Korean J Lab Med 2010;30:381-7 DOI 10.3343/kjlm.2010.30.4.381 Original Article Clinical Microbiology A Comparison Analysis on the Diagnosis of Helicobacter pylori Infection and the Detection of Clarithromycin Resistance according to Biopsy Sites Ah Ra Cho, M.D. and Mi-Kyung Lee, M.D. Department of Laboratory Medicine, Chung-Ang University College of Medicine, Seoul, Korea Background : This study was performed to determine the biopsy sites that are suitable for the diagnosis of Helicobacter pylori infection and to assess the sensitivity of culture, histology, and dual-priming oligonucleotide (DPO)-based multiplex PCR. Moreover, we evaluated the usefulness of PCR for the detection of 23S rrna mutations, which are responsible for the clarithromycin resistance of H. pylori. Methods : From 90 patients, we obtained biopsy specimens for culture, histology, and Seeplex ClaR-H. pylori PCR (Seegene Inc., Korea). Phenotypic susceptibility to clarithromycin was evaluated using the E-test (AB Biodisk, Sweden). Results : H. pylori was detected in 48 of 90 patients. The positive rates of infection in the antrum and body were higher than those in the biopsies obtained from the duodenal bulb. The positive rates in histology, PCR, and culture were 46.7%, 42.2%, and 34.4%, respectively. Using histology or PCR, we identified H. pylori in 46 of the 48 patients. 23S rrna mutations were detected in 8 patients. The clarithromycin E-test showed that all the 10 wild-type patients were susceptible. However, the results of the PCR and E-test of 3 of the 8 mutation-positive patients were discrepant. Conclusions : We observed that a combination of histology and PCR affords a high detection rate of H.pylori infection and that DPO-based PCR can be practically used for the diagnosis of H. pylori infection and the determination of clarithromycin resistance. These techniques were useful for biopsy sampling simultaneously from the antrum and body for the detection of clarithromycin resistance of multiple strain infection or heteroresistance. (Korean J Lab Med 2010;30:381-7) Key Words : Helicobacter pylori, Multiplex PCR, Clarithromycin, Resistance, 23S rrna, Point mutation 서 Helicobacter pylori는사람의위점막에서식하는그람음성만곡형간균으로만성위염을유발할뿐만아니라위궤양, 십이지장궤양, 점막연관림프조직림프종 (mucosa associated lymphoid tissue lymphoma) 및위암등과연관되어있다 [1, 2]. Received : February 12, 2010 Manuscript No : KJLM10-030 Revision received : July 7, 2010 Accepted : July 26, 2010 Corresponding author : Mi-Kyung Lee, M.D. Department of Laboratory Medicine, Chung-Ang University College of Medicine, 65-207 Hangang-ro 3-ga, Yongsan-gu, Seoul 140-757, Korea Tel : +82-2-748-9837, Fax : +82-2-748-9929 E-mail : cpworld@cau.ac.kr *This research was supported by the Chung-Ang University Research Grant in 2010. ISSN 1598-6535 론 The Korean Society for Laboratory Medicine 이러한 H. pylori 감염률은나이가들수록급격히올라가며한번감염되면저절로치유되는일은거의없이감염이지속된다. H. pylori는전세계적으로 50% 이상이감염되어있으며한국의혈청학적양성률은약 60% 로알려져있다 [3, 4]. H. pylori 감염을진단하기위해서는비침습적인검사인혈청학적검사, 요소호기검사 (urea breath test, UBT) 와침습적인검사로생검조직을이용한신속요소분해검사 (CLO 검사 ), 염색, 배양, 중합효소연쇄반응법 (PCR) 등매우다양한진단방법이시행되고있다. 국내에서는위내시경수가가저렴하고위암발생률이높아위내시경검사를통한침습적인방법들이임상에서선호된다. 내시경생검에가장좋은부위는전정부로알려져있어예전 H. pylori 감염진단을언급하는많은보고에서는위생검을전정부에서시행하였다 [5]. 그러나동서양위염환자에게위염의활동성, 만성정도, 위축의차이가있으며특히우리나라는만 381
382 Korean J Lab Med 2010;30:381-7 성위축성위염환자가많아전정부보다는다른부위에서더높은 H. pylori 진단율을보이기도한다 [5]. 대한 H. pylori 연구회에서는가능하면전정부와체부에서각각 1개이상의조직을채취하여검사하도록권장하고있지만 [6] 실제우리나라에서 H. pylori가위장내어느부위에많이분포하는지는충분한조사가이루어져있지않다. H. pylori 제균은심한위염, 소화성궤양, 출혈성궤양, 저위험성점막연관림프조직림프종및조기위암절제후에권장되며양성자펌프억제제 (proton pump inhibitor, PPI) 와두가지항생제를병용하는삼제요법이치료의주를이룬다. 주로사용되는항생제로서 clarithromycin (CLA), amoxicillin (AMOX), metronidazole (MET), tetracycline, quinolone 제재등이있다. 일반적으로 1차제균치료실패시그원인을항생제내성으로보아항생제감수성검사를하여 2차제균치료약제를결정할것을권장하고있다 [7]. 또한해당지역에서한항생제의내성률이 15% 가넘는경우 1차치료약제로권장되지않으며우리나라의 CLA 내성은 13.8-21.6% 로보고되고있다 [8-11]. 본연구에서는생검부위와검사방법에따른 H. pylori 검출률을비교하고자하였다. 위내시경시위전정부및체부, 십이지장구부를생검하여부위에따른양성률을관찰하였으며조직염색, 배양및 PCR을실시하여방법간의민감도를비교하였다. 또한 CLA 내성과연관되어있는 23S rrna 돌연변이를검출하고 E-test를실시하여표현형과유전형을비교하였다. 대상및방법 1. 대상 2008년 1월부터 3월까지중앙대학교용산병원소화기내과외래에서상부위장관내시경을시행한 90명의환자를대상으로하였다. 90명중 75명에서는위전정부와체부및십이지장구부에서점막조직생검이이루어졌고, 나머지 15명은위전정부와체부에서만점막조직을채취할수있었다. 위전정부와체부에서는각각두조각의조직을채취하여한조각은조직검사를시행하였고나머지한조각은배양과 PCR을시행하였다. 십이지장구부에서는한조각의조직만을채취하여배양과 PCR을시행하였다. 2. 조직검사총 90 명의환자로부터채취한 180개의생검조직을사용하였 으며, 위전정부와체부에서각각채취한 1개의생검조직으로 hematoxylin-eosin 염색, giemsa 염색을시행하여 H. pylori 감염여부를판단하였다. 십이지장검체는시행하지않았다. 3. 배양총 90 명의환자로부터채취한 255개의생검조직을사용하였다. 신선한생검조직을 5% 면양혈액한천배지에접종후 37 10% CO2 배양기에서 3일간배양후균집락을관찰하였고, 관찰되지않을때는 3일간더배양하여균집락의유무를판정하였다. 4. Clarithromycin 내성검사 1) DNA 추출배지에접종후남은생검조직에서의 DNA 분리는 QIAamp DNA Mini Kit (Qiagen, Valencia, CA, USA) 로제조회사의설명서에따라시행하였다. 생검조직에 ATL buffer 180 ml, proteinase K 20 ml를넣어 56 에서용해시킨후 AL buffer 200 ml를넣고 70 에서 10분간방치하였다. 100% ethanol 240 ml를첨가하여 15분간섞은후 QIAamp spin column에넣어 8,000 rpm에서 1분간원심분리하였다. Column에 AW1 buffer 500 ml를넣어 8,000 rpm, 1분원심분리, 2차로 AW2 buffer 500 ml를넣어 14,000 rpm, 3분원심분리한후세척하였다. 이후 AE buffer 200 ml를넣어 1분간방치한후 8,000 rpm, 1분간원심분리하여 column에붙어있는 DNA를분리하였다. 2) 내성유전자변이검사 : Dual-priming oligonucleotide (DPO)-based multiplex PCR Seeplex ClaR-H. pylori PCR kit (Seegene Inc., Seoul, Korea) 의 Seeplex home-brew primer mix를이용하여유전자를증폭하였다. DNA의증폭은 GeneAmp PCR system 9700 (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) 을이용하였으며, 94 에서 15분동안변성시킨후 94 에서 30초, 65 에서 30초, 72 에서 1분으로 40회증폭하였다. 마지막으로 72 에서 5분간연장반응을시켰다. 2% 아가로스겔에서전기영동하여브롬화에티듐 (ethidium bromide) 으로염색하여 Image system (ChemiDoc XRS system, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA) 으로분절의크기를확인하였다. 621 bp PCR 산물만보일경우 H. pylori 양성야생형 (wild type) 으로해석하였고그외 475 bp는 A2143G 돌연변이, 194 bp는
Cho AR, et al., Clarithromycin Resistance of H. pylori 383 A2142G 돌연변이로해석하였다 (Fig. 1). 3) 항생제감수성표현형검사 : E-test DPO-based multiplex PCR에서야생형 10균주, 돌연변이양성 8균주에대해서각각 E-test (AB Biodisk, Solna, Sweden) 로 CLA 감수성검사를시행하였다. 스트립을배지위에놓고 37 10% CO2 배양기에서 72시간배양이후최소억제농도가1 μg/ml 이상이면내성으로판정하였다 [12]. 5. H. pylori의감염기준조직검사, 배양, DPO-based multiplex PCR 중한가지검사이상에서양성을보일경우 H. pylori 감염으로판단하였다. 6. 의무기록조사 H. pylori 양성환자의제균치료력, 제균치료약제, 경과관찰을위한요소호기검사, 위내시경검사등의결과를조사하기위해후향적으로전산의무기록을검토하였다. 7. 통계분석통계학적분석을위해서 SPSS software ver. 12.5 (SPSS Inc., M 1 2 3 4 5 6 M 7 8 Chicago, IL, USA) 를이용하였다. 생검부위별검사양성률차이, 그리고검사방법간양성률차이는카이제곱검정에의해평가되었으며 P 값이 0.05 이하이면의미가있다고판단하였다. 결과 1. 대상환자군의 H. pylori 양성률본연구에서 H. pylori 감염은 53.3% (48/90) 였다. 생검부위에따른양성률은위전정부 53.3% (48/90), 체부 52.2% (47/90) 였으며, 십이지장구부는 17.3% (13/75) 로매우낮은양성률을보여주었다. H. pylori 양성 48명중위전정부의민감도는 100% (48/48), 체부는 97.9% (47/48) 로대부분의환자를검출할수있었다. 십이지장구부검체는 48명의양성환자중 42 명에서채취되었으며민감도는 30.9% (13/42) 였다. 부위별검사양성률은조직검사와 PCR에서전정부와체부는동일했으며배양에서는전정부보다체부가더높은양성률을보였다 (24/48, 50% vs. 28/48, 58.3%, P<0.05). 십이지장검체는조직검사를시행하지않아비교하지않았다 (Table 1). 90명환자의조직검사와배양, PCR을비교하였다 (Table 2). 조직검사 46.7% (42/90), PCR 42.2% (38/90), 배양 34.4% (31/90) 로조직검사의양성률이제일높았으며 (P<0.05), 조직검사와 PCR을동시에했을경우 46명의환자가양성으로보고되어총 48 명의양성환자중대부분의환자를검출할수있었다 (Table 3). Internal control (900 bp) H. pylori common (621 bp) A2143G (475 bp) Table 2. Dual-priming oligonucleotide (DPO)-based multiplex PCR, histological analysis, and culture of the biopsies obtained directly from 90 patients A2142G (194 bp) Fig. 1. Detection of the A2143G and A2142G in the 23S rrna gene on the basis of the dual-priming oligonucleotide-based multiplex PCR product. Lane M, amplicon size marker (Seegene Inc., Korea); lanes 4-7, wild type; lanes 1-3, mutant type of A2143G; lane 8, coexistence of A2143G and A2142G. Helicobacter pylori infection DPO-based PCR Histology Culture Positive 38 42 31 Negative 52 48 59 Total 90 90 90 The positivities of the 3 methods are significantly different (P<0.05). Table 1. Detection of Helicobacter pylori by histological analysis, culture, and dual-priming oligonucleotide (DPO)-based multiplex PCR of each biopsy site from H. pylori-positive patients (48 of 90) Biopsy site DPO-based multiplex PCR Histology Culture Positive Negative Positive Negative Positive Negative Antrum (N=48) 36 12 42 6 24 24 Body (N=48) 36 12 42 6 28* 20 Duodenal bulb (N=42) 10 32 Not tested Not tested 6 36 *P<0.05 compared to culture positivity of antrum.
384 Korean J Lab Med 2010;30:381-7 Table 3. Comparison of the Helicobacter pylori positivity of dual-priming oligonucleotide (DPO)-based PCR, histological analysis, and culture status DPO-based multiplex PCR Histological analysis Culture Positive Negative Positive Negative Positive 34 4 25 13 Negative 8 44 6 46 Total 42 48 31 59 The positivities of the 3 methods are significantly different (P<0.05). 2. Clarithromycin 내성유전형결과 CLA 내성유전형분석을위한 DPO-based multiplex PCR 에서 H. pylori 양성 48명중 8명에서내성과관련된점돌연변이가확인되어 16.7% 의빈도를보였다. A2143G 점돌연변이는 4 명, A2142G 점돌연변이는 1명에서전체또는일부생검부위에서검출되었으며, 그외 3명의환자에서야생형과돌연변이가동일환자의각기다른생검부위에서동시검출되었다 (Table 4). 3. Clarithromycin 내성유전형과표현형의비교 DPO-based multiplex PCR에서야생형으로확인된 10명의각생검부위에서분리된 23균주는 E-test에서모두 CLA 감수성을보였다. 돌연변이가검출된 8명의결과는 Table 3과같다. A2143G 돌연변이가검출된 4명중 1명은배양에서 H. pylori 가자라지않았고 (patient 1), 나머지 3명 (patient 2-4) 은배양이된부위에서는표현형과일치하는결과를보였다. 위전정부에서야생형, 체부에서 A2143G 돌연변이가발견된 1인 (patient 6) 은전정부에서는배양음성이었으나체부에서는 E-test에서 CLA 내성을보였다. 배양에서 H. pylori가증식된 7명중4명에서표현형과유전형이일치하는소견을보였다. 유전형과표현형이일치하지않은경우는 A2142G 돌연변이가검출되었으나 E-test에서 CLA 감수성으로확인된 1명 (patient 5) 과야생형과돌연변이가중복검출된 2명 (patient 7, 8) 으로서각부위별균주의유전형과표현형의불일치소견을보였다 (Table 4). 4. H. pylori 제균요법결과 H. pylori 양성 48명중 31명이제균치료를받았다. PPI, CLA, AMOX, MET 4제요법이 24명, PPI, AMOX, CLA 3제요법으로치료받은환자는 6명이었다. 그외 1차치료에실패하 Table 4. Comparison between dual-priming oligonucleotide (DPO)-based multiplex PCR and E-test for detection of clarithromycin resistance of Helicobacter pylori in 8 mutation-positive patients Patient No. Biopsy site 23S rrna genotype Phenotype 1 Antrum A2143G No growth 2 Antrum A2143G Resistant Duodenal Bulb A2143G No growth 3 Antrum A2143G Resistant 4 Antrum A2143G Resistant 5 Antrum Negative Susceptible Body A2142G Susceptible 6 Antrum Wild type No growth Body A2143G Resistant Duodenal Bulb Not tested Not tested 7 Antrum Wild type Susceptible Body A2142G, A2143G Susceptible Duodenal Bulb Wild type Susceptible 8 Antrum Wild type Susceptible Body A2142G No growth Duodenal Bulb A2142G Susceptible 고 2차치료를받는 1명이 PPI, MET, tetracycline, bismuth 요법으로치료받았다. 제균치료를받은 31명중 18 명에서추적검사로 UBT를시행하였으며이중 CLA 내성돌연변이가발견되지않은야생형 H. pylori 분리환자 14명은전부음성결과를보였다. 나머지 4명은전부 A2143G 돌연변이양성환자로서이중 PPI, CLA, AMOX, MET로치료받은 3명은추적 UBT 에서 2명은음성, 다른 1명은양성을보였다. 마지막환자 1명은 PPI, MET, tetracycline, bismuth 요법으로재치료받은환자이며추적 UBT에서음성을보였다. 고 서양에서는위전정부가 H. pylori 감염진단을위한가장좋은위치로알려져있으나우리나라는만성위염과내시경소견상위축형점막을가진환자가많아 H. pylori가위점막에균일하게분포하지않을확률이높으므로생검의위치나수에따라민감도가달라질수있다. 본연구에서위장내부위에따른양성률은위전정부 53.3% (48/90), 체부 52.2% (47/90) 는거의비슷하나그에비해십이지장구부는 17.3% (13/75) 로매 찰
Cho AR, et al., Clarithromycin Resistance of H. pylori 385 우낮은양성률을보여진단부위로적절치않음을알수있었다. 배양률은체부가가장높았으나조직검사, PCR의경우는전정부와체부의양성률이동일하였다. 대한 H. pylori 연구학회에서는전정부와체부에서각각검체를채취하도록권장하였으나 H. pylori 진단을위해서는위전정부나체부중어느한부위만생검하더라도비슷한양성률을얻을수있음을알수있었다. 하지만 CLA 내성검출을위한 DPO-based multiplex PCR에서는 23S rrna A2142G 돌연변이 1명 (patient 5) 은체부에서만발견되었으며야생형과돌연변이형이동시검출된 3 명은전정부와체부에서각각다른형이관찰되었다 (Table 4). 그러므로전정부와체부에서동시에조직을채취하는것은, 23S rrna 유전자돌연변이의검출률을높일수있을뿐만아니라중복감염이나 hetero-resistance 균주의검출률을높일수있을것으로생각한다. 조직검사와 DPO-based multiplex PCR의양성률을비교하였을때, 조직검사 46.7% (42/90), DPO-based multiplex PCR 42.2% (38/90) 로조직검사의양성률이더높았다 (Table 2). Woo 등 [13] 도조직검사의민감도가더높다고보고하였는데, 이는 H. pylori가위점막내균등하게분포하지않으며조직검사는두개의검체로시행하였으나 PCR의경우한개의검체로시행하였기때문에결과의편견 (bias) 을가져왔을것으로추측하였다. 본연구에서는조직검사와 PCR에이용된생검조직의개수는동일하였으나배양접종이후남은검체를 DNA 추출에이용하였기때문에조직검사에비해 PCR의민감도가떨어진원인으로생각된다. 하지만조직검사에서음성이고 PCR에서양성인환자가전체양성환자의 8.3% (4/48) 에서발견되어, PCR 검사를위한단독검체채취시 PCR 검사의민감도는상당히높아질것으로생각하였다 (Table 3). 서양에서는위내시경검사비용이높고위암발병률이낮아비침습적진단방법으로 H. pylori 존재유무를확인할것을권장하지만우리나라는위내시경수가가상대적으로저렴하고위암발생률이높아위내시경검사를우선시행하므로침습적진단방법이 H. pylori 감염진단에많이이용된다. 이를고려하여위내시경시생검한검체로조직검사와 PCR을동시에시행하였을경우거의모든환자 (95.8%, 46/48) 에서 H. pylori를검출할수있었다. 특히 CLA 내성이의심될때 DPO-based multiplex PCR 검사는 H. pylori 검출뿐만아니라내성을동시발견할수있어유용하게사용될수있을것으로생각된다. 우리나라에서는 1차제균요법에 AMOX, CLA이주로사용되는항생제이며이두항생제의병합요법제균율은 80-90% 이지만최근H. pylori 제균율은전반적으로감소하고있다. 이는 항생제의사용으로인한내성률증가가그원인으로생각되며 CLA의경우내성과치료효과에관한연구는아직부족하나내성균주의제균율은 25-50% 로낮게보고되고있다 [14]. 특정지역에서 CLA에대한내성이 15-20% 가넘으면경험적인일차치료제로 CLA를사용하기전에감수성검사를요구하고있다. 이는일차치료제를감수성결과에따라선택하는것이제균율을높이고, 항균제내성의발생을방지하기위해필요하기때문이다. 국내 CLA 내성률은검사방법, 균접종액농도, 배양기간, 내성판정을위한기준등이달라비교가어렵지만 2005년도이후 17.2-21.6% 로증가하는추세를보이고있으며 [8, 11] 본연구에서는 DPO-based multiplex PCR에서 48개중 8개로 16.7% 의빈도를보였다. 이를미루어볼때국내도일차치료제로 CLA를사용하기전에감수성검사가필요한시점으로생각된다. CLA 내성측정방법중액체배지희석법, 디스크확산법, E-test 등세균배양을이용한방법은배양자체가까다롭고또한시간이오래걸려실제임상에서이러한배양검사를제균치료전에시행하기어렵기때문에 PCR, PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP), real-time PCR hybridization, FISH 등신속한결과를낼수있는분자유전학적인방법이각광을받고있다 [11, 13, 15-19]. CLA 내성은 23S rrna 유전자돌연변이와관련되며 23s rrna V domain 염기서열 2,142번혹은 2,143번 adenine이 guanine으로치환되고소수 cytosine이나 thymine으로변이된다. 다른부위에서도돌연변이가일어나지만, 이두부위가 CLA의 H. pylori 결합에영향을주는부위이다 [20]. 본연구중 DPO-based multiplex PCR에서돌연변이형을보이는환자는 8명으로 A2143G 점돌연변이 4명, A2142G 점돌연변이 1명, 그외 3명의환자에게각각다른부위에서야생형과 A2143G 혹은 A2142G가동시검출되었다 (Table 4). 이와같은동시검출의경우야생형과변이형이같이있는 hetero-resistance 균주감염이거나한환자에게감수성을나타내는균과저항성을나타내는균이중복감염되어있는걸로추정할수있다. 국내는선진국에비해 H. pylori 감염률이높으며또한일상생활에서감염의기회가높아서로다른균주에의한중복감염의기회가높다고생각된다. 실제한국 H. pylori 감염환자는대부분 H. pylori 균주분포가혼합된양상을보여준보고도있다 [21]. 이렇게균주가혼합된경우는항생제내성균이포함될확률이높아지므로제균율에영향을줄수있다. 또한낮은농도의저항균주는디스크확산법이나 E-test 등내성표현형검사에서발현이안될수있으며 DNA sequencing 역시돌연변이형이전체의 25% 이하인경우놓칠가능성이높다. 그러나 DPO-based
386 Korean J Lab Med 2010;30:381-7 multiplex PCR인경우돌연변이형이 2% 만차지하더라도검출이가능한것으로보고되고있다 [13]. 또한본연구에서도돌연변이를보이는 8명중 3명은표현형에서감수성을보여 DPObased multiplex PCR의경우더높은민감도를보이는것을알수있었다. CLA 내성유전형과표현형과의일치율을살펴보았을때 10 명의환자로부터분리된야생형 23균주는모두감수성을보였다. 그러나돌연변이균주가관찰되는배양가능한환자 7명중 4명의균주만이유전형과일치하는양상을보였다. 나머지 3명은 A2142G 돌연변이 1명과중복감염인 2명 (patient 5, 7, 8) 으로서돌연변이가발현된부위와야생형이분리된부위에서모두감수성을보였다. 국내에서시행한 CLA 내성유전형과표현형검사들을살펴보면표현형에서감수성을보인균주에서일부는변이형을보이는등유전형과표현형이일치하지않는경우를보여주고있다 [8, 22]. 이는부위에따른저항성균주의농도차이가표현형검사에서감수성으로발현, 유전자변이와함께다른단계의내성획득기전존재의가능성, 혹은 23S rrna 돌연변이가실제모든환자에게저항성을나타내는지도고려해야할것이다. 제균치료이후추적검사를살펴보면 UBT를시행한야생형 14명은모두음성을보였으나돌연변이환자중 3명은추적 UBT 에서 2명은음성, 다른 1명은양성을보여유전형과맞지않은결과를보였다. PPI, CLA, AMOX, MET 4제요법으로치료하였기때문에 CLA 내성유전자돌연변이를가졌으나 AMOX, MET에대한감수성이있었을것으로추정할수도있다. 그러나실제 CLA 내성이있다하더라도 CLA를포함한제균요법에약 50% 는효과적으로제균된보고 [23] 도있으며또한앞에서언급한표현형과유전형의불일치율등을고려할때 23S rrna 돌연변이가절대적으로저항성을유발하는지에대한임상적연구가더필요할것으로사료되었다. 결론적으로내시경시위전정부와체부를같이생검하여 H. pylori 검출을위한조직검사와 DPO-based multiplex PCR을동시시행함으로써 H. pylori 검출민감도를증가시킬뿐만아니라중복감염및 hetero-resistance 균주의발견을높일수있을것으로기대되었다. 또한 H. pylori의 CLA에대한내성률은점차증가하고있으므로 DPO-based multiplex PCR은신속하게 CLA 내성균주를검출할수있는유용한방법으로생각된다. 요약배경 : 본연구에서는위생검부위에따른 H. pylori 검출률 을관찰하였으며배양, 조직검사및 dual priming oligonucleotide (DPO)-based multiplex PCR을실시하여방법간의민감도를비교하였다. 또한 clarithromycin 내성과연관된 23S rrna 돌연변이를검출하기위한 multiplex PCR의유용성을평가하였다. 방법 : 90명의환자에게위전정부, 체부및십이지장구부에서생검한조직을배양, 조직검사및 Seeplex ClaR-H. pylori PCR (Seegene Inc., Korea) 을시행하였다. Clarithromycin 내성표현형검사는 E-test (AB Biodisk, Sweden) 로시행하였다. 결과 : 90명환자중 48명 (53%) 이 H. pylori 양성이었다. 위전정부와체부에비해십이지장구부는낮은검출률을보였다. 조직검사 46.7% (42/90), PCR 42.2% (38/90), 배양 34.4% (31/90) 로조직검사의양성률이제일높았으며조직검사와 PCR 을동시에했을 95.8% (46/48) 로거의모든환자를검출할수있었다. DPO-based multiplex PCR에서는 8명의돌연변이환자가검출되었다. Clarithromycin 내성 E-test에서는유전형에서 wild type로나온 10명의 23 균주는모두감수성을보였으나돌연변이 3명은표현형과유전형이불일치하였다. 결론 : H. pylori는조직검사와 PCR을같이시행하였을경우높은검출률을보이며 DPO-based multiplex PCR를시행할경우 PCR과내성검사를동시에시행할수있어임상에유용한정보를제공할수있다. 또한위전정부와체부를동시에검사함으로써혼합감염및 hetero-resistance 균주로인한 clarithromycin 내성을검출할수있겠다. 참고문헌 1. NIH Consensus Conference. Helicobacter pylori in peptic ulcer disease. NIH Consensus Development Panel on Helicobacter pylori in Peptic Ulcer Disease. JAMA 1994;272:65-9. 2. Blaser MJ. Hypothesis: the changing relationships of Helicobacter pylori and humans: implications for health and disease. J Infect Dis 1999;179:1523-30. 3. Pounder RE and Ng D. The prevalence of Helicobacter pylori infection in different countries. Aliment Pharmacol Ther 1995;9(S2):33-9. 4. Yim JY, Kim N, Choi SH, Kim YS, Cho KR, Kim SS, et al. Seroprevalence of Helicobacter pylori in South Korea. Helicobacter 2007;12:333-40. 5. Lee MS, Roe IH, Lee MY, Lee JH, Nam SW, Lee MI, et al. The best endoscopic biops site for the diagnosis of Helicobacter pylori infection. Korean J Gastroenterol 2001;37:406-11. ( 이문숙, 노임환, 이만
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