RESEARCH ARTICLE 인삼종자에서추출한오일의항산화활성 송지혜 1, 손명수 1, 김혜옥 2, 김종식 3, 김의수 4, 김교남 1 * 1 경남대학교식품생명학과, 2 경남대학교간호학과, 3 ( 주 ) 한국인삼공사, 4 한국식품산업협회 Anti-oxidant Activity of Oil Extracted from Ginseng Seed Ji-Hye Song 1, Myung-Soo Shon 1, Hae Ok Kim 2, Jong Sik Kim 3, Eui-Su Kim 4, Gyo-Nam Kim 1 * 1 Department of Food Science and Biotechnology, Kyungnam University, 2 Department of Nursing, Kyungnam University 3 Korea Ginseng Corporation Central Research Institute, 4 Korea food industry association Abstract Skin, the largest body organ, is a major target for reactive oxygen species (ROS), physical and chemical toxic agents that a capable of altering its structure and functions. Thus, to maintain homeostasis of skin is an important. Korean ginseng (Panax ginseng C.A. Meyer) has been well-known as a medicinal herb included numerous bioactive substances such as ginsenosides, and saponins. While the leaf, berry, and particularly root of ginseng are known to possess various biological functions, the role and function of ginseng seed are relatively unknown. In this study, we prepared oil extracted from ginseng seed and its antioxidant activity was evaluated in both ORAC and cellular antioxidant capacity in HepG2 cells. In ORAC assay, the scavenging activities of ginseng seed oil (.5%-1%) against peroxyl and hydroxyl radicals are dose-dependently enhanced. We further examined that the cellular antioxidant activity of ginseng seed oil against oxidative stress generated by ROS generator including AAPH, Cu 2+, and H 2 in HepG2 cells. The ginseng seed oil effectively ameliorated the AAPH, Cu 2+, and H 2 -induced oxidative stress in HepG2 cells. Collectively, the results show that ginseng seed oil is expected to preserve from ROS-induced membrane damage. Ginseng seed oil may be utilized as an antioxidant functional material in cosmetics and nutricosmetics fields. Keywords: Korean ginseng, Seed oil, Antioxidant, Oxidative stress, ORAC 인삼은오가과 (Araliaceae) 의인삼속 (Panax genus) 에속하 는다년생음지성초본식물로서우리나라를비롯한동아시아부터시베리아동부, 북미에걸쳐서널리분포하고있다. 그중에서도약용식물로서주로활용되고있는고려인삼 (P. ginseng C.A. Meyer) 은우리나라를비롯한중국, 일본등에서주로재배되고있다 ( 고성룡등, 1996). 인삼은우리나라에서오랫동안약용식물로이용되어왔음은물론이고차, 음료, 스낵, 그리고 *Corresponding author: Gyo-Nam Kim, Department of Food Science and Biotechnology, Kyungnam University, 7 Kyungnamdaehakro, Masanhappo-gu, Changwon-si, Gyeongsangnam-do 631-71, Republic of Korea Tel.: +82 55 249 633, Fax: +82 55 999 2171 E-mail: gnkim@kyungnam.ac.kr Received February 13, 214; Revised April 8, 214; Accepted April 15, 214; Published April 3, 214 젤리등의가공식품으로도다양하게활용되고있다. 고려인삼과더불어해외에서유통되고있는미국삼 (P. quinquefolium L.) 과전철삼 (P. notoginseng F.H. Chen) 은지방산및지방산 ester의함량이높고 sesquiterpene 화합물의일부가미량으로검출되었으며 ( 고성룡등, 1996), 미국삼 (P. quinquefolium L.) 종자오일의경우 squalene, oxidosqualene, campesterol, stigmasterol, clerosterol, β-sitosterol, β-amyrin, lupeol, citrostadienol 그리고 2,4-methylenecycloartanol 등의 phytosterol을함유하고있는것으로보고되었다 (Thomas et al., 22). 고려인삼에존재하고있는오일성분으로는 α-panasinsene, β-panasinsene, α-neoclovene, β-neocloven 이외에도 gensenol, panasinsenol A, panasinsenol B, (+)-spathulenol, (-)-4β,1α-aromandendrenediol, 그리고 (-)-neointermedeol 등의분자량이 24인 sesquiterpene 화합물들이주요구성성분인것으로보고되었다 ( 고성룡등, 1996). 특히, 인삼종자는 dammarane-type과 lupane-type www.kosac.or.kr 235
triterpenes, aromatic oligoglycoside, sterol glycosides 그리고 damarane-type triterpene oligoglycoside (ginsenoside Rd, Re 그리고 Rg2) 및 β-n-oxalyl-l-α,β -diaminopropionic acid) 와같은다양한생리활성성분을포함하고있음에도불구하고인삼의 ginsenosides나사포닌에대다수의연구가치중되어있으며그외성분에대한연구는부족한실정이다 (Sachiko et al., 29; Kuo et al., 23). 최근연구된보고들에따르면, 자운영종자오일을 3%, 5%, 그리고 8% 첨가하여제조한화장품은약산성의 ph를나타내며도포한뒤 5 h 경과후에도농도의존적으로대조군에비해높은수분함량을보유하고있는것으로나타났다 ( 김란과김한석, 211). 자몽종자추출물은.5% 농도에서피부질환과관련된다양한원인균주들에대해강한항균활성을보이며이를활용한시제품은 ph, 점도, 점도, 굴절및색도변화에있어서모두안정성을나타내었다 ( 하유미등, 29). 또한가시연꽃종자의경우항산화활성, elastase 저해활성및미백활성을나타내는유효성분들을다량함유하여복합기능성을나타내는화장품원료로사용될수있는가능성이보고되는등 ( 추수진등, 29) 식물종자들의기능성과생리활성에대한연구들이활발히이루어지고있는실정이다. 인삼의경우 ginsenosides, polyacetylenes, polysaccharides, 그리고 phenolic compounds 등주요생리활성성분을포함하고있는인삼잎, 뿌리, 열매는피부미용과관련하여주름개선, 미백, 항노화등의기능성및안정성을포함한한방화장품의소재로서의활용가치가널리보고되고있으며다양한제품으로개발되어판매되고있지만 ( 이현정등, 21; 장정화등, 212; 전지민등, 211), 인삼종자는장기간동안저장성이높고 ( 이장호등, 24) 인삼의다른부위에포함된유사한생리활성성분들을함유하고있음에도불구하고아직까지인삼종자에대한과학적인접근은부족한실정으로이에대한체계적인연구가요구된다. 피부는인체에서가장큰범위를차지하고있는부분으로 UV, 화장품보존제, 의약품등에의해지속적으로영향을받음으로써산화적스트레스에노출된다. 산화적스트레스는지질이중막구조로이루어진피부의지질산화를촉진함으로써피부단백질의구조를무너뜨리고더나아가피부세포의유전자변형을야기해피부암의유발할수있다 (Brickers & Athar, 26). 따라서화장품보습소재로널리이용되는오일성분의항산화활성은중요하게검토되어야할부분이다. 본연구에서는인삼종자로부터오일을추출하고추출한인삼종자오일의항산화활성을평가하기위하여 oxygen radical absorbance capacity (ORAC) 방법을이용하여지질과산화와밀접하게관련된 peroxyl radical (ROO ) 과 hydroxyl radical (HO ) 소거활성을측정하였다. 또한추가적으로항산화연구 에주로이용되는인간유래 HepG2 세포주를이용하여다양한산화적스트레스 (AAPH, Cu 2+, 그리고 H 2 ) 를유도한후각각의산화적스트레스에대한인삼종자오일의억제활성을평가하고더나아가기능성화장품및미용기능식품소재로서의가능성에대해고찰하였다. 1. 실험재료본실험에사용된 HepG2 세포주는 American Type Culture Collection (ATCC; Rockville, MD, USA) 에서분양받아사용하였다. Dulbecco s modified Eagle s medium (DMEM), fetal bovine serum (FBS), Hank s balanced salt solution (HBSS), 그리고 streptomycin-penicillin cocktail 은 Gibco BRL. (Carlsbad, CA, USA) 에서구입하여사용하였다. 2,2-Azobis (2-amidino-propane) dihydrochloride (AAPH), CuSO 4, H 2, fluorescein, trolox, 그리고 2,7 -dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFH-DA) 는 Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA) 에서구입하여사용하였다. 형광분석기 (GENios fluorescence plate reader) 는 Tecan (Salzburg, Austria) 을사용하였다. 2. 인삼종자로부터오일성분의추출인삼종자오일은 한국인삼공사에서제공받아사용하였다. 인삼종자는초임계추출기를이용하여 45 bar의압력, 65 의온도에서유속 SF2의상태로인삼종자오일을추출하였고, 분자막증류장치를이용하여불순물을제거한후정제된인삼종자오일을시료로사용하였다. 3. 인삼종자오일의 peroxyl과 hydroxyl radical 소거활성인삼종자오일의 peroxyl과 hydroxyl radical 소거활성은 ORAC 실험법을이용하여측정하였다. Peroxyl radical 소거활성을측정하기위해서 96-well black microplate에 75 mm potassium phosphate buffer (ph 7.4) 에녹인 8 nm fluorescein 용액 1 μl와.5%,.1%,.5%, 그리고 1% 인삼종자오일용액 5 μl을넣은후 peroxyl radical generator로서 8 mm AAPH 용액 5 μl를혼합하였다. Hydroxyl radical 소거활성을측정하기위해서는 96-well black microplate 에 75 mm potassium phosphate buffer (ph 7.4) 에녹인 16 nm fluorescein 용액 5 μl와.5%,.1%,.5%, 그리고 1% 인삼종자오일용액 5 μl을넣은후 hydroxyl radical generator로서 2 μm CuSO 4 와 4 nm H 2 를혼합한용액 1 μl를넣어주었다. 형광분석기를이용하여 37 에서 2 min 236 www.kosac.or.kr
인삼종자오일의항산화활성 15 25 ORAC ROO ㆍ (Trolox Equivalents, μm) 1 5 a b c d ORAC HO ㆍ (Trolox Equivalents, μm) 2 15 1 5 a b c d.5.1.5 1.5.1.5 1 Figure 1. Scavenging activity of ginseng seed oil against peroxyl radicals as judged by ORAC ROO assay. Peroxyl radicals scavenging activity generated by AAPH of ginseng seed oil were evaluated using ORAC assay. One ORAC unit is indicated as net area of protention provided by 1 μm Trolox (TE, Trolox Equivalents). The results represent the mean±sd of values obtained from three measurements. Different corresponding letters indicate significant differences at p<.5 by Duncan s test. Figure 2. Scavenging activity of ginseng seed oil against hydroxyl radicals as judged by ORAC HO assay. Hydroxyl radicals scavenging activity generated by Cu 2+ -H 2 of ginseng seed oil were evaluated using ORAC assay. One ORAC unit is indicated as net area of protention provided by 1 μm Trolox (TE, Trolox Equivalents). The results represent the mean±sd of values obtained from three measurements. Different corresponding letters indicate significant differences at p<.5 by Duncan s test. 간격으로 1 cycle 동안 excitation wavelength 485 nm, emission wavelength 535 nm 파장에서형광값을측정하였다. 인삼종자오일의 peroxyl과 hydroxyl radical 소거활성최종결과값은항산화활성이잘알려진비타민 E 수용체, trolox equivalents (TE) 으로환산하여나타냈다. 4. HepG2 세포의배양 HepG2 세포주는 DMEM 배지에 1% FBS와 1% antibioticantimycotic agent를포함하여 37, 5% C 환경을유지하는세포배양기에서배양하였다. HepG2 세포주는 1:3 비율로계대배양하였다. 5. 인삼종자오일의 HepG2 세포내 radical 소거활성 HepG2 세포주를 96-well black plate에 5 1 5 cells/well의수로 24 h 동안 37, 5% C 가유지되는환경에서배양하였다. 각 well의세포배양배지를제거한후 HBSS 2 μl로교체하고.1%,.5%, 그리고.1% 인삼종자오일용액을 2 μl씩처리하였다. 시료가처리된 HepG2 세포주는 3 min 동안배양된후 HBSS 5 μl로씻어주었다. 각각의 radical generator 로서 6 μm AAPH, 1 μm CuSO 4, 그리고 1 mm H 2 를 2 μl씩처리하여 3 min 동안배양한뒤 4 μm DCFH-DA 를 2 μl씩처리하고 3 min 동안추가로배양하였으며형광분석기를이용하여 excitation wavelength 485 nm, emission wavelength 535 nm에서형광값을측정하였다. 최종결과값은처리하지않은 HepG2 세포주의형광값을대조군으로하여 DCF fluorescence intensity (% of control) 를계산하였다. 6. 통계분석모든데이터는평균 ± 표준편차로표현하였으며, 데이터의통계처리는 Statistical Package for Social Science (SPSS; Chicago, IL, USA) 를이용하여분석하였다. 신뢰수준 p<.5에서평균값들에대한유의성을검증하였다. 각항목은일원배치분산분석 (one-way ANOVA) 을시행하였으며, Duncan s test 및 t-test 방법에의하여각구간의유의성차이를검증하였다 ( # p<.5, p<.1, and # p<.1). 1. 인삼종자오일의 peroxyl과 hydroxyl radical 소거활성피부의노화는크게내인성노화와외인성노화로구분할수있다. 내인성노화는나이가들어가면서신체기관의기능감소와함께피부의구조와생리적기능의변화가일어나는것인반면, 외인성노화는공해, 자외선, 오염물질등에의해피부자극이반복되면서나타나는현상이다. 외인성자극이반복되면 reactive oxygen species (ROS) 가과도하게발생할수 www.kosac.or.kr 237
2 2 DCF Fluorescence Intensity (% of Control) 15 1 5 *** # DCF Fluorescence Intensity (% of Control) 15 1 5 *** # Control AAPH.1.5.1 Control Cu 2+.1.5.1 Figure 3. Cellular antioxidant activity of ginseng seed oil against AAPH-induced oxidative stress in HepG2 cells. Scavenging activity of cellular oxidative stress by 6 μm AAPH of ginseng seed oil in HepG2 cells were measured using DCFH- DA probe. Corresponding letter indicate significant differences between control and AAPH treatment only ( *** p<.1), and # corresponding letters indicate significant differences AAPH vs ginseng seed oil treatment ( p<.1, and # p<.1) by t-test. Figure 4. Cellular antioxidant activity of ginseng seed oil against Cu 2+ -induced oxidative stress in HepG2 cells. Scavenging activity of cellular oxidative stress by 1 μm Cu 2+ of ginseng seed oil in HepG2 cells were measured using DCFH- DA probe. Corresponding letter indicate significant differences between control and Cu 2+ ions treatment only ( *** p<.1), and # corresponding letters indicate significant differences AAPH vs ginseng seed oil treatment ( p<.1, and # p<.1) by t-test. 있으며 ROS의과도한증가는산화적스트레스를유발하며이는피부유전자와단백질구조를변화시켜피부손상및더나아가피부암의유발과도관련되어있다. 따라서과잉의활성산소를억제하고효율적으로제거할수있는항산화성분은이러한외인성노화를지연또는억제시키는데중요하게작용될수있다 ( 손명수등, 213). 대표적인 ROS로잘알려진 peroxyl radical은항산화제의수소이온전이에의해안정화될수있으며, H 2 와전이금속이온들과의결합을통해생성되는 hydroxyl radical은항산화제의금속킬레이팅능력이나생성된 hydroxyl radical과직접결합함으로인해안정화되는것으로알려져있으며대표적인항산화활성측정방법인 ORAC은 peroxyl과 hydroxyl radical 소거활성을분석하는데있어유용하게사용된다. ORAC 분석법을통해 AAPH로 peroxyl radical을생성시킨후인삼종자오일의 peroxyl radical 소거활성을측정하였다. 인삼종자오일은.5%-1% 에서농도의존적으로 (p<.5) peroxyl radical 소거활성이증가하였으며,.5%,.1%,.5%, 그리고 1% 의인삼종자오일의 peroxyl radical 소거활성은각각 1.31, 2.84, 7.94, 그리고 11.96 TE로나타났다 (Figure 1). 인삼종자오일의 hydroxyl radical 소거활성을측정한결과는 Figure 2와같다. Peroxyl radical 소거활성과유사하게인삼종자오일은.5%-1% 에서농도의존적인 (p<.5) hydroxyl radical 소거활성을나타냈으며,.5%,.1%,.5%, 그리고 1% 농도의인삼종자오일은각각 4.3, 9.16, 15.39, 그리고 21.63 TE의 hydroxyl radical 소거활성을나타냈다. 최근보고에따르면 peroxyl raidcal 생성과밀접하게관 련된 quinones류들은세포의 activator protein 1 (AP-1), nuclear factor κb (NF-κB) 의활성화를통해피부세포의분화를변화시키고세포사멸을유도한다고보고되었다 (Brickers & Athar, 2). 따라서인삼종자오일은화장품소재및미용기능식품소재로서 peroxyl radical로유도되는세포지질막및피부세포손상을억제하는데기여할수있을것으로생각되며, 항산화활성에기여하는인삼종자오일의생리활성물질에대한탐색이추가로요구된다. 2. HepG2 세포내에서인삼종자오일의산화적스트레스억제활성 ORAC 분석법을통한 in vitro 실험결과를바탕으로, 우리는추가적으로 HepG2 세포주를이용하여각각의산화적스트레스유도제 (AAPH, Cu 2+, 그리고 H 2 ) 에의해산화적스트레스가유도되었을때인삼종자오일에의한억제활성을대조군과비교하여평가하였다. 항산화연구에 HepG2는 in vivo 환경을잘반영하기때문에매우유용한세포주로잘알려져있다. 다른연구자들의보고에의하면 HepG2 세포주는항산화연구에적합하게잘분화되어있으며타세포주와비교하여재연성이우수하다고보고되었다 (Alia et al., 26; Wolfe et al., 28). 본실험에서 HepG2 세포주에.1%,.5%, 그리고.1% 의농도로인삼종자오일을처리한후각각의 6 μm AAPH, 1 μm Cu 2+ 그리고 1 mm H 2 로세포내산화적스트레스를유도하였으며, 세포내발생된 ROS와반응하여형광을나타내는 DCFH-DA를이용하여형광강도를측정하여정량화하였다. ORAC 분석법을통한 peroxyl radical 소거활성과같이인삼 238 www.kosac.or.kr
인삼종자오일의항산화활성 2 Ginseng seed oil DCF Fluorescence Intensity (% of Control) 15 1 5 *** # # Photosensitizer? UVB/UVA - H 2 Cu 2+ or Fe 2+ ROO OH Control H 2.1.5.1 Figure 5. Cellular antioxidant activity of ginseng seed oil against H 2 -induced oxidative stress in HepG2 cells. Scavenging activity of cellular oxidative stress by 1 mm H 2 of ginseng seed oil in HepG2 cells were measured using DCFH- DA probe. Corresponding letter indicate significant differences between control and Cu 2+ ions treatment only ( *** p<.1), and # corresponding letters indicate significant differences AAPH vs ginseng seed oil treatment ( # p<.5, and p<.1) by t-test. 종자오일은 HepG2 세포에서도 AAPH로유도된산화적스트레스를유의적으로감소시켰다 (Figure 3). AAPH에의해산화적스트레스를유도하였을때 HepG2 세포주는대조군 (1%) 에비해세포내 ROS 수준이 145.1% 로유의적으로증가되었으며.1%,.5%, 그리고.1% 농도의인삼종자오일을처리하였을때증가했던 ROS 수준이각각 35.71%, 44.3%, 그리고 61.81% 감소된결과를나타냈다. 또한 hydroxyl radical 생성과밀접하게관련되어있는 Cu 2+ 이온과 H 2 로산화적스트레스를유도하여인삼종자오일의산화적스트레스억제활성을평가하였다. Cu 2+ 이온으로산화적스트레스가유도된 HepG2 세포주의세포내 ROS 수준은대조군 (1%) 과비교하여 159.12% 로유의적으로증가되었으며각각의.1%,.5%, 그리고.1% 농도의인삼종자오일을 HepG2 세포에처리하였을때 4.35%, 52.69%, 그리고 58.59% 산화적스트레스가감소되었다 (Figure 4). HepG2 세포주에 H 2 로산화적스트레스를유도되었을때의결과는 Figure 5와같다. H 2 가처리되었을때대조군 (1%) 에비해 129.16% 로 HepG2 세포주내 ROS수준이증가하였으며.1%,.5%, 그리고.1% 농도의인삼종자오일을처리하였을때각각 18.36%, 19.52%, 그리고 32.78% 감소시켰다. 특히각각의 AAPH, Cu 2+, 그리고 H 2 를처리한결과모두에서.5% 와.1% 농도의인삼종자오일을처리하였을때농도의존적으로 HepG2 세포주내에서의산화적스트레스가감소된결과를확인할수있었다. 위의결과는인삼종자오일이항산화소재로사용될수있다는가능성을보여주는결과이며추가적인전임상및임상연구가요구된다. Plasma membrane OXIDATIVE STRESS Figure 6. Potential antioxidant function of ginseng seed oil in skin. 체내에들어간산소가산화과정에이용되면서에너지생산을위한여러대사과정에서생성되어활성산소들이생성되며, 과도한활성산소형성증가로산화적스트레스를유발하고효과적인항산화방어체계를감소시킨다 (Kim JM et al., 213). 이러한활성산소는반응성이높기때문에각종세포들과반응하여세포의구조적, 기능적손상을일으켜각종질환의원인이될수있다 ( 황인수등, 213). 따라서피부의구조적손상, 피부질환및피부암등과같은질환을예방하기위하여산화적스트레스에의해유발되는산화적손상을효과적으로억제할수있는항산화소재를탐색하기위한연구가요구된다 ( 김민주등, 213; 윤미영등, 29; 송영아등, 211). 본연구에서는대표적인약용작물로잘알려진인삼종자를초임계추출기를이용하여오일을추출하고정제하여인삼종자오일의항산화활성을평가하고자하였으며결과는다음과같다. 인삼종자오일의 peroxyl과 hydroxyl radical 소거활성을 ORAC 실험법을이용하여측정한결과.5%,.1%,.5%, 그리고 1% 농도에서인삼종자오일은농도의존적으로증가된 radical 소거활성을나타냈다. HepG2 세포에서 AAPH, Cu 2+, 그리고 H 2 로산화적스트레스를유도하고인삼종자오일의산화적스트레스억제활성을측정한결과인삼종자오일은농도의존적이며유의적으로 AAPH, Cu 2+, 그리고 H 2 로유도된산화적스트레스를억제하였다. 본연구결과는피부에미치는다양한산화적스트레스유발요인중 -, H 2, HO, 그리고 ROO 등의 radical 발생으로야기되는산화적스트레스를효과적으로억제할수있는항산화제의가능성을보여준결과로생각된다 (Figure 6). 추후 UV 및 photosensitizer 등으로유도된산화적스트레스억제활성에대한추가적검토가필요할것으로생각된다. www.kosac.or.kr 239
이상의연구결과는인삼종자오일의산화적스트레스억제를통한기능성항산화소재로서의가능성을보여주었으며향후화장품및미용기능식품개발에있어기초자료로사용될수있을것으로생각된다. 고성룡, 최강주, 김영회. 인삼속 (Panax species) 식물의정유성분조성비교. 고려인삼학회, 2: 42-48, 1996. 김란, 김한석. 자운영 (Astragalus sinicus Linne) 종자추출 Oil을함유한크림제조및피부보습효과에관한연구. 대한피부미용학회지, 9: 1-9, 211. 김민주, 이삼빈, 최준혁, 권승혁, 김형대, 방면호, 양선아. 미나리발효액과미나리발효액을이용한식초의특성분석및 glioma C6 세포에서산화적손상에대한보호효과. Korean J. Food Sci. Technol., 45: 35-355, 213. 손명수, 송지혜, 김종식, 장해동, 김교남. 홍삼에서추출한오일의항산화및보습활성. 대한피부미용학회지, 11: 489-494, 213. 송영아, 안홍석. 참깨오일의피부적용이노화건성피부의상태변화에미치는영향. 대한피부미용학회지, 9: 13-113, 211. 윤미영, 방민정, 진정화, 정광조. 샌달우드오일의항산화및항염증에관한효과. 대한피부미용학회지, 7: 263-273, 29. 이장호, 이성식, 안인옥, 강제용, 이명구. 저장기간과인삼종자발아력과의관계. 고려인삼학회지, 28: 215-218, 24. 이현정, 서형주, 이현순. 효소처리인삼잎추출물의화장품소재가능성연구. 대한피부미용학회지, 8: 59-69, 21. 장정화, 황세희, 이은주, Ohto N, 이진희. Hairless mice에서 UVB로유도된피부손상에인삼추출물 (Ginseol Kb1) 이미치는영향. J. East Asian Soc. Dietary Life, 22: 224-23, 212. 전지민, 최성규, 김윤정, 장수진, 천종우, 이현상. 유산균발효에의한인삼열매추출물의항산화및항노화효과. 대한화장품학회지, 37: 75-81, 211. 추수진, 김영희, 류인자, 허광화, 유익동. 가시연꽃종자추출물의화장품원료로서의특성. 대한화장품학회지, 35: 39-315, 29. 하유미, 이보배, 배희정, 제경모, 김순래, 최재석, 최인순. 피부질환원인균에대한자몽종자추출물과법제유황수의항균효과. 한국생명과학회지, 19: 94-1, 29. 황인수, 지진구, 곽이섭, 하민성, 이호. 최대운동부여가활성산소, 항산화능력및 EPOC에미치는영향. 코칭능력개발지, 15: 151-159, 213. Alia M, Mateos R, Ramos S, Lecumberri E, Bravo L, Goya L. Influence of quercetin and rutin on growth and antioxidant defense system of a human hepatoma cell line (HepG2). Eur. J. Nutr., 45: 19-28, 26. Brickers DR, Athar M. Novel approaches to chemoprevention of skin cancer. J. Dermatol., 27: 691-695, 2. Brickers DR, Athar M. Oxidative stress in the pathogenesis of skin disease. J. Inves. Dermatol., 126: 2565-2575, 26. Kim JM, Kim JS, Park EJ. Antioxidative and antigenotoxic effects of onion peel extracts in noncellular and cellular systems. Food Sci. Biotechnol., 22: 1395-142, 213. Kuo YH, Fumio I, Fernand L. Neuroactive and other free amino acids in seed and young plants of Panax ginseng. Phytochemistry, 62: 187-191, 23. Sachiko S, Seikou N, Hisashi M, Niichiro K, Masayuki Y. Chemical Consrituents from seeds of Panax ginseng: Structure of new dammarane-type triterpene ketone, panaxadione, and HPLC comparisons of seed and flesh. Chem. Pharm. Bull., 57: 283-287, 29. Thomas HJB, Thomas SCL, John CGD. Phytosterol content in American ginseng seed oil. J. Agric. Food Chem., 5: 744-75, 22. Wolfe KL, Kang X, He X, Dong M, Z hang Q, Liu RH. Cellular antioxidant activity of common fruits. J. Agric. Food Chem., 56: 8418-8426, 28. 24 www.kosac.or.kr