임상병리검사과학회지 : 제 3 권제 3 호 1 앉 }8. ELISA 법에의한 H.pylori 검출에서의각검사간의변이 삼광의료재단 오정민 김혜란 한혜연 이규현 G 훌 qmative S1I 빼 r of differer 값 Rs m 만 1ed: 폈 ciα1 of lk 빠찮 n:tor py 뼈. 웰 u 밟핑삼훌 ~ EIlSAre 뿔 1ÍS mre in 3 었 I 聊 jg. Oh, Chung Min., Kim, Hae Ran., Han, Hye Yun., Lee, Kyu Hyun. 앓 mkwang Reference Laboratories Helicobacter pylori, a Gram negative spiral bacilli, is known to be the cause of chronic gastritis and peptic u1cer disease and is strongly associated with gastric cancer. Therefore, the rapid detection of H.pylori infection is necessary for prevention and treatment. H.pylori antibody test by enzyme immunoassay is relatively simple and easy diagnostic tool, compared with traditional culture which is technically difficult, and other methods. We compared three different commercial H.pylori ELISA assay kits<monobind, RADIM, Orion). 3 ELISA kits rely on the determination of H.pylori antibodies in serum by means of enzyme immunoassay. RADIM and Orion used the mïcrotiter wells coated with the specific H.pylori antigens and anti human immunoglobulin. Monobind used biotinylated H.pylori antigen, the surface of streptoavidin coated wells, and anti human immunoglobulin. After stopping the reaction of 3 ELISA kits, the colour is measured by a photometer(monobind:45nm, RADIM:45Onm, Orion:45nm). In 7 random samples, the positive results by screening ELISA kits were 47.l%(33 cases) by Monobind, 78.6%(55 cases) by RADIM, 65.7%(46 cases) by Orion. We compared correlation of S/C values among the 3 ELISA kits, we cannot find significant difference. Our results were no statistically significant difference among the 3 ELISA kits. Further study for ELISA test would be warranted to evaluate the significance of antibody test in Korea. Key Words : H. pylo 끼. I mmunoassay 1. 서론환자의위점막생검조직으로부터그람음성의만 곡형간균올관찰하였고이를인공배지에처음 1 웠년뼈 rsh 허 l 과 W 하 reni> 은위염및위궤양균배양하는데성공함으로써 Heliaixctor pylori 가 -13 -
인체위질환의원인균임을밝혔다. 최근에는 Hpylori는인체 B형위염의원인균.2-4) 이며소화성궤양에있어서도일차적발병원인 5-8) 일뿐만아니라위암의일차적발병결정요인9) 으로서주목되는세균으로보고되고있다. 위장관증상이없는건강인에서혈청학적검사상항체양성율이서방선진국에서는밍대에서약밍 % 의양성율을보이는반면, 위장증세가없는건강인을대상으로한국내보고에따르면 4대이후에서 /의양성율을보여한국인에서높은감염율을나타내었다1 ) 현재이세균감염등에이용되고있는진단법및치료효과판정은위내시경을이용한생검법이있고, 세균배양법 11-12) Christensen s UI얹 broth 를이용한 m많se 시험 13-14) Wæ깐lÏn s빠ty silver 염색법 15) Giernsa 염색법 16) Gram 염색법 17) 등의세균염색법을통한조직병리학적검사와 Hpylori가 urease를다량생산한다는것에기초하여동위원소를표지한 urea를먹고공기등에배출되는 αh 동위원소표지탄소를측정하는 법 18) 과 Hpylori에대한항체가를측정하는방법 l됐 ) 이있다. 이중묘JSA법은 Hpylori 감염에비교적정확하고빠르며방법이칸편하고비용이경제적인검사법으로알려져있어널리이용되고있는실정이다. 이에대해본연구에서는 3사제품의 ELISA kit를사용하여그결과를비교하여상관성및일치성의관계를알아보고자하였다. 11 재료및방법 제품을사용하였다. RADTh1 사와 αion 사는 H p ylori 의특수항원이코팅된 well 을사용하여혈청 내항체와반웅시킨후항 human globulin ( 없강 :rre conjugate) 과반응시켰다. 전자는 43) run 에서, 후자는뼈 run 에서홉광도를측정하는 방법이다. 한편, Monobind 사는혈청내항체와 bio 디 nylat 어 Hαl 따 an 디 gen 과반응후침전되어 streptavidin 으로코팅된 well 에결합하여따 nbili 때 imrrune corrplex 가형성된다. 여기에 m 강 ræ conjugate 를넣어결합시킨후, 서 홉광도 43) run 에 측정하는방법이었다. 판독기준한계치는각 제조사의설명대로결정하였으며, cut off 치가서 로다르므로비교하기위해 single/cut off va1ue ( 이하 S/C v; 머 ue) 를사용하였다. S/C v; 려 ue 는각 시료의홉광도를각사의 off 치로나누어준값이다. 川. 결과 방법대로결정한 cut 제조원의검사지침대로시행한결과, 각사의 kit 에대한평균과표준편차 (Table.1) 는 Monobind 사의경우 37.9:t35.71 U/m1, RADIl\1 의경우 73.1 :t47.32 UR/m1, αion 의경우 1137.8 :t1e 윗.58 디따를나타내었다. Table 1. Assay results H.pylori Ab by 3 ELISA kits(n=7) 제조사단위 Mean :tsd Monoφbind U/ml 37.9:t 35.71 1. 검체본의료재단에의뢰된검체중임의로 7명의혈청을무작위선정하여검사대상으로하였다. RADIM UR/ml 73.1 :t 47.32 Orion titer 1137.8:t 1663.58 또한 Monobi띠에의해양성으로판정된시료 는 33 예 (47.1%) 였다. RADTh1 의경우 55 예 (78.6%), 2. 실험방법 αlon 의경우 46 예 (ffi.7%) 를나타내었으며 Monobind사보다 높은양성율을보였다 (Table2.) 3사 3사제품의묘JSA kit는현재 Hαlori 항체검모두양성으로판정된예는 33예를나타내었다. 사에사용되는 Monobind사, RADTh1사, αlon사 Monobi때와 RADTh1의경우 33 예, Mo- nobi때와 -14 -
넙hhOrion 의경우 33 예, RADIl\tI 과 Orion 의경우 46 예 였으며 RADIM 에서만양성으로판정된예는 9 예 였다. 이 9 예중 3 예가 W 얹 kly {Xlsitive 를나타내 었으나 Monobind 와 α1n 에서는음성을나타내 었다.(Table 3) 이 3 사간의보다객관적인비교를위하여 S/C value 를비교하여보았다 (Table4). 좀더세부적으 로나누어보면양성의경우 S/C value 가 1.- 2. 사이는 Monobind 가 12.l~/o, RADIl\tI 이 1O.91%, αiα1 이 17.P/o 를나타내었으며 (Tablái), Monobind 와 α1n 이 RADIl\tI 보다는조금나은것으로나타났다. 음성의경우 S/C v, 머 ue 가.6-1. 사이는 l\tbr 빼띠가 71. 않 %, RADIl\tI 이 m.67%, Orion 이 41.ffi% 로 (Table6J. RADIl\tI 이음성과양 성을구분짓는데있어서양호한것으로나타났다. 참고적으로 S/C value 에의해 3 사간의상관관 계를나타내었으나 (Table6') 유의한상관관계를 보이지않았다. (Table7. Figl-3) Table 2. Results of H.pylori Ab by 3 ELISA kits(n=7) Monobind RADIM Orion Negative 37 15 24 Positive 33 55 46 (%) 47.1 78.6 65.7 total 7 7 7 Table 3. Comparison of positive results among 3 ELISA kits(n=7) Results No. case(%) All 3 kits 33(47.1) Monobind & RADIM 33(47.1) Monobind & Orion 33(47.1) RADIM & Orion 46(65.7) only Monobind only RADIM 9(12.9) only Orion Table 6. Correlation of S/C values among 3 ELISA kits 상관계수 (r) Monobind & RADIM.6 Monobind & Orion.58 RADIM & Orion.48 '---, --- Y =HE77x +28πE am 6m f 뼈때 om om 1m 2m 3m 4m 5m 3. 25. 2 u.mnbnd Flg 1.Correlation of Monobind and RADIM I Q 15. y = 1 ID45< + 3715 1 5.. o 1. 2. 3. 5 MJnOO r 녕 Fig 2. Correlation of Monobi nd and Ori on IV. 결론및고활 위암은우리나라에서가장흔한암이다. 모든 암중에서위암이차지하는비율은 1 앓년에발 표된보사부의한국의암동록조사자료분석보고 서에의하면남자의경우 2B% 로수위를여자의 -15 -
Table 4. Comparison of S/C value among 3 ELISA kits in positive sera S/C value Monoφbi띠 nd % RADIM % Orion % 1.-1.5 2 6.6 4 7.27 7 15.22 1.5-2. 2 6.6 2 3.64 1 2.17 2.-4. 16 48.48 11 2 22 47. 잃 4.-6. 13 39.39 5 9.9 7 15.22 6.-8. 3 5.45 2 4.35 8. > 3 54.55 7 15.22 total 33 55 46 T a b I e 5. Comparison of S/C value among 3 ELISA kits in negative sera S/C value Monobind % RADIM % Orion % -.2.2-.4.4 -.6.6-.8.8-1. 6 12 9 4 6 16.22 32.43 24.32 1.81 16.22 6 5 3 4 33.3 6.67 2 4 1 5 5 16.67 41.67 2. 잃 2. 잃 total 37 15 24 ~.oo 25. 2. 톨 15 1 5. o y =8478< -3412 o. 2. 4. 6. R 빼 )M Fig3.Correlation 1 RADIM and Orion 8. 경우 1SO/o 로자궁암에이어 2 위를차지하고있으 며남녀를통틀어서는 25% 를차지한다 21-~) Hpylori 감염은만성위염과소화성궤양올일 으킬뿐만아니라최근에는위암발생의위험요인 으로주목받고있다. 만성위염은수십년후위축 성위염과장화생으로진행되고 Z3-2S) 은위암의전구병소이므로, 위축성위염 Hpylori 감염이위암 발생에중요한역할을할가능성이있다. 즉 Hpylori 는수년간위점막을자극하여염증을일으킨다는가설이다 29) 역학조사 3)) 에서위암발생 율이높은지역이 Hpylori 감염유병율도높다는 사실이알려졌고 Cohoπ 연구결과, H 마 lαi 감염군이비감염군보다위암발생도위험도가 2.7-6 배높았다. ELlSA 방법을이용한 Hpylori 혈청학적검사 는특이도와민감도가각각 - 뽀 %, ffi-94% 로 보고되었으며시행하기간편하고경제적이므로 Hpylori 감염과위암사이의연관성을연구하기에 적절하리라생각된다. 에서 본연구에서무작위추출된 7 예의혈청시료 양성율은 Monobind 사는 47.1%, RADIM 사 -16-
는 78.6%, αlon 사는 ffi.7% 의양성율을보였다. 그러나일치도면에서서로상이하여어느제품이 더좋다고이야기할수는없었대뼈 nobind& RADIM r=., Monobir 따 &Orion r=. 많, RADIM &Orion r=o.48). 국내연구결과를보면백둥 31> 이연구한 æ 세이상한국인의 % 이상이 Hpylori 에감염되어있다고보고한결과에서미루어볼 때, RADIM 사와 Orion 사에비해뼈 nobi 때사의 양성율이낮다는것올알수있었다. 그러나아직 까지 Hpyl,αi 감염이위암올유발한다는직접적 증거가없고 Hpylori 감염이위암발생의위험인 자로보고한 Cohort 연구들에서도 Hpylori 감염 이된대다수환자에서위암이발생하지않는사 실로보아 Hpylori 감염과위암과는직접적인연 관성은없는것으로생각된다. 따라서 Hpyl,αi 감염과위암발생사이의연관성올더명확히하기 위해서는 H 마새 'ori 감염군과비감염군올대상으로 위암발생에대한장기간추적관찰이필요한것으 로사료된다. 활고문헌 1. M 없하 lall BJ, Warren jrl: Urúdenti 컨 ed ruroed bacilli in the stonαfzcf α1tients with gastritis αjd peptic 띠 @ 뼈 im Lancet 1:1311.1. 뾰강 2. 이광호, 조명제, 김동배, 최상경, 김영채 : 위내시경생검체에서분리된 Canpy-ldxJαer pylαi 의미생물학적특성. 대한미생물학회지 Z3:1τ 1 왔 3. Jones DM, Lessells AM, Eldridge J: CanpylOOacter ηlαi like organi 는 mthe 명stric mucosa : αdture, histolo. 양ro1, α7d serologi 따 stl. 때 ies. ] Qin Rαhol 37:J(XJ2, 19}4 4. Warr 만 1 JR: Urúdent 파 ed al11jed bacilli m 용 7StriC epi, 갑 ælium in αtive d7rmic gastritis. Lancet 1;12 껑 ~ 1 웠? 5. HWlψhries H, Ih>ley α), Leurγ D, et a1: f 폈 èd; qthert1p} cn C1Jmyl-da.:ter ηlαidis : Aror 뼈 msed trial (AbstTαt). 다 Jt Z7:Aß11 l 잊췄 6. Marsha1l BJ, Armstrong JA, M퍼e-당1Íe DB, Glancy RJ: Atten짜 m 뻐따l Kodz's pas따r tes for pyloric CanpylOOacte,π Med ] AUST 142:4했 :1% 7. Pettross CW, co밟1 H, Aw1ermnMD, y4머e nzuela ]E, α뀐뼈 $αna P: Camylobacter pyloridis: Relati,α1하1Íp to peptic disease, 쩔 stric i, 쩨 1amr:z- ticn α7d αher απiitia1s. α7stnσ enterology g):1fb5, 19. 했 8. Priæ AB, Le 찌 J, Ihlby 1M. Dunsc-orr 뼈 PL, Smith A, Cl, 뼈 J, Ste- 야 lei1son ML: Camylobocter pylo 미 'dis in ~ 짜 ic 띠 r disease: Mia-o-biology, α 따 dogy, αjd swnning eledrcm mia osropy. Gut æ:11lf3, l 뾰 E 9. 이광호 : Helicobacter pylori 에의한위암원 인론. 대한미생물학회지 35:$'3, 19:Xl 1. 박인서 : 위장질환과 Heli,αixJcter pyl, 따대 한의학협회지 æ(2) 짧 -ZI) 11. 앞뼈1el JS, Westbltun TU, 1웰vey AD, et a1.: Pyloric car빼llo-bacter-lilæ organisms (P, 다Os) in 빠 '" 빼αmtic volunteers( Abstπd). α7strænterology g):13 웠 ~ 1 양혔 12. Pettross CW, Appleman MD, Cohen H, et a1.: Preoolence cf Canpy-lobader pylori αu1 assα 따 im with αltra1 rrurost. 찌 histology in s 따 ;eds with and witinjt ψlper gastnσ intestir 떼 syryjjtcms. Dig αs sci 33.'619, 1 앉 g 13. Czinn SJ, carr H: RLψlid 따쟁 nosis cf Canpylobacter py/'αidis- asso-띠1led gastritis. ] Pe빼 1tr 11:fRJ, 1앉?7 14. Das SS, Bain LA, Karim Ql', et 려.: Rapid diagnosis cf Canpylobacter pyl,αidis i~αtimj αin PatI때 4:71, 1않?7 15. Johnston BJ, Ali MH, 1월ines K, et a1.: clrn꾀!/obader-lilæ organisms in dj.ιrleml -17 -
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