샘많t I A 뺑씨m m 학의@ 0 칠맹N 체& 짜1ι삐少陰 A 升 R훌훌혔漫의免훌調節作用 유창휠 * 송정모 * b s t r a c t I I m m u n o r e g u l a t o r y A c t i o n o f S o e u m i n S e u n g y a n g i k k i t a n g R y u C h a n g - r y e o l S o n g J e o n g - m o D e p t 이 S a s a n g C o n s t i t u t i o n a l M e d i c i n e, C o l l e g e 이 O r i e 미 a l M 염 i a n e, W s u k U n i v T h e p u r p o s e o f t h i s r않 a r c h w a s c o i n v e s t i g a t e t h e e f f e a s o f S e u n g y a n g i k k i t a n g ( S I 끼 o n t h e i m m u n e c e l l s i n B A L B / c m i c e S I T ( 5 0 α n g / k g ) w a s a d m i n i s t e r d p o o n c e a d a y f o r 7 d a y s S I T e n h a n c e d t h e p r o l i f e r a t i o n o f t h y m o c y t e s, b u t d e c r e a s e d t h e p r o l i f e r a t i o n o f s p l e n o c y r e s S I T e n h a n c e d t h e s u b p o p u l a t i o n o f c y t o t o x i c T c e l l s i n t h y m o c y r e s a n d h e l p e r T c e l l s i n s p l e n o c y r e s, b u t d i d n o t a f f e a t h e s u b p o p u l a t i o n o f B 2 2 0 / T h y I c e l l s S I T e n h a n c e d t h e p r 여 u a i o n o f ) ( - i n t e r f e r o n a n d i n t e r l e u k i n - 2 i n t h y m o c y r e s, s p l e n o c y t e s a n d s e r u m, b u t d i d n o t a f f e c t t h e p r o d u a i o n o f i n t e r l e u k i n - 4 S I T s u p p r e s s e d t h e p r o d u a i o n o f n i t r i c o x i d e, b u t e n h a n c e d t h e l u c i g e n i n c h e m i l u m i n e s c e n c e a n d t h e e n g u l f m e n t o f F I T C - c o n j u g a t e d E c o l i p a r t i c l e s i n 야 r i r o n e a l m a c r o p h a g e s T h e s e r e s u l t s s u g g e s t t h a t S I T h a s a p o t e n t a a i v i r y o n t h e s 야 c i f i c i m m u n i t y v i a t h e c y t o k i n e s e c r e t i o n o f π 1 1 c e l l s a n d t h e n o n - s p e c i f i c i m m u n i t y v i a t h e p h a g o c y t i c a a i v i r y o f m a c r o p h a g e s i n v i v o K e y w o r d s : S e u n g y a n g i k k i t a n g, c y t o k i n e, p h a g κ y t I C, 띠 1 m u n i r y L 績틀융 升陽益氣淑은 r 東隔꿇世保元 에처음으로수록 되었으며少陰 A 亡陽證에升陽益氣의방법에의하 여치료하는처방으로제시되었다 I ) 기존웰짧學에서는 t 陽올陽氣가虛脫하여나타나는病쩔的徵 候로본것을李濟띤는陰陽升降의失調로인해陽 이上升하지못하고도리어下降함으로써나타난다고인식하여升陽益氣의방법올提示한것이다 2 ) 升陽益氣앓은少陰 A 탬受熱表熱病의亡陽初 證의適用方이며, 桂技揚과補中益氣陽의 ) j 意가복 中 합된處方으로서ι 4 ) 5 ) 은陽 l옮證에대한회복효과가있다고보고한바있다 이러한陽虛는소음인의체질적특정으로, 이의해결을위해 陽魔之氣가保命之 1 : 라는것올전제로하여少陰 A 表 1피짧에 i 밟補升陽함으로써陰陽升降의불균형상태를조절하여회복시킨다고하였다찌, 0 따, 陽虛는面色蒼터, 身據 z 力, 냄 i f, 懶言 { 핏演행, - f " 食不化, 없떻 1 8 冷, 四 J J U 찢冷, 小便淸長, 大 利 1펴앓, 좀質淡 f l, 빠虛 i 않或? X 둥의중상을나타내는증후군으로서, 이로인해同化 f t ' 用의감약, 腦 의興팎性저하, 에너지대사의저하, 짧環不良, 免훌 納 우석대학교한의과대학사상채질과 교신저자송정모주소 ) 전주시완산구중화산동 2-5 우석대학교부속한방병원전화 ) 0 6 3-2 2 0-8 6 0 0 E - M a i l ) s o o - < I a n g @ 뼈 n m a i I n C t - 1 0 2 -
- 유창열외 1 少톰, u t i l i 훌훌 ; R 의 S / t 흩빼 1 1 作 I I! - 能力의저하가나타나게된다 7, 8 ) 최근陽虛에대한없究로는升陽益氣揚과 子陽 ) 中앓 9 ), 6 ), 十全大補揚 補中益氣楊 1 0, 1 1 ) A 物君 升陽益氣附子揚과官桂附子理 香 i y 養몹現 1 2 ) 동의方햄 j 에 대한보고가, 免훌反應에대한없究로는補中益氣陽 I } - \ 끼 1 8,, 四君子揚과四物滾꺼 n 2 1, 2 낀퉁의方뼈에대한보고가있는바, 이를통해 補氣또는補血하는補益方들이陽虛를먼復시키고免훨機能의效果를增뭘시킨다는것올알수있다 升陽益氣揚의처방구성에참고된것으로보이는 桂技楊은 r W j 2 3 ) J 寒論에서太陽傷凰表虛證에웅용되며, 후세방補中益氣꿇은氣虛로인한中氣下업과牌不統血둥에웅용되는처방이다 8 ) 이는升陽益氣 없이소음인表病證의正氣와 $ 氣가싸우는상태 에서나타나는免훌反應에일정한영향올줄수있음을시사해준다 또한元 2 4 ) 과朴 2 ) 에의하면少陰 / \ 補中益氣陽은 短氣, 失血 꿇, 텀퓨, f f 둥의氣血虛로인한병 증뿐만아니라題痛, 班珍, 짧 l 館, 夢遺, 上消, 五빼, 體痛둥에도웅용되어지고있는바, 이와유사한方意를갖는升陽益氣꿇은 t 陽證뿐아니라일반雜 病에도널리웅용할수있어서일정한免훌調節作用이있올것으로사료된다 이에평者는少陰 A 升陽益氣楊의免훨調節作用 올관찰하기위해, 또體에서免훌系를조절하는중 요한細뼈인흉선세포, 비장세포및대식세포에대 한작용을관찰하여유의성 있는결과를 얻었기에 보고하는바이다 I I 를뚫材혐및方法 실험에사용한시약은 D u l b e c c o s m 여 i f i e d E a g l e ' s m 어뻐 n ( D M E ), p e n i c 피 i n - s t r e p t o m y c i n, D 띠 b e c c o p h p h a t e b u f f e r e d s 에 i n e ( D P B S - λ ), l i p o p o l y s a c c h a r i d e α P S ), - i n t e r f e r o n ( - I F N ), l u c i g e 띠 n, M T f, z y m o s a n, s 띠 f a! 피 a J D i d e, N - n a p h t h y l e t h y l e n e d i a m i n e 2 H d 은 S i g m a C o, R P 뻐 1 6 4 0, f e t a l b o v i n e s e r u m ( F B S ), t r y p s i n 은 G i b e o C o, m o u s e - I F N 띠 u n u n o a s s a y k i t, i n t e r f e r o n - 2 ( 1 1-2 ) i n u n u n o a s s a y k i t, m o u s e i n u n u n o a s s a y k i t 는 R & D C o, P E - c o n j u g a t e d a n t i - C D 4, F I T C - c o n j u g a t e d a n t i - C D B a n t i l x 녕 y, P E - c o n j u g a t e d a n t i - B 2 2 0, F I T C - c o n j u g a t e d a n t i - 까 l Y 1 m A b s 는 D a i n i p p o n 앞 I Y 짜 u C o, F I T C - c o n j u g a t e d E c o l i K - 1 2 b i o - p a r t i c l e s 는 M o l e c u l a r p r o b e s C o 제품퉁올사용하 였으며, 기타시약은 c e l l c u l t u r e 용및 l 급시약올사 용하였다 사용기구는 c u l t u r e f l a s k ( N u n c ), m u l t i - w e l l p l a t e ( 9 6 - w e l l, 2 4 - w e l l, C o s t a r ), M i c r o p l a c e - R e a d e r ( D y n a c e c h M R 5 0 0 0 ), C 0 2 i n c u b a t o r ( V 양 i o n s c i e n t i f i c C o ), i n v e r t e d m i c r o s c o p e ( N i k o n C o ), f r e e z e d r y a p p a r a t u s ( I l s i n C o ), f l o w c y t o m e t e r ( C o u l t e r E P I C S - X L ), l u m i n o m e t e r ( B e 버 1 이 d 9 6 L P ) 둥올사용하였다 2 方法 1 ) 홉홉의빼빼 本실험에사용한處方은 r 2 6 ) J 東醫혈世保元 m o u s e 1 1-4 收載된少陰 A 升陽益혔꿇으로, 사용한藥材들은 X 쉰大學校附屬韓方病院에서구입, 精 - 選하여사용하였고그內容과分量은다음과같다 P r e s c r i p t i o n o f S o e u m i n S e u n g y a n g i k k i t a 때 ( S I 끼 * 훌햇名生쫓名 A 훌 G i n s e n g R a d i x A l b a 重뾰 g ) 8 에 s 1 材料 1 ) 빠物 본실험에사용한생쥐는생후 8 주된 B A L B l c 수컷을대한실험동물 t 주 ) 에서구입하여, 온도 2 0 土 2 ' C, 습도 5 0 : t 5 %, d a r k! 1 i g h t 1 2 시간의조건하에서 l 주일이상실험실에적웅시킨후사용하였으며, 고 계 桂技 C i n 때 n o m i R a m 마 J S 白정햇 P a e o n i a e R a d α 짧홉 A s t r a g a l i R a φ x l 츠 I f 可首烏 C y n a n c h i W o l f 이 d i R a d i x 肉양 C i n n a m o m i C o r t e x S p i s s u s 쏠짧 A n g e l i ι a e G 멍 a n t i s R a φ x i t 草 G l y α 벼따 a e R a d i x 형사료와물올자유로이섭취하도록하였다 生훌 Z i n g i b e r i s R h i z o m a 4 大짧 z α y p h i F r u α u s 4 2 ) 試쫓및짧훌 合計 5 6 8 9 q 에 에8-1 0 3 -
- 사상혜짙의학회지제 1 3 권제 3 효때 1 - 상기처방 2 첩분량올중류수 2, α ) O m! 로 2 회가열추출한후, 여과하여여액올 r o t a r y e v a p o r a t o r 로농축한다음, f r e e z e d r y e r 로동결건조하여분말 2 2 5 g ( 수득율 2 0 8 % ) 을얻어 ( 이하 S I T i! } 칭합 ), 동물실험시에는생리식염수에용해시켜사용하였다 시 O I N H d 에용해시킨 1 0 % S D S 1 0 0 1 1 1 를각 w e l l 에첨가하고차광상태에서 1 8 시간더배양한후발색된各 w e l l 의홉광도를 m i c r o p l a t e - r e a d e r 로 5 7 0 n m 에서측정하여대조군의홉광도에대한실험군의홉광도를백분율로환산하여계산하였다 2 ) 뼈훌細뼈, 홈훌細 R 힌및大 1 훌뼈 R 먼톨리 생쥐의흉선세포및비장세포분리는 W y s o c k i 2 7 ) 및 M i z e l 2 8 ) 둥의방법을이용하였다 생쥐 5 마리를 1 군으로하여 S I T 5 0 α n g / k g 올 l 일 l 회씩 7 일간경구 투여한다음 8 일째생쥐를경추탈골하여도살하였 다 적출한흉선및비장올 D P B S - A 롤넣은 p e t r i d i s h 에서잘게분쇄하고멸균된 s t a i n l e s s m e s h 로여과하 여세포부유액올얻은후, D P B S - A 로 2 댄세척한다 음 0, 5 0 0 r p m 에서 1 0 분간원심분리 }, 흉선세포및비장세포부유액으로하였다 대식세포의분리는 S I T 5 0 0 m 아 < g 올 1 일 l 회씩 7 일간경구투여하였다 약물투여 4 일째 m o u s e 복강 에 3 % t h i o g l y c o l l a t e 2 m 1 를注入하고, 8 일째경추탈골 하여도살시킨다음, 복강에 c o l d P B S l O m I 를넣어 복강세포를수집하였다 수집한세포를 4 ' C 에서 1, 3 0 0 φ m으로 1 0 분간원심분리하고 R P M I 배지로 2 회세척후, 직경 1 2 0 m m p e t r i 이 s h 에분주하여 C 0 2 i n c u b a t o r 에서배양시키고 2 시간후에부착되지않은 세포를제거한다음, 부착한대식세포를 c e l l s c r a p e r 로분리하여사용하였다 생쥐흉선세포, 비장세포 및대식세포는 R P M I 1 6 4 0 협地를사용하였으며, 배 지에는 1 0 % F B S 와 p e n i c i l l i n - s t r e p t o m y c i n ( 1 0 0 u n i t s / m I, l O O l 1 g / m I ) 올첨가하여사용하였다 3 ) 뼈짧빼빼및홉톨細뼈의예 i 뭘能멍 9 솔 분리한흉선세포및비장세포의중식에미치는 S I T 의영향은 Mπ 법으로측정하였다 본실험에사 용한 Mπ 법은 M o s m a n n 영 ) 이개발하여 K o t n i k 둥 3 0 ) 1 변형시킨방법으로, 9 6 - w e l l p l a t e 의각 w e l l 에분리한 흉선세포및비장세포를각각 R P M I 1 6 4 0 배지로희 석하고 9 6 - w e l l p i 따 e 에 1 2 x l 0 6 c e U s / m I 농도로분주하 여흉선세포는 c o n c a n a v a l i n A ( C o n A } 5 1 1 g / m I 를, 비장 세포는 l i p o p o l y s a c c h - a r i d e ( L P S } 1 0 1 1 g / 찌를첨가한후, 3 7 ' C 의 C i n C뼈 l t o r 에서 4 8 시간배양한다음배양 종료 4 시간전에 Mπ 시약을 b n 하였다 배양종료 4 ) 뼈훌빼뼈, 빠훌빼뼈의 s u b p o p u l a t i o n 혹정 분리한흉선세포및비장세포를각각 R P M I I 6 4 0 배지로 3 회세척하였다 T 세포의개체수는 P E - c o 띠 u g a t e d a n t i - C D 4 및윈따 F IπTπCι- c o 떼빼 n j U 맹, 1 9 뼈 때혀 a 뻐a n따t t m o n o c 때 ' \ O C 때 o c 떠 d o n a 뼈 i 때 a 에 I 쩨 o n 빼a 띠n 1π t디t i뼈펴 b < 팩로료 y T 및 B 세포의 s u b φ p u J a t i o n 은 P E - c o n j u g a t e d a n t i - B 2 2 0 및타F IπT Cι, - c o떼 n 띠마빼 n니 1 ψj lψu 맹핑 l g a와 t e삐 d 때a nc 따t t m o r 때빼o 뼈n 베1 3 꾀 a l a c뻐 nπm t! t i b 뼈녕 < 팩로 y 이중염색하여 4 ' C 에서 3 0 분 간반웅시킨후 f l o w c y r o m e t e r ( e x c i t a t i o n ; 4 8 8 n m, e m i s s i o n ; 5 2 5 n m ( F I T G, 5 7 5 n m ( P E ) ] 로 s u b p 야 u l a t i o n 올 측정하였다 3 1 ) 5 ) C v t o k i n e s 빼좋 생쥐 5 마리를 l 군으로하여대조군에는생리식염수만올, 실험군에는 S I T 5 O O m g / k g 올 l 일 l 회씩 7 일간경구투여한다음 8 일째동일한방법으로흉선 세포및비장세포를분리하여 2 X 1 0 7 c e l l s / m I 로조 제하여 9 6 w e l l p l a t e 에 2 0 0 μ R 씩분주한후, 7 2 시간 동안 C 0 2 i n c u b a t o r 에서배양하였다 배양액을원심 분리 ( 2, 5 O O r p m, 2 분, 4 ' C ) 한다음, 상동액 5 0 μ e 를 취하여 m o u s e i m m u n o 잃 s a y k i t 를이용하여 c y r o k i n e s 를 측정하였다 혈청중 c y r o k i n e s 를측정할때는생쥐 5 마리를 l 군으로하여대조군에는생리식염수만을, 실험군에 는 S I T 5 0 0 m 빙 < g 올 l 일 l 회씩 7 일간경구투여한다 음 8 일째생쥐의심장으로부터혈액을채취하여원 심분리한후혈청올분리하여, 혈청 5 0 뼈를취하여 m o u s e l f f i f f i u n o a s s a y 따를이용하여 c y r o k i n e s 를측정하 였다 즉 s a m p l e 5 0 때에 a s s a y d i l u e n t 5 μ e 를혼합하여 실온에서 2 시간동안 incubation 한후 4 회세척하였 다 세척후 a n t i - r r o u s e c y r o k i n e s c o n j u g a r 벼 c o n c e n t r a r e 1 0 0 띠를가하여실온에서 2 시간 incubation 한후, 5 회 세척하고 s u b s t r a r e s o l u t i o n I 이 d 를혼합하여 3 0 분동 안실온에서배양하였다 S t o p s o l u t i o n 1 0 0 뼈를가하 여 4 5 0 n m 에서띠 c 때 a t e r e a d e r 로홉광도를측정한 후, 미리작성한검량선에의해 c y t o k i n e s 의양을환 1 0 4 -
) - 유장혈외 1 : 少홉 A 升빼 A a i 홉의 % 훌빼 g 作用 - 산하였다 6 ) 빠빼 빼뼈로부터 n i t r i c o x i d e 생성량혹정 l O O j d 를챔가하여 m v e 얀 e e t e 삐 d f l u o r o m 따 l 였다 3 5 ) 분리한대식세포를 2 4 w e l l p l a t e 에 w e l l 당 2 X 1 0 6 c e l l s 을분주한후대식세포로부터생성되는띠 t r i c 9 ) 륭계처리 모든실험결과들은 m e a n 土 S E 로나타내었고통계 O J c i d e ( N O ) 의양을 G r i e s s 법 3 2 ) 으로측정하였다 각 w e l l 에 L P S 1 1 1 g! 찌와 y - I F N 2 5 띠 l i t s / 찌를첨가하여 2 4 시 간배양한후, 배양액 1 0 0 1 1 1 와 G r i e s s 시약 ( 1 % s 띠뻐피없꾀 d e + 0 1 % N - n a p h t h y l e n e d i a m i n e 2 H d + 2 5 % H 3 P 0 4 ) 1 0 0 1 1 1 를혼합하여 9 6 w e l l m 여 u l e 에넣 고, 3 7 ' C 에서 1 0 분간방치한후 5 7 0 r u n 에서 n 1 i c r o p l a t e - r e a d e r 로홉광도를측정하여미리작성한 N a N 의검량선에의해 N ' 의농도를환산하였다 7 ) 빠뾰 * 훌細뼈의훌없 e 혹정 분리한대식세포를 2 X 1 0 6 c e l l s l 찌가되도록 D M E ( w i t h o u t p h e n o l r e d, 0 3 4 야 N a H C 0 3, 2 6 빼 H E P E S, p H 7 2 ) 에부유시켜실험에사용하였다 L u c i g e n i n 용액의제조는 I O m I 의 D P B S - A 에용해한 후, 여과멸균하여 - 2 0 ' C 에서보관하연서사용하였 다 - ( s t o c k s o l u t i o n ) L u c i g e n i n s t o c k s o l u t i o n 은사용하기직전에 D M E 배지에 1 / 1 0 로희석하여사용하였다 다 e m i l u n l i n 않 e n c e 측정은 l u n l i n o m e t e r 를이용하여 3 7 에서측정하였다 써측정용 n 1 i c r o p l a t e ( w h i t e ) 의각 w e l l 에준비된대식세포부유액 5 0 μ e 와 l u c i g e n i n 용 액 5 0 μ e 및 z y m o s a n 용액 3 0 뼈를첨가하여최종 v o l u m e 이 2 0 0 μ M 가되도록한후넣고 3 7 ' C 에서 1 5 분 간전처리한후 5 분간격으로 3 0 분동안 l u c i g e n i n c h e m i l u n l i n e s c e n c e 양올측정하였다 8 ) 빠團大 : & 빼뼈의 1 를作用에의환 e n g u l f m e n t 혹정 F I T C - c o n j u g a t e d E c o l i p a r t i c l e s 을 H B S S 에현탁시켜 s o n i f i c a t i o n 환후사용하였으며, t r y p a n b l u e 는 c i t r a t e b u f f e r ( p H 4 씨에 2 5 0 μ g 찌농도로용해하여사용하였 다 분리한대식세포를 R P M I I μ o 배지로 1 x 1 0 c e l l s / m I 되도록조정한후, 1 0 0 뼈를 9 6 w e l l 에분주한 다음, E c o l i p a r t i c l e s 올뻐 s s 용액으로 I m g! m I 되게 조제한현탁액 2 5 μ g 를가하여 l 시간동안 C 0 2 i n c u b a t o r 에서배양하였다 배양액을제거하고 e x r r a r e l l 빼 f l u o r e s c e n c e 를억제하기위해 t c y p a n b l u e 처리는 s t u d e n t t - t e s t 를실시하여 P < 0 0 5 를기준으로유의성여부를판정하였다 川 를훌훌월果 1 升홉훌혔場 ( S I T ) 1 뼈編細뼈및牌廳細뼈의 혜훌훌애미지는했果 대조군의흉선세포에 T 임파구 m I t o g e n 인 c o n c a n a v a l i n A ( C o n A ) 를처리하였을때의세포생존 율을 1 0 0 % 로하였을때, C o n A 를처리하지않았을 때세포생존율은 6 8 2 土 1 6 % 로감소하였으며, S I T 를 투여하고분리한흉선세포에 C o n A 를처리하였을 때의세포생존율은 1 1 6 5 f 2 4 % 로, C o n A 를처리하지 않았을때세포생존율은 8 5 1 土 2 8 % 로대조군에비 해중가하였다 - ( T a b l e I ) T a b l e I E l f 없이용 u n g y a r 빙빼떠 I갱 ( S i n o n t h e p r o l i f e r a t i o n 이 m u r i n e t h y r πα t e s S a m p l e s T r e a r e d o f N o n - t r c a r e d o f C o n c a n a v a l i n A C e l l P r o l i f e r a t i o n ( % ) C o n c a n a v a l i n A C o n r r o l 1 0 0 O t 1 2 6 8 2 t 1 6 S I T 1 1 6 5 t 2 4 * 8 5 1 t 2 8 * S I T ( 5 O O m g / k g ) w a s a d m i n i s r e r c d p o o n c e a d a y f o r 7 d a y s, a n d t h e s e p a r a r e d t h y m o c y t e s ( 1 2 x 1 0 6 c e l l s / m I ) w e r e c u l t u r e d f O t 4 8 h i n R P M I I 6 4 0 m e d i a m i x e d w i t h a n a c r i v a t i n g m i r o g e n o f c o n c a n a v a l i n A T h e d a t a π p t e s e n t s t h e m e a n :! : S E o f 5 m i c e * ; S i n i f i c a n d y 이 f f e r c n r f r o m c o n r r o l r o u p ( p < O O I ) 대조군의비장세포에 B 임파구 n 1 i t o g e n 인 L P S 를처리하였올때의세포생존율을 1 0 0 % 로하였을때, 대 S 를처리하지않았을때세포생존율은 7 7 5 :! : 3 1 % 로감소하였으며, S I T 를투여하고분리한비장세포 에 L P S 를처리하였을때의세포생존율은 8 8 6 土 2 1 % 로, L P S 를처리하지않았을때세포생존율은 6 6 7 : t 1 4 % 로대조군에비해감소하였다 T a b l e 1 1 ) - 1 0 5 -
- 사상채질의학회지제 1 3 권채 3 호때 1 - c a d e l 댄 g j d S T m t e αd i f g 빼 g 1 d r T U r n e 3 j g g N t E S S a m p l e s Q l l P r o l i & r a t i o n ( % ) T r e a t e d o f N o n - t r e a t t d o f L p o w l y s x c h a r 버 e l j p o p o J y s a k i 1 a r i d e @ n t r o l l % O ± 1 8 7 1 5 ± 3 l S I T 8 8 6 ± 2 l * 6 6 7 ± 1 4 * S l T ( 5 0 0 m g 뺑 ) w a s 썩 m i t i s t e 빼 p o o n c e a d a y & r 7 d a y s, a n d r h e s e p a r a t e d s p k n o c y t t S ( 1 2 x l O 6 c e l l s / I n l ) w e r e c u l t u r - e d f o r 4 8 h 띠 R P M I 1 6 4 0 m e d i a m i x e d w i t h a n a n i v a t i n g I I l i t o g e n o f l i p o p o l y s x r h a r i d e - T h e d a t a r e p r e s e n t s t h e m e a n 土 S E o f 5 I n k e * ; S i R 띠 6 c a I n l y d i R b r e n t 6 i o m c m l t r o l g r o u p ( p 0 0 5 ) 2 S T 가뼈線細힌및牌廳細뼈힌의 s u b p p u l d i o r 1 에미지는훨果 대조군의흉선세포중 m 4 s i n g l e w s i t i v t j C D 4 + ) 세 또는 l 2 2 ± 0 4 % 이었으며, m 8 s i n g l e p o s i t 뼈 C D 8 + ) 네포는 3 1 ± 0 2 % 이었다 S I T 를투여하고분리한생 쥐흉선세포의 C D 4 + 세포는 l 3 2 土 I l % 로對照群과 결차이가없었으나, m 8 + 세포는 4 3 ± 0 3 % 로對照 洋에비해증가하였다 { T a b l e I I I ) T a t j e E n g j d S T m t 엄 S t n n X J 녕 t l g 1 여 r T U n r e S a m p l e s C o n t r o l S l T t r v r T g y t e s C e l l S u b p o p u l a t i o n ( % ) C D 4 + C D 8 + l 2 2 ± 0 4 l 3 2 ± 1 l 3 1 ± 0 2 4 3 ± 0 3 * S l T ( 5 0 0 m g k g ) w a s a d m i r u s t e r e d P O o n c e a d a y h 7 d a y s, a n d t h e s e p a r a t a l t h y m K y t e s w e r e s t a m e d w i t h P E - c o n, L I g a t e d a n t l - C D 4 a n d F I T C O n j u g a t e d a n t i - C D 8 m o n k l o n a l a n n b o d y 6 b r 3 O I I 1 u n i t e s a t 4 T h e s u b p o p u l a t i o n w a s d e t e r m l I l e d w l t h a n o w c y r o m e t e r - T h e d a t a r e p r e s e n t s t h e m e a n ± S E o f 5 m i c e * ; S i g n 파 c a I n l y d i R K r e n t f r o m c o n t r o l g r o u p ( p 0 0 5 ) 대조군의비장세포중 B 2 2 0 @ s k i v e 세포 ( B 2 2 0 + ) 는 i 8 4 ± 2 7 9 6 이었으며, 1 1 1 y l p o s i t i v e 세포 ( T h y I + ) 는 1 3 ± 2 4 % 이었다 S I T 를투여하고분리한생쥐비 상세포중 B 2 2 0 + 세포는 3 7 7 ± 2 9 % 로 T h y 1 + 세포는 2 7 ± l 5 % 로대조군에비해별차이가없었다 비장 겨 T 임파구중대조군의 C D 4 + 세포는 1 3 3 土 l 2 %, ] 8 + 세포는 3 4 ± 0 2 % 이었으나, S I T 를투여하고분 끽한생쥐비장의 T 엄파구중 C D 4 + 세포는 l 6 6 土 l l % 로대조군에비해증가하였으며, m 8 + 세 포는 4 3 ± 0 3 % 로대조군과별차이가없었다 { T a b l e I V, F l g l ) T a 미 e V E H e c t o f S T o n t h e s u b m p u a t 0 n o f m u n n e s p e n α M e s S a m p l e s C o n t r o l C e l l S 띠 b p o p u l a t i o n ( % ) B 2 2 0 + T h y l + C D 4 + 3 8 4 土 2 7 2 Y 3 土 2 4 1 3 3 土 1 2 C D 8 + 3 4± 0 2 S I T 3 1 7 土 2 9 2 2 7 : t 1 5 I 6 6 土 1 1 * 4 3 ± 0 3 S I T ( 5 o α n e k e ) w a s a d m i n i s t e m d p α o n c f a d a y t 야 7 d a y s, a n d t h e s e p a r a t e d s p d t n K y t e s w e r e s t a i n e d w i t h P E - c m i l l g a r e d a n t i - B 2 2 0 및 F I T Q o n l u g a 1 c d a r m - 1 1 1 y I m o n o c l o n a l a n t l 뼈 y 아 P E - c m i l l g a I e d a n t i - C D 4 a n d F I T - c o n l l i g a t e d a n t i - C D 8 m o n k l b n a l a n t i b o d y f b r 3 O m i n u t e s a t 4 T h e s u b p o P u l a t l O n w a s d e R r m l n c d W l t h a n o w q t O I I r t e r T h e d a t a π p r e s e n t s t h e m e a n ± S E o f 5 r r u c e * ; S l R I l i f l c a n d y d i H e r e n t f r o m c o n t r o l g m u p ( p 0 0 5 ), j j 세t ( A ) L y m p h c y t t * c n l I u l ( U ) T h y m o c y t e s S l T 1 l : 지 l t l - -0 : F 짧센 편픽했닮 i ( C ) S p l m o c y t e s F l g 1 C y t o f u o r o m e t i c p a t t e r n o f l y m p h o q t e s s u b m p u a t i o n n S T - a d m n S t e r e d m l c e 3 S l T O 뼈線細뼈및 8뿔鷹細 R헌의 C y t o k i n e s 分泌에미 I 는했果 대조군의흉선세포중 X - i n t e r f e r o n 및 i n t e r l e u k i n - 2-1 0 6 -
- 유 & 밸외 1 : 少함 A J t 뼈훌월 옳의 I i 뼈 1 1 作用 -, I 의 양은 각각 6 9 5 土 4 5 및 3 1 3 4 土 6 8 P 밍 m J 이었으나 S T 를투여한군은 1 2 6 6 : t 7 2 및 3 4 6 0 : t 5 9 p g / m J 로 대조군에 비해증가하였다 I n t e r l e u k i n - 4 의 양은 대조 군에서 2 9 7 6 : t 6 3 P 밍 m J 이었으며 S T 을투여한군 은 2 9 7 0 土 9 5 p g / m J 로 대조군과 별 차이가 없었다 ( T a b l e 씨 대조군의 비장세포중 -inre, I, 대조군의 혈청중 -interferon 및 i n t e r l e u k i n - 2 의 양은 4 0 3 : 1 : 4 3 및 4 5 6 土 2 8 P밍빼이었으나 S T 를투 여한군은 7 5 4 : t 5 1 및 6 8 1 土 4 8 p, 밍때로대조군에비 해 증가하였다 I n t e r I e u k i n - 4 의 양은 대조군에서 6 5 2 : t 5 1 p, 밍 m J 이었으며 SIT 을 투여한 군은 5 8 5 : t 5 3 p g / m J 로 대조군과 별차이가 없었다 { T a b l e V I I ) 의양은각각 4 4 2 8 土 1 2 2, 3 5 4 3 土 1 0 8 p g / m J 이었으나 S I T 를투여한군은 5 1 1 8 土 9 7, 5 4 8 5 土 1 2 5 P i밍 m J 로대조군에비해모두증가하였다 I n c e r I e u k i n - 4 의양은대조군에서 1 9 1 1 土 8 7 p g / 찌이었으며, S I T 올투여한군은 2 0 1 5 土 I O J p g / m J 로대조군과별차이가없었다 ( T a b l e V I ) T 뼈 e V I I E f f e c t o f S I T o n t h e p r 여, u c U o n o f c y t o k i n 않 m m i c e s e r u m S a m p l e s P r o d u c e i o n o f C y t o k i n e ( p g / m I ) ' i - I n t e r f e r o n I n r e r l e u k i n - 2 I n t e r l e u k i n - 4 C o n c r o l 4 0 3 t 4 3 4 5 6 t 2 8 6 5 2 t 5 1 S I T 7 5 4 야 1 * * 6 8 U 4 8 * 5 8 5 : 1 : 5 3 T 빼 e V E f f e c t 이 S I T o n t h e p r o d u c t i o n o f c y t 때 n e s I n m u r i n e t h y m e α t e s S a m p l e s P råì u c t i o n o f C y t o k i n e ( P Ç m! ) ' i - I n r e r f e r o n I n r e r l e u k i n - 2 I n r e r l e u k i n - 4 C o n r r o l 6 9 5 t 4 3 1 3 4 t 6 8 2 9 7 6 :! : 6 3 S a m p l e s S I T 1 2 6 6 t 7 2 * * 3 4 6 0 t 5 9 * 2 9 7 0 t 9 5 S I T ( 5 0 0 m g / 뼈 ) w a s 찌찌 n 1 $ [ c r c 녕 p o o n c e a d a y f o r 7 d a y s, a n d t h e s e p a r a r e d r h y m o c y r e s ( 2 x 1 0 ' c d l s / m l ) w e r e c u l r u π d f o r 7 2 h i n R P M I l 6 4 0 m e d i a T h e s e c r e t i o n o f c y r o k i n e s w a s d e t e r m i n e d i n s u p e r n a t a n t s o f c u l r u r e s w i t h E U S A k i 끼 1 e d a t a π p r e s e n t s t h e m e a n :! : S E o f 5 m i c e o s 방 U f i c a n d y 에 f f e r e n t ) 1 t 1 c o n r r o l g r o u p ( * p < 0 0 5, * * ; P r o d u c t i o n 이 C y r o k i n e ( p g / m l ) ' i - I n r e r f e r o n I n r e r l e u k i n - 2 I n r e r l e u k i n - 4 GÇt u r o l 4 4 2 8 t 1 2 2 3 5 4 3 t J O 8 1 9 1 U 8 7 p < O ( X H ) T a 미 e 씨 E f f e c t o f S I T o n t h e p r, 여 u c b o n 이이 t o k i n e s i n m u r i n e s p l e n y t e s S I T 5 1 1 8 t 9 7 * 5 4 8 5 t I 2 5 * * 2 0 1 5 :! : 1 0 3 잉 T ( 5 0 0 m g / k g ) w a s a d m i n i s t e r e d p o o n c e a d a y f o r 7 d a y s, a n d t h e s e p a r a t e d s p l e n o c y t e s ( 2 x 1 0 ' : e l l s / m l ) w e r e c u l r u r e d f o r 7 2 h i n R P M l I 6 4 0 m e d i a 까 1 e s e c r e t i o n o f c y r o k i n e s w a s d e t e n n i n e d i n s u p e r n a t a n r s o f c u l r u r e s w i t h E U S A k i t T h e d a t a π p r e s e n t s t h e m e a n :! : S E o f 5 m i c e * S i g n U I C a n d y ω f f e r e n r & o m c o n r 빼 g r o q > ( * ; p < O O χ * * ; p < O O I ) S I T ( 5 0 0 m g / k g ) w a s aψ n i n i s t e r e d p o o n c e a d a y f o r 7 d a y s, a n d t h e p r o d 띠 c t i o n o f α r 피 n e s w a s d e t e r m i n e d i n 양 P 없 t 떠 s e r u m w i r h E U S A k i r T h e d a r a r e p r e s e n t s t h e m e a n t S E o f 5 m i c e * S 밍 n i f i α n t l y d i f f e π n r f r o m c o n r r o l g r o u p ( * ; p < 0 0 5, * * ; p < O O I ) 5 S I T 가뼈뺨大食細뼈로루터 n i r i c o x i d e 의 生成애 미지는훨果 대조군의대식세포에 L P S 와 - I F N 올처리하지않 았올때 n i t r i c o x i d e ( N O ) 생성양은 2 4 시간후에 1 2 : t 0 1 ) 1 M 이었으며, L P S 와 - I F N 을처리하연 N O 생성양은 1 2 5 土 0 3 ) 1 M 로증가하였다 S I T 를투여하고 분리한대식세포에 L P s 와 - I F N 을처리하였을때 N O 생성양은 7 5 : t o 씨 M 로대조군에비해감소하였 다 { T a b l e V I I I ) T a b l e 에 I 까 ' I e p r, 여떠 i o n o f n i t r i c o x i d e f r o m p e r i t o n e a l m a α 이 l a Q e S i n S I T - a d m i n i s t e r e d m i S a m p l e s N i r r i c o x i d c ( 1 I M ) C o n r r o l 1 2 1 :! : 0 1 S I T 7 5 t O 3 * S I T ( 5 o o m g / k g ) w a s a d m i n i s t e r e d p o o n c e a d a y f o r 7 d a y s, a n d t h e n 3 % t h i o 밍 y c o l l a r e w a s i n j e c t e d i p a r t h e 4 t h d a y P e r i r o n e a l m a c r o p h a g e s o b t a i n e d a f t e r 2 h r s a d h e π n e e p e n 여 w e π c u l r u r e d i n R P M l 1 6 4 0 m e d i a i n t h e p r e s e n c e l J ' S a n d ' i - i n t e r f e r o n * ; S i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t f r o m c o n t r o l g r o u p ( p < O o o l ) 4 S I T 가血淸中 C y t o k i n e s 의分뼈에미지는 훨果 - 1 0 7
- c 그 - 사상체짙의학회지제 1 3 권저 l 3 호 a m 1-6 S T 가題圖大食細뼈의훌食能에미지는했果 G 1 e m i l l l m i n e s c e n c d α ) 은탐식작용이진행되는동 안생성되는 o x y g e n r a d i c a l 에의해발생되며, l u c i g e n i n 에의해증가되는것으로알려져있다뼈 대조군의 대식세포로부터생성되는 Q 의양보다 S I T 를투여 하고분리한대식세포에서생성되는 α 양이현저 히증가하였다 F i g 2 ) 또한 F I T C c m i l l 맹 t e d E 싸 p a r t i c l e s 의탐식도현저히증가됨을관찰할수있었 다 { F l g 3 ) 이는 S I T 가대식세포의탐식능을중가시키고있음을시사하는것이다 A g o o 흔띈표 m c g a g - E 그= E u w m % m M N M M m 1 o 1 6 g o 1 l m ( m l n J 2 s 3 Q 3 s F l g 2 E f f e c t o f S T o n u α g e r m C h e r n l u m l n e $ e n c e n m u n n e p e n t o n e a r n a α o p h a g e s - S T ( g m m g j k g ) w a s a d m i n i s t e r 때 P O o n c e a d a y f o r 7 d a y s, a n d t h e n 3 % t h i o g y c o! a t e w a s n j e c t e d i p a t 4 t h d a y P e r i t o n e a r r g c r o p h a g e s ( 2 x 1 f 의 m e ) 때 t a m e d a f t e r 2 h a d h e r e n c e p e r k 잉 w e r e c u n u r 때 n D M E m e d l a ( M h p h e 이 r e d ) n t a l n l n g o p s o n g e d 긴 m O S a n - T h e C h e r n u m i n e s n c e w a s m e a s u r e d a t 5 m i n i n t e r v a s f o r 3 O m m @ h e r p r α : e d u r e s w e r e $ $ 매 e d a s d e t a e d n t h e n 딩 t e n a s a 때 m e t h o d s e c t i o n E a c h P 이 n t r e p r e s e n t s t h e r T e a r 1 ± S E o f 5 m i c e * ; S Q n l f l r a n t v d f f e r e n t f α n n t m l Q r o m p 0 m 1 ) F l g 3 P h o t o m C r o g r a p h s o f e n g l u m e n t o f f M o r e s c e l n c o n j 때 a t e d E k p a r m e s n p e n t o n e a r r g c r o p h a g e s o b t a i n e d f r o m S T - a d r n n S t e r e d m C e l n v e n e d f U o r o m c n g p e p h o t o n 1 C r o g r a p h s ( 2 m x ) s h o w l n g U p t a k e o f f u o r e s c e n 미 U g a t e d E c o l l p a r t C e S n n t r o ( A ), a n d p e n t o n e a n B C O p h a g e s o b t a i n e d f r o m S T - a d m n l S t e r e d m C e ( 테 V 考察 사상의학에서는질병을 j 빼 i 뿜과 i 쁘 i 펌으로분류하 여기폰의짧팎짧맹과시각의차이를보이고있는데, r Q 강댔 ; 倫 J 에서는 g j 氣의 f 냥人정도에따라 l 띠평 을나누고있지만, 사상의학에서는 π- 氣의 } a f 상정도 에따라病의짧深과 l 떠벙을판단하고있다 7 ) 이 I F 氣는保命之 - l E 라고표현되고있으며, 질병의치료에 있어서이保命之 5 의보호에모든치료의초점을 맞추고있는것을볼수있다 少陰 A은전체적으로 I { l 心했力이아래에있어陰 化되기쉬우므로陽않之氣가保命之 l, 라는것을바 탕으로升降擺念을운용한다 즉, 衣病펌에있어서 뽑太牌小한職 R 府的특정으로牌씨의 P 易氣가갱 5 쐐에 억플린바가되어, 뽑꾀의陽氣가그핑 * l i 의저항을 l O 8
- 유 g 밸외 1 少홈 A 升뼈훌 u 의免훌 m! l 1 I I - 받아不能直升하여牌局에速接하지못하여나타나 는뽕狂證파 t 陽證모두상숭하지못하는陽氣를 어떻게상숭시키느냐에따라, 다시말하면陰化된 기운올어떻게陽化시키느냐에주안점을두고기본 방향이정해진다 그래서짧狂證의無 f f 은陽氣힘存 한데營衛陰陽만의 되나亡陽證의有 f f 不和한때문이니調和營衛하면 은陽氣不足으로인한律被外脫 이므로治本하기위하여陽氣上升올목표로升陽益氣法올구사한다 2 ) 亡陽證올기폰한의학에서는과다한퓨버로인한 精 - 氣와律滅의外脫현상으로보았다 亡陽證의병 리인식에있어서 퓨多亡陽 으로표현하였고 3 8 \ f f 出 不止나 I 바뼈過極둥의원인으로인하여陽氣가돌 연홍종 i 용하면大 f f 이 # * 1 짧하고없寒, 手足冷, 呼吸微 꿇, 面色훨白,! I I i 微欲絡둥의중상이나타난다 3 9 ) 이 에대하여李濟馬는陰陽의정상적인升降運動失 짧로인한律波의外脫, 즉陽이上升하지못하고도리어下降하는것으로인식하였다 4 0 ) 소음인의표병에서 t 陽證이뽕狂證과다른점은 퓨出이있다는것인데, 땀이계속하여많이나오연 이것은陽이虛脫상태로빠진것을의미하는바, 뽕 狂證보다는亡陽證이훨씬陽앓之氣, 손상이심한것으로규정하고있다 3 7 ) 즉保命之主의 이러한亡陽證의치료에있어서初證에는桂技漫 에固表止퓨의효능올가진黃홉를가미한黃홉桂校없을사용하고, 中證에는升陽益氣시켜陽氣의虛 脫을방지하는의미로升陽益氣陽, 補中益氣揚 퉁올 사용하며, 末證에는附子와肉桂를사용하여牌氣가 總하는것을방지한다, 3 ) 升陽益氣陽은 r 東醫꿇 f t I : 保元 에처음으로收錄된이래여러文敵에기재되었으며 2 4, 2 j, 4 i 4 3 ), 少陽人 뽑受熱表熱病의亡陽初中證올치료할목적으로 4 ) 만들어진處方이다 朱는升陽益氣楊을補中益氣陽 4 ) 에서비롯된처방으로보았으며, 또한金 과朱는 方뼈구성상桂技없과補中益氣陽의方意가복합된처방으로보았다 이러한升陽益氣揚은止퓨固表 升 2 4 ) 陽하는효능이있으며, 主샘證으로元은傷寒陽明 病 t 陽, 短氣, 失血뾰짧, 小兒짧없둥에, 2 ) 朴은 g n, 없 I T 과小兒의毛髮과뼈牙發生에웅용하였다 r 3 8 ) J 陽寒論 에서桂校揚은太陽病 4 훌園證올主 펌하며頭痛, 發熱, 퓨出, 앞 ; 風, 服 f }! 數둥올목표로 하고있고, 그작용은滋陰和陽하여調和쩔衛하고解 J J J L 發 f f 하는데있다 2 3 ) 連系方으로金 少陰 A 新定處方中桂 技傷 3 ) 은川쯤桂技楊, 黃 桂校揚, 升陽益 氣 1, 升陽益氣附子陽, 黃 t t 技附子楊, J \ 홍종桂校附子陽, J \ 훌官桂附子짧둥올열거했다 補中益氣楊은李東혈에의해創方된처방으로四 股無力, 優침걷力, 앓옳, 少氣懶님, 自 f f, 해急, 좀淡 n 품白, ) j J j ( 虛無力한中氣下 P 섭證과해 A 의月經週期 短縮이나過多月經, 皮下버血이나타나는牌不統血證, 또는氣虛發熱證둥에응용된다 7 8 ) r 東짧훌世保元 의少陰 A 補中益氣 1 易은亡陽證 의初中證에升陽益氣 1 과함께적용되는처방으 2 ) 로 임상에서일반雜病질환에도폭넓게웅용되고있다껴, 2 ), 4 2 4 4 ) 이상에서본桂技陽과補中益氣없의方意가복합 된처방개념으로볼때升陽益氣陽은俠義의 t 陽 證개념에서더나아가일반雜病에도널리應用될수있을것으로생각된다 少陰 A 은陽虛하기쉬우므로이로인한機能훌退 와外 % 에대한짧抗力減退는免훌機能低下의상 태로나타날수있다 ) 훌후훌훌學에서免훨에대한개념은 素問刺法 ) 論 4 J 에 正氣存內 뻐不可주 ", r f 빔 上古天훨 論 4 J ) 의 훨氣從之 精神內守 病安從來 " r, 素 f 암 1 平熱病論 4 J ) 에 % 之所鍵其氣必虛 라고하여질병 의성립과정중正氣가왕성하면뻐氣가침입하지못하고正氣가허약하면 % 氣가침입하여발병한다 고하였고 r, 4 ) J 素問擔論 에서는 衛氣 Z 所在與 3 氣相슴而病發 이라하여衛氣를外 % 에대해짧 抗하는혔로인식한데서드러난다 여기에서正氣 와衛氣는생명활동의원동력으로서생체방어기구 의역할을담당하는 며, $ 기본적인물질이라볼수있으 氣는인체의내외환경에존재하는각종發病, ;,, 벼 f 를총칭한것으로六앓 없食 勞健 七情둥을 의미한다고볼수있다 % 쟁 ) 免훨이란생체가自己와非답 E 를식별, 非自己 를제거함으로써자신올보호하는것을의미하는 것으로, 면역세포가항원에특이한반웅을나타내어 內因性및外因性이물질 ( 항원 ) 에대한감시와방어 를통하여개체의현常性을유지하는현상올말한 다 4 9 - ) 1 ) 이러한연역반웅은 T 및 B 임파구가관련된 - 1 0 9 -
- 사상혜짚의억회지셰 1 3 검제 3 효 2 X J 1 - 特異的免훨反廳과대식세포가관련된非特異的免 훌反應으로대별되는데, 특이적연역반용은세포성 연역반용과체액성연역반웅으로구분되고, 비특이적연역반웅은영중반용과탑식작용으로구분된다 세포성연역반용은 T 임파구에의해이루어지는것 으로세포가행동인자로작용하여개체를보호하는 연역올말하며, 체액성연역반용은 T 임와구의도 움올받아 B 임파구에의해생산된항체에의해이루어지고, 세포보다는혈청내에존재하여항원과결 합하여대식세포에의해탑식되게하거나補體에 의해용해되기쉽게만드는것으로항체가行動困子로작용하여생체를보호하는연역올말한다 4 9 2 ) 본실험에서升陽益氣꿇 S I 1 ) 올투여하였올때흉 선세포의세포생폰용은대조군에비해증가되었으 나, 비장세포의세포생존율은감소되었다 이는 S I T 가특이적연역반웅중細 R 힘性免훨能을증강시킬 있음올시사하는것이다 흉선세포는흉선의皮質및顧質에서중식및분 화과정을거쳐 h e l p e r T 임파구 ( r h ) 및 c y t o t o 찌 c T 임파구 ( T c ) 로분화되며, 분화된 T h 1 c e l l은 ' i - i n t e r f e r o n ( π N ) 및 i n t e r l e u k i n - 2 ( D - 2 ) 를, π 1 2 c e l l 은 1 1-4, 1 1-5, ' i - I L - 6 및 1 1-1 0 둥의 c y t O k i n e 을분비하여다른 T 세포, B 세포및대식세포의증식과분화를촉진하며, c y t o t o x i c T c e l l 은 t w n o r c e l l 의용해를일으키며대식 세포를활성화시킨다 대조군의흉선세포중 π1 ( C D 4 s i n g l e p o s i t i v e c e l l ) 세포는 1 2 2 %, T c ( C D S s i n g l e p o s i t i v e c e l l ) 세포는 3 1 % 로정상생쥐흉선에서 α 4 + C D S ' c e l l s 은약 1 2 %, C D 4 ' C D S + c e l l s 은약 3 % 로보고된내용과비슷 한결과를나타내었으며, ) S I T 투여시흉선세포의 T c 세포 p o p u l a t i o n 이중가되었으나, 까 1 세포는변화 되지않았다 비장세포의 T 및 B 임파구의비율은 변화되지않았으나, 비장의 T 임파구중 T h 세포 p o p u l a t i o n 은대조군에비해증가하였다 이는 S I T 가 흉선세포에서는 T c 세포를비장세포에서는 T h 세포 를활성화하여연역반웅을중강시킬수있음올시사하는것이다 S I T 투여시흉선세포배양액에 T h 1 세포에서분 비되는 ' i - I F N 및 I L - 2 는증가하였으나, π 1 2 세포에 서분비되는 ι4 는변화가없었다 또한비장세포 배양액에서도 ' i - I F N 및 D - 2 는증가하였으나, 1 1-4 는 수 변화가없었다 혈청중의 ' i - I F N 및 D - 2 는증가하였 으나, D - 4 는변화가없었다 이결파는 S I T 가 T h 1 세 포를활성화하여 c y t o k i n e s 의분비를촉진함으로써 免훌能올증강시킬수있음올시사하는것이다 N i t r i c o x i d e ( N O ) 는 T 임와구가생성하는 c y t o k i n e 을 조절하며, i n v i v o 에서 T 임파구의생명을조절하는 인자중하나로알려져있다 ) 또한 N O 는 h e p e r T c e l l 의중식올억제하며 Q 자기연역계를억제하는 것으로보고 7 ) 되었다 본실험에서 S I T 투여시대조 군에비해 N O 생성이감소하였다 외부로부터이물질이첨입하게되면생체는자기 방어를위해대식세포가활성화되어 탑식작용이촉 진된다이러한탑식작용은 p o l y m o 빼 n 띠 e a r l e u k o c y t e s 에서도일어난다탑식작용은연역적인측면에서중 요하지만, 상처치유과정에서도매우중요하다본실 험에서대식세포의탑식능올측정하는데 c h e n i J w n i n e s c e n c e 를측정하는방법올이용하였다 이방법의원리는 대식세포가 p a r t i c l e 을탑식하는동안 o x y g e n r a d i c a l 을 생성하는데, 이때생성된 o x y g e n r a d i c a l 과 l u c i g e n i n 이 반웅하여 l u c i g e n i n c I 1 e m i l w n i n e s c e n c e 를발생하는것올 측정함으로써 탑식능이진행되는것올확인하는것 이다 뼈대식세포로부터생성되는 c h e 뼈 w n i n e s c e n c e ( a ) 를측정한결과 S I T 투여에의해 Q 양이현저히 중가하였다 또한 F 1 T C - c o n j u g a t e d E c o l i p a r t i c l e s 의탑 식작용도현저히중가됩올관찰할수있었다 N O 는 활성화된대식세포의 p s e u d o 때 i a 형성을억제하는 것으로알려져있다 9 ) 본실험에서 S I T 가 N O 생성 올억제하고탐식능올중가시켰다는결과는 S I T 가 대식세포의탑식능올증가시키는데 N O 가일부관 여하고있음올시사하는것이다 이는 S I T 가非特異的免훨反應도증강시킬수있음올시사하는것이다 이상의실험결과升陽益氣없은 T h 1 세포를활성 화하여 c y t o k i n e s 의분비를촉진합과동시에대식세 포의탑식작용올촉진하여免흉能올증강시키는작용이있는약물이라사료된다 v 結뚫 少陰 A 升陽益氣 1 쩌 S I 1 ) 올투여하여면역세포인 흉선세포, 비장세포및대식세포에대한작용올관 1 1 0 -
- 유 & 밸외 1 : 少 P t A 升톰훌훌遍의 S I t 훌해 I I 作 I I! - 찰한結果는다음과같다 1 뼈線細뼈의細 8 힘生存率은증가하였으나, 牌嚴細 8 밍의細 8 셉生存率은감소하였다 2 흉선세포중 T c 세포의비율이, 비장세포중 T h 세포의비융이중가하였다 3 흉선세포중 1 { - I F N 및 I L - 2 의양은중가하였으나, ι - 4 의양은변화하지않았다 4 비장세포중앙 I F N 및 I L - 2 의양은증가하였으나, I L - 4 의양은변화하지않았다 5 혈청중앙 I F N 및 I L - 2 의양은증가하였으나, I L - 4 의 양은 변화하지 않았다 6 복강대식세포로부터 n i t r i c o x i d e 의 생성올 억제하 였다 7 복강대식세포의탑식능이중가하였다 이상의실험결과少陰 A 升陽益氣없은 T h 1 세포 로부터 c y t o k i n e 의분비를촉진하여특이적연역반용을, 대식세포의탑식작용을촉진하여비특이적연역 반웅올증강시킬수있는처방이라사료된다 1 - f - 옳慶 매 훌考文廠 r 東짧꿇世保元 太少陰陽 A 의 病證 論 에관한 i f f 究, 四흉협學會짧 1 9 9 9 ; 1 1 ( 2 ) : 1 9 2 전국한의과대학사상의학교실 : 四象짧學, 서울, 集文호, 1 9 9 7 ; 1 4 8-1 6 8, 4 6 0-4 6 1 3 金正熙 : 少陰人病證및處方에나타난桂技陽 의 % 흉用에대한考察, 四象醫學뺨섭, 1 9 9 9 1 1 ( 1 ) : 2 0 7 4 朱웰天 : 少陰 A 뽑受熱表熱病論의病證및藥 理에대한맑究, 四象짧學會誌, 1 9 9 7 ; 9 ( 2 ) : 7 2-9 0 5 金鎭 t : 少陰 A j \ 物君子揚과升陽益氣앓이 H y d r o c o r t i s o n e A c e t a t e 로훌흉發된陽虛證에미치는 깜驗的 i f f 究, 大韓韓醫學會誌, 1 9 8 8 ; 9 ( 1 ) : 4 2-6 1 6 帳寧根 : 少陰 A 十全大補 없과局方十全大뼈써 이陽虛病證에미치는影響, 四象隱學會誌, 1 9 9 5 ; 7 ( 1 ) : 2 8 1-2 9 3 7 金完熙 崔達永 : 屬服輔證論治, 서울, 成輔社, 1 9 8 5 ; 5 5-5 6 8 李常仁 天헐處方解說, 서울, 成輔社, 1 9 8 7 ; 3 6-3 8, 4 5-4 7, 1 0 2 9 수震相 : 少陰 A 升陽益氣附子揚과官桂附子理中陽이陽虛證에미치는影響에관한훌驗的쩍究, 四象뿔學會홉, 1 9 8 9 ; 1 ( 1 ) : 8 7-1 1 2 1 0 李泰원 : 陽虛證홉發에의한補中益氣짧및六 味地黃楊의效果, 경희대학교대학원, 1 9 8 6 1 1 安光파 : 少陰인補中益氣陽과後世方補中益氣 없 - 이陽虛病證에미치는影響, 경희대학교대학 원, 1 9 9 5 1 2 孫昌園 : 少陰 A 香妙養몹陽이 H y d r o c o r t i s o n e A c e t a t e 로짧發된陽虛證에미치는影쩔에대한 첼驗的 i f f 究, 경희대학교대학원, 1 9 9 0 1 3 張賢鎭 : 少陽人쩨防地黃없, 十二味地黃淑과少 陰 A 補 中益氣揚, 十全大補 앓의免훌反總에관 한헬驗的 i f f 究, 경희대학교대학원, 1 9 9 4 1 4 金正慮 ; 補中益氣없 i, 人흉및黃 i t 樂鐵이免훨機能 m ; - f 에미치는影響, 경희대학교대학원, 1 9 9 9 1 5 洪律황 : 補中益氣없과香 y 六君子陽의힘用投 與가 5-1 8 0 題水癡細뼈를接種한생쥐의細뼈性 免훨에미치는影響, 동국대학교대학원, 1 9 9 4 1 6 韓없圭 : 補中益氣揚, 手뼈散및뼈 이益氣傷合 手짜散의抗혐과免흉調 [ 6 f F 用에관한깜驗的 앙 f 究, 경회대학교대학원, 1 9 9 5 1 7 閔勇泰補中益氣陽의投與가쌓外線照 射로 따下된마우스의免흉機能의俠復에미치는影 쩔, 원광대학교대학원, 1 9 9 1 1 8 金펄勳 : 四겸子傷, 四物揚및 A 物陽이 P r e d n i s o l o n e 으로設發된생쥐의免훨反應低下에 미치는影響, 경희대학교대학원, 1 9 8 7 1 9 崔允뼈 : 四쉰子泌및四物陽이 M e t h o t r e x a t e 로 i 흉導된흰쥐의免훌機能低 F 에미치는影繹 동국대학교대학원, 1 9 9 7 2 0 孫宰織 : j \ 物해이생쥐 M f 振末期에免훨細 8 밍 의 C y t o k i n e s 生成에미치는影響, 대전대학교대 학원, 2 0 0 0 2 1 金在燮 : 十소太補陽前 1 易액기스가생쥐의細뼈 # 및體 % 훗 t! = 免授 N 應에미치는影짧, 원광대 학교대학원, 1 9 8 4 2 2 黃앞 淵 : 十全大補陽 1 J Q 麗흉이마우스의免훨反 應에미치는影웰, 원광대학교대학원, 1 9 8 8 I I I
- 사상셰질의학회지쩌 1 3 권제 3 호 : m 1-2 3 蔡 t 뻐 : 傷寒論譯홉, 서울, 高文社, 1 9 9 1 ; 2 7 9 2 4 元持힘, 束醫四흉新編, 서울, 풍슴혈훌짧社, 1 9 7 4 ; 2 2, 3 4, 3 6, 5 4, 6 1 2 5 朴奭彦 : 東짧四象大典, 서울, 醫道韓國社 :, 1 9 7 7 ; 4 3 6, 6 0 5 2 6 李濟馬 : 東醫꿇世保元, 四象뽑學會 f l j, 서울, 大 星文化社, 1 9 7 9 2 7 w y s o c k i, L J 때 d S a t O, V L : P l a n n i n g f o r l y m p h o c y t e s : A m e t h o d f o r c e l l s e l e c t i o n P r o c N a i l A c a d S r i U S A, 1 9 7 8 ; 7 5 : 2 8 4 4 2 8 M a e l, S B, 0 야 n h e i m, J J a n d R o s e n s t e i c h, D L C h a r a c t e r i z a t i o n o f l y m p h o c y t e - a c t i v a t i n g f a c r o r ( L A F ) p r o d u c e d b y t h e m a c r o p h a g e c e l l l i n e P 3 8 8 D 1 J 1 m m ι 1 1 0 1, 1 9 7 9 ; 1 2 0 : 1 4 9 7 2 9 M o s m a n n, T : R a p i d c o l o r i m e t r i c a s s a y f o r c e l l u l a r g r o W t h a n d s u r v i v a l : a p p l i c a t i o n t o p r o l i f e r a t i o n 뻐 d c y t o t O X I C 없 a y s J 1 1 T l f T l / J 1 I O I t l x 찌, 1 9 8 3 ; 6 5 : 5 5 3 0 K o t n i c, V a n d F l e i s c h m a n n, W R J r : A s i m p l e a n d r a p i d m e t h o d t o d e r e r m i n e h e m a t O p o i e t i c g r o W t h f a c t o r a c t i v i t y J 1 1 T l f T l / J 1 I o l t l x 찌, 1 9 9 0 ; 1 2 9 : 2 3 3 1 S u d a, T a n d N a g a t a, S : P u r i f i c a t i o n 삐 d c h a r a c t e r i z a t i o n o f t h e F a s - l i g a n d t h a t i n d u c e s a p o p t o s 잉 J E 째 M 찌, 1 9 9 4 ; 1 7 9 : 8 7 3 3 2 R o c k e t t, K A, A w b 따 n, M M, C o w d e n, W B a n d G 앙 k, l A : K i l l i n g o f P l a s m 여 i u m f a c i p a r u r n i n v i t r o b y n i t r i c o x i d e d e r i v a t i v e s 1 n f «1 1 T l f T l / J 뼈, 1 9 9 1 ; 5 9 ( 9 ) : 3 2 8 0 3 3 B o u d a r d, F, V a l l o t, N, C 때 a n e r, C a n d B a s t i d e, M : C h e m i J u m i n e n s c e n c e a n d n i t r i t e d e t e r m i n a t i o n s b y t h e M A L U m a c r o p h a g e c e l l l i n e J 1 1 T l f T l / J n o l M t m 찌, 1 9 9 4 ; 1 7 4 ; 2 5 9 3 4 B l a i r, A L, C r e e, l A, B e c k, J S a n d H a t i n g, M J G : M e a s u r e m e n r o f p h a g o c y t e c h e m i J u m i n e n s c e n c e i n a m i c r o t i t e r p l a t e f o r m a t J 1 1 T l f T l / J n o l M t l x 찌, 1 9 8 8 ; 1 1 2 : 1 6 3 3 5 C h o k, P W, C h n, S P a n d B e n j 없피 n, H S : A r a p i d a n d s i m p l e m i c r o f l u o r o m e r r i c p h a g o c y t o s i s a s s a y J 1 1 T l f T l / J 1 I O M t l x 찌, 1 9 9 3 ; 1 6 2 : 1 3 6 B r e i h e i m, G, S t e n d 야나, O a n d D a h l g r e n, C : I n t r a - a n d e x r r a c e l l u l a r e v e v r s i n l u m i n o l 녕 e p e n d e n r c h e m i J u l i n e s c e n c e o f p 이 y m o r p h o n u d e a r l e u k o c y t e s I n f e a 1 1 T l f T l / J n, 1 9 8 4 ; 4 5 : 1 3 7 金一煥 : 少陰 / \ 補中益氣없과補中益氣陽에대 한四흉뽑學的比較昭究, 四象隱學會誌, 1 9 9 6 ; 8 ( 2 ) : 7 4 3 8 張件景 : { I 뿌景全별, 서울, 大星文化社, 1 9 9 3 ; 1 9 7 3 9 文짧典좋編 : 東짧홉理뺑서울, 흡文社 1 m ; 1 2 9 4 0 金龍國 : 亡陽 t 陰證에대한證냥 ; 隱學과四豪짧 [ 행 과의比較考察, 四象뽑웰會誌 1 9 9 1 ; ( 3 ) 1 : 7 9-8 0 4 1 朴寅商 東짧띤象要짧서울, 쫓표文 { I j 社 1 9 7 5 ; 7-8 4 2 李 ζ 뽑洪淳用 : 四象짧쩔原論, 서울, 종林出版 n t! :, 1 9 8 2 ; 2 2 8-2 3 0 4 3 李泰뿜 : 束醫四象該爾의秘 앉, 서울, 홈林뿔院, 1 9 5 2 ; 2 1 6 4 4 尹吉榮 : 四象體質짧學論, 서울, 한얼문고, 1 9 8 9 ; 3 6 8 4 5 楊 傑 : 숭둥帝써經素問 S 훨解, 1 9 7 6 ; 3, 2 6 6, 2 7 6, 4 6 末驚永 : p 훌훌病因病機學, t 京, f - 民衛生出版 j f t! : ' 1 9 8 7 ; 6 4-6 6 4 7 뼈言 : 三因及 - 病證方論, t 京, f - 民衛 H \ 版 i l i L 1 9 8 3 ; 1 9 4 8 蔡홈錫 : 免훨反應의웰方械과 4-1 1 : 1 ' ' & 짧에관한 ; 文없的용察, 대한한의학회지, 1 9 9 0 ; 1 1 ( 2 ) : 4-6 4 4 9 서울대학교의과대학편 학교출판부, 1 9 8 9 ; 1 5 0 쑤淵캅 免俊쩔, 서울, 서울대 最新免훌學, 서울, 集文파, 1 9 8 5 ; 3 3 5 1 鄭핸擇外 :! R 훨텔入門, 서울, 高文 l i d :, 1 9 8 8 ; 9-1 1 5 2 대한병리학회편 : 病理쟁 ; \, 서울, 좁히文 j f t! : ' 1 9 9 0 ; 1 8 3-2 0 2 5 3 M i c e l i, M C a n d P a r n e s, J R : T h e r o l e o f C D 4 a n d C D 8 i n T c e l l a c t i v a t i o n 뻐 d d i f f e r e n t i a t i o n A d v a n r e s i n 1 1 T 1 f 1 I I m o l o g y, 1 9 9 3 ; 5 3 : 5 9 5 4 A b 벼 s, A K, L c h t m a n, A H a n d P o b e r, J S : 농 l l u l a r a n d m o l e c u l a r i m m u n o l o g y S a u n d e π C o m p a n y ( 2 e d ) U S A, 1 9 9 4 ; 1 7 7-1 7 8 5 5 K i l b o u r n, R G a n d G r i f f i t h, O W : O v e r p r o d u c t i o n o f n i t r i c o x i d e i n c y r o k i n e - m e d i a t e d a n d s e p t i c s h o c k J N a i l C a n a r I n s t i t, 1 9 9 2 ; 8 4 ( 1 1 ) : 8 2 8-8 3 1 5 6 0 났 u d a, Y, S a k a d a, S, S h i m a o k a, M a n d Y a n a g i h a r a, T : N i t r i c o x i d e i n d u c e s a p o p t o s 잉 I n - 1 1 2
- 유 & 밸외 1 少톰 A 1 t 빼훌훌찌의 * 훌업 I I 用 - ; : l i,, t, r, : i t r i m o u s e s p l e n i c T l y m p h o c y t e s I m t T l J J T l l J l g y L e t t e r s, 1 9 9 6 5 2 1 3 5 5 7 A b n a J E A b a e J A a n d H e n y W L N c 0 잉 d e p r o d u c t i o n i s r e q u i r 벼 f o r m u r i n e r e s i d e n t p e r i t o n e a l m a c r o p h a g e s t o s u p p r e s s m i t o g e n - s t i r n 띠 a t e d T c e l l p r o l i f e r a t i o n ) I m t T l J J n o l, 1 9 9 1 ; 1 4 7 ( 1 ) : 1 4 4-1 4 8 5 8 d J a n n o n, J Y, L e s l i e, C C a n d J o h n s t O n, J r R B : Z y m o s a n - s t i m u l a t e d p r o d u c t i o n o f p h o s p h a t i d i c a c i d b y m a c r o p h a g e s : r e l a t i o n s h i p t o r e l e a s e o f s u p e r o x i d e a n i o n a n d i n h i b i t i o n b y a g e n t s t h a t i n c r e a s e i n t r a c e l l u l a r c y c l i c A M P ) L e ι c α y f e B i 이, 1 9 8 7 ; 4 1 : 4 5 0 5 9 J u n, C D, P a r k, S K, K i m, J M, K i m, J D a n d K i m, S H : N i t r i c o x i d e i n h i b i t s m a c r o p h a g e p s e u d o 뼈 a f o r m a t i o n i n t h e a c t i v a t e d m a c r o p h a g e s K o r ) I m t T l J J T l l J L, 1 9 9 6 ; 1 8 : 6 3 5-1 1 3 -