임앙병리럼마고 I 악외 1\ 1 : 머 133 뀐머 12 호, 81-85, 항바이러스치료효과판정에대한간염바이러스 청량검사와기타바이러스항원검사 제주한라대학생명과학연구소 의료법인한라병원임상병리과 * 문인경 민병해 김인환 김희정 * 김학구 * 정영준 * HBV Q

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김범수


동위원소검사학 강의13

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정재연 B 형간염치료약제의보험급여현황 양급여를인정받을것으로예상된다. 이중라미부딘은 2012년 9월 1일부터라미부딘제제보다높은유전적장벽 (genetic barrier) 이있는다른항바이러스제를사용할수없거나적절하지않은경우에한하며, 투여소견서를첨부하여야급여를인정받을수있게되었다


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Pharmacotherapeutics Application of New Pathogenesis on the Drug Treatment of Diabetes Young Seol Kim, M.D. Department of Endocrinology Kyung Hee Univ

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KOL Slidekit (Sep 2005)

요약문 ( 한글 )

211 년대한임상건강증진학회춘계통합학술대회 치료대상 치료대상 만성 B 형간염 간경변증 HBeAg (+) HBeAg (-) Compensated Decompensated KASL (27) 2 x UNL 2, 2 x UNL 2, APASL (28) 2 x UNL 2, 2

C 형간염의진단에서 Anti-HCV 와 HCV RT-PCR 결과검토 419 확진한다. Anti-HCV 검사가양성으로나오는경우는현재 HCV 감염상태이거나, 과거에감염되었다가항체만남아있는경우, 검사의위양성반응등을생각할수있다 [1]. 그러나이방법은혈액공여자나건강검진집단과같은

황지웅

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미생물분류는형태적특징, 생리 생화학적성질과상태, 화학분류학적성질과상태등을이용하여구분하는것이일반적이지만, 이와같은방법을이용하면많은시간을필요로한다. 또한분류가힘든경우나, 정확하지못한결과를얻는경우도있다. 최근미생물분류에도분자생물학적인방법을이용하여, 미생물이가지고있는 DNA를

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975_983 특집-한규철, 정원호

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목차 Ⅰ. 개요 1 Ⅱ. 용어의정의 4 Ⅲ. 관련규정 13 Ⅳ. 신청서기재항목및기술문서제출자료 14 Ⅴ. 제조 수입허가신청서기재항목 15

기관고유연구사업결과보고

α α α α α

Lumbar spine

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주간건강과질병 제 8 권제 42 호 B 형간염바이러스잠재감염헌혈자및헌혈혈액특성분석 Analysis of Characteristics of Blood Donors with Occult Hepatitis B Virus Infection Abstract Background:

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석사논문.PDF

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174 The Korean Journal of Hepatology : Vol. 5. No Key Words : Chronic hepatitis B, Lamivudine, HBV DNA polymerase, YMDD mutant :, 134,


12이문규

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내시경 conference

대한임상병리사회지 : 제 26 권제 1 호 B 형간염바이러스표면항원양성혈청에서 B 형간염 바이러스의 e 항원및 DNA 측정에관한분석 서울의과학연구소 서울임상병리검사센터 고려병원임상병리과 * 최철석 김은아 홍창식 이경옥 박창봉 * Kèy words : HBsA

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May 10~ Hotel Inter-Burgo Exco, Daegu Plenary lectures From metabolic syndrome to diabetes Meta-inflammation responsible for the progression fr

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제 21 차대한간학회추계학술대회 연구는대부분라미부딘경험이있거나복합요법을하는경우가많아다약제내성이상당수포함되며아 데포비어내성인 A181T/V 는라미부딘에도내성을가지고엔테카비어는그자체로다약제내성이므로본 고에서는내성치료의변천과각약제의내성에대한연구결과에대해정리해보고자한다. 본론

139~144 ¿À°ø¾àħ

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대한진단검사의학회지제 26 권제 6 호 2006 Korean J Lab Med 2006;26: 원저 진단면역학 실시간정량적중합효소연쇄반응을이용한혈청 B 형간염바이러스 DNA 검사 허정 1 고원욱 1 김광하 1 강대환 1 송근암 1 조몽 1 김형회 2,3 이은

( ) ) ( )3) ( ) ( ) ( ) 4) 1915 ( ) ( ) ) 3) 4) 285

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대한진단검사의학회지 : 제 25 권제 1 호 2005 Korean J Lab Med 2005; 25: 61-5 진단면역학 3 개대학병원환자의바이러스성간염검사에대한혈청학적표지자의역학조사 이고은 김경희 권정아 윤수영 이창규 조윤정 김소연 1 이동기 2 손미진 3 이갑노 고

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원저 Lab Med Online Vol. 3, No. 1: 23-28, January 진단면역학 바이러스간염진단을위한혈청학적검사법과 Magicplex HepaTrio Real-time

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EZ-Cloning kit

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Kosin Medical Journal 2014;29: K MJ Case Report A Case of Reactivation of Hepatitis B and Fulminant

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편집순서 3 : 목차 - 2 -

연구보고서화학물질노출에의한유전자돌연변이 ( 발암 ) 의조기확인 (II) - 실험동물을이용한고감도발암성확인기법의검증 - 임경택 김수진

(Exposure) Exposure (Exposure Assesment) EMF Unknown to mechanism Health Effect (Effect) Unknown to mechanism Behavior pattern (Micro- Environment) Re

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2.0 까지의값을반으로나누어서고, 저로분류하였다 N 에서 ALT 치가 0-30IU /L 인경우는 12 명이었다. Croup 1 은 HBsAg 와 HBsAb 가모두높은경우로공존예의간질환별빈도는무증상보균자가 10 명 ( 건 (6.7 %) 이고, Group n 는

대한임상병리학회지 : 제 20 권제 2 호 2000 Korean J Clin Pathol 2000; 20: 진단면역학 B형간염표면항원양성환자에서표면항체동시양성빈도및임상적의의 차영주 채석래 중앙대학교의과대학임상병리과학교실 Frequency and Signifi

서론 34 2


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Cloning

전기설비의 검사˚점검 및 시험등

Transcription:

임앙병리럼마고 I 악외 1\ 1 : 머 133 뀐머 12 호, 81-85, 2001. 항바이러스치료효과판정에대한간염바이러스 청량검사와기타바이러스항원검사 제주한라대학생명과학연구소 의료법인한라병원임상병리과 * 문인경 민병해 김인환 김희정 * 김학구 * 정영준 * HBV Quantitation PCR and Viral Marker Studies for Evaluation of Anti -viral Treatment Moon, In Kyung., Kirn, In Hwan., Min, Byung Hae., Kirn, Hee Jeong"'., Kirn, 1 굉 kg *., Jung, Y oung Zoon * Life Science Institute, Cheju Halla College Department 01 Clinical Pathology, Halla General H ospital* Hepatitis-B virus is a serious problem in Korea, and about 7 to 8 % of the populations are in carrier state. The only drugs currently approved for hepatitis-b infection is a -inteferon. However, the cure rate with this treatment is low. Some patients are unresponsive to the interferon, and some relapse when is stopped. Recently, Lamibudine, a novel cytosine analogue, exhibits potent anti-viral activity against hepatitis B virus. The effect of lamibudine treatment is good for almost all patient, but some patients showing refractorlness and the mutant HBV appearance. We studied for what kinds of tests are available for predict the response of lamibudine. HBeAg positive cases are 11.5 % in the HBV -PCR postive group and 0.0% in the HBV-PCR negative group. HBeAg neagtive cases are 88.5% in the HBV-PCR postive group and 100.0% in the HBV-PCR negative group. These results indicate that HBV-PCR test are more reliable for predict the viral state of HBV infection. So the 띠 ral status evaluation(infectivity) for HBV infection by HBeAg assay is not recommended. Further studies recruiting on patient s clinical courses and liver biopsy studies may helpful to determine the HBV viral status. Key Word : HBV, PCR, HBeAg 1. 서론우리나라에서 B 형간염바이러스 (hepatitis B 81

하 여 커口V 뼈 ; HBV) 는황달, 만성간염, 간경변, 간암의 가장흔한원인이다. 전국민의 7-8% 정도가가지 하였는데모든시약과검제는사용전에실온으 로평형시킨후가볍게흔들어주었다. 그리고 고있다. 이미 B 형간염바이러스를가지고있는반응판 (πay) 의 37R well 에음성대조혈청, 2 개의 사람들에게최근까지 B 형만성간염의치료제는 well 에양성대조혈청그리고 1 개 well 에각검체 인터페론이유일하였다. 그러나인터페론은효 10μM 씩을분주하였다. 각 well 에검체희석액 200 과가만족할만한수준이아니었고고가약제를 사용해야하며여러가지부작용이있다는문제 점이있다. 최근항바이러스제가개발된것중에 는 B 형간염바이러스에효과가인정되어임상 μm 씩분주하고비드 φea 이를 1 개씩분주하고반 응판을톡톡쳐서혼합하였다. 그리고 45 0 C 항온 수조에 3 시간반응시켰다. 세척방법에의해서비 드를 Quickwash 로 2 회씩세척하였다. 그리고각 시험을하였고. 이중먼저그임상효과를인정 well 에표지항체 ( 田 eab 125 1) 200 따씩을분주한 받은약제가라미뷰딘 (lamivudine) 이다. 그러나, 후 45 0 C 항온수조에 3 시간반응시켰다. 비드를 라미뷰딘을 1 년간사용하다보면 10 명중 1-2 명 Quickwash(Abbott, USA) 로 2 번세척한후 Gamma 에서내성이생겨약효가사라지며, 2 년째가되 counter 로 125 1 방사능을측정하였다. 면내성이생기는환자의수는계속늘어난다. 그러므로어떤환자가가장큰효과를볼것인 지에대해서는많은연구와검토가필요한상태 이다. 본실험에서는라미뷰딘치료환자의초기 임상검사가치료반응정도와의관련성이있는 HBV DNA 의증폭을위한시발처 1ψrimer) 의 지여부와치료반응을판단하는지표들의효율쌍은한국생공 (Bioneer, Korea) 에의뢰하여합성 성을검토해보고자하였다. 하였다. Nested PCR (Core region) 1st PCR P비 ner n. set(524bp) 재료및밭법 5 -TCCYACTGTTCAAGCCTCCAAGC 1. 1999 년 10 월부터 2000 년 3 월까지 H 병원에 내원한환자중에서 f 田 eag, HBV-PCR 정량검 사를시행한간염치료환자들의혈청을대상으 로검사하였다. 환자중에서 HBV-DNA 정량검 사추적관찰및임상양상결과치료기간중에 계속음성으로전환된환자를반응군으로정하 고, 반대로 HBV-DNA 정량검사에서음성이양 성으로되거나처음부터음성으로전환이되지 않은환자를비반응군으로정하였다. 2. HBeAg (RIA) 검사방법 방사면역측정법 (RIA, radioimmuno assay) 에 하여田 eag 양성율을검사하였다. 田 eag 의 출을위하여 Abbott 사의 HBeAg kit (125 1) 를사용 의 검 - nu -E요( 메 n 내중U 끼합반효쇄소혀근처 J출ψ만니네(KHBV1) 5 -TTCTTCTTCTAGGGGACCTGCC (KHBV2) 2nd PCR primer set(521bp) 5 -TTCTTCTTCTAGGGGACCTGCC (KHBV3) 5 -CTGTTCAAGCCTCCAAGCTGTGCC (KHBV4) 환자혈청 40μ 에용해완충액을 40μM 가하여 완전히혼합한후 mineral oil 을한방울떨어뜨 린다. 전자레인지 ( 출력 750W) 로 3 분 -3 분 -2 분 -2 분 끓인후 13,α 야 pm 4 0 C 에서 10 분동안원심분리 하여상층액을취하여 PCR 에사용하였다. 일차 PCR 은 accupower premix tube(bioneer, Korea) 에 멸균된 3 차증류수, HBV1, HBV2 primer( 각각 1 82

μq(2opmole/μq)), 시료 DNA( 0.3, 1, 7μ Q ) 를가하 여최종 20 씨로맞춘다음잘혼합한후 ltilcrocentrifuge 로 5 초원침한다. Mineral oil 을가하고 Table 1. Comparison of HBV -PCR test and HBe-Ag (RIA) test. f 핍 eag (+) f 핍 eag (-) PCR반응 (94 0 C 5 분, 94 0 C 1 분, 55 0 C 1 분, 72 0C 3분 33 회후 72 0 C 5 분 ) 을수행하였다. 양성대조군으 로는클론된 B 형 간염바이러스 cdna 를사 HBV-PCR (+) HBV-PCR (-) 23 3 0 11 용하였으며음성대조군으로는 DNA 대선증류 수를사용하였다. 이차 PCR 은 accupower premix tube 에 8-Mop 용액, HBV3, HBV 4 primer( 각각 1μM N. 고화를(2Opmole/ 따 )), 일차 PCR 반응액 2μ6 일차 PCR 과 B 형간염환자의일부는만성 B 형간염, 전격 같은조건으로수행하였다. PCR 이 끝난후 W 성간염으로이행된다. 田 V 가어릴때에감염될 n 뻐 silluminator 위에서 10-20 분동안비동화후 수록만성간염으로될가능성이높다. 출생때 (post -inactivation) 에 2 % agarose gel 에서 전기영동 에 모체로부터감염 ( 수직감염 ) 이되면대부분이 하였다. 그래픽프로그램을사용하여양성대조 1(521bp) band에대한 % 로 DNA 양을측정하였다 (level A: 검체 0.3 μ Q tube, level B: 1 따 tube, level C: 7μ tube). 만성화될수있다. 일단만성화되면대부분이평생동안바이라스를가지고있게된다 ( 보균자또는보유자 ). 세계적으로전인구의약 5% 가 HBV 보균자인데우리나라의경우 7~8% 정도 m. 켜를를 과 로보고된다. 田 V는증식기에바이러스가자신의 DNA 중합효소 (pol ymerase) 를이용해서활발히증식한다. HBV 의 e 항원 (1 田 eag) 과 DNA(HBV HBV-PCR 양성군에서 HBeAg 양성은 11.5% (3/26), 음성은 88.5%(23/26) 이였다. HBV-PCR 음성군에서 f 田 eag 양성은 0% (1/1 1), 음성은 100%(11/11) 이였다 (Table 1). HBV-PCR 정량겸사에의한치료반응군과치료비반응군의초기간기능검사 (ALP, AST, ALP, GGT) 는두군간의유의한차이가없었다 (Table 2). DNA) 가양성이고, 전염력이높게된다. 비증식기가되면田 eag와田 V DNA가음성이되고 e 항체 ( 田 eab) 가나타나며전염력도떨어지게되는데, 바이러스의 DNA는숙주인사람의 DNA에통합 (integration) 된다 (Alter et al., 1976; Fagan and Williams, 1986). HBV 의증식을반영하는지표로가장먼저사용된것은 B형간염표면항원 (hepatitis B surface antigen; HBsAg) 01 다. 이항원은바이러 Table 2. Biochemical laboratory data from lamibudine-treated response group and non-response group. ALP* AST ALT GGT Responcse Group Non-response Group 81.4 1: 65.6 127.1 1: 246.7 198.5 1: 37 1.1 45.9 1: 56.8 74.1 1: 38.1 71. 1 1: 75.3 118.7 1: 182.7 41.1 1: 24.0 * : ALP, Alkaline phosphatase(iu/l); AST, Aspartate transferase(iu/l); ALT, Alanine transferase(iu/l); GGT, r -Glutamyl transferase(iu/l) 83

스의증식이없이간세포유전자에통합된田 V 유전자에의해서도생성이가능해서바이러스의 칩고문헌 증식을정확히반영할수없었다. 다음으로사용된것은 HBeAg, HBeAb 이다. HBeAg 양성인 1. Alter HJ, Seeff LB, et al. Type B hepatitis. The infectivity of blood positive for e antigen 때d 환자의감염력을일률적으로예측하기힘들고 B DNA polymerase after accidenta1 needle stick 형 간염의 임상적 경과와간조직 검사소견이 exposure. N Engl J Med 295:900-913, 1976 f핍eag 유무와일정한관계가있다고볼수없 2. Fagan EA, Williams R. Serological response to 다는보고가있었다 (Hoofuagle et al., 1981; Fatto- HBV infection. Gut 27:858-867, 1986 vich et al., 1984). 또, 혈중 HBV 의 DNA 중합효 3. Fattovich SV, Rugge M, et al. Clinical, virologic 소의활성도를바이러스의증식지표로사용하 and histologic outcome following seroconversion 려는시도가있었지만예민도의문제가있어도 from 1 田 eag to anti-hbe in chronic hepatitis B. 움이되지못하였다 ( 돼ndman et 떠., 1976; 최 등 Hepatol 4:1052 (Abstract), 1984 1988). 이후바이러스입자의존재를의미하는 4. Fowler MJF, Monjardino J, et al. Analysis of HBV-DNA 를직접 검출할수있는방법이 개 the molecu1ar state of HBV DNA in the liver 발되어 HBV 에의한간염의상태를판단하는기 and serum of patients with chronic hepatitis or 준이되었다. HBV-DNA를검출할수있는방법 primary liver cell carcinoma and the effect of 은 dot blot/slot blot, in situ hybridization, souther therapy with adenine arabinoside. Gut 25:611- blot, PCR 법이 있으나 (Hadziy때nis et al., 1983; 618, 1984 Krogsaard et al., 1985; Fowler et al.,1984; Shafritz, 5. Hadziyannis SH, Lieberman HM, et al. Analysis 1982), 이중 PCR 법이가장예민한방법이고손 of liver di않ase, nuclear 1표3cAg, 띠ral replication, 쉽게검사할수있어최근많이사용하고있다 and hepatitis B virus DNA in liver and serum of (Saiki et al., 1985). 간염의치료는인터페론요법 f 田 eag vs. anti-hbe positive c따riers of hepatitis 이시행되어왔으나치료효율이떨어지는단점 B virus. Hepatol 3:656-662, 1983 이 있어, 최근라미뷰딘치료가시행되고있다. 6. 돼ndman SH, Gravelle CR, et al. "e" antigen, 라미뷰딘은치료종결후다시바이러스가등장 Dane particles, and serum polymerase activity in 하는단점이있으나초기치료효율이좋아각 HBsAg carriers. Ann Intern Med 85:458-460, 광받고있다. 이치료법의효과판정을위한바 1976 이러스표지검사는대표적으로田 eag과田 V 7. H lfuagle JH, Duseiko GM, et al. Seroconversion DNA 정량검사로치료가잘되면이 두가지 from hepatitis B e antigen to antilxxly in chronic 표지자가음성으로전환된다. 본실험에서두표 type B hepatitis. Ann Intern Med 94:744-748, 지자의의미를파악한결과 HBeAg 보다는 HBV 1981 DNA 검사가치료판정에더 의미가있는정보 8. Krogsaard K, Aldershivile J, et al. Hepatitis B 를준다는것이밝혀졌다. 향후간염치료의판정 virus DNA, HBeAg and delta infection during 이나간염의상태, 예후판정, 간염바이러스보 the course from acute to chronic hepatitis B virus 유자의전염력판정의척도등에 HBV DNA를 infection. Hepatol 5:778-782, 1985 이용하는것이더효율적이라고사료된다. 9. Sa퍼 RK, Sc뼈야S, et 떠.En장/ffiatic amplification of B-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia. 84

Science 230: 1350-1354, 1985 10. Shafritz DA. Hepatitis B virus DNA molecules in the liver of hepatitis B surface antigen carriers: mechanistic considerations in the pathogenesis of hepatocellular carcinoma. Hepatol 2 (Suppl):35s- 45s, 1982 11. 최상운, 김정룡, 이효석등. 간염 B 바이러스 DNA polymerase 활성도와田 eag 의관계. 대한소화기병학회잡지 20:112-117, 1988 85