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Biomaterials Research (2008) 12(3) : 102-108 Biomaterials Research C The Korean Society for Biomaterials 호주산 Propolis 의항균활성과치주조직에미치는영향 Antimicrobial Activity and the Effect on Periodontium of Australian Propolis 주동옥 1 국중기 2 김병옥 1 * 김생곤 3 Dong-Ok Joo 1, Joong-Ki Kook 2, Byung-Ock Kim 1 *, and Saeng-Gon Kim 3 1 조선대학교치과대학치주과학교실, 2 조선대학교치과대학구강생화학교실, 3 조선대학교치과대학인체생물학교실 1 Department of Periodontology, Chosun University, College of Dentistry, Gwangju 501-759, Korea 2 Department of Oral Biochemistry, Chosun University, College of Dentistry, Gwangju 501-759, Korea 3 Department of Human biology, Chosun University, College of Dentistry, Gwangju 501-759, Korea (Received June 24, 2008/Accepted August 18, 2008) Propolis is a naturally-occurring bee products and has been used in folk medicine for several purposes such as an antiseptic, anti-inflammatory, antimycotic and bacteriostatic agent. The aim of the present work was to evaluate the antibacterial activity and periodontal effects of Australian propolis (Green-One natural health, Sydney, Australia). Antibacterial effect of diluted propolis on seven oral pathogens, Prevotella intermedia (Pi), Prevotella nigrescens (Pn), Porphyromonans endodontalis (Pe), Porphyromonas gingivalis (Pg), Tannerella forsythensis (Tf) Actinobillus actinomycetemcomitans (Aa), and Fusobacterium nucleatum (Fn), were tested and their cytotoxic effect on human gingival fibroblasts (hgf) and periodontal ligament fibroblasts (hpdlf) were evaluated by MTT. Cell viability assays were performed using third to fourth-passage of hgf and hpdgf. And, for investigating the periodontal effect of propolis, gingival creviculr fluid (GCF) and sulcular bleeding index (SBI) were measured 10-day after applying diluted propolis with periodontal pack. MTT assay had demonstrated that 1/2 7 dilution of propolis had antimicrobial effect and was safe for hgf and hpdlf. After applying diluted propolis with periodontal pack, GCF was significantly reduced but SBI showed decreasing tendency. Author confirms that propolis has antiseptic, antibacterial and antiinflammatory properties if appropriate dilution can be prepared. And, more researches are needed to find out the appropriate diluted propolis solutions which are less cytotoxic for tissue cells but present strong antibacterial properties, and promote the wound healing. Key words: Propolis, Antimicrobial activity, Periodontal effects 치 서 주질환은치아를둘러싸고있는조직들에병변이발생된것으로, 그임상증상은비슷하나질환의원인에따라다양하게분류되고있다. 가장흔하게나타나는치태관련치주질환은기본적으로스켈링과치근활택술과같은기계적인처치와유지관리프로그램에의해건강한치주조직을유지할수있지만, 몸상태가좋지않을경우에는항생제와같은항균제를보조적으로사용해야한다. 항생제는치주치료의보조요법으로전신적또는국소적으로투여하고있으나, 전신적인항생제투여시항생제에대한내성을갖는치태세균이검출될수있다. 1) 따라서현재이런단점을극복하기위하여생약성분의천연추출물에서새로운항세균제를찾으려는노력이증가되고있다. * 책임연락저자 : inchae77@naver.com 론 이연구에사용된 propolis는꿀벌이다양한식물성원료로부터수집해서만든수지상의물질로벌집을유지하고만드는데사용된물질로서, 감염을치료하는데있어서지난수천년동안민간요법으로서사용되어오고있었으며, 오늘날항균효과, 항염증효과, 국소마취효과, 각종피부질환에대한치료효과와피부재생효과, 항바이러스효과, 항우식효과, 화상치료효과, 노화억제, 그리고면역체계의강화등여러분야에서탁월한효과가있다고보고되었다. 2-4) Propolis는 55% 의 resinous compound와 balsam, 30% 의 beeswax, 10% 의 ethereal oil과 aromatic oil, 5% 의 bee pollen을함유하고있다. 여기에포함된화합물로는 amino acids; flavones, flavonols, 그리고 flavanones를포함한 flavanoids; terpenes; vanillin; tetochrysin; isalpinin pinocembrin chrysin galangin; ferulic acid; caffeic acid; caffeic acid phenethyl ester; cinnamic acid와 chinnamyl alcohol 등이있다. 5) 102

호주산 Propolis 의항균활성과치주조직에미치는영향 103 Propolis는동유럽에서치과치료시근관학과치주과에서소독제로많이이용되었다고보고되었는데, 특히치주과영역에서 propolis의연구를살펴보면주로항균활성에관련된것으로, 그람양성균및그람음성균에대하여광범위한항균효과가있는것으로알려져있다. 6) Rodrigues 등 6) 과 Slot 등 7) 은치주조직의파괴와관련된세균들즉, A. actinomycetemcomitans, P. gingivalis, P. intermedia, F. nucleatum 등에대해서항균활성을가지고있다고하였고, Ghisalberti 등 8) 은이와같은 propolis의항균활성은페놀복합물특히 flavinoids, phenolic acid와이들의 esters 때문이라고하였다. 이와같이 propolis는여러분야에서치료효과를발휘하고있는데, 이연구에서는호주산 propolis가치주질환과연관된세균에대한항균활성, 사람의치은섬유모세포와치주인대섬유모세포에대한세포적합성, 그리고 propolis를첨가한치주포대를환자의잇몸에적용한후여러가지임상지수와치은열구액의변화에끼치는영향을평가하는것이다. 연구재료 재료및방법 * Propolis 이연구에는수용액 1ml당 200 mg의꿀벌 propolis 추출물이용해된 Australian propolis (Green-One natural health, Sydney, Australia) 가이용되었다. 연구대상연구대상은임상적, 방사선학적으로검사결과치은염으로진단되고, 최근 6 개월이내에어떠한항생제복용이나치주치료를받지않았으며, propolis 에피부알러지증상을호소하지않은신체건강한남녀 10 명을대상으로하였다. 분석된피실험자의연령은 22 세에서 34 세까지였으며, 평균연령은 25.7 세였다. 상악제 1, 2 대구치부위, 총 40 개치아를연구대상으로하였다. 이치아들에는 propolis 를첨가한치주포대 (Coe- Pak, USA) 를적용하고 3 일간유지시켰다. 연구방법 세균및세균배양이연구에사용된 Prevotella intermedia (Pi) 1 균주 (ATCC 25611), Prevotella nigrescens (Pn) 1 균주 (ATCC 25261), Porphyromonans endodontalis (Pe) 1 균주 (ATCC 35406), Porphyromonas gingivalis (Pg) 1 균주 (ATCC 33277), Tannerella forsythensis (Tf) 1 균주 (ATCC 43037), Actinobillus actinomycetemcomitans (Aa) 1 균주 (ATCC 33384), Fusobacterium nucleatum (Fn) 1 균주 (ATCC 23726) 는 American Type *This study protocol was approved by the Chosun University Dental Hospital Institutional Review Board (# CDIRB2007-1). Culture Collection (ATCC, University Boulevard, Manassas, VA, USA) 에서구입하였다. 균주들중 Aa는 TSV broth (Tryptic soy broth 3%, Yeast extract 0.1%, Vancomycin 5 g/ml, Bacitracin 75 ug/ml, Horse serum10%), Fn는 Schaedler broth (Schaedler broth 2.44%, Erythromycin 4 ug/ml) 그리고나머지균주들은 P broth (Tryptic soy broth 3%, Yeast extract 0.5%, 0.025% Resazurin 2 ml, Cystein HCl-H 2 O 0.05%, Hemin solution 0.5 mg/ml, Vitamin K 1 2 ug/ml) 에서 37 o C, anaerobic gas mixture (85% N 2, 10% H 2, 5% CO 2 ) condition으로 24시간동안배양하였다. 최소살균농도 (minimum bactericidal concentration; MBC) 프로폴리스의치주원인균인 Aa, Fn, Pi, Pn, Pg, Pe, 그리고 Tf 균주들에대한성장억제및살균효과를측정하기위해 MBC 를측정하였다. 먼저균주를각각의액체배지에서후기로그기까지배양하고, 이를액체배지에 37 o C 에서배양한후균주를파장 450 nm 에서 OD 값이 0.5 가되도록희석하였다. Propolis 원액을 96 well plate 에 1/10 ~ 1/5,120 로 2 배씩순차적으로희석하고, 희석된각각의균주들을 100 µl 씩넣은후 37 o C 에서 2 시간동안배양하였다. 각 well 의 5 µl 를취해서혈액한천배지에도말한후 2 시간후에세균이전혀배양되지않은 well 의 propolis 값을 MBC 값으로정하였다. 사람치은섬유모세포와사람치주인대섬유모세포배양이연구에사용된사람의치은섬유모세포와치주인대섬유모세포는 Hanks' Balanced Salt Solution (HBSS, GIBCO BRL, USA) 과 Antibiotic-Antimycotic (AA, GIBCO BRL, USA) 을혼합한용액에보관후슬라이드글라스를위치시켜조직의이동을방지하고 10% Fetal Bovine Solution( FBS, GIBCO BRL, USA) 와 Dulbeco's Modified Eagles Medium (DMEM, GIBCO BRL, USA) 과 1% Antibiotic-Antimycotic (AA, GIBCO BRL, USA) 을혼합한용액을이용하여 37 o C, 5% CO 2, 100% 습도조건에서배양하였다. 배지는 2 일에한번씩교체하고사람의치은섬유모세포와치주인대섬유모세포가증식함에따라계대배양하고 3 내지 4 세대의세포를이용하였다. 24-well 의배양접시에 1 ml 당 2 10 5 개의세포가되도록분주하여 2 주동안배양하였다. 세포적합성평가 24-well의배양접시에분주된세포에서배양액을제거하고 7 개의다른농도 (1/64-1/4,096) 로배양액에희석된 propolis 혼합액을동량으로각각의 well에첨가하고 48시간동안 37 o C, 5% CO 2, 100% 습도조건에서배양하였다. 3-(4,5-dimethylthiozole-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) 용액을배지 1 ml당 100 µl을섞어서각 well의세포에첨가하였고, 37 o C, 5% CO 2, 100% 습도조 Vol. 12, No. 3

104 주동옥 국중기 김병옥 김생곤 건에서 3 내지 4 시간동안방치하였다. 반응액을제거한후 10% SDS 를함유한 solubilizing solution 을 300 µl 씩첨가하여형성된 formazan 결정을용해시키고, 배양접시를잘흔든후 96-well 에 200 µl 씩분주하여 ELISA reader (Multiskan EX, Finland) 로파장 540 nm 에서흡광도를측정하였다. 이실험은 3 회반복시행하였다. 최소살균농도에서의희석방법에서는세균을최소한의농도로살균할수있는농도를찾기위해서 1/10 ~ 1/5,120 로 2 배씩순차적으로희석하였고, 세포적합성평가를위한희석방법에서는세포에유해하지않는최대농도를찾기위해서 1/64-1/4,096 로희석하였다. 치은열구출혈지수와치은열구액측정 1) 이연구를위하여선별된 10 명의연구대상의상악제 1, 2 대구치협측과구개측에서 propolis 의치주조직에끼치는효과를평가하기위하여치은열구출혈지수 (sulcus bleeding index, SBI) 와치은열구액 (gingival crevicular fluid, GCF) 을측정하였다. 먼저, 초진시에치은열구액을측정하였고, 치태세균을제거하고치은섬유모세포와치주인대섬유모세포에독성을나타내지않는농도 (1/2 7 ) 로 propolis 를치주포대에첨가하여대상치아에적용하고 3 일간유지하고 1 주일후내원시다시 SBI 와 GCF 를측정하였다. 1 치은열구출혈지수 (Sulcus Bleeding index, SBI) 협측이나구개측으로근심, 중앙, 원심을측정하여가장높은치수를선택하였다. 0: 치은이건강하고치은출혈이없는경우 1: 치은출혈이있으나치은변색과부종이없는경우 2: 치은출혈과변색이있으나부종이없는경우 3: 치은출혈, 변색, 부종을수반한경우 4: 치은출혈, 변색, 부종및궤양이있는경우 5: 치은출혈이저절로되고, 변색이있으며현저한부종및궤양이있는경우 적용하고 1 주일후에치은열구삼출액의용량을측정하였고, 통계학적으로분석하였다. 연구대상자의치주포대에대한평가연구대상자에게맛이나향그리고모양과치주포대의유지력에대해설문조사하고차후에치주포대사용시선택을할것인지에대해조사하였다. 통계학적분석실험결과는모든피실험자에대해평균 ± 표준편차로기록하였다. MTT assay 에의한세포적합성평가는 Unpaired t- Test 를통해평가하였다. Propolis 를첨가한치주포대를적용하기전과적용한후의임상지수 (SBI) 와치은열구액의비교는 Paired t-test 로하였다. 결과및고찰 최소살균농도 (minimum bactericidal concentration; MBC) Propolis의배양된치주병인균에대한 2시간동안의최소살균농도는 Pi ATCC 25611에서는 0.16% (1/640), Pn ATCC 25261과 Pg ATCC 33277에서는 0.32% (1/320), Pe ATCC 35406과 Tf ATCC 43037에서는 2.5% (1/40), Aa ATCC 33384에서는 10% (1/10) 미만에서그리고 Fn ATCC 23726 에서는 0.63% (1/160) 였다 (Table 1). MTT assay에의한세포적합성평가대조군과각농도별로처치한실험군을배양 2일후 MTT assay를이용하여세포활성을평가하였다. 사람의치은섬유모세포와치주인대섬유모세포에대해 propolis는 1/2 8 ~1/2 11 의농도에서대조군과비교시에활성감소가유의하게일어났으며 (Table 2, 3. Figure 1, 2), 1/2 6, 1/2 7, 그리고 1/2 12 농도에서는세포들에독성을나타내지않았다. 2 치은열구삼출액 (Gingival crevicular fluid, GCF) 의측정치은열구삼출액은 Periotron 8000(Oraflow, Inc. USA) 이용하여제조회사의지시대로설정한다음측정하였다. 먼저 0 점조정한다음측정대상치의협, 구개측에 cotton roll 로격리및방습하여타액등기타물질로부터의오염을방지하였다. 압축공기를치은쪽으로부터치관방향으로지나가도록하고, 이러한압축공기를가능한약하게사용함으로서치은열구벽을자극하여결과에영향을미치지않도록하였다. 이렇게건조시킨후 1 분간방치함으로서치은열구내로삼출액이유입될여유를준후흡수성 strip 을치아순측혹은설측중앙부치은열구또는치주낭내로가벼운저항을느낄때까지조심스럽게삽입한후 60 초간유지하였다가꺼낸즉시 Periotron 8000 (Oraflow Inc. New-York, USA) 에끼워넣어 15 초후의최대치를기록하였다. 초진시 propolis 를첨가한치주포대를 Table 1. Minimum bactericidal concentration of propolis against the periodontopathogens Species and strains MBC MBC (%) (ratio) 1/2 n < MBC (ratio) < 1/2 n-1 Pi ATCC 25611 0.16 (1/640) 1/2 10 < 1/640 < 1/2 9 Pn ATCC 25261 0.32 (1/320) 1/2 9 < 1/320 < 1/2 8 Pg ATCC 33277 0.32 (1/320) 1/2 9 < 1/320 < 1/2 8 Pe ATCC 35406 2.5 (1/40) 1/2 6 < 1/40 < 1/2 5 Tf ATCC 43037 2.5 (1/40) 1/2 6 < 1/40 < 1/2 5 Aa ATCC 33384 10 (1/10) < 1/2 4 < 1/10 < 1/2 3 Fn ATCC 23726 0.63 (1/160) 1/2 8 < 1/160 < 1/2 7 MBC: minimum bactericidal concentration. Pi: Prevotella intermedia, Pn: Prevotella nigrescens, Pg: Porphyromonas gingivalis, Pe: Porphyromonans endodontalis, Tf: Tannerella forsythensis, Aa: Actinobillus actinomycetemcomitans, Fn: Fusobacterium nucleatum. Biomaterials Research 2008

호주산 Propolis 의항균활성과치주조직에미치는영향 105 Table 2. The effects of propolis on proliferation of human gingival fibroblast cells con. 1/2 6 (1/64) 1/2 7 (1/128) 1/2 8 (1/256) 1/2 9 (1/512) 1/2 10 (1/1,024) 1/2 11 (1/2,048) 1/2 12 (1/4,096) Mean 0.324 1.089 0.531 0.279 0.108 0.217 0.258 0.295 S.D. 0.013 0.063 0.127 0.108 0.078 0.038 0.042 0.046 p-value 0.002 * 0.105 0.545 0.038 * 0.030 * 0.102 0.391 * : statistically significant from control group at p<0.05. con.: concentration. M: Mean. S.D.: standard deviation. Table 3. The effects of propolis on proliferation of human periodontal ligament fibroblast cells con. 1/2 6 (1/64) 1/2 7 (1/128) 1/2 8 (1/256) 1/2 9 (1/512) 1/2 10 (1/1,024) 1/2 11 (1/2,048) 1/2 12 (1/4,096) Mean 0.226 0.955 0.361 0.113 0.094 0.125 0.099 0.185 S.D. 0.044 0.332 0.173 0.011 0.022 0.069 0.014 0.077 p-value 0.060 0.308 0.040 * 0.020 * 0.111 0.029 * 0.483 * : statistically significant from control group at p<0.05. con.: control. M: Mean. S.D.: standard deviation. Figure 1. The effects of propolis on proliferation of human gingival fibroblast cells. * : statistically significant from control group at p<0.05. Figure 2. The effects of propolis on proliferation of human periodontal ligament fibroblast cells. * : statistically significant from control group at p<0.05. 임상지수와치은열구삼출액의변화량 Propolis 가첨가된치주포대를적용후 10 명의피실험자에서, 협구개측에서측정된치은열구출혈지수는초진과비교시통계학적으로유의하게감소되지않았으나 (p>0.05) 개선되는경향을보였으며, 협구개측에서측정된치은열구삼출액은 초진시에비교시통계학적으로유의하게감소하였다 (p<0.05) (Table 4). 연구대상자의평가절반정도의피실험자들은치주포대가유지되는동안치아 Vol. 12, No. 3

106 주동옥 국중기 김병옥 김생곤 Table 4. Changes in sulcus bleeding index and gingival creviculr fluid parameters 1 week after of application by periodontal dressing index location SBI GCF Buccal Palatal Buccal Palatal baseline 0.18±0.39 0.28±0.45 109±44.5 114±44.0 1-week after 0.15±0.36 0.18±0.39 54.8±24.7 84.5±44.0 p-value 0.311 0.09 0.00003 * 0.012 * * : statistically significant between baseline and results at p<0.05. SBI: sulcular bleeding index. GCF: gingival crevicular fluid. 면과떨어진느낌을호소하였으며, 치주포대의탈락도관찰되었다. 치주포대의형태에있어서는불편감이적었고, 맛과향에있어서는 2가지의치주포대사이에명확한차이가존재하지않았다. 그러나 propolis를첨가한치주포대가 Coe-Pak 보다더잘떨어지는단점이존재함에도불구하고, 20% 의실험자는 propolis를첨가한치주포대의사용을선호하였다 (Table 5). Propolis가천연물질이라고하지만, 과민증 9), allergic cheilitis 10), 그리고구강궤양 11) 과같은반응초래할수있다고보고되어이연구를시행하기전에몇가지사항을고려하여시험하였다. 먼저 propolis에대한과민반응이있는지를확인하였으며, 치주조직에끼치는영향을평가하고자치은열구액의유출량을측정한다음치은열구출혈지수를측정하였으며, 치주조직의염증반응을지속적으로조절하기위한방법으로기존의치주포대와함께섞어사용하였다. 치은섬유아세포와치주인대섬유아세포의 MTT 결과를살펴보면, 대조군과비교해서 propolis의희석농도 1/2 6 에서세포활성도가유의성있게증가된것은뜻밖의결과이나이것은침전물이생기면서전반적인 propolis의농도가이보다감소했기때문이라고생각된다. 기존의치주포대에혼합된 propolis의희석농도는 (1) 두섬유아세포가대조군과유사한세포활성을나타낸농도그리고, (2) 검사된세균들중에서 Fn에대한최소살균농도를감안하여희석농도 1/2 7 을선택하였다. 7개의세균종중에서 Fn의최소살균농도를특별히선정한이유는혼합세균막생태계내에서 Fn은 Pn과 Pg 등많은수의혐기성세균의생존에필수적이기때문이었다. 1) 이농도로희석된 propolis를치주포대에첨가하여대상치아에적용하여 3일간유지하고제거한후다시 4일후에내원시켜초진시와동일한방법으로측정하였는데, 이것은접합상피세포의교환속도를감안하여이프로토콜을계획하였다. 1) Propolis의항균활성에대한연구를살펴보면, 이연구에서는배양된치주병인균에대한 2시간동안의최소살균농도는 Pi Table 5. Patient assessment of packs expressed as number and % of observations in 10 patients Coe-Pak(%) Coe-pak with propolis(%) dressing loose 5 / 10 (50) 6 / 10 (60) unpleasant appearance 3 / 10 (30) 1 / 10 (10) unpleasant taste/smell 5 / 10 (50) 5 / 10 (50) preferred dressing 6 / 10 (60) 2 / 10 (20) ATCC 25611에서는 0.16% (1/640), Pn ATCC 25261과 Pg ATCC 33277에서는 0.32% (1/320), Pe ATCC 35406과 Tf ATCC 43037에서는 2.5% (1/40), Aa ATCC 33384에서는 10% (1/10) 미만에서그리고 Fn ATCC 23726에서는 0.63% (1/160) 였다. Santos 등 12) 은브라질산 propolis의구강혐기성세균에대한항균활성은 propolis내에포함되어있는여러화합물들의상승효과때문이며세균의최소억제농도는 64에서 1024 µg/ml라고하였다. 또한, Sonmez 등 13) 은알콜이함유되지않은호주산 30% propolis를이용하여치주질환원인균에대한최소억제농도를측정하였는데 Pg, Pi, 그리고 Fn 등은 1/ 128로희석된농도에서, 그리고미국산 20% propolis를이용한연구에서는 Pg와 Pi에서는 1/256, 그리고 Fn에서는 1/128 로희석된농도에서성장이억제되었다고보고하였다. 위의연구들은연구된세균종에대해자세한기술이없었고최소억제농도를측정하여이연구와비교하기어려웠다. 그러나 propolis를적절한농도로희석해서사용한다면항균효과를얻을수있음을알수있었다. Propolis 희석용액의연구는대부분이세균에관련되어이루어졌는데사람을대상으로한연구를살펴보면, Murray 등 14) 은 chlorhexidine 구강양치용액과 propolis 추출물이 10% 함유된구강양치용액을이용하여치태형성억제효과를평가하였는데, propolis가함유된양치용액은치태의재성장을억제하지못했다고보고하면서, propolis와관련된문제점은추출물이생산지에좌우되어변이성이나타난다는것이며, 그화합물의작용기전은밝혀져있지않다고하였는데, 향후에는호주산 propolis의활성물질을규명하는연구가지속되어야할것이다. 이연구에서는치주조직의염증반응을지속적으로조절하기위한방법으로기존의치주포대에세포에독성을나타내지않는희석농도 (1/2 7 ) 로함께섞어 3일동안적용하고다시 4일후에치은열구액과치은열구출혈지수를측정하였다. 치주포대는 1923년 Ward에의해수술부위에나타나는동통, 감염, 치아의지각과민을줄이기위해처음으로잇몸수술영역에서사용되었다. 14) 그러나치주포대는치태침착 15,16) 과 eugenol과같은구성물질에의한독성 17) 이나과민증 18) 이일어날수있는단점을지니고있어이러한단점을보완하기위해 non-eugenol pack(coe-pak) 이개발되어현재널리사용되고있으며, 정균제와살균제를치주포대에첨가하는시도 20) 가이루어졌으나이에대해서는임상적인결과가제한적이었다. 치은열구액은염증성삼출액으로서치은에염증이있을때, Biomaterials Research 2008

호주산 Propolis 의항균활성과치주조직에미치는영향 107 거친음식의저작시, 칫솔질, 치은맛사지, 배란, 호르몬성피임약, 흡연등에의해증가되며, 1일주기성을가지고있다. 1) 따라서연구대상을선정할때이러한요인들을감안하였으며 1 명의검사자가초진시와동일한시간에, 동일한방법으로측정하였다. 이연구에서 propolis가첨가된치주포대를적용후 10명의피실험자의협구개측에서측정된치은열구삼출액은초진시와비교하여통계학적으로유의하게감소하였는데, 이것은 propolis의소염효과를반영한것으로생각된다. 치은열구출혈지수는치은상태를객관적으로쉽게반복해서측정할수있고초기염증변화탐지에매우유용하며시진에의해접근할수없는치주낭기저부의염증성병소를탐지하는데유용하므로이연구에사용되었다. 1) 치은열구출혈지수는초진과비교하여감소되는경향을보였는데, 이것은연구대상의출혈지수가낮은치은염에국한되었기때문에이러한결과가도출되었다고생각된바, 향후에는치은열구출혈지수가높은환자를대상으로한연구가시행되어야할것이다. 또한, 희석된 propolis를치주포대와함께섞어서피검자의치아에사용했을때, 기존의치주포대를사용했을때와비슷한결과가나타났으나선호도에있어서약간의차이가존재한바 propolis를치주포대로제품화하였을때이러한점을고려하여야할것으로생각되었다. 이연구결과호주산 proplois가치주병인균과관련되어항균활성과소염효과가있다고확인되었는데, Banskota 등 21) 이 propolis가산소유리기를제거하는효과를나타낸다고보고한것처럼치주질환도과도한산소유리기때문에질환이진행될수있기때문에향후에는치주질환의병인발생억제에관한임상실험, 그리고창상치유효과에대한연구가필요할것이다. 결 이연구는호주산 propolis 가치주질환과연관된세균에대한항균활성, 사람의치은섬유모세포와치주인대섬유모세포에대한세포적합성, 그리고 propolis 를첨가한치주포대를환자의잇몸에적용한후치은열구출혈지수와치은열구액의변화에끼치는영향을평가하였다. Propolis 의배양된치주병인균에대한 2 시간동안의최소살균농도는 Pi ATCC 25611 에서는 0.16% (1/640), Pn ATCC 25261 과 Pg ATCC 33277 에서는 0.32% (1/320), Pe ATCC 35406 과 Tf ATCC 43037 에서는 2.5% (1/40), Aa ATCC 33384 에서는 10% (1/10) 미만에서그리고 Fn ATCC 23726 에서는 0.63% (1/160) 였다. 대조군과각농도별로처치한실험군을배양 2 일후 MTT assay 를이용하여세포활성을평가하였는데, 사람의치은섬유모세포와치주인대섬유모세포에대해 propolis 는 1/2 8 ~1/2 11 의농도에서대조군과비교시에활성감소가유의하게일어났으며, 1/2 6, 1/2 7, 그리고 1/2 12 농도에서는세포들에독성을나 론 타내지않았다. 치은열구출혈지수는초진과비교시개선되는경향을보였으며, 협구개측에서측정된치은열구삼출액은초진시에비교시통계학적으로유의하게감소하였다 (p<0.05). 이연구결과호주산 proplois 가치주병인균과관련되어항균활성과소염효과가있다고확인되었는데, 향후에는치주질환의병인발생억제에관한임상실험, 그리고창상치유효과에대한연구가필요할것이다. 감사의글 이논문은조선대학교교내학술연구비지원을받아연구되었음. 참고문헌 1. M. G. Newman, H. H. Takei, and F. A. Carranza, CARRANZA'S Clinical PERIDODONTOLGY 9th ed. W.B. Saunders, 16-35, 96-112, 253-262, 431-453, 675-687, (2002). 2. 권영선, 김병옥, 고영무. 수종의치주질환원인균에대한프로폴리스의항균효과. 대한치과기자재학회지, 33(4), 395-405 (2006). 3. K. Ikeno, M. Ikeno, and C. Miyazawa, Effects of propolis on dental caries rats. Caries Res, 25, 347-351 (1991). 4. A. Kujumgiev, I. Tsvetkova, Y. Serkedjieva et al., Antibacterial, antifungal ad antiviral activity of propolis of different geographic origin. J Ethnopharmacol, 64, 235-240 (1999). 5. Propolis: a background" BDJ. 200, 359-360 (2006). 6. P. H. Rodrigues, S. A. Carvalho, J. E. Costa et al., Black-pigmented Gram-negative anaerobes in Brazilian adults with periodontal disease. Anaerobe, 5, 267-268 (1999). 7. J. Slots, Selective medium for Actinobacillus actinomycetemcomitans. J Clin Micro, 606-609 (1982). 8. E. L. Ghisalberti, Propolis: a review, Bee World, 60, 59-84 (1979). 9. F. C. Thien, R. Leung, B. A. Baldo et al., Asthma and anaphylaxis induced by royal jelly. Clinical and experimental allergy. 26, 216-222 (1996). 10. C. Lombardi, M. Bottello, A. Caruso et al., Allergy and skin diseases in musicians. Allerg Immunol., 35, 52-55 (2003). 11. K. D. Hay and D. E. Greig, Propolis allergy: a cause of oral mucositis with ulceration. Oral Surg Oral Med Oral Pathol, 70, 584-586 (1990). 12. F. A. Santos, E. M. A. Bastos, M. Uzeda et al., Antibacterial activity of brazilian propolis and fractions against oral anaerobic bacteria. J Ethnopharmacol, 80, 1-7 (2002). 13. S. Sonmez, L. Kirilmaz, M. Yucesoy et al., The effect bee propolis on oral pathogens and human gingival fibroblasts. J Ethnopharmacol, 102, 371-376 (2005). 14. M. C. Murray, H. V. Worthington, and A. S. Blinkhorn, A study to investigate the effect of a propolis-containing mouthrinse on the inhibition of de novo plaque formation. J Clin Periodontol, 24, 796-798 (1997). 15. T. G. Heaney and J. Appleton, The effect of periodontal dressings on the healthy periodontium. J Clin Periodontol, 3, 66-76 (1976). 16. P. S. Newman and M. Addy, Comparison of hypertonic saline and chlorhexidine mouth rinses after inverse bevel flap procedure. J Periodontol, 53, 315-318 (1982). Vol. 12, No. 3

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