Bio-Monolith Protein G 컬럼 - mab 적정농도 (Titer) 측정을위한추가옵션 응용자료 생물의약품및바이오시밀러 저자 Phu T. Duong Agilent Technologies, Inc. 소개 최근에단클론성항체 (mab) 는다양한질병치료요건에부응하는주요바이오의약품으로떠오르고있습니다. 특별한유전자설계를통해제조된이러한항체는특정유전자구조를가지며병원체를겨냥하는능력이훨씬개선되었습니다. 항체개발과정에서, Protein A 및 G Analytical Affinity 컬럼을사용하여다양한세포배양상청액에서의항체적정농도 (titer) 나농도를측정하여고수율클론항체를선별합니다. 비활성 Polymeric Monolith 는 Protein A 와 Protein G 컬럼의담체로사용됩니다. 두컬럼모두높은항체친화성을가지기때문에세포배양상청액중의항체와만결합합니다. 그러나표 1 에제시된바와같이선택성에는일정한차이가있습니다. 이응용자료에서는 Agilent Bio-Monolith Protein G 컬럼에대해소개합니다. 이컬럼은고속및높은로딩용량을필요로하는분석을위해고안되었으며, 본문에서제공한데이터는이컬럼이높은특이성과직선성을가지고있음을보여줍니다. 직선성분석데이터는컬럼이세포배양상청액의 mab 를정확하게정량화할수있음을보여주며, 사용수명분석데이터는컬럼의높은재현성, 긴사용수명, 뛰어난안정성과낮은역압을입증합니다. Bio-Monolith Protein G 컬럼은 Bio Monolith Protein A 컬럼의보완제품으로, 단클론성항체의적정농도 (titer) 측정에추가적인옵션을제공합니다.
표 1. 다양한 IgG 아강에대한 Agilent Bio-Monolith Protein A 및 G 의결합친화성 [1,2] 항체 Protein A Protein G 인간인간 IgG1 ++++ ++++ 인간 IgG2 ++++ ++++ 인간 ++++ 인간 IgG4 ++++ ++++ 인간 IgA ++ 인간 IgD ++ 인간 IgE ++ 인간 IgM ++ 생쥐생쥐 IgG1 + ++ 생쥐 IgG2a ++++ ++++ 생쥐 IgG2b ++++ +++ 생쥐 + +++ 생쥐 IgM +/ 항체조각인간 Fab + + 인간 F(ab )2 + + 인간 scfv + + 인간 Fc + + 인간 K + + 인간 l + + ++++ = 강한친화성 +++ = 중간친화성 ++ = 약한친화성 + = 미세한친화성 = 친화성없음 재료및방법 인산나트륨일염기일수화물 (Sigma Aldrich, Corp., p/n S3522)(MW 137.99) 인산나트륨이염기이수화물 (Sigma, p/n 71643) (MW 177.99) 시트르산일수화물 (Sigma, p/n C7129)(MW 21.14) 염화나트륨 (Sigma, p/n S5886)(MW 58.44) 인산, H 2 O에서 85 wt %, 99.99% 극미량무기물주성분 (Aldrich, p/n 345245) 수산화나트륨용액, 물에서 5 ~ 52%, IC 용리액 (FLUKA 7264)(MW 4) 글리신 ( 전기영동용 ), 99%(Sigma, p/n G8898) (MW 75.7) 빙초산 (Sigma, p/n A9967)(MW 6.5) 염산, 36.5 ~ 38.%, 생체시약, 분자생물학용 (Sigma, p/n H1758) E.coli 세포용해키트 (Sigma p/n CB5) 중국햄스터난소 (CHO) 세포상청액및용해물, 곤충세포상청액, CHO 세포유도인간화단클론성항체 (IgG2 및 ), CreativeBio Labs 에서구입 분석법이동상 A는결합완충액이자세척완충액이며인산나트륨완충액 5mM(pH 7.4) 을포함하고있습니다. 27.6g의인산나트륨일염기일수화물과 35.6g의인산나트륨이염기이수화물을각각 1L의탈이온수과혼합하여 2가지원액 (.2M) 을제조합니다. 5mM 인산나트륨완충액과 5mM 염화나트륨이포함된 2L 인산나트륨 (ph 7.) 을제조하려면다음과같이하십시오. 1. 195mL의인산나트륨일염기일수화물원액과 35mL 의인산나트륨이염기이수화물원액을혼합한후자력교반기로두용액을교반합니다. 2. 5.8g의염화나트륨을넣고계속하여교반합니다. 3. 1L 탈이온수를추가합니다. 4. 용액의 ph를측정하고 NaOH 또는 3M 인산을이용해 ph 7.으로조절합니다. 5. 용액을 2L 용적플라스크에붓고표시선까지물을추가합니다. 이동상 B(pH 2.) 는.1M 시트르산을포함하는용리완충액이며, 21g 시트르산일수화물을 6mL 가량의물에넣고가볍게저어서용해시켜제조했습니다. 1M 염화수소를이용해 ph 2. 으로조절한다음, 1L 용적플라스크에옮기고물로표시선에도달할때까지희석합니다. CHO 세포상청액, 용해물, 곤충세포상청액 ( 모든시료는원심분리를거쳤음 ) 과인간화단클론성항체 IgG1, IgG2 및 은뉴욕 CreativeBio Labs 에서구입했습니다. E.coli 용해물은 Sigma Aldrich, Corp 의권장프로토콜에따라준비되었습니다 [3]. 키트에는 CelLytic B, 박테리아용해시약 (5mL), 리소자임용액 (1 1mL), 벤조나제 (25, 단위 ) 및단백질분해효소억제제 (5mL) 가포함되어있습니다. 용해물은 1.g 의세포판을 1mL CelLytic B 시약에첨가한후,.2mL 리소자임,.1mL 단백질분해효소억제제및 5 단위의벤조나제를추가하여제조되었습니다. 혼합물을 1 분동안간단히교반혼합하여 ( 손으로또는진탕기로 ) 가용성단백질을충분히추출합니다. 그런다음, 혼합물을 5,rpm 으로 1 분동안원심분리시켜불용성물질을전부침전시킵니다. 가용성단백질분획물 ( 상청액 ) 과세포찌꺼기 ( 튜브바닥에가라앉는침전물 ) 를조심스럽게분리합니다. 상청액의단백질농도는 Bradford 단백질분석법을이용해추정할수있습니다. 이실험에서의농도는 4mg/mL 입니다. 2
그런후에, 일부상청액에다음과같이 IgG1, IgG2 또는 을첨가합니다. 결합완충액 ( 또는완충액 A) 을이용해상청액의최종농도가 1mg/mL 로되도록희석하며, 2mg/mL 의정제된인간화 mab( 단클론성항체 )( 예 : IgG1, IgG2, 또는 ) 를한가지씩첨가합니다. 분석조건컬럼 : Agilent Bio-Monolith Protein G, 직경 5.2mm, 길이 4.95mm(p/n 519-69) 결합완충액 : A: 5mM 인산나트륨 (ph 7.4) 용리완충액 : B:.1M 시트르산 (ph 2.) 시료 : 크로마토그램참조 주입부피 : 크로마토그램참조 유속 : 1.mL/ 분 ( 또는크로마토그램참조 ) 기울기 : 시간 ( 분 ) % A 1.4 1.5 2. 2.1 1 4.2 1 온도 : 25 C 검출기 : UV, 28nm 시스템 : Agilent 126 Infinity Bio-inert Quaternary LC (UV 28nm) (UV 28nm) 4 35 3 25 2 15 1 5 1 8 6 4 2 A Bio-Monolith Protein A flow-through.5 1. 1.5 2. 2.5 3. 3.5 4. B Bio-Monolith Protein G (CHO ) 결과및토의 특이성및선택성표 1에표시된바와같이, 여러가지인간화단클론성항체아강에대한 Protein G 컬럼의결합친화성은 Protein A 컬럼보다높으며 아강은 Protein G 컬럼에대해서만친화성을가집니다. 그림 1A의데이터는 Bio-Monolith Protein G 컬럼의특이성과적정농도 (titer) 모니터링기능 ( 즉, 상청액에서의항체존재를확인하고농도를측정하는성능 ) 을보여줍니다. 정제된재조합인간화 mab인 (CHO 세포상청액에첨가됨 ) 가포함된시료를컬럼에주입합니다. 이 mab는 CHO 세포주에서발현되었습니다. 데이터가보여주듯이, 은컬럼에서캡처되고용리된유일한단백질이며, 1.mL/ 분의유속에서약 1.6분에확인됩니다. 반면에모든숙주세포단백질은컬럼에의해캡처되지않고 flow-through 피크에서용리됩니다. Protein A 컬럼과 Protein G 컬럼사이의선택성차이를보여주기위해, 두컬럼에단클론성항체 IgG1, IgG2 및 을각각주입합니다. IgG1 과 IgG2 는두가지컬럼모두에서캡처되었지만 ( 데이터는표시되지않음 ), 은 Bio-Monolith Protein A 에서캡처되지않았았습니다. 은 flow-through 피크에서용리되었으며 Bio-Monolith Protein G 컬럼에의해서만캡처되고용리됩니다 ( 그림 1A 와 1B 비교 )..5 1. 1.5 2. 2.5 3. 3.5 4. 그림 1. A) 은 Bio-Monolith Protein A 컬럼과결합되지않으며 은 flow-through 피크에서용리되었습니다. 2mg/mL 인간화 를결합완충액과혼합하였습니다 ( 컬럼주입부피 3µL). B) Agilent Bio-Monolith Protein G 컬럼은수집된 첨가세포배양액에서 만신속히캡처했습니다 (5µL 의 2.mg/mL 과 1mg/mL CHO 세포상청액을혼합하여컬럼에주입함 ). Bio-Monolith Protein G 컬럼의특이성, 즉컬럼이숙주세포단백질에대해결합친화성을가지지않았다는것을확인하기위해보다확실한테스트가실시되었습니다. E. coli 세포용해물, CHO 세포용해물, 상청액및곤충세포용해물에서추출한숙주세포단백질시료가사용되었습니다. 이러한용해물중의세포단백질은도데실황산나트륨 (sodium dodecyl sulfate) 이포함된용해완충액에의해추출되었으며, 도데실황산나트륨은컬럼의비특이성결합에현격한영향을미칩니다. 이러한시료에는항체가존재하지않으며오직숙주세포단백질만포함되어있습니다. 이테스트를실시하는이유는, 컬럼설계가합리적이지않은경우에까다로운시료를분석시비특이적인결과를도출하기때문입니다. 그림 2 에서, 그어떠한숙주세포상청액에서추출된단백질도컬럼에흡착되지않음을볼수있습니다. 3
(UV 28nm) (UV 28nm) (UV 28nm) (UV 28nm) 1, 8 6 4 2 8 6 4 2 1,4 1,2 1, 8 6 4 2 1,4 1,2 1, 8 6 4 2 A.5 1. 1.5 2. 2.5 3. 3.5 B CHO.5 1. 1.5 2. 2.5 3. 3.5 C CHO.5 1. 1.5 2. 2.5 3. 3.5 D E. coli.5 1. 1.5 2. 2.5 3. 3.5 그림 2. Agilent Bio-Monolith Protein G 컬럼과결합완충액으로희석된 1mg/mL 숙주세포단백질을이용한특이성분석모든시료의주입량은 5µL 입니다. A) 곤충세포용해물, B) CHO 세포상청액, C) CHO 세포용해물, D) E. Coli 용해물 모든숙주세포단백질은 flow through 피크에서용리되었습니다. 이데이터는 Bio-Monolith Protein G 컬럼이숙주세포단백질에대해아무런친화성을가지지않음을보여줍니다. 정확한정량분석세포주가결정되는개발초기단계에서, 생산단계에서세포배양상청액의 mab 양이최적의수집시기를결정할때, mab 적정농도 (titer) 의정확한정량분석은필수적입니다. Bio-Monolith Protein G 컬럼의정확한 mab 정량분석성능을입증하기위해다양한양 (μg) 의정제된 IgG를컬럼에주입하였습니다. 피크면적데이터와생성된 IgG의양을이용하여선형회귀곡선을그려분석정확도를판단합니다. 그림 3은 Protein G 컬럼을통해얻은피크면적의직선성을보여줍니다. 이데이터는다양한농도범위에서 Protein G 컬럼을사용하여수집세포배양액중 mab를정량화할수있음을나타냅니다. 컬럼에는최소 2μg의 IgG를주입할수있으며, 주입량이 2μg일경우, 신호대잡음비는 1:1을 (*S) 2, 18, 16, 14, 12, 1, 8, 6, 4, 2, 5 1 15 2 IgG (ng) IgG1 IgG2 R 2 =.9959 R 2 =.996 R 2 =.9989 그림 3. Agilent Bio-Monolith Protein G 컬럼을이용한단클론성항체정량분석, 이선형회귀곡선에는 25 ~ 2μg IgG 의피크면적데이터가포함됩니다. 4
초과하지않았습니다 ( 데이터는표시되지않음 ). 이컬럼의최대로딩용량은약 4 ~ 5μg IgG 이며 ( 데이터는표시되지않음 ), 세포주선택및생산과정에서도달할수있는농도범위를모두포함합니다. 다른공급업체의 Protein G 컬럼보다넓은로딩범위그림 4A는넓은 로딩범위에서의 Bio-Monolith Protein G 컬럼과다른공급업체의 Protein G 컬럼 (2.1 3mm, 4,Å) 의직선성비교결과를보여줍니다. 애질런트컬럼은 25 ~ 2µg 의선형로딩범위를제공하는반면에다른공급업체의컬럼은 25 ~ 1µg 사이에서만선형데이터를생성할수있었습니다 ( 해당공급업체의자료에서제공한권장수치와일치함 ). 높은로딩범위에서선형성을나타내지않는이유는컬럼이높은로딩범위에서모든물질을머무르게할수없기때문입니다. 실제로그림 4B 에표시된것처럼 2µg 로딩범위에서다른공급업체의 Protein G 컬럼은 mab 의 break-through 피크를나타냅니다 ( 일부 는컬럼에머무르지않고 flow-through 피크에서용리되었습니다 ). 2, 18, 16, A R 2 =.9987 Agilent Bio-Monolith Protein G Protein G 14, (*S) 12, 1, 8, 6, 4, Agilent Bio-Monolith Protein G 2, (UV 28nm) 12 1 8 6 4 5 1 15 2 25 (μg) B Agilent Bio-Monolith Protein G 2μg/ (UV 28nm) Protein G 12 1 8 6 4 (flow-though) 2 µg/ 2 2.5 1. 1.5 2. 2.5 3. 3.5 4..5 1. 1.5 2. 2.5 3. 3.5 4. 그림 4. A) Agilent Bio-Monolith Protein G 컬럼과다른공급업체의 Protein G 컬럼의 선형로딩범위를비교한결과 B) 2µL 를로드할경우다른공급업체의컬럼은 Bio-Monolith Protein G 에서관찰되지않은 flow-through 피크를보입니다. 따라서 Bio-Monolith Protein G 의로딩용량이더큽니다. 5
신속한분리 Bio-Monolith Protein G 는신속한분리를위해고안되었습니다. 그림 5 에서는 1., 1.5, 2. 및 2.5mL/ 분유속에서의 분석결과를통해다양한유속에서나타내는신속한 mab 캡처및용리성능을증명하였습니다 ( 컬럼은최대 3.mL/ 분의유속에서작동할수있습니다. 데이터는표시되지않음 ). 표 2 는유속과작동기울기를보여줍니다. 피크의머무름시간은유속이증가함에따라감소되지만각유속에서의상대적인피크면적은비슷합니다. 이는컬럼이모든유속에서비슷한회수율을생성함을의미합니다 ( 표 3). 표 2. Agilent Bio-Monolith Protein G 컬럼의머무름능력평가에사용된유속및작동기울기 시간 ( 분 ) %A %B 1. ml/min 1.4 1.5 1 1.7 1 1.8 1 4.2 1 1.5 ml/min 1.3 1.4 1 1.3 1 1.4 1 3. 1 2. ml/min 1.2 1.3 11.9 1 1. 1 2.1 1 2.5 ml/min 1.1 1.3 1.7 1.8 1 1.7 1 (UV 28nm) (UV 28nm) (UV 28nm) (UV 28nm) 5 4 3 2 1 5 4 3 2 1 5 4 3 2 1 5 4 3 2 1.44.53.69.185.12 1 %B.612.5 1. 1.5 1 %B 2. ml/min.815.5 1. 1.5 1 %B 1.76 2.5 ml/min %B %B %B 2..5 1. 1.5 2. 1 %B 1.518 %B 1 2.5 3..5 1. 1.5 2. 2.5 3. 8 6 4 2 B% %B %B 1 8 6 4 2 B% 1.5 ml/min %B 1 8 6 4 2 B% 1. ml/min 3.5 4. 그림 5. 다양한유속에서 Agilent Bio-Monolith Protein G 컬럼에대한 의결합성능을평가하였습니다. 주입부피 5µL(5mg/mL CHO 숙주세포단백질과 2.mg/mL 을혼합 ) %B 1 8 6 4 2 B% 표 3. Agilent Bio-Monolith Protein G 컬럼은모든유속에서유사한 flow-through 피크대 피크상대적비율을제공합니다. 유속 (ml/ 분 ) 총피크면적 (mauu*s) Flow-through 피크면적 (*S) Flow-through 피크상대면적 (%) 피크면적 (*S) 2.5 798 521 65.3 277 34.7 2. 1,56 79 67.1 347 32.9 1.5 1,39 932 67.1 458 32.9 1. 2,69 1392 67.3 677 32.7 피크상대면적 (%) 6
그림 6 은컬럼역압 (backpressure) 의선형회귀곡선을보여줍니다. 컬럼유속을 1 ~ 2.5mL/ 분범위에서.5mL/ 분씩증가시킬경우역압 (backpressure) 은선형으로증가합니다. 컬럼의최대역압 (backpressure) 은 15bar 입니다. Bio-Monolith Protein G 컬럼의일반적인분리유속은 1.mL/ 분입니다. 기기유속을 1.mL/ 분으로설정했을때컬럼역압 (backpressure) 은약 24bar 이고유속을 2.5mL/ 분으로증가했을때컬럼역압 (backpressure) 은약 6bar 로증가합니다. 앞서언급한바와같이, 역압 (backpressure) 이최대치에도달할때컬럼에대한 IgG 결합의영향이제일적습니다. 다양한용리완충액의호환성그림 7은 Bio-Monolith Protein G 컬럼에대한다양한용리완충액과의호환성을보여줍니다. 피크는다양한산성용리액에의해용리될수있습니다. 표 4는산성용리액의세기와 ph를보여줍니다. 12mM 염화수소를제외한이러한용리액은비슷한머무름시간으로컬럼에서 를용리할수있습니다 ( 다른 IgG에대해서도비슷한데이터가관찰되었음 ). 12mM 염화수소에의해용리된 피크의머무름시간은다른용리완충액에의해용리된 피크의머무름시간보다깁니다. 농도가.1M으로증가했을때, 이용리완충액은다른용리완충액과유사한머무름시간으로 를용리하기에충분한세기를획득합니다. (bar) 7 6 5 4 3 2 1 R 2 =.999 주목할만한것은, 각산성용리액이생성한 피크에약간의피크폭과테일링인자차이가있다는점입니다. 이는 IgG 가다름에따라머무름시간, 피크폭과테일링인자에대한산성용리액및그세기의영향에일정한차이가있음을의미합니다. 따라서 IgG 및데이터의기대치에근거하여그리고실험에의거하여산성용리액및그농도를결정해야합니다..5 1. 1.5 (ml/ ) 2. 2.5 3. 그림 6. 유속대역압 (backpressure). Agilent Bio-Monolith Protein G 컬럼의유속이선형으로증가할때역압 (backpressure) 역시선형으로증가합니다. (UV 28nm) 175 15 125 1 75 5 25 1,2,3,4 5 1 2 4 3 5 표 4. IgG 에대한다양한산성용리액의호환성과영향 피크 번호 산 PW 5% TF 1.1M 시트르산 (ph 2.).58 1.68 24 2.1M 염화수소.53 1.58 24 3 5% 아세트산.71 1.85 24 4.1M 글리신.75 1.82 24 5 12mM 염화수소.68 1.69 24 1 ml/ 분에서의압력 (bar).5 1. 1.5 2. 2.5 3. 3.5 4. 그림 7. Agilent Bio-Monolith Protein G 컬럼에서다양한산성용리액에의해용리된인간화 피크 7
clean-in-place(cip) 후컬럼성능의회복 그림 8 은 Bio-Monolith Protein G 컬럼이 clean-in-place (CIP) 후성능을완전히회복할수있음을보여줍니다. 를첨가한 CHO 세포상청액과용해물을 1, 회이상주입한후, 을컬럼에주입하였습니다. 데이터는컬럼이오염되었을때 의피크폭이넓어지고피크높이가낮아졌음을보여줍니다 (clean-in-place(cip) 전후를비교하는그림 8A 와 8B). 또한일부 가컬럼에의해 캡처되지않고 flow-through 에서용리되었음을보여주기도합니다 ( 그림 8, 패널 A). 컬럼이세척된후모든성능을다시회복하며 가완전히캡처됩니다 ( 그림 8B 참조 ). 그림 9 는컬럼이적절히세척되기전후에넓은로딩측정범위 (dynamic range) 에서측정한직선성비교데이터를보여줍니다. CIP 전후의 면적은매우유사했으며직선성도아주뛰어납니다. 이데이터는컬럼이효과적으로세척되었고표 5 에나오는세척프로토콜에적합함을보여줍니다. (UV 28nm) (UV 28nm) 1 8 6 4 2 1 8 6 4 2 A B 1.563.5 1. 1.5 2. 2.5 3. 3.5 4. 1.562.5 1. 1.5 2. 2.5 3. 3.5 4. 그림 8. A) 1 회이상의주입후 Agilent Bio-Monolith Protein G 에 주입한결과컬럼이오염되었습니다. B) 컬럼을세척하고나니성능을완전히회복했습니다. 표 5. Agilent Bio-Monolith Protein G 컬럼에대한 clean-inplace(cip) 프로토콜. 오염물질이컬럼의나머지부분에들어가지않도록, 프로토콜의첫단계에서.2 ~.5 ml/ 분의유속으로컬럼을백플러시해야합니다. 단계 용액 컬럼세척부피 (CV) 1.1 M 수산화나트륨 1 ~ 2 2 탈이온수 1 ~ 2 3.5M 인산나트륨완충액 (ph 7.4) 1 ~ 2 4 결합완충액으로컬럼을재평형화 5 8
Monolithic 컬럼의간단한재생만으로는충분하지않은경우가있습니다. 시료분자가컬럼으로부터완전히용리되지않거나컬럼내에침전될수있습니다. 이렇게컬럼내에오염물질이축적되면분리능과결합능력이떨어지고역압 (backpressure) 이증가하거나컬럼이완전히막힐수있습니다. 그리하여시료에존재하는오염물질의유형에따라특정 CIP 프로토콜을작성해야합니다. 컬럼재생에대한자세한내용은사용자안내서를참조하시기바랍니다. (*S) 2, 18, 16, 14, 12, 1, 8, 6, 4, 2, 5 1 15 2 (μg) 그림 9. 넓은로딩측정범위 (dynamic range) 에서측정한 Agilent Bio-Monolith Protein G 컬럼의 clean-in-place(cip) 전후직선성의비교 CIP CIP R² =.9997 R² =.9959 사용수명및재현성그림 1과 11은 Bio-Monolith Protein G 컬럼에, CHO 세포상청액및용해물을 1,회연속주입했을때의결과를보여줍니다. 컬럼에 CHO 세포상청액과용해물을 4회주입한후 을 1회주입했습니다. 세척을위해이시퀀스를중단없는 1,회연속주입으로설정합니다. 의피크머무름시간및피크면적의완전성 ( 그림 9) 과피크테일링인자및피크폭 ( 그림 1) 은거의변함이없으며컬럼의결합, 분리및용리능력에거의영향을미치지않습니다. 그림 11 은 1, 회주입연구동안에피크폭과테일링인자에대한영향이극히적음을보여줍니다. 2 1.9 1.8 1.7 1.6 1.5 A 1.4 2 4 6 8 1, 1,9 1,7 1,5 1,3 1,1 9 7 5 3 B 1 2 4 6 8 1, 그림 1. clean-in-place(cip) 없이 1, 회이상주입한후의 Agilent Bio-Monolith Protein G 컬럼의재현성 A) 머무름시간 B) 의피크면적, 매 4 회주입후의 1 회주입을기록하며 1, 회이상주입을반복합니다. 의머무름시간과피크폭은변하지않았습니다 ( 표준편차 = 2.5, n = 1). (5%) 5. 4.5 4. 3.5 3. 2.5 2. 1.5 1..5 2 4 6 8 1, 1,2.5.45.4.35.3.25.2.15.1.5 그림 11. Agilent Bio-Monolith Protein G 컬럼에서 1, 회이상주입을반복한후나타내는 피크의피크폭과테일링인자의일관성 9
결론 Agilent Bio-Monolith Protein G 컬럼은단클론성항체아강에대해높은친화성을가지며, 다양한로딩선형범위에서상청액중 mab 를캡처하고정확하게정량화할수있음이밝혀졌습니다. 이컬럼은다양한유속에서고품질의데이터를유지하면서효과적으로단클론성항체를정량화할수있습니다. 작동역압 (backpressure) 은상당히낮으며, 이는 Bio-Monolith Protein G 컬럼을 6bar 이하의 HPLC 기기에서작동할수있음을나타냅니다. 다양한산성용리액을이용할수있는컬럼의유연성으로인해쉽고간단하게실험을설계할수있습니다. Agilent Bio-Monolith Protein A 컬럼과 Protein G 컬럼은서로보완적이기에, Protein G 컬럼은 Protein A 컬럼과결합되지않는 mabs 에대해친화성을가지고 Protein A 컬럼은 Protein G 컬럼과결합되지않는 mabs 에대해친화성을가집니다. 이러한컬럼은다양한범위에서신속하게 mab 변이체의적정농도 (titer) 를측정할수있는추가옵션을제공합니다. 참조문헌 1. Richman, D. D.; Cleveland, P. H.; Oxman, M. N.; Johnson, K. M. The binding of 1. Staphylococci protein A by the sera of different animal species. J. Immunol. 1982, 128, 23-235. 2. Frank, M. B. Antibody Binding to Protein A and Protein G beads; 5. In Molecular Biology Protocols; Frank, M. B., Ed.; Oklahoma Medical Research Foundation, Oklahoma City, USA, 1997. 3. Anon. CelLytic B Plus Kit. Catalog numbers CB5 and CB5. Technical Bulletin. Sigma-Aldrich, Corp. St. Louis, MO, USA. 추가정보 이러한데이터는일반적인결과를나타냅니다. 애질런트제품및서비스에대한더자세한정보는애질런트웹사이트 www.agilent.com/chem 에서확인하실수있습니다. www.agilent.com/chem 연구용도로만사용하십시오. 진단용도로는사용하실수없습니다. 애질런트는이문서에포함된오류나이문서의제공, 이행또는사용과관련하여발생한부수적인또는결과적인손해에대해책임을지지않습니다. 이발행물의정보, 설명및사양은사전공지없이변경될수있습니다. Agilent Technologies, Inc., 218 한국에서발행 218 년 7 월 6 일 5991-694KO 서울시용산구한남대로 98, 일신빌딩 4층우 )4418 한국애질런트테크놀로지스 ( 주 ) 생명과학 / 화학분석사업부고객지원센터 8-4-59 www.agilent.co.kr