<31325F FBEC8C0CEBCF72CB1E8C1F6C7FD2CC0AFC8B8BCF E687770>

Size: px

Start display at page:

Download "<31325F FBEC8C0CEBCF72CB1E8C1F6C7FD2CC0AFC8B8BCF E687770>"

미영 상
6 years ago
Views:

1 대한피부미용학회지제5권제2호 239 B16F10 Mouse Melanoma 세포에서의 L-cysteine 에의한멜라닌생성억제 안인숙 / 김지혜 / 유회숙 / 장뢰 / 강상모 / 최태부 / 권태종 / 안성관 / 김기연 * 건국대학교산업대학원향장학과 / 충청대학피부미용과 * Abstract The Inhibition Effect of L-cysteine on Melanogenesis in B16F10 Mouse Melanoma Cells An, In-Sook / Kim, Ji-Hye / Yoo, Hoe-sook / Zhang, Rui / Kang, Sang-Mo / Choe, Tae-Boo / Kwon, Tae-Jong / An, Sung-kwan / Kim, Gi-Yeon* Dept. of Cosmetology, Graduate School of Engineering, Konkuk University Dept. of Cosmetology, Chungcheong University* Pigmented skin disorders, including melasma, freckles and post-inflammatory hyperpigmentation, are one of the commonest reasons for peoples and patients seeking various skin care shops and dermatology consultation. Melanocytic cells can produce two types of pigment, pheomelanin and eumelanin, in their specialized intracellular organelles termed melanosomes. Steps of melanin biosynthesis catalyzed by tyrosinease, a key enzyme of melanogenesis, are common to eumelanogenesis and pheomelanogenesis. In addition to tyrosinase, two more enzymes,tyrosinase-related protein 1 (TYRP1) and dopachrome tautomerase (DCT), are known to be involved in eumelanogenesis and/or pheomelanogenesis. It has been reported that thiol compounds, such as cysteine and glutathione, result in decreasing pigmentation by favoring to the pheomelanogenesis and bringing down synthesis of eumelanin. However its mechanisms are poorly understood. In the present study, the effect of L-cysteine on melanogenesis and expression of tyrosinase and its related proteins was examined in a B16F10 mouse melanoma cell line model system. Cytotoxicity of L-cysteine when co-treated with α-msh and arbutin in B16F10 mouse melanoma cells were tested. Within a concentration range of L-cysteine showing no cytotoxicity effects, it decreased the amount of melanin and activity of tyrosinase in cells treated with α-msh in a dose dependent manner. In addition, L-cysteine decreased levels of protein expression of tyrosinase, but not either of TYRP1 or DCT in these cells. Treatment of L-cysteine resulted in diminishing dendrite of B16F10 mouse melanoma cells. Collectively these data show that L-cysteine has a inhibitory effect on melanin synthesis and tyrosinase activity by down-regulation of tyrosinase protein in B16F10 mouse melanoma cells. It implies that L-cysteine may be a good ingredient candidate for developing whiting effect cosmetic products or drugs for hyperpigmentary disorders. Key Words : L-cysteine, Melanogenesis, B16F10, Tyrosinase, Hyperpigmentation

2 240 Ⅰ. 서론 피부는신체의표면을덮고있고점막과연결 되어있으며독특한구조로이루어진다양한세 포들이복합적기능을발휘하는하나의기관으 로인간의건강과생존에매우중요한역할을 수행하고있다. 피부의표피는기저층, 유극층, 과립층, 각질층으로나누어지고피부세포는멜 라닌세포, 랑거한스세포, 머켈세포가존재한다. 이중멜라닌세포는기저층에존재하는수지상 세포로적황색을띄는 색을띄는 pheomelanin 또는흑갈 eumelanin을분비하여각질형성세포 를생성하고수지상돌기는주변의각질형성세 포에연해있다. 인간의멜라닌은알칼리및난용 성으로흑갈색색소인 eumelanin 과적황색색소인 pheomelanin 의복합체이다. 피부색은혈관분포와 혈색소, 각질층의두께및카로틴, 멜라닌 (melanin) 등여러가지에의해좌우되며멜라닌의분포상태 및양이주된영향을미친다. 따라서미백효과를 검증하기위해서는멜라닌형성억제여부를증명 하는것이중요하다 1). 멜라닌은멜라노좀에서합성되며멜라노좀에는 정상적인멜라닌을합성하는데필요한특이적인 효소들을함유하고있다. 이효소들중널리알려 진것으로 tyrosinase, tyrosinase related protein 1 (TYRP1) 과 dopachrome tautomerase (DCT) 등이있다. 이중 tyrosinase 는 melanogenesis 의 속도결정단계인초기반응에작용하는효소로서 tyrosine 을 3,4-dihydroxyphenylalanine (DOPA) 로전환하는 tyrosine hydroxylase 활성과 DOPA 를 DOPAquinone 으로산화하는 DOPA oxidase 활성을모두가지고있다. TYRP1 은 mouse 에서 5,6-dihydroxyindole- 2-carboxylic acid (DHICA) 1) David A, Brown, Skin pigmentation enhancers, Journal of Photochemistry and Photobiology B:Biology, 63, 2001, 1-3, p 를 indole-5,6-quinone-2-carboxylic acid 로산화 하는효소이다. DCT는초기에는 tyrosinase-reated protein 2 (TYRP2) 로불렸던 효소로서 dopachrome 을 DHICA 로이성화하는효 소이다. Tyrosinase 는 eumelanin 과 pheomelanin 의합성모두에절대적으로필요하며 TYRP1 과 DCT는 eumelanin 의합성에밀접한연계가있는 것으로알려져있다 2)3)4). Tyrosinase 에는더욱이 제 3의작용점이있는 DHI oxidase 의활성도확 인할수있으며 dopaquinone 이후의반응은크게 2 가지로분류한다. 첫번째는 dopaquinone 에 cysteine ( 또는 glutathione) 이결합하고, cysteinyl DOPA 로대사시킨다음여러단계의반응을거쳐 pheomelanin 이생성되는것이다. 또다른경로는 dopaquinone 이 dopachrome 을거치는 eumelanin 생성과정이다. 이는 dopachrome 을산화시킨다 음두경로로나누어진다. 하나는 DCT에의해 DHOCA (5,6-dihydr-oxy-indole-2-carboxylic acid) 로변환시키고이후 TYRP1 에의해 DHICA 로산화된후, 최종적으로중합반응에의해 eumelanin 이생성되는경로이다. dopachrome 에서자동산화되어 (5,6-dihydroxy-indole) 을경유시킨후 의작용에의해 중합반응에의해 다른하나는 DHI tyrosinase indole-5,6-quinone 으로변환시켜 eumelanin 이생성되는경로이다. 이두가지의멜라닌합성경로의분기점에는 L-cysteine 이가장큰작용을하게된다5)6)7). 2) Hearing VJ. Biochemical control of melanogenesis and melanosomal organization, The Journal of investigative dermatology, 4, 1999, p ) Veronique del Marmol, and Friedrich Beermann. Tyrosinase and related proteins in mammalian pigmentation., FEBS Letters, 381, 1996, p ) Choe YS. The Effect of Basic Cosmetic Ingredients on the Melanogenesis in the B16F10 Mouse Melanocyte, Konkuk University, 2006

3 대한피부미용학회지제5권제2호 241 Tyrosinase 의생체내주요기능은질병과밀 접한관련이있다. 동물에있어서멜라닌합성의 이상에따라백반과색소침착과도와같은비정상 적인멜라닌착색을일으키며, 나아가서피부암을 유발하기도한다 8)9)10). 따라서멜라닌형성을억 제할수있는미백제에대한관심이증가와더불 어다양한연구가진행되고있다 11)12). 미백화장 5) Vincent J Hearing, Biogenesis of pigment granules a sensitive way to regulate melanocyte function, Journal of Dermatological Science, 37, 2005, 1, p ) Martinez-Esparza M, Jimenez-Cervantes C, Beermann F, Aparicio P, Lozano JA, Garcia-Borron JC. Transfoming growth factor- β1 inhibits basal melanogenesis in B16/F10 mouse melanoma cells by increasing the rate of degradation of tyrosinase and tyrosinase-related protein-1, J Biol Chem, 272(7), 1997,: p ) Thody AJ and Graham A. Dose α-msh have a role in regulating skin pigmentation in humans?, Pigment Cell Res, 11, 1998,: p ) Veronique del Marmol, and Friedrich Beermann. Tyrosinase and related proteins in mammalian pigmentation., FEBS Letters, 381, 1996, p ) 技, の,, ) Vincent J Hearing. Biogenesis of pigment granules: a sensitive way to regulate melanocyte function, Journal of Dermatological Science, 37, 2005, 1, p ) Martinez-Esparza M, Jimenez-Cervantes C, Beermann F, Aparicio P, Lozano JA, Garcia-Borron JC. Transfoming growth factor- β1 inhibits basal melanogenesis in B16F10 mouse melanoma cells by increasing the rate of degradation of tyrosinase and tyrosinase-related protein-1, J Biol Chem 272(7), 1997, p ) Thody AJ and Graham A. Dose α-msh have a role in regulating skin pigmentation in humans?, Pigment Cell Res, 11, 1998, p 품은자외선에의한기미, 주근깨등을완화시키 고멜라닌색소의생성을억제하는목적으로개발 된제품이다. 기존의미백제는작용기전에따라 자외선흡수제나산란제, vitamin C나 Kojic acid, arbutin 등과같은 tyrosinase 저해제, free radical 을소거하는 tocopherol 등으로분류할수있다. 그러나이러한물질들은피부알러지나독성을발 현하기도하여안정성측면에서문제점이발견되 기도한다. 본실험에서는두종류의멜라닌이분리되는시 점에서작용하는 L-cysteine 으로부터 pheomelanin 의생성량또는 tyrosinase 의효소활 성에미치는영향을알아보고자하였다. 현재시 중에판매되고있는소망화장품사의 멜라클리 어 제품은 L-cysteine 에의한미백효과를선전 하고있다. 그러나현재까지 L-cysteine 의단독적 인영향에관한연구는발표되지않았다. 현재까 지발표된 L-cysteine 에관한연구결과는대체로 Vitamine C 와함께복용하였을경우항산화작용 에의한미백효과를볼수있었다. 일반적으로화 장품은건강한피부에매일사용하는것으로안전 성이최우선시되어야하며부작용이발생되지않 아야함에따라본실험을통해 L-cysteine 에의 한세포독성을우선적으로확인하고 L-cysteine 이화장품재료로서적합성을파악하기위하여실 시하였다. L-cysteine 은독성을포함한상태에서 혈액내에흡수될때에는 L-cystine 으로변환되어세포내에서 L-cysteine 의환원형인 L-cysteine 으로자동적으로산화됨이잘보고되어져있으므 로, 본실험에서는 L-cystine 을세포에직접투입 하여 L-cysteine 에의한영향을확인하는방법을 채택하였다. 실험에서사용한세포주는멜라닌의 생성능력이뛰어난것으로알려진 B16F10 mouse melanoma 세포주를사용하였으며, camp 경로를 통하여멜라닌의합성량을촉진하는것으로보고 된바있는 α-msh 를첨가하였을때나타나는멜

4 242 라닌함량과 tyrosinase 활성을측정하여그저해 효과를확인하였다. 그리고 melanogenesis 관련 효소발현량의변화등을측정하였다. Ⅱ. 실험재료및연구방법 1. 실험재료 실험에사용된 α-melanocyte stimulating hormone ( α-msh), arbutin, L- 3, 4-dihydro - xyphenylalanin(l-dopa), L-cystine 은 Sigma 사 로부터구입하였다. 2. 세포배양 B16F10 melanoma cell 은한국세포주은행으 로부터분양받아 10% Fetal Bovine Serum (FBS, Gibco BRL) 과 penicillin 1%, 을첨가한 JBI사의 Dulbecco's,modified Eagle's medium (DMEM), phenol red free를기본배지로하여 3 7, 5% CO2 습윤배양기에서배양하였다. 3. 시료및시약처리 L-cystine 은 1M의 HCl 에용해시킨후 0.2µm filter 로 filtration 을한후사용하였다. 세포를배 양판(6 well plate) 에각 well 당 3.5 X 104씩분주 한후 24시간배양하여배양용기에세포를부착시 킨후각시약을농도별로알맞게처리한후 배양을기본으로하였다. 4. 세포독성측정 1) MTT assay 4일 각물질들의세포독성측정과더불어실험에 사용될농도범위결정을위하여 MTT assay 를 시행하였다. 세포배양용 96-well plate 에세포를 cells/well 농도로분주하고 24시간이지 난뒤세포가완전히부착된것을확인하였다. 200nM α-msh 과 L-cysteine 이농도별로첨가된 배지로교환하고 4일간배양후에 MTT assay 를 시행하였다. MTT assay 는세포배양이끝난후 MTT 용액 (200µg/mL) 을각 well 당 50µL 씩넣고 37 에 3 시간동안반응시킨후 PBS buffer 로수세한다 음 DMSO 를각 well 당 200µL 씩첨가한후 ELISA reader (MolecuLar Devices) 를이용하여 570nm 에서흡광도를측정하였다. 세포생존율 (%) = 2) FACS analysis 시료첨가군의 O.D. at 570nm 100 시료무첨가군의 O.D. at 570 nm FACS analysis 는세포배양이끝난후세포를 수확하여 에서 PBS buffer 로두번세척한후 8000rpm 5 분간원심분리를시행하였다. 상층액을제 거한후새로운 하고 사의 PBS buffer 400µL 에세포를희석 Propidium Iodide 4µg.mL 을염색한후 FACS Calibur 장비를이용하여 Laser 에서 Red Channel 로분석을하였다. 5. 멜라닌함량측정 세포배양용 농도로분주하고 리하고 로 6well plate 에 BD 488nm 3.5 X 104 cells/well 24시간이지난뒤각시약을처 4 일을배양하였다. 배양세포를 PBS buffer 2회수세한후원심분리하여수확한다음육안 으로멜라닌세포의색깔을관찰하고, 10% DMSO 가첨가된 1N NaOH 용액을 95 에서 20 분간멜라닌용해시킨후 정하였다. 6. Tyrosinase 활성측정 490nm 에서흡광도를측 Tyrosinase 의효소활성은기질인

5 대한피부미용학회지제5권제2호 243 L-3,4-dihydroxy-phenylalanine (L-DOPA) 이산 화되어검붉은색을띄는 것을 dopachrome 이생성되는 490nm 에서측정하였다. 앞에서언급되었던 실험들에서와같은방법으로세포를배양하고배 양이끝난후 cell lysis buffer 인 RIPA buffer(50mm Tris-HCl, ph 7.5, 150mM NaCl, 1% NP-40, 0.5% sodium deoxychlolate, 0.1% SDS와 Roche Diagnostics 사의 EDTA free Cocktail protease inhibitors) 로 lysis 한후 20µL 를취하여 0.1M sodium phosphate buffer (ph 7.0) 에녹인 2mg/mL L-DOPA 80µL 를각각혼합 한후 2시간동안 37 에서배양하였다. 반응이 끝난후 490nm 에서흡광도를측정하여 O.D. 값을 나타내었다. 7. Western blotting assay 세포를 3.5 X 104 이되도록 plating 한후 24시간 이지난뒤에시약을처리하고 4일동안배양하였 다. 배양이끝난후세포를수확한후 PBS buffer 로 2회수세한다음 RIPA lysis buffer 를첨가하 여 4 에서 30분간반응시키고 12000rpm 에서 30 분간원심분리후 cell debris 를제거하였다. 시료내단백질정량은 bradford 시약을사용하 여정량하였으며 40µg의단백질을이용하여 10% SDS-PAGE 를실시하였다. Tyrosinase, TYRP1, DCT 항체는 SantaCruz 사의제품을사용하였으 며 5% skimmilk 에 1:1000 으로희석하여반응시킨 후 Ammersham 사의 ECL kit를사용하여발광시 킨후필름으로현상하였다. Ⅲ. 결과및고찰 1. L-cystine 과 α-msh, Arbutin 의 B16F10 세포생존율에미치는영향 실험물질들이멜라닌합성에미치는영향을보 기위해 B16F10 mouse melanoma cell 을사용하 여 PKA pathway 를경유하여 melanogenesis 를 유도하는것으로알려진 α-msh 와멜라닌생성 저해제인 arbutin 을처리하였다. α-msh 와 arbutin 은실험에사용한농도에서세포독성을나타내지 않았다. Melanogenesis 유도물질과저해물질이 세포증식에커다란영향이없는것을확인하고 차후실험들을진행하였다. L-cysteine 성분이 B16F10 melanoma cell 의생 존율에미치는영향을알아보기위하여세포독성 을측정하였고, L-cystine 을녹인 1M HCl 에대한 영향을함께관찰하기위하여 control 과 1M HCl 을단독으로처리한시료를함께사용하였다. L-cystine 의농도는 N-acetyl-L-cysteine 에대한 보고자료를참조하여결정하였다. α-msh 와 arbutin 그리고 L-cystine 은실험에사용한농도 에서는세포독성이거의나타내지않았다 (Fig. 1). 멜라닌세포의증식을촉진하거나억제하는물질 의경우세포의증식에미치는영향만으로직접적 인멜라닌생성촉진이나억제효과를논하기는 어렵지만, 대체로세포독성을나타내지않으면서 멜라닌의생성을억제하는물질이좋은미백가능 성물질이라할수있다. Cell Viability (%) CTL CTL Fig. 1. Cytotoxicity of L-cystine when co-treated with α-msh and arbutin in B16F10 mouse melanoma cells 2. L-cysteine 의최종멜라닌생성억제효과 멜라닌은멜라닌세포의세포소기관인멜라노좀 에서일련의효소반응에의해생성되며멜라닌 합성과정에핵심역할을하는효소인 tyrosinase 의활성을 1M 1M HCl HCl α -MSH -MSH 200nM 200nM Arbutin Arbutin 0.01% 0.01% Cys Cys 0.5mM 0.5mM Cys Cys 1mM 1mM Cys Cys 2mM 2mM α -MSH+Arbutin -MSH+Arbutin α -MSH+Cys0.5 -MSH+Cys0.5 α -MSH+Cys1 -MSH+Cys1 α -MSH+Cys2 -MSH+Cys2 L-cysteine 이억제하는지알아보기위

6 244 하여 과 L-cystine 을처리한후합성된멜라닌의양 tyrosinase 의활성을측정하였다. 앞선세포독 성결과를참고하여멜라닌생성량측정실험과 동일한농도범위에서실험을진행하였다. 고 L-cystine 을 B16F10 melanoma cell에처리하 4 일간배양한다음, 세포를수확하여멜라닌 세포수에따른멜라닌양을측정하였다. 별로 각농도 L-cystine 을처리한결과멜라닌양은아무 시약도처리하지않은 생성을촉진하는 control 에비하여멜라닌 α-msh 만처리한것에서흡광 도는두배가량증가하였고, α-msh 와 L-cystine 2mM 을함께처리한것은멜라닌양은 아무것도처리하지않은 control 과유사한정도 로감소한것으로나타났다 (Fig 2-3). O.D (490nm) CTL 1M HCl α-msh 200nM Arbutin 0.01% Cys 0.5mM Cys 1mM Cys 2mM α -MSH+Arbutin α -MSH+Cys0.5 α -MSH+Cys1 α -MSH+Cys2 Fig. 2. The inhibition effect of L-cystine on melanin synthesis in B16F10 mouse melanoma cells by L-cysteine 혹은촉진하는지알아보기위하여시험물질처리 후합성된멜라닌의양과 tyrosinase 의활성을측 정하였다. 실험물질을 B16F10 melanoma cell에 각농도별로처리하고 4일배양한후세포내 tyrosinase 효소활성을조사하였다. α-msh 200nM 을처리하였을때 control 에비 해약 5배정도증가한것을알수있었고 arbutin 을처리한경우 control 보다도약간감소하였다..L-cystine 을단독으로처리하였을때 control 보 다감소하여 arbutin 과유사하게 activity 가감소 하는것으로나타났고, α-msh 와함께처리한것 에서도 α-msh 는것으로나타났다 (Fig 4). O.D (490nm) 단독으로처리한것보다감소하 Fig. 4. Inhibition effect of L-cysteine on the tyrosinase activity in B16F10 mouse melanoma cells 4. CTL 1M HCl α-msh 200nM Arbutin 0.01% 멜라닌합성관련효소의단백질발현량 의변화조사 Cys 0.5mM Cys 1mM Cys 2mM α -MSH+Arbutin α -MSH+Cys 0.5 α -MSH+Cys 1 α -MSH+Cys 2 Fig. 3. The difference of melanin contents by L-cysteine(1; control, 2; 1M HCl, 3; α-msh 200nM, 4; ar- butin 0.01%, 5; L-cystine 0.5mM, 6; L-cystine 1mM, 7; L-cystine 2mM, 8; α-msh + arbutin, 9; α-msh + L-cystine 0.5mM, 10; α-msh + L-cystine 1mM, 11; α-msh + L-cystine 2mM) 3. L-cysteine 의세포내 tyrosinase 활성억 제효과 실험물질이멜라닌의합성및합성과정에서핵 심역할을하는효소인 tyrosinase 의활성을억제 L-cystine 을처리하였을경우 tyrosinase 활성 이감소하였고생성된멜라닌의양도감소하였다. 따라서본실험에서는 tyrosinase 활성의감소가 효소발현량의변화에의한것인지를확인하고자 하였다. 또한 melanogenesis 관련효소중중요한 작용을하는 TYRP1, DCT 발현량에 L-cysteine 이미치는영향을조사하였다. Tyrosinase 활성을알아본실험조건과동일하 게세포배양과시약을처리하였다. α-msh 를처 리하였을때 control 에비해현저히 tyrosinase 발 현량이증가되는것을관찰할수있었고 arbutin 을함께처리하였을때에는발현량이감소하는것

7 대한피부미용학회지제5권제2호 245 을알수있었다. 2mM 의 L-cystine 을처리하였을 때에는 arbutin 을처리한시료와유사하게단백질 의발현이감소하는것을볼수있었다. 그러나 TYRP1 과 DCT의경우는 α-msh 와 L-cysteine 에의한변화량이큰차이를보이지는않았다. 결 과적으로 L-cysteine 은세가지의효소가운데 tyrosinase 의단백질발현에만영향을주는것으 로나타났다 M HCl Arbutin (0.01%) L-cystine (mm) α-msh 200nM β-actin Fig. 5. Western blot analysis of the expression of tyrosinase, TYRP1 and DCT in B16F10 mouse melanoma cells Ⅳ. 결론및제언 Tyrosinase TYRP-1 DCT 이급격히감소함을나타내는조건에서 L-cystine 0.5mM, 1mM, 2mM을 α-msh 와함께처리하였 을때, α-msh 단독으로처리하였을때보다멜라 닌생성량과효소활성이많이감소하였고특히 cystine 2mM의농도에서는 arbutin 에의한멜라 닌생성억제와유사하게멜라닌생성이저해되 는것을알수있었다. 더욱이이조건에서세포에 대한독성은거의나타내지않았다. L-cysteine 에 의한관련단백질들의발현량을 western blotting 으로알아보았을때 L-cysteine 은 tyrosinase 단 백질의발현량을감소시키고, TYRP1 이나 DCT의 단백질발현에는영향을미치지않음을알수있 었다. 즉, 본실험에서 L-cysteine 은 B16F10 melanoma cell 에서 tyrosinase 단백질발현을억제 하여멜라닌생성과 tyrosinase 활성을저해하는 것으로나타났다. 이상의연구결과를토대로보아 L-cysteine 은향후미백에효과가있는약품및화 장품개발에기여할수있을것으로사료된다. 최근에는멜라닌생합성저해, 자외선흡수및 차단, 각질용해, 피부세포활성촉진등다양한형 태의미백기능성화장품들이판매되고있다. 본 연구에서는현재복용제의성분으로는사용되고 있지만외용제로서의연구가미비한 L-cysteine 이피부미백제로서의가능성과 melanin 합성에서 의작용기전에어떠한영향을미치는가를알고자 하였다. 이를위해 melanogenesis 의가장마지막 단계인 정하였고, melanin 의함량과관련효소의활성을측 또한관련효소들의단백질발현량을 western blotting 기법을이용하여측정하였다. B16F10 melanoma cell 에 melanogenesis 를유 도하는것으로알려진 melanin α-msh 를처리하였을시 생성량과관련효소의활성이증가됨을 확인하였고, 멜라닌생성억제제로알려진 arbutin 을처리하였을때는 melanin 생성량과효소활성 참고문헌 1. Curto EV, Kwong C, Hermersdorfer H, Glatt H, Santis C, Virador V, Hearing VJ and Dooley P. "Inhibitors of mamalian melanocytes tyrosinase: In vitro comparisons of alkyl esters of gentisic acid with other putative inhibitors., Biochemical Pharmacology, 57, 1999, p Dawley RM, Flurkey WH. 4-hexylresocinol, a potent inhibitor of mushroom tyrosinase, J. Food Sci, 58, 1993, p Iwata, M., Corn, T., Iwata, S, Evertte, M. and Fuller, B. The relationship between tyrosinase activity and skin color in human foreskins, J. Invest Dermatol, 9, 1990, p.195

8 성기태, 피부미백제기술동향, 한국과학기술정보 연구원, HE G.,Vijay Kumar Kutala,Periannan Kuppusamy,and Jay L. Zweier. In vivo Measurment and mapping of skin redox stress induced by ultraviolet light exposure, Free Radical Biology & Medicine, 36,5, 2004, p Alaluf1 Simon, Ulrike Heinrich, Wilhelm Stahl,Hagen Tronnier, and Sheila Wiseman. Dietary carotenoids contribute to normal human skin color and UV photosensitivity, The American Society for Nutritional Sciences, 132, 2002, p David A, Brown. Skin pigmentation enhancers, Journal of Photochemistry and Photobiology B:Biology, 63, 2001, 1-3, p Hearing VJ. Biochemical control of melanogenesis and melanosomal organization, The Journal of investigative dermatology, 4, 1999, p Veronique del Marmol, and Friedrich Beermann. Tyrosinase and related proteins in mammalian pigmentation., FEBS Letters, 381, 1996, p Choe YS. The Effect of Basic Cosmetic Ingredients on the Melanogenesis in the B16F10 Mouse Melanocyte, Konkuk University, Vincent J Hearing. Biogenesis of pigment granules a sensitive way to regulate melanocyte function, Journal of Dermatological Science, 37, 2005, 1, p Martinez-Esparza M, Jimenez-Cervantes C, Beermann F, Aparicio P, Lozano JA, Garcia-Borron JC. Transfoming growth factorβ1 inhibits basal melanogenesis in B16/F10 mouse melanoma cells by increasing the rate of degradation of tyrosinase and tyrosinase-related protein-1, J Biol Chem, 272, 7, 1997, p Thody AJ and Graham A. Dose α-msh have a role in regulating skin pigmentation in humans?, Pigment Cell Res, 11, 1998, p Veronique del Marmol, and Friedrich Beermann. Tyrosinase and related proteins in mammalian pigmentation, FEBS Letters, 381, 1996, p 技, の,, Vincent J Hearing. Biogenesis of pigment granules, a sensitive way to regulate melanocyte function, Journal of Dermatological Science, 37, 2005, 1, p Martinez-Esparza M, Jimenez-Cervantes C, B e e r m a n n F, A p a r i c i o P, L o z a n o J A, Garcia-Borron JC. Transfoming growth factorβ1 inhibits basal melanogenesis in B16F10 mouse melanoma cells by increasing the rate of degradation of tyrosinase and tyrosinase-related protein-1, J Biol Chem, 272, 7, 1997, p Thody AJ and Graham A. Dose α-msh have a role in regulating skin pigmentation in humans?, Pigment Cell Res, 11, 1998, p

5

26 3 (2005 9 ) J Korean Oriental Med 2005;26(3):55-65 The Effcects of Psoraleae fructus Extract on Melanin Synthesis of B16 Melanoma Cells Jae-Ho Chung, Hyung-Sik Seo Dept. of Ophthamology, Otolaryngology