Journal of the Korea Academia-Industrial cooperation Society Vol. 18, No. 3 pp. 687-693, 2017 https://doi.org/10.5762/kais.2017.18.3.687 ISSN 1975-4701 / eissn 2288-4688 제주조릿대잎추출물의항산화효능및세포독성평가에관한연구 이송희 1, 이무성 2* 1 전남대학교대학원향장품학협동과정, 2 전남대학교응용화학공학부 The research on antioxidative effect of Sasa quelpaertensis extractum and assessment of cytotoxicity Song Hee Lee 1, Moo Sung Lee 2* 1 Interdisciplinary Program of Perfume and Cosmetics, Graduate School of Chonnam National University 2 Faculty of Applied Chemical Engineering, Chonnam National University 요약본연구는제주조릿대잎의열수추출물과에탄올추출물을이용하여항산화효능과세포독성에의한세포생존율을분석하였다. 제주조릿대잎은 95 물과 70% 에탄올용액으로각각추출하여사용하였으며, 총 polyphenol 함량, 총 tannin 함량, 총 flavonoid 함량을확인한결과총 polyphenol 함량은 95 열수추출물에서 26.6mg/g, 70% 에탄올추출물에서는 22.3mg/g 으로 95 열수추출물에서더높게나왔으며, tannin 함량역시 95 열수추출물 72.1mg/g, 70% 에탄올추출물에서 61.2mg/g 로 95 열수추출물이더높게나왔다. 총 flavonoid 함량은 95 열수추출물 (17.8mg/g) 보다 70% 에탄올추출물 (25.4mg/g) 에서더높게나타났다. 또한 DPPH radical 소거능, ABTS radical 소거능을측정한결과모두각추출물의농도가증가할수록증가하였으며, DPPH radical 소거능에서 L-ascorbic acid 는 500ppm 에서최대소거율을보인후농도가증가함에도더이상의변화는나타나지않았으나제주조릿대잎추출물에서는농도에따른증가를볼수가있었다. ABTS radical 소거능에서역시유사한현상을나타냈으나 BHT 와같은경우는 500ppm 에서최대소거율을보인후농도가증가함에따라점점떨어지는것을알수있었다. 그러나제주조릿대잎추출물에서는농도의존적으로증가하여 10000ppm 의농도에서는 90% 이상의소거율을보였으며, 95 열수추출물에서약간더증가함을알수있였다. 그리고, 인간섬유아세포주인 3T3 (human skin fibroblast) 를이용하여제주조릿대잎의세포생존율확인한결과 95 열수추출물은세포생존율이 85.6 66.6% 로다소낮아지는반면 70% 에탄올추출물에서는 92.1% 로생존율이더높게나타났다. 따라서제주조릿대잎추출물은향장소재뿐만아니라천연항산화제로서의가능성이있다고판단된다. Abstract This research analyzed cell survival rate according to antioxidative effect and cytotoxicity using Sasa quelpaertensis and Ethanol extracts. Sasa quelpaertensis used extracts of 95 boiled-water extract and 70% ethanol liquid each. For total polyphenol content, tannin content, and flavonoid content, polyphenol content of 95 boiled-water extract was 26.6 mg/g while that of 70% ethanol extract liquid was 22.3 mg/g, which means polyphenol content was higher in 95 boiled-water extract. Tannin content was 72.1 mg/g in 95 boiled-water extract which was higher than 61.2 mg/g in 70% ethanol extract liquid. Total flavonoid content was higher in 70% ethanol extract liquid (25.4 mg/g) than in 95 boiled-water extract (17.8 mg/g). Further, the researcher measured DPPH radical elimination and ABTS radical elimination. As a result, as the concentration of each extract increased, DPPH radical elimination and ABTS radical elimination increased. In the DPPH radical elimination, L-ascorbic acid was eliminated at 500 ppm and showed no change even though the concentration increased, whereas it increased in BHT and Sasa quelpaertensis leaf extracts according to concentration. ABTS radical elimination indicated the similar phenomenon, whereas BHT showed maximum elimination at 500 ppm and decreased gradually as the concentration increased. On the other hand, it gradually increased in Sasa quelpaertensis leaf extract and showed 90% elimination at 10,000 pm, and it increased in 95 boiled-water extract. Using human skin fibroblasts (3T3) to check the cell survival rate of Sasa quelpaertensis leaves showed that cell survival rate decreased between 85.6 and 66.6% in 95 boiled-water extract. The cell survival rate was between and 92.1% when using 70% ethanol extracts. Sasa quelpaertensis has efficacy as a natural antioxidant as well as a material hyangjang. Keywords : ABTS assay, Antioxidant, Cell Viability, DPPH assay, Phenolics, Sasa quelpaertensis * Corresponding Author : Moo-Sung Lee(Chonnam Univ.) Tel: +82-62-530-1776 email: moosung@jnu.ac.kr Received November 16, 2016 Revised (1st December 21, 2016, 2nd January 2, 2017) Accepted March 10, 2017 Published March 31, 2017 687
한국산학기술학회논문지제 18 권제 3 호, 2017 1. 서론최근소득증가와의학발전으로인해생활의질이향상되면서좀더건강증진적인측면즉, 식품영양요소, 질병예방, 안티-에이징 (anti-aging) 등에대한관심이한층더증가되고있다. 삶의질을떨어뜨리는다양한질병중에는잘못된생활습관뿐아니라바쁜현대사회에서오는스트레스가큰요인이되기도한다. 이러한스트레스로인해생체내부에서만들어지는활성산소의반응이주된원인으로지적되고있다. 그만큼활성산소발생방지와세포변이를막고암발생억제를위해항산화물질에대한관심도높아지고있다. 주로얻을수있는항산화물질로는비타민E와비타민C, 베타카로틴, 플라보노이드, 폴리페놀등의천연항산화제와합성항산화제인 butylated hydroxytoluene(bht), butylated hydroxyanisole (BHA) 등이있다. 그러나최근합성항산화제들은독성으로인해간을손상시키거나암까지유발하는등안전성문제들이대두되면서천연항산화제에대한관심이높아지고있다. 천연항산화제들은항산화능력이다소의차이는있으나사용하기안전하다는장점이있다 [1]. 천연항산화제는섭취할수있는자연식품이나식물로부터얻을수있고, 이러한천연물에서기능성식품이나의약품으로개발하고자하는연구들이이뤄지고있다 [2]. 본연구에서살펴보고자하는 조릿대는식물분류학적으로분류해보면벼과 (Gramineae) 와대나무아과 (Bambusoideae) 의조릿대속 (Sasa) 에속하며 [3], 동의보감에의하면대나무종류로는자체에독성이없어식용뿐아니라약용으로도사용할수있어고혈압, 당뇨같은성인병을다스리고중풍, 위나간의염증등과같은질병을치료하는데효능이있다고되어있고, 이미민간에서도대나무에서추출한수액이나, 그잎을가지고여러가지약재로사용되어왔음을알수있다 [4]. 최근들어조릿대에대한다양한생리활성연구와더불어새로운화합물을분리하고그에대한생리활성을확인하기위한많은연구들이수행되고있다 [5]. 특히본연구에서는제주조릿대 (Sasa quelpaertensis) 를주원료로사용하고있는데, 제주조릿대는한라산에넓게퍼져군락을이루어분포하며높이는 10 80cm정도이며지름은 3 4mm지름을가지고있는식물이다. 최근조릿대의번식력이강해제주에서는조릿대의개체수가급격하게증가함으로인해다른식물들의성장을 방해하고한라산생태종의다양성을저해하고있음으로인해문제가심각할수있는데, 이로인해제주조릿대의번식을적절하게막고제거된제주조릿대를이용해음료나화장품등을개발하는연구가활발하게이뤄지고있다 [6]. 그리고제주조릿대의성분으로분석된자료중에는 tricin형태의 6가지의새로운 flaonolignans의분리를보고하였으며 [7], 제주조릿대에서 3-Ο-p-coumaroyl-1- (4-hydroxy-3,5-dimethoxyphynyl)-1-prppanone과 3-Ο -p-coumaroyl-1-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphynyl)-1-οβ-d-glucopyranosylpropanol의두개의새로운화합물과 N-p-coumaroylserotonin, N-feruloylserotonin, p-coumaric acid의새로운화합물을분리하였다 [8]. 따라서본연구는제주조릿대에 polyphenol, tannin, flavonoid등의항산화물질이다량함유되어있다는자료들을바탕으로항산화효능실험을통해이성분을이용하여천연제품등향장품소재로서의활용가능성을평가하는데목적을두고있다. 2. 재료및실험방법 2.1 기기및시약열수추출물을추출하기위한온도를유지하기위하여 Water Bath[Lab Conpanion(BW -10H)] 를사용하여추출하는데사용하였으며, 에탄올추출물을추출하기위하여상온에서교반기 (Lab Companion(BW-10H) 를이용해교반하면서추출하는데사용하였으며 Rotary evaporateor(eyela- JAPAN) 를이용하여추출물을감압농축한다음동결건조기 (Ilshin Lab, Freeze dryer with shell Freezer) 를이용하여분말로만들어사용하였다. 그리고, 흡광도를측정하기위하여 ELISA reader (BioTek, ELx808, USA) 를사용하였다. 항산화력을측정하는데사용한시약은 gallic acid, Foline-ciocalteu's phenol reagent, Quercetin, aluminum nitrate, L-ascorbic acid, DPPH (2,2- Diphenyl-1- picrylhydrazyl), ABTS(2,2- azino-bis(3- ethylbenzothiazoline -6-sulfonic acid) diammonium salt) 는 Sigma-Aldric 에서구입하여사용하였으며, butylated hydroxytoluene, tannin, potassium acetate, sodium carbonate, potassium persulfate등의시약은 cyclon에서구입하여사용하였다. 688
제주조릿대잎추출물의항산화효능및세포독성평가에관한연구 2.2 제주조릿대잎추출물의제조제주조릿대잎은제주자원식물원에서구입하여사용하였으며열수추출물과 70% 에탄올추출물을만들어사용하였다. 열수추출물은제주조릿대잎 50g과원료무게의 20배의증류수 1L를가한다음 95 에서 10시간동안 water bath(lab Conpanion) 에서추출하였으며, 제주조릿대잎의 70% 에탄올추출물은조릿대의잎 50g과원료무게 20배의 70% 에탄올을 1L를가하여상온 (2 5 ) 에서 72시간추출하였다, 각각추출한추출액을 filter paper No2를이용하여여과한후교반기를이용하여교반한다음감압여과한후진공농축기 (Eyela-Japan) 를이용하여감압농축하였다. 각각의농축액을동결건조하여얻은분말을냉동보관하면서각각의실험할농도로희석하여사용하였다. 2.3 총 polyphenol 함량총 polyphenol함량은 Folin-Denis방법 [9] 을변형하여각추출물 100ul에 Folin-Ciocalteu's phenol reagent시약을 100ul를넣은후 5 7분간방치후 10% Sodium carbonate용액 1mL를혼합하고실온에서 1시간동안방치한후 ELISA reader(biotek. ELx808) 를이용하여 700nm 에서흡광도를측정하였다. 표준물질로는 gallic acid를사용하였으며여기에서얻은검량선을이용하여총 polyphenol 함량을계산하였다. 2.4 총 flavonoid 함량총flavonoid 함량은 Moreno방법 [10] 등에따라서각추출물 0.5ml에 10%aluminum nitrate 0.1mL와 1M potassium acetate 0.1mL를넣은다음 ethanol 4.3mL 를혼합하여실온 (25 ) 에서 40분간자연방치시킨다음 ELISA reader(biotek. ELx808) 를이용하여 405nm에서흡광도를측정하였다. 표준물질로는 Quercetin을사용하여얻은검량선을이용하여총 flavonoid함량을계산하였다. 2.5 총 Tannin 함량총 Tannin 함량역시 Folin-Denis법 [9] 을변형하여각추출물 50ul에 Folin-Ciocalteu's phenol Reagent시약 50ul을넣은후 5 7분간방치후 10% Sodium carbonate용액을 50ul를혼합한후실온에서 1시간동안방치한후후 ELISA reader(biotek. ELx808) 를이용하 여 700nm에서흡광도를측정하였다. 표준물질로 Tannin acid를사용하였으며 polyphenol 함량측정과동일한방법으로측정하여얻은검량선을이용하여 Tannin acid 함량을계산하였다. 2.6 DPPH radical 소거능측정 DPPH radical 소거능은 Blois방법 [11] 의일부를변형하여적자색의 DPPH radical이시료의항산화성분에의해색이변하는원리를적용하여측정하였다 [12]. 95 열수추출물과 70% 에탄올추출물을증류수에녹인제주조릿대잎추출물을각각 500, 1000, 2500, 5000, 10000ppm의농도로준비하였으며, 0.2mM DPPH(2,2- Diphenyl-1-picrylhydrazyl) 를 ethanol에녹인용액을준비하였다. 각각의농도별시료 20ul에 DPPH용액 180ul 를혼합하여상온에서빛을차단한후 30분간반응시킨후 ELISA reader(biotek. ELx808) 를사용하여 490nm 에서흡광도를측정하여 DPPH radical 소거능을측정하였다. 대조군으로는 L-ascorbic acid와 Butylated hydroxytoluene (BHT) 을사용하였으며, 시료무첨가군과비교하여계산해서얻은값을백분율 (%) 로표시하였다. 그리고 DPPH radical의흡광도가 50% 감소할때나타내는농도를 IC₅₀으로표시하였으며각시료에대하여 3회반복측정하여평균값으로표기하였다. Inhibition(%)=(1-시료첨가군의흡광도 / 시료무첨가군의흡광도 ) 100 2.7 ABTS radical 소거능측정 ABTS radical 소거능은 potassium persulfate 와반응을하여생성되는청색을띄는청록색의ABTS radical이항산화물질을함유하고있는추출물과반응하여청록색이연한녹색으로변하게되는원리를적용한 Vanden Berg[13] 등의방법을적용하여일부변형한후측정하였다. 7.4mM 2,2-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)diammonium salt와 2.45mM possium persulfate를증류수에용해하여실온인암소에서 24시간동안방치하여 ABTS cation radical을형성시켜서이용액을 734nm 에서흡광도값이 1.45±1.5가될수있도록증류수로희석하여사용하였다. 95 열수추출물과 70% 에탄올추출물을증류수에녹인제주조릿대잎추출물을각각 500, 1000, 2500, 5000, 10000ppm의농도로준비하였 689
한국산학기술학회논문지제 18 권제 3 호, 2017 으며, 각각의농도별시료 10ul에 ABTS용액 190ul를혼합하여실온에서빛을차단하고 30분간반응시킨후, ELISA reader(biotek. ELx808) 를이용하여 700nm에서흡광도를측정하여 ABTS의 cation radical 소거능을측정하였다. 대조군으로는 L-ascorbic acid와 Butylated hydroxytoluene (BHT) 을사용하였으며, 시료를첨가하지않은대조군과비교하여계산한후얻은값을백분율 (%) 로표시하였다. 그리고 DPPH radical 소거능과같이흡광도가 50% 감소할때나타내는농도를 IC₅₀으로표시하였으며각시료에대하여 3회반복측정하여평균값으로표기하였다. Inhibition(%)=(1-시료첨가군의흡광도 / 시료무첨가군의흡광도 ) 100 2.8 세포배양인간섬유아세포주 (human skin fibroblast) 는한국세포주은행에서분양받아사용하였으며, Dulbecco's medium Eagel's medium(dmem), fetal bovine serum(fbs) 및항생제 (penicillin/ streptomycin) 는 Gibco사 (GIsland, CA, USA) 제품을사용하였다, Fibroblast 3T3을 1 10⁴ cell/ml씩분주하여 37, 5% CO₂ 조건의 incubator에서 24시간배양하였다. 2.9 세포독성평가배양후배지를제거하고 125 1000ppm의농도로희석한추출물의시료 100ul가첨가된새로운배지로교체하고다시 24시간동안배양후MTT[3-(4,5- dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide, sigma] 를각 well당 20ul의 DMSO(Dimethyl Sulfoxide) 에녹이고 ELISA reader(biotek. ELx808) 를이용하여 570nm에서흡광도를측정하였다. 세포생존율 (Cell viability) 은아래의식으로계산하였다. Cell viability(%)=[(exp-blank)/control]x 100 Exp: 세포를포함한추출물의흡광도 Blank: 세포를포함하지않는추출물의흡광도 Control: 세포를포함한증류수의흡광도 2.10 통계처리 본연구의실험결과들은모두 3회반복측정하여평균값 (mean) 과표준편차 (standard deviation, SD) 로표시하였다. 3. 연구결과및고찰 3.1 항산화활성 3.1.1 총 polyphenol 및 tannin acid 함량 Folin-reagent가추출물에함유되어있는 polyphenol 성분으로인해몰리브덴청색으로환원되는원리를이용하여실험한결과는 Table 1과같이나타내었다. 95 열수추출물과 70% 에탄올추출물의경우각각 26.6mg/g 과 22.3mg/g으로 95 열수추출물이조금더높게나타난것을알수있었다. 이는 Park 등 [12] 의제주조릿대의 12.81 15.98mg/g보다는많은양이었으며, Song등 [14] 의조릿대의 41.26 41.46mg/g보다는다소적은양이었으나이는추출방법등에서약간의차이가있을수있으며또한시료를녹이는용매등여러가지요인에의한차이도있을것이라고사료된다. Tannin 함량은총 polyphenol함량과마찬가지로 9 5 열수추출물이 72.2mg/g으로더높게나왔으며 Park 등 [12] 의에탄올추출물에서 18.36mg/g보다는월등히많은양을함유하는것으로나타났다 Table 1. Total phenolic contents, total tannin acid and flavonoid contents of Sasa quelpaertensis. Groups Polyphenol (mg/g) Tannin acid (mg/g) Flavonoid (mg/g) 95 water extracts 26.6±0.06 72.1±0.09 17.8±0.00 70% ethanol extracts 22.3±0.04 61.2±0.03 25.4±0.01 3.1.2 총 flavonoid 함량 flavonoid는관속식물의식물에존재하며, 황색을나타내는항산화물질로이루어진화합물로 [15] 강한산화제를투입했을때 flavonoid를함유하고있는추출물은노란색으로변하게되는원리를이용하여측정한결과 95 열수추출물과 70% 에탄올추출물의경우각각 17.8 mg/g 와 25.4mg/g으로 70% 에탄올추출물이조금더높게나타난것을알수있었다. 이는 Song등 [14] 의조릿대추출물에서의 21.45 29.49mg/g과비슷한양으로나 690
제주조릿대잎추출물의항산화효능및세포독성평가에관한연구 타났음을알수있다. 3.1.3 DPPH radical 소거능매우안정한용액인 DPPH(2,2- Diphenyl -1-picrylhydrazyl) 는수용성 free radical로 517nm에서특정한빛의흡수를보여주는적자색의화합물로추출물의항산화물질을만나면 radical이소거되면서 DPPH의특정한색인적자색이점차적으로없어지는특성이있다 [12]. 이러한시료의색과표준물질의색의세기를비교하여시료의물질을정량하는화학적분석법인비색정량 [16] 측정하였다. 본연구에서 95 열수추출물과 70% 에탄올추출물을증류수에녹여 500, 1000, 2500, 5000, 10000ppm의농도로제조하여 DPPH free radical의소거활성을측정한결과를 Fig. 1과 Table 2에나타내었다. Fig. 1에서보는바와같이 L-ascorbic acid는 IC₅₀값의 77.3ppm에서 50% 이상의소거율을보였으며 500ppm에서 78.1% 의소거율을보인후농도에따른변화는거의없었다. BHT 역시 IC₅₀값이 652ppm이었으며농도가 1000ppm 에서 63.2% 의소거율을보인후큰변화는없었다. 95 열수추출물은 IC₅₀값의 2225ppm에서 50% 의소거율을보였으며, 70% 에탄올추출물은 IC₅₀값의 2196ppm에서 50% 의소거율을보였다. 강력한천연항산화제인 L-ascorbic acid과합성항산화제의대표라고할수있는 BHT와는달리제주조릿대잎추출물에서는 2000ppm 이하에서는큰변화를나타내지않다가점차적으로농도가증가함에따라높은소거활성을알수있었다. 그리고 2000ppm이하에서는 70% 에탄올추출물이소거율이높게나타났으며 2000ppm이상에서는 95 열수추출물에서소거율이더높게나타난것을알수있었다. Table 2. DPPH radical scavenging activity of extracts from Sasa quelpaertensis. Cone(ppm) 500 1000 2500 5000 10000 L-ascorbic acid BHT 95 water extracts 78.1 ±0.29 44.2 ±8.03 0.7 ±4.64 70% ethanol extracts 11.5 ±1.94 78.4 ±0.29 63.2 ±1.86 14.1 ±0.45 21.7 ±0.84 3.1.4 ABTS radical 소거능 79.1 ±0.44 64.6 ±3.06 58.1 ±3.60 57.2 ±1.99 78.6 ±0.60 64.6 ±3.06 69.8 ±4.75 70.3 ±3.32 78.3 ±0.00 71.3 ±0.76 76.9 ±2.87 70.8 ±0.29 IC 50 (PPM) 77.3 652 2,225 2,196 ABTS radical 소거활성은 DPPH radical과같은일종으로 DPPH는 free radical인데반해 ABTS는 cation radical 이라는것에서차이가있다 [14]. 본연구에서 9 5 열수추출물과 70% 에탄올추출물을증류수에녹여 500, 1000, 2500, 5000, 10000ppm 의농도로제조하여 ABTS radical 의소거활성을측정한결과를 Fig. 2 와 Table 3 에나타내었다. Fig. 2 에서보는바와같이 L-ascorbic acid 는 IC₅₀ 값이 196ppm 에서 50% 이상의 Fig. 2. ABTS cation radical scavenging effect of extracts from Sasa quelpaertensis presented as them±s.d. Table 3. ABTS radical scavenging activity of extracts from Sasa quelpaertensis. Cone(ppm) 500 1000 2500 5000 10000 L-ascorbic acid 95.5 ±0.00 ±0.14 ±0.14 ±0.07 ±0.07 IC 50 (ppm) 196 BHT 94.8 ±0.00 93.7 ±0.12 81.5 ±2.22 69.1 ±5.65 53.5 ±3.78 166 Fig. 1. DPPH free radical scavenging effect of extracts from Sasa quelpaertensis presented as them±s.d. 95 water extracts 70% ethanol extracts 13.4 ±2.61 10.2 ±1.85 26.7 ±3.50 25.6 ±1.40 57.4 ±1.23 61.7 ±2.70 84.5 ±0.30 85.5 ±1.96 94.6 ±0.14 93.0 ±0.12 2,137 2,013 691
한국산학기술학회논문지제 18 권제 3 호, 2017 소거율을보였으며 500ppm에서 95% 이상의소거율을보인후더이상증가하지않고그대로유지하고있는것을알수있었으며, BHT의경우는 IC₅₀값이 165.7ppm 에서 50% 이상의소거율을나타내었다. 그러나 DPPH radical 소거능에서와는달리 BHT는 L-ascorbic acid와같이농도가 500ppm에서 94.8% 의최대소거율을보인후농도증가에따라서활성도가떨어져 10000ppm 에서는 53.5% 로낮아지는것을알수있었다. 제주조릿대잎추출물은낮은농도에서는활성도에많은영향을미치지는않았으나 95 열수추출은 IC₅₀값이 2137ppm을나타내었으며, 70% 에탄올추출물은 IC₅₀값이 2013ppm으로 95 열수추출보다는약간낮은농도에서나타남을알수있었으며 95 열수추출물과 70% 에탄올추출물모두농도의존적으로증가함을알수있었다. 3.2 세포생존율측정본연구에서사용된인간섬유아세포주인 3T3 (human skin fibroblast) 를이용하여제주조릿대잎의세포생존율을확인하였다. 각추출물을 125 1000ppm 농도로 24시간동안처리한결과최고농도인 1000ppm까지세포생존율을보았을때 Fig. 3에서살펴보면 95 열수추출물은세포생존율이 85.6 66.6% 로낮아지는반면 70% 에탄올추출물은 92.1% 로 90% 이상의생존율이나타난것으로봐서세포생존율에미치는영향이현저하게낮아짐을알수있었다. Fig. 3. Cell viability of dependent on concentration from of Sasa quelpaertensis presented as them±s.d. 4. 결론본연구에서제주도한라산에자생하고있는제주조릿대잎의항산화효능과세포독성에의한세포생존율을분석하였다. 제주조릿대잎은 95 증류수와 70% 에탄올용액으로각각추출하여총 polyphenol함량, Tannin함량, flavonoid 함량과 DPPH radical 소거능, ABTS radical 소거능을측정하고, 세포배양후세포독성평가를실시하여세포생존율을측정하여다음과같은결과를얻었다. 첫째, 총 polyphenol함량으로는 95 열수추출물에서 26.6mg/g, 70% 에탄올추출물에서 22.3mg/g으로 95 열수추출물이약간높게나타났으며, 총Tannin의함량으로는 95 열수추출물이 72.2mg/g, 70% 에탄올추출물에서 61.2mg/g으로이역시 95 열수추출물이약간높게나타났다, 그리고 polyphenol함량보다는탄닌의함량이월등하게높게나타난것을알수있었다. 그리고총 flavonoid 함량은 95 열수추출물이 17.8mg/g, 70% 에탄올추출물에서 25.4 mg/g으로 70% 에탄올추출물에더많은함유량을나타냈다. 둘째, DPPH free radical의소거능과 ABTS radical 소거활성을실험한결과농도의존적으로높아짐을알수있었다. DPPH radical 소거활성에서강력한천연항산화제인 L-ascorbic acid와합성항산화제의대표라고할수있는 BHT같은경우에는아주소량으로도소거활성이나타났으며일정농도에서최대값을보인후에는큰변화가나타나지않은반면에제주조릿대잎추출물에서는 2000ppm이하에서는큰변화를나타내지않다가점차적으로농도가증가함에따라높은소거활성이나타난것을볼수있었다. ABTS radical 소거활성에서는 L-ascorbic acid는 500ppm이상에서최대의활성도를보인후농도증가에도그대로유지되고있음을확인하였으며 BHT 와같은경우에는 L-ascorbic acid와같이 500ppm이상에서최대의활성도를보였으나이후에는활성이떨어진것을알수있었다. 그리고제주조릿대잎추출물에서는두추출물모두낮은농도에서는큰변화를나타내지않다가농도가증가함에따라높은소거활성이나타난것을볼수있었다. 그리고 95 열수추출물과 70% 에탄올추출물에서약간의차이가나는것을알수있었는데이는추출물의폴리페놀함량과더불어다른극성의항산화물등에의한영향이있을것으로사료되어진다 [12]. 셋째, 인간섬유아세포주인 3T3 (human skin 692
제주조릿대잎추출물의항산화효능및세포독성평가에관한연구 fibroblast) 를이용하여제주조릿대잎의세포생존율을확인한결과 125 1000ppm농도별로처리했을때 95 열수추출물은세포생존율이 85.6-66.6% 로다소낮아지는반면 70% 에탄올추출물에서 92.1% 로높게나타남을확인할수있었다. 이상과같은연구결과로보았을때제주조릿대잎추출물은 95 열수추출물과 70% 에탄올추출물의농도를잘조절하여사용한다면향후피부및두피, 모발등에사용할수있는천연향장소재로서가능성이있음을시사한다. References [1] Yeon-Ok Park, Effects of the Extract of Sasa borealis Leaves on the Physical and Sensory Characteristics of Cooked Rice, Chonnam National University doctorate thesis, 2008. [2] Hyun-Ju Jang, Screening for Antioxidant Activity of Jeju Native Plants, Jeju National University master thesis, 2007. [3] Mi-Gyeong Jang. Apototic activity of the leaf extract of Sasa quelpaertensis Nakai in acute leukemia. Cheju National University. 2006. [4] 허준. 동의보감. p 3059-3061. 3차개정판. 여강출판사, 서울. 2005. [5] Hee-Chul Ko, Identification and Biological activities of Phytochemicals Isolated from Citrus sunki, Sasa quelpaertensis, and Petalonia binghamiae. Jeju National University doctorate thesis, 2010. [6] Areum Kim, So-Jin Bing, Jinhee Cho, KHINM Herath, Ginnae Ahn, EunJin Park, Min-Ju Kim, Dae-Seung Kim, Ju-Sung Kim, Nam-Ho Lee, Youngheun Jee. Protective effects of Sasa quelpaertensis nakai extract on radiation-induced oxidative stress in immune cells. J. Prev. Vet. Med. vol. 39. no. 4: 169-174, 2015. DOI: https://doi.org/10.13041/jpvm.2015.39.4.169 [7] Numata. M, Conservation implications of bamboo flowering and death in Japan, Biol. Consero. 2, 227-229. 1970. DOI: https://doi.org/10.1016/0006-3207(70)90120-5 [8] Sultana, Nasim., Lee, Nam. Ho, New phenylpropanoids from Sasa quelpaertensis Nakai with tyrosinase inhibition activities, Bull. Korean Chem. Soc., 30(8), 1729-1732, 2009. DOI: https://doi.org/10.5012/bkcs.2009.30.8.1729 [9] Folin, O. and W. Denis. On phosphotungasticphospho molybdic compounds as color reagent. J. Biol. chem. 12: 239-243. 1912. [10] Moreno, M. L., M. I. Isla, A. R. Sampietro, and M. A. Vattuone. Comparison of the free radical-scavenging activity of propolis from several regions of Argentina. J. Ethnopharmacol. 71:109-114. 2000. DOI: https://doi.org/10.1016/s0378-8741(99)00189-0 [11] Blois, M.S.: Antioxidant determination by the use of a stable free radical. Nature, 26, 1199-1200, 1958. DOI: https://doi.org/10.1038/1811199a0 [12] Hyun-Sun Park, "Antioxidant and Antimicrobial Activities of Sasa-quelpaertensis Extracts", Dept. of Food School of Industry and Engineering, The Graduate School of Industry and Engineering seoul National University of Science and Technology, July, 2013. [13] Venden Berg R, haenen GR, Van de Berg H, Bast A. "Applicability of an improved trolox equivalent anti-oxidant capacity(teac) assay for evaluation of anti-capacity measurements of mixture. Food Chem, 66, pp. 511-517, 1999. DOI: https://doi.org/10.1016/s0308-8146(99)00089-8 [14] W0n-Young Song, SO-jeong Byeon, Jeong -Hwa Choi, "Anti-oxidative and Anti-inflammatory Activities of Sasa borealis Extracts", Agriculture & Life Science 49(3) pp. 145. MAY, 2015. [15] Hee-Jeong Park, Ki-Young Lee, Evaluations on Antioxidant Effect of Methanol Extract from lmmature Cotton Boll, Korean J. Plant Res. 26(4):426-432, 2013. [16] http://krdic.naver.com/detail.nhn?docid=18473800, Colorimettic analysis, 2016, November 이송희 (Song-Hee Lee) [ 정회원 ] 2011년 8월 : 호남대학교미용교육대학원 ( 미용교육학석사 ) 2016년 2월 : 전남대학교일반대학원향장품학협동과정박사수료 2013년 10월 : 미용기능장 2014년 8월 ~ 현재 : 송희뷰티랜드원장 2015년 3월 ~ 현재 : 무안초당대학교왜래강사 < 관심분야 > 헤어미용, 두피, 화장품 이무성 (Moo-Sung Lee) [ 정회원 ] < 관심분야 > 분해성고분자재료, 고기능생활성물질 1986 년 2 월 : 서울대학교섬유공학과 ( 공학학사 ) 1991 년 8 월 : 서울대학교대학원섬유공학과 ( 공학박사 ) 1995 년 12 월 ~ 1997 년 8 월 : 미국미네소타주립대화학공학과 Post-doc 1992 년 8 월 ~ 현재 : 전남대학교화학공학부교수 693