능한혈청 살상능이없었다. 또한, 성인에서 Hib 감염으로인한괴사 129

6 이지현외 3 인 : 우리나라성인에서 Haemophilus influenzae type b 에대한항체평가 근막염및후두개염, 복막염과같은심각한환자보고도 계속되는실정이다 16-19). 캐나다의경우, 공중보건가이 드라인에서해부학적또는기능적무비증환자나항체및 보체결핍환자와같은고위험군을대상으로성인 Hib 접 종을추천하기도하였다 20) 년발표한 Collin 등 21) 도, 년동안영국및웨일스에서 Hib 감염에대한 혈청역학연구에서, 106 명의 Hib 감염케이스중 73% 가 성인연령이었으며, 기존의기저질환이함께있는경우가 77% 였다. 또한영국및웨일스에서 년동안 2002 년이후전체적인 Hib 의발생률은줄었으나, 매해발 생케이스에서연령에따른분포를볼때, 1 4 세, 5 19 세에는비율이확연히줄어든것에비해, 세및 65 세 이상의연령에서차지하는비율이증가했음을알수있다. 이와같은결과해외에서의 Hib 감염의증가와성인에 서혈청학적취약성확인연구결과가보고되고있으나, 국내에서는전연령에서의혈청역학자료가없는실정이 다. 본연구결과에서우리나라성인의경우 18 세이상성 인에서 0.15 μg/ml 이상은약 90% 에서, 1.0 μg/ml 이상은약 62% 에서만양성이었던 8) Gambia 의결과와매 우유사하다. 노인에서도 1.0 μg/ml 이상을보인비율은 Gambia 의결과와비슷함을알수있었다. 따라서본연구 의대상자수가매우제한적이기는하지만성인및노인 을포함한대부분우리나라성인에서적절한농도의 Hib 에대한 IgG 항체농도를가지고있었다. 그러나일부에서 는충분한항체농도를가지지않았고, 점점증가하는노 인인구에서당뇨, 고혈압, 암과같은질환및면역억제치 료의증가로인한면역저하자가점차증가하고있어침 습감염질병발생에대한감수성감시가필요하다. 물론 Hib 감염의역학은인구집단의혈청항체보유율외에 Hib 보균율및균주의병독성변화등다른많은요인들 이관여하므로이들요인들에대해서도계속감시가필요 하겠다. 최근 B 군연쇄상구균 (group B streptococcus [GBS]) 에의한침습감염질환도 18 년동안의인구기반분석에 서성인특히노인의 GBS 감염질환의발병률이지속적으 로증가하고있으며, 2007 년에는 10 만명당 7.3 건으로증 가했다고한다 22). 심각한임상증후군에의한사망률은신 생아보다나이가많고당뇨와같은만성질환이흔한노 인에게서현저히높다고보고되었다 23). 그러므로만성질 환을가진노인인구가증가함에따라과거신생아와소 아에서대부분을차지하였던침습 GBS 감염이이연령군 에서증가하는바와같이비슷한역학을보였던 Hib 감염 도같은발생의변화를보이는지계속추적관찰할필요 가있겠다. 그동안의연구에의하면항 -PRP 항체들에는다양한특 성을가진항체들이포함되어있다 24). Hib 감염에자연노 출군, PRP 백신접종군, 다양한 Hib 단백결합백신접종 군에서혈청내항 -PRP 항체를연구한결과, 특이항체 에는 IgG, IgM 및 IgA 등이모두포함되어있었으며특히 IgM 은자연노출군과 PRP 백신접종군에서전체항체중 차지하는비율이상대적으로많았고각군에서각항체의 종류들은기능적으로도차이를보인다고보고되었다 15). 한편폐구균에서도백신접종에의해유도되는면역을평 가하기위해서는항체의기능과농도간차이를보이므로 25-27), 최근에는성인에서의폐구균에대한백신의면역반 응평가에서는항체가대신항체기능을측정하도록세계 보건기구와미국 FDA 에서권고한다 28). 이와같은이유로 본연구에서는혈청내항체농도의양적측정뿐아니라 항체의기능도측정하였다. 그결과 SBI 의기하평균은성 인군에서 354, 노인군에서는 449 이었고 SBI 4 이상을보 이는혈청양성률의경우, 성인군은 82.1%, 노인군은 100% 로확인되었다. 따라서, 아직성인이나노인연령에서 SBI 의침습감염을포함하여 Hib 감염에대한방어기준이설 정된바는없지만, 한국의성인과노인에서 Hib 에대한기 능적항체방어력은검사대상노인의전체와대부분의 성인에서보유하고있음을알수있었다. 한편본연구에서는혈청내항 -PRP IgG 항체농도와 SBI 간유의한상관관계를보였으나그정도는모든대상 혈청에서낮았고이를각연령군으로구분하여도낮았다. 이는혈청내 IgG 항체농도만측정하는 ELISA 와달리혈 청살상능은혈청내 Hib 균에대해특이살상기능을가 지는다른항체종류즉 IgM 등이측정될수있기때문으 로생각된다 년발표된 Cho 등 29) 도, 폐구균살상능 을평가하는옵소닌식세포살상분석법 (opsonophagocytic killing assay) 이 IgG 및 IgM 항체를모두측정함을 보고하였다. 향후성인이나노인에서는항 -PRP IgG 항체 농도뿐아니라항 -PRP IgM 항체농도에대한추가적연 구가필요할수있겠다. 우리나라에도 Hib 백신이도입되고난후소아에서침 습 Hib 감염은발생이급격히줄어들어거의보고되지않 고있다 30). 그러나외국에서는다양한연령군에서의 Hib 감염의발생증가와특히성인면역저하자에게서의발생 이보고되는상황이다 31,32). 그러므로우리나라에서도성인 과노인연령군의혈청내항체농도및기능을계속감시 한다면 Hib 감염의발생가능성을어느정도예측하여진 단, 치료및예방에적용할수있을것이다. 특히혈청역학 130

7 Pediatr Infect Vaccine Vol.24, No.3, 2017 적감시는 Hib 감염에취약할수있는성인면역저하자가우선적대상이될수있겠다. 본연구는소아가아닌한국성인에서 Hib에대한 anti- PRP IgG 및 SBI를측정한연구로성인및노인에서대한국내자료가없는상황이므로첫기초자료로의미를둘수있다. 하지만, 검사대상혈청수가적었다는제한점이있다. 한편침습 Hib 감염에대한방어농도로인정되고있는항-PRP IgG 농도는소아연령을대상으로설정된농도이며과연성인이나노인에서같은혈청내농도가침습감염에대한방어에적용될수있을지연구된바없으므로이에대한연구가더필요하겠다. 그동안보고된대부분의연구에서는성인에서주로항-PRP IgG의혈청내농도를양적으로측정하였지만본연구에서는그동안거의연구된바없는항체의기능을성인과노인에서평가하여보고하였고항-PRP IgG 농도와의상관성을조사하였다. 이와같은연구는향후성인과노인연령군에서폐구균특이항체측정과마찬가지로항-PRP 항체를평가하는목적으로도항체의양뿐아니라항체의기능측정이반드시필요함을보여주는것으로생각된다. 또한, 노인군에서당뇨, 심혈관질환등과같은질환이포함되었으며, 이러한질환은노인군에서높은비율로발생하기때문에안정적인건강상태 ( 예 : 잘조절되는당뇨, 심혈관질환, 폐질환및간경화 ) 를가진노인환자를대상에서제외할수없었다. 결론적으로, 본연구에서는연구대상중대부분의건강한성인과노인연령군에서양적으로그리고기능적으로적절한 Hib에대한특이항체방어력을가지고있음을보여주었다. 하지만, 일부성인및노인에서는충분한항체가를가지고있지않아, 향후계속되는백신접종에의한군집면역유도와낮은 Hib 균의순환으로 Hib에대한자연면역획득및면역증강의기회가낮아진다면성인과노인군에서만성질환으로인한면역저하자들을기점으로 Hib 침습감염이다시증가할수있다. 따라서, 인구집단의 Hib 항체가및항체의질을지속적으로평가하여감염역학연구를통한감시를지속하고, 면역저하자와같은특수집단에서의백신접종등에대한근거자료마련이필요하다. 감사의글 이연구는 2016년대한소아감염학회학술상및식품의약품안전처용역연구 (16172감염병267) 로수행되었습니다. References 1. Chandran A, Watt JP, Santosham M. Haemophilus influenzae vaccine. In: Plotkin SA, Orenstein WA, Offit PA, editors. Vaccines. 6th ed. Philadelphia: Elsevier Health Sciences, 2013: Pittman M. Variation and type specificity in the bacterial species Hemophilus influenzae. J Exp Med 1931;53: Kim KH, Lee H, Chung EH, Kang JH, Kim JH, Kim JS, et al. Immunogenicity and safety of two different Haemophilus influenzae type b conjugate vaccines in Korean infants. J Korean Med Sci 2008;23: Kim HW, Kim KH, Kim J, Nahm MH. A high throughput serum bactericidal assay for antibodies to Haemophilus influenzae type b. BMC Infect Dis 2016;16: Mackenzie GA, Ikumapayi UN, Scott S, Idoko O, Odutola A, Ndiaye M, et al. Increased disease due to Haemophilus influenzae type b: population-based surveillance in eastern Gambia, Pediatr Infect Dis J 2015;34:e Idoko OT, Roberts E, Cox M, Jafali J, Njie-Jobe J, Mackenzie G, et al. Antibodies against Haemophilus influenzae type b in The Gambia: investigating the extent of protection across age groups. Vaccine 2014;32: McVernon J, Trotter CL, Slack MP, Ramsay ME. Trends in Haemophilus influenzae type b infections in adults in England and Wales: surveillance study. BMJ 2004;329: Dworkin MS, Park L, Borchardt SM. The changing epidemiology of invasive Haemophilus influenzae disease, especially in persons > or = 65 years old. Clin Infect Dis 2007;44: Rubach MP, Bender JM, Mottice S, Hanson K, Weng HY, Korgenski K, et al. Increasing incidence of invasive Haemophilus influenzae disease in adults, Utah, USA. Emerg Infect Dis 2011;17: Shuel M, Hoang L, Law DK, Tsang R. Invasive Haemophilus influenzae in British Columbia: non-hib and nontypeable strains causing disease in children and adults. Int J Infect Dis 2011;15:e Kim KH, Lim SY. Validation of enzyme immunoassay for the quantitative measurement of human IgG antibodies specific for Haemophilus influenzae type b capsular poly 131

8 이지현외 3 인 : 우리나라성인에서 Haemophilus influenzae type b 에대한항체평가 saccharide. Korean J Pediatr 2007;50: Peltola H, Kayhty H, Sivonen A, Makela H. Haemophilus influenzae type b capsular polysaccharide vaccine in children: a double-blind field study of 100,000 vaccinees 3 months to 5 years of age in Finland. Pediatrics 1977;60: Oh SY, Griffiths D, John T, Lee YC, Yu LM, McCarthy N, et al. School-aged children: a reservoir for continued circulation of Haemophilus influenzae type b in the United Kingdom. J Infect Dis 2008;197: Kayhty H, Peltola H, Karanko V, Makela PH. The protective level of serum antibodies to the capsular polysaccharide of Haemophilus influenzae type b. J Infect Dis 1983;147: Nix EB, Hawdon N, Gravelle S, Biman B, Brigden M, Malik S, et al. Risk of invasive Haemophilus influenzae type b (Hib) disease in adults with secondary immunodeficiency in the post-hib vaccine era. Clin Vaccine Immunol 2012;19: Chalmers C. Necrotising fasciitis complicating Haemophilus influenzae type b epiglottitis in an adult. J Laryngol Otol 2010;124: Saito T, Matsunaga H, Matsumura Y, Segawa H, Takakura S, Nagao M, et al. Necrotizing fasciitis caused by Haemophilus influenzae type b in an elderly patient. J Clin Microbiol 2009;47: Chew CG, Clarkson AR, Faull RJ. Relapsing CAPD peritonitis with rapid peritoneal sclerosis due to Haemophilus influenzae. Nephrol Dial Transplant 1997;12: Neuhaus TJ, Iselin H, Nadal D. Haemophilus influenzae: a cause of peritonitis in peritoneal dialysis. Nephrol Dial Transplant 1996;11: Public Health Agency of Canada. Canadian immunization guide th ed. Ottawa: Public Health Agency of Canada, Collins S, Ramsay M, Campbell H, Slack MP, Ladhani SN. Invasive Haemophilus influenzae type b disease in England and Wales: who is at risk after 2 decades of routine childhood vaccination? Clin Infect Dis 2013;57: Skoff TH, Farley MM, Petit S, Craig AS, Schaffner W, Gershman K, et al. Increasing burden of invasive group B streptococcal disease in nonpregnant adults, Clin Infect Dis 2009;49: Edwards MS, Baker CJ. Group B streptococcal infections in elderly adults. Clin Infect Dis 2005;41: Jelonek MT, Chang SJ, Chiu CY, Park MK, Nahm MH, Ward JI. Comparison of naturally acquired and vaccineinduced antibodies to Haemophilus influenzae type b capsular polysaccharide. Infect Immun 1993;61: Kim YJ, Hwang JY, Choi SH, Kong E, Kim Y, Park KS, et al. Antibody responses in hematopoietic cell transplantation recipients after vaccination against Haemophilus influenzae type b and Streptococcus pneumoniae. Korean J Pediatr Infect Dis 2014;21: Lee H, Nahm MH, Burton R, Kim KH. Immune response in infants to the heptavalent pneumococcal conjugate vaccine against vaccine-related serotypes 6A and 19A. Clin Vaccine Immunol 2009;16: Song JY, Moseley MA, Burton RL, Nahm MH. Pneumococcal vaccine and opsonic pneumococcal antibody. J Infect Chemother 2013;19: World Health Organization. Guidelines on clinical evaluation of vaccines: regulatory expectations. Proposed revision of WHO TRS 924, Annex 1 [Internet]. Geneva: World Health Organization; 2004 [cited 2017 Nov 7]. Available from: guidelines_final_line_nos_20_july_2016.pdf. 29. Cho HK, Park IH, Burton RL, Kim KH. Impact of IgM antibodies on cross-protection against pneumococcal serogroups 6 and 19 after immunization with 7-valent pneumococcal conjugate vaccine in children. J Korean Med Sci 2016;31: Kim KH. Present status and prospects of Haemophilus influenzae type b (Hib) immunization. Korean J Pediatr 2006;49: Shinefield HR, Black S. Postlicensure surveillance for Haemophilus influenzae type b invasive disease after use of Haemophilus influenzae type b oligosaccharide CRM197 conjugate vaccine in a large defined United States population: a four-year eight-month follow-up. Pediatr Infect Dis J 1995;14: Watt JP, Levine OS, Santosham M. Global reduction of Hib disease: what are the next steps? Proceedings of the meeting Scottsdale, Arizona, September 22-25, J Pediatr 2003;143(6 Suppl):S

9 Pediatr Infect Vaccine Vol.24, No.3, 2017 요약 목적 : 1995년한국에서 b형헤모필루스인플루엔자 (Haemophilus influenzae type b [Hib]) 백신이도입된이후, 2013년국가예방접종에포함되었다. Hib 백신도입시기이후다른나라의일부연구에따르면, 침습적 Hib 질환은소아보다성인, 특히노인및면역저하환자에서더자주발생한다고보고하였다. 따라서, 본연구는 20 85세의한국성인에서항-polyribosylribitol phosphate (PRP) 항체의양적및질적측정을통하여질병감수성을평가하고자하였다. 방법 : 혈청은 39명의건강한성인 (20 50세) 과면역저하상태가아닌 30명의노인 (75 85세) 에서수집하였다. 모든피험자는 7일이내에항생제를복용하지않았다. 항-PRP 면역글로불린 G (immunoglobulin G [IgG]) 항체가및혈청살상능역가 (serum bactericidal index [SBI]) 는효소결합면역흡착측정법과혈청살상능평가분석을통해측정하였다. 결과 : 항-PRP IgG 항체가의기하평균및 SBI의기하평균은성인군에서각각 0.88 μg/ml (95% 신뢰구간, ) 및 354 (95% 신뢰구간, 50 2,499) 이었고, 노인군에서는각각 1.67 μg/ml (95% 신뢰구간, ) 및 449 (95% 신뢰구간, 146 1,376) 이었다. 소아에서 Hib 감염에대한방어농도로인정하고있는 0.15 및 1.0 μg/ml을적용하였을때, 항체양성률은성인군에서 87.2%, 노인군에서 100% 였다. SBI의양성률 (SBI 4) 은성인군에서 82.1%, 노인군에서 100% 였다. 결론 : 대부분의성인군과노인군에서양적으로나기능적으로 Hib 질환에대한방어면역력을가지고있었으나모두는아니었다. 높은면역력과낮은 Hib 순환율은인구에서 Hib에대한자연면역을감소시킬수있으므로, Hib 면역과질병에대한지속적인감시가필요하다. 133

한국성인에서초기황반변성질환과 연관된위험요인연구

한국성인에서초기황반변성질환과 연관된위험요인연구 한국성인에서초기황반변성질환과 연관된위험요인연구 - - i - - i - - ii - - iii - - iv - χ - v - - vi - - 1 - - 2 - - 3 - - 4 - 그림 1. 연구대상자선정도표 - 5 - - 6 - - 7 - - 8 - 그림 2. 연구의틀 χ - 9 - - 10 - - 11 -