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한방안이비인후피부과학회지제 31 권제 1 호 (2018 년 2 월 ) J Korean Med Ophthalmol Otolaryngol Dermatol 2018;31(1):32-41 pissn 1738-6640 eissn 2234-4020 http://www.ood.or.kr http://dx.doi.org/10.6114/jkood.2018.31.1.032 Original Article / 원저 Angelica gigas 에탄올추출물의 Hyaluronic acid 합성효과에대한실험적연구 박혜수 1) 하헌용 2) 김희택 1)* 1) 세명대학교한의과대학한방안이비인후피부과학교실 2) 서원대학교제약공학과 An Experimental Study on the Effect of Angelica gigas Ethanol Extract on Hyaluronic Acid Synthesis Hye-Su Park 1) Hun-Yong Ha 2) Hee-Taek Kim 1)* 1) Department of Korean Medical Ophthalmology & Otolaryngology & Dermatology, College of Korean Medicine, Semyung University 2) Department of Pharmaceutical Science & Engineering, Seowon University Abstract Objectives : Hyaluronic acid(ha) is a mucopolysaccharide, occuring naturally in living organisms. It is one of the most hydrophilic molecules, so it has been known as being related to skin hydration and skin aging. The purpose of this study is to examine the effects of Angelica gigas(a. gigas) ethanol extract on hyaluronic acid synthesis. Methods : To determine cytotoxicity and hyaluronic acid synthase 2 gene expression, hyaluronic acid production in HaCaT cells, MTT assay and RT-PCR ELISA was used. Results : There were no cytotoxicity in 50 μg / ml concentration A. gigas extract in MTT assay. Hyaluronic acid synthase 2(HAS2) gene expression was increased by all treated concentration A. gigas extract. Hyaluronic acid production was higher than control group in 50 μg / ml & 100 μg / ml concentration A. gigas extract. Conclusions : Hyaluronic acid production was increased by A. gigas extracts. Therefore, We suggest that A. gigas can make a contribution to the moisturizing effect on human skin. Key words : Angelica gigas; Hyaluronic acid; Hyaluronic acid synthesis; Moisturizing effect; HAS2 c 2018 the Society of Korean Medicine Ophthalmology & Otolaryngology & Dermatology This is an Open Access journal distributed under the terms of the Creative Commons Attribution Non-Commercial License (http://creativecommons.org/license/by-nc/3.0/) which permits unrestricted non-commercial use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited. 32

박혜수외 2 인 : Angelica gigas 에탄올추출물의 Hyaluronic acid 합성효과에대한실험적연구 Ⅰ. 서론 인체의표면에위치하는피부조직은표피, 진피, 피 하지방층의세층으로구성되어있으며외부에서들어오는세균의침입과각종물리적및화학적자극으로부터보호해주고체내수분을보호하여인체의항상성을유지하는기능을수행하고있다 1). 표피의최외곽층인각질층은피부의강력한물리적인장벽과투과장벽기능을하고표피의항상성을유지하며 1-3), 특히각질층은정상인의경우 10~20% 가량의수분을함유하고있어피부보습을증가시키고수분의증발을막아건강하고탄력있는피부유지및피부노화를방지한다 4). 히알루론산 (hyaluronic acid, HA) 은고점도성, 보습성, 생체적합성의특징을지닌수용성다당류의생체고분자물질로서 8) 조직의수분보유, 세포성장인자및영양성분의저장과확산, 면역조절등에관여하는것으로보고된바있다 8-10). 노화에따른 HA 양의감소는피부보습장벽의결함으로표피를위축시켜피부의주름증가, 탄력감소및수분함유량감소의직접적인원인중하나로여겨지고있다 8-10). 피부에서 HA의함량은 hyaluronic acid synthase(has) 에의한합성과 Hyaluronidase(HYAL) 에의한분해에의해조절되며 11), 최근 HAS 유전자발현증가를통해 HA의합성을조절하여보습력및항노화기능을향상시키고자하는연구가다양하게이루어지고있다 9-12). 당귀 ( 當歸 ) 는미나리과 ( 산형과 ; Umbelliferae) 에속한당귀의다년생초본의뿌리를건조시킨것으로甘味는補하고辛未는酸하며溫性은通氣하여補血活血, 行氣止痛하는대표적인보혈제의효능과더불어 Corresponding author : Hee-Taek Kim, 65, Semyung-ro, Jecheon-City, Chungbuk, Korea (Tel: 043-649-1817, E-mail: kht8725c@naver.com) Recieved 2018/1/9 Revised 2018/2/2 Accepted 2018/2/9 散瘀消腫하여외과질환에도다용하여왔다 13). 특히당귀를군약으로하는당귀음자는보혈기능과항알러지작용및면역조절을통해건선, 아토피피부염등다양한피부질환에운용되고있다 14-18). 당귀는기원식물에따라참당귀 (Angelica gigas Nakai), 일당귀 (Angelica acutiloaba Kitag.), 중국당귀 [Angelica sinensis(oliv.) Diels] 로나뉘며국내에서는참당귀와일당귀가약재로서활용되고있다 12). 기존연구에의하면참당귀는피부미백및자외선차단효과 19,20), 콜라겐합성증가로인한항주름효과 21), 항암및항스트레스효과 22) 등이보고된바있으며, 자외선흡수도측정, 항산화시험, 미백효과시험, 주름개선효과시험및안전성시험을통해참당귀의화장품소재로서의응용가능성이연구된바있으나 23), 참당귀의피부보습효과에관한연구는미흡한단계이다. 본연구에서는참당귀의 HA 합성촉진을통한피부보습효과를정량적으로평가하여유의한결과를얻었기에다음과같이보고하고자한다. Ⅱ. 연구대상및방법 1. 재료및방법 1) 세포배양및실험조건실험에사용한 HaCaT 세포주는미국 ATCC 로부터분양받아사용하였으며, HaCaT 세포는 Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM, Gibco) 에 10% Fetal bovine serum (FBS, Gibco) 과 1% penicillin-streptomycin (PS, Gibco) 이함유된배지에서 37, 5% CO 2 조건에서배양하였다. 2) 시약참당귀 (A. gigas) 는퓨어마인드제약 ( 경북, 영천 ) 에서구입하였으며시료는세명대학교한방바이오융합 33

한방안이비인후피부과학회지제 31 권제 1 호 (2018 년 2 월 ) 과학부천연물실험실에보관하여사용하였다. 약재는 100g을측정하여 70% (v/v) 에탄올용매에담가냉침한뒤여과하여 Bottle 에포집하였고이과정을 3회반복하였다. 감압농축기로농축한이후에동결건조하여실험에사용하였다. 2. 방법 1) 세포배양및독성실험세포를 2 10 5 / ml농도로 96 well plate에 seeding 하였다. 24시간후에 serum-free DMEM으로교체해준후에 A. gigas 추출물로시료를처리하였다. 24시간동안배양해준후에 media 를걷어내고 20μl의 3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazo lium bromide (MTT, 5mg / ml ) 을넣어주고 CO2 배양기에서 2시간배양하였다. 100μl의 DMSO로결정을용해시킨후에 570nm에서흡광도를측정하였다. 생존율은 control과비교하여 % 로표시하였다. 세포에처리한샘플에포함된 DMSO 는최종농도 0.1% 에맞추었다. 2) RT-PCR 세포를 2 10 5 / ml농도로 6 well plate에 seeding 하였다. 24시간후에 serum-free DMEM으로교체해준후에 A. gigas 추출물을처리해주었다. 최종 DMSO 는농도는 0.1% 로맞추어주었다. 24시간동안배양해준후에 easyblue (intron) 로 RNA를추출하였 다. RNA 농도와순도 (OD260 / OD280) 를측정한후에 2μg RNA로 power cdna synthesis kit (intron) 을이용하여 cdna 합성을하였다. PCR 은 premix PCR kit (Solgent) 을이용하였다. PCR product는 1.5% agarose gel에전기영동하여밴드를확인하였다. All-trans-retinoic acid (ATRA, sigma) 1µM을양성대조군으로사용하였다. Primer는기존논문에보고된 sequence로제작하였다 (Table 1) 20). 3) ELISA 세포를 2 x 105/ ml농도로 6 well plate 에 seeding 하였다. 24시간후에 serum-free DMEM 으로 2번 washing 해준후에 serum-free DMEM 를새로교체하고샘플을처리해주었다. DMSO 는 0.1% 로맞추어주었다. 15분후에 350μl의 media 를걷어내었고다시 15분후에동량걷어내었고, 다시 15분후에 1차례더동량걷어내었다. 15,000 x g에서 5분간원심분리하고상층액을걷어내어 ELISA를수행할때까지 -20 에서보관하였다. ELISA는 HA-ELISA kit (echelon) 를이용하였으며제조사에서제공한방법에의해진행하였다. ATRA 1µM을양성대조군으로사용하였다. 4) 통계통계는 Student's t-test를이용하였으며유의성기준을 p-value가 0.05 미만일경우로설정하였다. Table 1. Primers Sequence Gene Direction Sequence (5' 3') Size (bp) HAS2 Forward GCT ACC AGT TTA TCC AAA CG (20 mer) Reverse GTG ACT CAT CTG TCT CAC CG (20 mer) GAPDH Forward ATT GTT GCC ATC AAT GAC CC (20 mer) Reverse AGT AGA GGC AGG GAT GAT GT (20 mer) PCR 조건은다음과같다. 94 15 min, 32~35 cycles: 94 30s 50 30s 72 60s 72 10 min 최종합성. 393 546 34

박혜수외 2 인 : Angelica gigas 에탄올추출물의 Hyaluronic acid 합성효과에대한실험적연구 Ⅲ. 결과 1. MTT assay 70% 에탄올 A. gigas 추출물의세포독성을확인하기위하여 MTT assay 를시행하였다. 추출물을 10, 50, 100, 200μg / ml로처리한범위에서그생존율을확인하였다. 각농도별생존율은양성대조군인 ATRA 에비하여 10μg / ml에서 102.11% 50μg / ml에서 111.06%, 100μg / ml에서 120.82%, 200μg / ml에서 87.49% 로모든농도범위에서뚜렷한세포독성을나타내지않아생물학적으로비교적안전한물질임을확인할수있었다 (Fig. 1). 1 2 3 4 5 6 HAS2 GAPDH Fig. 2. RT-PCR Results. 1 : DNA Ladder 2 : 0.1% DMSO - 10μL 3 : 1 μm ATRA - 10μL 4 : 50 μg/ml A. gigas Ethanol Extract - 10μL 5 : 100 μg/ml A. gigas Ethanol Extract - 10μL 6 : 200 μg/ml A. gigas Ethanol Extract - 10μL 3. HA-ELISA assay Fig. 1. Effect of Angelica Gigas Ethanol Extract on Viability of HaCaT Cells. Viability of HaCaT cells treated with test compounds (10~ 200 μg/ml) for 24 h was analyzed by MTT assay. Values represent the mean±sd of three independent measurements. 2. A. gigas 의 HAS2 유전자발현증가 70% 에탄올 A. gigas 추출물의 HAS2 유전자의발현여부를확인하기위하여 RT-PCR 을시행하였다. 모든농도의 70% 에탄올 A. gigas 추출물처리군에서 HAS2 유전자가발현되었음을확인하였으며, 특히 100μg/mL 및 200μg/mL 처리군에서밴드가가장뚜렷하게발현되었다 (Fig. 2). 70% 에탄올 A. gigas 추출물을 50, 100, 200μg / ml처리했을때 HA의생성량을확인하기위해 ELISA kit를사용하였다. 50μg / ml처리한샘플군에서는 HA 의생성량이 15분, 30분, 45분, 60분에서각각 498.10, 560.62, 531.96, 499.08이었고, 100μg / ml처리한샘플군에서는 449.26, 489.49, 456.57, 412.82 이었으며 200μg / ml처리샘플군에서는 118.39, 139.07, 132.35, 101.84로시료처리후 30분에서 HA 생성량이가장높게나타났으며, 시료처리후 15분, 45분, 60분의순대로 HA의생성량이높게나타나는것을확인하였다 (Fig. 3,4,5,6). A. gigas 추출물처리군의경우 50μg / ml, 100μg / ml, 200μg / ml의순으로 HA의생성량이높았으며, 200μg / ml처리한샘플의경우 DMSO 0.1% 처리한 vehicle 군에비하여오히려 HA생성량이낮았는데이는 200μg / ml의농도에서보이는 A. gigas 추출물의세포독성에기인한것으로생각된다. 35

한방안이비인후피부과학회지제 31 권제 1 호 (2018 년 2 월 ) Ⅳ. 고찰피부의노화는세월이흘러감에따라자연스럽게나타나는내인적노화와외부환경자극에의한외인적노화가상호작용하여피부의구조적, 기능적변화혹은생화학적변화를초래하는현상이다 10). 노화된피부는표피두께감소와표피내랑게르한스세포및 멜라닌세포수와기능의감소로인한면역기능및색소침착반응감소, 진피두께감소와진피내아교질결핍및탄력섬유감소로인한주름형성및탄력감소, 상처치유능력의감소, 피부의양성및악성종양의증가, 피부면역및항산화방어기능감소, 비타민D 합성의감소와같은다양한조직학적및기능적저하가발생하는데이중가장대표적인현상은주름의발생, 탄력의감소및건조한피부이다 1,10). 노화된피 Fig. 3. Hyaluronic Acid Production (μg/ml) - 15min 50 : 50 μg/ml Angelica gigas Ethanol Extract treated group 100 : 100 μg/ml Angelica gigas Ethanol Extract treated group 200 : 200 μg/ml Angelica gigas Ethanol Extract treated group ATRA : Retinoic Acid treated group Values represent the mean±sd of three independent measurements. Values with different superscripts are significantly different (p<0.05) by Student's t-test. Fig. 5. Hyaluronic Acid Production (μg/ml) - 45min 50 : 50 μg/ml Angelica gigas Ethanol Extract treated group 100 : 100 μg/ml Angelica gigas Ethanol Extract treated group 200 : 200 μg/ml Angelica gigas Ethanol Extract treated group ATRA : Retinoic Acid treated group Values represent the mean±sd of three independent measurements. Values with different superscripts are significantly different (p<0.05) by Student's t-test. Fig. 4. Hyaluronic Acid Production (μg/ml) - 30min 50 : 50 μg/ml Angelica gigas Ethanol Extract treated group 100 : 100 μg/ml Angelica gigas Ethanol Extract treated group 200 : 200 μg/ml Angelica gigas Ethanol Extract treated group ATRA : Retinoic Acid treated group Values represent the mean±sd of three independent measurements. Values with different superscripts are significantly different (p<0.05) by Student's t-test. Fig. 6. Hyaluronic Acid Production (μg/ml) - 60min 50 : 50 μg/ml Angelica gigas Ethanol Extract treated group 100 : 100 μg/ml Angelica gigas Ethanol Extract treated group 200 : 200 μg/ml Angelica gigas Ethanol Extract treated group ATRA : Retinoic Acid treated group Values represent the mean±sd of three independent measurements. Values with different superscripts are significantly different (p<0.05) by Student's t-test. 36

박혜수외 2 인 : Angelica gigas 에탄올추출물의 Hyaluronic acid 합성효과에대한실험적연구 부에서는피부진피의기질단백질중아교질원섬유의길이와분포가손상되며양이감소하고탄력섬유가변성되어그결과피부주름및탄력감소등의증상을초래하며표피의각질층내수분함유량이 10-20% 정도를유지하지못하고감소하게되면건조피부및가려움등을유발하여피부의노화를촉진시키게된다 1,4). 한의학적관점에서피부는인체의최외곽에위치하여일차방어선으로서중요한역할을담당하며표피와대응하는한의학적개념은 膚腠 로볼수있다 5). 膚는신체의표피이고, 腠는肌肉의紋理인데, < 雜病源流犀燭 > 에서는 皮也者所以包涵肌肉防衛筋骨者也 라하여고인들은膚腠가담장과유사한기능을한다고인식하였다. 특히腠는津液의滲泄을주관함으로써 5), 몸안의수분을배설하고氣血을통하게하여外邪의침범을방어하는기능을한다 6). 또한표피와진피및피하지방층은통틀어 肌膚 에해당한다고볼수있으며한의학의肌膚는脾에속한다고하여노화에의한주름의발생은脾臟기능저하로肌膚가자양받지못해발생하는현상으로본다 25). 肺의선발작용을통해散布된衛氣가외부자극으로인한피부수분손실을방지하고腠理개합을조절하고津液을輸布함으로써피부를촉촉하게유지시켜주는반면노화로인해肺가손상되어衛氣와津液이輸布하지못하면피부내부의윤택함이소실되어피부건조를유발하게되며 25), 보습기능의저하를 燥 로파악하고그원인을 血少 와 金受熱 등으로보아보습의작용을 潤燥 라고하여 補血養血 의치료법을중시하였다 26). 또한일반적으로모든소양감은虛로보는데血虛의소양은벌레가피부를기는듯하여참기어려운심한가려움및통증을유발한다하여補血養血을중시하였으며 5), 체내精氣와津液을자양하지못하거나영양공급에이상이초래되면피부에병변이나타나게된다고하였다 7). 이와같이한의학적관점에서도표피의보습기능을적절히유지하는것이다양한피부병변을예방하고건강한피부를유지하여노화를방지하는데에중요한역할을한다고볼수있다. 히알루론산 (Hyaluronic acid, HA) 은콜라겐및엘라스틴과함께피부 3대요소중하나로인체피부의대부분을차지하는 Glycosaminoglycan(GAG) 로서 N-acetyl-D-glucosamine 과 D-glucuronic acid 가교대로결합한 disaccharide 반복단위의종합체로분자량이 20~40만에달하는직쇄상의고분자화합물이다 9,10,12). 포유류의체내에존재하는 HA는관절액의주성분이고 50% 이상이표피의세포간간격과진피의세포외기질에분포한다고보고되어있으며주로표피의각질형성세포와진피의섬유아세포에의해 2 4.5 일의주기로합성되어수분보유능력을통한조직의수분유지, 세포간간격유지, 세포의분열과분화, 세포의성장인자및영상성분의저장과확산, 조직치유반응등에관여한다고보고된바있다 8-10). 피부세포배양상태에서 HA의합성은 trans forming growth factorβ (TGF-β), platelet-derived growth factor-bb (PDGF-BB), fibroblast growth factor (FGF), epidermal growth factor (EGF) 와같은다양한성장인자와 trans-retinoic acid, N-metyl-L-serine 등에의해증가된다는보고가있으나대사에대한자세한메커니즘은정확히밝혀지지않았으며다만 HA 의합성은세포막의내측표면에서히알루론산합성효소 (Hyaluronic acid synthase, HAS) 에의해진행되며세포외기질에축적된다고알려져있다 9,10). HA의양은노화에따라함량이줄어든다고보고되어있으며수분증발을막는장벽인 HA의함량감소는거칠고건조한피부, 각질의부적절한탈락으로인한피부탄력저하, 피부주름의주요한요인이된다고알려져있다 11). 한편현대사회의소득수준및삶의질향상으로인한미에대한관심및젊은피부를유지하려는욕구가증가하면서피부보습과그와관련된 HA 에대한관심도가증대되어 HA의합성을증가하여피부의보습력을강화시키려는연구가진행되어오고있으며한약재를이용한대표적인연구로는송등 10) 의천궁으로부터분리된 ferulic acid, 이등 11) 의황기메탄올추출물, 정등 27) 의황금에탄올추출물, 유등 37

한방안이비인후피부과학회지제 31 권제 1 호 (2018 년 2 월 ) 2) 의회향메탄올추출물, 강등 12) 의일당귀에탄올추출물, 홍등 28) 의갈근에탄올추출물등이있다. 血病의요약으로불리는당귀는한의학의대표적인보혈제로서산형과에속한다년생초본인당귀의뿌리를늦가을부터이듬해봄새싹이돋기전에채취하여진흙을제거한뒤수일동안건조한것으로국내에서는참당귀, 일본에서는일당귀, 중국에서는중국당귀를기원으로한다 13,29,30). 당귀는신농본초경 ( 神農本草經 ) 中品에수록된이래寶血活血, 行氣調經止痛, 潤燥滑腸등의효능으로한의학계임상에서부인과및외과질환에활용되는한약재로서감초, 생강과함께최다빈용약물에속한다 13,30). 당귀의약리작용으로는조혈계통및심혈관계통에대한작용, 자궁의발육촉진과조절작용, 항염작용, 진통작용, 면역증강작용, 말초순환장애개선작용, 진정작용등의효능이보고되어있으며혈류개선효과로혈액순환을도와주어주름개선및노화방지와조직재생에도움이된다고알려져있다 30,31). 당귀는기원에따라참당귀, 일당귀, 중국당귀의 3종으로분류할수있으며이들은각각외형적차이뿐만아니라이화학적성분및구성생화합물의약리작용에서도차이가있는것으로보고되어있다 13,31). 당귀의기원식물및기미의차이에따라補血에는참당귀보다甘한일당귀를사용하고活血祛瘀에는일당귀보다苦한참당귀를사용하는것이일반적이다 13). 이중참당귀는강등 30) 의연구에서 cyclophosphamide로유발된흰쥐의빈혈에있어조혈작용이일당귀와중국당귀에비해뛰어나다는것이보고되었고오등 32) 의연구에서혈관신생작용과혈관이완효과가입증되었으며피부미용에서중요한요소인혈류개선효과및혈액순환을도와피부조직재생을통한자외선차단효과와피부미백에도효과가있다고보고된바있다 19,23). 현대사회의미에대한욕구증가로인해피부보습에대한관심이증대하는반면최근까지당귀의보습효과에대한연구는미흡한단계이며최근일당귀의 HA 합성촉진으로인한보습효능에관한연구가수행된바있 으나 12), 국내에서비교적안정적으로대량수확이가능하며수입품인일당귀에비해저렴한가격으로구할수있는참당귀의약재활용가치가더욱탁월하기때문에참당귀의보습효과에대한연구가지속적으로필요하다고볼수있다. 일당귀추출물의세포독성을확인하기위해추출물의농도를 10, 50, 100, 200μg / ml로처리한 MTT assay에서각농도별생존율은대조군에비하여 10μg / ml에서 102.11%, 50μg / ml에서 111.06%, 100μg / ml에서 120.82%, 200μg / ml에서 87.49% 로모든농도범위에서뚜렷한세포독성을보이지않았다. HA는주로각질형성세포와섬유아세포의 hyaluronic acid synthase(has) 에의해합성되고 2), 피부에서 HA의함량은 HAS에의한합성과 Hyaluronidase(HYAL) 에의한분해에의해조절되며 11), 특히 HAS 유전자중 HAS2 와 HAS3는히알루론산합성에중대한역할을하는것으로보고된바있다. 12) 참당귀추출물의 HAS2 유전자의발현여부를확인하기위해시행한 RT-PCR 에서는모든농도의 70% 에탄올참당귀추출물처리군에서 HAS 2 유전자가발현되었음을확인하였으며, 이는처리농도범위에서보습효과와관련된 HA 합성을유도한다는것을보여준다. 또한모든농도에서유전자의발현이확인되었으나, 특히 100μg / ml의농도에서유전자의발현이비교적뚜렷하게나타난것을확인할수있었다. 고농도인 200μg / ml에서 HAS2 유전자의발현이약간감소되는현상이확인되었으며, 이는세포생존율에서확인된미약한세포독성과관련이있을것으로판단된다. 참당귀추출물의 HA의생성량을확인하기위해시행한 ELISA에서는 50μg / ml처리한샘플군에서 HA의생성량이 15분, 30분, 45분, 60분에서각각 498.10, 560.62, 531.96, 499.08, 100μg / ml처리한샘플군에서는 449.26, 489.49, 456.57, 412.82, 200μg / ml처리샘플군에서는 118.39, 139.07, 132.35, 101.84로시료처리후 30분에서 HA 생성량이가장높게나타났 38

박혜수외 2 인 : Angelica gigas 에탄올추출물의 Hyaluronic acid 합성효과에대한실험적연구 으며 15분, 45분, 60분을처리한순대로 HA의생성량이높았다. 참당귀추출물처리군의경우 50μg / ml, 100μg / ml, 200μg / ml의순으로 HA의생성량이높았으며, 200μg / ml처리한샘플의경우 DMSO 0.1% 처리한 vehicle 군에비하여오히려 HA생성량이낮았는데이는 200μg / ml의농도에서보이는참당귀추출물의세포독성에기인한것으로보인다. 각각의실험결과는 student's t-test 를이용하여양성대조군인 ATRA와비교하였을때통계적으로유의한결과임을확인하였다 (p<0.05). 이상으로본연구에서참당귀추출물의 HA 합성에대해시험한결과특정농도에서비교적유의한효과를보임을알수있었다. 다만본연구는 HA합성에대한보습효과의검정이 3종의당귀중참당귀에한해이루어졌으며, 추출물을 50, 100, 200μg / ml의농도에서처리하여그효과를시험하였으나 100μg / ml이상농도에서보인미약한세포독성으로 HA의합성으로인한보습효과를기대하기에가장적정한농도를찾기가어렵고, 고농도인 200μg / ml에서 HAS2 유전자의발현이약간감소되는현상에대한정확한원인을알수없다는한계가있다. 추후당귀 3종에대한 HA의합성에관한보습효과비교및세포독성을보이지않는저농도에서최고효율을나타내는농도를찾고고농도처리군에서 HAS2 유전자발현감소현상의정확한원인을파악하기위한추가적인연구가필요할것으로사료된다. Ⅴ. 결론 A. gigas 의 HA 합성효과를알아보기위해 HaCaT cell 을이용하여세포독성, HAS2 유전자발현, HA 합성량을측정한결과다음과같은결론을얻었다. 1. A. gigas 추출물은 100μg / ml의범위에서인체유래 각질세포에대하여뚜렷한세포독성을나타내지않았으며, 200μg / ml의농도에서는저농도와비교하였을때미약한세포독성반응이확인되었다. 2. HaCaT cell에서 A. gigas 추출물은모든시료처리농도에서 HAS2 유전자의발현량을증가시켰다. 3. A. gigas 추출물을 50, 100μg / ml로처리한샘플의경우 DMSO 0.1% 처리한 vehicle 군과비교하여 HA 생성량이높았고 200μg / ml처리시에는 vehicle 군에비하여그생성량이뚜렷하게증가하지는않았으나, HA의합성을유도할수있음을확인하였다. 감사의글이논문은 2015학년도세명대학교교내학술연구비지원에의해수행된연구임 References 1. KDA Textbook Editing Board. Textbook of Dermatology. 6th edition. Seoul:medbook. 2014:2-3,697-703. 2. Yu HY, Yang IJ, V.R Lincha, Park IS, Lee DU, Shin HM. The Effects of the Fruits of Foeniculum vulgare on Skin Barrier Function and Hyaluronic Acid Production in HaCaT Keratinocytes. Journal of Life Science. 2015;25(8):880-8. 3. Park CS. Epidermal Homeostasis and Dry Skin Management. J Soc Cosmet Scientists Korea. 2008;34(1):1-8. 4. Kim DS, Jeon BK, Mun YJ, Kim YM, Lee YE, Woo WH. Effect of Dioscorea Aimadoimo on Anti-aging and Skin Moisture Capacity. Korean J Oriental Physiology & 39

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