(19) 대한민국특허청 (KR) (12) 등록특허공보 (B1) (45) 공고일자 2014년12월24일 (11) 등록번호 10-1475505 (24) 등록일자 2014년12월16일 (51) 국제특허분류 (Int. Cl.) A61K 8/97 (2006.01) A61Q 19/02 (2006.01) A61Q 19/00 (2006.01) (21) 출원번호 10-2012-0076458 (22) 출원일자 2012 년 07 월 13 일 심사청구일자 2012 년 07 월 13 일 (65) 공개번호 10-2014-0010543 (43) 공개일자 2014 년 01 월 27 일 (56) 선행기술조사문헌 KR1020100005557 A KR1020120058720 A (73) 특허권자 신라대학교산학협력단 부산광역시사상구백양대로 700 번길 140 ( 괘법동, 신라대학교 ) (72) 발명자 김형석 부산광역시해운대구해운대로 483 번길 10 ( 우동, 롯데아파트 ) 1 동 1301 호 김재훈 부산광역시해운대구삼어로 55 ( 반여동, 명장 SK 아파트 ) 102 동 505 호 ( 뒷면에계속 ) (74) 대리인 이덕록전체청구항수 : 총 4 항심사관 : 서대종 (54) 발명의명칭톳추출물을유효성분으로함유하는미백용화장료조성물 (57) 요약 본발명은톳추출물을유효성분으로포함하는미백용화장료조성물에관한것으로, 미백효과를갖는천연물질톳추출물을기능성화장품소재로제공하는뛰어난효과가있다. 대표도 - 도 5-1 -
(72) 발명자 이상현 부산남구오륙도로 85, 101 동 605 호 ( 용호동, 오륙도 SKVIEW 아파트 ) 김미향 부산남구신선로 566, 308 동 1404 호 ( 용호동, GS 하이츠자이 ) 전명제 부산사하구신산북로 63, 나동 301 호 ( 신평동, 중앙쉐르빌 ) 이승우 부산연제구법원북로 16, 202 동 1602 호 ( 거제동, 거제 2 차현대홈타운 ) 장혜지 부산광역시기장군철마면정전리산 180-89 이발명을지원한국가연구개발사업 과제고유번호 00047743 부처명 중소기업청 연구관리전문기관 ( 사 ) 한국산학연협회 연구사업명 산학연공동기술개발사업 연구과제명 톳을이용한고기능성화장품소재의개발 기여율 1/1 주관기관 신라대학교산학협력단 연구기간 2011.06.01 ~ 2012.05.31-2 -
특허청구의범위청구항 1 톳 (Hizikia fusiformis) 의에탄올추출물을다시 CH 2 Cl 2 /H 2 O(1:1) 혼합물로추출한후수득한수층을부탄올로다시분획하여수득한것이특징인톳추출물의수층분획물. 청구항 2 제 1항의톳추출분획물을유효성분으로함유하는것을특징으로하는미백용화장료조성물. 청구항 3 삭제청구항 4 제 2항에있어서, 상기조성물은스킨, 로션, 크림, 에센스, 영양수, 화장수및팩중어느하나의제형임을특징으로하는화장료조성물. 청구항 5 제 2항에있어서, 상기조성물은비누, 샴푸, 린스, 클렌징, 전신세정제, 세안제, 트리트먼트및미용액중어느하나의제품임을특징으로하는화장료조성물. 명세서 [0001] 기술분야 본발명은톳추출물을유효성분으로포함하는미백용화장료조성물에관한것이다. [0002] 배경기술멜라닌은자외선으로부터피부를보호하는역할을하지만과도하게생성될경우피부에색소가침착되어기미와주근깨를형성하며, 심할경우피부암의원인이되기도한다. 따라서, 피부의색소침착현상을방지하지위해서는멜라닌생성과정의일부분을저해하여멜라닌생성을감소시켜야한다. 멜라닌은동 식물과미생물계에널리존재하는페놀류의고분자천연색소로표피기저층에존재하는 melanocyte 내의 melanosome에서합성된다. [0003] 멜라닌은 L-tyrosine의연속적인산화반응으로합성되는데, L-tyrosine은 tyrosinase에의해 3,4- dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) 으로전환되고, L-DOPA는 phenylanine-3,4-quinone으로산화되어중간대사산물을거쳐최종적으로멜라닌이된다. 따라서, 피부미백과관련된기능성화장품의소재를개발하기위해서는그물질이 tyrosinase의활성을저해하는지의여부가중요하다. [0004] 현재까지멜라닌색소의생합성을저해하는물질에관한연구는주로 tyrosinase의활성을저해하는수준에서이루어져왔으며저해제로는 hydroquinone, ascorbic acid, 4-hydroxyanisole, kojic acid, azelaic acid, arbutin, corticosteroids 등이보고되고있으나, 안전성및경제성등의문제점으로사용이제한되고있다. 따라서, 화장품업계에서는기존의미백소재가가지고있는이러한단점을극복하기위해서최근에는상백피, 짝자래나무, 포도씨및피트모스추출물등의천연물질을활용한화장품소재의개발을위한연구가활발히진행되고있으며, 피부에안전하면서미백효과가뛰어난소재개발에대한요구가증가하고있다. [0005] 최근우리나라는생활수준의향상으로건강한삶과노화에대한관심이증가하면서웰빙 (well-being) 및웰에이 - 3 -
징 (well-aging) 의개념이확대되고있는추세이다. 특히, 화장품산업에는생리활성성분이첨가된기능성화장품의개념이도입되어산업적으로많이사용되고있다. 기능성화장품은화장품기술에생명공학기술을접목시켜피부미용뿐만아니라노화예방작용도가질수있는화장품군으로, 노령인구의증가에따른삶의질향상에대한사회적욕구를충족시킬수있는제품으로인식되고있다. 이러한기능성화장품의개발을위해서는소비자가원하는활성과안전성을가진원료물질의개발이우선되어야한다. [0006] 천연물질중에는여러가지생리활성을가진물질이많이존재하여이에대한연구가활발히진행되고있으며, 기능성화장품소재로활용되고있다. 최근, 천연물질의생리활성검색은육상생물대상뿐만아니라해양생물대상으로도활발히이루어지고있으며, 특히, 해조류의생리활성성분들에대한연구가활발히진행되고있다. 해양생물은독특한환경으로인하여육상생물에없는특유의대사과정을가지고있어다양한신규생리활성물질의탐색가능성이높다. 또한, 해양생물에대한연구는육상생물에대한연구에비해아직그수가많지않아서새로운천연물질의개발에대한기대가높은편이다. [0007] 톳 (Hizikia fusiformis) 은갈조식물 (Phaeophyta) 문모자반과의바닷말로우리나라의서해안, 남해안및제주도 에서식하는천연자원식물이다. 톳은식이섬유가풍부하고혈액응고작용및면역증강작용등의기능을갖는중 성다당류인라미나란 (laminaran) 과함황산성다당류인푸코이단 (fucoidan) 을다량함유하고있다. [0008] 지금까지밝혀진톳에대한연구로는미생물번식효과 (Lim, S. B., Kim, S. H., Ko, Y. H., and Oh, C. K. 1995. Extraction yields of Hizikia fusiforme and Aloe vera Linne by supercritical carbon dioxide and antimicrobial activity of their extracts. Kor. J. Food Sci. Technol. 27, 68-73), 지질대사개선효과및항암효과 (Jung, B. M., Ahn, C. B., Kang, S. J., Park, J. H., and Chung, D. H. 2001. Effects of Hizikia fusiforme extraction lipid metabolism and liver antioxidative enzyme activities in triton-inducced hyperlipidemic rats. J. Kor. Soc. Food Sci. Nutr. 30, 1184-1189, Kim, S. A., Kim, J., Woo, M. K., Kwak, C. S., and Lee, M. S. 2005. Antimutagenic and cytotoxic effects of ethanol extracts from five kinds of seaweeds. J. Kor. Soc. Food Sci. Nutr. 34, 451-459) 등이있다. [0009] 또한, 해양생물을이용한미백용조성물에관한보고로는대한민국공개특허제 10-2004-0095124 호에티로시나제 저해활성을갖는곰피추출물또는그로부터분리된플로로탄닌류의화합물을함유하는미백용화장료조성물에 관해개시되어있다. [0010] 한편, 식용해조류인톳추출물을이용하여피부미백활성을가진기능성화장품소재에관한보고는지금까지 전무한실정이다. 발명의내용 [0011] 해결하려는과제 따라서, 본발명의목적은톳추출물을함유하는피부미백용화장료조성물을제공하는데있다. [0012] 과제의해결수단본발명의상기목적은톳에탄올추출물및분획물을제조하는단계와 ; 제조한톳추출물에의한 B16F10 흑색종세포생존율을조사하는단계와 ; 상기제조한톳추출물에의한 B16F10 세포의 tyrosinase 저해활성및멜라닌생성저해활성을조사하는단계와 ; 톳추출물에의한 DPPH 자유라디칼소거능을측정하는단계와 ; LPS에의해유도된 inos 발현에대하여톳추출물의저해효과검증단계를통하여달성하였다. - 4 -
[0013] 발명의효과 본발명은톳의추출물로부터피부미백활성을가진기능성화장품소재를제공하는뛰어난효과가있다. [0014] 도면의간단한설명 도 1 은톳추출물의제조과정을나타낸공정도이다. 도 2는톳추출물의 tyrosinase 저해활성을나타낸그래프이다. 도 3은 B16F10 세포내에서톳추출물의세포독성을나타낸그래프이다. 도 4는 B16F10 세포내에서톳추출물의미백효과를나타낸그래프이다. 도 5는 B16F10 세포내에서톳추출물의 tyrosinase 저해활성을나타낸그래프이다. 도 6은톳추출물에의한 DPPH 자유라디칼소거능을나타낸그래프이다. 도 7은 LPS에의해유도된 inos 발현에있어서톳추출물의저해효과를나타낸그래프이다. 이하, 본발명의구체적인내용을바람직한실시예와실험예를통하여상세히설명한다. [0015] [0016] [0017] 발명을실시하기위한구체적인내용본발명은톳추출물을유효성분으로함유하는미백용화장료조성물을제공한다. 본발명의톳추출물을유효성분으로함유하는조성물은미백효과를위한화장품, 세안제및샴푸등에다양하게사용될수있다. 예컨대, 각종스킨, 로션, 크림, 에센스, 영양수, 화장수및팩과같은화장품류와비누, 샴푸, 린스, 클렌징, 전신세정제, 세안제, 트리트먼트및미용액등이있다. 본발명의미백용화장료조성물은톳추출물이외에화장품제제에있어서수용가능한담체를포함할수있으며, 이는이미공지되어사용되고있는화합물또는조성물이거나앞으로개발될화합물또는조성물로서피부와의접촉시인체가적응가능한이상의독성, 불안정성또는자극성이없는것을말한다. 예를들어, 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘오일, 습윤제, 보습제, 점성변형제, 유제, 안정제, 자외선차단제, 발색제, 향료등은이미당업계에공지되어있기때문에당업자라면적절한해당물질또는조성물을선택하여사용할수있다. [0018] 본명세서에서 톳추출물 은톳을에탄올로추출하여얻어진에탄올추출물과그추출물에서메탄올, 헥산, 부탄올및물을사용하여정제된분획물을포함하는의미이다. [0019] [0020] 본발명의각실험예에서사용된톳추출물의농도는 1, 10 및 100 μg /ml 이었다. kojic acid (Sigma, USA) 및 arbutin (Sigma, USA) 은하기각실험예에서양성대조군으로사용되었다. [0021] 이하, 본발명의구체적인방법을실시예와실험예를들어상세히설명하고자하지만본발명의권리범위는이 들예에만한정되는것은아니다. [0022] [0023] 실시예 1 : 톳추출물의제조본발명의공시재료톳 (Hizikia fusiformis) 은국내에서자생또는양식되는생시료를구입하여사용하였다. 구입한톳은수세및건조시킨후분쇄하여얻은분말 500 g에 10배량 (w/v) 의 80% ethanol을첨가하여 80 에서 8 시간동안추출한후, 지름 150 mm의여과지 (Advantec, Japan) 로 2회여과한뒤동결건조하여톳에탄올추출물 - 5 -
108.5 g를수득하였다. 상기톳에탄올추출물을극성과비극성즉, methanol, hexane, butanol 및 H 2 O 을사용하여도 1에나타낸바와같이분획한다음, speed vacuum evaporation으로농축한후동결건조하여메탄올분획물 5.1 g, 헥산분획물 3.7 g, 부탄올분획물 3.8 g 및수층분획물 4.1 g을수득하였다. 톳에탄올추출물의수율은 21.7% 였고, 각용매별분획물의수율은 3.4~4.7% 의범위였으며특히, 메탄올분획물이가장높게나타났다 ( 표 1). [0024] Extraction method Yield (%) Fractions Yields (%) 80, 8 h, ethanol 21.7 Hexane 3.4 Methanol 4.7 Butanol 3.5 Aqueous 3.8 표 1 [0025] [0026] 실험예 1 : 톳추출물의 tyrosinase 저해활성측정 멜라닌생성에중요한역할을하는효소인 tyrosinase 에대한저해활성은 mushroom tyrosinase 를효소원으로 하여기질인 L-DOPA 와의반응으로생성된 L-dopaquinone 의흡광도로측정하였다. [0027] 즉, 50 mm sodium phosphate (ph 6.8) buffer 155 ul에 50 mm L-DOPA (Sigma, USA) 기질액 25 ul와실시예 1 에서수득한톳추출물을농도별로희석하여 10 ul 첨가하고잘혼합한후, mushroom tyrosinase (50 units/ml, Sigma, USA) 10 ul를첨가하여 25 에서 2분간반응시켜생성된 DOPA chrome의흡광도를 475 nm에서측정하였다. [0028] [0029] 실험결과도 2에나타낸바와같이, 톳추출물중가장높은 tyrosinase 저해활성을나타낸톳에탄올추출물은 100 μg /ml 농도에서음성대조군에비해 mushroom tyrosinase 효소활성을통계적으로유의하게 44% 억제하였다. 특히, 상기추출물의농도는양성대조군인 arbutin의 100 μg /ml 농도보다는낮은저해활성을나타내었지만, 10 μg /ml 농도보다는높은저해활성을보여주었고, 또다른양성대조군인 kojic acid의 10 μg /ml 농도보다는낮은저해활성을나타내었다. 한편, 톳의메탄올, 헥산, 부탄올및수층분획물들은 100 μg /ml 농도에서음성대조군에비해 tyrosinase 활성을통계적으로유의하게각 25%, 27%, 23% 및 27% 억제하였으며특히, 수층분획물은 10 μg /ml 농도에서도통계적으로유의하게 16% 의저해활성을나타내었다. 그러나, 4가지분획물의 1 μg /ml 농도에서는통계적으로유의한저해활성을나타내지않았다. [0030] [0031] 실시예 2 : 세포배양본발명에사용된생쥐의 B16F10 흑색종 (melanoma) 세포는한국세포주은행 (Korean Cell Line Bank, KCLB, Seoul, Korea) 에서분양받았다. B16F10 세포는 10% fetal bovine serum (FBS, BioWhittaker, Walkersville, MD, USA) 및 penicillin-streptomycin (100 units/ml, BioWhittaker) 을포함하는 DMEM (BioWhittaker) 배지를사용하여 37, 5% CO 2 에서배양하였다. [0032] [0033] 실험예 2 : MTT assay 를이용한세포독성평가 톳추출물이 B16F10 세포의생존율에미치는영향을알아보기위하여 3-[4,5-dimethylthiazole-2yl]-2,5- diphenyl-tetrazolium bromide (MTT, Sigma, USA) 환원방법을사용하여측정하였다. 즉, B16F10 세포를 96 well plate 에 well 당 1 10 4 개의세포를접종하고 24 시간동안 37, 5% CO 2 세포배양기에서배양한후농도별 로희석한톳추출물 10 ul 를첨가하여배양하였다. 24 시간배양한뒤 MTT 용액 (5 mg /ml) 10 ul 와배지 90 ul 를 - 6 -
첨가하여상기배양조건에서 4 시간동안배양한후배지를제거하고세포를 phosphate buffered saline (PBS, BioWhittaker) 으로 2 회세척하였다. 각 well 당 10% DMSO 200 ul 를첨가하여 570 nm 에서흡광도를측정하였다. [0034] 실험결과도 3에나타낸바와같이, 톳에탄올추출물은 1, 10, 100 μg /ml의모든농도에서통계적으로유의한세포독성을나타내지않았다. 또한, 톳수층분획물의모든농도에서도통계적으로유의한세포독성을나타내지않았다. 한편, 메탄올, 헥산및부탄올분획물들은 100 μg/ml의농도에서는통계적으로유의하게세포독성을나타내었으며, 양성대조군인 kojic acid의 10 μg /ml 농도에서도통계적으로유의하게세포독성을나타내었다. [0035] [0036] 실험예 3 : 멜라닌생성저해활성측정실시예 2에서배양된 B16F10 세포 ( 배지 2 ml) 에 200 nm α-melanocyte stimulating hormone (MSH, Sigma, US A) 을처리하고농도별로희석한톳추출물 10 ul를첨가하여 48시간배양하였다. 그후배지를제거하고 PBS 2 ml로 2번세척한다음, PBS 1 ml를다시첨가하여세포를긁어낸뒤, 4, 1,700 xg에서 5분간원심분리하였다. 세포침전물에 1 N NaOH (10% DMSO) 200 ul를첨가하여현탁시킨후, 96 well plate로옮겨 405 nm에서흡광도를측정하였다. [0037] 실험결과도 4에나타낸바와같이, 톳에탄올추출물은 100 μg /ml의농도에서음성대조군에비해멜라닌생성을통계적으로유의하게 26% 저해하는것을보여주었고, 톳수층분획물은 100 μg /ml의농도에서통계적으로유의하게 18% 억제효과를나타내었다. 특히, 가장높은저해활성을나타낸 100 μg /ml의톳에탄올추출물은양성대조군인 arbutin 및 koji acid의 100 μg /ml 농도에서의저해활성보다낮게나타났지만, 10 μg /ml 농도에서의활성보다는높은활성을나타내었다. [0038] [0039] 실험예 4 : 세포내 tyrosinase 저해활성측정상기실시예 2에서배양된 B16F10 세포 ( 배지 2 ml) 에 200 nm의 α-msh (Sigma, USA) 를처리하고농도별로희석한톳추출물 10 ul를첨가하여 48시간배양하였다. 그후배지를제거하고 PBS 2 ml로 2번세척한뒤, 다시 PBS 1 ml를첨가하여세포를긁어내어 4, 1,700 xg에서 5분간원심분리하였다. 세포침전물에 lysis buffer (50 mm sodium phosphate (ph 6.8) buffer, 1% Triton X-100, 0.1 mm PMSF) 55 ul를첨가하여세포를용해시킨후, 얼음에 30분간방치한뒤 4, 1,700 xg에서 5분간원심분리하여상층액을회수하였다. 상층액 50 ul에 50 mm sodium phosphate (ph 6.8) buffer 125 ul와기질용액인 50 mm L-DOPA (Sigma, USA) 25 ul를넣고 37 에서 1시간반응시킨후, 475 nm에서흡광도를측정하였다. [0040] 실험결과도 5에나타낸바와같이, 톳에탄올추출물은 100 μg /ml의농도에서음성대조군에비해통계적으로유의하게 40% 의저해활성을나타내었으며, 10 μg /ml의농도에서도통계적으로유의하게 20% 의저해활성을나타내었다. 또한, 톳의메탄올, 헥산, 부탄올및수층분획물전부 100 μg /ml의농도에서음성대조군에비해통계적으로유의하게각 18%, 22%, 20% 및 23% 의저해활성을나타내었다. 특히, 가장높은저해활성을나타낸톳에탄올추출물은 10 μg /ml의농도에서양성대조군인 arbutin 및 kojic acid의 10 μg /ml 농도에서의활성보다낮은저해활성을나타내었지만, 100 μg /ml의농도에서는 arbutin의 10 μg /ml 농도에서의활성보다높은저해활성을보여주었다. [0041] 피부는자외선에노출되면 tyrosine 에서출발하여일련의산화중합반응을거쳐생성된 melanin 에의해기미, 노인성홍반등을유발하며피부노화가촉진된다. 이과정에서중요하게작용하는효소가 tyrosinase 이며, tyrosinase 효소의활성억제로멜라닌생합성을억제할수있는것으로알려져있다. [0042] 따라서, 톳에탄올추출물및수층분획물은 tyrosinase 활성을억제시킴으로서피부색소침착을방어하는미 - 7 -
백효과가있음을확인하였다. [0043] [0044] 실험예 5 : DPPH 자유라디칼소거능측정피부는외부환경에노출되어있는신체기관으로서자외선에의한영향을직접받는다. 자외선은피부에활성산소종을유발시키고그결과피부세포의손상및색소침착을증가시키게되며이는직접적인피부노화로이어진다. [0045] 톳추출물의항산화활성을검증하기위해서, 양성대조군인 BHT (butyl hydroxy toluen, Sigma, USA), gallic acid (Sigma, USA) 및 ascorbic acid (Sigma, USA) 와비교하여 DPPH의수소공여능을측정하였다. 즉, 1,1- Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH, Sigma, USA) 은 MeOH에녹여 1.5 10-4 M/mL의농도로제조하였다. 농도별로희석한톳추출물 50 μl와 DPPH 용액 200 μl를균일하게혼합하여실온에서 30분간방치한후, 520 nm에서흡광도를측정하였다. [0046] 실험결과도 6에나타낸바와같이, 톳추출물중가장높은활성을나타낸톳에탄올추출물은 5,000 μg /ml 농도에서 93% 의라디칼소거능을나타내었다. 상기에탄올추출물을동일농도의양성대조군 ascorbic acid 및 gallic acid의라디칼소거능과비교시유사한활성을나타내었지만, 500 μg /ml의농도에서는양성대조군보다낮은활성을나타내었다. 또한, 톳수층및부탄올분획물의 5,000 μg /ml 농도에서는유의적으로 90% 및 66% 의소거능을나타내었다. 특히, 톳수층분획물은 5,000 μg /ml 농도에서는동일농도의 ascorbic acid 및 gallic acid와유사한활성을나타내었다. [0047] 따라서, 톳에탄올추출물및수층분획물의피부보호효과가기대되는항산화소재로서의활용가능성을확인 하였다. [0048] [0049] 실험예 6 : In vitro inos 발현검출시스템을이용한 LPS 유도성 inos 발현저해효과검증 Nitric oxide (NO) 는다양한생리적기능에관여하고있으나, 과도한 NO의생성은세포사멸을유발시키는것으로알려져있다. NO의합성효소인 NOS (nitric oxide synthase) 는정상생리적조건에서존재하는 constitutive형 (cnos) 과면역반응에의해일어나는 inducible형 (inos) 으로나뉜다. 유도성 inos는세포내칼슘농도와외부에서주입된 calmodulin의자극과는무관하게, 활성화된다양한세포에서유도되어병리생태학에서중요한역할을한다. NOS의과다발현은뇌출혈, 뇌성마비및뇌졸중등의뇌손상이나알츠하이머병및파킨슨병과같은퇴행성뇌신경질환의신경독성과밀접한관련이있다고알려져있다. [0050] 본발명에서는톳추출물의면역활성을검증하기위해서양성대조군인 saponin (Sigma, USA) 과비교하여 LPS (lipopolysaccharide) 유도성 inos 발현저해효과를측정하였다. 즉, RAW264.7/pGL2-Neo-miNOS_pro11 세포 (Kim, N.-Y., Jang, H., Lee, D.-G., Jang, M.-K., Lee, S. W., Jeon, M. J., Kim, M., Kim, S. G., and Lee, S.-H. 2011. Establishment of in vitro detection system for inos expression and verification of suppressive effect by pine needle extract. KSBB J. 26, 172-176) 를 60 mm dish에서 24시간배양한뒤, 배지를제거하고 PBS로세정한후 LPS( 최종농도 1 μg /ml) 를첨가한다음, 농도별로희석한톳추출물 5 ul를첨가하여 37, 5% CO 2 세포배양기에서 24시간배양하였다. 세포추출물의 luciferase 활성측정은 luciferase assay kit (Promega, WI, USA) 을사용하여제조사의방법에따라수행하였으며, TD-20/20 Luminometer (Turner Design, Sunnyvale CA, USA) 를이용하여측정하였다. 모든 luciferase 활성측정결과는 BCA protein assay reagent (Pierce, Rockford, IL, USA) 를사용하여상기측정한세포추출물의단백질함량으로표준화하였다. [0051] 실험결과도 7 에나타낸바와같이, LPS 만을처리하여 inos 발현을유도시킨대조군에비해톳에탄올추출물 - 8 -
500 μg /ml를처리하였을때 inos 발현이 82% 저해되어표준물질인 saponin 50 μg /ml과유사한활성을나타내었고, 50 μg /ml의농도로처리한경우에는 42% 저해되어 saponin 0.5 μg /ml의활성보다높은 inos 저해활성을나타내었다. 또한, 톳수층분획물을 500 μg /ml의농도로처리하였을때 inos 발현이 80% 저해되어동일농도의톳에탄올추출물처리와유사한활성을나타내었다. 한편, 톳부탄올, 헥산및메탄올분획물을 500 μg /ml 처리하였을때 inos 발현이 70%, 62% 및 65% 저해되어 saponin 5 μg /ml 처리와유사한활성을나타내었다. 반면, 톳에탄올추출물및분획물들을최종농도 5 μg /ml 이하로처리하였을경우에는 LPS 유도성 inos 발현저해효과를나타내지않았다. 즉, 최종농도 500 50 μg /ml의톳에탄올추출물및수층분획물이 LPS 유도성 inos 발현을효과적으로저해함을관찰하였다. [0052] 따라서, 톳에탄올추출물및수층분획물은안전한피부미백효과를갖는기능성화장품소재로이용가능할것 으로판단되었다. [0053] 산업상이용가능성 이상에서설명한바와같이, 본발명은미백효과를갖는해양천연물질톳의추출물을기능성화장품소재로제 공하는효과가있으므로화장품산업상매우유용한발명인것이다. 도면 도면 1-9 -
도면 2 도면 3-10 -
도면 4 도면 5-11 -
도면 6-12 -
도면 7-13 -