대한임상병리사회지 : 제 17 권제 1 호 19E5 B 형간염바이러스표면항원검색을위한 Latex agglutination 법에대한고찰 연세대학교원주의과대학부속기독병원임상병리파 허향숙 이경원 양용석 연세대학교외과대학임상병리과 송경순 이삼열 Evaluation of Latex Agglutination Tests for the Detection of HBs Ag> liyang Suk Hur, Kyng 'Von Lee, Y ong Suk Ryang Dept. 01 Clinical Pathology, 1foη ju Medical College Yonsei University Kyung Soon Song, Samuel Y. Lee Dept. 01 Cliη ical Pathology Yonsez" Uη ive γsity College 01 Medicine =Abstract= The study subjects consisted of positive blood serum samples from 151 patients and negative blood serum samples from 56 patients referred for HBsAg test by ELISA in Yonsei University Yeong Dong Hospital during 5 month' period from December, 1984 to April, 1985. HBs Ag was tested by latex agglutination, using the original (LA-A) method and the recently developed, modified (LA-B) method separately as well as RPHA. The results were as fo I1ows: 1. Of the 151 HBs Ag positive samples confirmed by ELISA, 140(92.7%) were confirmed positive by RPHA, 134(88.7%) by LA-A and 135(89.4%) by LA-B (P>0.05). 2. Of the 56 HBs Ag negative samples confirmed by ELISA 55(98.2%) were shown negative by RPHA, 53(94.6%) by LA-A and 52(92.9%) by LA-B (P>0.05). 3. Of the 142 moderate to strongly reactive samples (O.D>2.0) confirmed by ELISA, 139(97.9' %) were confirmed positive by RPHA, 133(93.7%) by LA-B (P>0.05). Of the 9 weakly reactive samples (O.D<2.0) reported by ELISA, 1(11. 1%) each was shown positive by RPHA and LA-A and 2(22.2%) by LA-B (P>0.05). 4. Comparison of the original latex agglutination (LA-A) and the modifiecl latex agglutination (LA-B) methods showed their predictability levels were 97. 7% by LA-A and 97. 1 % by LA-B. There was no significant statistical difference between the LA-A and LA-B methods(p>o. 05) and a further advantage of the modified method is its economical use of reagents. On the basis mentioned above, we considered these techniques very useful detection methods because both LA-A and LA-B appear to be equivalent about predictability. Also they can be. applied for mass screening of HBs Ag, and as routine tests for private c1inics and emergency testing of HBs Ag in blood banks. - 26-
토하고자하였다. 1. 서론 1965 년 Blumberg 등에의해 Australia a Iì. tigen 이발 II. 연구재료및방법 견된이래 (Blumberg 등, 1965) HBs 항원이 B 형깐염 바이러스의표식자로서알려져왔고, 그검색을위한 어러가지띤역화학석방뱀의예만도, 득이도빚이의 싣용성에대하여많은연구와말전이거듭되어왔다. 지금까지캐말된방법들은그여 1 만도의차이에따라 크게세가지로분류띈다. 즉, 제 1 세대침사립에는 agar gel immunodiffusion 법이있고제 2 세대검사법 에는 counterimmuno-electrophoresis (CIEP), comple ment fixation(cf)test 와 haemagglutination inhibition (HAI) test등이이에속하고제 3 세대검사법에는 reverse passive hemagglutination (RPHA) test, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) 그러고 radioimmunoassay(ria) 등이있다 (Locker, 1979). 현재미국에서는 RIA 법과 ELISA 볍같은제 3 세태 검사법의시행으로 (Goldfield 등 1975) 과거에는수렐 후간염 (post-transfusion hepatitis) 의 30 ", 35% 가 B 형 간염바이러스 (HBV) 에감염된상태였었는데 (Aach 및 Kahn, 1980) 이것이 10 ", 15% 로감소되었다고한다 (Prince 등, 1974). 제 3 세대검사법중에서 RIA 법파 ELISA 법은높은예만도를보여환자진단용으로척당 하지만 ( 조등, 1982) 검사시간파비용이비교적많이소 요되는단점이있으며특히 RIA 법은고가의특수장비 즉, gamma 계수기를설치해야검사이용이가능하묘로 통상적이용에문제가있다 ( 김등, 1981; 조등, 1982). 이에비해 RPHA 볍은특수한장비가필요치않고바 교적적은 101 1 용으로검사할수있어서현재국내의일 반컴사살이나혈액원에서넬리이용되고있다 ( 김등, 1981; 즈등, 1982; 킴등, 1984). 그러나아직까지예 만도가높으면서도간단하고경제적이며, 가능하면자 동화까지될수있는만족할만한검사볍이없는실정 이며 ( 김등, 1984), 지금까지사용된방볍듣은결파판 정이신속치못하고기구의반복사용이 1 외한오염및 감염문제를해결하지옷하고있으며시약의유효기간 이짧은컷이단점이다. 이에저자는 ELISA 법으로양성결과플부안환자혈 청과음성결과블보인환자혈청을재료로하여최근개 발된 Latex agglutination 볍을원볍 (LA-A) 파변볍 (LA B) 그리고 RPHA 의 3 가지방법으로 HBs 항원검사를동 시에실시한다음그결파릎바교하였다. 또한이땅 법들이대량선별검사, 혈액은행의응급검사에대한적 합성여부그리고경제적측면에서의효파등을비교검 A. 연구재료 1984 년 12 월부터 1985 년 4 월사이이 1 연세의대부속영 동병원임상병러파에의뢰된 HBs 항원검사중에서 EL ISA 법으로 HBs 항원이검출펀 151 명의환자혈청파 HBs 항원이검출안된 56 명의환자혈청을재료로하였다. 가검혈청은 -20 0 C 냉동실에보그만하여사용하였고가 검혈청이 60 켜개정도확보되었을해검사플시행하였 다. B. 연구방볍 ELISA 법은 Auszyme@ II (Abbott) kit 릎사용하였고 RIA 법은 Ausria@ II -125 (Abbott) kit 를사용하였으며 RPHA 볍은 Serodia (Fujirebio) kit 를사용하였다. Latex agglutination 볍은 Latex Quicktest (Human)kit 릎사용하였으며다음파같은두가지방볍으로시행하 였다. (1) Latex agglutination 볍의채료 가토에서얻은 HBs 항원에대한항체가업혀진 latex 업자현타액과 positive control 및 negative control 그리고일회용 slide 와일회용교만봉이사용되었다. (2) 캠사방법 a) Latex agglutination-a(la-a) 볍 양성대조혈청 50μl 와음성태조혈청 50μ1 를 slide 의 두젤 (cell) 에각각떨어뜨리고여백의 6 썰 (cell) 에는검 체 50μl 를각각떨어뜨란다음이어서 HBs 항원에대 한항체가업혀진 latex 업자현탁액 50μl 릎첨가하고 교만봉 A 로균등하게흔합시킨다. 그후 slide 릎약 5 분동안앞뒤로기울이면서응집여부블판독한다. 이 혜응칩이있 면양성, 응집이없으면음성 로판독 한다. 황달이나 AST 상승등의특징적안증상이확인 된환자에서는위음성반응이나타날수있으므로 1 : 40 으로휘석시컨혈청을추가하여재검사하였다. 1::) Latex agglutination-b(la-b) 업 가검혈청파양성및음성다 ] 조혈청을원법의 1/2 량 안 25μl 로감량하여 slide 에떨어뜨리고, 동시에 latex 입자현탁액도 1/2 량안 25μl 로감량하여흔합한뒤에 Latex agglutination-a 뱀파동일한방뱀으로시행하여 결과블판득하였다. III. 연구결과 A. RPHA 뱀파 LA(LA-A 및 LA-B) 볍의성적 - 2 7-
- - "' -P -뼈 따Table 1. Comparison of RPHA, LA-A and LA-B methods for the detection of HBsAg. ELISA Positive Negative Ju 때다-- -J\ -) -oy (!- n I 151 I 56 RPHA Pos. (%) I 140(92. η 1( 1. 8)1 a) ELISA: Enzyme-linked immunosorbent assay b) RPHA: Reverse passive hemaggluination Neg.(%) 11( 7.3)1 55(98.2)1 c) LA-A: Latex agglutination-a(50μ1 of sample volume) d) LA-B: Latex agglutination-b (25μ1 of sample volume) P>O.05 : Comparison RPHA with LA-A and LA-B. LA-A I LA-B Pos. (%) j Neg. (%) jpos.(%) 꿇자 ~) 134(88.7)[ 17(11. 3)1 ι 135(89.4)1 16(10.6} 3( 5.4)1 53(94.6)1 4( 7. 1)52(92.9) 97.7 i - ELISA 법에서 HBs 항원잉 = 성안환자 151 명에대하여 RPHA 법으로비교심험한성적에서예만도는 92.7% (1 40 명 ) 로나타녔고득이도는 98.2%(55 명 ) 로나타났 며, 이의예측도는 99.2% 였다. 또 LA-A 볍 A 로는 예민도가 88.7% (1 34 명 ) 이었고튜이도는 94.6%(53 명 ) 이었 녁예측도는 97.7% 였다. 그러고 LA-B 법에서는 예민도가 89.4% (1 35 명 ) 이었고득이도는 92.9%(52 명 ) 이었으며예측도는 97.1% 였다. RPHA 법, LA-A 법그 리고 LA-B 법에대한통계학적유의성을 McNemar-test 로검증한바유의한차이가없는것으로나타났다. (P>O. 05), (Table 1) B. 흡광도에위한 RPHA 법, LA-A 법과 LA-B 법의 벼교 ELISA 법에서 HBs 항원양성안환자 151 명중에서 흡광도 2. 이상안강양성환자는 142 명이었고흡광도 2.0 야하안약양성환자는 9 명이었다. 장기에대하여 RPHA 법, LA-A 법그리고 LA-B 법에대한예민도릎쿠 Table 2. Comparison of sensitivity between RPHA, LA-A and LA-B using positive samples by ELISA Method ELISA a) n=142(100%)1 b) n=9(100%) 한성척은 Table 2 에서와같다. 즉, HBs 항원강양성 환자에서 RPHA 법의예민도가 97.9% (1 39 명 ) 로나타 났고 HBs 항원약양성환자에서는 1 1. 1% (1 명 ) 였다. 또 HBs 항원강양성환자에대한 LA-A 법의예민도는 93.7%(133 명 ) 이었 며 HBs 항원약양성환자에서는 1 1. 1% (1 명 ) 이었다. 그리고 LA-B 법에서는 HBs 항원캉 양성환자에대하여 93.7%(133 명 ) 가나타났고 HBs 항 원약양성환자에서 22.2%(2 명 ) 를보였다. 상기방법 들간의통계학적유의성을 x2-test 로검증한결과유 의한차이가없었다 (P>0.05). C. ELISA 법파 LA-A 법에서결과가일치하지않은 8 예에대한 RIA 법의확안실험 실험에이용된총 207 명의환자중에서 ELISA 법 과 LA-A 법에서성적이일치하지않은환자는총 21 명 이였우먹 l 중에서 8 명을임위선정하역 RIA 법우혹 비교한결과는마음과같다. 즉 ELISA 법과 LA-A 법 의양 음성결과가서로일치하지않은 8 명을 RIA 법 으로비교한결파는 ELISA 법과 RIA 법의성적이모두 일치하였우며 (ELISA 법양성 6 명은역시 RIA 법양성 Table 3. Comparison of 8 cases with discrepant results by ELISA and LA-A to the results by RIA RPHA 1(11. 1) ELISA(O.D) LA-A RIA(c.p.m) LA-A 133(93. 7) 1(11. 1) LA-B 133(93. 7) 2(22.2) +(>2.0) +(21, 786) P(by x 2 -test) d) >0.05 +(>2.0) +(24, 292) +(>2.0) +(14, 184) a) Samples showing mcderate to strongly positive +( <2.0) +( 2, 143) results (O.D>2.0). +( <2.0) +( 823) b) Samples showing v.reakly positiive results(o.d +( <2.0) +( 5, 264) <2.0). + 138) c,d) Comparison of positive rates between RPHA, LA-A and LA-B. - 28- + 213)
ELISA 뱀음성 2 영응역시 RIA 법음성 ), LA.A 법과 RIA 법위성적에서는모두일치플보이지않았다 (LA.A 법음성 6 명은모두 RIA 법양성, LA.A 법양성은모 두 RIA 볍음성 ) 그리고 ELISA 법에서흡광도 2.0 0 1 상인강양성자에서는역시 RIA 법에서도방사능위수 치가높게나타났다 (Table 3). 방법간외정확성을벼교하는데예측도가예민도나득 이도보다훨씬중요하게인용되고있음을고려할때 우리나라에서도검사방법에대한비교연쿠에예측도의 성적이다루어져야할것 로생각된다. 본연구에서는특히예측도 (predictability) 의확률을 비교하는데비중을두고자하였으며 (Table 1), 특히 본연구중에서 LA.B 법의예측도가 97.1% 로나타났 N. 고찰 HBs 항원의정확한검사는간칠환의진단에필요할 뿐만아니라 (Chiaramonte 등, 1977; 안등, 1980) 수혈후간염발생을방지하기위하여시행하는공혈자검 사블위해서도중요하다 (Hyland 등, 1979: 안등 1980) 우리나라는만성활동성간엽이나간경병증에서는물론 원발성간암에서도 HBs 항원양성률이현저히높아서 ( 킴등, 1977: 김및이, 1981) 이들의원인적인자로 간염바이러스가중요한역할을하고있음이알려져 있으벼 ( 최, 1978: 최및박, 1980) HBs 항원검출을위 한방볍은예만도가높응제 3 세대검사법외이용이늘 어나고있마 (Polesky 및 Taswel1, 1975). 본연쿠에서 RPHA 법과 LA.A 법그러고 LA.B 법의검사성척을비 교해불때위양성률은 RPHA 법이 1. 8% 이고 LA.A 법 은 5.4%, LA.B 법은 7.1% 의성적이다. 1981~ AA. BB.CAP(American Association of Blocd Banks and the College of American Pathologists) 의연쿠성적은 RPHA 가 1. 3%, LA 법이 5.9% 의위양성률로서저자 의연쿠성척과유사한특이도를보이고있읍을알수있 다 (Polesky 및 Hanson, 1981). 그러고예민도와예측 도변에서도우수한정척을보였고세방법간의통계 학척으로유의한차이가없었다. 첩단컴사방법의연구 에서예민도 (sensitivity) 냐특이도 (specif icity) 와함께 점단캠사법에서양성이라고판명된사랍중에실제로 양성일확률을나타내는예측도 (predictability) 를측정 한논문이많지않다. 근래에선진국에서는칩단검사 고 RPHA 볍이나 LA.A 법에비하여예측도의성적이 비슷하게나타난컷은검사살에서의잘용가능성을보 여주고있다. Polesky 및 Hanson(1981) 의연쿠결과에의하면 HBs 항원캉양성 (O.D>2.0) 컴체에대한예민도는 RPHA 볍에서 98.3% 이었고 LA볍에서는 83.9% 를보였으며 약양성 (O.D<2.0) 캠체에대한- 예만도는 RPHA볍이 49.2% 그러고 LA 법은 30.6% 로보고되었다. 처자의 컴우에도이와비솟한컬과를보였으나 LA 볍에서캉 양성캠체에대하여는예민도가 LA.A 볍파 LA.B 볍이 각각 93.7% 로나타나서비교적높은정척을보였다. ELISA 볍파 RIA 볍의예민도와특이도를비교한많 운연구성적틀을보면 ELISA 법운예만도가가창높은 컴색볍으로알려진 RIA 법과비슷한진단적의의가있 다고한다 (Nath 등. 1983: Hanson 및 Polesky, 1983; Hyland 등, 1979: 병및킴, 1984: 안등 1980: Vandervelde 등, 1977: Wolters등, 1976). 저자의정척에 서 ELISA 법파 LA.A 법이불일치블보인 8 개의캠체 를 RIA 법으로확인살험한결파에서 ELISA 볍파 RIA 법이일치하여 LA 법은 ELISA 볍보다는낮은예민도 임을알수있 q(table 3). 즉, 이결과는 LA 볍이제 3 세대캠사법인 ELISA 볍파 RIA 법보다캠자의청확 정이약깐떨어진다고볼수있다. 그러나 LA.A 볍파 LA.B 법그리고 RPHA 법빛 ELI. SA 볍을종합적으로비교했을해 (Table 4), LA.A 볍 및 LA.B 법은컴사의소요시간이현재의검사볍중에 서는제일단축되며또한검사과정이칸펀하면서도판 Table 4. Comparisons of ELISA, RPHA, LA.A and LA.B methods for the detection of HEsAg. Method I Material 뎌繼 μ1 짧짧 i TAT* 많짧 ELISA Enzyme 200 3hrs 13 steps RPHA Chicken RBC 5 6Mons 2hrs 4 steps LA.A Latex 50 12Mons 10min LA.B Latex 25 12Mons 10min 2 steps *T A T: Turn Around Time Spectropl tometer Tray mi o. I Higher xer I Mcderate Mcderate Lower - 29-
독이용이하고, 장비가전혀필요하지않아서 기쿠의 반복사용에의한오염및 감염의문제가없으며, 시약 의보존도비교적장기간가능하다. 이런점으로미루 어 볼해대량선벨검사, 의원급의통상검사및 혈액은 행의응급검사에특히유용하리라생각되며, LA-B 법 을사용하면가격도상당히절감되면서검사의정확성 도기대할수있을것으로믿는다. V. 결 론 ELISA 법으로확인된환자혈청을대상으로 RPHA 법 파최근개발된 Latex agglutination 법을원법 (LA-A) 과변법 (LA-B) 으로쿠분하여 HBs항원검사를시행하여 비교검토한결과마음과같은성적을얻었다. 1. ELISA 볍에서 HBs항원양성으로나타난환자혈 청 151 명 중에서 RPHA 볍 140명 (92.7%), LA-A 법 134명 (88.7%) 및 LA-B 뱀 135 명 (89.4%) 이 양성 로 나타났다 (P>0.05). 2. ELISA법으로확인된 HBs항원음성환자 56명중 에서 RPHA 법 55 명 (98.2%), LA-A 볍 5 명 3(94.6%) 및 LA-B 법 52 명 (92.9%) 이 음성 A로나타났다 (P>0.05). 3. ELISA 법으로 HBs항원캉양성 (O.D>2.0) 으로나 타난환자 142 명에 대한결과는 RPHA 법 139 명 (97.9 '%), LA-A 볍 133 명 (93.7%) 그리고 LA-B 법 133명 (93.7%) 이 양성결과를보였다 (P>0.05). HBs항원약 양성 (O.D<2.0) 으로나타난환자 9명에 대한결과는 RPHA볍과 LA-A 볍에서각각 1 명 (1 1.1%) 이 양성결파 로나타났고 LA-B 법에서 2 명 (22.2%) 이 양성결파였 "t;-}(p>0.05). 4. LA 법을바교했을해 원볍 (LA-A) 파 변볍 (LA-B) 운예측도가각각 97. 7%, 97. 1 % 로서차이가 없었오 며경제적인효파를기대할수있었다 (P>0.05). 이상의결과에서 LA-A 법및 LA-B 법은 RPHA 법에웃지않은유사한예만도를보안점 로불쩨대량선밸검사, 의원급의통상검사빛혈액은행의응급검사에특히유용하리라생각되며, 변법 (LA-B) 에서 97.1% 의예측도를보인것은경제적인효파도아울러기대할수있을것으로생각된다. 참고문헌 1. Aach, R. D. and Kahn, R. A.: Post-transfusion Hepatitis: Current Perspectives, Ann. Intern. Med. e2: 5~9, 1980. 2. 안우성, 백안기, 김상언 : 검사방법에따른간염항 원캠출률에판한연쿠, 대한병리학회지 14(1) : 31, 1980. 3. Blumberg, B.S., Alter, H.]. and Visnich, S.: A new" Antigen in Leukemia Sera, ]AMA 91(7) : 541, 1965. 4. 범회승, 낌세종 : RIA 법파 EIA 법에의한 B 형간 염바이러스표지자캠출에판한고찰, 대한소화기 병학회장지 16(2) : 69 (413), 1984. 5. Chiaramente, M., Heathcote, ]., Crees, M. and Sher1ock, S.: Detection, by three three techniques, of hepatitis B surface antigen(hbsag) and determination of HBsAg and anti-hbs titres in patients with chronic liver disease, Gut 18 : 1, 1977. 6. 조동희, 최영숙, 박애자, 송경순, 이삼옐 : HBs 항 원검출을위한 Third generation Test 에관한비 교연구, 대한병리학회지 16(2) : 231, 1982. 7. 최흥재 : Hepatitis B 항원및항체의임상척의의, 연세의대논문접 11( 제 1 호부록 ) : 48(S), 1978. 8. 최흥재, 박인서 : 한국에있어서의 Virus 성간염, 대한의학협회지 23(8) : 645, 1980. 9. Goldfield, M., Black, H.C., Bi11, ]., Srihongse, S. and Pizzuti, W.: The consequences of administering blood pretested for HBsAg by third generation techniques: a progress report. ]. Med. Sci. 270 : 335, 1975. Am. 10. Hanson, M.R. and Polesky, H.F.: Radioimmunoassay and Enzyme Immunoassay Methods for Detecting Viral Hepatitis Markers, Am. ]. Clin. Pathol. 80 (Suppl) : 590, 1983. 11. Hyland, C.A., Mason, E.C., Harden, P.A., Shaw, A.E., Maurer, D. and Hope, S. L.: Sensitivities of Radioimmunoassay and Enzyme-Linked lmmunosorbent Assay for detection of Hepatitis B Surface Antigen, Vox. Sang. 36 : 137, 1979. 12. 김정룡, 서동진, 김선태, 이효양 : 한국인원발성 간암예에서 AFP 검출및 HBsAg 양성의임상적의 의, 대한내과학회장지 20(3) : 229, 1977. 13. 김정룡, 이효석, 유병철, 백현욱, 송영욱, 정현채 최상운 : HBs Ag 검출에있어서 Radioimmunoassay(RIA) 와 Reverse Passive Hemagglutination (RPHA) 의벼교, 대한의학협회지 27(1) : 49, 1984. 14. 김재식, 최성만, 킴경선, 김영태, 이진주, 이해숙 배규옥, 김중명 : RPHA 법과 EIA 법에 Ag 검출률, 대한입상병리학회지 p.17. 1981. 의한 HBs - 30-
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