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1 연구기관 한국식품연구원 농림부

2 연구기관 한국식품연구원 농림부

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44 Analytical Semi-preparative

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47 Solution A 1) Solution B 2) Mixing Spreading Coating medium Corona treated OPP 3) film Casting Drying Room temp., 24 h

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53 Sac I 5 Mature peda Deduced Factor Xa recognition sequence 3 Hind III Xba I Pst I Sal I EcoR I BamHI Xho I Kpn I Nde I Hind III Sac I

54

55 0.5Kb Ped + Sal I plasmid EcoRV Nde I peda pedb pedc pedd pucfp23 BamHI ped-hup-3 BamHI ped-hrp-3 pucpm5 BamHI ped-pmb-up Sac I ped-hrp pcwpm30 BamHI ped-pmb-up BamHI ped-hrp-3 pcwppm P32 ped-pmb-up ped-hrp-3 Primer

56

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61 검체채취량

62 검체채취량

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66 M

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68 Kbp M

69 kbp M kb

70 kbp M kbp M

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72 kbp M kbp M kbp

73 1 2

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75 OD (at 660nm) 2 1 OD ph AU 6 5 ph Activity(AU/mL) Culture time(hr) OD (at 660nm) 2 1 OD ph AU 6 5 ph Activity(AU/mL) Culture time(hr) 4 0

76 OD (at 660nm) 2 1 OD ph AU ph Pediocin activity(au/ml) Culture time(hr) OD (at 660nm) 2 1 OD ph AU ph Pediocin activity(au/ml) Culture time(hr) 4 0

77 OD (at 660nm) 2 1 OD ph AU 6 5 ph Activity(AU/mL) Culture time(hr) O.D(at 660nm) ph 7.0 ph 6.8 ph 6.6 ph 6.4 ph 6.0 ph 5.8 ph 5.6 ph Culture time(hr)

78 7.5 ph ph 7.0 ph 6.8 ph 6.6 ph 6.4 ph 6.0 ph 5.8 ph 5.6 ph Culture time(hr) 1600 Pediocin activity (AU/mL) ph 7.0 ph 6.8 ph 6.6 ph 6.4 ph 6.0 ph 5.8 ph 5.6 ph Culture time(hr)

79 3.0 O.D (at 660nm) Peptone Tryptone Meat extract Yeast extract Culture time(hr) Peptone Tryptone Meat extract Yeast extract 5.5 ph Culture time(hr)

80 1200 Pediocin activity(au/ml) Peptone Tryptone Meat extract Yeast extract Culture time(hr) 1400 Pediocin activity(au/ml) % 0.02% 0.04% 0.06% 0.10% Culture time(hr)

81 1400 Pediocin activity(au/ml) % 0.015% 0.025% 0.035% 0.045% Culture time(hr)

82

83 O.D. at 660nm control whey 10% whey 2% whey 0.2% Incubation time(hr) 2.5 O.D. at 660nm control tryp1%+whey10% tryp1%+whey2% tryp1%+whey0.2% tryp2%+whey10% tryp2%+whey2% tryp2%+whey0.2% tryp3%+whey10% tryp3%+whey2% tryp3%+whey0.2% Incubation time(hr)

84 2.5 O.D. at 660nm control yeast1%+whey10% yeast1%+whey2% yeast1%+whey0.2% yeast2%+whey10% yeast2%+whey2% yeast2%+whey0.2% yeast3%+whey10% yeast3%+whey2% yeast3%+whey0.2% Incubation time(hr) 2.5 O.D. at 660nm control beef1%+whey10% beef1%+whey2% beef1%+whey0.2% beef2%+whey10% beef2%+whey2% beef2%+whey0.2% beef3%+whey10% beef3%+whey2% beef3%+whey0.2% Incubation time(hr)

85 O.D. at 660nm control whey2%+pep1% whey2%+pep2% whey2%+pep3% whey2%+pep4% whey2%+pep5% whey2%+pep6% Incubation time(hr) 3.0 O.D. at 660nm control whey4%+pep1% whey4%+pep2% whey4%+pep3% whey4%+pep4% whey4%+pep5% whey4%+pep6% Incubation time(hr)

86 3.0 O.D. at 660nm control whey6%+pep1% whey6%+pep2% whey6%+pep3% whey6%+pep4% whey6%+pep5% whey6%+pep6% Incubation time(hr) O.D. at 660nm control whey2%+pep6% whey3%+pep6% whey4%+pep6% whey6%+pep6% Incubation time(hr)

87 3.0 O.D. at 660nm control whey4%+pep1% whey4%+pep2% whey4%+pep3% whey4%+pep4% whey4%+pep5% whey4%+pep6% Incubation time(hr)

88

89 O.D. at 660nm control yeast1%+whey2% yeast2%+whey2% yeast3%+whey2% yeast4%+whey2% yeast5%+whey2% yeast6%+whey2% Incubation time(hr) O.D. at 660nm control yeast1%+whey4% yeast2%+whey4% yeast3%+whey4% yeast4%+whey4% yeast5%+whey4% yeast6%+whey4% Incubation time(hr)

90 O.D. at 660nm control yeast1%+whey6% yeast2%+whey6% yeast3%+whey6% yeast4%+whey6% yeast5%+whey6% yeast6%+whey6% Incubation time(hr) O.D. at 660nm control yeast6%+whey2% yeast6%+whey4% yeast6%+whey6% Incubation time(hr)

91 O.D. at 660nm control yeast0%+glc0% yeast0%+glc1% yeast0%+glc2% yeast0%+glc3% Incubation time(hr) O.D. at 660nm control yeast1%+glc0% yeast1%+glc1% yeast1%+glc2% yeast1%+glc3% Incubation time(hr)

92 O.D. at 660nm control yeast2%+glc0% yeast2%+glc1% yeast2%+glc2% yeast2%+glc3% Incubation time(hr) O.D. at 660nm control yeast3%+glc0% yeast3%+glc1% yeast3%+glc2% yeast3%+glc3% Incubation time(hr)

93 O.D. at 660nm control yeast4%+glc0% yeast4%+glc1% yeast4%+glc2% yeast4%+glc3% Incubation time(hr) O.D. at 660nm control yeast5%+glc0% yeast5%+glc1% yeast5%+glc2% yeast5%+glc3% Incubation time(hr)

94 O.D. at 660nm control yeast0%+glc1% yeast1%+glc1% yeast2%+glc1% yeast3%+glc1% yeast4%+glc1% yeast5%+glc1% yeast6%+glc1% Incubation time(hr) O.D. at 660nm Incubation time(hr) control yeast6%+glc1% yeast3%+pep3%+glc1% glc1%+pep1% glc1%+pep2% glc1%+pep3% glc1%+pep4% glc1%+pep5% glc1%+pep6%

95 O.D. at 660nm Incubation time(hr) control yeast6%+glc1% yeast3%+pep3%+glc1% glc2%+pep1% glc2%+pep2% glc2%+pep3% glc2%+pep4% glc2%+pep5% glc2%+pep6% O.D. at 660nm Incubation time(hr) control yeast6%+glc1% yeast3%+pep3%+glc1% glc3%+pep1% glc3%+pep2% glc3%+pep3% glc3%+pep4% glc3%+pep5% glc3%+pep6%

96

97 O.D. at 660bn control yeast6%+glc1% yeast3%+pep3%+glc1% glc2%+pep1% Incubation time(hr) O.D. at 660nm control yeast0% yeast6% yeast3%+tryp1% yeast3%+tryp2% yeast3%+tryp3% yeast3%+beef1% yeast3%+beef2% yeast3%+beef3% Incubation time(hr)

98 O.D. at 660nm control yeast0% yeast6% yeast3%+tryp1% yeast3%+tryp2% yeast3%+tryp3% Incubation time(hr) O.D. at 660nm control yeast0% yeast6% yeast3%+beef1% yeast3%+beef2% yeast3%+beef3% Incubation time(hr)

99 O.D. at 660nm Incubation time(hr) 0.1% 0.2% 0.4% 0.6% 0.8% 1.0% 1.5% 2.0% 3.0% 4.0% 5.0% O.D. at 660nm ph Activity(AU/mL) Incubation time(hr) 0

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109 OD (at 660nm Untreated Pediocin 50ppm Pediocin 100ppm Pediocin 250ppm Pediocin 25ppm Pediocin 75ppm Pediocin 125ppm Incubation time(hr) 1.0 OD (at 660nm Untreated Polylysine 50ppm Polylysine 100ppm Polylysine 250ppm Polylysine 25ppm Polylysine 75ppm Polylysine 125ppm Incubation time(hr)

110 OD (at 660nm) Untreated Nis in 50ppm Nis in 100ppm Nis in 250ppm Nisin 25ppm Nisin 75ppm Nis in 125ppm Incubation time(hr) OD (at 660nm Untreated Pediocin 50ppm Pediocin 100ppm Pediocin 250ppm Pediocin 25ppm Pediocin 75ppm Pediocin 125ppm Incubation time(hr)

111 Untreated Polylysine 50ppm Polylysine 100ppm Polylysine 250ppm Polylysine 25ppm Polylysine 75ppm Polylysine 125ppm OD (at 660nm) Incubation time(hr) 1.0 OD (at 660nm) Untreated Nisin 50ppm Nisin 100ppm Nisin 250ppm Nisin 25ppm Nisin 75ppm Nisin 125ppm Incubation time(hr)

112 OD (at 660nm) Untreated Pediocin 50ppm Pediocin 100ppm Pediocin 250ppm Pediocin 25ppm Pediocin 75ppm Pediocin 125ppm Incubation time(hr) OD (at 660nm) Untreated Polylysine 50ppm Polylysine 100ppm Polylysine 250ppm Polylysine 25ppm Polylysine 75ppm Polylysine 125ppm Incubation time(hr)

113 OD (at 660nm) Untreated Nisin 50ppm Nisin 100ppm Nisin 250ppm Nisin 25ppm Nisin 75ppm Nisin 125ppm Incubation time(hr) OD (at 660nm) Untreated Pediocin 25ppm Pediocin 50ppm Pediocin 75ppm Pediocin 100ppm Pediocin 125ppm Pediocin 250ppm Incubation time(hr)

114 OD (at 660nm) Untreated Polylysine 25ppm Polylysine 50ppm Polylysine 75ppm Polylysine 100ppm Polylysine 125ppm Polylysine 250ppm Incubation time(hr) OD (at 660nm) Untreated Nisin 50ppm Nisin 100ppm Nisin 250ppm Nisin 25ppm Nisin 75ppm Nisin 125ppm Incubation time(hr)

115 OD (at 660nm) Untreated Pediocin 25ppm Pediocin 50ppm Pediocin 75ppm Pediocin 100ppm Pediocin 125ppm Pediocin 250ppm Incubation time(hr) OD (at 660nm) Untreated Polylysine 25ppm Polylysine 50ppm Polylysine 75ppm Polylysine 100ppm Polylysine 125ppm Polylysine 250ppm Incubation time(hr)

116 OD (at 660nm) Untreated Nisin 50ppm Nisin 100ppm Nisin 250ppm Nisin 25ppm Nisin 75ppm Nisin 125ppm Incubation time(hr)

117 log cfu/g Untreated Pediocin 25ppm Pediocin 100ppm Pediocin 250ppm Pediocin 500ppm Pediocin 1000ppm Storage time(days) log cfu/g Untreated Polylysine 25ppm Polylysine 250ppm Polylysine 1000ppm Polylysine 4000ppm Polylysine 8000ppm Storage time(days)

118 10 8 Untreated Nis in 100ppm Nis in 500ppm Nisin 25ppm Nis in 250ppm Nis in 1000ppm log cfu/g Storage time(days) L value Un tre ate d P ediocin 100ppm P ediocin 500ppm Pediocin 25ppm Pediocin 250ppm P ediocin 1000ppm Storage time(days)

119 L value Un tre a te d Polylysine 250ppm Polylysine 4000ppm Polylysine 25ppm P olylys in e 1000ppm P olylys in e 8000ppm Storage time(days) L value Untreated Nis in 100ppm Nis in 500ppm Nisin 25ppm Nis in 250ppm Nis in 1000ppm Storage time(days)

120

121 10 8 Untreated Polylysine 0.2% Polylysine 0.4% Polylysine 0.6% Polylysine 0.8% Polylysine 1.0% Polylysine 1.5% Log cfu/g Storage time(days)

122 85 80 L value Untreated Polylysine 0.2% Polylysine 0.4% Polylysine 0.6% Polylysine 0.8% Polylysine 1.0% Polylysine 1.5% Storage time(days)

123

124 ogcfu/ Untreated 100 ppm nisin ppm nisin 400 ppm nisin ppm nisin 1200 ppm nisinl g log CFU/g Storage time(days) L value Untreated 100 ppm nisin 200 ppm nisin 400 ppm nisin 800 ppm nisin 1200 ppm nisin Storage time(days)

125 ogcfu/ Untreated ppm pediocin 200 ppm pediocin 1200 ppm 400 ppm pediocin 2 pediocinl800 ppm pediocin Storage time(days) g log CFU/g L value Untreated 100 ppm pediocin 200 ppm pediocin 400 ppm pediocin 800 ppm pediocin 1200 ppm pediocin Storage time(days)

126

127 10 8 Log cfu/g Untreated Lysozyme 0.01% Lysozyme 0.05% Lysozyme 0.1% Lysozyme 0.3% Lysozyme 0.5% Storage time(days) L value Untreated Lysozyme 0.01% Lysozyme 0.05% Lysozyme 0.1% Lysozyme 0.3% Lysozyme 0.5% Storage time(days)

128

129 Untreated Chito-oligo 0.05% Chito-oligo 0.1% Chito-oligo 0.3% L value Storage time(days) 10 8 Log cfu/g Untreated Chito-oligo 0.05% Chito-oligo 0.1% Chito-oligo 0.3% Storage time(days)

130

131 10 8 Log cfu/g Untreated GSE 250ppm GSE 1000ppm GSE 50ppm GSE 500ppm Storage time(days) L value Untreated GSE 250ppm GSE 1000ppm GSE 50ppm GSE 500ppm Storage time(days)

132

133 ogcfu/ Untreated 100 ppm vitaten-s ppm vitaten-s ppm vitaten-sl g log CFU/g Storage time(days) L value Untreated 100 ppm vitaten-s 1000 ppm vitaten-s ppm vitaten-s Storage time(days)

134

135 ogcfu/ Untreated 4 50 ppm hinokitiol 100 ppm hinokitiol ppm hinokitiol 200 ppm hinokitioll g log CFU/g Storage time(days) 85 L value Untreated 50 ppm hinokitiol 100 ppm hinokitiol 150 ppm hinokitiol 200 ppm hinokitiol Storage time(days)

136

137

138 olog CFU/glgCFU/ g Storage time(days)

139 90 85 L value Storage time(days)

140

141 10 8 log cfu/g Log Untreated D W Citric acid 0.1% Citric acid 0.25% Citric acid 0.5% 8 log cfu/g Log Untreated Citric acid 0.75% Citric acid 1.0% Citric acid 1.25% Citric acid 1.5% Storage time(days)

142 L value Untreated D W Citric acid 0.1% Citric acid 0.25% Citric acid 0.5% L value Untreated Citric acid 0.75% Citric acid 1.0% Citric acid 1.25% Citric acid 1.5% Storage time(days)

143

144 8 log cfu/g Log Untreated Malic acid 0.1% Malic acid 0.25% Malic acid 0.5% log cfu/g Log Untreated Malic acid 0.75% Malic acid 1.0% Malic acid 1.25% Malic acid 1.5% Storage time(days)

145 L value Untreated Malic acid 0.1% Malic acid 0.25% Malic acid 0.5% L value Untreated Malic acid 0.75% Malic acid 1.0% Malic acid 1.25% Malic acid 1.5% Storage time(days)

146

147

148 10 8 Treat. I Treat. III Treat. V Treat. VII Treat. II Treat. IV Treat. VI Log cfu/g Treat. VIII Treat. X Treat. XII Treat. IX Treat. XI Treat. XIII Log cfu/g Storage time(days)

149 85 80 Treat. I Treat. III Treat. V Treat. VII Treat. II Treat. IV Treat. VI L value Treat. VIII Treat. X Treat. XII Treat. IX Treat. XI Treat. XIII L value Storage time(days)

150

151 10 8 log cfu/g Log D W normal temp., 1min D W 40, 1 min D W 40, 2 min D W 50, 30 sec D W 50, 1 min D W 50, 2 min 8 log cfu/g Log D W normal temp., 1min D W 60, 30 sec D W 60, 1 min D W 60, 2 sec D W 70, 1 min Storage time(days)

152 L value D W normal temp., 1min D W 40, 2 min D W 50, 1 min D W 40, 1 min D W 50, 30 sec D W 50, 2 min L value D W normal temp., 1min D W 60, 1 min D W 60, 30 sec D W 70, 1 min D W 60, 2 sec Storage time(days)

153

154 10 8 Log cfu/g Storage time(days) Untreated Ascorbic acid 0.1% Ascorbic acid 0.25% Ascorbic acid 0.5% Ascorbic acid 0.75% Ascorbic acid 1.0%

155 L value Untreated Ascorbic acid 0.1% Ascorbic acid 0.25% Ascorbic acid 0.5% Ascorbic acid 0.75% Ascorbic acid 1.0% Storage time(days) 10 8 Log cfu/g Storage time(days) Untreated Calcium chloride 0.1% Calcium chloride 0.25% Calcium chloride 0.5% Calcium chloride 0.75% Calcium chloride 1.0%

156 80 75 L value Untreated Calcium chloride 0.1% Calcium chloride 0.25% Calcium chloride 0.5% Calcium chloride 0.75% Calcium chloride 1.0% Storage time(days)

157 10 8 Untreated Treat. Ⅱ Treat. Ⅳ Treat. Ⅰ Treat. Ⅲ Log cfu/g Storage time(days)

158

159 L value Untreated Treat. Ⅰ Treat. Ⅱ Treat. Ⅲ Treat. Ⅳ Storage time(days)

160 5 4 Hardness(kg Untreated Treat. Ⅱ Treat. Ⅳ Treat. Ⅰ Treat. Ⅲ S torage time(days)

161

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164 Un tre ate d Treat. Ⅱ Treat. Ⅳ Treat. Ⅰ Treat. Ⅲ Weight loss(% S torage time(days)

165 Titratable acidity(% Untreated Treat. Ⅱ Treat. Ⅳ Treat. Ⅰ Treat. Ⅲ Storage time(days)

166

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168 ogcfu/gogcfu/10 8 Untreated H treat. log CFU/ NP treat HNP treat.l Storage time(days) g l

169 85 80 Untreated NP treat H treat HNP treat. L value Storage time(days)

170 5 4 Force(kg Untreated NP treat H treat HNP treat Storage time(days)

171 0.4 Untreated H treat. Titratable acidity( NP treat. HNP treat Storage time(days)

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181 56 37 Weissella koreensis AY Weissella viridescens AB Weissella confusa AB Weissella cibaria AF Weissella soli AY Lactobacillus reuteri X Lactobacillus vaginalis AF Lactobacillus colehominis AJ Weissella thailandensis AB0238 Weissella hellenica AB Weissella paramesenteroides S67831 B

182 56 Weissella koreensis AY Weissella viridescens AB Weissella confusa AB Weissella cibaria AF Weissella soli AY Lactobacillus colehominis AJ Lactobacillus vaginalis AF Lactobacillus reuteri X76328 Weissella thailandensis AB0238 Weissella hellenica AB Weissella paramesenteroides S67831 B193

183

184

185 1.2 OD (at 660nm) E. coli KFRI 242 E. coli KFRI Ped M E. coli KFRI E. coli KFRI E. coli KFRI Cultivation time (hr) 1.0E E +09 Total count[log(cfu/ml)] 1.0E E E E +05 U n tre a te d P. acidilactici E Storage time(day)

186 1.0E +10 Lactic acid bacteria count[log(cfu/ml)] 1.0E E E E E E +04 U n tre a te d P. acidilactici Storage time(day) 1.0E +05 Coliform bacterial count[log(cfu/ml)] 1.0E E E E E +00 U n tre a te d P. acidilactici Storage time(day)

187 7 6 5 ph 4 3 Untreated P. acidilactici Storage time(day) 1.0 U n tre a te d P. acidilactici Acidity(%) Storage time(day)

188 Microbial count[log(cfu/ml) 1.0E E E+07 Untreated Polylysine 250ppm Mixture Ped M 250ppm Nisin 250ppm 1.0E Storage time(day)

189 1.0E+09 Untreated Ped M 250ppm Polylysine 250ppm Nis in 250ppm Coliform count[log(cfu/ml)] 1.0E E+07 Mixture 1.0E Storage time(day) 1.0E+09 Lactic acid bacterial count[log(cfu/ml)] 1.0E E+07 Untreated Polylysine 250ppm Mixture Ped M 250ppm Nisin 250ppm 1.0E Storage time(day)

190 1.0E+09 Yeast & Mold count[log(cfu/ml)] 1.0E E+07 Untreated Polylysine 250ppm Mixture Ped M 250ppm Nisin 250ppm 1.0E Storage ti me(day) ph Untreated Polylysine 250ppm Mixture Ped M 250ppm Nisin 250ppm Storage time(day)

191 Acidity(%) Untreated P oly ly s ine 250ppm Mixture P e d M 250ppm Nis in 250ppm Storage time(day) Amino nitrogen(mg%) Untreated Polylysine 250ppm Mixture Ped M 250ppm Nisin 250ppm Storage time(day)

192

193 Bacterial species Antimicrobial materials Gram Pediocin Nisin staining A 1) B 2) A 1) B 2) Bacillus cereus KCTC " KCTC " KCTC " KCTC " KCTC " KCTC " KCTC " KCCM " KCCM " KCCM Lactobacillus plantarum KFRI " KFRI " KFRI " KFRI Lactobacillus acidophilus KFRI " KFRI Bacillus subtilis KFRI " KFRI " KFRI " KFRI Lactobacillus brevis KFRI " KFRI " KFRI " KFRI Enterococcus faecalis KFRI Klebsiella pneumoniae KCTC " KCTC " KCTC " KCTC " KCTC " KCTC " KCTC " KCTC

194

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196

197 Control 0.03% 0.05% 0.10% ph Storage time (hr) 7 Total count(log. CFU/mL) Control 0.03% % % Storage time (hr)

198 Coliform count(cfu/ml) Control 0.03% 0.05% 0.10% Storage time (hr)

199 Yeast&Mold count(log. CFU/mL) Control 0.03% % 0.10% Storage time (hr)

200

201 8 6 ph 4 Control % 0.05% 0.10% Storage time (hr) Control 0.03% 0.05% 0.10% Acidity Storage time (hr)

202 Turbidity(NTU) Control 0.03% 0.05% 0.10% Storage time (hr)

203 Total count(log. CFU/mL) 10 Control % 0.05% % Storage time (hr)

204 Coliform count(cfu/ml) Control 0.03% 0.05% 0.10% Storage time (hr)

205 ph Control 0.03% % 0.10% Storage time (hr)

206

207 7 Total count(log. CFU/mL) 6 5 Control % 0.05% 0.10% Storage time (hr) Coilform count(log. CFU/mL) Control % 0.05% 0.10% Storage time (hr)

208

209 ogcfu/10 Untreated H treat. 8 NP treat HNP treat.llog CFU/ Storage time(days) g

210 ogcfu/6 5 Untreated H treat. NP treat HNP treat.l g log CFU/ Storage time(days)

211 Untreated H treat. Force(g) NP treat. HNP treat Storage time(days)

212

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215

216 0.8 OD at 660nm Incubation time(h) 0.8 OD at 660nm Incubation time(h)

217

218 0.8 OD at 660nm Incubation time(h) 25 Polylysine concentration( μg /ml) ` Storage time(days)

219

220 8 Microbial count[log(cfu/ml)] Incubation time(days) 8 Microbial count[log(cfu/ml)] Incubation time(days)

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