RESEARCH ARTICLE Kor. J. Aesthet. Cosmetol., Vol. 13 No. 2, 261-266, April 215 국산블루베리착즙액의항산화활성및멜라닌생성저해효과 최문희 1, 신현재 1,2 1 조선대학교대학원화학공학과향장공학, 2 조선대학교대학원화학공학과 Anti-oxidative and Anti-melnogenesis Effects of Buleberry Extract Moon-Hee Choi 1, Hyun-Jae Shin 1,2 1 Major in Cosmetic Engineering, Department of Chemical Engineering, Graduate School of Engineering, Chosun University 2 Department of Chemical Engineering, Graduate School of Engineering, Chosun University Abstract Excessive production of melanin occurs in response to UV-induced DNA damage, skin hyperpigmentation, post-inflammation and so on. There are many reports on anti-oxidant, anti-inflammation, and antimelanogenesis (whitening) activities of plant polyphenols and the relations with each activity, but little reports about blueberry (Vacciniium virgatum) juice. We investigated here the three activities from Korean blueberry juice. Three in vitro anti-oxidant activities of 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl (DPPH), 2,2 -azinobis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid (ABTS), and hydroxyl radical scavenging were evaluated. The antioxidant activities (IC5 of DPPH) of the quercetin, gallic acid, ascorbic acid, and the blueberry juice were.3,.1,.4, and 83.2 mg/ml, respectively. In addition, the results of ABTS test were.11,.14,.6, and 68. mg/ml, respectively. At last, hydroxyl radical scavenging activities were.28,.15,.11 and 91.14 mg/ml. Blueberry juice inhibited mushroom tyrosinase activity with an IC5 value of 528 μg/ml, ascorbic acid 14.4 μg/ml, and arbutin 94.3 μg/ml. Moreover, melanin biosynthesis has been decreased in a-msh treated B16F1 melanoma cells with dose dependent manner. These results suggest that Korean blueberry juice might have potential in the development of depigmenting agents. Keywords: Blueberry juice, Anti-oxidant, Anti-melanogenesis, Tyrosinase inhibition, Whitening 현재인류는과학의진보와의학, 경제, 문화의발달로인간 의평균수명은 1 세이상의시대로접어들고있다. 인간의수 명이연장됨에따라건강한삶에대한중요성과더불어젊고아 름다운외모에대한관심이증대되고있으며, 이와같은사회 적트렌트에따라미용, 의학등다양한분야에서항노화 (antiaging) 는사회전반적인이슈가되고있다. 피부노화는크게내 인성노화와외인성노화로나눌수있으며, 외인성노화중가 장큰원인은자외선의과다노출이다 (Yaar et al., 27). 자외 Corresponding author: Hyun-Jae Shin, Department of Chemical Engineering, Graduate School of Engineering, Chosun University, 39, Pilmun-daero, Dong-gu, Gwangju 51-759, Republic of Korea Tel.: +82 62 23 7518, Fax: +82 62 232 2474 E-mail: shinhj@chosun.ac.kr Received March 26, 215; Revised April 21, 215; Accepted April 24, 215; Published April 3, 215 선은파장에따라 UVC (2~28 nm), UVB (28~32 nm), UVA (32~4 nm) 로나뉘어지는데 UVC는파장이짧아대부분오존층에흡수되며, 주로피부에는 UVB와 UVA가직접적인영향을준다. UVB 같은경우표피의단백질및 DNA 염기들이 UVB 파장영역을대부분흡수하기때문에표피의손상을일으키며, UVA 의경우는장파장으로표피에서파장을거의흡수하지않기때문에진피까지도달하여피부손상과함께피부색소침착을일으킨다 (Kochanek et al., 2). 이렇게자외선에노출되면생체내포르피린 (Porphyrin), 리보플라빈 (Riboflavin) 에의한자외선의흡수로활성산소종 (reactive oxygen species, ROS) 이생성된다. ROS 는일반적인삼중항상태의산소 ( 3 O 2 ) 보다반응성이커서인체내의성분들을산화시키는물질로일중항산소 ( 1 O2), 과산화수소 (H 2 O 2 ) 와같은비라디칼종과슈퍼옥사이드라디칼 (O 2 - ), 하이드록실라디칼 ( OH) 과같은산소중심의라디칼, 생체성분과 ROS와의반응에서유래된과산화라디칼 (ROO ), 알콕실라디칼 (RO ), 히드로과산화물 (ROOH) 등이포함된다. 이러한 ROS 는고에너 www.kosac.or.kr 261
Kor. J. Aesthet. Cosmetol., Vol. 13 No. 2, 261-266, April 215 지복사선, 광증감반응및효소반응을거쳐생성되어피부세포에산화적스트레스를유발시키고콜라겐및엘라스틴분자의절단및손상을일으켜주름생성을유도하며, DNA 손상및활성에영향을주어멜라닌세포의증식과멜라닌합성을증가시킨다 (Kochanek et al., 1996; Lee, 26). ROS로부터산화적손상을방지하기위해생체방어기구로서 superoxide dismutase (SOD), catalase, glutathione peroxidase 등의항산화효소와 vitamin E, vitamin C, glutathinone 등과같은항산화물질이존재하지만피부는직접적인환경요인들과접촉하고있기때문에산화적스트레스에항상노출되어생체내의항산화성방어망의불균형이일어나과산화지질및산화생성물이축적되고피부노화가촉진된다 (Ahn et al., 29). 따라서활성산소를제거할수있는항산화제를사용하면피부자체의항산화네트워크를회복시켜피부조직을보호하고색소침착과같은피부노화를늦출수있으며, 암을유발시킬수있다고알려져있는합성항산화제보다는인체에안전하고항산화가효과가뛰어난천연항산화제의연구개발이필요하다 (Park et al., 24). 색소침착의원인으로알려져있는멜라닌은사람의피부색을결정하는주요인자중하나로서동, 식물계에존재하는생체고분자물질로피부의기저층에존재하는멜라닌생성세포 (melanocyte) 에의해생합성되며수지상돌기를통해각질형성세포 (keratinocyte) 로수송되어각화과정에의해피부외층으로이동하게된다 (Magdalena et al., 21). 6 멜라닌은멜라닌생성세포의세포소기관인멜라노좀 ( melanosome) 에서멜라닌합성에필요한 tyrosinase, tyrosinase-related protein1(trp-1), dopachrome tautomerase (TRP-2) 등의효소등에의해흑. 갈색의멜라닌 (eumelanin) 과황. 적색의멜라닌 (pheomelanin) 의혼합물로생합성된다 (Marmo et al.,1996). 멜라닌은 UV부터피부를보호하는기능을가지고있지만과도하게생성되거나노화로인해피부의기능이저하되면피부표면에침착되어기미, 주근깨와같은미용상의문제를일으키고멜라닌전구물질등의독성으로세포변이와세포사멸을유발시킨다 (Choi et al., 1998). 최근멜라닌색소침착을억제하기위해멜라닌생합성의속도결정단계에관여하는티로시나제 (tyrosinase) 저해제들이연구되고있는데현재미백화장품으로사용되는티로시나제저해제들은하이드로퀴논 (hyeroquinone), 코직산 (kojic acid), 알부틴 (arbutin), 아젤라익산 (azelaic acid), 아스코르빈산 (ascorbic acid; vitamin C) 등이대표적이다 (Kim et al., 24). 하이드로퀴논은미백효과가뛰어나지만세포독성과피부암을유발시킨다는보고가있으며, 코직산의경우는미생물유래의물질로미백화장품의주성분으로사용되고있으나접촉성피부염과홍반과같은피부자극을일으킨다고알려져있어피부에안전하고자극이없는천연미백소재에관한연구가필요하다 (Nakagawa et al.,1995). 블루베리 (Blueberry) 는진달래과 (Ericaceae) 산앵두나무속 (Vaccinium) 에속하는관목성식물로서, 전세계적으로 4여종이있으며, 주로북미지역에분포되어있다. 우리나라에서는주로전남담양지역에서재배하고있으며, 재배면적이 85ha 로전남재배면적의 52% 를차지한다 (Folin et al.,1912). 블루베리는다양한생리활성물질을포함하고있으며, 각종성인병을예방하고항산화및, 항당뇨및항암효과등이보고되었고성분에관한연구로는블루베리로부터페놀화합물의분리및동정등이조사되었다 (Srivastava et al., 27). 또한블루베리품종에관한연구와건강기능성식품개발에관한기초연구도활발하게진행되고있으나, 미백화장품소재로서의활용가능성에대한연구는매우미흡하다. 따라서본연구에서는블루베리추출물의항산화활성과멜라닌생성저해능을확인하고미백화장품천연소재로서의가능성에대해조사하였다. 1. 블루베리추출물제조본실험에사용한블루베리는담양시소재블루베리향토사업단출하공장에서구입하였으며, 블루베리 1 g을착즙기 (Hurom HE-DBF4) 를사용하여착즙후 sample을 12, rpm에서 7 min 간원심분리하고상등액을취하여 filtration (Sartorius.45 ul) 하고동결건조하여사용하였다. 2. 블루베리추출물의항산화활성 1) DPPH radical scavenging DPPH는 radical 상태에서보라색을띄고, 환원이되면노란색의 2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazine (DPPH-H) 으로변환된다. 안정한라디칼인 DPPH는산화방지물질로부터전자혹은수소를제공받으면 non-radical 로전환된다 (Choi et al., 214; Diaconeasa et al., 215). DPPH법은천연물의수용성혹은유기용매추출물의항산화활성측정법으로널리사용하는방법이다. 본실험에서는항산화활성측정방법중 Blois의방법에따라측정하였다 (Blois, 1958). 먼저 95% ethanol 에용해시킨.1 mm DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl, Sigma, USA) 8 μl와각실험군 2 μl을 E.P. tube 에넣고 3 min 간 voltexing 하여암실에서 3분간반응시켰다. 남아있는 radical의농도를 UV-Visible spectrophotometer (SCINCO, Seoul, Korea) 를사용하여 517 nm에서측정하였으며, 양성대조군으로는 gallic acid (Sigma, USA), quercetin (Sigma, USA), ascorbic acid (Sigma, USA) 를사용하였고, 농도범위는.5 mg/ml~.25 mg/ml 로측정하였다. 추출물의 DPPH에대한소거능 (IC 5 ) 은용매만을사용한대조군의흡 262 www.kosac.or.kr
블루베리추출물의미백효과 광도를 5% 감소시키는데필요한농도로나타내었다. 항산화능은시료첨가구와무첨가구의흡광도를구하여아래와같이백분율로표시하였다. absorbance of control-absorbance of sample Antioxidant activity (%) = 1 absorbance of control 2) ABTS radical scavenging ABTS radical 소거능은 Jeong 등의방법을변형하여측정하였다 (Jeong et al., 29). 실험방법은증류수에용해한 7 mm 의 ABTS potassium persulfate 2.45 mm을 1:1로넣어흡광도값이.7±.2이되도록 PBS (ph 7.4) 로희석하였다. 12-16 h 동안암소에방치하고 Radical stock solution은희석된용액 8 μl에농도별로제조된 sample 2 μl씩을가하여 15 min 동안방치후흡광도를측정하였다. 양성대조군으로는 gallic acid (Sigma, USA), quercetin (Sigma, USA), ascorbic acid (Sigma, USA) 를사용하였고, 농도범위는.5 mg/ml~.25 mg/ml 로측정하였다. 추출물의 ABTS 에대한소거능 (IC 5 ) 은용매만을사용한대조군의흡광도를 5% 감소시키는데필요한농도로나타내었다. 항산화능은시료첨가구와무첨가구의흡광도를구하여아래와같이백분율로표시하였다. absorbance of control-absorbance of sample Antioxidant activity (%) = 1 absorbance of control 3) Hydroxyl radical scavenging Hydroxyl radical은활성산소라디칼중에서화학적으로가장반응성이크며지질산화를개시하고 DNA손상을주거나돌연변이를유발하는물질로알려져있고, 생체의대사과정에서생성되는지질의과산화물이나과산화수소가 Fe 2+ 나 Cu 2+ 이온의존재하에서생성되며가장독성이강한 free radical이다. F 2 SO 4 (IronⅡ sulfate hepta-hydrate; Sigma, USA) 와 Salicylic acid를각각 9 mm 농도로제조하고각 1 ml씩반응시킨후.3 % 의 H 2 O 2.5 ml 과.5 mg/ml~.25 mg/ml 농도의블루베리추출액 1 ml을섞어 3 min 동안암실상태로반응시킨뒤 51 nm에서흡광도를측정하였다. 항산화능은시료첨가구와무첨가구의흡광도를구하여아래와같이백분율로표시하였다. absorbance of control-absorbance of sample Antioxidant activity (%) = 1 absorbance of control 12 1 8 6 4 2 l 와 5~1 μg/ml 농도로제조된블루베리추출액 2 μ l, L-tyrosine (Sigma, USA) 1.5 mm 4 μl, 15 unit 로 제조한 Mushroom tyrosinase (Sigma, USA) 2 μl 을넣고 37 에서 15 min 간반응시켰다. 반응이끝난후 tyrosinase 에의해 3, 4-dihydroxyphenylalanine (DOPA) 로부터형성 되는 dopachrome 의양을 49 nm 에서측정하였다. Positive control 로는 Arbutin 과 Ascorbic acid 를사용하였다. 4. 세포배양 B 1mg/ml B 5mg/ml B 25mg/ml B 1mg/ml B 5mg/ml Figure 1. DPPH radical scavenging activity of blueberry juice, quercetin, gallic acid, and ascorbic acid. B16F1 mouse 세포는한국세포주은행에서분양받았 으며, 1% fetal bovine serum (FBS, Gibco BRL, USA),.2 % sodium bicarbontate 를첨가한 Dulbeccos modified Eaglesmedium (DMEM; Sigma, USA) 를배지로사용하였고, 37 온도에서 5% CO 2 상태로배양하였으며, 세포가바닥면 적의 9% 정도까지자란상태에서계대배양을하였다. 5. 멜라닌함량측정 B16F1 세포를 96well 에 1 1 4 cells/well 농도로분주하 고 24 h 후에 1 nm α-msh 와블루베리추출물을각농 도별 (2 µg/ml~1 µg/ml) 로각각처리하였으며, 72 h 이지 난후멜라닌생성을확인하고세포를 PBS 로세척하였다. 세포 를수확하고 1, rpm 에서 5 min 간원심분리하고생성된 pellet 에 1N NaOH 를넣고 6 에서 1 h 동안방치하여용해시 킨후 45 nm 에서흡광도를측정하였다. 멜라닌함량은무 처리군의흡광도와비교하였으며, 양성대조군으로는 ascorbic acid 를사용하였다. B: Blueberry Q: Quercetin G: Gallic acid A: Ascorbic acid Q.5mg/ml Q.25mg/ml Q.1mg/ml Q.5mg/ml Q.25mg/ml G.5mg/ml G.25mg/ml G.1mg/ml G.5mg/ml G.25mg/ml A.5mg/ml A.25mg/ml A.1mg/ml A.5mg/ml A.25mg/ml 3. Mushroom tyrosinase 저해활성측정블루베리추출액의티로시나제저해활성을확인하기위해식약처고시방법에따라진행하였다. 실험방법은 Eppendorf tube 에.1 M sodium phosphate buffer (ph 6.5) 22 μ 1. 블루베리추출물의항산화활성 블루베리착즙액의 DPPH radical 소거능을확인한결과양 www.kosac.or.kr 263
Kor. J. Aesthet. Cosmetol., Vol. 13 No. 2, 261-266, April 215 12 1 B: Blueberry Q: Quercetin G: Gallic acid A: Ascorbic acid 1 B: Blueberry Q: Quercetin G: Gallic acid A: Ascorbic acid 8 6 4 2 B 1mg/ml B 5mg/ml B 25mg/ml B 1mg/ml B 5mg/ml 성대조군인 quercetin, gallic acid, ascorbic acid 에비해낮 은항산화활성이확인되었으나, 천연물기준으로보았을 때매우높은항산화활성을나타내었으며, 블루베리착즙액 의 IC 5 값은 83.2 mg/ml, quercetin 의 IC 5 값은.3 mg/ ml, gallic acid 의 IC 5 값은.1 mg/ml, ascorbic acid 의 IC 5 값은.4 mg/ml 이었다 (Figure 1). 블루베리착즙액의항산 화능은 flavonoids 와 polyphenols 계열성분에의해나타나 는것으로판단되어지며, 추후각성분의표준물질을이용하 여항산화능과정확한기전을규명할필요가있다. 항산화능 실험의결과를종합해보았을때블루베리착즙액은천연화 장품의소재로서매우적합하다고판단된다. ABTS 항산화실 험결과블루베리착즙액의 IC 5 값은 68. mg/ml, quercetin 의 IC 5 값은.11 mg/ml, gallic acid 의 IC 5 값은.14 mg/ ml, ascorbic acid 의 IC 5 값은.6 mg/ml 이었다 (Figure 2). ABTS radical scavenging 결과는앞서실험한 DPPH radical scavenging 보다약간높은항산화활성을나타내었는데이것 은 ABTS radical scavenging 가친수성시료와소수성시료의 radical 소거활성을모두측정할수있기때문에다른항산화 실험결과보다높은항산화능을나타내었다. Hydroxyl radical scavenging 실험결과블루베리착즙액의 IC 5 값은 91.14 mg/ ml, quercetin 의 IC 5 값은.28 mg/ml, gallic acid 의 IC 5 값 은.15 mg/ml, ascorbic acid 의 IC 5 값은.11 mg/ml 이었다 (Figure 3). 이와같은결과로볼때블루베리추출물은인체에 매우유용한천연항산화소재로서가능성이있다고판단되며, 추후다른추출방법 ( 초음파, 효소추출 ) 을통해폴리페놀의함량 증대에관한연구가필요할것으로판단된다. 2. 블루베리추출물의티로시나제저해 Q.5mg/ml Q.25mg/ml Q.1mg/ml Q.5mg/ml Q.25mg/ml G.5mg/ml G.25mg/ml G.1mg/ml G.5mg/ml G.25mg/ml A.5mg/ml A.25mg/ml A.1mg/ml A.5mg/ml A.25mg/ml Figure 2. ABTS radical scavenging activity of blueberry juice, quercetin, gallic acid, and ascorbic acid. Tyrosinase 는멜라닌합성에있어서핵심적인역할을하는 효소로서멜라닌합성에대한억제기전에가장많이밝혀져있 으며, 멜라닌합성의출발물질인 tyrosine 을 DOPA-quinone 8 6 4 2 B 1mg/ml B 5mg/ml B 25mg/ml B 1mg/ml B 5mg/ml Figure 3. Hydroxyradical scavenging activity of blueberry juice, quercetin, gallic acid, and ascorbic acid. 으로전환하기때문에 tyrosinase 의활성유무에따라서멜라 닌의양이결정된다 ( 안정현과민유홍, 214; 최연선과최태 부, 214). 본실험에서블루베리의티로시나제저해결과 IC 5 값은 528 µg/ml 으로측정되었으며, 양성대조군으로사용 한 Ascorbic acid 과 Arbutin 의 IC 5 값은각각 14.4 µg/ml 과 94.3 µg/ml 로나타났다 (Figure 4). 이와같은결과는양성대 조군으로사용한 Ascorbic acid 와 Arbutin 보다는낮은저해활 성을나타내지만실험시료가천연물이라는점을감안했을때는 비교적높은저해활성이라고볼수있으며, 선행실험에서시행 되었던블루베리잎의열수추출물실험과에탄올추출물의실험 결과의저해활성농도와비슷하다 (Kim et al., 214). 블루베 리열매와잎에는수많은폴리페놀화합물들이존재하는데주 로안토시아닌 (Ahntocyanin) 유래의 cyanidin, pelargonidin, peonidin, delphinidin, malvidin, petunidin 등이대표적이며, 식물에존재하는폴리페놀성분들은항산화및미백활성에효 과가있음이보고되어있다 (Veberic et al., 215). 일반적으로 페놀류화합물을다량으로함유하는식물체와그추출물은높 은항산화능을갖기때문에, tyrosinase 에의한가역적산화반 응을억제시키는특성을나타낸다 (Kim et al., 25). 또한페 놀류화합물은 tyrosinase 의기질인 tyrosine 과구조적으로유 사하여 tyrosinase 의활성을저해한다고알려져있다 (Boissy et al., 24). 효소반응에서경쟁적저해제 (competitive Inhibitor) 는기질과그형태가매우유사하며효소의활성부위 에기질과경쟁적으로결합하는데이와같은원리로블루베리 착즙액이 tyrosinase 를저해하여미백활성을나타내었다고판 단되었다. 추후블루베리착즙액의 tyrosinase 연관단백질과 mrna 등의발현량을통해멜라닌생성억제능에관한분자생 물학적수준의연구가필요하다고생각된다. 3. 멜라닌생성저해 Q.5mg/ml Q.25mg/ml Q.1mg/ml Q.5mg/ml Q.25mg/ml G.5mg/ml G.25mg/ml G.1mg/ml G.5mg/ml G.25mg/ml A.5mg/ml A.25mg/ml A.1mg/ml A.5mg/ml A.25mg/ml B16F1 세포주에서블루베리의멜라닌생성저해능을확인 264 www.kosac.or.kr
블루베리추출물의미백효과 Activity (%) 1 8 6 4 2 한결과농도의존적으로멜라닌양이감소함을확인하였다. 1 nm α-msh 를처리한경우무처리군 (1%) 에비해멜 라닌양이 63.79% 증가하였으며, α-msh 1 nm 을블루베 리추출물 1 μg/ml, 2μg/ml 농도로같이처리한실험군 에서는무처리군기준으로각각 14.1% 와 39.3% 로감소하였다 (Figure 5). 이와같은결과는양성대조군인 ascorbic acid 보다 는낮지만실험시료가천연물이므로비교적높은멜라닌생성 저해효과를보여준다고생각된다. 블루베리열매와잎에는안토시아닌 (Anthocyanin) 성분 이다량으로포함되어있는데이러한안토시아닌색소가 tyrosinase 활성을저해하고멜라닌생성을억제한다는연구 결과가보고되어있다 (Aramwit et al., 21). 현재블루베리 에관한연구로는영양성분분석및항산화활성에관한연구가 대부분이며미백활성에대한연구는매우미흡하다. 따라서추 후블루베리착즙액의총폴리페놀함량과플라보노이드함량 에대한정량적인분석과함께천연물을포함한지표성분의미 백활성검증을통해천연화장품소재로서의가능성에대해검 토할필요가있다. 4. 통계처리 2 4 Concentration(mg/ml) 6 8 1 모든결과값은세번의반복적인실험으로수행되었으며, 실험에의해얻어진값들의평균 ± 표준편차로나타내었다. 대 조군과실험군사이의통계학적유의성검증은 T-Test 사용하 였으며, p<. 5 이하인경우유의하다고판정하였다. Blueberry Vit. C Arbutin Figure 4. Inhibition of mushroom tyrosinase by blueberry juice, vitamin C, and arbutin. 본연구에서는블루베리추출물의천연미백기능성화장품 소재로써의가능성을확인하고자여러가지항산화활성비교와 함께 B16F1 세포의멜라닌합성, RAW 264. 7 세포의항염증 효과에대해조사하였다. 블루베리추출물의항산화활성을측 정한결과농도에의존적으로 DPPH, ABTS, Hydroxyl radical 18 16 14 12 1 8 6 4 2 con. Figure 5. Inhibition of melanin biosynthesis by blueberry juice and ascorbic acid using a-msh treated B16F1cell line. means statistically significant (p<.5). 을소거하였으며, 본연구에서진행한 3 가지항산화실험방법 중 ABTS 항산화능실험결과가가장높게측정되었고 IC 5 값은 68. mg/ml 이었다. 블루베리의미백활성을조사하기위하 여 Tyrosinase 의저해활성을측정하였는데블루베리의티로 시나제저해결과 IC 5 값은 528 µg/ml 으로측정되었으며, 이와 같은결과는양성대조군으로사용한 Ascorbic acid 와 Arbutin 보다는낮은저해활성을나타내지만천연물기준 (Kim et al., 214) 으로보았을때는매우높은저해활성이다. B16F1 세포 를이용한멜라닌생성저해실험결과블루베리추출물은농도 에의존적으로멜라닌양을감소시켰다. 이와같은결과들을 보았을때블루베리추출물은천연미백기능성화장품소재로 써적합하다고할수있으며, 국내에서는블루베리의단일물질 들에대한연구가대부분이므로추후블루베리추출물의멜라 닌합성억제에관한 Protein level 과 Gene level 의기작연구 와함께인체적용실험을통한미백활성검증이필요할것으로 판단되어진다. α _MSH 1 3 안정현, 민유홍. 행인정유의멜라닌생합성저해효과. 대한피 부미용학회지, 12: 677-683, 214. Blueberry concentration(mg/ml) +α -MSH 1 nm 최연선, 최태부. B16F1 mouse melanoma 세포에서삼채 (Allium hookeri) 추출물의멜라닌형성억제효과에관한 연구. 대한피부미용학회지, 12: 163-168, 214. Blueberry Vit. C 6 1 2 Ahn YJ, Won BR, Kang MK, Kim JH, Park SN. Antioxidant activity and component analysis of fermented Lavendula angustifolia extract. J. Soc. Cosmet. Sci-entists. Korea., 35: 125-134, 29. www.kosac.or.kr 265
Kor. J. Aesthet. Cosmetol., Vol. 13 No. 2, 261-266, April 215 Aramwit P, Nipaporn B, Srichana T. The properties and stability of anthocyanins in mulberry fruits. Food Res. Int., 43: 193-197, 21. Blois MS. Antioxidant determinations by the use of a stable free radical. Nature, 29: 1199-12, 1958. Boissy RE, Manga P. On the etiology of contact/ occupational vitiligo. Pigment Cell Res., 17: 28-214, 24. Choi BW, Lee BH, Kang KJ, Lee ES, Lee NH. Screening of the tyrosinase inhibitorys from marine algae and medicinal plants. Kor. J. Pharmacogn., 29: 237-242,1998. Diaconeasa Z, Leopold L, Rugină D, Ayvaz H, Socaciu C. Antiproliferative and antioxidant properties of anthocyanin rich extracts from blueberry and blackcurrant juice. Int. J. Mol. Sci., 16: 2352-2365, 215. Folin O, Denis W. On phosphotungstic-phosphomolybdic compounds as color reagents. J. Biol. Chem., 12: 239-243, 1912. Green LC, Wagner DA, Glogowski J. Analysis of nitrate, nitrite and nitrate in biological fluids. Anal. Biochem., 126: 131-138, 1982. Jeon SM, Choi MH, Lee YJ, Shin HJ. Anti-wrinkle effect of facial mask pack containing onion (Allium cepa) skin extracts. KSBB J., 28: 387-393, 213. Jeong CH, Jang CW, Kum DC, Lee KY, Lee SY, Hur SJ, Lee SJ. Protective effects of berry extracts on hydrogen peroxide-induced rat brain neuronal cell damage in vitro. J. Food Nutr. Res., 2: 277-28, 214. Jeong YS, Jung HK, Youn KS, Kim MO, Hong JH. Physiological activities of the hot water extract from Eriobotrya japonica Lindl. J. Kor. Soc. Food Sci. Nutr., 38: 977-982, 29. Kim KH, Kim KS, Kim JG, Han CS, Kim YH, Park SN. Synthesis of novel kojic acid perivative and its antipigmentation effect. J. Soc. Cos. Sci. Kor., 3: 49-414, 24. Kim MK, Lee IC. Anti-oxidant and anti-inflammatory effects of extracts from blueberry (Vaccinium ashei) Leaf. J. Kor. Soc. B&A., 15: 19-12, 214. Kim YJ, Uyama H. Tyrosinase inhibitors from natural and synthetic sources: Structure, inhibition mechanism and perspective for the future. Cell. Mol. Life Sci., 62: 177-1723, 25. Kochanek KS. Photoaging of the connective tissue of skin: its prevention and therapy, In: antioxidant in disease mechanisms and therapy. Adv. Pharmacol., 38: 639-655,1996. Kochanek KS, Brenneisen P, Wenk J. Photoaging of the skin from phenotype to mechanisms. Exp. Gerontol., 35: 37-316, 2. Magdalena LC, Tak YA. Reactive oxygen species, cellular redox system, and apoptosis. Free Radic. Biol. Med., 48: 749-762, 21. Marmol V, Veermann F. Tyrosinase and related proteins in memmalian pigmentation. FEBS Letters, 381: 165-168, 1996. Nakagawa M, Kawai K, Kawai K. Contact allergy to kojic acid in skin care products. Contact Dermatitis, 32: 9-13, 1995. Park IH, Chung SK, Lee KB, Yoo YC, Kim SK, Kim GS, Song KS. An antioxidant hispidin from the mycelial cultures of Phellinus linteus. Arch. Pharm. Res., 27: 615-618, 24. Samad NB, Debnath T, Ye M, Hasnat MA, Lim BO. In vitro antioxidant and anti-inflammatory activities of Korean blueberry (Vaccinium corymbosum L.) extracts Asian Pac. J. Trop. Biomed., 4: 87-815, 214. Smirnoff N, Cumbes QJ. Hydroxyl radical scavenging activity of compatible solutes. Phytochem., 28: 157-16, 1989. Srivastava A, Akoh CC, Yi W, Fischer J, Krewer G. Effect of storage conditions on the biological activity of phenolic compounds of blueberry extract packed in glass bottles. J. Agric. Food Chem., 55: 275-2713, 27. Twentyman PR, Luscombe MA. Study of some variables in a tetrazolium dye (MTT) based assay for cell growth and chemosensitivity. Br. J. Cancer, 56: 279-285, 1987. Veberic R, Slatnar A, Bizjak J, Stampar F. Mikulic PM. Anthocyanin composition of different wild and cultivated berry species. LWT-Food Sci. Technol., 6: 59-517, 215. Yaar M, Gilchrest BA. Photoageing: mechanism, prevention and therapy. Br. J. Dermatol., 157: 874-887, 27. 266 www.kosac.or.kr