생약학회지 Kor. J. Pharmacogn. 47(1) : 1 6 (2016) 히어리나무의페놀성화합물및세포독성활성 권오길 1 김충섭 1 서원세 1 박경진 1 차준민 1 최상운 2 권학철 3 이강노 1 * 1 성균관대학교약학대학천연물약품화학연구실, 2 한국화학연구원, 3 한국과학기술연구원천연물연구소 Phenolic Compounds from the Twigs of Corylopsis coreana Uyeki and Their Cytotoxic Activity Oh Kil Kwon 1, Chung Sub Kim 1, Won Se Suh 1, Kyoung Jin Park 1, Joon Min Cha 1, Sang Un Choi 2, Hak Cheol Kwon 3, and Kang Ro Lee 1 * 1 Natural Product Laboratory, School of Pharmacy, Sungkyunkwan University, Suwon 16419, Korea 2 Korea Research Institute of Chemical Technology, Daejeon 34114, Korea 3 Natural Product Research Center, Korea Institute of Science and Technology, Gangnueng, Gangwon-do 25451, Korea Abstract Phytochemical investigation of the twigs of Corylopsis coreana afforded 10 phenolic compounds, bergenin (1), 6 - O-galloylbergenin (2), 3 -O-galloylbergenin (3), (-)-catechin (4), (-)-epicatechin (5), (-)-epicatechin-3-o-galloyl ester (6), 4- methoxy-3,-5-dihydroxybenzoic acid (7), gallic acid (8), 2,4,6-trimethoxyphenol-1-O-β-D-glucopyranoside (9), and 2,4,6-trimethoxyphenol-1-O-β-D-(6-O-galloyl)-glucopyranoside (10). Their structures were characterized by spectroscopic data and identified by comparing these data with those in the literatures. The compounds 3, 9 and 10 were isolated for the first time from this source. All the isolates (1-10) were tested for their cytotoxic activity against A549, SK-OV-3, SK-MEL-2, and HCT15 cell lines in vitro using the SRB bioassay. The compounds 5, 7 and 8 exhibited selective cytotoxic activity against SK-MEL-2 cell line. Key words Corylopsis coreana, Hamamelidaceae, Bergenin, Flavonoid, Cytotoxicity 히어리나무 (Corylopsis coreana) 는조록나무과 (Hamamelidaceae) 에속하며한국에널리분포하고있는식물이다. 주로산기슭과산중턱에서식하며, 3 월에서 4 월에개화하고 9 월에열매가익는다. 1) 내한성이강해영하 30 o C 이하에서도동해를입지않고내건성또한우수해건조한토양에서도잘자란다. 전통적으로감기, 몸살, 발열에이식물의근피가처방되어왔다. 2) 기존의히어리나무 (C. coreana) 의식물화학적연구에서는 phenyl propanoid derivatives, tannins, flavonoids, 및 terpenoids 등이보고되어있고, 3,4) 그중일부는항산화활성과항염증작용을나타내었다. 5) 본연구에서는국내에자생하는천연자원들의활성성분연구의일환으로히어리나무 (C. coreana) 의가지부분에대한성분연구를진행하였다. 80% MeOH 로추출한히어리나무 (C. coreana) 가지추출액을극성별로 n-hexane, chloroform, ethyl acetate, n-butanol 층으로분획하였고이중 ethyl acetate 층 * 교신저자 (E-mail):krlee@skku.edu (Tel): +82-31-290-7710 으로부터 column chromatography 방법을이용하여총 10 종의화합물을분리하였다. 분리된화합물의구조는 NMR, MS 데이터를이용하여결정하였으며, 기존에보고된문헌과비교하여확인하였다 (Fig. 1). 분리된화합물은 Sulforhodamine B(SRB) 측정법에의해네종류의암세포에대한세포독성을측정하였다. 재료및방법 시약및기기 1 H-NMR 과 13 C-NMR spectra 는 Varian UNITY INOVA 500 NMR spectrometer 를이용하여측정하였다. IR spectra 는 Bruker IFS-66/S FT-IR spectrometer 를이용하였다. FAB, HRFAB mass spectra 는 JEOL JMS700 mass spectrometer 를이용하였다. Semi-preparative HPLC 는 Gilson 306 pump 와 Shodex refractive index detector 를함께이용하였고, column 으로는 J sphere ODS-M80 column (250 10 mm I.D.) 을이용하였다. Low-pressure liquid chromatography 는 Lichroprep Lobar -A RP-C 18 (240 10 mm 1
2 Kor. J. Pharmacogn. Fig. 1. Chemical structures of compounds (1-10) from C. coreana. I.D.) column이 FMI QSY-O pump(isco) 와함께이용되었다. Column chromatography에이용된충진제는 silica gel 60 (Merk Co., 70-230 mesh), RP-C 18 silica gel(ymc GEL ODS-A, 12 nm, S-75 μm) 과 sephadex LH-20(Pharmacia Co.) 가이용되었다. TLC는 Merck precoated silica gel F254 plates를이용하였으며, RP TLC로는 RP-C 18 F 254s plates가이용되었다. UV light를이용하여 254 nm와 365 nm 파장에서 1차적으로확인하고 anisaldehyde-sulfuric acid를이용하여발색확인하였다. 실험재료 연구에이용된히어리나무 (C. coreana) 의가지는 2014년 6월수원성균관대학교근교에서채집하였고, 저자중의한명인이강노교수가동정하였다. 음건후세절 하여사용하였으며, 그표본 (SKKU-NPL-1402) 은성균관대학교약학대학표본실에보관하고있다. 추출및분리 히어리나무 (C. coreana) 의가지 (8 kg) 는 80% MeOH 용매를이용하여추출되었고, 동시에여과지에여과되었다. 여과된추출액은감압농축기를이용하여농축되었고, MeOH 농축액 (570 g) 을얻었다. MeOH 농축액을증류수 800 ml에녹인후에 n-hexane, chloroform, ethyl acetate, n-butanol을이용해순차적인용매분획을시행하여각각 15, 3, 20, 50 g을얻었다. Ethyl acetate 분획 15 g을 silica gel column(230-400 mesh, 360 g), chloroform/meoh/ water(5:1:0.1) 조건으로진행하였고, 9개의소분획 (A-I) 을얻었다. 소분획 B(670 mg) 은 RP-C 18 silica gel column(30%
Vol. 47, No. 1, 2016 3 Table I. Cytotoxic activities of compounds (1-10) from C. coreana Compound IC 50 (µm) a A549 SK-OV-3 SK-MEL-2 HCT-15 1 >30.0 >30.0 >30.0 >30.0 2 18.27 17.74 16.22 18.31 3 23.86 19.44 15.75 17.80 4 >30.0 >30.0 18.29 >30.0 5 14.85 15.17 7.41 18.03 6 18.36 19.54 12.64 20.08 7 12.17 12.04 8.26 11.97 8 13.24 4.03 1.96 14.33 9 >30.0 >30.0 >30.0 >30.0 10 27.05 27.21 16.39 21.58 Cisplatin b 1.96 2.11 1.17 3.04 a 50% inhibitory concentration; the concentration of compound that caused a 50% inhibition in cell growth. b Positive control substance. CH 3 CN) 과 RP-C 18 semi-prep HPLC(28% CH 3 CN) 정제과정을거쳐화합물 7(9 mg) 을얻었다. 소분획 C(300 mg) 은 RP- C 18 silica gel column(15% CH 3 CN) 과 RP-C 18 semi-prep HPLC(10% CH 3 CN) 정제과정을거쳐화합물 9(7 mg) 을얻었다. 소분획 D(3.5 g) 은 RP-C 18 silica gel column(40% MeOH) 을이용하여 3 개의소분획 (D1-D3) 으로분리하였다. 소분획 D1(670 mg) 은 RP-C 18 silica gel column(20% CH 3 CN) 을이용해 3 개의소분획 (D11-D13) 으로분리하였고, 소분획 D12(60 mg) 은 Lobar -A RP-C 18 (20% MeOH) 과 RP-C 18 semi-prep HPLC(29% CH 3 CN) 정제과정을거쳐화합물 5(4 mg) 를얻었다. 소분획 D13(100 mg) 은 RP-C 18 Sep-pak(20% CH 3 CN) 과정과 RP-C 18 semi-prep HPLC(29% CH 3 CN) 정제과정을거쳐화합물 10(16 mg) 을얻었다. 소분획 D2(1.8 g) 은 RP-C 18 silica gel column(40% MeOH) 과 RP-C 18 semi-prep HPLC(17% CH 3 CN) 정제과정을거쳐화합물 1(20 mg) 을얻었다. 소분획 E(700 mg) 는 RP-C 18 silica gel column(40% MeOH) 을이용하여 4 개의소분획 (E1-E4) 으로분리하였다. 소분획 E2(110 mg) 는 Lobar -A RP-C 18 (20% CH 3 CN) 을이용하여 3 개의소분획 (E21-E23) 으로분리하였고, 소분획 E22(20 mg) 는 RP-C 18 semi-prep HPLC (20% CH 3 CN) 정제과정을거쳐화합물 4(5 mg) 를얻었다. 소분획 E3(190 mg) 은 Lobar -A RP-C 18 (20% CH 3 CN) 을이용하여 3 개의소분획 (E31-E33) 으로분리하였다. 소분획 E32(80 mg) 는 RP-C 18 semi-prep HPLC(20% CH 3 CN) 정제과정을거쳐화합물 6(20 mg) 을얻었다. 소분획 E33(20 mg) 은 RP-C 18 semi-prep HPLC(20% CH 3 CN) 정제과정을거쳐화합물 2(7 mg) 를얻었다. 소분획 F(400 mg) 는 RP-C 18 silica gel column(18% CH 3 CN) 과 RP-C 18 semi-prep HPLC(29% CH 3 CN) 정제과정을거쳐화합물 3(10 mg) 을얻었다. 소분획 G(520 mg) 는 RP-C 18 silica gel column(20% MeOH) 과 RP- C 18 semi-prep HPLC(15% CH 3 CN) 과정을거쳐화합물 8(28 mg) 을얻었다. 화합물 1 Yellow powder; m.p. 277-278 o C; 1 H NMR (CD 3 OD, 500 MHz) δ: 7.10 (1H, s, H-6), 4.97 (1H, d, J=10.5 Hz, H-1 ), 4.09 (1H, dd, J=10.4 Hz, 9.5 Hz, H-2 ), 4.05 (1H, dd, J=11.5 Hz, 1.6 Hz, H-6 ), 3.93 (3H, s, OCH 3 ), 3.83 (1H, dd, J=14.7 Hz, 5.5 Hz, H-3 ), 3.72 (1H, dd, J=11.6 Hz, 6.9 Hz, H-6 ), 3.68 (1H, m, H-5 ), 3.46 (1H, t, J=9.1 Hz, H-4 ). 13 C NMR (CD 3 OD, 125 MHz) δ: 165.9 (C-7), 149.5 (C-3), 142.4 (C-4), 119.5 (C-1), 117.4 (C-2), 111.1 (C-5, C-6), 83.1 (C-5 ), 81.5 (C-2 ), 75.7 (C- 3 ), 74.3 (C-1 ), 72.0 (C-4 ), 62.8 (C-6 ), 61.0 (OCH 3 ); FABMS, m/z 329 [M+H] +. 화합물 2 Yellow gum; 1 H NMR (CD 3 OD, 500 MHz) δ: 7.13 (2H, s, H-2, H-6 ), 7.12 (1H, s, H-6), 5.06 (1H, d, J=10.5 Hz, H-1 ), 4.42 (1H, dd, J= 12.2 Hz, 6.6 Hz, H-6 ), 4.13 (1H, t, J=10.0 Hz, H-4 ), 3.98 (1H, m, H-5 ), 3.92 (3H, s, OCH 3 ), 3.87 (2H, m, H-2, H-6 ), 3.57 (1H, m, H-3 ). 13 C NMR (CD 3 OD, 125 MHz) δ: 165.9 (C-7), 149.4 (C-3), 142.4 (C-4), 119.6 (C-1), 117.8 (C-2), 111.3 (C-5), 81.4 (C-5 ), 80.8 (C-2 ), 74.5 (C-3 ), 74.3 (C-1 ), 71.9 (C-4 ), 64.8 (C-6 ), 61.1 (OCH 3 ), 168.3 (C-7 ), 146.7 (C-3, C-5 ), 140.2 (C-4 ), 121.1 (C-1 ), 110.4 (C-2, C- 6 ); FABMS, m/z 481 [M+H] +. 화합물 3 Yellow gum; 1 H NMR (CD 3 OD, 500 MHz) δ: 7.16 (2H, s, H-2, H-6 ), 7.11 (1H, s, H-6), 5.58 (1H, t, J=8.7 Hz, H-4 ), 5.17 (1H, d, J= 10.2 Hz, H-1 ), 4.44 (1H, t, J=9.8 Hz, H-3 ), 4.07 (1H, d, J=11.7 Hz, H-6 ), 3.94 (3H, s, OCH 3 ), 3.84 (1H, brs, H-5 ), 3.79 (2H, m, H-2, H-6 ). 13 C NMR (CD 3 OD, 125 MHz) δ: 165.4 (C- 7), 152.6 (C-5), 149.6 (C-3), 142.5 (C-4), 119.4 (C-1), 117.1 (C-2), 111.3 (C-6), 83.2 (C-5 ), 79.2 (C-2 ), 76.2 (C- 3 ), 74.4 (C-1 ), 70.2 (C-4 ), 62.4 (C-6 ), 61.0 (OCH 3 ), 167.9 (C-7 ), 146.6 (C-3, C-5 ), 140.1 (C-4 ), 121.3 (C- 1 ), 110.5 (C-2, C-6 ); FABMS, m/z 481 [M+H] +. 화합물 4 Yellow gum; 1 H NMR (CD 3 OD, 500 MHz) δ: 6.86 (1H, d, J=2.0 Hz, H-2 ), 6.78 (1H, d, J=8.0 Hz, H-6 ), 6.74 (1H, d, J=8.0 Hz, H-5 ), 5.95 (1H, s, H-8), 5.87 (1H, s, H-6), 4.58 (1H, d, J=7.4 Hz, H-2), 3.99 (1H, m, H-3), 2.87 (1H, dd, J=16.0 Hz, 5.1 Hz, H-4), 2.52 (1H, dd, J=16.1 Hz, 8.2 Hz, H-4). 13 C NMR (CD 3 OD, 125 MHz) δ: 157.8 (C-9), 157.5 (C-7), 156.8 (C-5), 146.2 (C-3 ), 132.2 (C-1 ), 120.0 (C-6 ), 116.1 (C-5 ), 115.2 (C-
4 Kor. J. Pharmacogn. 2 ), 100.8 (C-10), 96.3 (C-6), 82.8 (C-2, C-8), 68.8 (C-3), 28.4 (C-4); FABMS, m/z 291 [M+H] +. 화합물 5 Colorless gum; 1 H NMR (CD 3 OD, 500 MHz) δ: 7.0 (1H, s, H-2 ), 6.82 (1H, dd, J=8.2 Hz, 1.9 Hz, H-6 ), 6.78 (1H, d, J=8.1 Hz, H-5 ), 5.96 (1H, d, J=2.3 Hz, H-8), 5.94 (1H, d, J=2.3 Hz, H-6), 4.84 (1H, s, H-2), 4.20 (1H, ddd, J=4.5 Hz, 3.0 Hz, 1.4 Hz, H-3), 2.89 (1H, dd, J=16.6 Hz, 4.6 Hz, H-4β), 2.76 (1H, dd, J=16.7 Hz, 2.8 Hz, H-4α). 13 C NMR (CD 3 OD, 125 MHz) δ: 156.6 (C-8a), 156.2 (C-7), 155.9 (C-5), 144.5 (C-4 ), 144.3 (C-3 ), 130.9 (C-1 ), 117.9 (C-6 ), 114.4 (C-5 ), 113.9 (C-2 ), 98.6 (C-4a), 94.9 (C-6), 94.4 (C-8), 78.4 (C- 2), 66.1 (C-3), 27.8 (C-4); FABMS, m/z 291 [M+H] +. 화합물 6 Yellow gum; 1 H NMR (CD 3 OD, 500 MHz) δ: 6.97 (2H, s, H-2, H-6 ), 6.95 (1H, d, J=1.7 Hz, H-2 ), 6.83 (1H, dd, J=8.2 Hz, 1.6 Hz, H-6 ), 6.72 (1H, d, J=8.2 Hz, H-5 ), 5.99 (1H, d, J=2.2 Hz, H-8), 5.98 (1H, d, J=2.2 Hz, H-6), 5.55 (1H, brs, H-3), 5.05 (1H, s, H-2), 3.02 (1H, dd, J=17.3 Hz; 4.6 Hz, H-4β), 2.87 (1H, dd, J=17.3 Hz, 1.6 Hz, H-4α). 13 C NMR (CD 3 OD, 125 MHz) δ: 167.6 (C-7 ), 157.8 (C-9), 157.7 (C-7), 157.3 (C-5), 146.3 (C-5 ), 146.2 (C-3 ), 145.9 (C-4 ), 145.8 (C-3 ), 139.8 (C-4 ), 131.5 (C-1 ), 121.4 (C-1 ), 119.4 (C-6 ), 116.0 (C-5 ), 115.1 (C-2 ), 110.2 (C-2, C-6 ), 99.4 (C-10), 96.7 (C-6), 95.9 (C-8), 78.6 (C-2), 70.0 (C-3), 26.9 (C-4); FABMS, m/z 443 [M+H] +. 화합물 7 White powder; m.p. 242-244 C; 1 H NMR (CD 3 OD, 500 MHz) δ: 7.06 (2H, s, H-2, H-6), 3.84 (3H, s, OCH 3 ). 13 C NMR (CD 3 OD, 125 MHz) δ: 169.1 (COOH), 146.6 (C-5), 146.6 (C-3), 139.9 (C-4), 121.5 (C- 1), 110.1 (C-2, C-6), 52.4 (OCH 3 ); FABMS, m/z 185 [M+H] +. 화합물 8 Yellow gum; 1 H NMR (CD 3 OD, 500 MHz) δ: 7.05 (2H, s, H-2, H-6). 13 C NMR (CD 3 OD, 125 MHz) δ: 170.4 (COOH), 121.9 (C-1), 110.3 (C-2, C-6), 146.3 (C-3, C-5), 139.6 (C-4); FABMS, m/z 171 [M+H] +. 화합물 9 Yellow gum; 1 H NMR (CD 3 OD, 500 MHz) δ: 6.48 (2H, s, H-3, H-5), 4.81 (1H, d, J=7.4 Hz, anomeric proton), 3.80 (6H, s, OCH 3-2, OCH 3-6), 3.70 (3H, s, OCH 3-4). 13 C NMR (CD 3 OD, 125 MHz) δ: 156.2 (C-4), 154.9 (C-2, C-6), 134.5 (C-1), 103.3 (C-1 ), 96.2 (C-3, C-5), 78.5 (C-3 ), 78.2 (C-5 ), 75.0 (C-2 ), 71.8 (C- 4 ), 62.8 (C-6 ), 61.3 (OCH 3-4), 56.6 (OCH 3-2, OCH 3-6); FABMS, m/z 347 [M+H] +. 화합물 10 Yellow gum; 1 H NMR (CD 3 OD, 500 MHz) δ: 7.08 (2H, s, H-3, H-5), 6.41 (2H, s, H-2, H-6 ), 4.85 (1H, d, J=7.6 Hz, anomeric proton), 4.65 (1H, dd, J=11.9 Hz, 1.8 Hz, H-6 ), 4.45 (1H, dd, J=11.9 Hz, 6.7 Hz, H- 6 ), 3.69 (3H, s, OCH 3-4), 3.69 (6H, s, OCH 3-2, OCH 3-6). 13 C NMR (CD 3 OD, 125 MHz) δ: 166.8 (COO), 154.4 (C- 4), 153.3 (C-2), 153.3 (C-6), 145.1 (C-3, C-5 ), 138.5 (C-4 ), 133.2 (C-1), 119.9 (C-1 ), 108.7 (C-2 ), 108.7 (C- 6 ), 101.8 (C-1 ), 94.9 (C-3, C-5), 76.2 (C-3 ), 74.4 (C-5 ), 73.5 (C-2 ), 70.3 (C-4 ), 63.7 (C-6 ), 59.8 (OCH 3-4), 55.1 (OCH 3-2, OCH 3-6); FABMS, m/z 499 [M+H] +. 세포독성측정 6) 분리된화합물에대한세포독성측정을위해 SRB 방법이적용되었고, 한국화학연구원에서수행되었다. 네종류의인간암세포인 A549( 폐암세포 ), SK-OV-3 ( 난소암세포 ), SK-MEL-2( 피부암세포 ), HCT15( 대장암세포 ) 에대해 sulforhodamine B dye로염색하여흡광도를측정하였고, 이흡광도는생존세포들의수에비례하게나타난다. 대조군으로는 cisplatin이사용되었다. A549, SK-OV-3, SK-MEL-2, HCT15 세포에대한 cisplatin의세포독성은각각 IC 50 1.96, 2.11, 1.17, 3.04로확인되었다. 결과및고찰 히어리나무 (C. coreana)80% MeOH 추출물의 ethyl acetate 분획으로부터분리된 10 종의화합물은 3 종의 bergenin 계화합물, 3 종의 flavonoids, 그리고 4 종의 phenolic 화합물로확인되었다. 분리된화합물은 1 H-NMR 과 13 C-NMR data 를기존에보고된문헌과비교하여구조동정하였으며, SRB 측정법을통해화합물각각의세포독성을측정하였다. 이중에서화합물 3, 9, 10 은히어리나무 (C. coreana) 에서처음분리된화합물로확인되었고, 이에대해고찰하고자한다. 화합물 3 의 1 H NMR spectrum 에서 bergenin 계화합물에서특징적으로나타나는 δ 7.11 의 singlet(1h, H-6) 과 δ 5.17 에서나타나는 doublet(1h, J=10.2 Hz, H-1 ) 그리고 δ 3.94 에서나타나는 singlet(3h, OCH 3-4)peak 을확인할수있었다. 7-9) 화합물 1 과의다른점은화합물 3 의 1 H NMR spectrum 에서 δ 7.16 의 singlet(2h, H-2, H-6 ) 으로나타나는 gallic acid moiety 의 phenolic proton 이추가된것이고, 13 C NMR spectrum 에서는 gallic acid moiety 의특징적인 peak 인 δ 167.9(C-7 ), 146.6(C-3, C-5 ), 140.1(C-4 ), 121.3(C-1 ), 110.5(C-2, C-6 ) 가추가된것이다. 이로부터화합물 3 에 gallic acid moiety 가존재한다는것을추정할수있었다. 화합물 1 의 1 H NMR data 와의비교를통해화합물 3 의 H-3 위치에서 δ 3.83 이 δ 4.44 로 downfield shift 하는것을확인하였고, 기존문헌 10) 과의비교를통해최종적으로 gallic acid moiety 가 C-3 위치에결합된 3 -Ogalloylbergenin 으로확인하였다.
Vol. 47, No. 1, 2016 5 화합물 9의 1 H NMR spectrum에서 δ 6.49 위치에 singlet (2H, H-3, H-5) 으로나타나는 phenolic proton과, δ 3.80 위치에나타나는 singlet(6h, OCH 3-2, OCH 3-6)peak을통해화학적환경이같은각각 2개의 phenolic proton과 methoxy group이존재하고있음을확인할수있었다. 또한 δ 3.70의 singlet(3h, OCH 3-4) 을통해앞선두개의 methoxy group과화학적환경이다른하나의 methoxy group을확인하였다. δ 4.81에위치하고있는당의 anomeric proton을확인할수있었고, 13 C NMR spectrum에서 δ 103.3에나타나는 anomeric carbon과 δ 78.5(C-3 ), 78.2(C-5 ), 75.0(C-2 ), 71.8 (C-4 ), 62.8(C-6 ) 을확인함으로써 glucose의존재를추정할수있었다. 이상의 spectroscopic data를문헌 11) 과비교하여이화합물이 2,4,6-trimethoxyphenol-1-O-β-D-glucopyranoside 임을확인할수있었다. 화합물 10의 1 H NMR 및 13 C NMR spectrum은화합물 9와매우유사하였다. 차이점으로는화합물 10의 1 H NMR spectrum에서 δ 6.41에 singlet(2h, H-2, H-6 ) 으로나타나는 gallic acid moiety의 phenolic proton이추가된것이고, 13 C NMR spectrum에서는 gallic acid moiety의특징적인 peak인 δ 166.8(C-7 ), 145.1(C-3, C-5 ), 138.5(C-4 ), 119.9 (C-1 ), 108.7(C-2, C-6 ) 이추가된것이다. 또한화합물 9 에서 δ 62.8에존재하던 glucose의 C-6 peak이화합물 10 에서는 δ 63.7로 downfield shift 하는것을확인할수있었고, 이로부터 gallic acid moiety가 C-6 에결합된것을추정할수있었다. 이상의 spectroscopic data를문헌 12) 과비교하여화합물 10의구조를 2,4,6-trimethoxyphenol-1-O-β-D-(6- O-galloyl)-glucopyranoside로확인하였다. 분리된화합물 1-10의세포독성은 A549( 폐암세포 ), SK- OV-3( 난소암세포 ), SK-MEL-2( 피부암세포 ), HCT15( 대장암세포 ) 에대해 SRB 측정법을적용하여확인하였으며, 이때의대조군은 cisplatin이사용되었다. 그결과화합물 2-8, 10 이 4종류의암세포에대해독성을나타내었으며 (IC 50 1.96-27.21 μm, Table I), 그중화합물 5, 7, 8이 SK-MEL-2 세포에대해각각 IC 50 7.41, 8.26, 1.96 μm의강한세포독성을나타내었고, 화합물 8이 SK-OV-3 세포에대해강한세포독성을나타내었다 (IC 50 4.03 μm). 결 히어리나무 (C.coreana) 80% MeOH 추출물을용매분획하여얻어진 ethyl acetate 층을각종 chromatography 분리기법으로총 10 종의화합물을분리하였고, 이들의 1 H NMR, 13 C NMR, MS 데이터를기존에보고된논문과비교하여동정하였으며, 각각 bergenin(1), 7-9) 6 -O-galloylbergenin(2), 3) 3 -O-galloylbergenin(3), 10) (-)-catechin(4), 13) (-)-epicatechin (5), 14) (-)-epicatechin-3-o-galloylester(6), 15) 4-methoxy-3,5- 론 dihydroxybenzoic acid(7), 16) gallic acid(8), 17) 2,4,6-trimethoxyphenol-1-O-β-D-glucopyranoside(9), 11) 2,4,6-trimethoxyphenol- 1-O-β-D-(6-O-galloyl)-glucopyranoside(10) 12) 로확인되었다. 그중화합물 3, 9, 10은히어리나무 (C. coreana) 에서처음으로분리된것으로확인하였다. 분리된화합물 (1-10) 에대해세포독성활성을측정하였으며, 화합물 5, 7, 8이강한세포독성을나타내었다 (IC 50 1.96-8.26 μm). 사 이논문은 2016 년도정부 ( 교육부 ) 의재원으로한국연구재단의지원을받아수행된기초연구사업임 (NRF-2012R1 A5A2A28671860). 사 인용문헌 1. 이창복 (2003) 원색대한식물도감, 500. 향문사, 서울. 2. 박종희 (2004) 한국약초도감, 636. 신일상사, 서울. 3. Kim, M. H., Ha, S. Y., Oh, M. H., Kim, H. H., Kim, S. R. and Lee, M. W. (2013) Anti-oxidative and anti-proliferative activity on human prostate cancer cells lines of the phenolic compounds from Corylopsis coreana Uyeki. Molecules 18: 4876-4886. 4. Iwashina, T., Kitajima, J. and Takemura, T. (2012) Flavonoids from the leaves of six Corylopsis species (Hamamelidaceae). Biochem. Syst. Ecol. 44: 361-363. 5. Patel, D. K., Patel, K., Kumar, R., Gadewar, M. and Tahilyani, V. (2012) Pharmacological and analytical aspects of bergenin: a concise report. Asian Pac. J. Tro. Dis. 163-167 6. Skehan, P., Stroreng, R., Scudiero, D., Monks, A., Mcmahon, J., Vistica, D., Warren, J. T., Bokesch, H., Kenney, S. and Boyd, M. R. (1990) New colorimetric cytotoxicity assay for anti-cancer-drug screening. J. Natl. Cancer Inst. 82: 1107-1112. 7. Nunomura, R. C. S., Oliveira, V. G., Da Silva, S. L. and Nunomura, S. M. (2009) Characterization of bergenin in Endopleura uchi bark and its anti-inflammatory activity. J. Braz. Chem. Soc. 20: 1060-1064. 8. Sariga, C. D., Shakila, R. and Kothai, S. (2015) Isolation, characterization and quantification of bergenin from Syzygium cumini stem bark. Int. Res. J. Pharm. 6: 108-110. 9. Taneyama, M., Yoshida, S., Kobayashi, M. and Hasegawa, M. (1983) Isolation of norbergenin from Saxifraga stolonifera. Phytochemistry 22: 1053-1054. 10. Yoshida, T., Takama, T. and Okuda, T. (1982) Bergenin derivatives from Mallotus japonicas. Phytochemistry 20: 1180-1182. 11. Hongmei, P., Bin, C., Fu, L. and Mingkui, W. (2013) Chemical constituents from the stems of Dendrobium denneanum (ll). Chin. J. Appl. Environ Biol. 19: 952-955.
6 Kor. J. Pharmacogn. 12. Nonaka, G., Nishimura, H. and Nishioka, I. (1982) Tannins and related compounds. IV. seven new phenol glucoside gallates from Quercuss tenphylla MAKINO (1). Chem. Pharm. Bull. 30: 2061-2067. 13. Lin, H. Y., Kuo, Y. H., Lin, Y. L. and Chiang, W. C. (2009) Antioxidative Effect and active components from leaves of Lotus (Nelumbo nucifera). J. Agric. Food Chem. 57: 6623-6629. 14. Foo, L. Y., Lu, Y., Howell, A. B. and Vorsa, N. (2000) The structure of cranberry proanthocyanidins which inhibit adherence of uropathogenic P-fimbriated Escherichia coli in vitro. Phytochemistry 54: 173-181. 15. Braca, A., Politi, M., Sanogo, R., Sanou, H., Morelli, I., Pizza, C. and De Tommasi, N. (2003) Chemical composition and antioxidant activity of phenolic compounds from wild and cultivated Sclerocarya birrea (Anacardiaceae) leaves. J. Agric. Food Chem. 51: 6689-6695. 16. Saxena, G., McCutcheon, A. R., Farmer, S. Towers, G. H. N. and Hancock, R. E. W. (1994) Antimicrobial constituents of Rhus glabra. J. Ethnopharmacol. 42: 95-99. 17. Ning, D. S., Yan, X. X., Huang, S. S., Cheng, L., Li, J. and Pan, Z. H. (2015) Studies on chemical constituents of zhuang medicine Excoecaria venenata and their cytotoxic activity. Chn. J. Chin. Mat. Med. 40: 686-690. (2016. 2. 4 접수 ; 2016. 3. 10 심사 ; 2016. 3. 18 게재확정 )