J Dent Hyg Sci Vol. 16, No. 2, 2016, pp.176-182 http://dx.doi.org/10.17135/jdhs.2016.16.2.176 RESEARCH ARTICLE 치약용약효제의적용시간에따른실험실적효능연구 안재현 ㆍ김지혜ㆍ김지영 ( 주 ) 엘지생활건강기술연구원 Evaluation of In-Vitro Efficacy of Active Ingredients in Dentifrice Used for Different Treatment Times Jae-Hyun Ahn, Ji-Hye Kim, and Ji-Young Kim LG Household & Health Care Research Park, Daejeon 34114, Korea The purpose of this study was to evaluate the in-vitro efficacy of the active ingredients of dentifrice following treatment time. The whitening effect was evaluated by a change in lightness value relative to the contact time of hydrogen peroxide, by using artificially stained hydroxyapatite discs. The anti-calculus effect was assessed based on the amount of calcium eluted from the human dental calculus by sodium pyrophosphate. Remineralization was evaluated by the Vickers hardness test following the application of sodium fluoride to bovine enamel. In order to view dentinal tubules occlusion, the formation of insoluble calcium salts by bovine dentin specimens was observed using scanning electron microscopy. Change in lightness value ( L) was 5.50±1.51 after 1 min of treatment, 5.73±0.43 after 3 min, 8.64±0.24 after 10 min, 18.93±0.76 after 30 min, and 27.35±0.54 after 60 min. The amount of calcium eluted from the human dental calculus was 4.23±0.14 ppm after 1 min of treatment, 4.51±0.04 ppm after 3 min, 12.12±0.16 ppm after 10 min, 17.85±0.81 ppm after 30 min, and 25.15±0.32 ppm after 60 min. The Vickers hardness change value ( VHN) was 1.96±1.44 after 1 min, 1.52±1.06 after 3 min, 9.06±0.15 after 10 min, 10.83±5.13 after 30 min, and 12.55±2.09 after 60 min. Partial dentinal tubules occlusion was observed at 10 min and complete occlusion was evident at 60 min. In summary, the use of patch type dentifrices for 10, 30, or 60 min were 1.57 to 8.26 times more effective than using the paste type dentifrices for 1 to 3 min. Based on these findings, it is reasonable to expect that the use of patch type dentifrices for 10 min would lead to remineralization, anti-calculus and dentinal tubules occlusion effects, and that use for 30 min would result in a whitening effect. Key Words: Active ingredient, Dentifrice, Patch, Treatment time 서론 우리가사용하고있는페이스트형 ( 연고형 ) 치약의발명은약 120년전인 1896년미국의 Colgate-Palmolive사에서개발하여제품화되었으며, 현재까지도전세계시장의주된제품이되고있다 1). 치약을페이스트제형을나타내는 paste 와치아를결합하여 toothpaste라고표현하는데, 페이스트치약은칫솔모위에짜서 1 3분간칫솔로문지른후헹구어내는편리한사용방법으로치약의대표적제형이되었 다. 그러나 Yoon과 Han 2) 이보고한초등학생을대상으로한칫솔질행동에관련된연구보고에의하면전체대상자 446 명중약 60% 이상이 30초에서 2분가량칫솔질을하는것으로조사되었으며, 칫솔질의중요성을교육받고인식하고있는치위생학과의학생들을대상으로한 Lim과 Hwang 3) 의조사에서는초등학생들보다는긴칫솔질시간을나타내었으나약 4분이상칫솔질하는사람은 25% 에불과하였다. 이러한페이스트치약은칫솔질과함께치약중의세마제등에의한물리적세정은가능하지만너무짧은사용시간으 Received: March 10, 2016, Revised: March 25, 2016, Accepted: April 3, 2016 Correspondence to: Jae-Hyun Ahn LG Household & Health Care Research Park, 175 Gajeong-ro, Yusung-gu, Daejeon 34114, Korea Tel: +82-42-860-8821, Fax: +82-42-863-2073, E-mail: jhahnjhahn@hanmail.net ISSN 1598-4478 (Print) / ISSN 2233-7679 (Online) Copyright 2016 by Journal of Dental Hygiene Science This is an Open Access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution Non-Commercial License (http://creativecommons.org/licenses/ by-nc/4.0) which permits unrestricted non-commercial use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited.
안재현외 : 치약용약효제의적용시간에따른실험실적효능연구 로구강내에불소등의약물을전달하기에는한계가있다. 또한유효성분의종류에따라구강내사용시타액과의혼합및희석으로인한유효성분의불활성화또는한계치이하의농도로효능을기대하기어려웠다. 이러한점을보완하기위한연구가 80년대후반부터시작되었는데, 기존의페이스트치약에서점착성이강한고분자성물질이나유효성분과친화성이좋은계면활성을가지는소재를적용하여칫솔질후구강내에오랫동안유효성분을잔류시킬수있는치약에대한연구가대부분이었다. 많은연구들이항균제인 triclosan에초점을맞추었는데, 대표적인연구로 Nabi 등 4) 은치약에 polyvinyl methyl ether/ maleic acid copolymer (PVM/MA) 고분자를농도별로첨가하여 triclosan을치아나잇몸조직에오랫동안잔존시킬수있음을발표하였으며, Gaffar 등 5) 은이러한잔존효과로치약중에 PVM/MA를사용할경우치석의형성을억제할수있음을발표한바있다. Nabi와 Gaffar 6) 는이러한연구를기반으로특허를얻게되었으며이것이치약시장의새로운기술로부각되어왔다. 실리카를연마제로사용하고불소를기본으로하는치약중에 0.3% 의 triclosan과 2.0% 의 PVM/MA copolymer를사용하여칫솔질후에도유효성분을잔류시키고접촉시간을연장하여효능을증가시킨치약에대한수많은실험실적및임상적효능평가에대한연구가세계여러나라에서발표되었으며 7-12) 미국 Colgate사의콜게이트토탈 (Colgate Total; Colgate-Palmolive, New York, NY, USA ) 이라는브랜드로세계치약시장을선도하는제품이되었다. Ma 등 13) 은치약중에점착성이강한고분자를사용하지않고분자내친수성과친유성기능을함께가지는 ursodesoxycholic acid를사용하여실험실적으로 hydroxyapatite disk에서잔류효과와임상적으로치은염및치석형성억제효과가나타남을연구발표한바있다. 이러한연구는짧은양치시간이후에치면또는잇몸에유효성분을잔류시켜효능을극대화하려고하였으나, 실제잔류량은사용농도보다극히미량이어서효능을나타내기에는부족하고결국은타액에희석되어사람이섭취하게되는문제점이있다. Chae 등 14) 은치약에사용되는비타민종류의항산화제와항염제등을나노에멀전젤형태의치약으로만들어구강내병소또는창상이있는국소부위에도포하고장시간경과후상태가호전된증례를보고한바있다. 한편 Park 등 15) 과 Im 등 16) 은고분자로만들어진필름형태의제형에불소성분을첨가한후기존의불소바니쉬와비교하여접촉시간대별로나타나는효능을비교연구하였다. 지금까지살펴본연구들을종합해보면유효성분을구강내오랫동안잔류시키거나유효성분의접촉시간을늘리면 효능을극대화할수있다는것을알수있다. 저자들은이러한점에서기존의페이스트치약의사용시간이짧은단점을보완하여장시간사용할수있고필요부위에집중적으로접촉할수있는치약제제를연구개발중에있다. 본보고는사전평가연구단계로, 실험실적평가를통하여적절한사용시간에대한객관적지표를예측하기위해치약에사용되고있는대표적유효성분을사용하여접촉시간대별로나타나는효능을비교평가하고자하였다. 연구대상및방법 1. 재광화효과 1) 우치법랑질시편제조소의영구절치로부터직경 3 mm의원통형의법랑질을 drilling하여취한후 acrylic resin을이용하여아크릴봉에고정시키고 #120, #400, #600, #800, #1,200번연마지 (carbimet; Buehler, Lake Bluff, IL, USA) 를이용하여순차적으로시편표면을연마하였다. 수산화인산칼슘이포함된 0.1 M 젖산과 Carbopol (Ultrez 10; Lubrizol Advanced Materials Co., Brecksville, OH, USA) 을이용하여 ph 5.0 의 0.1 M 젖산용액을제조한후시편을 72시간처리하여탈회시키고표면미세경도측정기 (MVK-E; AKASHI, Tokyo, Japan) 로시편표면의좌우상하 4부위에표면경도 (Vickers hardness number) 를측정하였으며시편의법랑질표면이직각이되도록위치한다음 200 g의하중으로 10초간압인한후현미경으로 400배의배율에서압흔의크기를계측하여법랑질표면경도를측정하였다. 탈회된시편의초기표면경도값이 28 45 범위의값을갖는시편 30개를선정하여실험에사용하였다. 2) 인공타액의제조인공타액은증류수 1,000 ml 중에 potassium chloride (KCl) 624.6 mg, sodium chloride (NaCl) 866.6 mg, potassium phosphate dibasic (K 2HPO 4) 33.8 mg, magnesium chloride (MgCl 2) 59.6 mg, calcium chloride dehydrate (CaCl 2 2H 2O) 166.6 mg이함유되도록제조하여냉장보관하면서사용하였다. 3) 재광화효과평가우치시편을표면미세경도측정기로초기표면경도를측정하고 0.22% 불화나트륨용액 (NaF) 10 ml와인공타액 5 ml를첨가한용액을사용하여접촉시간을 1분, 3분, 10분, 177
J Dent Hyg Sci Vol. 16, No. 2, 2016 30분및 60분으로처리한후, 시편의표면을증류수로세척하고상온에서건조시킨후말기표면경도를측정하였다. 각각의처리시간대별표면경도변화값의산술평균값으로시간대별표면경도증가수준을비교하였다. 2. 미백효과 1) 착색수산화인회석 (hydroxyapatite) 시편제조수산화인회석분말 (Wako Chemical, Osaka, Japan) 과 polyvinyl alcohol (Sigma, St. Louis, MO, USA) 3% 용액으로반죽을제조하고 105 o C에서충분히건조시킨후적당히분쇄시킨분말을 0.30 0.35 g 칭량하여적외선분광기시료제조용압축기로 1분동안약 4.2톤의압력을주어직경 12.5 mm에두께 1.8 mm의원판모양의수산화인회석을만든후 1,000 o C에서소결시켜서사용하였다. 소결시킨수산화인회석시편을바닥에고정시키고 2 2 cm의 mould와 epoxy 수지를사용하여시편의형상을만든후시편착색은 Stookey s method 17) 를이용하였다. 처리된시편을백열등조명이장착된회전형착색기 (staining machine; LG Co., Daejeon, Korea) 에장착하고멸균된 800 ml의 Typticase Soy Broth (Becton, Sparks, MD, USA) 용액에 coffee, tea, mucin 분말을 8:8:6의비율로혼합한것 7.4 g과 FeCl 3 1.6 g 을가하였다. Sarcina lutea균배양용액 30 ml을혼합한착색용액에접촉하여착색및건조과정을 2주간반복하여착색시킨후색차계 (Minolta CR-321; Minolta Camera Co., Osaka, Japan) 를사용하여명도값 (L) 이 45에서 55인시편 30개를사용하였다. 2) 미백효과평가착색된수산화인회석시편을색차계를이용하여초기명도값 (L) 을측정하였으며 3.0% 과산화수소수액을사용하여 37 o C incubator (OF-12GW; Jeioteck Co., Daejeon, Korea) 에서접촉시간을 1분, 3분, 10분, 30분및 60분으로처리한후시편을증류수로깨끗하게세척하고상온에서건조시킨후의말기명도값을측정하여처리전후의명도변화값을얻었다. 각각의처리시간대별명도변화값의산술평균값으로시간대별명도증가수준을비교하였다. 3. 항치석효과 1) 치석분말제조균일한입도의치석분말을제조하기위하여대전에소재한치과의원에서수거된발치치아중치석이다량부착된 전치부치아를선별하여사용하였다. 치과용 unit chair에부착된초음파스케일러를이용하여치아에부착된치석을분리한다음, 치아로부터분리된치석을 105 o C에서약 2시간처리하여수분을제거하고막자사발에서 1차분쇄한후다시마노 (agate) 막자사발에서미분쇄를하였으며 200 mesh sieve와 325 mesh sieve로 sieving하여 325 mesh에잔존하는입도가균일한치석분말을시료로사용하였다. 2) 항치석효과평가치석분말 0.1 g을캡이있는원심분리용용기에취한후, 0.1 mol 인산용액으로 ph를중성으로조정한 3.4% 피로인산나트륨 (Na 4P 2O 7 10H 2O) 수용액을 30 ml 넣고 37 o C로조정된 shaking incubator (KMC-8480SF; Vision Scientific, Bucheon, Korea) 에서 1분, 3분, 10분, 30분및 60분동안각각 shaking한후, 즉시 10,000 rpm으로 10분간원심분리하고상등액에서의칼슘양을유도결합플라즈마원자방출분광기 (Optima 5300; Perkin-Elmer Inc., Waltham, MA, USA) 로정량하여치석으로부터유리된칼슘양을시간대별로비교하였다. 4. 상아세관폐쇄효과 1) 우치상아질시편제조소의영구절치로부터직경 3 mm의원통형의상아질을 drilling하여취한후상아세관의둥근홀이표면으로노출되도록 acrylic resin을이용하여아크릴봉에고정시키고 #120, #400, #600, #800, #1,200번연마지 (Buehler) 를이용하여순차적으로시편표면을연마하였다. 2) 상아세관폐쇄효과평가인공타액 500 ml를 37 o C로맞춘후, 이용액에완전히침적되도록우치상아질시편을상아질표면을위쪽방향으로노출시켜바닥에고정하고 0.22% 의불화나트륨용액과함께 2.0% 의제1인산칼륨및 3.0% 의제2인산칼륨을함유한용액을각각분당 10 ml의속도로 topping하면서시간대별처리후, 흐르는증류수에 10분간세척하고상온에서건조시켜이리듐 (iridium) 입자로시료표면을코팅한다음, 전자주사현미경 (Hitachi S-4800; Hitachi, Tokyo, Japan) 을사용하여 10,000배에서상아세관의폐쇄정도를관찰, 분석하였다. 5. 통계분석실험실적평가로도출된접촉시간에따른각각의변화값 178
안재현외 : 치약용약효제의적용시간에따른실험실적효능연구 들의통계적검정은통계분석프로그램인 IBM SPSS Statistic ver. 19.0 (IBM Co., Armonk, NY, USA) 의일원변량분석법 (ANOVA) 을이용하여분석하였다. 결과 1. 재광화효과우치법랑질시편의탈회후경도를초기경도로하고 1,000 ppm의불소용액 (0.22% 불화나트륨 ) 으로처리시간별로우치법랑질의표면경도증가를측정한결과각시간대별 1.52±1.06에서 12.55±2.09까지의평균표면경도증가를나타내었으며시간에따른표면경도변화가통계적으로유의하였다 (p<0.001; Table 1). 2. 미백효과 45에서 55의명도값을가지는착색된수산화인회석시편의초기평균명도값을기준으로 3.0% 과산화수소수액을사용하여각각의시간대별로처리한후평균명도증가값을산출한결과 1분처리시 5.50±1.51에서 60분처리시 27.35± 0.54까지평균명도변화값이증가하였으며시간에따른명도변화가통계적으로유의하였다 (p<0.001; Table 2). 3. 항치석효과사람의치석분말을사용하여 3.4% 피로인산나트륨수용액으로각각의시간대별로처리한후치석으로부터킬레이션 (chelation) 또는용해된칼슘양을정량분석한결과, 1분처리시 4.23±0.14 ppm, 3분처리시 4.51±0.04 ppm으로큰 Table 1. Average VHN Value according to Treatment Time of Fluoride Solution Treatment time (min) Number Average VHN value VHN value/ VHN value (1 min) p-value 1.0 6 1.96±1.44 1.00 3.0 6 1.52±1.06 0.78 10.0 6 9.06±0.15 4.62 <0.001 30.0 6 10.83±5.13 5.52 60.0 6 12.55±2.09 6.40 Values are presented as mean±standard deviation. VHN: Vickers hardness change value. Table 2. Average L Value according to Treatment Time of Hydrogen Peroxide Solution Treatment time (min) Number Average L value L value/ L value (1 min) p-value 1.0 6 5.50±1.51 1.00 3.0 6 5.73±0.43 1.04 10.0 6 8.64±0.24 1.57 <0.001 30.0 6 18.93±0.76 3.44 60.0 6 27.35±0.54 4.97 Values are presented as mean±standard deviation. L: lightness change value. Table 3. Average Calcium Amount (ppm) according to Treatment Time of Sodium Pyrophosphate Solution Treatment time (min) Number Average calcium amount (ppm) Calcium amount (ppm)/ calcium amount (1 min) p-value 1.0 3 4.23±0.14 1.00 3.0 3 4.51±0.04 1.07 10.0 3 12.12±0.16 2.87 <0.001 30.0 3 17.85±0.81 4.22 60.0 3 25.15±0.32 5.95 Values are presented as mean±standard deviation. 179
J Dent Hyg Sci Vol. 16, No. 2, 2016 Fig. 1. Scanning electron microscope after each treatment for 1 min (upper left), 3 min (upper right), 10 min (lower left), 30 min (lower middle), and 60 min (lower right). 차이가없었으나 10분처리시 12.12±0.16으로크게증가하는양상을나타내었으며시간에따른칼슘양이통계적으로유의하였다 (p<0.001; Table 3). 4. 상아세관폐쇄효과상아세관의폐쇄정도는 10분처리에서일부상아세관의폐쇄가관찰되기시작하여 60분처리에서는대부분의상아세관의폐쇄가관찰되었다 (Fig. 1). 고찰 치약은구강건강과위생을위해가장보편적으로사용하는대표적인자기구강관리제품으로궁극적인목적은치면세균막의제거와불소또는항균제와같은약물전달에기인한치아우식증및치주병의예방, 지각과민증의완화, 치석형성예방등다양한구강내질환을예방하거나증상을완화시키는것이다. 본연구는기존의페이스트치약의구강내사용시간 (1 3분) 을임의로조절할수있도록구강내일정시간부착후칫솔질하는부착형치약제의부착시간을설계함에있어서기존의페이스트치약에서이미안전하고유효한것으로사용중인성분들을선정하고실험실적으로약물의처리시간에따른효능수준을비교평가하여향후개발될부착형치약의적절한사용시간의결정에참고하고자 하였다. 치아우식증예방을위하여치약에사용되고있는유효성분중세계적으로그유효성을가장인정받고있는성분은불소성분임은의심의여지가없다. 이러한불소의효능은불소용액의처리전후에따른법랑질의표면경도변화값으로설명할수있다. 이미안전하고유효한것으로알려진불화나트륨을이용하여불소이온농도로 1,000 ppm을사용하였고, 1분간처리하였을때의표면경도증가값을기준으로 3분처리시 0.78배, 10분처리시 4.62배, 30분처리시 5.52 배, 60분처리시 6.40배증가하였으며 10분처리에급증하여이후에는증가수준이약한양상을보였다. 3분처리시 1 분처리시보다표면경도증가가오히려적었는데, 이는시편수가작고시편간차이및측정오차가있었기때문으로생각되었다. 치아미백을위한대표적인유효성분은발생기산소를방출하는과산화물이며치약뿐만아니라치과병원에서의치아미백시술용으로도보편적으로사용되고있는물질이과산화수소수이다. 그러나과산화수소의강한산화력과자극성으로치약이나치아미백제에사용농도를국가별로제한하고있으며, 국내의경우처방없이직접구매할수있는제품에서는과산화수소를 3.0% 이하로사용하도록규정하고있다 18). 이러한이유로본연구에서는 3.0% 과산화수소수액을사용하여시간대별인공착색시편의명도변화값을평가하였으며처리시간 1분을기준으로 3분처리시 180
안재현외 : 치약용약효제의적용시간에따른실험실적효능연구 1.04배, 10분처리시 1.57배, 30분처리시 3.44배, 60분처리시 4.97배까지처리시간에비례하여명도변화값이증가하였다. 치석의형성억제에효능이입증되고국내외적으로공인된성분은피로인산나트륨이대표적이다. 치약에서의치석형성억제를위한연구들은 80년대에많이이루어졌는데, 이러한결과들을토대로국내식품의약품안전처에서치약표준기준을고시하고있으며여기에앞에서언급한불소와과산화수소및피로인산나트륨에대한각각의사용한도와효능에대하여규정하고있다 18). 본실험에서는피로인산나트륨의배합한도를국내기준에부합하는 3.4% 의농도를사용하였으며, 치석으로부터유리되거나킬레이팅 (chelating) 되어나온칼슘양을평가한결과에서도명도변화증가값과비슷한양상을나타내었다. 치석으로부터제거된칼슘의양은처리시간 1분을기준으로 3분처리시 1.07 배, 10분처리시 2.87배, 30분처리시 4.22배, 60분처리시 5.95배로증가하였다. 이러한값들의변화를엑셀프로그램 (MS Excel; Microsoft, Redmond, MA, USA) 을이용하여다양한추세선과추세함수식을구한결과처리시간에따른명도변화값과치석으로부터제거된칼슘양은 1차함수적으로증가하였으며표면경도변화의증가는로그함수로나타났다. 이러한결과들은 in vitro 평가에서나타나기쉬운현상으로시간에비례하는결과치를나타내고있으며, 우치시편을사용한표면경도증가가 10분처리까지증가후처리시간에비례하여증가하지못하는것은실제법랑질의조직치밀도로인한불소의침투와흡착이표면에서발생한후내부까지의침투흡착에서는구조적방해를받은것으로추정된다. 불소용액, 제1인산칼륨용액, 제2인산칼륨용액및인공타액중칼슘이온그리고우치상아질시편의칼슘성분들과상호반응하여불용성의불화칼슘및인산칼슘등을상아질표면에서형성하고상아세관에침착하여폐쇄시키는효과도처리시간에비례하는양상을보였다. 일반적인페이스트치약의사용시간으로볼수있는 1분과 3분처리에서는상아세관폐쇄효과는거의관찰되지않았고, 10분이상에서표면침착이보이기시작하여 30분처리에서는상아세관안쪽까지침착이발생하여상아세관의직경이작게보이는것이관찰되었으며, 60분처리에서는완전히상아세관전체를폐쇄시켰다 (Fig. 1). 이상의결과들을종합해보면치약중에사용되는유효성분들의실험실적효능은적용시간에비례하여증가하였으며일반적인페이스트치약의사용시간인 1분에서 3분과사용시간을증가시킨 10분에서 60분처리의효과를비교하면치아표면경도증가에서는최소 5.96에서 8.26배, 명도증가에서는 1.57에서 4.97배, 칼슘용출량은 2.86에서 5.94배더 효과적임을알수있었다. 사용시간이증가하면효과도증가하지만그만큼불편함도함께증가될것이므로재광화효과와항치석효과, 그리고상아세관폐쇄효과에서는사용시간 10분이상이적절한것으로판단되며, 미백효과에서는 10분처리에서효과증가가나타났지만 30분이상처리가보다효과적일것으로생각되었다. 그러나본연구의경우아주제한된환경의실험실적평가로서실험조건의변화로결과값의변동이예상되고또한완제품을이용한실험이아니어서제제내에서의약물방출속도와함께사용된다른약물의방해나조력작용등이고려되지못하였다. 차후에는부착형치약의제형개발을완료하여실제제형을이용한실험실적평가와사람을대상으로한임상적평가를수행하고자한다. 요약 페이스트치약의구강내사용시간 (1 3분) 과사용시간을길게조절할수있는부착형치약의사용시간을고려하여치약제의유효성분을처리시간조건별로 (1분, 3분, 10분, 30분및 60분 ) 미백효과, 항치석효과, 재광화효과및상아세관의폐쇄효과를실험실적으로평가한결과다음과같은결과를도출하였다. 처리시간대별명도변화값 ( L) 은 1분 5.50±1.51에서 60 분 27.35±0.54였고치석으로부터제거된칼슘양 (ppm) 은 1 분 4.23±0.14에서 60분 25.15±0.32였으며경도증가값은 1 분 1.96±1.44에서 60분 12.55±2.09였다. 상아세관의폐쇄정도는 10분처리에서일부상아세관의폐쇄가관찰되기시작하여 60분처리에서는대부분의상아세관의폐쇄가관찰되었다. 본실험조건에서는처리시간을 10분에서 60분처리시 1 분에서 3분처리할때보다최소 1.57배에서최대 8.26배까지효능을증가시켰으며재광화효과, 항치석효과및상아세관폐쇄효과에서는사용시간 10분이상에서적절하였고미백효과에서는 30분이상이보다효과적일것으로생각되었다. References 1. Kim BI: Textbook of oral care products. 1st ed. Charmyun Publishing Company, Seoul, pp.51-64, 2010. 2. Yoon SG, Han SJ: Factors influencing the toothbrushing behavior of elementary school students adapted by the theory of planned behavior. J Dent Hyg Sci 14: 554-562, 2014. 181
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