대한진단검사의학회지제 권제 호 00 Korean J Lab Med 00;:- 원저 진단유전학 실시간정량적중합효소연쇄반응을이용한 Real-Q HBV Quantification Kit의성능평가 황상현 1 차충환 김유리 3 권오중 3 오흥범 부산대학교병원진단검사의학과 1, 울산의대서울아산병원진단검사의학과, ㄜ바이오세움생명공학연구소 3 Performance Evaluation of Real-Q HBV Quantification Kit for HBV DNA by Real-Time PCR Sang-Hyun Hwang, M.D. 1, Choong-Hwan Cha, M.D., Yoo-Li Kim, Ph.D. 3, Oh-Joong Kwon, Ph.D. 3, and Heung-Bum Oh, M.D. Department of Laboratory Medicine, Pusan National University Hospital 1, Busan; Asan Medical Center and University of Ulsan College of Medicine, Seoul; BioSewoom Institute of Bioscience & Biotechnology 3, Seoul, Korea Background : Hepatitis B virus (HBV) DNA quantification is important for the management of HBV infection and identification of the development of resistance. The susceptibility to contamination and more variable reproducibility of results with the conventional HBV DNA quantification method have raised the need of a more simple and accurate method for HBV DNA quantification. Real-time quantitative PCR assays recently introduced in the laboratory can meet these needs. In this study, we evaluated the performance of the Real-Q HBV Quantification kit developed in Korea. Methods : We evaluated the recovery of DNA extraction, the interference of internal control, an analytical sensitivity, specificity, and reproducibility, a clinical specificity, and a reportable range of the Real-Q HBV Quantification kit. The quantification result was also compared to that obtained by the Digene Hybrid-Capture II. Results : The mean percent recovery was 10.% and there was no interference with the internal control on DNA extraction. None of HIV, hepatitis C virus, or cytomegalovirus showed a cross-reactivity with HBV. This assay detected HBV DNA in a linear range from 10 to 10 10 copies/ml, with the detection limit of 5 copies/ml. The assay exhibited a low within-run CV (coefficient of variation) (.7-11.9%), between-run CV (10.5-1.7%), and between-day CV (13.-1.%). No HBV DNA was detected in any of 100 samples without HBV, resulting in a clinical specificity of 100%. The levels of HBV DNA showed a good correlation with those determined with Digene Hybrid-Capture II (R =0.97). Conclusions : The Real-Q HBV Quantification kit showed a good analytical sensitivity, specificity, and high reliability with a broad reportable range. This assay should be clinically useful in managing patients with HBV infection. (Korean J Lab Med 00;:-) Key Words : Real-time polymerase chain reaction, Hepatitis B virus, Evaluation, TaqMan 서 론 접 수 : 00년 5월 일 접수번호 : KJLM1951 수정본접수 : 00년 7월 일 게재승인일 : 00년 월911일 교신저자 : 오흥범 우 13-73 서울시송파구풍납동 3-1 서울아산병원진단검사의학과 전화 : 0-3010-505, Fax: 0-7-0 E-mail : hboh@amc.seoul.kr 기존의 B형간염바이러스 (Hepatitis B virus, HBV) DNA 정량검사방법은전통적인중합효소연쇄반응 (PCR) 방법을이용하여핵산을증폭한후최종산물을희석하여정량값을구하는방식과증폭없이핵산에탐식자를부착시켜증폭된신호를토대로정량값을구하는것이었다. 전자에는 Amplicor HBV Monitor
Real-Q HBV Quantification Kit 의성능평가 3 (Roche Molecular System, Pleasanton, CA) 가대표적이며 [1, ], 후자에는 branched-dna (bdna) 기술을근본으로하는 Quantiplex HBV DNA (Bayer Diagnostics, Emeryville, CA)[3, ] 와 hybrid-capture 기술로불리는 Digene Hybrid-Capture (Murex Diagnostics, Dartfold, UK) 가대표적이다 [5]. 그런데 Amplicor HBV Monitor의경우는저농도 (300-00,000 copies/ ml) 의 HBV DNA 정량은가능하나고농도에서는직선성이유지되지않는단점이있으며, 이에반해 bdna와 hybrid capture 방법은개발시기에따라다르지만일반적으로고농도바이러스혈증 (>10 5 copies/ml) 에대해서정확한정량이가능하고저농도의바이러스는검출하지못하는한계가있었다 []. 과거에는 10 5 copies/ml 이하인경우비활동성보유자 (inactive carrier) 로간주되어임상적관심이낮았으나, 약물치료로 10 5 copies/ml 이하로떨어진이후에도다시재발하는사례들이있어 10 5 copies/ ml 이하에서도정확한정량값을알고자하는필요가발생하였다. 따라서보통은약물치료추적검사를 bdna 혹은 hybrid capture 방법으로하다가 10 5 copies/ml 이하로떨어진경우에는 Amplicor HBV Monitor를이용하여다시검사하였다. 이러한이중검사체계의단점들을보완하면서보다간편하고정확한 HBV DNA 정량기법의필요성이제기되었는데최근검사실에보급되고있는실시간정량 PCR (real-time quantitative PCR, RQ- PCR) 은이런요구에부응할수있는기법이다 [7-9]. RQ-PCR은기존의 PCR과는달리증폭산물을형광으로정량검출하는것으로주로 TaqMan probe 원리를이용한다 [10]. 이는기존의 PCR과유사하나형광염료가부착된탐식자와형광공명에너지전이현상 (fluorescence resonance energy transfer, FRET) 을이용한다는점이다르다 [11, 1]. 즉, 탐식자내보고색소 (reporter dye; FAM, VIC, TET, HEX) 의형광발현을억제하고있는억제색소 (quencher dye; TAMRA) 를핵산증폭과정에서 DNA polymerase에의하여제거함으로써, 증폭주기마다증폭산물에비례하여증가하는형광의강도를실시간으로확인한다 [13-15]. 본연구에서는국내에서개발된 HBV DNA RQ-PCR 시약에대해검사실사용에앞서검사키트의성능평가경험을소개하고자한다. 성능평가항목은검출한계, 분석특이도, 진단특이도, 정밀도, 직선성범위, 상관성등이었다. 재료및방법 1. 성능평가대상키트본연구에서는 ABI PRISM 7000 SDS (Applied Biosystems, CA, USA) 기기를이용하여 Real-Q HBV quantification kit (BioSewoom Inc., Seoul, Korea) 를평가하였는데, HBV DNA 정량방법을간략히소개하면다음과같다. QIAamp MinElute virus spin kit (Qiagen, Hilden, Germany) 를사용하여혈청 00 L에서최종 30 L로 HBV DNA를추출하였다. 이때내부대조 (internal control, IC) DNA를첨가하여추출함으로써핵산추출및증폭과정상의오류가없음을확인할수있도록하였다. 5 L의추출한 HBV DNA 및 Real-Q HBV quantification kit내 HBV standard DNA를 0 L의반응혼합물 (master mix) 에분주하고 ABI PRISM 7000 SDS를이용하여 50 분, 95 10 분이후95 0초 /5 30초 /7 30초를 5회반복하였다. 반응후 HBV standard DNA의농도에대한 threshold cycle (Ct) 값으로 standard 직선을얻고이직선에대비하여검체의 HBV DNA를 copies/ L의단위로정량하였다. Standard 직선에서계산된 HBV DNA 농도 (copies/ L) 에총추출된 DNA 부피 ( L) 를곱하고추출에사용한혈청의양 (0. ml) 으로나누어주어검체 l ml 내존재하는 HBV DNA를계산하였다. 검사시사용하는 HBV standard DNA의성상은다음과같다. HBsAg의일부를 PCR로증폭한후 pgem T-Easy Vector System (Promega, Madison, USA) 의사용법에따라 vector내에삽입하였다. 삽입된 DNA를 ECOS101 (Yeastern Biotech., Taiwan) 세포에도입하고배양한후플라스미드 DNA를추출하였다. NanoDrop ND-1000 (NanoDrop Technologies, Wilmington, USA) 을사용하여플라스미드 DNA 의농도를정량한후 National Institute for Biological Standards and Control (NIBSC) 의 WHO HBV 국제표준품 (97/7) 을사용하여보정하였다. HBV DNA에는 VIC 염색제를, 내부대조물질에는 FAM 염색제를부착하여별도의형광채널에서검출하고내부대조물질의 Ct 범위가 33±3 cycle 이내에드는것을확인하였다. 또한매반응마다 PCR의오염을확인하기위해증류수를사용한음성대조군에서음성의결과가나오는지를확인하며, 저농도및고농도정도관리물질을동시검사하여지정된범위내에드는지를확인하였다. 내부정도관리기준에부적합한경우는동시검사하였던모든검체에대해재검하였다.. HBV DNA 표준물질의회수율평가 HBV viral DNA assay validation kit (AcroMetrix Corporation, CA, USA) 를사용하여키트의회수율을평가하였다. 음성혈장을포함하여키트내 00 IU/mL의농도부터.0 10 7 IU/ ml의농도까지 10배농도차이를나타내는 개의표준물질로부터 DNA를추출한후 Real-Q HBV Quantification kit를이용하여정량값을측정한후비교하였다. 3. 검출한계평가검출한계를결정하기위하여 ACCURUN 35 HBV DNA 양성대조검체 (BBI Diagnostics, MA, USA) 를 HBV 음성혈장으로희석하여 5 copies/ml, 11.5 copies/ml, copies/ml,
황상현 차충환 김유리외 인 5 copies/ml, copies/ml 농도의희석액을만들어사용하였다. 각농도당 50번반복검사를실시하였다.. 특이도평가 Architect HBsAg (Abbott Laboratories, IL, USA) 검사에서음성인 100검체와 ACCURUN HCV RNA performance panels (1a, 1b, a, b, 3a, 3b,, h, 5a, a 유전자형 ), ACCU- RUN HIV-1 RNA performance panels (A, B, C, D, E, F, G, H 유전자형 ) 그리고 ACCURUN CMV positive control 검체 19개를이용하여동일조건에서 RQ-PCR을시행하고교차반응여부를확인하였다. 5. 정밀도평가 1 10, 1 10 3 copies/ml 농도의 HBV standard DNA를사용하여 NCCLS EP-5에따라 0일간하루에 시간이상의간격으로 회씩을시행하였고, 매번실시할때마다두번반복측정하였다. 이결과를이용하여검사차례내 (within-run), 검사차례간 (between-run), 검사일간 (between-day) 정밀도를평가하였다.. 직선성평가 NCCLS EP-에따라 HBV standard DNA를검출한계농도및10 1 copies/ml에서 10 10 copies/ml 범위에서 10배수로연속희석한농도에대해 ( 총 11개농도 ) 각농도마다 회씩반복측정하여직선성을평가하였다. 7. 상관성비교 NCCLS EP-9에따라다양한범위의농도를가지는 0개의검체를이용하여 Digene Hybrid-Capture II (Murex Diagnostics, Dartfold, UK) 와비교하였으며, 각농도별로두번씩반복측정한후평균값을사용하였다. 선형회귀모델을이용하여검사간상관성을평가하였다.. 내부대조물질 (internal control) 의 PCR 반응간섭여부평가 IC의 PCR 반응간섭여부를확인하기위하여핵산추출시, 한검체당 L의 IC를첨가한경우와그렇지않은경우에대해동일한과정을거쳐 RQ-PCR을시행하였다. 정상적인핵산추출시 IC의 Ct 범위가 33±3 cycle이고각검체에서이범위안에들어가는지조사하였다. 9. 통계분석 최소검출농도는 probit 분석을통하여 95% 신뢰수준에서예측하였고, 분석에이용한통계소프트웨어는 StatsDirect (Stats- Direct Ltd., Cheshire, UK) 이었다. 직선성을평가하기위해다항회귀분석을시행하였고, t-test로검정하였다. 검사간상관성분석은선형회귀분석을이용하였다. P<0.05일때통계적으로유의한것으로판정하였다. 통계소프트웨어는 SPSS version 13.0 (SPSS Inc., Illinois, USA) 을이용하였다. 결 과 Observed HBV DNA, Log10 copies/ml 7 5 3 1 Input HBV DNA, Log10 IU/mL y=1.03x+0.17 R =0.993 0 0 1 3 5 7 Fig. 1. Quantitative correlation between reference from HBV viral DNA assay validation kit (AcroMetrix corporation) and observed value by Real-Q HBV Quantification kit (BioSewoom Inc.). 1. HBV DNA 표준물질의회수율평가 음성혈청을포함한 00 IU/mL의농도부터.0 10 7 IU/mL의농도까지 개의표준물질에대한평가결과는 Fig. 1과같았다. 개의표준물질의기대치에대한관측치의평균회수율은 10.% 이었고, 기울기 =1.03, R =0.993로 Real-Q HBV Quantification kit는다양한농도의 HBV에대하여우수한회수율을나타내었다 (Fig. 1). Table 1. Detection limit of Real-Q HBV Quantification kit Input HBV (copies/ml) Result Replicates Positive reaction % 5 50 50 100 11.5 50 50 100 50 9 9 5 50 9 50 39
Real-Q HBV Quantification Kit 의성능평가 5. 검출한계 3. 특이도 검출한계를검증하기위해시행한검사에서 Real-Q HBV Quantification kit는 5 copies/ml (confidence interval 1- copies/ml) 의 HBV DNA를 9% 의양성률로검출할수있었던반면, copies/ml의경우는 % 의양성률로검출되었다 (Table 1). 따라서, 검출한계는 5 copies/ml으로정하였다. 반복측정한자료를이용한 Probit 분석에서 95% 신뢰수준으로결정되는검출한계의 HBV 정량값은 51 copies/ml이었다. HBsAg 음성혈청 100 검체와 ACCURUN HCV RNA performance panels (1a, 1b, a, b, 3a, 3b,, h, 5a, a 유전자형 ), ACCURUN HIV-1 RNA performance panels (A, B, C, D, E, F, G, H 유전자형 ) 그리고 ACCURUN CMV positive control에서 HBV DNA가증폭되지않아진단특이도는 100% 이었다 (Table ).. 정밀도 Table. Analytical specificity of Real-Q HBV Quantification kit HBV (VIC) Internal control (FAM) Cytomegalovirus - + Hepatitis C virus 1a - + Hepatitis C virus 1b - + Hepatitis C virus a - + Hepatitis C virus b - + Hepatitis C virus 3a - + Hepatitis C virus 3b - + Hepatitis C virus - + Hepatitis C virus h - + Hepatitis C virus 5a - + Hepatitis C virus a - + HIV A - + HIV B - + HIV C - + HIV D - + HIV E - + HIV F - + HIV G - + HIV H - + VIC and FAM are the reporter dyes. Estimated HBV DNA concentration (Log10 copies/ml) 11 10 9 7 5 y=0.91x+0.1053 3 R =0.990 1 0 0 1 3 5 7 9 10 11 Nominal HBV DNA concentration (Log10 copies/ml) Fig.. Linearity range of Real-Q HBV Quantification kit (BioSewoom Inc.). The straight line was determined by a linear regression of the log 10 estimated concentrations with the log 11 nominal concentrations. Linearity was found from 10 to 10 10 copies/ml. 1 10, 1 10 3 copies/ml 두농도에대해검사차례내정밀도는각각.7%, 11.9% 이었으며검사차례간 CV의경우는각각 Log10 HBV concentration (copies/ml) Real-Q HBV Quantification 10 y=0.935+0.955 R =0.97 0 0 10 Log10 HBV concentration (copies/ml) Hybrid capture II Fig. 3. Quantitative comparison of Real-Q HBV Quantification kit (BioSewoom Inc.) with Digene Hybrid-Capture II (Murex Diagnostics). HBV DNA concentration without interna control (Log10 copies/ml) y=0.99x+0.011 R =0.9999 0 0 HBV DNA concentration with internal control (Log10 copies/ml) Fig.. The comparison of HBV concentrations measured with and without internal control.
황상현 차충환 김유리외 인 10.5%, 1.7% 이었고, 검사일간 CV의경우는각각 13.%, 1.% 이었다. 5. 직선성 Real-Q HBV Quantification kit의직선성은 10 1-10 10 copies/ ml 범위의경우 10 1 copies/ml은검출한계이하, 검출한계에해당하는 5-10 10 copies/ml 범위의경우선형회귀모델 (y=a+ b 1 X) 에서 b 1 =0.913 (P=0.13), 비선형회귀모델 (y=a+b 1 X+ b ) 에서는 b =1.13 (P<0.0001) 로직선성이유지되지않음 을확인하였다. 10-10 10 copies/ml 범위에서는선형회귀모델에적합하였다 (b 1 =0.91, P<0.0001, adjusted R =0.990). 따라서, 본검사는 10-10 10 copies/ml 범위에서직선성이유지됨을알수있었다 (Fig. ).. 검사법비교 Digene Hybrid-Capture II에서 10 5 copies/ml 이하의결과를보였던 1개검체는 Real-Q HBV Quantification kit에서 0-15, copies/ml의다양한결과를보였다. 10 5 copies/ml 이상의결과를보였던 개검체에서는기울기 =0.935, R =0.97의좋은상관성을나타내었다 (Fig. 3). 7. 내부대조물질 (IC) 의 PCR 반응간섭여부 IC을사용하는경우와사용하지않는경우결과값에차이가없이기울기 =0.99, R =0.9999의좋은상관성을나타내었다 (Fig. ). 또한검사기간동안내부대조물질의 Ct 범위가모두 33±3 cycle에들어가는것을확인할수있었다. 고찰 HBV는만성간질환의주요한원인이며, 간경변증, 간암등의합병증을유발시키는것으로알려져있다. 세계보건기구의 000 년통계에의하면, 전세계적으로 0억정도의인구가 HBV에감염되어있고그중 3억 5천만명이상이만성간염을가지고있는것으로보고되었다 [1]. 만성 B형간염의치료는 interferon- 의주 3회주사나라미부딘 (lamivudine) 일일경구단독투여요법이흔히시행되고있다. 만성 B형간염환자들에서혈청내 HBV 의정량적인측정은환자의예후를예측하고치료의반응을평가하여치료의시작과종료를결정하는데있어서매우중요한판단의근거가된다. 또한, lamivudine의내성은치료 1년이후 1-3% 에서나타나며, 치료 년이지나면 3-5% 에서나타난다. 따라서 lamivudine 내성 HBV의조기발견을위해더민감한 HBV 정량검사와 lamivudine 내성검사등이필요하다. 국내에서 HBV DNA 정량을위해널리이용되는검사법에는 Amplicor HBV Monitor test, bdna test 그리고 Hybrid-Capture test 등이있다 [17]. HBV DNA를직접증폭하는 Amplicor HBV Monitor는낮은농도의 HBV DNA 검사에효율적이고, HBV DNA에부착된형광시그날을증폭하는 bdna와 Hybrid- Capture는높은농도의검사에효율적이다 []. 과거에는 HBV DNA 농도가 10 5 copies/ml 이하인경우비활동성보유자 (inactive carrier) 로간주되어임상적으로관심이낮았으나, Amplicor HBV Monitor 방법으로 HBV를정량적으로측정하여 00 copies/ml 이하인경우는재발률이 37%, 1,000 copies/ml 이상인경우는 73% 에서재발한다는보고가있어 [1], 10 5 copies/ml 이상뿐만아니라, 그이하에서도정확한정량이가능한새로운검사기법이필요하게되었다. RQ-PCR의가장큰장점은 에서 10 log의넓은측정범위를가지고있다는점이다. 또한실시간으로형광신호를관찰하기때문에증폭후전기영동을하는과정이필요없어검사보고시간이빠르고검사시발생할수있는 carryover 위험성을최소화할수있다 [19]. 현재검사실에서많이사용되고있는 RQ-PCR 기기의종류로는 ABI Prism 7000/7300/7500/7900HT SDS (Applied BioSystems) 와 LightCycler (Roche Molecular Systems, Rotor- Gene 3000 (Corbett Life Science, NSW, Australia), COBAS TaqMan analyzer (Roche Molecular Systems) 등이있다 [0]. 또한 RQ-PCR의반응신호검출형식에따라크게이중가닥 DNA에끼어들어가는방식과탐식자에형광을부착시키는방식으로나눌수있는데전자에는 SYBR Green I 형광염료가쓰이고, 후자에는 TaqMan, Hybridization, Molecular Beacon 방법등이있다 [15, 0, 1]. SYBR Green I 형광염료를사용하는경우는상대적으로저렴한비용으로신속히선별검사를시행할수있는장점이있으나, 탐식자를이용하는방식보다특이도가낮다는단점이있다 []. 따라서바이러스정량과같이정확한결과를필요로하는경우는탐식자를이용하는것이보편적이다. RQ-PCR 에있어가장중요한데이타는역치증폭주기 (threshold cycle) 즉, Ct 값이다. Ct는 PCR 과정에서증폭산물이현저히증가하기시작하는지점의 PCR cycle 수를의미한다. 즉분리된 보고자염색 (reporter dye)' 에의하여생기는형광의양이일정한기준값에도달하는증폭주기인것이다. 원래검체에 HBV DNA 양이많으면일찍 Ct 값에도달하고검체에 HBV DNA 양이적으면늦은 cycle에서 Ct에도달하게되므로표준물질의 Ct 값을알고있으면검체의 Ct 값을통하여원래검체의 HBV DNA 를정량할수있게된다 [15,, 3]. 본연구에서평가한 Real-Q HBV Quntification kit는 RQ- PCR 원리를사용하고검출한계는 5 copies/ml로이는 Ho 등 [] 의보고 (50 copies/ml) 보다는우수한결과이며, Roche COBAS TaqMan HBV Test (3 copies/ml) 와는비슷한수준이었다 [5]. 직선성은 COBAS TaqMan HBV Test (170 to at least.5 10 copies/ml) 와대등하였다 [5]. HIV, HCV,
Real-Q HBV Quantification Kit 의성능평가 7 CMV 등주요바이러스와교차반응은없었으며, 임상검체를대상으로한진단특이도또한 100% 로우수한성능을보였다. 1 10, 1 10 3 copies/ml 두가지농도에서의정밀도는검사차례내정밀도가.7-11.9%, 검사차례간정밀도가 10.5-1.7%, 검사일간정밀도가 13.-1.% 였다. Weiss 등 [5] 의연구와비교해보면, 본검사와유사한 HBV DNA 농도를보이는구간에서 COBAS TaqMan HBV Test의정밀도는검사차례내정밀도가 7.9-11.%, 검사차례간정밀도가 13.0-1.% 으로차이가거의없었으며, Zanella 등 [] 의연구에서는검사차례내정밀도가 19.3-35.%, 검사차례간정밀도가 9.3-33.9% 로본검사의정밀도는 HBV DNA가낮은농도에서도우수한것으로판단되었다. Digene Hybrid-Capture II와비교에서는 R =0.9로우수한상관성을보였다. 하지만본연구에서사용한 Digene Hybrid- Capture 방법은검출한계가 10 5 copy/ml 이상으로그보다낮은농도에서타검사법과의상관성은확인하지못하였다. 본검사법과유사한 Taqman probe 방법을이용한 real-time PCR인 COBAS TaqMan HBV Test와 Amplicor HBV MONITOR test의상관성비교연구에서는 R =0.9575의상관관계를보이는것으로알려져있다 [7]. Digene Hybrid-Capture II와의우수한상관성, 10-10 10 copies/ml 범위에서의우수한직선성,.0 10 -.0 10 7 copies/ml 범위의표준 DNA에대한정확한회수율을고려할때본연구에서사용한 Real-Q HBV Quantification kit 또한 10 5 copy/ml 이하에서도우수한상관성을보일것으로사료된다. 특히 Real-Q HBV Quantification kit은 IC를검체와혼합하여 DNA를추출하기때문에추출과정에서의오류를검출할수있도록고안되었다. Real-Q HBV Quantification kit에서사용하는 IC는목표 (target) 유전자증폭에있어간섭인자가되지않음을확인할수있었다. 또한 IC의 Ct을점검함으로증폭과정의적절성을확인할수있었는데이는본연구키트의장점이라여겨진다. 결론적으로본연구를통하여평가된 Real-Q HBV Quantification kit (BioSewoom) 는검출한계, 직선성, 특이도, 정밀도등의성능에있어유사제품에비해손색이없다고판단되는바, HBV DNA 정량을이용한만성 B형간염치료의추적관찰에유용하게사용될수있을것으로판단된다. 요약배경 : Hepatitis B virus (HBV) DNA 정량검사는항바이러스제제의사용, 치료효과추적, 내성 HBV의조기진단등 HBV 감염의치료를위해필요하다. 최근검사실에보급되고있는 realtime quantitative PCR은기존의 HBV DNA 검사법의단점들을보완하면서보다간편하고정확한 HBV DNA 정량기법이다. 본연구에서는최근국내에서개발된 Real-Q HBV Quantification kit의성능을평가하였다. 방법 : Real-Q HBV Quantification kit의회수율, 검출한계, 분석특이도및진단특이도, 정밀도, 직선성범위, 그리고 Digene Hybrid-Capture II와상관성과 internal control (IC) 의간섭영향을분석하였다. 결과 : 평균 % 회수율은 10.% 이었으며, 동일검체에서 IC과의경쟁때문에 target 유전자의증폭이억제되지않음을확인하였다. Hepatitis C virus (HCV), human immunodeficiency virus (HIV), Cytomegalovirus (CMV) 19개의양성검체와교차반응은없었으며, 본검사의재현성은검사차례내변이계수.7-11.9%, 검사차례간변이계수 10.5-1.7%, 검사일간변이계수 13.-1.% 를보였다. 검출한계는 5 copies/ml이었으며, 보고범위는 10-1 10 10 copies/ml이었다, HBV 음성 100검체를이용하여분석한진단특이도는 100% 이었고, Digene Hybrid-Capture II와우수한상관관계를보였다 (R =0.97). 결론 : 본연구를통하여평가된 Real-Q HBV Quantification kit는우수한검출한계, 특이도, 높은신뢰성을보였으며, 기존의 HBV DNA 정량검사법보다넓은범위의 HBV DNA를측정할수있어, HBV 감염의치료와내성 HBV 조기진단에매우유용할것으로판단된다. 참고문헌 1. Gerken G, Gomes J, Lampertico P, Colombo M, Rothaar T, Trippler M, et al. Clinical evaluation and applications of the Amplicor HBV Monitor test, a quantitative HBV DNA PCR assay. J Virol Methods 199;7:155-5.. Kessler HH, Pierer K, Santner BI, Vellimedu SK, Stelzl E, Lackner H, et al. Quantitative detection of hepatitis B virus DNA with a new PCR assay. Clin Chem Lab Med 199;3:01-. 3. Urdea MS, Horn T, Fultz TJ, Anderson M, Running JA, Hamren S, et al. Branched DNA amplification multimers for the sensitive, direct detection of human hepatitis viruses. Nucleic Acids Symp Ser 1991; :197-00.. Hendricks DA, Stowe BJ, Hoo BS, Kolberg J, Irvine BD, Neuwald PD, et al. Quantitation of HBV DNA in human serum using a branched DNA (bdna) signal amplification assay. Am J Clin Pathol 1995;10:537-. 5. Pawlotsky JM, Bastie A, Lonjon I, Remire J, Darthuy F, Soussy CJ, et al. What technique should be used for routine detection and quantification of HBV DNA in clinical samples? J Virol Methods 1997;5: 5-53.. Pawlotsky JM, Bastie A, Hezode C, Lonjon I, Darthuy F, Remire J, et al. Routine detection and quantification of hepatitis B virus DNA in clinical laboratories: performance of three commercial assays. J Virol Methods 000;5:11-1.
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