(52) CPC 특허분류 G01N 33/02 ( ) G01N 33/53 ( ) (72) 발명자 타치드지안캐서린 미국캘리포니아주 샌디에고카미니토터비소 3905 수훙 미국캘리포니아주 샌디에고비아홀구라 3955 리칭 미국캘리포니아주

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1 (19) 대한민국특허청 (KR) (12) 등록특허공보 (B1) (51) 국제특허분류 (Int. Cl.) C07D 413/06 ( ) C07C 211/14 ( ) G01N 33/02 ( ) G01N 33/53 ( ) (52) CPC 특허분류 C07D 413/06 ( ) C07C 211/14 ( ) (21) 출원번호 ( 분할 ) (22) 출원일자 ( 국제 ) 2008 년 08 월 19 일 심사청구일자 2015 년 04 월 13 일 (85) 번역문제출일자 2015 년 03 월 13 일 (65) 공개번호 (43) 공개일자 2015 년 04 월 03 일 (62) 원출원특허 원출원일자 ( 국제 ) 심사청구일자 2013 년 08 월 16 일 (86) 국제출원번호 PCT/US2008/ (87) 국제공개번호 WO 2009/ 국제공개일자 (30) 우선권주장 2009 년 02 월 26 일 2008 년 08 월 19 일 60/957, 년 08 월 21 일미국 (US) 61/047, 년 04 월 23 일미국 (US) (56) 선행기술조사문헌 WO A1* * 는심사관에의하여인용된문헌 (45) 공고일자 2016년03월08일 (11) 등록번호 (24) 등록일자 2016년02월26일 (73) 특허권자 세노믹스, 인코포레이티드 미국캘리포니아 샌디에고넥서스센터드라이브 4767 (72) 발명자 리샤오둥 미국캘리포니아주 샌디에고애스터메도우플레이스 5887 패트론앤드류 미국캘리포니아주 샌마르코스타라웨이 1701 ( 뒷면에계속 ) (74) 대리인 장훈 전체청구항수 : 총 16 항심사관 : 김승오 (54) 발명의명칭인간 T2R 쓴맛수용체및이의용도 (57) 요약 본발명은, T2R 미각수용체패밀리중특정인간미각수용체가예를들어커피에존재하는특정쓴맛화합물에반응한다는발견에관한것이다. 또한, 본발명은, 쓴맛차단제로서기능을하는특정화합물및조성물, 및예를들어커피와커피맛식품, 음료및의약에서쓴맛차단제또는풍미조절제로서의이의용도의발견에관한것이다. 또한, 본발명은수많은상이한인간 T2R 에길항작용을하는화합물, 및분석에서및인간및동물이섭취하는조성물중쓴맛차단제로서의이의용도의발견에관한것이다. 대표도 - 도 3-1 -

2 (52) CPC 특허분류 G01N 33/02 ( ) G01N 33/53 ( ) (72) 발명자 타치드지안캐서린 미국캘리포니아주 샌디에고카미니토터비소 3905 수훙 미국캘리포니아주 샌디에고비아홀구라 3955 리칭 미국캘리포니아주 샌디에고린다미어레인 프로닌알렉세이 미국캘리포니아주 샌디에고하다르드라이브 서번트가이 미국캘리포니아주 샌디에고앨버트애비뉴 장란 미국캘리포니아주 샌디에고카미니토카멜랜딩 4863 브래디토마스 미국캘리포니아주 샌디에고윈드송로드 7561 다모후소도빈센트 미국캘리포니아주 샌디에고 #44 데코로스트리트 4178 아렐라노멜리사 미국캘리포니아주 샌디에고버다레인 6205 셀초빅터 미국캘리포니아주 샌디에고칼레후아니토 칭브렛웨일런 미국캘리포니아주 샌디에고키카코트 카라뉴스키도날드에스. 미국캘리포니아주 에스콘디도콘티넨탈레인 1797 브러스트폴 미국캘리포니아주 샌디에고 #256 웨스트오션에어드라이브 링징 미국캘리포니아주 칼스배드티트리스트리트 6737 자오원 미국캘리포니아주 샌디에고 #3356 코스타버드블러바드 8840 프리스트채드 미국캘리포니아주 엔시니타스크레스트드라이브 에이 - 2 -

3 명세서청구범위청구항 1 하기구조를갖는화합물로부터선택되는화합물. 청구항 2 하기화학식 (I) 의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N- 옥사이드, 또는 화학식,,, - 3 -

4 - 4 - 등록특허

5 - 5 - 등록특허

6 - 6 - 등록특허

7 - 7 - 등록특허

8 - 8 - 등록특허

9 - 9 - 등록특허

10 등록특허

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14 등록특허

15 등록특허

16 등록특허

17 등록특허

18 등록특허

19 등록특허

20 또는 N- 옥사이드. 의화합물, 또는이의염, 수화물, 용매화물

21 [ 화학식 I] 상기화학식 I에서, Ar 1 은 5원또는 6원아릴, 헤테로아릴, 또는사이클로알킬환이고 ; m은 0, 1, 2 또는 3이고 ; R 1 은 SO 2, C=O, C=S 또는 C=NOR 4 이고 ; X는수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터선택되고 ; R 1 ' 는각각수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되거나 ; 또는 X 및 / 또는적어도하나의 R 1 ' 는이들이결합하고있는원자와함께아릴, 치환된아릴, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된사이클로알킬, 사이클로헤테로알킬또는치환된사이클로헤테로알킬환을형성하고, 여기서상기환은다른아릴, 치환된아릴, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된사이클로알킬, 사이클로헤테로알킬또는치환된사이클로헤테로알킬환에임의로융합되고 ; R 4 내지 R 8 은수소, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 헤테로알킬, 치환된헤 테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬및치환된헤테로아릴알킬로이루어진군으로부터독립적으로선택되거나, 또는 R 5 및 R 6, R 6 및 R 7, 또는 R 7 및 R 8 은이들이결합하고있는원자와함께사이클로헤테로알킬또는치환된사이클로헤테로알킬환을형성하고 ; A 및 B는수소, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬및치환된헤테로아릴알킬로이루어진군으로부터독립적으로선택되고 ; b는 0, 1, 또는 2이다. 청구항 3 하기화학식 (II) 의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N-옥사이드. [ 화학식 II] 상기화학식 II 에서,

22 Ar 1, Ar 2 및 Ar 3 은독립적으로 5원또는 6원아릴, 헤테로아릴, 또는사이클로알킬환이고 ; m은 0, 1, 2 또는 3이고 ; n 및 p는독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고 ; r 및 t는독립적으로 0, 1 또는 2이고 ; Y 및 Z는 CR 6 R 7, C=O, C=S, C=NOR 6, O, NR 6, 및 S(O) b 로이루어진군으로부터독립적으로선택되고 ; R 1 은 SO 2, C=O, C=S, 및 C=NOR 4 로이루어진군으로부터선택되고 ; X는수소, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, -OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터선택되고 ; R 1 ' 는각각수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되고 ; R 2 ' 는각각수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(OR 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되고 ; R 3 ' 는각각수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되거나 ; 또는 X 및 / 또는적어도하나의 R 1 ' 는이들이결합하고있는원자와함께아릴, 치환된아릴, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된사이클로알킬, 사이클로헤테로알킬또는치환된사이클로헤테로알킬환을형성하고, 여기서상기환은다른아릴, 치환된아릴, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된사이클로알킬, 사이클로헤테로알킬또는치환된사이클로헤테로알킬환과임의로융합되고 ; R 4 내지 R 8 은독립적으로수소, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬또는치환된헤테로아릴알킬이거나, 또는 R 5 및 R 6, R 6 및 R 7, 또는 R 7 및 R 8 은이들이결합하고있는원자와함께사이클로헤테로알킬또는치환된사이클로헤테로알킬환을형성하고 ; b는 0, 1, 또는 2이다. 청구항

23 제3항에있어서, X가수소, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, S(O) b R 6, CONR 6 R 7, -CO 2 R 6, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터선택되는화합물. 청구항 5 하기화학식 (III) 의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N-옥사이드. [ 화학식 III] 상기화학식 III에서, Ar 1, Ar 2 및 Ar 3 은독립적으로 5원또는 6원아릴, 헤테로아릴, 또는사이클로알킬환이고, Ar 2 및 Ar 3 는임의로제외될수있고 ; m은 0, 1, 2 또는 3이고 ; n 및 p는독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고 ; R 1 ' 는각각수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되고 ; R 2 ' 는각각수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되고 ; R 3 ' 는각각수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되고 ; R 5 내지 R 8 은독립적으로수소, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬또는치환된헤테로아릴알킬이거나, 또는 R 5 및 R 6, R 6 및 R 7, 또는 R 7 및 R 8 은이들이결합하고있는원자와함께사이클로헤테로알킬또는치환된사이클로헤테로알킬환을형성하고 ; b는 0, 1, 또는 2이다

24 청구항 6 하기화학식 (IV) 의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N- 옥사이드. [ 화학식 IV] 상기화학식 IV 에서, Ar 4 및 Ar 5 는독립적으로 5 원또는 6 원아릴또는헤테로아릴환이고 ; W 는 CR 6 R 7, C=O, C=S, C=NOR 6, O, NR 6, S, SO, SO 2, 및 (CH 2 ) n 으로이루어진군으로부터선택되고 ; n 은 0, 1, 2, 또는 3 이고 ; G 는 CR 6 R 7, C=O, C=S, C=NOR 6, 및 S(O) b 로이루어진군으로부터선택되고 ; R 20 는수소, 아릴알케닐, 헤테로아릴알케닐, 아릴알킬, 헤테로아릴알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알킬, 알콕시-알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 및치환된유도체로이루어진군으로부터선택되고 ; R 21 은아릴알케닐, 헤테로아릴알케닐, 아릴알킬, 헤테로아릴알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알킬, 알콕시-알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 및치환된유도체로이루어진군으로부터선택되고 ; R 6 및 R 7 은수소, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 헤테로알킬, 치환된헤테 로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬및치환된헤테로아릴알킬로이루어진군으로부터독립적으로선택되거나, 또는 R 6 및 R 7 은이들이결합하고있는원자와함께사이클로헤테로알킬또는치환된사이클로헤테로알킬환을형성하 고 ; b는 0, 1, 또는 2이다. 청구항 7 하기화학식 (V) 의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N-옥사이드. [ 화학식 V] 상기화학식 V에서, Ar 4 및 Ar 5 는독립적으로 5원또는 6원아릴또는헤테로아릴환이고 ; n은 0, 1, 2, 또는 3이고 ; R 21 은아릴알케닐, 헤테로아릴알케닐, 아릴알킬, 헤테로아릴알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알킬, 알콕시-알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 및치환된유도체로이루어진군으로부터선택되고 ; R 35 는수소, 알킬, 및치환된알킬로이루어진군으로부터선택된다. 청구항

25 하기화학식 (VI) 의화합물, 또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N- 옥사이드, 또는 화학식 ( 여기서, R 은각각독립적으로 Cl, MeO, CN, EtO, OH, Me, -SO 2 Me, F, 또는 H 이고, n 은 0, 1, 2, 3 또는 4 이다 ), ( 여기서, R 은각각독립적으로 MeO, 또는 OH 이고, n 은 0, 1, 2, 3 또는 4 이 다 ), CH 2 OH, OMe, 및 Ph 로이루어진군으로부터선택된다 ), ( 여기서, R 은 H, Me, Et, OCOMe,

26 등록특허

27 등록특허

28 등록특허

29 등록특허

30 N- 옥사이드. 의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 [ 화학식 VI] 상기화학식 VI에서, R 30 은아릴알케닐, 헤테로아릴알케닐, 아릴알킬, 헤테로아릴알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알킬, 알콕시-알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 및치환된유도체로이루어진군으로부터선택되고 ; R 35 는수소, 알킬, 및치환된알킬로이루어진군으로부터선택된다. 청구항 9 인간또는동물이섭취하는조성물에조성물과관련된쓴맛을완화또는감소하기위한유효한농도로제2항또는제8항에따른적어도하나의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N-옥사이드를첨가함을포함하는, 인간또는동물이섭취하는조성물의쓴맛을감소또는완화시키는방법. 청구항 10 제2항또는제8항에따른적어도하나의화합물의유효량을첨가하여쓴맛을완화또는감소시킨, 쓴맛을갖는식품, 음료또는의약조성물. 청구항 11 세포의세포막을제2항또는제8항에따른적어도하나의화합물에노출시킴을포함하는, 상이한인간 T2R 에존재하는보존된결합모티프를확인하는방법

31 청구항 12 제9항에있어서, 상기적어도하나의화합물의농도가 0.1 ppm 내지 100 ppm인, 방법. 청구항 13 제9항에있어서, 상기적어도하나의화합물의농도가 1 ppm 내지 25 ppm인, 방법. 청구항 14 제10항에있어서, 음료조성물이휴대용, 가용성또는건조커피음료 ; 커피음료믹스또는커피음료농축액 ; 커피음료용낙농크리머, 비낙농크리머또는분말크림 ; 치약, 구강세정제또는츄잉검 ; 또는비-식용제품이고, 상기비-식용제품이보충물, 기능식품, 기능성식품, 조제약, 일반의약품, 구강케어제품또는화장품인, 식품, 음료또는의약조성물. 청구항 15 화학식 의화합물 ( 여기서, R 56, R 57, 및 Alk 는하기정의한바와같고, J 는이탈기이다 ) 을화학식 의화합물 ( 여기서, M 1 및 M 2 는하기정의한바와같다 ) 과반응시켜 NO 2 기를갖는화학식 의화합물을얻고 ; NO 2 기를환원시켜서 NH 2 기를갖는화합물을얻고 ; NH 2 기를갖는화합물을화학식 의화합물 ( 여기서, J 2 는이탈기이고, T 2 및 R 53 는하기정의한바와같 다 ) 과반응시킴을포함하는, 하기화학식의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N- 옥사이드의제조방 법. 상기화학식에서, Alk는헤테로원자에의해임의로방해된알킬기이고 ; T 2 는 C=S, C=O, 또는 S(O) 2 이고 ; R 53 은치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치환또는비치환된아릴, 또는치환또는비치환된아릴알킬이고 ; M 1 은 N 또는 CR 54 이고, 여기서, R 54 는 H 또는치환또는비치환된알킬이고 ; M 2 은 N 또는 CR 55 이고, 여기서, R 55 는 H 또는치환또는비치환된알킬이고 ; R 56 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된알콕시, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된 아릴알킬, 또는할로이고 ;

32 R 57 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된알콕시, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된 아릴알킬, 또는할로이다. 청구항 16 화학식의화합물 ( 여기서, J 는이탈기이다 ) 을화학식의화합물과반응시켜서생 성물을얻고 ; 상기생성물을화학식의화합물 ( 여기서, J는이탈기이다 ) 과반응시킴을포함하는, 하기화학식 (III) 의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N-옥사이드의제조방법. [ 화학식 III] 상기화학식 III에서, Ar 1, Ar 2 및 Ar 3 은독립적으로 5원또는 6원아릴, 헤테로아릴, 또는사이클로알킬환이고, Ar 2 및 Ar 3 는임의로제외될수있고 ; m은 0, 1, 2 또는 3이고 ; n 및 p는독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고 ; R 1 ' 는각각수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되고 ; R 2 ' 는각각수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되고 ; R 3 ' 는각각수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되고 ; R 5 내지 R 8 은독립적으로수소, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬또는치환된헤테로아릴알킬이거나, 또는

33 R 6 및 R 7 또는 R 7 및 R 8 은이들이결합하고있는원자와함께사이클로헤테로알킬또는치환된사이클로헤테로알 킬환을형성하고 ; b 는 0, 1, 또는 2 이다. 발명의설명 [0001] [0002] [0003] [0004] [0005] [0006] [0007] [0008] [0009] [0010] [0011] 기술분야관련출원본출원은 2007년 8월 21일에출원된미국가출원제60/957,129호및 2008년 4월 23일에출원된미국가출원제 61/047,187호를우선권으로주장하고, 차례로 2002년 7월 10일에출원된미국출원제10/191,058호의일부계속출원이며또한 2001년 4월 5일에출원되어현재미국특허번호제7,105,650호인미국출원제09/825,882호의분할출원인 2003년 12월 1일에출원된미국출원제10/742,209호의일부계속출원인 2006년 11월 1일에출원된미국출원제11/555,617호의일부계속출원인미국출원제11/766,974호와관련되며, 이들모든출원은전체가본명세서에참조로통합된다. 기술분야본출원은인간 2형미각수용체 (ht2r) 의확인및특정 T2R들을활성화시키는리간드를확인하기위한분석법에서의이의용도에관한것이다. 이러한리간드는미각인지, 특히쓴맛을조절하는데유용하다. 이전특허출원에서, 본발명자들은 ht2r8 및 ht2r14를포함하는인간쓴맛수용체의기능적발현을설명하였다. 본특허출원에서, 본발명자들은 ht2r8 및 ht2r14가커피의쓴맛이풍부한분획에의해활성화된다고보고하고, 또한고속탐색분석법을이용한 ht2r8 및 ht2r14에대한길항물질의확인을보고하고, 상기길항물질들의조합으로커피와커피분획들의쓴맛을줄일수있다는것을보고한다. 본발명은커피음료의맛을조정하고개선하는방법을제공한다. 구체적으로, 본발명은커피및그외식음료의쓴맛을억제 ( 차단 ) 하는화합물을확인하는스크리닝분석및미각시험에서의 ht2r8 및 / 또는 ht2t14의용도에관한것이다. 또한, 본발명은광범위한쓴맛길항특성들, 즉다양한세트의쓴맛리간드에의해 13개의많은다른쓴맛수용체의활성화를주목할만하게차단하거나억제하고, 그들이상호작용하는쓴맛수용체 ( 들 ) 이아직설명되지않은몇가지쓴맛화합물에의해생기는쓴맛을억제할뿐만아니라 6개의다른쓴맛수용체의활성화를차단또는억제하는, 리간드를발견하는것에관한것이다. 보다구체적으로, 본발명은광범위한쓴맛길항특성, 즉다양한세트의쓴맛리간드에의해 ht2r3, 7, 10, 14, 16, 44, 51, 55, 61, 63, 64, 65 및 71 쓴맛수용체의활성화를주목할만하게도차단하거나억제하고, 그들이상호작용하는쓴맛수용체 ( 들 ) 이아직설명되지않은몇가지쓴맛화합물에의해생기는쓴맛을억제할뿐만아니라 6개의다른쓴맛수용체, 예를들면 ht2r5, 9, 13, 54, 67 및 75의활성화를차단또는억제하는, 화합물 C로본명세서에지칭된리간드의발견에관한것이다. 또한보다구체적으로, 본발명은이러한길항물질화합물이살리신의쓴맛, ht2r16 길항물질 (antagonist) 및페닐티오우레아 ht2r51 작용제 (agonist) 를감소시킨다는발견을제공한다. 또한보다구체적으로, 본발명은이러한동일한길항물질화합물이 ht2r10, 14 및 75를활성화시키는오메프라졸 (omeprazole); 및적어도 7개의쓴맛수용체를활성화시키는천연감미제인레바우디오사이드 A(Rebaudiodise A) 를포함하는다수의쓴맛수용체를활성화시키는쓴맛화합물에의해생기는쓴맛을차단한다는것과이러한동일한길항물질이나아가또한덱스트로메토르판 (dextromethorphan) 및디펜하이드라민 (diphenhydramine) 을포함하여이들이상호작용하는수용체 ( 들 ) 가알려지지않은쓴맛화합물에의해생기는쓴맛을억제한다는발견을제공한다. 이에기초하여, 본발명은쓴맛이다수의쓴맛수용체의활성화와관련된확인되지않은쓴맛리간드나화합물, 또는이의수용체특이성이결정되지않은쓴맛화합물에의해발생하는쓴맛을포함하는이의쓴맛을약화시키기위해식품, 음료, 약및기타섭취물 (injestibles) 에서의본화합물의용도에관한것이다. 또한이에기초하여, 본발명은리간드결합및 T2R 활성화와관련된상이한인간 T2R들에존재하는보존모티프 (conserved motif) 를설명하기위하여, 본길항물질의용도및이러한모티프를함유하도록조작된키메라및

34 돌연변이된 G- 단백질 - 결합수용체 (GPCR) 의설계에관한것이다. [0012] 또한, 본발명은이러한스크리닝분석을이용하여확인된임의의화합물및이의커피와커피향식품및음료 및약을포함하는식음료및약에서의용도에관한것이다. [0013] 배경기술인간이감지할수있는기초적인미각양상중하나는쓴맛이다. 상당히최근까지쓴맛의생리학은거의이해되지않았다. 최근연구들이미각생물학에실마리를제공하기시작하였다 (Lindemann, Nature(2001)). 많은쓴맛화합물이세포표면수용체와상호작용하여쓴맛을생성한다고현재알려져있다. 이러한수용체는세포내 G 단백질들과상호작용하는 7개의막관통도메인수용체의패밀리 (family) 에속한다. T2R로불리는신규 GPCR 패밀리는인간및설치류에서확인되었다 (Adler et al., Cell 100(6): (2000); Chandrashekar et al., Cell 100(6): (2000); Matsunami H, Montmayeur J P, Buck L B. Nature 404(6778): (2000)). 본발명이전의수많은증거들은 T2R이쓴맛화합물에대한반응을조정한다고제시하였다. 첫째, T2R 유전자들은혀와구개부상피의미각수용체세포들의부분집합 (subset) 에서특이적으로발현된다. 둘째, 인간 T2R(hT2R1) 중하나에대한유전자는인간에서쓴맛화합물인 6-n-프로필-2-티오우라실에대한민감도와연관된염색체좌위 (locus) 에위치한다 (Adler et al., (Id.)(2000)). 셋째, 마우스 T2R(mT2R5) 중하나는마우스에서쓴맛화합물인사이클로헥시미드 (cycloheximide) 에대한민감도와연관된염색체좌위에위치한다. 또한, mt2r5는미각세포에서특이적으로발현되는 G 단백질인거스트두신 (gustducin) 을활성화시킬수있고, 쓴맛자극전도에연관되어있는것으로나타났다 (Wong et al., Nature 381: (1996)). mt2r5에의한거스트두신활성화는사이클로헥시미드에대한반응시에만일어난다 (Chandrashekar et al., (Id.)(2000)). 따라서, mt2r 패밀리가마우스에서쓴맛반응을조정하는반면, ht2r 패밀리는인간에서쓴맛반응을조정한다고제안되어왔다. 단지하나의인간 T2R이쓴맛리간드를확인한것으로제시되었는데, ht2r4는데나토늄 (denatonium) 에의해활성화되는것으로나타났다 (Chandrashekar et al., (Id.)(2000)). 하지만, 본연구에사용된효과적인데나토늄농도 (1.5 mm) 는특이하게높았는데, 즉인간에대한데나토늄의쓴맛역치로보고된 것보다 10 5 배높았다 (Saroli, Naturwissenschaften 71: (1984)). 따라서, 어떠한특정쓴맛리간드도어떤 ht2r과확실하게일치하지않았다. 또한, 각각의 ht2r이다수의쓴맛리간드를결합시킬수있다고제시되어왔다. 이러한가설은 ht2r 패밀리가단지확인된 25개의구성원으로이루어져있는반면인간은수백개의상이한화합물을쓴맛으로인식할수있다는사실에기초한다. ht2r들의서열은이전에보고되어왔고, Zuker 등및 Adler 등에의해공개된 PCT 출원 (WO 01/18050 A2, (2001); WO 01/77676 A1, (2001)) 에개시되어있으며, 이들모두는전체가참조로본발명에통합되어있다. [0014] [0015] [0016] [0017] T2R 기능연구의어려움중하나는이러한수용체가배양된포유동물세포주들에서즉시발현되지않는다는점이다. T2R 발현을개선하기위하여, 잘-발현된 GPCR인로돕신으로부터의 N-말단서열을 T2R 서열에붙였다 (Chandrashekar et al., (Id.)(2000)). 이 N-말단태그는또한이용가능한항체로인하여단백질발현을쉽게관찰할수있게해주었다. 또한, 다른 N-말단태그인 SSTR3 태그 (Bufe et al., Nat. Genet. 32: (2002) 가 T2R 발현을개선하기위해사용되어왔다. 로돕신태그의통합이포유동물세포주에서몇몇 T2R들의발현을개선시킨반면, 많은 T2R들은여전히기능을연구하기에충분할만큼발현되지않았다. 다른접근법에서, mt2r5는곤충 Sf9 세포에서성공적으로발현되었고생화학적 GTPγS 결합분석을이용한기능연구를위해사용되었다 (Chandrashekar et al., (Id.)(2000)). 출원인들의초기특허출원으로현재미국특허제7,105,650호인미국출원제09/825,882호에서, 출원인들은 ht2r51, ht2r54, ht2r55, ht2r61, ht2r63, ht2r64, ht2r65, ht2r67, ht2r71 및 ht2r75를포함하는수많은신규인간미각수용체의핵산서열및폴리펩타이드서열을확인하고제공하였다. 또한전체가참조로써본명세서에통합된미국출원제 11/182,942 및 10/628,464호에서출원인들은또다른확인된 ht2r76으로명명된신규인간미각수용체의폴리펩타이드및 DNA 서열을제공하였다. 또한, 전체가참조로써본명세서에통합된미국출원제10/191,058호에서, 출원인들은세개의상이한인간 T2R들을특이적으로활성화시키는리간드를발견하였다. 더욱이, 출원인들은전체가참조로써본명세서에통합된미국출원 11/455,693호를최근에출원하였고, 여기서는추가로다른인간 T2R들에특이적으로결합하는쓴맛리간드를추가로확인하였고관련된분석법을제공하였다. 또한, 발명의실용성과관련하여, T2R 및 T1R 미각수용체모두가위장관계 (gastrointestinal system) 에서발현된다고보고되어왔다. 예를들어, Wu 등 (Wu et al., Proc, Natl. Acad. Sci, USA 99(4):2392-7(2002)) 은 T2R

35 들이거스트두신및트랜스두신 (transducin) 소단위들뿐만아니라장내분비세포들 (STC1 세포들 ) 에서발현되며이러한세포들은위장관내에서쓴맛리간드에반응할것으로예상된다고보고한다. 또한, Chen 등 (Chen et al., AM J. Physiol. Cell Phyisol. 291(4):C (2006)) 에의해쓴맛자극이장내분비 STC-1 세포들에서 Ca++ 신호및콜레시스토키닌 (cholecystokinin; CCK) 방출을유도한다고보고되었다. 또한, Rozengurt(Rozengurt, A J Physiol Gastrointes Liver Physiol 291(2):G171-7 (2006)) 는소화관내미각수용체는소화기능, 및호르몬및 / 또는신경경로의조절을분자적으로인식하는역할을할것같다는것과이들이유해한약물들의검출및생존반응의역할을할수있을것으로보고하였다. 또한, Sternini 등 (Sternini Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 292(2):G (2007)) 은소화관내미각수용체가분자인식 (molecular sensing), 영양분흡수, 해로운물질로부터의보호와같은위장관기능과연관될수있다고보고하고, 또한이러한메커니즘들을이해하는것이섭식장애 (feeding disorder) 및염증과같은질병상태및조건과연관될수있다고제시한다. 또한, 최근에 Mace 등 (Mace et al., J Physiol (Epub)) 에의해 T2R 및 T1R들이포스포리파아제 C 베타 2, PLC 베타2를활성화시킨다는것과, 혀세포에존재하는것과유사한소화관내분자장관인지시스템이있을것같다는것과, 미각수용체를발현하는브러시세포들 (brush cells) 이나고립화학민감성세포들 (solitary chemosensory cells) 과같은장관내세포들이 GLUT2 증가를야기할수있으며, 영양분인지역할을할수있으며, 비만및당뇨병의치료에서영양역할을할수있다. 또한, Cui 등 (Cui et al, Curr Pharm Des. 12(35): (2006)) 은소화관내에서발현된 T1R들이인공감미제뿐만아니라비만및당뇨병을치료하는데있어화합물에대한분석법에사용될수있다는것을제시한다. [0018] 하지만, 보고되어온것과 T2R 구성원들이쓴맛을조절한다는것을이해하는것, 및이들의위장기능에서의가능한역할에도불구하고, 인간 T2R 쓴맛수용체를활성화시키는특정리간드를확인할필요가있다. 상이한 T2R들, 특히인간 T2R들의결합특성을보다더이해하는것이매우유익한데, 이는바람직한미각조절특성, 즉특정쓴맛성분의맛을차단또는억제하는화합물을선별하는데있어서이의용도를훨씬더용이하게할것이기때문이다. 또한, 이는위장기능및비만, 당뇨병, 식품섭취, 식품감지, 섭식장애와같은관련질병의치료및조절용화합물의확인과 GLUT2, 콜레시스토킨등과같은관련호르몬및펩타이드의조절을제공할것이다. [0019] [0020] [0021] [0022] [0023] [0024] [0025] [0026] 발명의내용발명의요약그목적을위해, 본발명은, ht2r8 및 ht2r14 가커피의쓴맛풍부분획에의해활성화되는발견에관한것이다. 또한, 본발명은커피와커피관련식품, 음료및의약의쓴맛을억제또는차단하는 ht2r8 및 ht2r14에대한길항물질의확인을위한이의용도에관한것이다. 또한, 본발명은커피및다른커피맛식품, 음료및의약의쓴맛을억제하는특이적길항물질 ( 쓴맛차단제 ) 화합물에관한것이다. 또한, 본발명은넓은쓴맛길항물질특성을갖는리간드의발견에관한것이다, 즉, 그것은쓴맛리간드의다양한세트에의해많은 (13개) 상이한쓴맛수용체의활성을감지할수있을정도로차단또는억제하고, 상호작용하는쓴맛수용체 ( 들 ) 가아직까지명료하지않은일부쓴맛화합물에의해유도된쓴맛을억제할뿐만아니라 6개의다른쓴맛수용체의활성을차단또는억제한다. 더욱구체적으로, 본발명은넓은쓴맛길항물질특성을갖는화합물 C 로불리는리간드의발견에관한것이다, 즉, 그것은쓴맛리간드의다양한세트에의해 ht2r3, 7, 10, 14, 16, 44, 51, 55, 61, 63, 64, 65 및 71 쓴맛수용체의활성을감지할수있을정도로차단또는억제하고, 상호작용하는쓴맛수용체 ( 들 ) 가아직까지명료하지않은일부쓴맛화합물에의해유도된쓴맛을억제할뿐만아니라 6개의다른쓴맛수용체, 즉 ht2r5, 9, 13, 54, 67 및 75의활성을차단또는억제한다. 또한, 더욱구체적으로, 본발명은, 이러한길항물질화합물이 ht2r16 길항물질인살리신및 ht2r51 작용물질인페닐티오우레아의쓴맛을감소시킨다는발견을제공한다. 또한, 더욱구체적으로, 본발명은, 이러한동일한길항물질화합물이 ht2r10, 14 및 75 을활성화시키는화합물인오메프라졸및적어도 7개의쓴맛수용체를활성화시키는천연감미제인레바우디오사이트 A 를포함하는다수의쓴맛수용체를활성화시키는쓴맛화합물에의해유도된쓴맛을차단하고 ; 이러한동일한길항물질화합

36 물은덱스트로메트로판및디펜히드라민을포함하는, 상호작용하는쓴맛수용체 ( 들 ) 이공지되어있지않은쓴맛 화합물에의해유도된쓴맛을억제한다는발견을제공한다. [0027] [0028] [0029] [0030] [0031] [0032] [0033] [0034] [0035] [0036] 이를근거로하여, 본발명은미확인쓴맛리간드또는화합물에의해유도된쓴맛을포함하는쓴맛을완화하기위한, 식품, 음료, 의약및다른섭취될수있는것에서본발명의화합물및이와관련된화합물의용도에관한것이고, 여기서, 쓴맛은다수의쓴맛수용체또는쓴맛화합물의활성을수반하고, 상기수용체특이성은미확인되어있다. 또한, 본발명은쓴맛을억제또는차단하는데충분한, 적어도하나의확인된쓴맛길항물질화합물을함유하는식품, 음료및의약에관한것이다. 본발견은특이적쓴맛리간드의의존재및부재에서특정 T2R 를발현시키는세포를사용하여 T2R 의활성을측정한세포기반분석을사용하여행해졌다. 특히, 아래에아주상세히기재된바와같이, 표면상에상기특이적 T2R 를발현시키고상기 T2R 를기능적으로연결하는키메라 G 단백질을추가발현시킨 HEK 세포주는세포내칼슘농도의변화를검출한세포기반분석에사용되었고, 특이적쓴맛화합물에의해특이적으로활성화된것이발견되고, 반면에, 다른 ht2r 은유사한조건하에서활성화되지않았다. 따라서, 본발명은커피및관련식품및음료에존재하는이들및다른쓴맛화합물에의해이들수용체의활성을조절, 바람직하게는차단하는다른화합물을확인하기위한, 분석, 바람직하게는고효율분석에서의이들인간미각수용체의용도를포함한다. 또한, 본발명은화합물, 특히쓴맛을유도하는커피와커피맛식품, 음료및의약에존재하는화합물을확인하기위한이들수용체의용도에관한것이다. 또한, 본발명은시험관내분석및생체내미각테스트에사용하기위한, 넓은범위의길항물질특성을갖는길항물질화합물의용도에관한것으로서, 이화합물이유도된쓴맛을억제하고 / 하거나쓴맛화합물을함유하는쓴맛화합물또는분획에의한하나이상의쓴맛수용체의활성을억제하는쓴맛화합물 ( 들 ) 또는쓴맛분획을확인한다. 또한, 본발명은인간또는동물이섭취하는식품, 음료, 의약및다른소비제품에서의널리작용하는길항물질의용도에관한것으로서, 여기서, 쓴맛은바람직하게는완화된다. 본발명은또한인간또는다른미각테스트에서확인된조절화합물의효과를평가하고특히, 쓴맛, 특히커피, 및쓴맛감지를유도하는하나이상의화합물을함유하는, 커피로부터유래된분획에의해유도된쓴맛에대한확인된화합물의효과를평가하는추가적인단계를포함하는분석방법을포함한다. 또한, 본발명은쓴맛수용체, 예를들어쓴맛화합물의양을제거또는감소시키기위해가공된식품및음료를특이적으로활성화시키는화합물을제거하기위해처리된커피와커피맛식품, 음료및의약의제조방법을포함한다. 어떤측면에서, 본발명은또한하기에주어진 2개의골격으로표시되는화합물의구조적클래스에관한것이다. 골격 1 은대표적인우라졸골격을나타내고골격 2 은대표적인히단토인골격을나타낸다. [0037] [0038] [0039] 본발명의다른특정목적은 T2R8 수용체에의해매개되는식품 / 약학적적용, 특히커피와커피맛식품, 음료및의약에서쓴맛을감소시키기위해쓴맛차단제로서상기에나타낸화합물, 및골격 1 및골격 2 의유사체를사용하는것이다. 본발명의다른목적은확인된화합물이인간또는동물미각테스트, 바람직하게는인간미각테스트에서커피와커피맛식품, 음료및의약에의해유도된쓴맛을조절, 바람직하게는억제또는차단한다는것을확인하는것이다. 실시예 1 은이들화합물중의하나에대한대표적인감각데이터를보여준다. 상기데이터는특이적 T2R8 작용물질에대한쓴맛의상당한감소및공지된 T2R8 쓴맛차단제에대한효능의상당한증가를명확히증

37 명하고있다. [0040] [0041] [0042] [0043] [0044] [0045] [0046] [0047] 본발명의다른목적은미각수용체를특이적으로활성화시키는화합물에의해유도된쓴맛을억제또는차단하기위해조성물중첨가제또는풍미조절제로서기재된화합물을이용하는것이다. 본발명의바람직한목적은커피와커피맛식품, 음료및의약에존재하는화합물의쓴맛을차단하기위해 T2R8 수용체의활성을억제하는화합물을사용하는것이다. 본발명에따라확인된화합물은커피에존재하는쓴맛화합물및관련식품, 음료및의약또는구조적으로관련된화합물또는다른쓴맛화합물, 예를들어쓴맛감지를유도하는식품및음료또는의약또는화장품에발견된화합물에의한 ht2r8 의활성에의해유발된쓴맛을조절, 바람직하게는차단하기위해식품, 음료, 화장품또는의약조성물에첨가될수있다. 발명의목적본발명의목적은커피와커피맛식품, 음료및의약과관련된쓴맛을유도또는차단하는화합물및이를함유하는조성물을확인하는 ht2r8 및 / 또는 ht2r14 및키메라및이의변이체를사용하는분석방법을제공하는것이다. 본발명의특정목적은커피쓴맛에대해책임있는화합물또는이를함유화합물에의 ht2r8 의결합및 / 또는활성화를차단또는조절하는화합물을확인하는분석방법을제공하는것이다. 본발명의특정목적은커피쓴맛에대해책임있는화합물또는이를함유화합물에의 ht2r14 의결합및 / 또는활성화를차단또는조절하는화합물을확인하는분석방법을제공하는것이다. 본발명의다른특정목적은창의적인분석을사용하여확인된특정조성물및특히커피와커피맛식품, 음료및의약을함유하는조성물을제공하는것이다. 본발명의특정목적은커피의쓴맛을차단하기위해제시되었던 T2R8 및 T2R14 길항물질인하기의화합물을제공하는것이다. [0048] [0049] [0050] [0051] [0052] [0053] 본발명의다른특정목적은 T2R8 및 / 또는 T2R14 수용체, 특히커피와커피맛식품, 음료및의약에의해전달되는음식 / 약제학적응용에서쓴맛을감소시키기위해쓴맛차단제로서상기의화합물및화합물 A, 화합물 B 및화합물 C의유사체를사용하는것이다. 본발명의다른특정목적은인간 T2R3, 7, 10, 14, 16, 44, 51, 55, 61, 63, 64, 65, 또는 71 및 / 또는인간 T2R5, 9, 13, 54, 67 또는 75 중어떤것에의해전달되는음식 / 약제학적응용에서, 특히다수의쓴맛화합물, 다수의쓴맛수용체와상호작용하는쓴맛화합물, 또는미공지쓴맛화합물또는수용체특이성이공지되지않은쓴화합물을함유하는조성물을함유하는식품, 음료및의약에서쓴맛을감소시키기위해널리작용하는쓴맛차단제로서화합물 C 및이의유사체를사용하는것이다. 본발명의다른특정목적은하기화학식에의해표시될수있는화합물을제공하는것이다. 첫번째측면에서, 화학식 (I) 의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N-옥사이드를제공한다 : [ 화학식 I] [0054] [0055] 상기화학식에서,

38 [0056] [0057] [0058] [0059] Ar 1 은 5원또는 6원아릴, 헤테로아릴또는사이클로알킬환이고 ; m 은 0, 1, 2 또는 3 이고 ; R 1 는 SO 2 ; C=O; C=S 또는 C=NOR 4 이고 ; X 는수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터선택되고 ; [0060] 각 R 1 ' 은수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아 실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되 거나 ; 또는 [0061] [0062] X 및 / 또는적어도하나의 R 1 ' 은이들이결합하고있는원자와함께아릴, 치환된아릴, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된사이클로알킬, 사이클로헤테로알킬또는치환된사이클로헤테로알킬환을형성하고, 여기서, 환은다른아릴, 치환된아릴, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된사이클로알킬, 사이클로헤테로알킬또는치환된사이클로헤테로알킬환으로임의로융합되고 ; R 4 내지 R 8 은수소, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 헤테로알킬, 치환된헤 테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬및치환된헤테로아릴알킬로이루어진군으로부터 독립적으로선택되거나, 또는 R 5 및 R 6, R 6 및 R 7, R 7 및 R 8 은이들이결합하고있는원자와함께사이클로헤테 로알킬또는치환된사이클로헤테로알킬환을형성하고 ; [0063] [0064] [0065] A 및 B 는수소, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬로이루어진군으로부터독립적으로선택되고 ; b 는 0, 1, 또는 2 이다. 어떤구현예에서, A 및 B 는이들이부합하는질소원자와함께추가치환또는비치환된환과융합될수있고적어도하나의이중결합을포함할수있는환을형성한다. 그와같은환의비제한적인예는하기화학식을갖는기를포함한다 : [0066] [0067] [0068] 두번째측면에서, 본발명은하기에표시된화학식 (II) 의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N- 옥 사이드를제공한다 : [ 화학식 II] [0069]

39 [0070] [0071] [0072] [0073] [0074] [0075] 상기화학식에서, Ar 1, Ar 2 및 Ar 3 은독립적으로 5원또는 6원아릴, 헤테로아릴, 또는사이클로알킬환이고 ; m 은 0, 1, 2 또는 3 이고 ; n 및 p 는독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4 이고 ; r 및 t 는독립적으로 0,1 또는 2 이고 ; Y 및 Z 는 CR 6 R 7, C=O, C=S, C=NOR 6, O, NR 6, 및 S(O) b 로이루어진군으로부터독립적으로선택되고 ; [0076] [0077] R 1 은 SO 2, C=O, C=S, 및 C=NOR 4 로이루어진군으로부터독립적으로선택되고 ; X 는수소, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아실, 헤테로알 킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, -OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되고 ; [0078] X 는수소, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아 릴알킬, CN, S(O) b R 6, CONR 6 R 7, -CO 2 R 6, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택된다. [0079] 각 R 1 ' 은수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아 실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되 고 ; [0080] 각 R 2 ' 은수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아 실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(OR 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되고 ; [0081] 각 R 3 ' 은수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아 실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되 거나 ; 또는 [0082] [0083] X 및 / 또는적어도하나의 R 1 ' 은이들이결합하고있는원자와함께아릴, 치환된아릴, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된사이클로알킬, 사이클로헤테로알킬또는치환된사이클로헤테로알킬환을형성하고, 여기서환은다른아릴, 치환된아릴, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된사이클로알킬, 사이클로헤테로알킬또는치환된사이클로헤테로알킬환에임의로융합되고 ; R 4 내지 R 8 은독립적으로수소, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬또는치환된헤테로아릴알킬이거나, 또는 R 5 및 R 6, R 6 및 R 7, R 7 및 R 8 은이들이결합하고있는원자와함께사이클로헤테로알킬또는치환된사이

40 클로헤테로알킬환을형성하고 ; [0084] [0085] [0086] b 는 0, 1, 또는 2 이다. 다른측면에서, 본발명은하기에표시된화학식 (III) 의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N-옥사이드를제공한다 : [ 화학식 III] [0087] [0088] [0089] [0090] [0091] [0092] 상기화학식에서, Ar 1, Ar 2 및 Ar 3 은독립적으로 5원또는 6원아릴, 헤테로아릴, 또는사이클로알킬환이고, Ar 2 및 Ar 3 는임의로제외될수있고 ; m 은 0, 1, 2 또는 3 이고 ; n 및 p 는독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4 이고 ; 각 R 1 ' 은수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되 고 ; [0093] 각 R 2 ' 은수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아 실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되 고 ; [0094] 각 R 3 ' 은수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아 실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되 고 ; [0095] R 5 내지 R 8 은독립적으로수소, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 헤테로알 킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬또는치환된헤테로아릴알킬이거나, 또는 R 5 및 R 6, R 6 및 R 7, R 7 및 R 8 은이들이결합하고있는원자와함께사이클로헤테로알킬또는치환된사이 클로헤테로알킬환을형성하고 ; [0096] [0097] b 는 0, 1, 또는 2 이다. 또다른측면에서, 본발명은하기구조의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N- 옥사이드를 제공한다 :

41 [0098] [0099] 또다른측면에서, 본발명은하기구조의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N- 옥사이드를 제공한다 : [0100] [0101] 또다른구현예에서, 본발명은본발명은하기구조의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N- 옥사이 드를제공한다 : [0102] [0103] [0104] 관련측면에서, 화학식 (IV) 의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N- 옥사이드를제공한다 : [ 화학식 IV] [0105] [0106] [0107] [0108] [0109] [0110] 상기화학식에서, Ar 4 및 Ar 5 는독립적으로 5원또는 6원아릴또는헤테로아릴환이고 ; W 는 CR 6 R 7, C=O, C=S, C=NOR 6, O, NR 6, S, SO, SO 2, 및 (CH 2 ) n 로이루어진군으로부터선택되고 ; n 은 0, 1, 2, 또는 3 이고 ; G 는 CR 6 R 7, C=O, C=S, C=NOR 6, 및 S(O) b 로이루어진군으로부터선택되고 ; [0111] R 20 은수소, 아릴알케닐, 헤테로아릴알케닐, 아릴알킬, 헤테로아릴알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알킬, 알콕시 - 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 및치환된유도체로이루어진군으로부터선택되고 ;

42 [0112] R 21 은아릴알케닐, 헤테로아릴알케닐, 아릴알킬, 헤테로아릴알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알킬, 알콕시 - 알킬, 알케 닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 및치환된유도체로이루어진군으로부터선택되고 ; [0113] R 6 및 R 7 은수소, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 헤테로알킬, 치환된헤 테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬또는치환된헤테로아릴알킬로이루어진군으로부터 독립적으로선택되거나, 또는 R 6 및 R 7 은이들이결합하고있는원자와함께사이클로헤테로알킬또는치환된 사이클로헤테로알킬환을형성하고, [0114] [0115] [0116] b 는 0, 1, 또는 2 이다. 다른관련측면에서, 화학식 (V) 의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N- 옥사이드를제공한다 : [ 화학식 V] [0117] [0118] [0119] [0120] [0121] 상기화학식에서, Ar 4 및 Ar 5 는독립적으로 5원또는 6원아릴또는헤테로아릴환이고 ; n 은 0, 1, 2, 또는 3 이고 ; R 21 은아릴알케닐, 헤테로아릴알케닐, 아릴알킬, 헤테로아릴알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알킬, 알콕시 - 알킬, 알케 닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 및치환된유도체로이루어진군으로부터독립적으로선택되고 ; [0122] [0123] [0124] R 35 는수소, 알킬, 및치환된알킬로이루어진군으로부터독립적으로선택된다. 한층추가적인구현예에서, 본발명은화학식 (VI) 의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N-옥사이드를제공한다 : [ 화학식 VI] [0125] [0126] [0127] 상기화학식에서, R 30 은아릴알케닐, 헤테로아릴알케닐, 아릴알킬, 헤테로아릴알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알킬, 알콕시 - 알킬, 알케 닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 및치환된유도체로이루어진군으로부터선택되고 ; [0128] [0129] R 35 는수소, 알킬, 및치환된알킬로이루어진군으로부터선택된다. 한층추가적인구현예에서, 본발명은하기구조의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N- 옥사이드를 제공한다 : [0130]

43 [0131] [0132] [0133] [0134] 상기화학식에서, 각 R 은독립적으로 Cl, MeO, CN, EtO, OH, Me, -SO 2 Me, F, 또는 H 이고, n 은 0, 1, 2, 3 또는 4 이다. 또다른구현예에서, 본발명은하기구조의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N-옥사이드를제공한다 : [0135] [0136] [0137] [0138] 상기화학식에서, 각 R 은독립적으로 MeO 또는 OH 이고, n 은 0, 1, 2, 3 또는 4 이다. 또다른구현예에서, 본발명은하기구조의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N-옥사이드를제공한다 : [0139] [0140] [0141] [0142] 상기화학식에서, R 은 H, Me, Et, OCOMe, CH 2 OH, OMe, 또는 Ph 이다. 또다른구현예에서, 본발명은하기구조의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N- 옥사이드를제공한 다 :

44 [0143] [0144] 또다른구현예에서, 본발명은하기구조의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N- 옥사이드를제공한 다 : [0145] [0146] 또다른구현예에서, 본발명은하기구조의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N- 옥사이드를제공한 다 :

45 [0147] [0148] 또다른구현예에서, 본발명은본발명은하기구조의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N- 옥사이 드를제공한다 : [0149] [0150] 하나의측면에서, 본발명은하기화학식의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물, N- 옥사이드또는프로드러 그 (prodrug) 에관한것이다 : [0151] [0152] [0153] [0154] [0155] 상기화학식에서, Ar 6 및 Ar 7 은서로독립적으로동일또는상이한 5원또는 6원아릴기또는 5원또는 6원헤테로아릴기이고 ; Alk는헤테로원자에의해임의로방해된알킬기이고 ; R 36 및 R 37 은서로독립적으로동일또는상이한 H, 또는알킬이거나, 또는 R 36 및 R 37 은이들이부착되어있는원 자와함께임의치환된 5 원또는 6 원헤테로사이클을형성하고 ; [0156] R 38 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된헤테로사이클 로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된아릴아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴아 미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치 환또는비치환된헤테로아릴알킬, 또는할로알킬이다. [0157] [0158] 하나의측면에서, 본발명의화합물은 5원헤테로사이클을함유한다. 하나의구현예에서, 5원헤테로사이클은히단토인또는치환또는비치환사이클릭우레아이다. 하나의구현예에서, 히단토인은하기화학식의히단토인또는이의염, 수화물, 용매화물, N-옥사이드또는프로드러그이다 : [0159] [0160] 상기화학식에서,

46 [0161] [0162] [0163] Ar 6 및 Ar 7 은서로독립적으로동일또는상이한 5 원또는 6 원아릴기또는 5 원또는 6 원헤테로아릴기이고 ; Alk 는헤테로원자에의해임의로방해된알킬기이고 ; R 38 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된헤테로사이클 로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된아릴아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴아 미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치 환또는비치환된헤테로아릴알킬, 또는할로알킬이고 ; [0164] R 39 및 R 40 은서로독립적으로동일또는상이한 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬 알킬, 치환또는비치환된헤테로사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된아릴아미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴알킬아미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치환또는비치환된헤테로아릴알킬, 할로알킬이거나, 또는 R 39 및 R 40 은이들이부착되어있는탄소원자와함께 C=O 기또는치환또는비치환된알케닐기를형성한다. [0165] 다른측면에서, 본발명의화합물은우라졸인 5 원헤테로사이클을함유한다. 하나의구현예에서, 우라졸은하 기화학식의우라졸또는이의염, 수화물, 용매화물, N- 옥사이드또는프로드러그이다 : [0166] [0167] [0168] [0169] [0170] 상기화학식에서, Ar 6 및 Ar 7 은서로독립적으로동일또는상이한 5원또는 6원아릴기또는 5원또는 6원헤테로아릴기이고 ; Alk 는헤테로원자에의해임의로방해된알킬기이고 ; R 38 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된헤테로사이클 로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된아릴아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴아 미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치 환또는비치환된헤테로아릴알킬, 또는할로알킬이고 ; [0171] R 41 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된헤테로사이클 로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된아릴아미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴알킬아미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치환또는비치환된헤테로아릴알킬, 또는할로알킬이다. [0172] 다른측면에서, 본발명의화합물은 6 원헤테로사이클을함유한다. 하나의구현예에서, 6 원헤테로사이클은하 기화학식의 6 원헤테로사이클또는또는이의염, 수화물, 용매화물, N- 옥사이드또는프로드러그이다 : [0173] [0174] [0175] 상기화학식에서, R 38 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된헤테로사이클 로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된아릴아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴아 미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치 환또는비치환된헤테로아릴알킬, 또는할로알킬이고 ; [0176] R 42, R 43, R 44, R 45, 및 R 46 는서로독립적으로동일또는상이한 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환

47 된사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤 테로아릴, 치환또는비치환된헤테로아릴알킬이거나, 또는 R 42 및 R 43, 또는 R 45 및 R 46 는이들이부착되어있는 탄소원자와함께 C=O 기를형성한다. [0177] 다른측면에서, 본발명은하기화학식의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물, N- 옥사이드또는프로드러그 에관한것이다 : [0178] [0179] [0180] [0181] 상기화학식에서, Alk 는헤테로원자에의해임의로방해된알킬기이고 ; M 1 은 N 또는 CR 49 이고, 여기서, R 49 는 H 또는치환또는비치환된알킬이고 ; [0182] [0183] M 2 은 N 또는 CR 50 이고, 여기서, R 50 는 H 또는치환또는비치환된알킬이고 ; R 36 및 R 37 은서로독립적으로동일또는상이한 H, 알킬이거나, 또는, R 36 및 R 37 는이들이부착되어있는원자 와함께임의치환된 5 원또는 6 원헤테로사이클을형성하고 ; [0184] R 38 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된헤테로사이클 로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된아릴아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴아 미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치 환또는비치환된헤테로아릴알킬, 또는할로알킬이고 ; [0185] R 47 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된알콕시, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된 아릴알킬, 또는할로이고 ; [0186] R 48 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된알콕시, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된 아릴알킬, 또는할로이다. [0187] 또다른측면에서, 본발명은하기화학식의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물, N- 옥사이드또는프로드 러그에관한것이다 : [0188] [0189] [0190] [0191] 상기화학식에서, Alk 는헤테로원자에의해임의로방해된알킬기이고 ; T 1 는 C=O 이고, Q 는 CR 51 R 52 또는 NR 51 이고, 여기서, R 51 및 R 52 은서로독립적으로동일또는상이한 H, 치환 또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된헤테로사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된아릴아미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴알킬아미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치환또는비치환된헤테로아릴알킬, 할로알킬이거나, 또는 R 51 및 R 52 은이들이부착되어있는탄소원자와함께 C=O 기또는치환또는비치환된알케닐기를형성하고 ; [0192] M 1 은 N 또는 CR 49 이고, 여기서, R 49 는 H 또는치환또는비치환된알킬이고 ;

48 [0193] [0194] M 2 은 N 또는 CR 50 이고, 여기서, R 50 는 H 또는치환또는비치환된알킬이고 ; R 38 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된헤테로사이클 로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된아릴아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴아 미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치 환또는비치환된헤테로아릴알킬, 또는할로알킬이고 ; [0195] R 47 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된알콕시, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된 아릴알킬, 또는할로이고 ; [0196] R 48 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된알콕시, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된 아릴알킬, 또는할로이다. [0197] 다른구현예에서, 본발명은하기화학식의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물, N- 옥사이드또는프로드러 그에관한것이다 : [0198]

49 [0199]

50 [0200] [0201]

51 [0202] 다른측면에서, 본발명은하기화학식의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물, N- 옥사이드또는프로드러그 에관한것이다 : [0203] [0204] [0205] 또다른측면에서, 본발명은하기화학식의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물, N- 옥사이드또는프로드 러그에관한것이다 : [0206] [0207] [0208] [0209] [0210] 상기화학식에서, Alk 는헤테로원자에의해임의로방해된알킬기이고 ; T 2 는 C=S, C=O, 또는 S(O) 2 이고 ; R 53 은치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치환또는 비치환된아릴, 또는치환또는비치환된아릴알킬이고 ; [0211] M 1 은 N 또는 CR 54 이고, 여기서, R 54 는 H 또는치환또는비치환된알킬이고 ; [0212] [0213] M 2 은 N 또는 CR 55 이고, 여기서, R 55 는 H 또는치환또는비치환된알킬이고 ; R 56 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된알콕시, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된 아릴알킬, 또는할로이고 ;

52 [0214] R 57 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된알콕시, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된 아릴알킬, 또는할로이고 ; [0215] 상기방법은화학식 ( 여기서, R 56, R 57, 및 Alk 는상기에서정의한바와같고, J 는이탈기이다 ) 의 화합물을화학식 ( 여기서, M 1 및 M 2 는상기에서정의한바와같다 ) 의화합물과반응시켜 NO 2 기를 갖는화학식의화합물을얻고 ; [0216] NO 2 기를환원시켜서 NH 2 기를갖는화합물을얻고 ; [0217] NH 2 기를갖는화합물을화학식 ( 여기서, J 2 는이탈기이고, T 2 및 R 53 는상기에서정의한바와같다 ) 의화합물과반응시키는것을포함한다. [0218] 또다른측면에서, 하기화학식의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물, N- 옥사이드또는프로드러그에관한 것이다 : [0219] [0220] [0221] [0222] 상기화학식에서, Alk 는헤테로원자에의해임의로방해된알킬기이고 ; R 51 및 R 52 은서로독립적으로동일또는상이한 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬 알킬, 치환또는비치환된헤테로사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된아릴아미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴알킬아미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치환또는비치환된헤테로아릴알킬, 할로알킬이거나, 또는 R 51 및 R 52 는이들이부착되어있는탄소원자와함께치환또는비치환된알케닐기를형성하고 ; [0223] M 1 은 N 또는 CR 49 이고, 여기서, R 49 는 H 또는치환또는비치환된알킬이고 ; [0224] [0225] M 2 은 N 또는 CR 50 이고, 여기서, R 50 는 H 또는치환또는비치환된알킬이고 ; R 38 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된헤테로사이클 로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된아릴아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴아 미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치 환또는비치환된헤테로아릴알킬, 또는할로알킬이고 ; [0226] R 47 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된알콕시, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된 아릴알킬, 또는할로이고 ; [0227] R 48 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된알콕시, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된

53 아릴알킬, 또는할로이고 ; [0228] 상기방법은화학식 ( 여기서, R 47, R 48, Alk, M 1, 및 M 2 는상기에서정의한바와같다 ) 의화합물을가열하여 -CON 3 기를 -N=C=O 기로전환시킨다음, 화학식 ( 여기서, J 3 는이탈기이고, R 38, R 51, 및 R 52 는상기에서정의한바와같다 ) 의화합물과반응시킴을포함한다. [0229] 또다른측면에서, 본발명은하기화학식의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물, N- 옥사이드또는프로드 러그의제조방법에관한것이다 : [0230] [0231] [0232] [0233] 상기화학식에서, Alk 는헤테로원자에의해임의로방해된알킬기이고 ; R 52 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된헤테로사이클 로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된아릴아미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴알킬아미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치환또는비치환된헤테로아릴알킬, 할로알킬이고 ; [0234] M 1 은 N 또는 CR 49 이고, 여기서, R 49 는 H 또는치환또는비치환된알킬이고 ; [0235] [0236] M 2 은 N 또는 CR 50 이고, 여기서, R 50 는 H 또는치환또는비치환된알킬이고 ; R 38 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된헤테로사이클 로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된아릴아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴아 미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치 환또는비치환된헤테로아릴알킬, 또는할로알킬이고 ; [0237] R 47 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된알콕시, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된 아릴알킬, 또는할로이고 ; [0238] R 48 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된알콕시, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된 아릴알킬, 또는할로이고 ; [0239] 상기방법은화학식 (R 47, R 48, Alk, M 1, 및 M 2 는상기에서정의한바와같다 ) 의화합물 을가열하여 -CON 3 기를 -N=C=O 기로전환시킨다음, 화학식 (R 38 는상기에서정의한바와같다 ) 의히

54 드라진과반응시킴을포함한다. [0240] [0241] 또다른측면에서, 본발명은하기화학식의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물, 또는 N- 옥사이드의제조 방법에관한것이다 : [ 화학식 III] [0242] [0243] [0244] [0245] [0246] [0247] 상기화학식에서, Ar 1, Ar 2 및 Ar 3 은독립적으로 5원또는 6원아릴, 헤테로아릴, 또는사이클로알킬환이고, Ar 2 및 Ar 3 는임의로제외될수있고 ; m 은 0, 1, 2 또는 3 이고 ; n 및 p 는독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4 이고 ; 각 R 1 ' 은수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되 고 ; [0248] 각 R 2 ' 은수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아 실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되 고 ; [0249] 각 R 3 ' 은수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아 실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되 고 ; [0250] R 5 내지 R 8 은독립적으로수소, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 헤테로알 킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬또는치환된헤테로아릴알킬로이루어 진군으로부터독립적으로선택되거나, 또는 R 6 및 R 7, R 7 및 R 8 은이들이결합하고있는원자와함께사이클로 헤테로알킬또는치환된사이클로헤테로알킬환을형성하고 ; [0251] b 는 0, 1, 또는 2 이고 ; [0252] 상기방법은화학식 ( 여기서, J 는이탈기이다 ) 의화합물을화학식의화합물 과반응시켜서생성물을얻고 ;

55 [0253] [0254] 상기생성물을화학식 ( 여기서, J 는이탈기이다 ) 의화합물과반응시킴을포함한다. 본발명의또다른목적은이러한미각수용체를특이적으로활성화시키는화합물에의해생기는쓴맛을억제또는차단하기위하여, 본명세서에기재된분석에서확인된화합물을첨가제또는향미조절제로조성물에이용하는것이다. 본발명의바람직한목적은커피와커피맛식품, 음료및의약에존재하는화합물의쓴맛을차단하기위하여, 상기확인된인간 T2R 수용체중적어도하나의활성화를억제하는화합물을사용하는것이다. [0255] [0256] [0257] 본발명의또다른목적은 ht2r8 미각수용체를특이적으로활성화시키는성분, 다수의쓴맛수용체를활성화시키는리간드, 알려지지않은수용체특이성을갖는쓴맛화합물또는알려지지않은또는다수의쓴맛화합물을함유하는조성물에의해생기는쓴맛을억제또는차단하기위하여, 본발명의화합물을광범위하게작용하는쓴맛차단제로서이용하는것이다. 일실시예에있어서, 본발명의화합물은적어도하나의상기확인된인간 T2R 수용체의활성화를억제함으로써커피와커피맛식품, 음료및의약에존재하는화합물의쓴맛을차단하기위해이용된다. 본발명의또다른목적은상기확인된화합물이예를들어인간또는동물미각시험, 바람직하게는인간미각시험에서커피와커피맛식품, 음료및의약에의해생긴쓴맛을조절, 바람직하게는억제또는차단한다는것을확인하는것이다. 본발명의또다른목적은이러한미각수용체를특이적으로활성화시키는화합물에의해생긴쓴맛을억제또는차단하기위하여, 본명세서에기재된분석에서확인된화합물을첨가제또는향미조절제로조성물에이용하는것이다. 본발명의바람직한목적은커피와커피맛식품, 음료및의약에존재하는화합물의쓴맛을차단하기위하여, 상기확인된인간 T2R 수용체중적어도하나의활성화를억제하는화합물을사용하는것이다. 특히바람직한실시예에있어서, ht2r3, 7, 10, 14, 16, 44, 51, 55, 61, 63, 64, 65, 71 및 / 또는 ht2r5, 9, 13, 54, 67 및 75 미각수용체를특이적으로활성화시키는화합물, 다수의쓴맛수용체를활성화시키는리간드, 알려지지않은수용체특이성을갖는쓴맛성분들또는알려지지않은또는다수의쓴맛화합물을함유하는조성물에의해생긴쓴맛을억제또는차단하기위하여, 화합물 C 및이의유사체가광범위하게작용하는쓴맛차단제로서사용된다. 화합물 C의광범위한길항특성을고려해볼때, 이는가장쓴화합물및이를함유하는조성물의쓴맛을실질적으로약화시켜야한다. 본발명의바람직한목적은커피와커피맛식품, 음료및의약에존재하는화합물의쓴맛을차단하기위하여, 화합물 C 및이의유사체와같이상기확인된인간 T2R 수용체중적어도하나의활성화를억제하는화합물을사용하는것이다. [0258] 도면의간단한설명도 1은본명세서에참조로통합된출원인의이전특허출원들에기재된바와같이일시적으로형질감염된 HEK 세포들에서 25개의인간 T2R들을탐색하기위하여, 커피로부터의부분적으로정제된쓴맛분획을사용한실험에관한것이다. 도 1에나타난바와같이, 상기커피분획은칼슘이미지분석에서 ht2r8 및 ht2r14로일시적으로형질감염된 HEK293 세포들을활성화시켰다. 상기커피분획의형광수준을감소시키기위하여청색염료 FD&C가사용되었고, 이들은분석을간섭하였다. 도 2는커피유래의쓴맛분획에대한 ht2r8 및 ht2r14의용량-의존적반응을보여주는 F/F 대로그 (log) 커피분획의그래프이다. 상기분석은 ht2r8 및 ht2r14 안정세포주및자동화된형광검출기 FLIPR을이용하여수행하였다. 도 3은 ht2r8 활성의백분율억제대화합물의농도의로그의그래프로서, 안정적인 ht2r8 발현세포주에서화합물 A 및 B에대한용량-의존적억제를보여준다. 도 4는 ht2r8 활성의백분율억제대화합물 C의농도의로그의그래프로서, 안정적인 ht2r8 발현세포주에서화합물 C에대한용량-의존적억제를보여준다. 도 5는상이한 (2) 인간쓴맛수용체에대한화합물 C의억제활성을나타낸다. 도 6은사카린농도의로그의기능으로서의수용체활성의그래프이다. 도 6은용량-반응관계와 ht2r43, ht2r44 및 ht2r8의변이체 (variant) 들을발현하는형질감염세포에서의수용체활성에대한사카린의영향을보여준다. ht2r8은 " 미각감별사 (taster)" 인 ht2r43-w35 및 ht2r44-w34 대립유전자 (allele) 보다시험관내 (in vitro) 분석에서사카린에대한반응성이낮았지만, " 비-미각감별사 (non-taster)" 인 ht2r43-s35 및 ht2r44-r35 대립유전자보다더반응한다

56 [0259] [0260] [0261] [0262] [0263] [0264] [0265] 발명을실시하기위한구체적인내용본발명에따르면, 본발명의화합물은조성물, 예를들어섭취가능한조성물의쓴맛을약화시키거나감소시키는데사용될수있다. 본명세서에사용된바와같이, " 섭취가능한조성물 (ingestible composition)" 은단독으로또는다른물질과함께경구소비되고자하는임의의물질을포함한다. 상기섭취가능한조성물은 " 식품또는음료제품 " 및 " 비-식용제품 " 모두를포함한다. " 식품또는음료제품 " 은고체, 반고체또는액체 ( 예를들어, 음료 ) 를포함하는, 인간이나동물에소비되고자하는식용제품을의미한다. 용어 " 비-식용 (non-edible) 제품 " 또는 " 비-식용 (noncomestible) 조성물 " 은보충물 (supplement), 기능식품 (nutraceutical), 기능성식품 ( 예를들어영양소를공급하는기본적인영양학적기능을넘어건강-증진및 / 또는질병-예방특성을갖는다고주장하는임의의신선또는가공식품 ), 조제약및일반의약품 (over the counter), 치약 (dentifice) 및구강청결제와같은구강케어제품, 립밤과같은화장품및기타개인관리제품들을포함한다. 상기섭취가능한조성물은또한약제학적, 의학적또는식용조성물을포함하며, 또는대안적으로제형, 예를들어약제학적또는의학적제형또는식품또는음료제품또는제형을포함한다. 본발명의화합물은또한단독으로또는알려져있거나후에발견될임의의섭취가능한조성물과함께조합되어제공될수있다. 예를들어, 상기섭취가능한조성물은식용조성물또는비-식용조성물일수있다. " 식용조성물 " 은인간이나동물에의해식품으로소비될수있는임의의조성물을의미하며, 고체, 젤, 페이스트, 포말성 (foamy) 물질, 반-고체, 액체또는이의혼합물을포함한다. " 비-식용조성물 (noncomestible composition)" 은식품이아닌것으로인간도는동물에의해소비되거나사용되고자하는임의의조성물을의미하며, 고체, 젤, 페이스트, 포말성물질, 반-고체, 액체또는이의혼합물을포함한다. 상기비-식용조성물은의학조성물을포함하지만이에제한되는것은아니며, 치료목적을위해인간이나동물에의해사용되고자하는비-식용조성물을의미한다. " 동물 " 은예를들면가축및애완동물과같은임의의인간이아닌동물을포함한다. 일실시예에있어서, 본발명의화합물은보충물 (supplement), 기능식품 (nutraceutical), 기능성식품 ( 예를들어영양소를공급하는기본적인영양학적기능을넘어건강-증진및 / 또는질병-예방특성을갖는다고주장하는임의의신선또는가공식품 ), 조제약및일반의약품 (over the counter), 치약 (dentifice) 및구강청결제와같은구강케어제품, 립밤과같은화장품및기타개인관리용품과같은, 비-식용조성물또는비-식용제품에첨가될수있다. 일반적으로, 처방전없이구입이가능한 (OTC) 제품및구강위생용품은처방전없이및 / 또는의학교수에게방문하지않고판매될수있는가정용및 / 또는개인용제품을의미한다. OTC 제품의예에는비타민및영양제 ; 국소진통제및마취제 ; 기침, 감기및알레르기치료약 ; 항히스타민제및 / 또는알레르기치료약제 ; 및이의조합을포함하나, 이에제한되는것은아니다. 비타민및영양제에는비타민, 영양제, 토닉 / 병영양음료, 어린이대상비타민, 영양보충제, 임의의기타영양제품또는영양관련제품또는영양제공제품, 및이의조합을포함하나이에제한되는것은아니다. 국소진통제및 / 또는마취제는표재성 (superficial) 또는심재성 (deep-seated) 아픔및통증, 예를들어근육통을약화시키기위해사용되는임의의국소크림 / 연고 / 젤 ; 티딩젤 (teething gel); 진통성분을갖는패취 ; 및이의조합을포함한다. 기침, 감기및알레르기치료약은충혈제거제 (decongestant), 기침치료약, 인두 (pharyngeal) 제제, 약용과자 (medicated confectionery), 항히스타민제및어린이대상기침, 감기및알레르기치료약 ; 및이의조합을포함하나이에제한되는것은아니다. 항히스타민제및 / 또는알레르기치료약은건초열 (hay fever), 비알레르기 (nasal allergy), 곤충물림및쏘임에대한임의의체계적치료를포함하나이에제한되는것은아니다. 구강위생용품의예에는구강세정스트립 (strip), 치약, 치솔, 구강세정제 (mouthwash)/ 치아린스, 의치 (denture) 관리, 구강청정제 (mouth freshener), 가정용치아미백제 (at-home teeth whitener) 및치실을포함하나이에제한되는것은아니다. 다른실시예에있어서, 본발명의화합물은식품이나음료제품또는제제에첨가될수있다. 식품및음료제품또는제형의예에는식용제품을위한코팅, 설탕입힘 (frosting) 또는윤내기 (glaze), 또는스프류, 건조가공식품류, 음료류, 즉석식품 (ready meal) 류, 캔또는보존식품류, 냉동가공식품류, 냉장가공식품류, 스낵식품류, 구운제품류, 과자류, 낙농품류, 아이스크림류, 대체식량류, 파스타및국수류및소스, 드레싱, 조미료류, 아기식품류, 및 / 또는스프레드류에포함된임의의개체를포함하나, 이에제한되는것은아니다. 일반적으로, 상기스프류는캔 / 보존, 건조, 인스턴트, 냉장, UHT 및냉동스프를가리킨다. 본정의를위하여, 스프는고기, 가금류, 생선, 야채, 곡물, 과일및기타재료로부터제조되어, 상기재료들의조각의일부또는

57 전부가포함될수있는액상으로조리되는식품을의미한다. 스프는맑거나 ( 브로스 (broth) 로서 ) 진하고 ( 차우더 (chowder) 로서 ), 부드럽고, 퓨레또는덩어리가든 (chunky), 즉시제공되는, 반농축또는농축일수있으며, 식사중처음코스로또는메인코스로또는간식 ( 음료와같이조금씩마시는 ) 으로뜨겁게또는차갑게제공될수있다. 스프는다른음식을준비하기위한재료로사용될수있고브로스 ( 콘소메 ) 로부터소스 ( 크림또는치즈기반스프 ) 의범위일수있다. [0266] [0267] [0268] [0269] [0270] [0271] [0272] [0273] " 건조및요리 (culinary) 식품류 " 는일반적으로 (i) 제품, 소스및레시피믹스 ( 기술에관계없이 ) 내완제품또는성분으로개별적으로판매되는, 분말, 과립, 페이스트, 농축부용, 압축된큐브, 정제또는분말또는과립형태의부용및부용유사제품과같은조리보조제품들 ; (ii) 건조스프믹스를포함하는건조및냉동건조스프, 건조인스턴스스프, 건조즉석조리스프, 파스타, 감자및쌀음식을포함하는즉석제조된음식, 식사및단일제공앙트레 (antree) 의건조또는앰비언트 (ambient) 조제물과같은식사해결제품들 (meal solution products); 및 (iii) 건조, 액상또는냉동이든간에완제품으로또는제품내성분으로판매되는, 조미료, 양념장 (marinade), 샐러드드레싱, 샐러스토핑, 딥 (dip), 반죽 (breading), 배터믹스 (batter mix, 튀김용믹스 ), 상온보관가능한 (shelf stable) 스프레드, 바베큐소스, 액상레시피믹스, 농축액, 샐러드용레시피믹스를포함하는소스또는소스믹스와같은식사장식제품들을의미한다. 음료류는, 탄산및비탄산음료, 알콜및비알콜음료, 휴대용 (ready to drink) 음료, 소다수와같은음료제조를위한액상농축조제물, 및건조분말음료프리커서 (precursor) 믹스를포함하나이에제한되지않는일반적으로음료, 음료믹스및농축물을의미한다. 상기음료류는또한알콜음료, 청량음료, 스포츠음료, 이온음료및핫드링크를포함한다. 상기알콜음료는맥주, 사이다 / 페리 ( 배로빚은술 ), 향알코올음료 (FAB), 포도주, 및스피릿 (spirits) 을포함하나이에제한되는것은아니다. 상기청량음료는콜라및비콜라탄산음료와같은탄산음료 ; 쥬스, 넥타, 쥬스음료, 과일향음료와같은과일쥬스 ; 청량수 (sparkling water), 샘물 (spring water) 및정제수 / 광천수 (table water) 를포함하는생수 (bottled water); 스포츠, 에너지또는엘릭서제 (elixir) 를포함하고, 탄산이거나그대로일수있는기능성음료 ; 액상및분말농축물과같은농축물을포함하나이에제한되는것은아니다. 상기핫드링크는신선 ( 예를들어, 우려낸 ), 인스턴트, 혼합 (combined), 액상, 휴대용, 용해도가높은건조커피음료, 커피음료믹스및농축물 ( 시럽, 퓨어, 제형화또는분말형태 ; " 분말형태 " 의예는모든파우더형태의커피, 감미제및분말크림 (whitener) 을포함하는제품임 ); 홍차, 녹차, 백차 (white tea), 우롱차및향차 (flavored tea) 와같은차 ; 및향-, 맥아- 또는식물-기반의분말, 과립, 또는우유또는물과혼합된블록또는정제를포함하나이에제한되는것은아니다. 스낵식품류는단맛과짤짤한맛의스낵및스낵바 (snack bar) 를포함하나이에제한되는것은아닌, 일반적으로가벼운일상적인식사가될수있는임의의식품을의미한다. 스낵식품의예에는과일스낵, 칩 / 크리습 (crisp), 압출스낵, 토틸라 / 옥수수칩, 팝콘, 프레첼 (pretzel), 넛트및기타단맛과짭짤한맛의스낵을포함하나이에제한되는것은아니다. 스낵바의예에는그라놀라 (granola)/ 뮤즐리 (muesli) 바, 아침식사용바, 에너지바, 과일바및기타스낵바가포함되나이에제한되는것은아니다. 구운제품류는일반적으로이의제조과정이열이나과다한햇빛에노출되는것을포함하는임의의식용제품을의미한다. 구운제품의예에는빵, 번 (bun), 쿠키, 머핀, 시리얼, 토스터페이스트리, 페이스트리, 와플, 토틸라, 비스켓, 파이, 베이글, 타르트 (tart), 퀴치 (quich), 케익, 임의의구운식품및이의임의의조합을포함하나이에제한되는것은아니다. 아이스크림류는일반적으로크림과설탕및향료를함유하는냉동디저트를의미한다. 아이스크림의예에는임펄스 (impulse) 아이스크림 ; 테이크-홈아이스크림 ; 프로즌요구르트및아티서널 (artisanal) 아이스크림 ; 대두, 오트, 콩 ( 예를들어, 적두및녹두 ), 및쌀-기반의아이스크림을포함하나이에제한되는것은아니다. 과자류는일반적으로맛이단식용제품을의미한다. 과자류의예에는캔디, 젤라틴, 초콜릿과자, 설탕과자, 검등과이의조합제품이포함되나이에제한되는것은아니다. 식사대체류는특히건강이나체형에관심을갖는사람들을위한정상적인식사를대체하고자하는임의의식품을지칭한다. 식사대체류의예에는슬리밍 (slimming) 제품및요양 (convalescence) 제품을포함하나이에제한되는것은아니다. 즉석식사류는일반적으로대대적인준비나가공없이식사로제공될수있는임의의식품을지칭한다. 상기즉석식사류는제조업체에의해첨부된조리 " 기술 " 을갖는제품을포함하며, 이는즉석도, 완성도및편의성이높다. 즉석식사의예에는캔 / 보존, 냉동, 건조, 냉장즉석식사 ; 디너믹스 (dinner mix); 냉동피자 ; 냉장피

58 자 ; 및가공된샐러드를포함하나이에제한되는것은아니다. [0274] [0275] [0276] [0277] [0278] [0279] [0280] [0281] [0282] [0283] 파스타및국수류는캔, 건조및냉장 / 신선파스타 ; 및일반, 즉석, 냉장, 냉동및스낵국수를포함하나이에제한되지않는임의의파스타및 / 또는국수를포함한다. 캔 / 보존식품류는캔 / 보존고기및고기제품들, 생선 / 해산물, 야채, 토마토, 콩, 과일, 즉석식사, 스프, 파스타, 및기타캔 / 보존식품을포함하나, 이에제한되는것은아니다. 냉동가공식품류는냉동가공된적색육 (red meat), 가공가금류, 가공생선 / 해산물, 가공야채, 육류대체물, 가공토마토, 베이커리제품들, 디저트, 즉석식사, 피자, 스프국수및기타냉동식품을포함하나, 이에제한되는것은아니다. 건조가공식품류는쌀, 디저트믹스, 건조즉석식사, 건조스프, 즉석스프, 건조파스타, 일반국수및즉석국수를포함하나이에제한되는것은아니다. 냉장가공식품류는냉장가공육, 가공생선 / 해산물제품, 런치키트 (lunch kit), 신선컷 (cut) 과일, 즉석식사, 피자, 가공샐러드, 스프, 신선파스타및국수를포함하나이에제한되는것은아니다. 소스, 드레싱, 조미료 (condiment) 류는토마토페이스트와퓨레, 부용 (bouillon)/ 고형육수 (stock cube), 허브와향신료 (spice), 글루탐산나트륨 (MSG), 테이블소스, 콩기반소스, 파스타소스, 웨트 (wet)/ 쿠킹 (cooking) 소스, 건조소스 / 분말믹스, 케찹, 마요네즈, 겨자, 샐러드드레싱, 비네그레트 (vinaigrette), 딥 (dip), 피클제품, 및기타소스, 드레싱및조미료를포함하나이에제한되는것은아니다. 유아식품류는우유- 또는대두-기반의유동식 (formula); 및가공, 건조및기타유아식품을포함하나이에제한되는것은아니다. 스프레드류는잼과설탕절임 (preserve), 꿀, 초콜릿스프레드, 넛트기반의스프레드, 및효모기반의스프레드를포함하나이에제한되는것은아니다. 낙농제품류는일반적으로포유동물의젖으로부터생산되는식품을지칭한다. 낙농제품류의예에는마시는우유제품, 치즈, 요구르트와사우어우유음료 (sour milk drink), 및기타낙농제품을포함하나이에제한되는것은아니다. 식용조성물 (comestible composition), 특히식음료제품또는제형들의또다른예들이다음과같이제공된다. 예시적인식용조성물은하나이상의과자류, 초콜릿과자, 정제류, 카운트라인 (countline) 류, 배그드 (bagged) 셀프라인 (selfline)/ 소프트라인 (softline) 류, 박스포장류 (boxed assortments), 일반박스포장류 (standard boxed assortments), 꼬아서감싼미니어처 (twist wrapped miniatures), 양념초콜릿, 초콜릿장난감, 알파요레 (alfajores), 다른초콜릿, 과자, 박하사탕, 보통박하사탕, 파워박하사탕, 눈깔사탕, 향정, 껌, 젤리및껌, 토핑, 카라멜및너겟, 약성분함유과자, 롤리팝, 감초, 다른설탕과자, 껌, 츄잉껌, 설탕껌, 무설탕껌, 기능성껌, 풍선껌, 빵, 포장된 / 대량생산빵, 비포장된 / 장인제조빵, 페스트리, 케익, 포장된 / 대량생산케익, 비포장된 / 장인제조케익, 쿠키, 초콜릿코팅비스켓, 샌드위치비스켓, 충진된비스켓, 짭짤한비스켓및크래커, 빵대체식품, 조식용시리얼, RTE (ready-to-eat) 시리얼, 가족조식용시리얼, 플레이크, 뮤즐리, 다른 RTE 시리얼, 어린이용조식시리얼, 핫시리얼, 달고짭짤한스낵, 과일스낵, 칩 / 크리스피, 압출스낵, 토띨라 / 옥수수칩, 팝콘, 프레즐, 넛트, 다른달콤짭짤한스낵, 스낵바, 그라놀라바, 조식용바, 에너지바, 과일바, 다른스낵바, 고기대체제품, 슬리밍제품, 회복기드링크, 즉석식품 (ready meals), 캔조리식품, 냉동조리식품, 건조조리식품, 냉장조리식품, 디너믹스, 디저트믹스, 냉동피자, 냉장피자, 수프, 캔수프, 건조스프, 인스턴트스프, 냉장스프, 냉동스프, 파스타, 캔파스타, 건조파스타, 냉장 / 신선파스타, 누들, 보통누들, 인스턴트누들, 냉동누들, 컵 / 용기인스턴트누들, 파우치인스턴트누들, 냉장누들, 스낵누들, 푸드캔, 고기캔및고기식품, 어류 / 해물캔, 야채캔, 토마토캔, 콩캔, 과일캔, 조미식품캔, 파스타캔, 다른캔식품, 냉동식품, 냉가공붉은색고기, 냉가공가금류, 냉가공어류 / 해물, 냉가공야채, 냉동고기대체물, 냉동포테이토, 오븐베이트포테이토칩, 다른오븐베이크포테이토식품, 비오븐가공포테이토, 냉동베이커리식품, 냉동디저트, 다른냉동식품, 건조식품, 냉장가공고기, 냉장어류 / 해물식품, 냉장가공어류, 냉장코팅어류, 냉장훈제어류, 냉장런치킷트, 냉장 / 신선파스타, 냉장누들, 오일및지방, 올리브오일, 야채및씨오일, 쿠킹지방, 버터, 마아가린, 스프레드오일및지방, 기능성스프레드오일및지방, 소스, 드레싱및조미료, 토마토페이스트및퓨레, 부용 / 스톡큐브, 스톡큐브, 그레이비그래뉼, 액상스톡및폰드, 허브및스파이스, 발효소스, 콩류소스, 파스타소스, 젖은소스, 건조소스 / 분말믹스, 케첩, 마요네즈, 보통마요네즈, 머스타드, 샐러드드레싱, 보통샐러드드레싱, 저지방샐러드드레싱, 비니그레트 (vinaigrettes), 딥

59 (dip), 피클식품 (pickled products), 다른소스류 (other sauces), 드레싱류및조미료류, 스프레드류, 쨈류, 및방부제, 꿀, 초콜릿스프레드, 넛류스프레드, 및효모류스프레드를포함한다. [0284] [0285] 인간이나동물에의해판명된바와같이, 또는, 제형시험의경우당해분야에서일반적으로알려진과정을통해대다수의패널, 예를들어 8명의인간미각감별사 (taster) 에의해판명된바와같이, 본발명의화합물없이제조된조성물과비교시, 조성물과관련된쓴맛을약화시키거나줄이기위하여, 전형적으로조성물, 예를들어섭취가능한조성물과관련된쓴맛을약화시키거나줄이기에충분한양이상기조성물에첨가된다. 조성물관련쓴맛을약화시키거나감소시키기에효과적인본발명의성분의농도는식용조성물의특정형태와이의다양한기타성분, 자연의유전적다양성과개개의선호도와상기조성물을맛보는다양한인간의건강상태, 및이러한화학감각화합물의미각에대한특정화합물의주관적효과를포함하는다양한변수에따라물론달라질것이다. 몇몇실시예에있어서, 조성물과관련된쓴맛을약화시키거나감소시키는데효과적인본발명의화합물의농도는약 ppm 내지약 100 ppm, 예를들어, 약 0.1 ppm 내지 100 ppm, 약 1 ppm 내지약 25 ppm, 약 1 ppm 내지약 10 ppm, 약 0.1 ppm 내지약 10 ppm, 약 0.01 ppm 내지약 30 ppm, 약 0.05 ppm 내지약 10 ppm, 약 0.01 ppm 내지약 5 ppm, 약 0.02 ppm 내지약 2 ppm, 또는약 0.01 ppm 내지약 1 ppm이다. [0286] [0287] [0288] [0289] [0290] [0291] [0292] 본발명의몇몇실시예에있어서, 조성물과관련된쓴맛을약화시키거나줄이기위하여본발명의하나이상의화합물의혼합물이사용될것으로고려된다. 상기하나이상의화합물의농도는같거나각화합물의농도는다를수있다. 본발명을더설명하기에앞서, 하기정의가제공된다. 용어 "T2R" 패밀리는, (1) 약 30-40% 아미노산서열동일성 (identity), 보다상세하게는약 25개의아미노산, 최적으로 개의아미노산들의윈도우이상으로, 아래및본명세서에참고로통합된 Zuker (Id) (2001) 및 Adler (Id.) (2001) 출원에개시된 T2R과약 40, 50, 60, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 또는 99% 아미노산서열동일성을가지며 ; (2) 아래에개시된 T2R 서열및이의보존적으로변형된변이체들로이루어진군으로부터선택된아미노산서열을포함하는면역원 (immunogen) 에의해생성된항체에특이적으로결합하고 ; (3) 엄격한하이브리드화조건하에서아래에개시된 T2R DNA 서열및이의보존적으로변형된변이체들로이루어지는군으로부터선택되는서열에특이적으로하이브리드화 ( 적어도약 100, 선택적으로약 뉴클레오타이드의크기를가짐 ) 하며 ; (4) 아래에개시된 T2R 아미노산서열로이루어지는군으로부터선택되는아미노산서열과적어도약 40% 동일한서열을포함하고 ; (5) 기재된 T2R 서열들에엄격한하이브리드화조건하에서특이적으로하이브리드화하는프라이머들에의해증폭되는, 다형성변이체, 대립유전자 (allele), 돌연변이, 및동족체 (homolog) 를포함한다. 특히, 이러한 "T2R" 은본출원에서제공된핵산서열및아미노산서열을갖는 ht2r8 및 ht2r14로본명세서에서지칭된미각수용체 GPCR, 및본명세서에서확인된쓴맛리간드에특이적으로결합하는이의변이체, 대립유전자, 돌연변이, 오르토로그 (ortholog) 와키메라, 및기타구조적으로관련성이있는화합물및쓴맛화합물을포함한다. T2R 유전자들은단백질및 DNA 수준모두에서실질적인서열차이를나타내는반면, 현재까지분리된모든 T2R 들은동일한특정영역에서어떤보존서열 (consensus sequence) 을함유한다고확인되었거나본명세서에전체가참조로통합되어있는애들러 (Adler) 등 (WO 01/77676 A1 (2001) 및주커 (Zuker) 등 (WO 01/18050 A2) 에서이전에확인된 T2R 보존서열을함유하거나적어도 70-75% 서열동일성을갖는것으로확인되었다. 위상학적으로, 어떤화학감각 GPCR들은 "N-말단도메인 ", " 세포외영역 ", 7개의막관통영역을포함하는 " 막관통도메인 " 및상응하는세포질및세포외루프, " 세포질영역 " 및 "C-말단영역 " 을가지고있다 (Hoon et al, Cell, 96: (1999); Buck & Axel, Cell, 65: (1991) 참조 ). 이러한영역들은소수성및친수성도메인을확인하는서열분석프로그램 (Stryer, Biochemistry, (3rd ed. 1988) 참조 ; dot.imgen.bcm.tmc.edu 에서얻을수있는프로그램과같이수많은인터넷기반서열분석프로그램참조 ) 과같이당해기술분야의숙련자에의해알려진방법을이용하여구조적으로확인될수있다. 이러한영역들은키메라단백질들을만드는데유용하고, 본발명의시험관내분석, 예를들어리간드결합분석에유용하다. 예를들어, 키메라 T2R은하나의 T2R의세포외영역과동일하거나다른종의또다른 T2R의막관통영역과결합하여제조될수있다. 그러므로, " 세포외영역 " 은세포막으로부터돌출되어세포의세포외표면에노출된 T2R 폴리펩타이드의도메인을지칭한다. 상기영역들은세포의세포외면에노출된막관통도메인의세포외루프들, 즉막관통영역 2와

60 3, 막관통영역 4와 5 및막관통영역 6 및 7 사이의세포외루프들뿐만아니라세포의세포외면에노출된 "N- 말단도메인 " 을포함한다. 상기 "N-말단도메인 " 은 N-말단에서시작해서상기막관통영역의시작점근처영역까지확장한다. 이러한세포외영역들은수용상및고체상모두시험관내리간드결합분석에유용하다. 또한, 아래에기재된막관통영역들은세포외영역과조합되거나단독으로리간드결합에관여할수있고, 따라서시험관내리간드결합분석에유용하다. [0293] 본명세서에서 "T2R 발현세포 " 는내생 (endogenous) T2R 발현세포뿐만아니라본발명에따른인간 T2R 서열을발현하는재조합세포를포함한다. 이러한세포들은혀및위장시스템에포함되어있으며, 위장내브러시세포, STC-1 세포와같은장내분비 (enteroendocrine) 세포와같은위장시스템및관련기관내세포뿐만아니라혀위에발현된미뢰 (taste bud) 와같은구강내세포를포함한다. 이러한세포들은또한구스트두신 (gustducin), 트랜스두신 (transducin), G α15 또는 G α16 과같은 G 단백질을발현할수있다. 특정 T2R들을발현 하는세포들은 FACS 세포분리및 / 또는마그네틱비드세포분리과정과같이알려진방법에의해확인및분리 될수있다. [0294] [0295] [0296] [0297] [0298] [0299] [0300] 7개의막관통 " 영역들 (regions)" 을포함하는 " 막관통도메인 " 은원형질막내에있는 T2R 폴리펩타이드의도메인을지칭하며, 또한막관통 " 영역들 " 로지칭되는, 대응하는세포질 ( 세포내 ) 및세포외루프들을또한포함할수있다. 상기 7개의막관통영역과세포외및세포질루프들은 Kyte & Doolittle(J. Mol. Biol., 157: (1982)) 또는 Stryer에서언급된바와같은표준방법을이용하여확인될수있다. " 세포질도메인들 " 은세포내에맞대고있는 T2R 단백질들의도메인들, 예를들면, "C-말단도메인 " 및막관통도메인의세포내루프들, 예를들면, 막관통영역 1과 2, 막관통영역 3과 4 및막관통영역 5와 6 사이의세포내루프들을지칭한다. "C-말단도메인 " 은마지막막관통영역의끝에서부터단백질의 C-말단까지걸쳐있는영역을지칭하며, 정상적으로세포질내에위치한다. 용어 "7-막관통수용체 " 는원형질막에 7번걸쳐있는 7개의영역을갖는막관통단백질들의슈퍼패밀리에속하는폴리펩타이드를의미한다 ( 따라서, 상기 7개의영역은 " 막관통 " 또는 "TM" 도메인들 TM I 내지 TM VII로불림 ). 후각및어떤미각수용체의패밀리들은각각이슈퍼패밀리에속한다. 하기에보다상세히설명되는바와같이, 7-막관통수용체폴리펩타이드들은비슷하고특징적인제1, 제2 및제3 구조를가지고있다. 용어 " 리간드결합영역 " 은막관통도메인 II 내지 VII(TM II 내지 VII) 을실질적으로통합하는화학감각또는미각수용체로부터유래한서열을지칭한다. 상기영역은리간드, 보다상세하게는미각생성화합물과결합할수있다. 용어 " 원형질막전위 (translocation) 도메인 " 또는간략하게 " 전위도메인 " 은폴리펩타이드암호화서열의아미노말단으로통합시, 하이브리드화 (" 융합 ") 단백질을높은효율로세포원형질막으로 " 인솔 (chaperone)" 하거나 " 전위 (translocate)" 할수있는폴리펩타이드도메인을의미한다. 예를들어, 인간로돕신수용체폴리펩타이드인 7-막관통수용체의아미노말단에서최초로유래한특정 " 전위도메인 " 을사용할수있다. 또다른전위도메인은소의로돕신서열에서유래되었고또한전위를용이하게하는데유용하다. 로돕신유래서열들은 7- 막관통융합단백질을원형질막으로전위시키는데특히효율적이다. " 기능적동등성 (functional equivalency)" 은비슷한조건하에서로돕신에서유래한것과같은예시적인전위도메인만큼효과적으로새롭게번역된단백질을원형질막으로전위시키는도메인의능력및효율을의미하며, 상대적효율은본명세서에기재된바와같이 ( 정량적으로 ) 측정되고비교될수있다. 본발명의범주내에속하는도메인들은, 20개의아미노산길이의전위도메인인서열번호 1과동일한효율로새롭게합성된폴리펩타이들을세포내 ( 포유동물, 제노푸스 (Xenopus) 등 ) 원형질막으로전위시키는효율을일상적으로스크리닝하여결정될수있다. 미각신호전달을중재하는 T2R 패밀리구성원을조절하는화합물을시험하기위한분석법의문맥에서구 " 기능적효과 (functional effect)" 는비직접적또는직접적으로수용체의영향하에있는임의의변수, 예를들어기능적, 물리적및화학적효과를결정하는것을포함한다. 이는리간드결합, 이온유속 (ion flux) 의변화, 막전위, 전류흐름 (current flow), 전사, G 단백질결합, GPCR 인산화또는탈인산화, 신호전달, 수용체-리간드 상호작용, 이차전달자 (messenger) 농도 ( 예를들어, camp, cgmp, IP3, 또는세포내 Ca 2+ ), 시험관내, 생체내및 생체외 (ex vivo) 를포함하고, 또한신경전달물질또는호르몬방출의증가또는감소와같은기타생리학적효 과를포함한다

61 [0301] [0302] [0303] [0304] [0305] [0306] " 기능적효과를결정한다는것 " 은비직접적또는직접적으로 T2R 패밀리구성원의영향하에있는변수, 예를들어기능적, 물리적및화학적효과를증가시키거나감소시키는화합물에대한분석을의미한다. 이러한기능적효과들은예를들어분광학적특성 ( 예를들어, 형광성, 흡광도, 굴절률 ), 유체역학적 ( 예를들어, 형태 ), 크로마토그래피, 또는용해도특성의변화, 패치클램프, 전압-민감성염료, 전체세포전류, 방사성동위원소유출, 유도성마커, 난모세포 T2R 유전자발현 ; 조직배양세포 T2R 발현 ; T2R 유전자의전사활성화 ; 리간드결합분석 ; 전압, 막전위및컨덕턴스 (conductance) 변화 ; 이온유속분석 ; camp, cgmp 및이노시톨삼인산 (IP3) 와같은세포내 2차전달자의변화 ; 세포내칼슘수준의변화 ; 신경전달물질방출등과같은당해기술분야의숙련자들에게알려진임의의수단에의해측정될수있다. T2R 단백질수용체의 " 억제제 ", " 활성제 " 및 " 조절제 " 는예를들어리간드, 작용제, 길항물질, 및이들의동족체 (homolog) 및모방체 (mimetic) 와같은미각신호전달을위한시험관내및생체내분석을이용하여확인된억제성, 활성화또는조절하는분자들을의미하는것으로상호교환적으로사용된다. 억제제는미각신호전달에, 예를들어결합하거나, 부분적으로또는전체적으로자극을차단하거나, 감소시키거나, 예방하거나활성화를지연시키거나, 불활성화시키거나, 둔감화시키거나예를들어길항물질와같이하향조절하는화합물이다. 활성제는미각신호전달에결합하고, 자극하고, 증가시키고, 열고, 활성화시키고, 촉진하고, 활성화를증가시키고, 민감하게하고또는작용제와같이상향조절하는화합물이다. 조절제는예를들어활성제나억제제 ( 예를들어에브네린및소수성담체패밀리의기타구성원 ); G 단백질 ; 키나아제 ( 예를들어, 수용체의불활성화및둔감화와관련된로돕신키나아제및베타아드레날린성수용체키나아제의동족체 ); 및또한수용체를불활성화시키고둔감화시키는아레스틴 (arrestin) 에결합하는세포외단백질과수용체의상호작용을바꾸는화합물을포함한다. 조절제는자연적발생및합성리간드, 길항물질, 작용제, 작은화학분자등뿐만아니라예를들어바뀐활성을갖는유전적으로변화된형태의 T2R 패밀리구성원을포함한다. 억제제및활성제를위한상기분석들은, 예를들어세포또는세포막에서 T2R 패밀리구성원들을발현하는것, 예를들어쓴맛화합물을조절하는화합물의존재또는부재하에추정되는조절제화합물을적용하는것, 및그리고나서상기기재한바와같이미각신호전달에미치는기능적효과를결정하는것을포함한다. 잠재적활성제, 억제제또는조절제로처리된 T2R 패밀리구성원들을포함하는시료들또는분석을상기억제제, 활성제또는조절제가없는대조군시료와비교하여조절정도를조사한다. 대조군시료들 ( 조절제로처리되지않음 ) 은 100% 의상대적 T2R 활성값을부여받는다. T2R의억제는대조구대비 T2R 활성값이약 80%, 선택적으로 50% 또는 25-0% 인때에달성된다. T2R의활성화는대조구대비 T2R 활성값이 110%, 선택적으로 150%, 선택적으로 %, 또는 % 이상인때달성된다. 본명세서에사용된바와같이용어 " 정제된 ", " 실질적으로정제된 " 및 " 분리된 " 은본발명의화합물이자연상태에서정상적으로회합하는기타다른화합물이없는상태를가리킨다. 바람직하게는, " 정제된 ", " 실질적으로정제된 " 및 " 분리된 " 은상기조성물이주어진시료의중량의적어도 0.5%, 1%, 5%, 10% 또는 20%, 가장바람직하게는적어도 50% 또는 75% 의중량비를포함하는것을가리킨다. 바람직한일실시예에있어서, 이들용어들은주어진시료의중량의적어도 95% 의중량비를포함하는본발명의화합물을가리킨다. 본명세서에사용된바와같이, 핵산이나단백질의용어 " 정제된 ", " 실질적으로정제된 " 및 " 분리된 " 은핵산이나단백질을지칭시, 포유동물, 특히인간체내에서자연적으로발생하는것보다는다른정제또는농도의상태를또한가리킨다. 포유동물, 특히인간체내에서자연적으로발생하는것보다큰임의의정제정도또는농도정도는 (1) 다른회합된구조들이나화합물로부터의분리또는 (2) 포유동물, 특히인간체내에서정상적으로회합되지않는구조들이나화합물과의회합을포함하여, " 분리된 " 의의미에속한다. 당해기술분야에서숙련자에게알려진다양한방법들과공정에따라, 본명세서에기재된핵산이나단백질또는핵산이나단백질의클래스 (class) 는분리되거나, 그렇지않으면자연상태에서정상적으로회합되지않는구조들이나화합물과회합될수있다. 본명세서에사용된바와같이용어 " 분리된 " 은핵산또는폴리펩타이드와관련하여, 포유동물, 특히인간신체에서자연적으로존재하는것과상이한정제또는농도의상태를가리킨다. 체내에서자연적으로발생하는것보다큰임의의정제정도또는농도정도는 (1) 다른자연적으로발생하는회합된구조들이나화합물로부터의정제또는 (2) 체내에서정상적으로회합되지않는구조들이나화합물과의회합을포함하여, " 분리된 " 의의미에속한다. 당해기술분야에서숙련자에게알려진다양한방법들과공정에따라, 본명세서에기재된핵산이나폴리펩타이드는분리되거나, 그렇지않으면자연상태에서정상적으로회합되지않는구조들이나화합물과회합될수있다. 본명세서에사용된바와같이, 용어 " 증폭하는 " 및 " 증폭 " 은하기에상세히설명되는바와같이, 재조합또는자연적으로발현되는핵산을생성하거나검출하기위한임의의적절한증폭방법의사용을가리킨다. 예를들

62 어, 본발명은생체내또는시험관내로자연적으로발현된 ( 예를들어, 게놈또는 mrna) 또는재조합 ( 예를들어, cdna) 의본발명의핵산들 ( 예를들어, 본발명의미각을생성하는화합물이결합한서열들 ) 을증폭 ( 예를들어, PCR) 하기위한방법들및시약들 ( 예를들어, 특정올리고뉴클레오타이드프라이머쌍 ) 을제공한다. [0307] [0308] [0309] [0310] 용어 " 발현벡터 " 는원핵, 효모, 곰팡이, 식물, 곤충또는포유동물세포를포함하는임의의세포에서시험관내또는생체내로, 구성적으로또는유도적으로, 본발명의핵산서열을발현하는목적을위한임의의재조합발현시스템을가리킨다. 상기용어는선형또는원형발현시스템을포함한다. 상기용어는에피좀 (episome) 으로있거나숙주세포의게놈으로삽입되는발현시스템을포함한다. 상기발현시스템은자가-복제하거나그렇지않은능력, 즉세포내에서일시적발현만을유도하는능력을가질수있다. 상기용어는재조합핵산의전사를위해필요한최소한의구성요소만을함유한재조합발현 " 카세트 " 를포함한다. 용어 " 라이브러리 " 는축퇴성프라이머쌍과핵산의증폭으로재조합생성감각, 특히미각수용체리간드결합영역, 또는상기증폭된리간드결합영역들에삽입되는분리된벡터들의집합, 또는미각수용체를암호화하는적어도하나의벡터로각각무작위로형질감염된세포들의혼합물과같은상이한핵산또는폴리펩타이드분자들의혼합물의조제물을의미한다. 용어 " 핵산 " 또는 " 핵산서열 " 은일본쇄또는이본쇄형태의데옥시-리보뉴클레오타이드또는리보뉴클레오타이드올리고뉴클레오타이드를가리킨다. 상기용어는천연뉴클레오타이드의알려진유사체를함유하는핵산들, 즉올리고뉴클레오타이드를포함한다. 상기용어는또한합성골격을갖는핵산-유사구조들을포함한다. 다르게표시하지않는한, 특정핵산서열은직접적으로표시한서열뿐만아니라이의보존적으로변화된변이체들 ( 예를들어, 축퇴성코돈치환 ) 및상보적인서열들을또한암시적으로포함한다. 구체적으로, 축퇴성코돈치환은예를들어선별된하나이상의코돈중세번째위치가혼합-염기및 / 또는데옥시이노신잔기들과치환된서열들을생성함으로써달성될수있다 (Batzer et al., Nucleic Acid Res., 19:5081 (1991); Ohtsuka et al., J. Biol. Chem., 260: (1985); Rossolini et al., Mol. Cell. Probes, 8:91-98 (1994)). 상기용어핵산은유전자, cdna, mrna, 올리고뉴클레오타이드, 및폴리뉴클레오타이드와상호교환적으로사용된다. [0311] [0312] [0313] [0314] 용어 " 폴리펩타이드 ", " 펩타이드 " 및 " 단백질 " 은아미노산잔기들의중합체를가리키는것으로본명세서에서상호교환적으로사용된다. 상기용어는자연적으로발생하는아미노산중합체및비-자연적으로발생하는아미노산중합체뿐만아니라, 하나이상의아미노산잔기가상응하는자연적으로발생하는아미노산의합성화학적모방체 (mimetic) 인아미노산중합체에적용된다. 본명세서에사용된바와같이, 예를들어알콕시, 알카노일, 알케닐, 알키닐등과같은접두사 " 알크 (alk)" 를갖는다른기뿐만아니라 " 알킬 " 이란선형또는분지형또는이의조합일수있는탄소사슬을의미한다. 알킬기의예는메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 2급- 및 3급-부틸, 펜틸, 헥실, 헵팁등을포함한다. 바람직한알킬기는 1개내지 4개의탄소를갖는다. " 알케닐 " 및기타는적어도하나의불포화탄소-탄소결합을갖는탄소사슬을포함한다. " 알키닐 " 및기타는적어도하나의탄소-탄소삼중결합을갖는탄소사슬을포함한다. 용어 " 사이클로알킬 " 이란헤테로원자를갖는않는카보사이클을의미하고, 모노-, 비- 및트리사이클릭포화카보사이클, 및융합환계를포함한다. 사이클로알킬의예는사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 데카하이드로나프탈렌, 아다만테인, 인다닐, 인데닐, 플루오레닐, 1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌등을포함한다. 용어 " 아릴 " 이란단일환또는함께융합된다중환인방향족치환기를의미한다. 예시적인아릴기는비제한적으로페닐, 나프틸, 안트라세닐, 피리디닐, 피라지닐, 피리미디닐, 트리아지닐, 티오페닐, 푸라닐, 피롤릴, 옥사졸릴, 이미다졸릴, 트리아지올릴, 및테트라졸릴기를포함한다. 하나이상의헤테로원자 ( 예를들어, 피리디닐 ) 를갖는아릴기는종종 " 헤테로아릴기 " 라부른다. 다중환으로형성될때, 구성환의적어도하나는방향족이다. 어떤구현예에서, 다중환의적어도하나는헤테로원자를포함하고, 이에따라헤테로원자함유아릴기를형성한다. 헤테로원자함유아릴기는비제한적으로벤족사졸릴, 벤즈이미다졸릴, 퀴녹살리닐, 벤조푸라닐, 및 1H-벤조 [d][1,2,3] 트라아졸릴기를포함한다. 헤테로원자함유아릴기는또한비제한적으로 2,3- 디하이드로벤조 [b][1,4] 디옥시닐및벤조 [d][1,3] 디옥솔릴기를포함한다. 헤테로원자함유아릴기는또한적어도하나의헤테로원자및적어도하나의카보닐기를포함하는헤테로사이클릭환에융합된방향족환을포함한다. 그와같은기는비제한적으로디옥소테트라하이드로퀴녹살리닐및디옥소테트라하이드로퀴나졸리닐기

63 를포함한다. [0315] [0316] [0317] [0318] [0319] [0320] [0321] [0322] [0323] [0324] [0325] [0326] [0327] 용어 " 아릴알콕시 " 란알콕시기에결합된아릴기를의미한다. 용어 " 아릴아미도알킬 " 이란아릴-C(O)NR-알킬또는아릴-NRC(O)-알킬을의미한다. 용어 " 아릴알킬아미도알킬 " 이란아릴-알킬-C(O)NR-알킬또는아릴-알킬-NRC(O)-알킬을의미하고, 여기서, R 은하기에열거된어떤적합한기이다. 용어 " 아릴알킬 " 이란알킬기에결합된아릴기을의미한다. 용어 " 할로겐 " 또는 " 할로 " 란염소, 브롬, 불소또는요오드를의미한다. 용어 " 이탈기 " 란치환반응, 예컨대친핵성치환반응에서다른관능기또는원자에의해대체될수있는원자또는관능기를의미한다. 예로써, 대표적인이탈기는하기를포함한다 : 클로로, 브로모및요오도기 ; 설폰산에스테르기, 예컨대메실레이트, 토실레이트, 브로실레이트, 노실레이트등 ; 및아실옥시기, 예컨대아세톡시, 트리플루오로아세톡시등. 용어 " 할로알킬 " 이란하나이상의할로겐원자를갖는알킬기 ( 예를들어, CF 3 ) 를의미한다. 용어 " 헤테로알킬 " 이란 N, O, P, B, S, 또는 Si 와같은헤테로원자를포함하는알킬부분을의미한다. 헤테로원자는포화또는불포화결합에의해헤테로알킬부분의나머지에연결될수있다. 따라서, 기로치환된알킬, 예컨대헤테로사이클로알킬, 치환된헤테로사이클로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 알콕시, 아릴옥시, 보릴, 포스피노, 아미노, 실릴, 티오, 또는셀레노는용어헤테로알킬의범위내에있다. 헤테로알킬의예는시아노, 벤조일, 2-피리딜및 2-푸릴을포함하지만이들로한정되지는않는다. 용어 " 헤테로아릴알킬 " 이란알킬기가부착된헤테로아릴기를의미한다. 용어 " 헤테로사이클 " 이란질소, 산소및황으로부터독립적으로선택된적어도하나의헤테로원자, 특히 1 내지 4개의헤테로원자를함유하는 1개또는 2개다수의결합, 및환원자를이의로갖는탄소및수소원자를포함하는모노시클릭또는폴리시클릭환을의미한다. 헤테로사이클환구조는모노-, 바이-, 및트리-사이클릭화합물을포함하지만이들로한정되지않는다. 구체적인헤테로사이클은모노시클릭또는바이시클릭이다. 대표적인헤테로사이클은사이클릭우레아, 모르폴리닐, 피롤리디노닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 히단토이닐, 발레로락타밀, 옥시라닐, 옥세타닐, 테트라하이드로푸라닐, 테트라하이드로피라닐, 테트라하이드로피리디닐, 테트라하이드로피리미디닐, 테트라하이드로티오페닐, 테트라하이드로티오피라닐, 테트라졸릴, 및우라졸릴을포함한다. 헤테로사이클릭환은비치환또는치환일수있다. 바람직한헤테로사이클은 5원및 6원헤테로사이클, 특히히단토이닐및우라졸릴이다. 용어 " 헤테로사이클로알킬 " 이란환중탄소원자중의적어도하나가헤테로원자 ( 예를들어, O, S 또는 N) 에의해대체되는사이클로알킬기를의미한다. 용어 " 헤테로사이클로알킬알킬 " 이란알킬기가부착된헤테로사이클로알킬기를의미한다. 용어 " 치환된 " 이란선행기술에공통적인하나이상의치환을특히구상하고참작한다. 그러나, 당업자는, 치환기는화합물의유용한특성에부정적영향을미치지않거나기능을부정적으로방해하지않도록선택되어야한다는것을일반적으로이해한다. 적합한치환기는예를들어하기를포함할수있다 : 할로기, 퍼플루오로알킬기, 퍼플루오로알콕시기, 알킬기, 알케닐기, 알키닐기, 하이드록시기, 옥소기, 머캅토기, 알킬티오기, 알콕시기, 아릴또는헤테로아릴기, 아릴옥시또는헤테로아릴옥시기, 아르알킬또는헤테로아르알킬기, 아르알콕시또는헤테로아르알콕시기, 아미노기, 알킬- 및디알킬아미노기, 카르바모일기, 알킬카보닐기, 카르복실기, 알콕시카보닐기, 알킬아미노카보닐기, 디알킬아미노카보닐기, 아릴카보닐기, 아릴옥시카보닐기, 알킬설포닐기, 아릴설포닐기, 사이클로알킬기, 시아노기, C 1 -C 6 알킬티오기, 아릴티오기, 니트로기, 케토기, 아실기, 보로네이트또는보로닐기, 포스페이트또는포스포닐기, 설파밀기, 설포닐기, 설피닐기, 및이의조합. 치환된조합, 예컨대 " 치환된아릴알킬 " 의경우에, 아릴또는알킬기, 또는아릴및알킬기모두가하나이상의치환기로치환될수있다. 추가로, 어떤경우에, 적합한치환기는당업자에공지된하나이상의환을형성하기위해조합할수있다. [0328] 본명세서에기재된화합물은하나이상의이중결합을함유하고, 따라서, 다른형태이성체뿐만아니라시스 / 트 랜스이성체를생기게할수있다. 본발명은모드그와같은가능한이성체, 및그와같은이성체의혼합물을

64 포함한다. [0329] [0330] [0331] [0332] [0333] [0334] [0335] 본명세서에기재된화합물, 특히상기에기재된치환기는하나이상의비대칭중심을함유할수있고, 따라서부분입체이성체및광학이성체를생기게할수있다. 본발명은모두그와같은가능한부분입체이성체, 및이의라세미혼합물, 실질적으로순수한분할거울상이성체, 모든가능한기하이성체, 및이의허용되는염을포함한다. 또한, 분리된특정입체이성체뿐만아니라입체이성체의혼합물이또한포함된다. 그와같은화합물을제조하기위한합성절차의과정동안에, 또는당업자에게공지된라세미화또는에피머화과정의사용시에, 그와같은절차의생성물은입체이성체의혼합물일수있다. 본명세서에사용된바와같이, 용어 " 염 " 및 " 약제학적으로허용되는염 " 이란개시된화합물의유도체를의미하고, 여기서, 모화합물은이의산또는염기염을만들기위해변성된다. 약제학적으로허용되는염의예는아민과같은염기성기의무기산또는유기산염 ; 및카르복실산과같은산성기의알칼리또는유기염을포함하지만, 이들로한정되는것은아니다. 약제학적으로허용되는염은예를들어, 비독성무기또는유기산으로부터형성된모화합물의종래의 4차암모늄염또는종래의비독성염을포함한다. 예를들어, 그와같은종래의비독성염은하기를포함한다 : 염산, 브롬화수소산, 황산, 설파민산, 인산, 및질산과같은무기산으로부터유래된것 ; 및아세트산, 프로피온산, 숙신산, 글리콜산, 스테아르산, 락트산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르브산, 파모산, 말레산, 하이드록시말레산, 페닐아세트산, 글루탐산, 벤조산, 살리실산, 설프아닐산, 2- 아세트옥시벤조산, 푸마르산, 톨루엔설폰산, 메탄설폰산, 에탄디설폰산, 옥살산, 및이세티온산등과같은유기산으로부터유래된염. 본발명의약제학적으로허용되는염은종래의화학방법에의해염기또는산부분을함유하는모화합물로부터합성될수있다. 일반적으로, 그와같은염은이들화합물의유리산또는유리염기형태를물또는유기용매, 또는이들의혼합물중적합한염기또는산의화학양론적양과반응시킴으로써제조될수있고 ; 일반적으로, 에테르, 에틸아세테이트, 에탄올, 이소프로판올, 또는아세토니트릴과같은비수성매질이바람직하다. 적합한염의목록은 Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p 에기재되어있고, 이의내용은참고로본명세서에통합되어있다. 용어 " 용매화물 " 이란비공유분자간력에의해결합된용매의화학양론적또는비화학양론적양을포함하는화합물또는이의염을의미한다. 용매가물인경우, 용매화물은수화물이다. 용어 " 프로드러그 (prodrug)" 란활성화합물, 특히본발명의화합물을제공하기위해생물학적조건 ( 시험관내또는생체내 ) 하에서가수분해, 산화또는반응할수있는화합물의유도체를의미한다. 프로드러그의예는생가수분해성아미드, 생가수분해성에스테르, 생가수분해성카바메이트, 생가수분해성카보네이트, 생가수분해성우레이드, 및생가수분해성포스페이트유사체와같은생가수분해성부분을포함하는본발명의화합물의유도체및대사산물을포함하지만, 이들로한정되는것은아니다. 카르복실관능기를갖는화합물의특정프로드러그는카르복실산의저급알킬에스테르이다. 카르복실레이트에스테르는분자상에존재하는어떤카르복실산부분을에스테르화하여편리하게형성된다. 프로드러그는공지된방법, 하기에기재된것을사용하여전형적으로제조될수있다 : Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery 6th ed. (Donald J. Abraham ed., 2001, Wiley) and Design and Application of Prodrugs (H. Bundgaard ed., 1985, Harwood Academic Publishers Gmfh). 본명세서에사용된바와같이, 그리고달리지적되지않으면, 용어 " 생가수분해성아미드," " 생가수분해성에스테르," " 생가수분해성카바메이트," " 생가수분해성카보네이트," " 생가수분해성우레이도," " 생가수분해성포스페이트 " 란하기인화합물각각의아미드, 에스테르, 카바메이트, 카보네이트, 우레이도, 또는포스페이트를의미한다 : 1) 화합물의생물학적활성을방해하지않지만그화합물에작용의활용, 기간또는시작과같은생체내유익한특성을제공할수있거나 ; 2) 생물학적으로비활성이지만생물학적활성화합물로생체내에서전환된다. 생가수분해성에스테르의예는하기를포함하지만, 이들로한정되지않는다 : 저급알킬에스테르, 알콕시아실옥시에스테르, 알킬아실아미노알킬에스테르, 및콜린에스테르. 생가수분해성아미드의예는하기를포함하지만, 이들로한정되지않는다 : 저급알킬아미드, 알파-아미노산아미드, 알콕시아실아미드, 및알킬아미노알킬카보닐아미드. 생가수분해성카바메이트의예는하기를포함하지만이들로한정되지않는다 : 저급알킬아민, 치환된에틸렌디아민, 아미노산, 하이드록시알킬아민, 헤테로사이클릭및헤테로방향족아민, 및폴리에테르아민. 본명세서에사용된바와같이, 본명세서에개시된화합물의맥락에서의용어 " 이의유사체 " 는화합물의부분입체이성체, 수화물, 용매화물, 염, 프로드러그, 및 N-옥사이드를포함한다

65 [0336] [0337] [0338] [0339] [0340] [0341] [0342] 본명세서에기재된 " 전좌 (translocation) 영역 " " 리간드결합부위 ", 및키메라수용체조성물은예시적인서열에대체로상응하는구조및활성을 " 유사체 " 또는 " 보존적변이체 " 및 " 모방체 " (" 펩타이도모방체 ") 이다. 따라서, 용어 " 보존적변이체 " 또는 " 유사체 " 또는 " 모방체 " 란변형아미노산서열을갖는폴리펩타이드를의미하고, 이에따라변화 ( 들 ) 은본명세서에서정의된바와같은폴리펩타이드 ( 보존적변이체 ) 구조및 / 또는활성을실질적으로바꾸지않는다. 이들은아미노산선열의보존적으로변형된변화, 즉, 단백질활성에필요하지않은잔기의아미노산치환, 부가또는삭제, 또는유사한특성 ( 예를들어, 산성, 염기성, 양성또는네가티브충전, 또는극성또는비극성등 ) 을갖는잔기에의한이미노산의치환을포함하고, 이에따라훨씬필요한아미노산의치환은구조및 / 또는활성을실질적으로바꾸지않는다. 더욱특히, " 보존적으로변형된변이체 " 은아미노산및핵산서열모두에적용된다. 특정핵산서열에대해, 보존적으로변형된변이체는동일한또는본질적으로동일한아미노산서열을암호화하거나핵산이아미노산서열을본질적동일한서열로암호화하지않는핵산을의미한다. 유전암호의축퇴때문에, 수많은기능적으로동일한핵산은어떤소정의단백질을암호화한다. 예를들어, 코돈 GCA, GCC, GCG 및 GCU 모두는아미노산알라닌을암호화한다. 따라서, 알라닌이코돈에의해지정된모든위치에서, 코돈은암호화된폴리펩타이드를바꾸지않고기재된어떤상응하는코돈으로바꿀수있다. 그와같은핵산변화는보존적으로변형된변화의한종류인 " 잠재성변화 " 이다. 폴리펩타이드를암호화하는모든핵산서열은핵산의모든가능한잠재성변화를기재하고있다. 당업자는, 핵산중의각코돈 ( 대개메티노닌에대한유일한코돈인 AUG, 및대개트립토판에대한유일한코돈인 TGG 제외 ) 이기능적으로동일한분자를산출하기위해변형될수있다는것을인식할것이다. 따라서, 폴리펩타이드를암호화하는핵산의각잠재성변화는기재된각서열에포함된다. 기능적으로유사한아미노산을제공하는보존적치환표는선행기술에공지되어있다. 예를들어, 보존적치환을선택하기위한하나의예시적인지침은하기를포함한다 ( 최초잔여물, 그다음, 예시적인치환 ): ala/gly 또는 ser; arg/lys; asn/gln 또는 his; asp/glu; cys/ser; gin/asn; gly/asp; gly/ala 또는 pro; his/asn 또는 gln; ile/leu 또는 val; leu/ile 또는 val; lys/arg 또는 gln 또는 glu; met/leu 또는 tyr 또는 ile; phe/met 또는 leu 또는 tyr; ser/thr; thr/ser; trp/tyr; tyr/trp 또는 phe; val/ile 또는 leu. 대안적인예시적인지침은하기의 6개의군을포함하고, 각각은서로에대해보존적치환인아미노산을함유한다 : 1) 알라닌 (A), 세린 (S), 트레오닌 (T); 2) 아스파르트산 (D), 글루탐산 (E); 3) 아스파라긴 (N), 글루타민 (Q); 4) 아르기닌 (R), 리신 (I); 5) 이소류신 (I), 류신 (L), 메티오닌 (M), 발린 (V); 및 6) 페닐알라닌 (F), 티로신 (Y), 트립토판 (W); ( 참조, 예를들어, Creighton, Proteins, W. H. Freeman and Company (1984); Schultz and Schimer, Principles of Protein Structure, Springer-Verlag (1979)). 당업자는, 상기의치환이유일한가능한보존적치환은아니라는것을인식할것이다. 예를들어, 어떤목적을위해, 당업자는, 모든충전된아미노산을, 양성또는네가티브인지를서로에대해보존적치환으로서간주할것이다. 또한, 암호화된서열중소량의아미노산또는단일아미노산을변경, 부가또는삭제하는개별치환, 삭제또는부가는 " 보존적으로변형된변화 " 로서고려될수있다. 용어 " 모방체 " 및 " 펩타이도모방체 " 란폴리펩타이드의동일한구조적및 / 또는기능적특성, 예를들어, 본발명의전좌영역, 리간드결합부위, 또는키메라수용체를상당히갖는합성화합물을의미한다. 모방체는전적으로아미노산의합성의비천연유사체로구성될수있거나, 부분적으로천연인펩타이드아미노산및아미노산의부분적으로비천연인유사체의키메라분자일수있다. 모방체는또한어떤양의천연아미노산보존적치환을포함할수있는데, 단, 그와같은치환이모방체의구조및 / 또는활성을실질적으로변경하지않아야한다. 보존적변이체인본발명의폴리펩타이드와마찬가지로, 일상적인실험은모방체가본발명의범위내인지, 즉, 이의구조및 / 또는기능이실질적으로변경되지않는지를결정할것이다. 폴리펩타이드모방체조성물은전형적인 3개의구조군으로부터의비천연구조성분의어떤조합을함유할수있다 : a) 천연아미드결합 (" 펩타이드결합 ") 연결이외의잔기연결기 ; b) 자연발생아미노산잔기대신의비천연잔기 ; 또는 c) 2차구조모방을유도하는, 즉 2차구조, 예를들어, 베타턴 (beta turn), 감마턴 (gamma turn), 베타시트 (beta sheet), 알파나선형태등을유도하거나안정화시키기위한잔기. 폴리펩타이드는, 잔기의모두또는일부가천연펩타이드결합이외의화학수단에의해결합될때모방체를특징으로할수있다. 개별펩타이도모방체잔기는펩타이드결합, 다른화학결합또는커플링수단, 예컨대, 예를들어, 글루타르알데히드, N-하이드록시숙신이미드

66 에스테르, 2관능성말레이미드, N,N'-디사이클로헥실카보디이미드 (DCC) 또는 N,N'-디이소프로필카보디이미드 (DIC) 에의해연결될수있다. 종래의아미드결합 (" 펩타이드결합 ") 연결에대해대안적일수있는연결기는예를들어, 케토메틸렌 ( 예를들어, --C(.=O)--NH--) 에대해 --C(.=O)--CH 2, 아미노메틸렌 (CH 2 NH), 에틸렌, 올레핀 (CH.dbd.CH), 에테르 (CH 2 O), 티오에테르 (CH 2 --S), 테트라졸 (CN 4 ), 티아졸, 레트로아미드, 티오아미드, 또는에스테르를포함한다 ( 참조, 예를들어, Spatola, Chemistry and Biochemistry of Amino Acids, Peptides and Proteins, Vol. 7, , Marcell Dekker, Peptide Backbone Modifications, NY (1983)). 폴리펩타이드는또한자연발생아미노산잔기대신에모든또는일부비천연잔기를함유함으로써모방체를특징으로할수있고 ; 비천연잔기는과학및특허문헌에잘기재되어있다. [0343] " 표지 (label)" 또는 " 검출가능부분 " 은분광, 광화학, 생화학, 면역화학, 또는화학수단에의해검출가능한조 성물이다. 예를들어, 유용한표지는 32 P, 형광염료, 전자치밀시약, 효소 ( 예를들어, ELISA에서통상사용됨 ), 바이오틴, 디곡시게닌, 또는합텐 (hapten) 및단백질을포함하고, 이는방사성표지 (radiolabel) 를펩타이드에혼입하여만들어질수있거나펩타이드와특이적반응성이있는항체를검출하기위해사용될수있다. [0344] [0345] [0346] [0347] [0348] [0349] " 표지된핵산프로브 (probe) 또는올리고뉴클레오타이드 " 는링커또는화학결합을통해공유적으로또는이온, 반데르발스, 정전또는수소결합을통해비공유적으로표지에결합된것이고, 이에따라프로브의존재는프로브에결합된표지의존재를검출함으로써검출될수있다. 본명세서에사용된바와같이, " 핵산프로브또는올리고뉴클레오타이드 " 는화학결합의하나이상의유형, 통상상보적염기페어링 (pairing), 통상수소결합형성을통해상보적서열의표적핵산에결합할수있는핵산으로서정의된다. 본명세서에사용된바와같이, 프로브는천연 ( 즉, A, G, C, 또는 T) 또는변형염기 (7-데아자구나노신, 이노신등 ) 를포함할수있다. 또한, 프로브중염기는포스포 ( 포스포 ) 디에스테르결합이외의연결에의해연결될수있고, 단, 하이브리드화를방해하지않아야한다. 따라서, 예를들어, 프로브는, 구성염기가포스포디에스테르연결보다는펩타이드결합에의해연결된펩타이드핵산일수있다. 당업자는, 프로브가하이브리드화조건의엄격함에따라프로브서열과의완전한상보성이부족한표적서열을결합할수있다. 프로브는스트렙타비딘복합체가나중에결합할수있는바이오틴으로간접적으로표지되거나동위원소, 발색단, 루미포어 (lumiphore), 색원체로임의로직접표지된다. 프로브의존재또는부재에대하여분석함으로써, 선택된서열또는서브 (sub) 서열의존재또는부재를검출할수있다. 핵산의부분을참조로사용될때의용어 " 이종 " 이란, 핵산이사실상서로동일한관계에서발견되지않는둘이상의서브서열을포함한다는것을나타낸다. 예를들어, 핵산은통상재조합적으로생산되고, 새로운기능적핵산, 예를들어하나의공급원으로부터의프로모터및다른공급원으로부터의암호화부위를만들기위해배열된무관련유전자로부터 2이상의서열을갖는다. 마찬가지로, 이종단백질이란, 단백질이사실상서로동일한관계에서발견되지않는둘이상의서브서열을포함한다 ( 예를들어, 융합단백질 ) 는것을나타낸다. " 프로모터 " 란핵산의전사를겨냥하는핵산서열의어레이 (array) 로서정의된다. 본명세서에사용된바와같이, 프로모터는폴리머라제 II 타입프로모터의경우에 TATA 요소와같은전사의개시부위에인접한필요한핵산서열을포함한다. 프로모터는또한임의로디스털인핸서 (distal enhancer) 또는억제인자요소를포함하고, 이는전사의개시부위로부터수천쌍의염기만큼위치할수있다. " 지속적 " 프로모터는대부분의환경적및발달적조건하에서활성인프로모터이다. " 유도가능 " 프로모터는환경적및발달적조절하에서활성인프로모터이다. 용어 " 작동가능하게연결된 " 이란핵산발현조절서열 ( 예컨대, 전사인자결합부위의어레이또는프로모터 ) 과제2 핵산서열사이의기능적연결을의미하고, 여기서, 발현조절서열은제2 서열에상응하는핵산의전사를겨냥한다. 본명세서에사용된바와같이, " 재조합 " 이란세포또는다른생물계에서유전자산물을생산하기위해재조합폴리뉴클레오타이드를사용하는방법에대하여시험관내에서합성또는조작된폴리뉴클레오타이드 ( 예를들어, " 재조합폴리뉴클레오타이드 "), 또는재조합폴리뉴클레오타이드에의해암호화된폴리펩타이드 (" 재조합단백질 ") 을의미한다. " 재조합수단 " 은또한다양한암호화부위또는영역을갖는핵산또는상이한공급원으로부터의프로모터서열의, 발현카세트 (cassette) 또는발현, 예를들어본발명의전좌영역을포함하는융합단백질및본발명의프라이머를사용하여증폭된핵산서열의유도가능또는지속적발현을위한벡터로의결찰을포함한다. 구절 "~ 로선택적으로 ( 또는특이적으로 ) 하이브리드화하다 " 란, 복합혼합물 ( 예를들어, 총세포또는라이브

67 러리 DNA 또는 RNA) 에존재할때엄격한하이브리드화조건하에서분자의특정뉴클레오타이드서열에만결합, 듀플렉싱 (duplexing) 또는하이브리드화하는것을의미한다. [0350] [0351] [0352] [0353] [0354] [0355] [0356] [0357] 구절 " 엄격한하이브리드화조건 " 이란, 프로브가통상핵산의복합혼합물에서다른서열은아닌표적서브서열로하이브리드화하는조건을의미한다. 엄격한조건은서열의존성이고, 상이한환경에서는상이할것이다. 긴서열은고온에서특이적으로하이브리드화한다. 핵산의하이브리드화에대한광범위한안내는하기에서발견된다 : Tijssen, Techniques in Biochemistry and Molecular Biology--Hybridization with Nucleic Probes, "Overview of principles of hybridization and the strategy of nucleic acid assays" (1993). 일반적으로, 엄격한조건은정의된이온세기, ph 에서특정서열에대한열융점 (Tm) 보다약 5 내지 10 낮게선택된다. Tm 은, 표적에대해상보적인프로브의 50% 가평형상태 ( 표적서열은 Tm 에서과잉으로존재하기때문에, 프로브의 50% 는평형상태에있다 ) 에서표적서열로하이브리드화하는 ( 정의된이온세기, ph, 및핵산농도하에서의 ) 온도이다. 엄격한조건은, 염농도가 7.0 내지 8.3 의 ph 에서약 1.0 M 미만, 전형적으로약 0.01 내지 1.0 M 나트륨이온농도 ( 또는다른염 ) 이고, 온도는짧은프로브 ( 예를들어, 10 내지 50개의뉴클레오타이드 ) 에대해서적어도 30 및긴프로브 (50개초과의뉴클레오타이드 ) 에대해서적어도약 60 인것이다. 엄격한조건은또한포름아미드와같은탈안정화제의첨가로달성될수있다. 선택적또는특이적하이브리드화에대해서, 양성 (positive) 신호는적어도 2배, 임의로 10개의백그라운드 (background) 하이브리드화이다. 예시적인엄격한하이브리드화조건은하기와같을수있다 : 50% 포름아미드, 5xSSC, 및 1% SDS, 42 에서배양, 또는, 5xSSC, 1% SDS, 65 에서배양, 및 65 에서 0.2xSSC, 및 0.1% SDS 에서세정. 그와같은하이브리드화및세정단계는예를들어, 1, 2, 5, 10, 15, 30, 60분 ; 또는그이상동안수행될수있다. 엄격한조건하에서서로하이브리드화하지않는핵산은, 암호화하는폴리펩타이드가실질적으로관련되어있다면여전히실질적으로관련되어있다. 이는, 예를들어핵산의복사물이유전부호에의해허용되는최대코돈축퇴를사용하여만들어질때일어난다. 그와같은경우에, 핵산은전형적으로중간정도로엄격한조건하에서하이브리드화한다. 예시적인 " 중간정도로엄격한하이브리드화조건 " 은 37 에서 40% 포름아미드의버퍼, 1 M NaCl, 1% SDS 에서하이브리드화및및 45 에서 1xSSC 에서세정을포함한다. 그와같은하이브리드화및세정단계는예를들어, 1, 2, 5, 10, 15, 30, 60분 ; 또는그이상동안수행될수있다. 양성 (positive) 하이브리드화는적어도 2회의백그라운드 (background) 이다. 당업자는, 대안적인하이브리드화및세정조건이유사한엄격한조건을제공하기위해이용될수있다는것을쉽게인식할것이다. " 항체 " 란항원을특이적으로결합하고인식하는면역글로불린유전자또는이의절편으로부터골격부위를포함하는폴리펩타이드를의미한다. 인식된면역글로불린유전자는카파, 람다, 알파, 감마, 델타, 엡실론및뮤불변부위유전자및미리어드 (myriad) 면역글로불린가변부위유전자를포함한다. 경쇄는카파또는람다로서분류된다. 중쇄는감마, 뮤, 알파, 델타또는엡실론으로분류되는데, 이는차례차례면역글로불린부류, IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE 을각각정의한다. 예시적인면역글로불린 ( 항체 ) 구조단위는테트라머를포함한다. 각테트라머는 2개의동일한쌍의폴리펩타이드사슬로구성되고, 각쌍은하나의 " 경쇄 "( 약 25 kda) 및하나의 " 중쇄 " ( 약 kda) 를갖는다. 각사슬의 N-말단은항원인식에우선책임있는약 100 내지 110개이상의아미노산의가변부위를한정한다. 용어가변경쇄 (V L ) 및가변중쇄 (V H ) 는각각이들경쇄및중쇄를의미한다. " 키메라항체 " 란하기인항체분자이다 : (a) 불변부위, 또는이의부분은변경, 대체또는교환되고, 이에따라항원결합부위 ( 가변부위 ) 가상이하거나변경된부류, 작동체기능및 / 또는종류의불변부위, 또는새로운특성을키메라항체, 예를들어, 효소, 독소, 호르몬, 성장인자, 약물등에수여하는전적으로상이한분자에연결되거나 ; 또는 (b) 가변부위, 또는이의부분은상이하거나변경된항원특이성을갖는가변부위로변경, 대체또는교환된다. " 항-T2R" 항체는 T2R 유전자, cdna, 또는이의서브서열에의해암호화된폴리펩타이드를특이적으로결합하는항체또는항체절편이다. 용어 " 면역분석 " 은항원을특이적으로결합하기위해항체를사용하는분석이다. 면역분석은항원을분리, 표적으로삼고 / 삼거나정량하기위해특정항체의특이적결합특성을사용을특징으로한다. 단백질또는펩타이드를언급할때, 구절 "~ 와특이적으로 ( 또는선택적으로 ) 면역반응하는 " 또는 " 항체에특이적으로 ( 또는선택적으로 ) 결합하는 " 이란단백질및다른생물의약품의이종집단에서단백질의존재를확정하는결합반응을의미한다. 따라서, 지정된면역분석조건하에서, 명기된항체는적어도 2회의백그라운드

68 (background) 로특정단백질에결합하고, 샘플에존재하는다른단백질에상당한양으로실질적으로결합한다. 그와같은조건하에서항체에대한특이적결합은특정단백질에대한특이성을위해선택된항체를필요로할 수있다. [0358] [0359] [0360] [0361] [0362] [0363] [0364] 예를들어, 래트, 마우스또는인간과같은특정종으로부터 T2R 패밀리구성원로향상된다클론성항체는 T2R 폴리펩타이드또는이의면역부분과특이적으로면역반응하고 T2R 폴리펩타이드의상동체또는다형적변이체및대립유전자를제외하고다른단백질과는반응하지않는다클론성항체만을얻기위해선택될수있다. 이러한선택은다른종또는다른 T2R 분자로부터 T2R 분자와교차반응하는항체를공제함으로써달성될수있다. 다른패밀리로부터 GPCR 은아닌 T2R GPCR 패밀리구성원만을인식하는항체가또한선택될수있다. 다양한면역분석형식은특정단백질과특이적으로면역반응하는항체를선택하기위해사용될수있다. 예를들어, 고상 ELISA 면역분석은단백질과특이적으로면역반응하는항체를선택하기위해일상적으로사용된다. ( 참조, 예를들어, Harlow & Lane, Antibodies, A Laboratory Manual, (1988), 특이적면역활성을측정하기위해사용될수있는면역분석형싱및조건의기재 ). 전형적으로, 특이적또는선택적반응은적어도 2회, 더욱전형적으로 10 내지 100회의백그라운드신호또는노이즈일것이다. 구절 "~ 와선택적으로관련된다 " 란상기에기재된다른것과 " 선택적으로하이브리드화하는 " 핵산의능력, 또는상기에기재된 " 단백질과선택적으로 ( 또는특이적으로결합하는 ) 항체의능력을의미한다. 용어 " 발현벡터 " 란원핵생물, 효모, 진균, 식물, 곤충또는포유동물세포를포함하는어떤세포에서시험관내또는생체내, 지속적으로또는유도성으로본발명의핵산서열을발현시키기위해어떤재조합발현시스템을의미한다. 상기용어는선형또는환형발현시스템을포함한다. 상기용어는에피좀으로남아있거나숙주세포게놈으로통합된발현시스템을포함한다. 발현시스템은자기복제하거나그렇지않을능력을가질수있고, 즉세포내에서일시적인발현만을추진할수있다. 상기용어는재조합핵산의전사에필요한최소요소만을함유하는재조합발현 " 카세트 " 를포함한다. " 숙주세포 " 란발현벡터를함유하고발현벡터의복제또는발현을지지하는세포를의미한다. 숙주세포는원핵생물세포, 예컨대대장균, 또는진핵세포, 예컨대효모, 곤충, 양서류, 또는포유동물세포, 예컨대 CHO, HeLa, HEK-293 등, 예를들어, 생체내배양세포, 외식편, 및세포일수있다. 상기를근거로하여, 본발명은쓴맛화합물, 예를들어커피및이로부터유도되고구조적으로관련된추출물에존재하는쓴맛화합물및다른쓴맛화합물에의한, 미리확인된인간쓴맛수용체의특이적활성을조절하고, 바람직하게는차단하는화합물을확인하는분석방법을제공한다. 특히, 본발명은 ht2r8 및 ht2r14 의활성을조절하는 ( 예를들어, 차단하는 ) 화합물을분석하기위한세포기반분석방법을제공한다. 이들화합물은인간대상체에서이들미각수용체와관련된쓴맛을조절할것이다. 이는미각테스트에서확인될것이다. 또한, 본발명은공지및미공지쓴맛화합물을함유하는, 인간또는동물이섭취하는식품, 음료, 의약및다른물질에사용될수있는넓은범위의길항물질특성을갖는길항물질을확인하고제공하는데, 여기서, 쓴맛은바람직하게는최소화되거나제거된다. 상기미각수용체가커피에존재하는쓴맛화합물 ( 들 ) 및하나, 다수의또는미공지쓴수용체와상호작용하는특정쓴맛화합물에반응하는것은, 현양수인에의해출원된특허출원, 예를들어, U.S. 시리즈 No. 10/191,058 및 09/825,882뿐만아니라다른공보에보고된칼슘이미징법및 HEK293 발현시스템을사용하여본질적으로결정되었고, 상기문헌모두는이의전체가참고로본명세서에통합되어있다. 더욱특히, 본발명자들은구스트듀신의잔기에의한카르복시-44 아미노산잔기의대체에의해변형된 G α16 G 단백질서열을포함 하는키메라 G 단백질 (G16gust44) 와함께로돕신 35 아미노산태그 ( 서열번호 1) 로태그된 (tagged) 특정 ht2r 로 HEK293 세포를형질감염 (transfection) 했고, 칼슘이미징법을사용하여특정쓴맛리간드에대한세포의반 응을기록했다. [0365] 구체적으로, 본발명자들은 ht2r 활성을모니터하기위해포유동물세포기반분석을사용했다. 칼슘이미징분석에대해, 세포를 48-웰조직배양플레이트에시딩 (seeding) 했다. 24시간후, 세포를, ht2r 핵산서열을함유하는발현플라스미드 (peak10), 및키메라 G 단백질 (G16gust44) 을함유하는플라스미드 (peak10) 로일시적으로형질감염했다. 추가 24시간후, 세포를, 칼슘 (Fluo-4; Molecular Probes) 에대해특이적인형광염료와함께배양했다. 로딩 (loading) 된세포는상이한쓴맛분자에노출되고, ht2r 의활성은 G16gust44 의활성으로이르게하고, 이는세포내로칼슘이동으로이르게된다. 칼슘농도에서의이러한증가는세포내의칼슘염료의형광특성을변화시킨다. 이런변화는형광현미경관찰을이용하여모니터한다

69 [0366] [0367] [0368] [0369] [0370] 본발명자들은또한약간상이한프로토콜을사용하는자동형광표적시스템 (automated fluorimetric aiming system) FLIPR 을사용했다. G16gust44 를안정하게발현시키는 HEK293 세포주를 24시간후 ht2r 발현플라스미드로형질감염했고, 세포를로딩하고, FLIPR 상에서분석했다. 리간드가특정 ht2r 에대해확인된후, ht2r 및 G16gust44 모두를안정하게발현시키는 HEK293 세포주를산출하는데, 이는특정 ht2r 를활성화시키거나다른쓴맛리간드, 예컨대커피내에함유된쓴맛화합물에의해 ht2r 의활성을조절 ( 차단또는향상 ) 하는다른리간드를확인하기위해미래스크리닝분석을촉진한다. 도면들에보여진바와같이, 그와같은실험은, ht2r8 및 ht2r14 가커피내에존재하는쓴맛화합물에반응한다는것을보여주었고커피의쓴맛을억제또는차단하는화합물을확인했다. 또한, 하기의도 5 및실시예 3 에서의실험은특히화합물 C 의넓은길항물질특성을보여주었다. 이들결과는, ht2r 미각수용체를확인한세포가상기의특정 ht2r 중의적어도하나와관련된쓴맛을조절하는리간드를확인하기위해분석, 및쓴맛에대해책임있는화합물을검출하기위한분석에사용될수있다는것을나타낸다. 바람직하게는, 이들분석은아래에서확인된아미노산서열들중의하나를갖는 ht2r 을암호화하는 DNA 를발현시키는테스트세포를이용할것이다. 그러나, 이들쓴맛수용체의기능적특성을보유하는, 즉어떤쓴맛화합물에반응하는이들수용체폴리펩타이드의절편, 상동체, 변이체또는키메라가이들분석에서유용할것이라는것이예상된다. 그와같은변이체의예는접합 (splice) 변이체, 단일뉴클레오타이드다형성, 대립유전자변이체, 및재조합또는화학수단에의해생산되거나자연발생돌연변이를포함한다. 본발명의분석, 및수용체의활성을억제하는화합물을확인하기위해본발명에사용하기위해고려된분석에사용된 T2R 의분리및발현수단은하기에기재되어있다. [0371] [0372] [0373] [0374] [0375] [0376] T2R의분리및발현본발명의 T2R, 또는이의절편또는변이체의분리및발현은출원에개시된 T2R 핵산서열을근거로한구성된프로브또는프라이머를사용하여잘확립된클로닝절차에의해달성될수있다. 관련 T2R 서열은또한본명세서에개시된서열및및공지된컴퓨터기반탐색기술, 예를들어, BLAST 서열탐색을사용하여인간또는다른종게놈데이타베이스로부터확인될수있다. 특정구현예에서, 본명세서에개시된유사유전자는기능적대립유전자또는관련유전자를확인하기위해사용될수있다. 그다음, 발현벡터는이들서열의기능적발현을위해숙주세포를감염시키거나형질감염하기위해사용될수있다. 이들유전자및벡터는시험관내또는생체내에서만들어지고발현될수있다. 당업자는, 핵산발현을변경및조절하기위한목적표현형이본발명의벡터내에서유전자및핵산 ( 예를들어, 프로모터, 인핸서등 ) 의발현또는활성을조절함으로써얻을수있다는것을인식할것이다. 발현또는활성을증가또는감소시키기위해기재된어떤공지된방법을사용할수있다. 본발명은과학및특허문헌에잘기재되어있는, 선행기술에공지된어떤방법또는프로토콜과함께실시될수있다. 대안적으로, 이들핵산은예를들어하기에기재된바와같이공지된화학합성기술에의해시험관내에서합성될수있다 : Carruthers, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 47: (1982); Adams, Am. Chem. Soc., 105:661 (1983); Belousov, Nucleic Acids Res. 25: (1997) Frenkel, Free Radic. Biol. Med. 19: (1995); Blommers, Biochemistry 33: (1994); Narang, Meth. Enzymol. 68:90 (1979); Brown, Meth. Enzymol. 68:109 (1979); Beaucage, Tetra. Lett. 22:1859 (1981); U.S. 특허 No. 4,458,066. 그다음, 이본쇄 DNA 절편은상보적가닥을합성하고적합한조건하에서가닥을어닐링 (annealing) 하거나, 적합한프라이머서열을갖는 DNA 폴리머라제를사용하여상보적가닥을첨가하여얻을수있다. 핵산의처리, 예를들어서열에서돌연변이를산출하고, 서브클로닝 (subcloning), 프로브표지화 (labeling), 시퀀싱 (sequencing), 하이브리드화등의기술은과학및특허문헌에기재되어있다. 참조, 예를들어, Sambrook, ed., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd ed.), Vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory (1989); Ausubel, ed., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., New York (1997); Tijssen, ed., Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology: Hybridization With Nucleic Acid Probes, Part I, Theory and Nucleic Acid Preparation, Elsevier, N.Y. (1993). 핵산, 벡터, 캡시드 (capsid), 폴리펩타이드등은당업자에게공지된수많은일반적인기술중어떤것에의해

70 분석및정량화될수있다. 이들은예를들어하기를포함한다 : 분석생화학방법, 예컨대 NMR, 분광광도법, 방사선촬영, 전기영동, 모세관전기영동, 고속액체크로마토그래피 (HPLC), 박층크로마토그래피 (TLC), 및초고확산크로마토그래피, 다양한면역방법, 예를들어, 유체또는겔침강소반응, 면역확산, 면역전기영동, 방사선면역분석 (RIA), 효소결합면역흡착분석 (ELISA), 면역형광분석, 써던 (Southern) 분석, 노던 (Northern) 분석, 닷블롯 (dot-blot) 분석, 겔전기영동 ( 예를들어, SDS-PAGE), RT-PCR, 정량 PCR, 다른핵산또는표적또는신호증폭법, 방사성표지화 (radiolabeling), 섬광계수기, 및친화성크로마토그래피. [0377] [0378] [0379] [0380] [0381] 올리고뉴클레오타이드프라이머는 T2R 리간드결합부위를암호화하는핵산을증폭하기위해사용될수있다. 본명세서에기재된핵산은또한증폭기술을사용하여정량적으로클로닝 (cloning) 또는측정될수있다. 증폭방법은또한선행기술에공지되어있고예를들어하기를포함한다 : 폴리머라제사슬반응 (PCR) (Innis ed., PCR Protocols, a Guide to Methods and Applications, Academic Press, N.Y. (1990); Innis ed., PCR Strategies, Academic Press, Inc., N.Y. (1995)); 리가제사슬반응 (LCR) (Wu, Genomics, 4:560 (1989); Landegren, Science, 241:1077 (1988); Barringer, Gene, 89:117 (1990)); 전사증폭 (Kwoh, PNAS, 86:1173 (1989)); 자기지속서열복제 (Guatelli, PNAS, 87:1874 (1990)); Q 베타레플리카제증폭 (Smith, J. Clin. Microbiol., 35: (1997)); 자동 Q-베타레플리카제증폭분석 (Burg, Mol. Cell. Probes, 10: (1996)); 및다른 RNA 폴리머라제매개기술 ( 예를들어, NASBA, Cangene, Mississauga, Ontario). 참조, 또한, Berger, Methods Enzymol., 152: (1987); Sambrook; Ausubel; U.S. 특허 Nos. 4,683,195 and 4,683,202; Sooknanan, Biotechnology, 13: (1995). 일단증폭되면, 핵산은, 필요에따라, 개별적으로또는라이브러리로서, 선행기술에공지된방법에따라일상적인분자생물학적방법을사용하여어떤다양한벡터로클로닝될수있고 ; 시험관내증폭된핵산을클로닝하는방법은예를들어, U.S. 특허 No. 5,426,039 에기재되어있다. 증폭된서열의클로닝을촉진하기위해서, 제한효소부위는 PCR 프라이머쌍 " 에만들어 " 질수있다. 예를들어, Pst I 및 Bsp E1 부위는본발명의예시적인프라이머쌍에설계되었다. 이들특정제한부위는부위가접합된 7-막수용체 " 공여체 " 암호화서열에대해 " 인프레임 (in-frame)" 인서열을갖는다 ( 리간드결합부위암호화서열은 7-막폴리펩타이드에대해내재하고, 따라서, 구성이제한효소접합부위의번역된하류인것이바람직하다면, 골격을벗어난결과는피해야하고 ; 이는, 삽입된리간드결합부위가대부분의막관통 VII 부위를실질적으로포함한다면필요하지않을수있다 ). 프라이머는 " 공여체 " 7-막수용체의최초서열을보유하기위해설계될수있다. 대안적으로, 프라이머는보존적치환 ( 예를들어, 소수성잔기에대한소수성, 상기논의참조 ) 또는기능적으로양호한치환 ( 예를들어, 이는원형질막삽입을방지하고, 이에따라펩티다제에의한절단을야기하고, 또한수용체의비정상폴딩을야기한다등 ) 인아미노산잔기를암호화할수있다. 프라이머쌍은 T2R 단백질의리간드결합부위를선택적으로증폭하기위해설계될수있다. 이들결합부위는상이한리간드에대해서변할수있고 ; 따라서, 하나의리간드에대해최소결합부위일수있는것은, 제2 잠재적인리간드에대해너무제한적일수있다. 따라서, 상이한영역구조를포함하는상이한크기의결합부위는증폭될수있고 ; 예를들어, 7-막관통 T2R의막관통 (TM) 영역 II 내지 VII, III 내지 VII, III 내지 VI 또는 II 내지 VI, 또는이의변화 ( 예를들어, 특정영역의서브서열만, 영역의순서를혼합함등 ). 많은 7-막 T2R 단백질의영역구조및서열은공지되어있기때문에, 당업자는축퇴성증폭프라이머쌍을설계하기위해모델서열로서영역플랭킹 (flanking) 및내부영역서열을쉽게선택할수있다. 예를들어, 핵산서열암호화영역부위 II 내지 VII 는프라이머쌍을사용하여 PCR 증폭에의해산출될수있다. 막관통영역 I (TM I) 서열을포함하는핵산을증폭하기위해, 축퇴성프라이머는상기에기재된 T2R 패밀리공통서열 1 의아미노산서열을암호화하는핵산으로부터설계될수있다. 그와같은축퇴성프라이머는결합부위혼입 TM I 내지 TM III, TM I 내지 TM IV, TM I 내지 TM V, TM I 내지 TM VI 또는 TM I 내지 TM VII 을산출하기위해사용될수있다. 다른축퇴성프라이머는다른 T2R 패밀리공통서열을근거로설계될수있다. 그와같은축퇴성프라이머는결합부위혼입 TM III 내지 TM IV, TM III 내지 TM V, TM III 내지 TM VI 또는 TM III 내지 TM VII 를산출하기위해사용될수있다. 축퇴성프라이머쌍을설계하기위한패러다임은선행기술에공지되어있다. 예를들어, COnsensus-DEgenerate Hybrid Oligonucleotide Primer (CODEHOP) 전략컴퓨터프로그램은 로서접근가능하고, 공지된미각수용체리간드결합부위로서관련단백질서열의세트로시작하는하이브리드프라이머예측에대해 lockmaker 다수의서열정렬부위로부터직접연결된다 ( 참조, 예를들어, Rose, Nucleic Res., 26: (1998); Singh, Biotechniques, 24: (1998))

71 [0382] [0383] [0384] [0385] [0386] [0387] [0388] 올리고뉴클레오타이드프라이머쌍을합성하는수단은선행기술에공지되어있다. " 천연 " 염기쌍또는합성염기쌍이사용될수있다. 예를들어, 인공적인뉴클레오베이스의사용은프라이머서열을처리하고증폭생성물의복합혼합물을산출하기위해다양한접근을제공한다. 인공적인뉴클레오베이스의다양한패밀리는축퇴성분자인식에대한수단을제공하기위해내부결합회전을통해다수의수소결합지향성을추정할수있다. 이들유사체의, PCR 프라이머의단일위치로의혼입은증폭생성물의복합라이브러리의산출을허용한다. 참조, 예를들어, Hoops, Nucleic Acids Res., 25: (1997). 무극성분자는또한천연 DNA 염기의형태를모방하기위해사용될수있다. 아데닌에대한비수소결합형태의모방체는티민에대한무극성형태의모방체에대해효율적이고선택적으로복제할수있다 ( 참조, 예를들어, Morales, Nat. Struct. Biol., 5: (1998)). 예를들어, 2개의축퇴성염기는피리미딘염기 6H, 8H-3,4-디하이드로피리미도 [4,5-c][1,2] 옥사진-7-온또는퓨린염기 N6-메톡시-2,6-디아미노퓨린일수있다 ( 참조, 예를들어, Hill, PNAS, 95: (1998)). 본발명의예시적인축퇴성프라이머는뉴클레오베이스유사체 5'-디메톡시트리틸-N-벤조일-2'- 데옥시-시티딘,3'-[(2-시아노에틸)--(N,N-디이소프로필)]- 포스포르아미다이트 ( 서열에서용어 "P", 상기참조 ) 일수있다. 이피리미딘유사체는 A 및 G 잔기를포함하는퓨린과수소결합한다. 본명세서에개시된미각수용체와실질적으로동일한다형적변이체, 대립유전자, 및이종간동족체는상기에기재된핵산프로브를사용하여분리될수있다. 대안적으로, 발현라이브러리는 T2R 동족체를인식하고선택적으로결합하는 T2R 폴리펩타이드에대해만들어진항혈청또는정제항체로발현된동족체를면역적으로검출하여 T2R 폴리펩타이드및다형적변이체, 이의대립유전자, 및이종간동족체를클로닝하기위해사용될수있다. 미각수용체의리간드결합부위를암호화하는핵산은적합한 ( 완전한또는축퇴성 ) 프라이머쌍을사용하여접합한핵산서열의증폭 ( 예를들어, PCR) 에의해산출될수있다. 증폭된핵산은미각수용체발현세포로부터유도된어떤세포또는조직또는 mrna 또는 cdna로부터의게놈 DNA 일수있다. 하나의구현예에서, 전좌서열에융합된 T2R 을암호화하는핵산을포함하는하이브리드단백질암호화서열이구성될수있다. 또한, 전좌모티프, 및화학적감각수용체, 특히미각수용체의다른패밀리의맛도출화합물결합부위를포함하는하이브리드 T2R 를제공한다. 이들핵산서열은전사또는번역조절요소, 예를들어, 전사및번역개시서열, 프로모터및인핸서, 전사및번역터미네이터 (terminator), 폴리아데닐레이션서열, 및 DNA 를 RNA 로전사하는데유용한다른서열에작동가능하게연결될수있다. 재조합발현카세트, 벡터및형질전환의구성에서, 프로모터절편은모든목적세포또는조직에서목적핵산의발현을이끌기위해이용될수있다. 다른구현예에서, 융합단백질은 C-말단또는 N-말단전좌서열을포함할수있다. 또한, 융합단백질은예를들어, 단백질검출, 정제, 또는다른적용에대한추가요소를포함할수있다. 검출및정제촉진영역은예를들어하기를포함한다 : 금속킬레이팅 (chelating) 펩타이드, 예컨대폴리히스티딘트랙 (tract), 히스티딘-트립토판모듈, 또는고정화금속에대한정제를허용하는다른영역 ; 말토스결합단백질 ; 고정화면역글로불린에대한정제를허용하는단백질 A 영역 ; 또는 FLAGS 신장 / 친화성정제시스템에이용된영역 (Immunex Corp, Seattle Wash). ( 유효한원형질막발현에대한 ) 전좌영역및새로번역된폴리펩타이드의나머지사이의절개가능링커서열, 예컨대인자 Xa ( 참조, 예를들어, Ottavi, Biochimie, 80: (1998)), 서브틸리신프로테아제인식모티프 ( 참조, 예를들어, Polyak, Protein Eng., 10: (1997)); 엔테로키나아제 (Invitrogen, San Diego, Calif.) 등의포함은정제를촉진하는데유용할수있다. 예를들어, 하나의구성은 6개의히스티딘잔기, 그다음, 티오레독신에연결된핵산서열을암호화하는폴리펩타이드, 엔테로키나아제분절부위 ( 참조, 예를들어, Williams, Biochemistry, 34: (1995)), 및 C-말단전좌영역을포함할수있다. 히스티딘잔기는검출및정제를촉진하고, 한편엔테로키나아제분절부위는융합단백질의나머지로부터목적단백질 ( 들 ) 을정제하기위한수단을제공한다. 융합단백질을암호화하는벡터및융합단백질의적용에관한기술은과학및특허문헌에기재되어있다 ( 참조, 예를들어, Kroll, DN세포. Biol,. 12: (1993)). 리간드결합부위암호화서열을포함하는, 개별발현벡터로서또는발현벡터의라이브러리로서발현벡터는게놈에또는세포질또는세포의핵에도입될수있고과학및특허문헌에기재된다양한종래기술에의해발현될수있다. 참조, 예를들어, Roberts, Nature, 328:731 (1987); Berger supra; Schneider, Protein Exper. Purif., 6435:10 (1995) Sambrook; Tijssen; Ausubel. 생물학적시약및실험장비의제조자로부터의제품정보는또한공지된생물학적방법에관한정보를제공한다. 벡터는천연공급원으로부터분리되고, ATCC

72 또는 GenBank 라이브러리로서그와같은공급원으로부터얻고, 또는합성재조합방법에의해제조될수있다. [0389] [0390] [0391] [0392] [0393] [0394] 핵산은세포에서안정적으로또는일시적으로발현되는발현카세트, 벡터또는바이러스에서발현될수있다 ( 예를들어, 에피솜발현시스템 ). 선택마커 (marker) 는형질변환된세포및서열상에선택가능표현형을부여하기위해발현카세트및벡터에혼입될수있다. 예를들어, 선택마커는에피솜유지및복제를암호화할수있고, 이에따라숙주게놈으로의통합이필요하지않다. 예를들어, 마커는목적 DNA 서열로형질변환된세포의선택을허용하기위해항생물질에대한내성 ( 예를들어, 클로람페니콜, 카나마이신, G418, 블레오마이신, 하이그로마이신 ) 또는제초제내성 ( 예를들어, 클로로설푸론또는 Basta) 을암호화할수있다 ( 참조, 예를들어, Blondelet-Rouault, Gene, 190: (1997); Aubrecht, J. Pharmacol. Exp. Ther., 281: (1997)). 네오마이신또는하이그로마이신과같은지질에내성을부여하는선택가능마커유전자는단지조직배양에이용될수있기때문에, 화학물질저항성유전자는또한시험관내및생체내선택가능마커로서사용된다. 키메라핵산서열은어떤 7-막관통폴리펩타이드내의 T2R 리간드결합부위를암호화할수있다. 7-막관통수용체폴리펩타이드는유사한 1차서열및 2차및 3차구조를갖기때문에, 구조영역은 ( 예를들어, 세포외영역, TM 영역, 세포질영역등 ) 은서열분석에의해쉽게확인될수있다. 예를들어, 상동성모델링, 푸리에 (Fourier) 분석및나선주기성검출은 7-막관통수용체서열을갖는 7개의영역을확인하고그특성을기술할수있다. 고속푸리에변환 (FFT) 알고리듬은분석된서열의소수성및가변성의프로파일의특성을기술하는주요기간을평가하기위해사용될수있다. 주기성검출상승및알파나선주기성인덱스 (index) 는예를들어, Donnelly, Protein Sci., 2:55-70 (1993) 에의해행해질수있다. 다른정렬및모델링알고리듬은선행기술에공지되어있다 ( 참조, 예를들어, Peitsch, Receptors 채널, 4: (1996); Kyte & Doolittle, J. Md. Biol., 157: (1982); 및 Cronet, Protein Eng., 6:59-64 (1993). 본발명은또한지정된핵산및아미노산서열을갖는핵산분자및폴리펩타이드뿐만아니라이의절편, 특히예를들어, 40, 60, 80, 100, 150, 200, 또는 250 뉴클레오타이드, 또는그이상의절편, 및예를들어 10, 20, 30, 50, 70, 100, 또는 150 아미노산, 또는그이상의폴리펩타이드절편을포함한다. 임의로, 핵산절편은 T2R 패밀리구성원에대해상승된항체에결합할수있는항원폴리펩타이드를암호화할수있다. 또한, 본발명의단백질절편은임의로 T2R 패밀리구성원에대해상승된항체에결합할수있는항원절편일수있다. 또한다른 GPCR 의모두또는일부, 바람직하게는 7 막관통슈퍼패밀리의구성원을대표하는추가아미노산에커플링 (coupling) 된본명세서에기재된 T2R 폴리펩타이드의적어도하나의적어도 10, 20, 30, 50, 70, 100, 또는 150개의아미노산, 또는그이상을포함하는키메라단백질이고려된다. 이들키메라는즉각적인수용체및다른 GPCR 로부터만들어질수있고, 또는 2이상의본수용체를조합하여만들어질수있다. 하나의구현예에서, 키메라의하나의부분은본발명의 T2R 폴리펩타이드의막관통영역에상응하거나그영역으로부터유도된다. 다른구현예에서, 키메라의하나의부분은본명세서에기재된 T2R 폴리펩타이드의막관통영역에상응하거나그영역으로부터유도되고, 나머지부분 ( 들 ) 은다른 GPCR 로부터유래될수있다. 키메라수용체는선행기술에공지되어있고, 그것을만들기위한기술, 및혼힙하기위한 G 단백질커플링된수용체의영역도는절편의선택및경계는또한공지되어있다. 선행기술에공지된이러한지식은그와같은키메라수용체를만들기위해쉽게사용될수있다. 그와같은키메라수용체의사용은예를들어다른수용체, 예컨대선행기술인분석시스템에사용된공지된수용체의신호전달특성과커플링된, 본명세서에구체적으로개시된수용체중의하나가특징인미각선택성을제공할수있다. 예를들어, 부위, 예컨대리간드결합부위, 세포외영역, 막관통영역, 막관통영역, 세포질영역, N-말단영역, C-말단영역, 또는이의어떤조합은이종단백질에공유적으로연결될수있다. 예를들어, T2R 막관통부위는이종 GPCR 막관통영역에연결될수있거나, 이종 GPCR 세포외영역은 T2R 막관통부위에연결될수있다. 선택된다른이종단백질은예를들어, 녹색형광단백질, 베타-갈락토시다아제폴리펩타이드, 글루타메이트수용체, 및로돕신폴리펩타이드, 예를들어, 로돕신예를들어, 소 (bovine) 로돕신의 N-말단절편을포함할수있다. 또한본발명의 T2R, 절편, 또는변이체를발현시킥기위한상이한숙주세포를사용하는것은본발명의범위내에있다. 클로닝된유전자또는핵산, 예컨대본발명의 cdna 암호화 T2R, 절편, 또는변이체의고수준발현을얻기위해서, 당업자는전형적으로관심을끄는핵산서열을, 전사, 전사 / 번역터미네이터, 및단백질을암호화하는핵산에대해서라면, 번역개시용리보솜결합부위를이끌기위해강한프로모터를함유하는발현벡터로서브클로닝한다. 적당한박테리아프로모터는선행기술에공지되어있고, 예를들어 Sambrook et al 에

73 기재되어있다. 바람직하게는, 진핵세포발현시스템은대상체인 ht2r 수용체를발현시키기위해사용된다. [0395] [0396] 외래의뉴클레오타이드서열을숙주세포에도입하기위한어떤공지된절차가사용될수있다. 이들은인산칼슘형질감염, 폴리브렌 (polybrene), 세포융합, 전기천공법, 리포솜, 미량주사, 혈장벡터, 바이러스벡터및클로닝된게놈 DNA, cdna, 합성 DNA 또는다른외래의유전자물질을숙주세포에도입하기위한어떤공지된방법의사용을포함한다 ( 참조, 예를들어, Sambrook et al). 특정유전자조작절차가, 관심을끄는 T2R, 절편, 또는변이체를발현시킬수있는숙주세포에하나이상의핵산분자를성공적으로도입할수있도록사용되는것이단지필요하다. 발현벡터가세포에도입된후, 형질감염된세포는조건하에서배양된다. 관심을끄는수용체, 절편, 또는변이체의발현을돕는조건하에서배양되고, 그다음, 표준기술을사용하여배양으로부터회수된다. 그와같은기술의예는선행기술에공지되어있다. 참조, 예를들어, WO 00/06593, 이는본명세서와일치하는방식으로참고로포함되어있다. [0397] [0398] [0399] [0400] [0401] [0402] 본발명에따른 ht2r의활성을조절하는화합물의검출을위한분석방법테스트화합물이시험관내및생체내에서본발명의 T2R 폴리펩타이드에특이적으로결합하는지를측정하기위한방법및조성물은하기에기재되어있다. 세포생리의많은측면은자연발생또는키메라 T2R 에의리간드결합의효과를평가하기위해모니터될수있다. 이들분석은 T2R 폴리펩타이드를발현시키는완전한세포, 투과된세포또는표준방법에의해생산된막분획에대해수행될수있다. 미각수용체는맛유발화합물을결합하고, 화학자극의전기신호로의전달을개시한다. 활성또는억제된 G 단백질은표적효소, 채널, 및다른작동체단백질의특성을차례차례변경할것이다. 일부예는시각계에서트랜스듀신에의한 cgmp 포스포디에스테라제, 자극 G 단백질에의한아데닐 ( 산 ) 시클라아제, Gq 및다른동족 G 단백질에의한포스포리파제 C 의활성, 및 Gi 및다른 G 단백질에의한다양한채널의조절이다. 하향성결과는또한포스포리파제 C 에의한디아실글리세롤및 IP3 의산출로서, 그리고 IP3 에의한칼슘이동에대해테스트될수있다. 분석의대상체 ht2r 단백질또는폴리펩타이드는전형적으로특허청구범위앞에기재된서열목록에함유된서열을갖는폴리펩타이드또는이의절편또는보존적변형된변이체으로부터선택될것이다. 대안적으로, 분석의 T2R 단백질또는폴리펩타이드는진핵세포숙주세포로부터유도될수있고, 이들 ht2r 폴리펩타이드또는이의보존적으로변형된변이체에대한어떤 % 의아미노산서열동일성을갖는아미노산서열을포함할수있다. 일반적으로, 아미노산서열동일성은적어도 30%, 바람직하게는 30-40%, 더구체적으로 50-60, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일것이다. 임의로, 분석의 T2R 단백질또는폴리펩타이드는 T2R 폴리펩타이드의부위, 예컨대세포외영역, 막관통부위, 세포질영역, 리간드결합영역등을포함할수있다. 임의로, 본명세서에예시된바와같이, T2R 폴리펩타이드, 또는이의부분은본명세서에기재된분석에사용된키메라단백질을만들기위해이종단백질에공유적으로연결될수있다. T2R 활성의조절제는재조합또는자연발생으로상기에기재된 T2R 단백질또는폴리펩타이드를사용하여테스트될수있다. T2R 단백질또는폴리펩타이드는재조합으로또는자연발생적으로분리, 세포에서발현, 세포로부터유로된막에서발현, 조직또는동물에서발현될수있다. 예를들어, 혀절편, 혀로부의분리세포, 형질변환된세포, 또는막이사용될수있다. 조절은본명세서에기재된시험관내또는생체내분석중의하나를사용하여테스트될수있다. [0403] [0404] [0405] 조절제의검출테스트화합물이시험관내및생체내에서본발명의 T2R 수용체에특이적으로결합하는지를측정하기위한방법및조성물은하기에기재되어있다. 세포생리의많은측면은본발명의 T2R 폴리펩타이드의리간드결합의효과를평가하기위해모니터될수있다. 이들분석은화학적감각수용체를발현시키는완전한세포, 투과된세포또는표준방법에의해생산된막분획또는새로합성된단백질의시험관내사용에대해수행될수있다. 생체내에서, 미각수용체는맛조절화합물을결합하고, 화학자극의전기신호로의전달을개시한다. 활성또는억제된 G 단백질은표적효소, 채널, 및다른작동체단백질의특성을차례차례변경할것이다. 일부예는

74 시각계에서트랜스듀신에의한 cgmp 포스포디에스테라제, 자극 G 단백질에의한아데닐 ( 산 ) 시클라아제, Gq 및다른동족 G 단백질에의한포스포리파제 C 의활성, 및 Gi 및다른 G 단백질에의한다양한채널의조절이다. 하향성결과는또한포스포리파제 C 에의한디아실글리세롤및 IP3 의산출로서, 그리고 IP3 에의한칼슘이동에대해테스트될수있다. [0406] [0407] 대안적으로, 분석의 T2R 단백질또는폴리펩타이드는진핵세포숙주세포로부터유도될수있고, 이들본명세서에개시된 ht2r 폴리펩타이드, 또는이의절편보존적으로변형된변이체에대한아미노산서열동일성을갖는아미노산서열을포함할수있다. 일반적으로, 아미노산서열동일성은적어도 35 내지 50%, 또는임의로 75%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 일것이다. 임의로, 분석의 T2R 단백질또는폴리펩타이드는 T2R 단백질의영역, 예컨대세포외영역, 막관통부위, 세포질영역, 리간드결합영역등을포함할수있다. 또한, 상기에기재된바와같이, T2R 단백질, 또는이의영역은본명세서에기재된분석에사용된키메라단백질을만들기위해이종단백질에공유적으로연결될수있다. T2R 활성의조절제는재조합또는자연발생으로상기에기재된 T2R 단백질또는폴리펩타이드를사용하여테스트될수있다. T2R 단백질또는폴리펩타이드는재조합으로또는자연발생적으로분리, 세포에서발현, 세포로부터유로된막에서발현, 조직또는동물에서발현될수있다. 예를들어, 혀절편, 혀로부의분리세포, 형질변환된세포, 또는막이사용될수있다. 조절은본명세서에기재된시험관내또는생체내분석중의하나를사용하여테스트될수있다. [0408] [0409] [0410] [0411] [0412] [0413] 시험관내결합분석맛전달은또한본발명의 T2R 폴리펩타이드를사용하여가용또는고형상태반응으로시험관내에서테스트될수있다. 특정구현예에서, T2R 리간드결합영역은리간드결합에대해분석하기위해가용또는고형상태반응에시험관내에서사용될수있다. 리간드결합영역이세포외영역의추가부분, 예컨대막관통영역의세포외루프와함께 N-말단영역에의해형성될수있다. 시험관내에서, 결합분석은다른 GPCR, 예컨대친대사성글루타메이트수용체와함께사용되었다 ( 참조, 예를들어, Han 및 Hampson, J. Biol. Chem. 274: (1999)). 이들분석은방사성으로또는형광성으로표지된리간드를대체하는것을필요로하고, 이는고유형광의변화또는단백질분해민감성의변화등을측정한다. 본발명에따른 T2R 폴리펩타이드에결합하는리간드는용액, 고상에임의로부착된이중층막, 지질단일층, 또는소낭에서테스트될수있다. 조절제의결합은예를들어, 분광특성 ( 예를들어, 형광, 흡광도, 굴절률 ), 수력학적 ( 예를들어, 형태 ), 색층분석, 또는용해도특성의변화를사용하여테스트될수있다. 본발명의바람직한구현예에서, [35S]GTPγS 결합분석이사용된다. 상기에기재된바와같이, GPCR 의활성화시에, G 단백질복합체의 Ga 서브유닛은자극되어결합된 GDP 를 GTP 로교환한다. G 단백질교환활성의 리간드매개자극은추정리간드의존재에서, 첨가된방사성으로표지된 [35S] GTPγS 의 G 단백질로의결합을측정하여생화학분석에서측정될수있다. 전형적으로, 관심을끄는화학적감각수용체를함유하는막은 G 단백질과혼합된다. 잠재적인억제제및 / 또는활성제및 [35S] GTPγS 는분석에추가되고, [35S] GTPγS 의 G 단백질에의결합이측정된다. 결합은액체섬광카운팅 (counting), 또는섬광근접측정법 (SPA) 을포함하는, 선행기술에공지된어떤다른수단에의해측정될수있다. 다른분석형식에서, 형광성으로표지된 GTPγS 이이용될수있다. [0414] [0415] 형광편광분석다른구현예에서, 형광편광 ("FP") 계분석은리간드결합을검출및모니터하기위해사용될수있다. 형광편광은평형상태결합, 핵산하이브리드화, 및효소활성을측정하기위한다양한실험실기술이다. 형광편광분석은분리단계, 예컨대원심분리, 여과, 크로마토그래피, 침전, 또는전기영동를필요로하지않는다는점에서동질적이다. 이들분석은용액에서직접적으로실시간으로행해지고, 고정상을필요로하지않는다. 편광값은반복적으로그리고시약의첨가후에측정될수있는데, 그이유는, 편광의측정이신속하고샘플을파괴

75 하지않기때문이다. 일반적으로, 이러한기술은낮은피코몰 (picomolar) 로부터마이크로몰 (micromolar) 수준으로의형광염료의편관값을측정하기위해사용될수있다. 이단락은, 형광편광이리간드의본발명의 T2R 폴리펩타이드에의결합을측정하기위해서어떻게샘플에서및정량적방법으로사용될수있는지를기재하고있다. [0416] [0417] 형광성으로표지된분자가평면편광으로여기될때, 분자회전에반비례인평광도를갖는빛을방출한다. 큰형광성으로표지된분자는여기상태 ( 플루오레세인의경우에 4 나노초 ) 동안에비교적정적상태를유지하고, 빛의편광은여기및방출사이에서비교적일정하게유지된다. 작은형광성으로표지된분자는여기상태동안에빠르게회전하고평광은여기및방출사이에서상당히변한다. 따라서, 작은분자는낮은편광값을가지고, 큰분자는높은편광값을갖는다. 예를들어, 단일가닥플루오레세인표지된올리고뉴클레오타이드는비교적낮은편광값을갖지만, 상보적가닥으로하이브리드화될때, 높은편광값을갖는다. 본발명의화학적감각수용체를활성화또는억제할수있는미각유발화합물결합을검출및모니터하기위해 FP 를사용할때, 형광표지된미각유발화합물또는자가형광미각유발화합물이사용될수있다. 형광편광 (P) 은하기와같이정의된다 : [0418] [0419] 여기서, Int par 는여기광평면에평행한방출광의세기이고, Int perp 는여기광평면에수직인방출광의 세기이다. 광세기의비인 P 는무차원수이다. 예를들어, Beacon TM 및 Beacon 2000 TM 시스템은이들분석과 관련하여사용될수있다. 그와같은시스템은전형적으로밀리 (milli) 편광단위 (1 편광단위 = 1000 mp 단위 ) 에서편광을나타낸다. [0420] [0421] 분자회전과크기사이의관계는페린 (Perrin) 방정식에의해기재되고, 독자는참고로본명세서에통합되어있는 Jolley, M. E. (1991, Journal of Analytical Toxicology, pp ) 를주목하는데, 이는상기방정식의철저한설명을제공한다. 마찬가지로, 상기페린방정식은, 편광이회전완화시간 ( 분자가대략 68.5 각으로회전하는데걸리는시간 ) 에직접적으로비례한다는것을제시한다. 회전완화시간은하기방정식에의한점도 (eta.), 절대온도 (T), 분자부피 (V), 및기체상수 (R) 과관련된다 : 2( 회전완화시간 ) = 3 VRT 회전완화시간은작은분자 ( 예를들어플루오레세인 ) 에대해서는작고 ( 약나노초 ), 큰분자 ( 예를들어면역글로불린 ) 에대해서는크다 ( 약 100 나노초. 점도및온도가일정하게유지되면, 회전완화시간, 및편광은분자부피에직접관련된다. 분자부피의변화는다른분자와의상호작용, 형광성으로표지된분자의분리, 중합, 분해, 하이브리드화, 또는형태변화에기인할수있다. 예를들어, 형광편광은프로테아제, DNase, 및 RNase 에의한큰플루오레세인표지된폴리머의효소절단을측정하기위해사용되었다. 또한단백질 / 단백질상호작용에대한평형상태결합, 항체 / 항원결합, 및단백질 /DNA 결합을측정하기위해사용되었다. [0422] [0423] [0424] 고체상태및가용성고효율분석또다른구현예에서, 본발명은 T2R 폴리펩타이드를사용하는가용분석 ; 또는 T2R 폴리펩타이드를발현시키는세포또는조직을제공한다. 다른구현예에서, 본발명은고효율포맷으로고상계시험관내분석을제공하는데 ; 여기서 T2R 폴리펩타이드, 또는 T2R 폴리펩타이드를발현시키는세포또는조직은고상기질또는미각자극화합물에부착되고, T2R 수용체와접촉하고, 결합은 T2R 수용체에대해상승된항체또는적합한태그를사용하여검출된다. 본발명의고효율분석에서, 하루에수천개의상이한조절제또는리간드를스크리닝할수있다. 특히미량역가판의각웰은선택된잠재적인조절제에대한별개의분석을수행하기위해사용될수있고, 또는농도또는배양시간효과가관찰되면, 매 5 내지 10개의웰은단일조절제를테스트할수있다. 따라서, 단일표준미량역가판은약 100개 ( 예를들어, 96개 ) 의조절제를분석할수있다. 1536개의웰플레이트가사용되면, 그때, 단일플레이트는약 1000 내지약 1500개의상이한화합물을쉽게분석할수있다. 또한각플레이트웰에서다수의화합물을분석할수있다. 하루에몇개의상이한플레이트를분석할수있고 ; 약 6,000-20,000개까지의상이한화합물에대한분석스크린은본발명의통합시스템을사용하여가능하다. 아주최근에, 시약처리에대한미세유체적인접근이개발되었다

76 [0425] [0426] [0427] [0428] [0429] [0430] 관심을끄는분자는공유또는비공유연결을통해, 예를들어태그를통해직접또는간접적으로고체상태성분에결합될수있다. 상기태그는어떤다양한성분일수있다. 일반적으로, 태그를결합하는분자 ( 태그바인더 ) 는고형지지체에고정되고, 관심을끄는태그된 (tagged) 분자 ( 예를들어, 관심을끄는맛전달분자 ) 는태그및태그바인더의상호작용에의해고형지지체에부착된다. 수많은태그및태그바인더는문헌에잘기재된공지된분자상호작용을근거로사용될수있다. 예를들어, 태그가천연바인더, 예를들어, 바이오틴, 단백질 A, 또는단백질 G 를가지는경우에, 적합한태그바인더 ( 아비딘, 스트렙트아비딘, 뉴트르아비딘, 면역글로불린의 Fc 부위등 ) 과연계하여사용될수있다. 바이오틴과같은천연바인더를갖는분자에대한항체는또한널리이용가능하고, 태그바인더 ( 참조, SIGMA Immunochemicals 1998 catalogue SIGMA, St. Louis Mo.) 를전용할수있다. 마찬가지로, 어떤합텐또는항원화합물은태그 / 태그바인더쌍을형성하기위해적합한항체와조합하여사용될수있다. 수천개의특이적항체는상업적으로이용할수있고, 많은추가항체는문헌에기재되어있다. 예를들어, 하나의공통구성에서, 태그는제1 항체이고, 태그바인더는제1 항체를인식하는제2 항체이다. 항체-항원상호작용에추가하여, 수용체-리간드상호작용은또한태그및태그-바인더쌍으로서적합하다. 예를들어, 세포막수용체의작용물질및길항물질 ( 예를들어, 세포수용체-리간드상호작용, 예컨대트랜스페린, c-키트, 바이러스수용체리간드, 사이토킨수용체, 케모카인수용체, 인터루킨수용체, 면역글로불린수용체및항체, 캐드헤린패밀리, 인테그린패밀리, 셀렉틴패밀리등 ; 참고, 예를들어, Pigott & Power, The Adhesion Molecule Facts Book I (1993)). 마찬가지로, 독소및독액, 바이러스에피토프, 호르몬 ( 예를들어, 아편제, 스테로이드등 ), 세포내수용체 ( 예를들어, 이는다양한작은리간드의효과를절단한다, 스테로이드, 갑상선호르몬, 레티노이드및비타민 D; 펩타이드포함 ), 약물, 렉틴, 당, 핵산 ( 선형및환형폴리머구성모두 ), 올리고당, 단백질, 인지질및항체모두는다양한세포수용체와상호작용할수있다. 합성폴리머, 예컨대폴리우레탄, 폴리에스테르, 폴리카보네이트, 폴리우레아, 폴리아미드, 폴리에틸렌이민, 폴리아릴렌설파이드, 폴리실록산, 폴리이미드, 및폴리아세테이트는또한적합한태그또는태그바인더를형성할수있다. 많은다른태그 / 태그바인더쌍은또한본명세서의검토시당업자에게뚜렷한바와같이본명세서에기재된분석시스템에유용하다. 공통적인링커, 예컨대펩타이드, 폴리에테르등은또한태그로서쓰일수있고, 폴리펩타이드서열, 예컨대약 5 내지 200개의아미노산의 poly gly 서열을포함한다. 그와같은유동링커는당업자에게공지되어있다. 예를들어, 폴리 ( 에틸렌글리콜 ) 링커는 Shearwater Polymers, Inc. (Huntsville, Ala) 로부터이용할수있다. 이들링커는임의로아미드결합, 설프히드릴결합, 또는헤테로기능적결합을갖는다. 태그바인더는현재이용가능한다양한방법들중의어떤것을사용하여고형기질에고정된다. 고형기질은일반적으로기질의전부또는일부를, 태그바인더의일부와반응하는표현에화학기를고정하는화학시약에노출시켜서유도또는기능화된다. 예를들어, 장쇄부분에부합하기에적합한기는아민, 하이드록실, 티올, 및카르복실기를포함한다. 아미노알킬실란및하이드록시알킬실란은다양한표면, 예컨대유리표면을기능화하기위해사용될수있다. 그와같은고상생물고분자어레이의구성은문헌에기재되어있다. 참조, 예를들어, Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85: (1963) ( 예를들어, 펩타이드의고상합성을기재하고있음 ); Geysen 등, J. Immun. Meth., 102: (1987) ( 핀 (pin) 에대한고상성분의합성을기재하고있음 ); Frank & Doring, Tetrahedron, 44: (1988) ( 셀룰로스디스크에대한다양한펩타이드서열의합성을기재하고있음 ); Fodor 등, Science, 251: (1991); Sheldon 등, Clinical Chemistry, 39(4): (1993); 및 Kozal 등, Nature Medicine, 2(7): (1996) ( 모두는고형기질에고정된생물고분자의어레이를기재하고있음 ). 태그바인더를기질에고정하기위한비화학적접근은다른일반적인방법, 예컨대열, UV 조사에의한가교결합등을포함한다. [0431] [0432] 세포기반분석하나의바람직한구현예에서, T2R 단백질은비변형형태로, 또는분비경로를통한약물표적화및성숙을촉진하는이종의샤페론서열을갖는, 바람직하게는갖지않는키메라, 변이체또는절단수용체로서진핵세포에서발현된다. 그와같은 T2R 폴리펩타이드는어떤진핵세포, 예컨대 HEK-293 세포에서발현될수있다. 바람직하게는, 세포는기능적 G 단백질, 예를들어, G α15 또는키메라 G α16, 구스트듀신또는트랜스듀신또는키메라 G 단백질, 예컨대 G16gust44 를포함하는데, 이는키메라수용체를세포내신호전달경로또는신호전달단백질,

77 예컨대포스포리파제 C 에연결할수있다. 그와같은세포에서의 T2R 수용체의활성은어떤표준방법을사용 하여, 예컨대세포내 FURA-2 의존형광을검출하여세포내칼슘의변화를검출하여검출될수있다. 그와같은 분석은본출원에제공된실험적발견을근거로한다. [0433] [0434] [0435] [0436] 활성화된 GPCR 수용체는종종수용체의 C-말단꼬리 ( 및가능한다른부위 ) 를인산화하는키나아제를위한기질이다. 따라서, 활성제는섬광계수기로분석될수있는, 방사능표지 ATP 로부터수용체까지의 32P 의이동을촉진할것이다. C-말단꼬리의인산화는어레스틴과같은단백질의결합을촉진할것이고, G 단백질의결합을방해할것이다. GPCR 신호전달및신호전달을분석하는방법의일반적인검토에대해, 예를들어하기를참고한다 : Methods in Enzymology, vols. 237 and 238 (1994) and volume 96 (1983); Bourne 등, Nature, 10:349: (1991); Bourne 등, Nature, 348: (1990); Pitcher 등, Annu. Rev. Biochem., 67: (1998). T2R 조절은추정 T2R 조절제로처리된 T2R 폴리펩타이드의반응을미처리된대조군샘플또는공지된 " 양성 (positive)" 대조군을함유하는샘플의반응을비교함으로써분석될수있다. 그와같은추정 T2R 조절제는 T2R 폴리펩타이드활성을억제또는활성하는분자를포함할수있다. 하나의구현예에서, T2R 을활성화시키는화합물로처리된대조군샘플은 100 의상대적인 T2R 활성값이지정된다. T2R 폴리펩타이드의억제는, 대조군샘플에대한 T2R 활성값이약 90%, 임의로 50%, 임의로 25-0% 일때달성된다. T2R 폴리펩타이드의활성은, 대조군에대한 T2R 활성값이 110%, 임의로 150%, %, 또는 % 일때달성된다. 이온유속의변화는 T2R 폴리펩타이드를발현시키는세포또는막의이온편광 ( 즉, 전위 ) 의변화를측정하여평가될수있다. 세포편광의변화를측정하는하나의수단은전압고정및패치클램프 (patch-clamp) 기술로전류의변화를측정 ( 이에따라편광의변화를측정한다 ) 하는것이다 ( 참조, 예를들어, " 세포부착 (cellattached)" 방식, " 인사이드아웃 (inside-out)" 방식, 및 " 전세포 (whole cell)" 방식, 예를들어, Ackerman 등, New Engl. J Med., 336: (1997)). 전세포전류는표준을사용하여편리하게측정된다. 다른공지의분석은전압민감성염료를사용하는방사능표지이온유속분석및형광분석을포함한다 ( 참조, 예를들어, Vestergarrd-Bogind 등, J. Membrane Biol., 88:67-75 (1988); Gonzales & Tsien, Chem. Biol., 4: (1997); Daniel 등, J. Pharmacol. Meth., 25: (1991); Holevinsky 등, J. Membrane Biology, 137:59-70 (1994)). 폴리펩타이드의기능에대한테스트화합물의효과는상기의파라미터들중어떤것을테스트하여측정될수있다. GPCR 활성에영향을미치는어떤적합한생리변화는본발명의폴리펩타이드에대한테스트화합물을영향을평가하기위해사용될수있다. 기능적결과가완전한세포또는동물을사용하여측정될때, 또한다양한효과, 예컨대트랜스미터 (transmitter) 방출, 호르몬방출, 공지되고특성이없는유전자마커에대한전사적변화 ( 예를들어, 노던블롯 (northern blot)), 세포대사작용의변화, 예컨대세포성장또는 ph 변화, 및세 포내제 2 메신저, 예컨대 Ca 2+, IP3, cgmp, 또는 camp 의변화를측정할수있다. [0437] GPCR 에대한바람직한분석은수용체활성을보고하기위해이온또는전압민감성염료로채워진세포를포함한다. 그와같은수용체의활성을측정하기위한분석은또한테스트된화합물의활성을평가하기위해대조군으로부터다른 G 단백질연결수용체에대한공지된작용물질및길항물질을사용할수있다. 조절화합물 ( 예를들어, 작용물질, 길항물질 ) 을확인하기위한분석에서, 세포질또는막전압에서의이온의수준의변화는이온민감성또는막전압형광지시약을각각사용하여모니터될것이다. 사용될수있는이온민감성지시약및전압프로브중에서, Molecular Probes 1997 Catalog 에개시된것이있다. G 단백질연결수용체에대해, 무차별적인 G 단백질, 예컨대 G α15 및 G α16 은선택된분삭에사용될수있다 (Wilkie 등, Proc. Nat'l Acad. Sci., 88: (1991)). 대안적으로, 다른 G 단백질, 예컨대구스트듀신, 트랜스듀신및키메라 G 단 백질, 예컨대 Gα16gust44 또는 Galpha16t25 이사용될수있다. [0438] 수용체활성은다음의세포내사건, 예를들어, 제2 메신저의증가를일으킨다. 어떤 G 단백질연결수용체의활성은포스파티딜리노시톨의포스포리파제 C 매개가수분해를통한인노시톨트리포스페이트 (IP3) 의형성을자극한다 (Berridge & Irvine, Nature, 312: (1984)). IP3 는차례차례세포내칼슘이온저장의방출을자극한다. 따라서, 세포질칼슘이온수준의변호, 또는제2 메신저수준의변화, 예컨대 IP3 는 G 단백질연결수용체기능을평가하기위해사용될수있다. 그와같은 G 단백질연결수용체를발현시키는세포는세포내저장으로부터의칼슘방출및원형질막이온채널을통한세포외칼슘유입모두로부터기여의결과로서증가된세포질칼슘수준을나타낼수있다

78 [0439] 바람직한구현예에서, T2R 폴리펩타이드활성은수용체를포스포리파제 C 신호전달경로에연결하는무차별적인 G 단백질로이종세포에서 T2R 유전자를발현시킴으로써측정된다 ( 참고, Offermanns & Simon, J. Biol. Chem., 270: (1995)). 바람직하게는, 세포주는 HEK-293 ( 이는보통 T2R 유전자를발현시키지않음 ) 이고, 무차별적인 G 단백질은 G α15 (Offermanns & Simon, 상기 ) 또는키메라 G 단백질, 예컨대 G16gust44 이다. 미각전달의조절은 T2R 폴리펩타이드와관련된분자의투여를통해 T2R 신호전달경로의조절에응하여변화하는세포내 Ca 2+ 수준의변화를측정하여분석된다. Ca2+ 수준의변화는형광 Ca2+ 지시약염료및형광이미징 (imaging) 을사용하여임의로측정된다. [0440] [0441] [0442] [0443] 다른구현예에서, 포스파티딜이노시톨 (PI) 가수분해는 U.S. 특허 No. 5,436,128 에따라분석될수있고, 이는참고로본명세서에통합되어있다. 간단히말해서, 분석은 48시간이상동안세포를 3H-마이오이노시톨로표지화하는것을수반한다. 표지된세포는테스트화합물 1시간동안처리되고, 처리된세포는분리되고, 클로로포름-메탄올-물에서추출되고, 그후, 이노시톨포스페이트는이온교환크로마토그래피로분리되고, 섬광계측으로정량화된다. 폴드 (fold) 자극은작용물질존재에서의 cpm 대완충용액대조군의존재에서 cpm 의비를계산하여측정된다. 마찬가지로, 폴드 (fold) 억제는길항물질존재에서의 cpm 대완충용액대조군 ( 이는작용물질을함유하거나그렇지않을수있음 ) 의존재에서의 cpm 의비를계산하여측정된다. 다른수용체분석은세포내환형뉴클레오타이드, 예를들어, camp 또는 cgmp 의수준을측정하는것을수반할수있다. 수용체의활성이환형뉴클레오타이드수준의감소로귀결되는경우에, 분석에서수용체활성화합물을세포에첨가하기전에, 세포내환형뉴클레오타이드수준을증가시키는제제, 예를들어, 포스콜린에세포를노출시키는것이바람직할수있다. 하나의구현예에서, 세포내 camp 또는 cgmp 의변화는면역분석을사용하여측정될수있다. 하기에기재되어있는방법은 camp 의수준을측정하기위해사용될수있다 : Offermanns & Simon, J. Bio. Chem., 270: (1995). 또한, 하기에기재된방법은 cgmp 의수준을측정하기위해사용될수있다 : Felley-Bosco 등, Am. J. Resp. Cell 및 Mol. Biol., 11: (1994). 또한, camp 및 / 또는 cgmp 를측정하기위한분석키트는 U.S. 특허 No. 4,115,538 에기재되어있고, 이는참고로본명세서에통합되어있다. 다른구현예에서, 전사수준은신호전달에대한테스트화합물효과를평가하기위해측정될수있다. 관심을끄는 T2R 폴리펩타이드를함유하는숙주세포는어떤상호작용에영향을주는충분한시간을위해테스트화합물과접촉된다음, 유전자발현의수준이측정된다. 그와같은상호작용을초래하는시간의양은예컨대시간대별로수행하고시간의함수로서전사의수준을측정하여경험적으로측정될수있다. 전사의양은적합한, 당업자에게공지된어떤방법을사용하여결정될수있다. 예를들어, 관심을끄는단백질의 mrna 발현은노던블롯 (northern blot) 을사용하여검출될수있거나이의폴리펩타이드생산물은면역분석을사용하여확인될수있다. 대안적으로, 리포터 (reporter) 유전자를사용하는, 전사를기초로한분석은 U.S. 특허 No. 5,436,128 에기재되어있고, 이는참고로본명세서에통합되어있다. 리포터유전자는클로람페니콜, 아세틸트랜스페라제, 루시페라제, 베타-갈락토시다아제, 베타-락타마제및알칼리포스파타제일수있다. 또한, 관심을끄는단백질은제2 리포터, 예컨대녹색형광단백질에의부착을통해직접적인리포터로서사용될수있다 ( 참조, 예를들어, Mistili & Spector, Nature Biotechnology, 15: (1997)). 그다음, 전사의양은테스트화합물의부재에서의동일한세포에서의전사의양과비교되거나, 또는관심을 R 는 T2R 폴리펩타이드 ( 들 ) 이부족한실질적으로동일한세포에서의전자의양과비교될수있다. 실질적으로동일한세포는재조합세포가만들어지지만이종 DNA 의도입에의해변형된동일한세포로부터유도될수있다. 전사의양에서의어떤차이는, 테스트화합물이관심을끄는 T2R 폴리펩타이드의활성을어떤식으로든변경했다는것을나타낸다. [0444] [0445] [0446] 화학적감각수용체를발현시키는유전자도입비인간동물본발명의하나이상의미각수용체서열을발현시키는비인간동물은또한수용체분석을위해사용될수있다. 그와같은발현은, 핵산암호화화학적감각수용체또는리간드결합부위로안정하게또는일시적으로형질감염된비인간동물을테스트화합물과접촉시켜서테스트화합물이포유동물미각막관통수용체복합물과생체내에서특이적으로결합하는지를측정하고, 동물이수용체폴리펩타이드복합물에특이적으로결합하여테스트화합물에반응하는지를측정하기위해사용될수있다. 본발명의벡터로형질감염또는감염된동물은특히특이적수용체또는수용체세트에결합할수있는미각

79 자극을확인하고특성을부여하기위한분석에특히유용하다. 인간미각수용체서열을발현시키는그와같은 벡터 - 감염된동물은마각자극의생체내스크리닝, 및예를들어, 세포생리 ( 예를들어, 미각뉴런 ), CNS, 또 는행동에대한이의효과를위해사용될수있다. [0447] 개별적으로또는라이브러리로서핵산및벡터를감염 / 발현시키기위한수단은선행기술에공지되어있다. 다 양한개별세포, 기관, 또는전체동물파라미터는다양한수단에의해측정될수있다. 본발명의 T2R 서열은 예를들어감염인자, 예를들어, 아데노바이러스발현벡터에의한전달로동물미각조직에서발현될수있다. [0448] [0449] [0450] 내생적미각수용체유전자는기능적인것으로남아있을수있고, 야생형 ( 본래의 ) 활성은여전히존재할수있다. 다른상황에서, 모든미각수용체활성이도입된외생적하이브리드수용체에의한것이바람직한경우에, 녹아웃라인 (knockout line) 의사용이바람직하다. 비인간형질전환동물의구성, 및형질변환된세포를산출하기위한재조합구성의선택및준비를위한방법은선행기술에공지되어있다. " 녹아웃 (knockout)" 세포및동물의구성은, 포유동물세포중특정유전자의발현의수준은억제될, 유전자의 DNA 서열의어떤부분을방해하는데도움이되는신규 DNA 서열을게놈에도입함으로써완전히폐기되거나감소될수있다는전제를기초로한다. 또한, " 유전자트랩 (trap) 삽입 " 은숙주유전자를파괴시키기위해사용될수있고, 마우스배아줄기 (ES) 세포는녹아웃형질전환동물을생산하기위해사용될수있다 ( 참조, 예를들어, Holzschu, Transgenic Res 6: (1997)). 외생적인것의삽입은전형적으로상보적핵산서열사이의동족재조합에의한다. 외생적서열은변형될표적유전자의일부, 예컨대엑소닉 (exonic), 인트로닉 (intronic) 또는전사조절서열, 또는표적유전자의발현의수준에영향을미칠수있는어떤게놈서열 ; 또는이의조합이다. 다능성배아줄기세포중동족재조합을통한유전자표적으로관심을끄는게놈서열을정밀하게변형할수있다. 어떤기술은녹아웃동물을만들고, 스크리닝하고, 번식시키기위해사용될수있다. 예를들어, 참고, Bijvoet, Hum. Mol. Genet. 7:53-62 (1998); Moreadith, J. Mol. Med. 75: (1997); Tojo, Cytotechnology 19: (1995); Mudgett, Methods Mol. Biol. 48: (1995); Longo, Transgenic Res. 6: (1997); U.S. 특허 Nos. 5,616,491; 5,464,764; 5,631,153; 5,487,992; 5,627,059; 5,272,071; WO 91/09955; WO 93/09222; WO 96/29411; WO 95/31560; WO 91/ 본발명의핵산은 " 녹아웃 " 인간세포및이의자손을생산하기위한시약으로서또한사용될수있다. 마찬가지로, 본발명의핵산은또한마우스에서 " 녹아웃인스 (knock-ins)" 를생산하기위한시약으로서사용될수있다. 인간또는래트 T2R 유전자서열은마우스게놈에서상동체 T2R 를대체할수있다. 이런식으로, 인간또는래트 T2R 를발현시키는마우스가생산된다. 그다음, 이마우스는인간또는래트 T2R 의기능을분석하고그와같은 T2R 에대한리간드를확인하기위해사용될수있다. [0451] [0452] [0453] [0454] 조절제 T2R 패밀리구성원의조절제로서테스트된화합물은어떤작은화합물, 또는생물학적실체, 예컨대단백질, 당, 핵산또는지질일수있다. 대안적으로, 조절제는 T2R 패밀리구성원의유전적으로변경된버젼일수있다. 전형적으로, 테스트화합물은작은화학분자및펩타이드일수있다. 본질적으로어떤화합물은본발명의분석에서의잠재적인조절제또는리간드로서사용될수있지만, 대부분의화합물은종종사용된수성또는유기 ( 특히 DMSO 계 ) 용액에용해될수있다. 분석은분석단계를자동화하고화합물을어떤편리한공급원으로부터분석 ( 이는전형적으로병행하여 ( 예를들어, 로봇이용분석에서미량역가판상의미량역가포맷으로 ) 수행됨 ) 까지제공하여큰화학라이브러리를스크리닝하기위해설계될수있다. 하기를포함하는, 화합물의많은공급자가있다는것을인식할것이다 : Sigma (St. Louis, Mo.), Aldrich (St. Louis, Mo.), Sigma- Aldrich (St. Louis, Mo.), FlukChemika-Biochemica Analytika (Buchs, Switzerland) 등. 하나의구현예에서, 고효율스크리닝 (screening) 방법은수많은잠재적인치료화합물 ( 잠재적인조절제또는리간드화합물 ) 을함유하는조합적인화학또는펩타이드라이브러리을제공함을수반한다. 그다음, 그와같은 " 조합화학라이브러리 " 또는 " 리간드라이브러리 " 는, 본명세서에기재된바와같이, 목적하는특징적인활성을나타내는라이브러리구성원 ( 특정화학종또는서브클래스 ) 를확인하기위해하나이상의분석에서스크리닝된다. 따라서, 확인된화합물은종래의 " 선도화합물 " 로서쓰일수있거나, 그자체로잠재적인또는실제적인소비자생산물로서사용될수있다. 조합화학라이브러리는수많은화학 " 빌딩블록 (building block)" 을조합하여화학합성또는생물합성에의

80 해산출된다양한화합물의선택이다. 예를들어, 선형조합화학라이브러리, 예컨대폴리펩타이드라이브러리는소정의화합물길이 ( 폴리펩타이드화합물중아미노산의수 ) 에대한모든가능한방법으로화학빌딩블록 ( 아미노산 ) 의세트를조합하여형성된다. 수많은화합물은화학빌딩블록의그와같은조합적인혼합을통해합성될수있다. [0455] [0456] [0457] 조합화학라이브러리의제조및스크리닝은당업자에게공지되어있다. 그와같은조합화학라이브러리는펩타이드라이브러리를포함하지만이에한정되지는않는다 ( 참조, 예를들어, U.S. 특허 No. 5,010,175, Furka, Int. J. Pept. Prot. Res., 37: (1991) 및 Houghton 등, Nature, 354:84-88 (1991)). 화학다양성라이브러리를산출하기위한다른화학이또한사용될수있다. 그와같은화학은하기를포함하지만, 이들로한정되지않는다 : 텝토이드 ( 예를들어, WO 91/19735), 암호화된펩타이드 ( 예를들어, WO 93/20242), 랜덤바이오-올리고머 ( 예를들어, WO 92/00091), 벤조디아제핀 ( 예를들어, U.S. 특허 No. 5,288,514), 다이버조머 (diversomer), 예컨대히단토인, 벤조디아제핀및다이펩타이드 (Hobbs 등, PNAS., 90: (1993)), 비닐위치폴리펩타이드 (Hagihara 등, J. Amer. Chem. Soc., 114:6568 (1992)), 글로코스골격을갖는비 ( 非 ) 펩타이드펩타이도모방체 (Hirschmann 등, J. Amer. Chem. Soc., 114: (1992)), 작은화합물라이브러리의유사한유기합성 (Chen 등, J. Amer. Chem. Soc., 116:2661 (1994)), 올리고카바메이트 (Cho 등, Science, 261:1303 (1993)), 펩티딜포스포네이트 (Campbell 등, J. Org. Chem., 59:658 (1994)), 핵산라이브러리 (Ausubel, Berger, 및 Sambrook, all supra), 펩타이드핵산라이브러리 (U.S. 특허 No. 5,539,083), 항체라이브러리 (Vaughn 등, Nature Biotechnology, 14(3): (1996) 및 PCT/US96/10287), 탄수화물라이브러리 (Liang 등, Science, 274: (1996) 및 U.S. 특허 No. 5,593,853), 작은유기분자라이브러리 ( 벤조디아제핀, Baum, C&EN, Jan 18, page 33 (1993); 티아졸리디논및메타티아자논, U.S. 특허 No. 5,549,974; 피롤리딘, U.S. 특허 Nos. 5,525,735 및 5,519,134; 모르폴리노화합물, U.S. 특허 No. 5,506,337; 벤조디아제핀, 5,288,514 등 ). 조합라이브러리를만들기위한설계는상업적으로이용할수있다 : ( 참조, 예를들어, 357 MPS, 390 MPS (Advanced Chem Tech, Louisville Ky.), Symphony (Rainin, Woburn, Mass.), 433A (Applied Biosystems, Foster City, Calif.), 9050 Plus (Millipore, Bedford, Mass.)). 또한, 수많은조합라이브러리는자체로상업적으로이용할수있다 ( 참조, 예를들어, ComGenex, Princeton, N.J.; Tripos, Inc., St. Louis, Mo.; 3D Pharmaceuticals, Exton, Pa.; Martek Biosciences; Columbia, Md. 등 ). 본발명의하나의측면에서, T2R 조절제는어떤식품, 과자류, 약제학적조성물, 또는이의성분에사용하여제품, 조성물또는성분의미각을원하는방식으로조절할수있다. 예를들어, 쓴맛을향상시키기위한 T2R 조절제를첨가하여쓴맛을제품또는조성물에제공할수있지만, 쓴맛을차단하는 T2R 조절제를첨가하여제품또는조성물의쓴맛을차단할수있다. 또한, 본발명은식품, 음료, 화장품및의약에발견된쓴맛화합물을확인하고이의감소된양을갖는미각개선식품, 음료및의약을생산하는수단을제공한다. [0458] [0459] [0460] [0461] [0462] 본발명에의해확인된화합물의용도본발명에따라확인된화합물을식품, 음료, 화장품또는의약조성물에첨가하여커피및관련식품, 음료및의약또는구조적으로관련된화합물또는다른쓴맛화합물, 예를들어, 쓴맛감지를유도하는식품및음료또는의약또는화장품에발견된화합물에존재하는쓴맛화합물에의해 ht2r8 및 / 또는 ht2r14 중적어도하나의활성에의해유발된쓴맛을조절, 바람직하게는차단할수있다. 특히, 넓은범위의길항물질특성을기초로한화합물 C, 및이의유사체는인간또는동물에의해소비되는어떤식품, 음료, 의약또는물질에서의첨가제로서사용될수있고, 여기서, 쓴맛은바람직하게는완화된다. 주어진화합물 C 의특성이주어지면, 이들물질은특이적쓴맛리간드, 예컨대 ht2r3, 7, 10, 14, 16, 44, 51, 55, 61, 63, 64, 65, 또는 71 와상호작용하고 / 하거나 ht2r5, 9, 13, 54, 67 및 75, 또는이의조합과상호작용하는것으로공지되거나쓴맛수용체선택성이미확인된쓴맛화합물을함유하는쓴맛리간드를함유할수있다. 특히바람직한적용은다수의쓴맛수용체를활성화시키는화합물을함유하는조성물이다. 또한, 화합물 C 을포함하는대상체화합물은, 화합물 C 가쓴맛을차단하거나억제하는쓴맛화합물을확인하기위해쓴맛뿐만아니라경쟁적결합및기능적분석에사용될수있다. 상기에서언급한바와같이, 바람직하게는, 대상체 T2R 세포기반분석에서확인된화합물의미각조절특성, 바람직하게는쓴맛차단특성은인간또는동물미각테스트, 바람직하게는인간미각테스트에서확인될것이

81 다. [0463] [0464] [0465] [0466] [0467] 키트 T2R 유전자및이의동족체는미각수용체세포의확인, 포렌식스 (forensics) 및부계결정, 및미각전달의검사를위한유용한도구이다. T2R 핵산, 예컨대 T2R 프로브및프라이머로특이적으로하이브리드화하는 T2R 패밀리구성원특이적시약, 및 T2R 단백질, 예를들어, T2R 항체로특이적으로결합하는 T2R 특이적시약은미각세포발현및미각전달조절을검사하기위해사용된다. 샘플중 T2R 패밀리구성원에대한 DNA 및 RNA 의존재에대한핵산분석은당업자에게공지된수많은기술, 예컨대써던 (southern) 분석, 노던 (northern) 분석, 닷블롯 (dot blot), RNase 보호, S1 분석, 증폭기술, 예컨대 PCR, 및인시투 (in situ) 하이브리드화를포함한다. 인시투하이브리드화에서, 예를들어, 표적핵산은, 차후의번역및분석에대한세포형태를보존하면서, 세포내의하이브리드화에이용할수있도록세포환경으로부터자유롭게된다. 하기논문은인시투하이브리드화의기술의개략을제공한다 : Singer 등, Biotchniques, 4: (1986); Haase 등, Methods in Virology, vol. VII, (1984); 및 Names 등, eds., Nucleic Acid Hybridization: A Practical Approach (1987). 또한, T2R 단백질은상기에기재된다양한면역분석기술로검출될수있다. 테스트샘플은전형적으로양성대조군 ( 예를들어, 재조합 T2R 단백질을발현시키는샘플 ) 및음성대조군모두에비교된다. 본발명은또한 T2R 패밀리구성원의조절제를스크리닝하는키트를제공한다. 그와같은키트는쉽게이용가능한물질및시약로부터제조될수있다. 예를들어, 그와같은키트는어떤하나이상의하기물질을포함할수있다 : T2R 핵산또는단백질, 반응튜브, 및 T2R 활성을테스트하기위한설명서. 임의로, 키트는기능적 T2R 폴리펩타이드를함유한다. 다양한키트및성분은키트의장래사용자및사용자의특별한필요에의존하여본발명에따라제조될수있다. 이제본발명을전체적으로기재하였기때문에, 동일한것은하기실시예를참고로더쉽게이해될것이고, 상기실시예는설명하기위한것이지제한하기위한것은아니다. 다양한변경및변화는본발명의정신및범위를벗어나지않으면서본명세서의개시된예시적인구현예에대해행해질수있다. [0468] [0469] [0470] [0471] 실시예실시예 1 ht2r8 및 ht2r14 는쓴맛커피분획에의해활성화된다커피로부터의부분정제쓴맛분획을, 이전특허출원에기재된바와같이일시적으로형질감염된 HEK 세포에서 25개의인간 T2R 를스크리닝하기위해사용했다. 간단히말하면 ( 참고로본명세서에통합되어있는미국특허출원 No. 2003/ 에더욱상세히검토한바와같이 ), 큰 T-세포항원및 G15 단백질 (HEK-G15) 을안정 하게발현시키는인간배아신장세포를 ( 예를들어, Ca 2+ 포스페이트또는지질기반시스템의사용에의해 ) ht2r 발현플라스미드로일시적으로형질감염했다. 추가로, 다른 HEK-G15 세포주를다른인간 T2R 로일시적으로형질감염했다. 그후, 형광이용분석을, 일시적형질감염된세포에서칼슘농도의변화를검출하기위해사용했다. 테스트화합물 ( 들 ) 과형질감염된세포와의상호작용은 PLC 의활성에이르는신호절단케스케이드, 및칼슘민감성형광염료를사용하여검출된형광의증가로귀결되는세포내칼슘농도의차후의증가를유도한다. 이들변화를, 예를들어형광현미경검사및적합하게설계된소프트웨어 ( 예컨대, Imaging Workstation, Axon) 를사용하여모니터했다. [0472] 커피분획은분석을방해하는고수준의형광을갖는다. 상기방해를극복하기위해, 수많은청색염료를커피분획으로부터형광을차단하는능력에대해테스트했다. 도 1 에보여진바와같이, 커피분획은일시적으로형질감염된세포를사용하여칼륨이미징분석으로 ht2r8 및 ht2r14 을활성화했다. 도 1의실험에사용된청색염료는 1.9 mm 에서 FD&C 1 이다. 몇개의다른 ht2r 은또한이러한커피분획에의해활성화되는것으로보였다. 상이한청색염료로, ht2r 의상이한조합은활성화된다 ( 표 1). 그러나, ht2r8 및 ht2r14 는커피분획에반응함에따라꾸준히늘어나고, 이들 2개의수용체의활성은커피분획투여에따른다 ( 도 2). 도 2의실험에사용된청색염료는트립탄블루 (tryptan blue) 였다

82 표 1 [0473] [0474] 이분석을사용하여, ht2r8 및 ht2r14를발현시키는, 커피로부터세포로의쓴맛분획의첨가는세포내 G 단백질을활성화시켰다는것이발견되었다. 반대로, 동일한분석을사용하여, 커피로부터의쓴맛분획은다른 ht2r 로일시적으로형질감염된 HEK-G15 세포를특이적으로활성화시키지않았다. 이실험은, 미각수용체 ht2r8 및 ht2r14 이커피에존재하는쓴맛화합물 ( 들 ) 에특이적으로반응한다는것을뒷받침한다. [0475] [0476] [0477] 실시예 2 ht2r8 및 ht2r14 의길항물질의확인길항물질을확인하기위해, 무차별적인키메라 G16g44 단백질과함께 ht2r8 및 ht2r14 을각각안정하게발현시키는세포주를이전특허출원에기재된바에따라산출했다. 고효율분석을, 안정한세포주및 FLIPR (Fluorescent Imaging Plate Reader) 을사용하여확립했다. ht2r8 또는 ht2r14 의작용물질을, 각최대활성의 70 내지 80% 까지수용체를활성화시키기위해사용했다. ht2r8 에대해, 사용된작용물질은안드로그라폴리드 (200 μm) 였고 ; ht2r14 에대해서는, 아리스톨로킥산 (3 μm) 였다. 길항물질을확인하기위해, 다양한화학구조를갖는화합물을작용물질과함께첨가했다. 수용체활성의통계적으로상당한감소를야기하는화합물을함께풀링 (pooling) 하고, 투여에따른억제곡선으로재확인한다. 화합물 A 및화합물 B 를 ht2r8 길항물질로서확인했다 ( 도 3). 화합물 C 를 ht2r14 길항물질로서확인했다 ( 도 4). [0478] [0479] [0480] [0481] [0482] 실시예 2a ht2r8 및 ht2r14 길항물질의조합은커피의쓴맛을감소시킨다미각테스트를, 4 내지 5명의패널의미각패널로대안적인강제선택방법을사용하여커피분획및 2종의인스턴트커피 ( 중배전두및강배전두 ) 에서 ht2r8 및 ht2r14 길항물질의조합으로수행했다. 길항물질을갖는커피샘플을길항물질없는동일한샘플과함께미각패널에게주었고, 패널에게 2개중더쓴맛샘플을확인할수있는지를물었다. 표 2에보여진바와같이, 패널은길항물질을갖는샘풀보다더쓴맛으로서길항물질없는커피분획샘플을꾸준히확인했는데, 이는길항물질이커피분획의쓴맛을감소시켰다는것을나타낸다. 마찬가지로, 표3에보여진바와같이, 길항물질은 2개타입의인스턴트커피의쓴맛을감소시켰다. 본실시예의미각테스트에의해설명된바와같이, 쓴맛을보이는조성물 ( 예를들어, 식품, 음료및 / 또는의약 ) 중쓴맛의감지는 ht2r8 및 / 또는 ht2r14 의길항물질의그와같은조성물에의혼입에의해감소또는제거될수있다. 개별길항물질의기여를측정하기위해, 미각테스트를, 화합물 C 를갖는중배전두인스턴트커피로수행했다. 표 4에서보는바와같이, ht2r14 길항물질 ( 화합물 C) 는자력으로본실시예의커피에서의쓴맛을충분히감소시킨다

83 표 2 [0483] 표 3 [0484] 표 4 [0485] [0486] [0487] [0488] [0489] 실시예 3 화합물 C 는널리작용하는더쓴맛수용체길항물질이다상기의실시예 2 는, 화합물 C 가 ht2r14 를사용하는고효율스크리닝분석에의해확인된인간 T2R 길항물질이라는것을알려준다. 추가실험은, 화합물 C 가 13개의인간 T2R 에대하여널리맞추어진길항물질이고, 그보다는덜하지만 6개의다른인간 T2R 에대하여반대로작용한다. 더욱이, 미각테스트중의이화합물은수많은다양한쓴맛물질에의해유도된쓴맛강도를차단한다. 구체적으로, 화합물 C 의억제선택성을평가하기위해, 이화합물을, Senomyx 에의해탈오펀된 (deorphaned) 22 인간 T2R 대해테스트했다. 이들인간 T2R 을활성화시키는이들수용체및쓴맛리간드는참고로본명세서에통합되어있는이전특허출원에보고되어있다. 이들 22 인간 T2R 는 ht2r1, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 13,

84 14, 16, 44, 51, 54, 55, 61, 63, 64, 65, 67, 71 및 75 이다. 모든이들 T2R 의아미노산및핵산서열은이들초기특허출원에서발견될수있다. 이들인간 T2R 각각을, 무차별적인 G 단백질 G16g44 을안정하게발현시키는 HEK293 세포로개별적이고일시적으로트랩스펙션하고, 기능적분석을이들동일한특허출원에개시된바와같이이들수용체를사용하여수행했다. 이들실험에서, 각수용체를, 특정 T2R 를활성화시키기위해이전설명한쓴맛분자로부터선택된리간드중의하나로활성화했다. 리간드를 EC80 농도수준에서사용했다. 이용된쓴맛리간드의목록및테스트된리간드농도를본실시예에표 5에나타나있다. [0490] [0491] [0492] [0493] [0494] 더욱이, 수용체분석에서이화합물의시험관내할성을확인하기위해, 본발명자들은생체내화합물의효과를측정하기위해쌍을이룬비교미각테스트를수행했다. 미각패널에게화합물 C 의유무에따라쓴맛물질의맛을보고어느샘플이더쓴지를확인하기를요청했다. 각패널은다중쌍의맛을보고샘플의크기를증가시키고, 그결과를, 적당한통계적방법으로분석했다. 화합물 C 유무에따른샘플의순서를무작위로고르고대등하게했다. 이화합물의넓은길항물질특성을확립하기위해서, 다수의쓴맛수용체를활성화시키는것으로공지된쓴맛리간드및특이적 ht2r 을활성화시키기위해아직증명되지않은쓴맛리간드에의해유도된쓴만뿐만아니라다양한쓴맛리간드에의해유도된쓴맛을차단하는능력에대해서테스트했다. 쓴맛수용체를활성화시키는것으로공지된몇개의쓴맛분자를, 화합물 C 에의해활성이억제되는지에대해서테스트했다. 구체적으로, 살리신은 ht2r16 를활성화시키는쓴맛분자이고, 미각테스트결과는, 40 μm 에서의화합물 C 가쓴맛을감소시킬수있다는것을보여주었다. 페닐티오우레아는 ht2r51 를활성화시키는쓴맛분자이고, 화합물 C 는 25 μm 에서쓴맛을감소시켰다. 다수의 T2R 를활성화시킬수있는몇개의쓴맛분자를, 화합물 C 로유사하게테스트했다. 이들분자의일부에대한쓴맛수용체의활성을화합물 C 로부분적으로억제했다. 오메프라졸은 ht2r10, 14 및 75 을활성화시키는쓴맛분자이다. 쓴맛이다수의쓴맛수용체를수반할수있을지라도, 쓴맛은또한화합물 C 에의해감지할수있을정도로감소되었다. 레바우디오사이드 A 는적어도 7개의인간 T2R 을활성화시키는강한쓴맛을갖는천연감미제가다. 이의쓴맛은또한화합물 C 에의해감소한다. 또한, 화합물 C 는일부화합물, 예컨대덱스트로메트로판및디펜히드라민에대해쓴맛을억제했고, 여기서, 상호작용하는수용체 ( 들 ) 은공지되어있지않다. 이들화합물에대한화합물 C 의효과를테스트하고이의쓴맛이또한감소한다는것을발견했다. 상기와관련하여, 도 5는실험결과를나타내고있고, 여기서, 화합물 C 를상이한작용물질화합물로테스트했다. 억제활성은화합물 C 의존재에서수용체활성의감소로나타낸다. 도 5는, 13개의상이한 ht2r 이화합물 C 에의해상당히 (30% 초과 ) 억제되었다는것을나타내고있다. 이들 13개의 ht2r 는 ht2r3, 7, 10, 14, 16, 44, 51, 55, 61, 63, 64, 65, 및 71 이다. ht2r5, 9, 13, 54, 67 및 75 를포함하는 6개의다른수용체가, 적은정도지만또한억제되었다

85 표 5 [0495] [0496] [0497] [0498] [0499] 실시예 4 ht2r8 길항물질 : 본발명의화합물의제조본발명에따른예시적인화합물을하기와같이합성한다. 실시예 4-1: N-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 피콜린아미드. [0500] [0501] 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-아민하이드로클로라이드 ( 실시예 4-1a) (400 mg, 2.1 mmol), 피콜린산 (256 mg, 2.1 mmol), 및 HOBt (388 mg, 2.50 mmol) 을 DCM (7 ml) 에서혼합했다. 반응물을트리에틸아민 (670 ml, 4.8 mmol) 로처리하고, 15분동안실온에서질소대기하에서교반했다. EDC (598 mg, 3.1 mmol) 을첨가하고, 반응물을추가 4시간동안교반했다. 그다음, 반응물을디클로로메탄 (5 ml) 로희석하고, 포화탄산수소나트륨수용액 (5 ml, 2x, 그다음, 포화염화나트륨수용액 (5 ml) 로세정했다. 유기층을수집, 건조시키고, 여과했다. 용매를진공하에서제거했다. 조생성물을 EtOH (5 ml) 에서재현탁시키고, 역상 HPLC ( 물중 5%-95% ACN: 25분구배 ) 로정제했다. 순수분획을배합하고, 농축하여 N-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 피콜린아미드 (372 mg, 60%) 를백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 2.21(s, 3H), 2.44(s, 3H), 5.05(s, 2H), (m, 1H), 7.59(s, 1H), (dt, J=14, 2Hz, 1H), 8.07(s, 1H), (d, J=8Hz, 1H), (m, 1H), 9.83(bs, 1H). LC/MS; C15H15N5O2 에대해계산된 [M+H]; 예상치 297.1; 실측치 융점 : [0502] 화합물은 0.57 μm 의, ht2r8 쓴맛수용체에대한 IC 50 를가졌다. [0503] [0504] 실시예 4-1a: 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-아민하이드로클로라이드 3급-부틸 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일카바메이트( 실시예 4-1b) (592 mg, 2 mmol) 을실온에서 2시간동안디옥산 (20 ml) 중 4N HCl 의용액에서교반했다. 용매를감압하에서제거하고, 잔류물을 1/1 에틸아세테이트 / 헥산 (30 ml) 의 1:1 혼합물에서취하고, 농축 (2회) 시켰다. 고형물을헥산으로분쇄하고,

86 여과로수집하여 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 아민하이드로클로라이드 (500 mg, 99%) 를백 색고형물로서얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 2.11(s, 3H), 2.38(s, 3H), 5.16(s, 2H), 7.51(s, 1H), 8.03(s, 1H), 10.27(bs, 3H). [0505] [0506] 실시예 4-1b: 3급-부틸 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일카바메이트 3,5-디메틸-4-((4-니트로-1H-피라졸-1- 일 ) 메틸 ) 이속사졸 ( 실시예 4-1c) (14.6 g, 66 mmol), Boc 무수물, 및 10% Pd/C (3.8g) 을 1기압의수소하에서 MeOH (400 ml) 에서 16시간동안실온에서교반했다. 혼합물을여과하고, 용액을감압하에서제거했다. 잔류물을실리카겔크로마토그래피 ( 헥산중 20% 에틸아세테이트 ) 로정제하여 3급-부틸 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일카바메이트 (12.7 g, 66%) 를옅은분홍색고형물로 서얻었다. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 1.41 (s, 9H), 2.10(s, 3H), 2.32(s, 3H), 4.90(s, 2H), 6.19(bs, 1H), 7.19(s, 1H), 7.50(s, 1H). MS 293 (MH + ). [0507] [0508] 실시예 4-1c: 3,5-디메틸-4-((4-니트로-1H-피라졸-1- 일 ) 메틸 ) 이속사졸빙수조를통해 0 로냉각된 DMF (80 ml) 중 4-니트로-1H-피라졸 ( 실시예 4-1d) (3.8 g, 34 mmol) 에, t-buok (4.2 g, 38 mmol) 를첨가했다. 염기의첨가후, 빙조를제거하고, 혼합물을 30분동안교반하고, 그다음, 4- ( 클로로메틸 )-3,5-디메틸이속사졸 (5 g, 34 mmol) 을첨가했다. 그다음, 반응물을 16시간동안환류시키고, 그다음, 실온으로냉각했다. 물을반응혼합물에첨가하고, 형성된침전물을여과로수집했다. 침전물을추가물로세정하고, 그다음, 고진공하에서건조시켜 3,5-디메틸-4-((4-니트로-1H-피라졸-1-일 ) 메틸 ) 이속사졸 (5.8 g, 78%) 를담황색고형물로서로서얻었다. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 2.23(s, 3H), 2.46(s, 3H), 5.08(s, 2H), 8.02(s, 1H), 8.08(s, 1H). [0509] [0510] 실시예 4-1d: 4-니트로-1H-피라졸피라졸 (10 g, 147 mmol) 을, 빙수조를통해 50 미만으로내부반응온도를유지하면서진한황산 (100 ml) 에나누어서첨가했다. 그다음, 진한질산 (10 ml) 을, 빙수조를통해 50 미만으로내부반응온도를유지하면서적가했다. 빙수조를제거하고, 반응물을 60 로가열하고, 4시간동안교반했다. 반응물을빙수조를통해냉각하고, 18 N 수산화나트륨수용액 (150 ml) 으로염기성약 ph 8 을만들었다. 백색고형물로서침전된생성물을여과로수집하고, 물로세정하고, 고진공하에서건조시켜 4-니트로-1H-피라졸 (7g, 42%) 를백색고형물 로서얻었다. 13 C NMR (100 MHz, CDCl 3 ): δ 126.4, [0511] 실시예 4-2: 3- 클로로 -N-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-4-( 메틸설포닐 ) 티오펜 -2- 카르복 사미드 [0512] [0513] 빙수조를통해 0 로냉각된 DCM (20 ml) 중 ((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 아민하이드로클 로라이드 ( 실시예 4-1a) (500 mg, 2 mmol) 의교반혼합물에트리에틸아민 (600 mg, 6 mmol) 을첨가했다. 혼합 물을모든고형물이용액에있게될때까지교반했다 ( 약 10 분 ). 2 ml CH 3 CN 중 3- 클로로 -4-( 메틸설포닐 ) 티오펜 -2-카보닐클로라이드 (543 mg, 2.1 mmol) 을 0 에서주사기를통해유리아민에첨가했다. 빙조를제거하고, 혼합물을 2시간동안교반했다. 반응물을디클로로메탄 (100 ml) 으로희석하고, 유기상을물 (200 ml) 로세정했다. 유기층을황산나트륨상에서건조시키고, 여과하고, 감압하에서농축했다. 고형물을에틸아세테이트 / 헥산 (1/5) 로분쇄하여 3-클로로-N-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4- 일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-4 ( 메틸설

87 포닐 ) 티오펜 -2- 카르복사미드 (375 mg, 45%) 를백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 2.20(s, 3H), 2.43(s, 4H), 3.22(s, 3H), 5.05(s, 2H), 7.57(s, 1H), 7.94(s, 1H), 8.41(s, 1H), 8.59(bs, 1H). LC/MS; [M+H] 융점 : [0514] 화합물은 2.09 μm 의, ht2r8 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0515] 실시예 4-3: (S)-N-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2- 페닐프로판아미드. [0516] [0517] 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-아민하이드로클로라이드 ( 실시예 4-1a) (200 mg, 1 mmol), (S)-2-페닐프로피온산 (156 mg, 1 mmol), 및 PyBop (650 mg, 1.3 mmol) 을 DMF (4 ml), 그다음트리에틸아민 (0.3 ml, 2.1 mmol) 에첨가했다. 반응물을 4시간동안실온에서질소대기하에서교반한다음, 에틸아세테이트 (20 ml) 로희석하고, 포화탄산수소나트륨수용액 (2x15 ml), 그다음포화염화나트륨수용액 (15 ml) 으로세정했다. 유기상을건조, 여과하고, 로토바프 (rotovap) 상에서농축했다. 조생성물을메탄올 (3 ml) 에서재현탁시키고, 역상 HPLC ( 물중 5% - 95% ACN: 25분구배 ) 로정제했다. 순수한생성물을함유하는분획을농축하여 (S)-N-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-2-페닐프로판아미드 (200 mg, 60%) 를백색 고형물로서얻었다. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 1.36(d, J=7.2,Hz, 3H), 2.09(s, 3H), 2.36(s, 3H), (m, 1H), 5.05(s, 2H), (m, 5H), 7.37(s, 1H), 7.90(s, 1H), 10.05(s, 1H). MS 325 (M+H). 융 점 [0518] 화합물은 0.41 μm 의, ht2r8 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0519] 실시예 4-4 : N-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2-(4- 하이드록시 -3,5- 디메톡시페닐 ) 아세 트아미드. [0520] [0521] 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-아민하이드로클로라이드 ( 실시예 4-1a) (376 mg, 1.7 mmol), 2-(4-하이드록시-3,5-디메톡시페닐 ) 아세트산 (350 mg, 1.7 mmol), PyBop (1 g, 2 mmol) 및트리에틸아민 (605 mg, 6 mmol) 을함께 DMF (10 ml) 에서함께실온에서 2시간동안교반했다. 반응혼합물을수성 1N HCl (100 ml) 으로희석하고, DCM (3x, 75 ml) 로추출했다. 배합된유기추출물을황산나트륨상에서건조시키고, 여과하고, 로토바프상에서농축했다. 잔류물을실리카겔크로마토그래피 ( 헥산중 30% 에틸아세테이트 ) 로정제하여 N-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-2-(4-하이드록시-3,5-디메톡시페닐 ) 아세트아미드 (189 mg, 29%) 를백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz) δ 2.10(s, 3H), 2.36(s, 3H), 3.40(s, 2H), 3.70(s, 6H), 5.07(s, 2H), 6.53(s, 2H), 7.39(s, 1H), 7.92(s, 1H), 8.18(s, 1H), 10.03(s, 1H). LC/MS; C19H22N4O5 에대해계산된 [M+H]; 예상치 ; 실측치 융점 : [0522] 화합물은 0.46 μm 의, ht2r8 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다

88 [0523] 실시예 4-5 : N-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2- 페닐프로판아미드. [0524] [0525] 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-아민하이드로클로라이드 ( 실시예 4-1a) (300 mg, 1.3 mmol), 2-페닐프로판산 (225 mg, 1.5 mmol), 트리에틸아민 (300 mg, 3 mmol), DMAP (61 mg, 0.5 mmol), 및 EDC (386 mg, 2 mmol) 을함께 DCM (10 ml) 에서실온에서 4시간동안교반했다. 반응혼합물을수성 1N HCl (100 ml) 로희석하고, DCM (3x, 75 ml) 로추출했다. 배합된유기추출물을황산나트륨상에서건조시키고, 여과하고, 로토바프상에서농축했다. 잔류물을실리카겔크로마토그래피 ( 헥산중 30% 에틸아세테이트 ) 로정제하여 N-(1- ((3,5-디메틸이속사졸-4-일) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-2-페닐프로판아미드 (272 mg, 81%) 를백색고형물로서얻었 다. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz) δ 1.36(d, 3H, J=7.2Hz), 2.10(s, 3H), 2.37(s, 3H), 3.70(m, 1H, J=6.8Hz), 5.06(s, 2H), 7.20(t, 1H, J=8.4Hz), (m, 4H), 7.38(s, 1H), 7.91(s, 1H), 10.10(s, 1H). LC/MS; C18H20N4O2 에대해계산된 [M+H]; 예상치 ; 실측치 융점 : [0526] 화합물은 0.32 μm 의, ht2r8 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0527] 실시예 4-6: N-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2- 페닐아세트아미드. [0528] [0529] 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-아민하이드로클로라이드염 ( 실시예 4-1a) (230 mg, 1 mmol) 및트리에틸아민 (300 mg, 3 mmol) 을빙수조를통해 0 로냉각된 DCM (10 ml) 에서교반했다. 2-페닐아세틸클로라이드 (184 mg, 1.3 mmol) 을교반반응혼합물에적가했다. 첨가가완결되었을때, 빙조를제거하고, 반응물을 1시간동안교반했다. 혼합물을 DCM (50 ml) 로희석하고, 1N 수성 HCl (100 ml), 그다음, 1N 수성 NaOH (100 ml), 그다음물 (100 ml) 로세정했다. 배합된유기추출물을황산나트륨상에서건조시키고, 여과하고, 용매를로토바프상에서제거했다. 수득한잔류물을실리카겔크로마토그래피 ( 헥산중 50% 에틸아세테이트 ) 로정제하여에틸아세테이트 / 헥산 (1/9) 에서분쇄된 210 mg 의고형생성물을얻고 N-(1-((3,5-디메틸이 속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-2-페닐아세트아미드 (188 mg, 68%) 를백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 2.15(s, 3H), 2.38(s, 3H), 3.69(s, 2H), 4.97(s, 2H), 7.15 b(s, 1H), (m, 6H), 7.84(s, 1H). LC/MS; C17H18N4O2 에대해계산된 [M+H]; 예상치 ; 실측치 융점 : [0530] 화합물은 0.53 μm 의, ht2r8 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0531] 실시예 4-7: N-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-3- 메톡시벤즈아미드. [0532] [0533] 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-아민하이드로클로라이드 ( 실시예 4-1a) (300 mg, 1.3 mmol), 3-메톡시벤조산 (172 mg, 1.3 mmol), EDC (386 mg, 2 mmol), 및트리에틸아민 (303 mg, 3 mmol) 을 DCM (5 ml) 에서실온에서 6시간동안. 반응물을 DCM (50 ml) 로희석하고, 유기상을수성 0.1 N HCL (150 ml), 그다음, 수성 1N NaOH (150 ml) 로세정했다. 유기층을황산나트륨상에서건조시키고, 여과하고, 로토바프상에서농축했다. 조생성물을실리카겔크로마토그래피 ( 헥산중 40% 에틸아세테이트 ) 로정제하여 225 mg 의회색이도는백색고형물로서얻었다. 고형물을에틸아세테이트 / 헥산 (1/9) 으로분쇄하고, 백색고형물을여과로수집

89 했다. 순수생성물을무수에탄올에용해시키고, 로토바프상에서농축하여 (4x, 25 ml) N-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-3-메톡시벤즈아미드 (185 mg, 43%) 를백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 2.20(s, 3H), 2.42(s, 3H), 3.85(s, 3H), 5.03(s, 2H), (m, 1H), (m, 2H), 7.41(m, 1H), 7.51(s, 1H), 7.93(bs, 1H), 8.03(s, 1H). LC/MS; C17H18N4O3 에대한계산된 [M+H]; 예상치 ; 실측치 융점 : [0534] 화합물은 0.39 μm 의, ht2r8 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0535] 실시예 4-8: N-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 벤조 [d][1,3] 디옥솔 -5- 카르복사미드 [0536] [0537] [0538] 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-아민하이드로클로라이드 ( 실시예 1a) (8 mg, 35 μmol) 및벤조 [d][1,3] 디옥솔-5-카르복실산 (7 mg, 42 μmol) 을각각 200 μl디메틸포름아미드에용해시켰다. Si-카보디이미드수지 (70 mg, 70 μmol) 을 1.2 ml 96웰그레니어플레이트 (Greiner plate) 에적재하고, 그다음, 아민및산을첨가했다. 하이드록시벤조트리아졸 (6 mg, 42 μmol) 을 100 μl디메틸포름아미드에용해시키고, 반응웰에첨가했다. 반응물을밤새실온에서흔들었다. 과량의카르복실산및하이드록시벤조트리아졸을제거하기위해, PS-트리스아민수지 (35 mg, 70 μmol) 을반응혼합물에첨가하고, 밤새실온에서흔들었다. 200 μl의아세토니트릴을반응웰에첨가하고, 1분동안흔들었다. 상부의맑은용액을새로운플레이트로이동시켰다. 추출공정을 2회초과반복했다. 용액을진공하에서증발시키고, 목적생성물을얻었다. 수율 6%. MS M+H 계산치 341.1, 실측치 화합물은 0.2 μm의, ht2r8 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0539] 실시예 4-9: N-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2,5- 디메톡시벤즈아미드 [0540] [0541] [0542] 2,5- 디메톡시벤조산및 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 아민하이드로클로라이드 ( 실시예 4-1a) 로부터실시예 4-8 과같이제조했다. 수율 13%. MS M+H 계산치 357.5, 실측치 화합물은 0.17 μm 의, ht2r8 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0543] 실시예 4-10: 3- 시아노 -N-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 벤즈아미드 [0544] [0545] [0546] 3- 시아노벤조산및 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 아민하이드로클로라이드 ( 실시예 4-1a) 로 부터실시예 4-8 과같이제조했다. 수율 15%. MS M+H 계산치 322.6, 실측치 화합물은 0.2 μm 의, ht2r8 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다

90 [0547] 실시예 4-11: N-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1- 페닐사이클로프로판카르복사미드 [0548] [0549] [0550] 1- 페닐사이클로프로판카르복실산및 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 아민하이드로클로라이드 ( 실시예 4-1a) 로부터실시예 4-8 과같이제조했다. 수율 6%. MS M+H 계산치 337.6, 실측치 화합물은 0.25 μm 의, ht2r8 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0551] 실시예 4-12: N-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-3- 페닐부탄아미드 [0552] [0553] [0554] 3- 페닐부타노산및 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 아민하이드로클로라이드 ( 실시예 4-1a) 로 부터실시예 4-8 과같이제조했다. 수율 6%. MS M+H 계산치 339.6, 실측치 화합물은 0.28 μm 의, ht2r8 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0555] 실시예 4-13: N-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1H- 피롤 -2- 카르복사미드 [0556] [0557] [0558] 1H- 피롤 -2- 카르복실산및 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 아민하이드로클로라이드 ( 실시예 4-1a) 로부터실시예 4-8 과같이제조했다. 수율 18%. MS M+H 계산치 286.6, 실측치 화합물은 0.57 μm 의, ht2r8 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0559] 실시예 4-14: 2- 사이클로헥실 -N-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 아세트아미드 [0560] [0561] [0562] 2- 사이클로헥실아세트산및 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 아민하이드로클로라이드 ( 실시예 4-1a) 로부터실시예 4-8 과같이제조했다. 수율 17%. MS M+H 계산치 317.6, 실측치 화합물은 0.73 μm 의, ht2r8 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0563] 실시예 4-15: N-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 신남아미드 [0564] [0565] 신남산및 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 아민하이드로클로라이드 ( 실시예 4-1a) 로부터실시 예 4-8 과같이제조했다. 수율 4%. MS M+H 계산치 322.6, 실측치

91 [0566] 화합물은 0.7 μm 의, ht2r8 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0567] 실시예 4-16: N-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 아다만테인. [0568] [0569] 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-아민하이드로클로라이드 (300 mg, 1.56 mmol), 아다만테인- 1-카르복실산 (281 mg, 1.56 mmol), PyBop (972 mg, 1.87 mmol), 및트리에틸아민 (0.438 ml, 3.12 mmol) 을 DMF (5 ml) 에서혼합했다. 반응물을실온에서 4시간동안질소대기하에서교반했다. 반응물을에틸아세테이트 (4 ml) 로희석하고, 포화탄산수소나트륨용액 (2x, 3 ml), 그다음, 포화염화나트륨용액 (3 ml) 으로세정했다. 유기층을추출, 건조시키고, 여과했다. 용매를진공하에서제거했다. 조생성물을메탄올 (4 ml) 에서재현탁시키고, HPLC로정제했다. 순수생성물을에탄올에서재용해시키고, 진공하에서농축하여 (3x3mL) N-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 아다만테인을백색고형물로서얻었다. 수율 60%. 1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ (m, 6H), (m, 6H), 2.08(bs, 3H), 2.18(s, 3H), 2.41(s, 3H), 4.98(s, 2H), 7.37(s, 1H), 7.38(s, 1H), 7.92(s, 1H). MS 355 (M+H). 융점 [0570] [0571] 화합물은 0.88 μm의, ht2r8 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. 추가화합물을실시예 4-1 내지 4-16 에기재된것과유사한절차에따라합성했고, 실험적으로테스트하고실측한결과, ht2r8 쓴맛수용체의억제제로서비교적고수준의유효성을갖는다. 테스트결과는하기의표 A에나타나있다

92 [0572] [ 표 A] [0573]

93 [0574]

94 [0575]

95 [0576]

96 [0577]

97 [0578]

98 [0579]

99 [0580]

100 [0581]

101 [0582]

102 [0583]

103 [0584]

104 [0585]

105 [0586]

106 [0587]

107 [0588]

108 [0589] [0590] [0591] [0592] 실시예 4-67 내지 4-91: 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 아민하이드로클로라이드 ( 실시예 4-1a) 및이의대응하는관 능화된카르복실산으로부터실시예 4-73 과같이제조했다. 목적질량이측정될때 LCMS 로특성을부여했다

109 [0593] 실시예 4-73: N-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-3,4- 디하이드록시 -5- 메톡시벤즈아미드 [0594] [0595] [0596] 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-아민하이드로클로라이드 ( 실시예 4-1a) (228 mg, 1 mmol), 3,4-디하이드록시-5-메톡시벤조산 (184 mg, 1 mmol), HOBt (135 mg, 1 mmol), 및 EDC (191 mg, 1 mmol) 을마이 크로웨이브바이알 (microwave vial) 에서 2 ml DMF에용해시키고, 그다음, 트리에틸아민 (101 mg, 1 mmol) 을 첨가했다. 반응물을 165 의마이크로웨이브에 5분동안두었다. 조생성물을바리안 (Varian) HPLC ( 물중 10%-95% ACN: 25분구배 ) 로직접정제했다. 순수분획을배합하고, 농축하여 N-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4- 일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-3,4-디하이드록시-5- 메톡시벤즈아미드를얻었다. (280 mg, 70%). LC/MS; C17H18N4O5에대해계산된 [M+H]; 예상치 359.1; 실측치 화합물은 2.2 μm의, ht2r8 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0597] 실시예 4-92: N-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-7- 메톡시벤조 [d][1,3] 디옥솔 -5- 카르복사 미드 [0598] [0599] [0600] N-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-3,4-디하이드록시 -5-메톡시벤즈아미드 ( 실시예 73) (50 mg, 0.14 mmol) 및세슘카보네이트 (113 mg, 2.5 mmol) 을 1 ml 아세톤에용해시키고, 그다음, 디브로모메탄 (239 mg, 1.4 mmol) 를첨가했다. 반응물을 120 의마이크로웨이브반응기에 20분동안두었다. 반응물로부터맑은용액을제거하고, 진공하에서증발시켰다. 조생성물을 1 ml 에탄올에용해시키고, 바리안 (Varian) HPLC ( 물중 10%-95% ACN: 25분구배 ) 로정제했다. 순수분획을배합하고, 농축하여 N-(1-((3,5-디메틸이속사졸- 4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-2-(7-메톡시벤조[d][1,3] 디옥솔-5-일 ) 아세트아미드를얻었다. (12 mg, 23%). LC/MS; C18H18N4O5에대해계산된 [M+H]; 예상치 371.1; 실측치 화합물은 0.7 μm의, ht2r8 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0601] 실시예 4-93: N-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-8- 메톡시 -2,3- 디하이드로벤조 [b][1,4] 디 옥신 -6- 카르복사미드 [0602] [0603] [0604] N-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-3,4-디하이드록시 -5-메톡시벤즈아미드 ( 실시예 4-73), 세슘카보네이트및디브로모에탄으로부터실시예 4-92 와같이제조했다. 수율 20 %. MS M+H 계산치 385.1, 실측치 화합물은 0.7 μm의, ht2r8 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0605] 실시예 4-94: N-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-7- 메톡시 -2- 메틸벤조 [d][1,3] 디옥솔 - 5- 카르복사미드

110 [0606] [0607] [0608] N-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-3,4-디하이드록시 -5-메톡시벤즈아미드 ( 실시예 4-73), 세슘카보네이트및 1,1-디브로모에탄으로부터실시예 4-92와같이제조했다. 수율 25 %. MS M+H 계산치 385.1, 실측치 화합물은 0.7 μm의, ht2r8 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0609] 실시예 4-95: N-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-7- 메톡시 -2,3- 디하이드로벤조 [b][1,4] 디 옥신 -6- 카르복사미드 [0610] [0611] 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 아민하이드로클로라이드 ( 실시예 4-1a) 및 7- 메톡시 -2,3- 디하 이드로벤조 [b][1,4] 디옥신 -6- 카르복실산 ( 실시예 4-95a) 으로부터실시예 4-73 과같이제조했다. 수율 50 %. MS M+H 계산치 385.1, 실측치 H NMR (400 MHz, DMSO): (s,3h), 2.410(s, 3H), 3.851(s, 3H), 4.214(bs, 2H), 4.296(bs, 2H), 5.120(s, 2H), 6.688(s, 1H), 7.290(s, 1H), (s, 1H), 8.069(s, 1H), 9.856(s, 1H). [0612] 화합물은 0.7 μm 의, ht2r8 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0613] 실시예 4-95a: 7- 메톡시 -2,3- 디하이드로벤조 [b][1,4] 디옥신 -6- 카르복실산 [0614] [0615] 2mL 마이크로웨이브바이알에서, 메틸 7-브로모-2,3-디하이드로벤조 [b][1,4] 디옥신-6-카르복실레이트 (273 mg, 1 mmol) 및 CuBr (14.3 mg, 0.1 mmol) 을건조 DMF 에용해시키고, 빙조에넣었다. 나트륨메톡시드 (540 mg, 10 mmol) 을, 0 에서교반하면서반응혼합물에첨가했다. 반응물을실온으로가온하고, 45분동안교반했다. 그다음, 반응물을마이크로웨이브반응기에 5분동안 135 에서두었다. 반응혼합물을물에용해시키고, 에틸아세테이트로세정했다. 물층을수집하고, 1M HCl 로 ph 4 로산성화했다. 생성물을에틸아세테이트로추출한다음, 황산나트륨상에서건조시켰다. 용매를진공하에서증발하여목적중간체인 7-메톡시-2,3-디하이드로벤조 [b][1,4] 디옥신-6-카르복실산을얻었는데, 이는추가정제없이직접사용되었다. 수율 57 %. MS M+H 계산치 211.1, 실측치 [0616] [0617] [0618] 실시예 5 ht2r14 길항물질 : 본발명의화합물의제조 하기실시예는본발명의다양한예시적인구현예를설명하고어떤식으로든제한하는것은아니다

111 [0619] 실시예 5-1: 4-(N- 벤질 -N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조산 [0620] [0621] 벤질 4-(N-벤질-N-(4-메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조에이트 ( 실시예 5-1a) (517 mg, 1 mmol) 을 6N NaOH( 수성 )/THF/MeOH (27 ml) 의 10/1/2 용액에서실온에서 6시간동안교반했다. 용액을 3N HCl ( 수성 ) 로약 ph 3 ( 약 50 ml) 로산성화하고, 수성상을에틸아세테이트 (3x, 75 ml) 로추출했다. 배합된유기추출물을황산나트륨상에서건조시키고, 로토바프상에서농축했다. 잔류물을 MeOH (15 ml) 에서취하고, 역상 HPLC ( 물중 5-95% 아세토니트릴구배 : 25분 ) 을 3개의 5 ml 분취액에서정제했다. 순수분획을배합하고, 농축하여백색고형물로서얻었다. 생성물을 15 ml 의무수에탄올에용해시키고, 로토바프 (4x) 상에서증발시켜순수 4-(N-벤질 -N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조산 (174 mg, 42%) 를백색고형물로서얻었다. M.p H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 3.78(s, 3H), 4.32(s, 2H), 4.36(s, 2H), 6.78(d, J=8.4Hz, 2H), 6.99(d, J=8.8Hz, 2H), (m, 2H), (m, 3H), 7.93(d, J=8.8Hz, 2H), 8.24(d, J=8Hz, 2H). MS 412 (MH+). [0622] 화합물은 0.22 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0623] [0624] 실시예 5-1a: 벤질4-(N-벤질-N-(4-메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조에이트 DMF (10 ml) 중 4-(N-(4-메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조산 ( 실시예 5-1b) (450, mg, 1.4 mmol), 벤질브로마이드 (770 mg, 4.5 mmol), 및세슘카보네이트 (1.5g, 4.5 mmol) 을 80 에서 2시간동안교반했다. 용액을실온으로냉각하고, 물 (200 ml) 로희석하고, 에틸아세테이트 (3x, 100 ml) 로추출했다. 배합된유기층을황산나트륨상에서건조시키고, 여과하고, 진공하에서농축했다. 잔류물을실리카겔크로마토그래피 ( 헥산중 10% 에틸아세테이트 ) 로정제하여벤질 4-(N-벤질-N-(4-메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조에이트 (517 mg, 73 %) 를백색고형 물로서얻었다. 1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ 3.76(s, 3H), 4.28(s, 2H), 4.32(s, 2H0, 5.40(s, 2H), 6.79(d, J=8Hz, 2H), 6.96(d, J=8Hz, 2H), (m, 2H), (m, 3H), (m, 5H), 7.85(d, J=8Hz, 2H), 8.17(d, J=8.4Hz, 2H). [0625] [0626] 실시예 5-1b: 4-(N-(4-메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조산 4-( 클로로설포닐 ) 벤조산 (5 g, 22.7 mmol) 을, 빙수조를통해 10분에걸쳐 0 로냉각된아세톤 (100 ml) 중 4-메톡시벤질아민 (6.1 g, 45 mmol) 및트리에틸아민 (2.3 g, 22.7 mmol) 의교반용액에고형물로서 3번에걸쳐첨가했다. 빙조를제거하고, 반응물을추가 4시간교반했다. 반응혼합물을, 물 (150 ml) 중 5% 아세트산의용액으로희석하고, 에틸아세테이트 (3x, 100 ml) 로추출했다. 배합된유기추출물을황산나트륨상에서건조시키고, 여과하고, 로토바프상에서농축했다. 수득한백색고형물을헥산 / 에틸아세테이트 (9/1) 로분쇄 하여 4-(N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조산 (5.1 g, 70 %) 를백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (400 MHz, DMSO d 6 ) δ 3.68(s, 3H), 3.91(s, 2H), 6.79(d, J=8.4Hz, 2H), 7.10(d, J=8.8Hz, 2H), 7.80(d, J=8.8Hz, 2H), 8.02(d, J=8.4Hz, 2H)

112 [0627] 실시예 5-2 : 4-(N-( 푸란 -2- 일메틸 )-N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조산 [0628] [0629] 4-메톡시벤질 4-(N-( 푸란-2-일메틸 )-N-(4-메톡시벤질) 설파모일 ) 벤조에이트 ( 실시예 5-2a) (750 mg, 1.4 mmol) 을수성 2N LiOH/THF/MeOH (45 ml) 의 2/2/1 혼합물에서실온에서 3시간동안교반했다. 용액을수성 1N 수성 HCl 로약 ph 3 ( 약 100 ml) 로산성화하고, 에틸아세테이트 (3x, 100 ml) 로추출했다. 배합된유기추출물을황산나트륨상에서건조시키고, 로토바프상에서농축했다. 잔류물을 MeOH (9 ml) 에서취하고, 역상 HPLC ( 물중 5-95% ACN 구배 : 40분 ) 로 3개의 3 ml 분취액에서정제했다. 순수분획을배합하고, 백색고형물로농축했다. 생성물을무수에탄올에용해시키고, 정제하여 (4x, 20 ml) 순수 4-(N-( 푸란-2-일메틸 )-N-(4-메톡시 벤질 ) 설파모일 ) 벤조산 (205 mg, 36 %) 를백색고형물로서얻었다. M.p H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 3.71(s, 3H), 4.24(s, 2H), 4.27(s, 2H), 6.14(d, 1H, J=3.2Hz), 6.26(m, 1H), 6.87(d, 2H, J=9.2Hz), 7.14(d, 2H, J=8.8Hz), 7.41(s, 1H), 7.89(d, 2H, J=8Hz), 8.06(d, 2H, J=8.4Hz), 13.48(bs, 1H). MS 400 (M-H). [0630] 화합물은 0.59 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0631] [0632] 실시예 5-2a: 4-메톡시벤질 4-(N-( 푸란-2-일메틸 )-N-(4-메톡시벤질) 설파모일 ) 벤조에이트 : 4-(N-( 푸란-2-일메틸 ) 설파모일 ) 벤조산 ( 실시예 5-2b) (500 mg, 1.8 mmol), p-메톡시벤질클로라이드 (624 mg, 4.0 mmol), 및세슘카보네이트 (1.3 g, 4.0 mmol) 을 DMF (10 ml) 에용해시키고, 80 에서 1시간동안교반했다. 혼합물을실온으로냉각시키고, 물 (200 ml) 로희석하고, 에틸아세테이트 (3x100 ml) 로추출했다. 배합된유기물을황산나트륨상에서건조시키고, 로토바프상에서농축했다. 생성물을실리카겔크로마토그래피 ( 헥산중 15% 에틸아세테이트 ) 로정제하여 4-메톡시벤질4-(N-( 푸란-2-일메틸 )-N-(4-메톡시벤질) 설파모일 ) 벤조 에이트 (753 mg, 80%) 를맑은오일로서얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 3.70(s, 3H), 3.75(s, 3H), 4.22(s, 2H), 4.26(s, 2H), 5.39(s, 2H), 6.14(d, 1H, J=3.2Hz), 6.25(m, 1H), 6.87(d, 2H, J=8.8Hz), 6.97(d, 2H, J=8.8Hz), 7.13(d, 2H, J=8.4Hz), 7.39(m, 1H), 7.43(d, 2H, J=8.4Hz), 7.91(d, 2H, J=8.4Hz), 8.07(d, 2H, J=8.4 Hz). [0633] [0634] 실시예 5-2b: 4-(N-( 푸란-2-일메틸 ) 설파모일 ) 벤조산 : 4-( 클로로설포닐 ) 벤조산 (5.0 g, 22.7 mmol) 을, 빙수조를통해 0 로냉각된아세톤 (200 ml) 중푸르푸릴아민 (6.6 g, 68 mmol) 의교반용액에 10분에걸쳐 3번에걸쳐첨가했다. 설포닐클로라이드의첨가가완결된후, 빙조를제거하고, 용액을 1시간동안실온에서교반했다. 혼합물을농축하고실리카겔크로마토그래피 (90% 에틸아세테이트, 8% 헥산및 2% 아세트산 ) 로정제하여 4-(N-( 푸란-2-일메틸 ) 설파모일 ) 벤조산 (4.4 g, 68%) 를백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 4.04(d, 2H, J=6Hz), 6.13(d, 1H, J=3.2Hz), 6.25(m, 1H), 7.43(m, 1H), 7.83(d, 2H, J=8.4Hz), 8.05(d, 2H, J=8.4Hz), 8.36(t, 1H, J=6Hz), 13.4(bs, 1H)

113 [0635] 실시예 5-3: 4-(N-(4- 에톡시벤질 )-N-( 푸란 -2- 일메틸 ) 설파모일 ) 벤조산 [0636] [0637] 4-시아노-N-(4-에톡시벤질 )-N-( 푸란-2-일메틸 ) 벤젠설폰아미드 ( 실시예 5-3a) (300 mg, 0.8 mmol) 을디옥산 /1.5 N 수성 NaOH (100 ml) 의 1/1 혼합물에서 80 에서 16시간동안교반했다. 혼합물을냉각하고, 1N 수성 HCl (100 ml) 으로산성화하고, 에틸아세테이트로추출했다 (3x, 75 ml). 배합된유기추출물을황산나트륨상에서건조시키고, 여과하고, 로토바프상에서농축했다. 고형물을에틸아세테이트 / 헥산 ( 약 1/9) 으로분쇄하고, 여과로수집하여 4-(N-(4-에톡시벤질 )-N-( 푸란-2-일메틸 ) 설파모일 ) 벤조산 (250 mg, 69 %) 를백색고형물로서얻었다. NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 1.29(t, J=6.8Hz, 3H), 3.97(q, J=6.4Hz, 2H), 4.23(s, 2H), 4.27(s, 2H), 6.15(d, J=3.2Hz, 1H), 6.27(m, 1H), 6.84(d, J=8.8Hz, 2H), 7.11(d, J=8.8Hz, 2H), 7.39(m, 1H), 7.87(d, J=8.4Hz, 2H), 8.00(d, J=8.4Hz, 2H). [0638] 화합물은 3.0 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0639] [0640] 실시예 5-3a: 4-시아노-N-(4-에톡시벤질 )-N-( 푸란-2-일메틸 ) 벤젠설폰아미드 : 4-시아노벤젠-1-설포닐클로라이드 (600 mg, 2.9 mmol) 을 DCM (100 ml) 중 N-(4-에톡시벤질 )-1-( 푸란-2-일 ) 메탄아민 ( 실시예 5-3b) (685 mg, 2.9 mmol) 및트리에틸아민 (455 mg, 4.5 mmol) 의교반용액에첨가하고, 반응물을 2시간동안교반했다. 반응물을물 (200 ml) 로희석하고, DCM 으로추출했다 (3x, 75 ml). 배합된유기추출물을황산나트륨상에서건조시키고, 여과하고, 로토바프상에서농축했다. 잔류물을실리카겔크로마토그래피 ( 헥산중 10% 에틸아세테이트 ) 로정제하여 4-시아노-N-(4-에톡시벤질 )-N-( 푸란-2-일메틸 ) 벤젠설폰아미드 (665 mg, 68 %) 를회색이도는백색고형물로서얻었다. NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 1.29(t, J=7.2Hz, 3H), 3.97(q, J=6.8Hz, 2H), 4.23(s, 2H), 4.27(s, 2H), 6.15(d, J=3.2Hz, 1H), 6.27(m, 1H), 6.84(d, J=8.8Hz, 2H), 7.11(d, J=8.8Hz, 2H), 7.39(m, 1H), 7.92(d, J=8.4Hz, 2H), 8.03(d, J=8.4Hz, 2H). [0641] [0642] 실시예 5-3b : 4 N-(4-에톡시벤질 )-1-( 푸란-2-일 ) 메탄아민 : 메탄올 (50 ml), 트리메틸오르토포르메이트 (10 ml) 및 AcOH (1 ml) 의혼합물중 4-에톡시벤즈알데히드 (5 g, 33 mmol) 및푸르푸릴아민 (4.2 g, 43 mmol) 을실온에서, 질소대기하에서 16시간동안교반했다. 나트륨보로하이드라이드 (1.4 g, 35 mmol) 을 30분에걸쳐 4번에걸쳐첨가했다 ( 발열반응 ). 반응물을추가 2시간동안실온에서교반했다. 용매를진공하에서제거하고, 잔류물을에틸아세테이트 (150 ml) 에서취했다. 유기상을물 (200 ml) 로세정하고, 수성상을에틸아세테이트 (2x, 100 ml) 로역추출했다. 배합된유기층을농축하고, 잔류물을실리카겔 ( 약 0.5 % 트리에틸아민을갖는헥산중 70% 에틸아세테이트 ) 로정제하여 N-(4-에톡시벤질 )-1-( 푸란-2-일 ) 메탄아민 (6.1 g, 80 %) 를맑은오일로서얻었다. NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 1.40(t, J=7.2Hz, 3H), 3.71(s, 2H), 3.76(s, 2H), 4.02(q, J=7.2Hz, 2H), 6.17(d, J=4Hz, 1H), 6.31(m, 1H), 6.84(d, J=8.8Hz, 2H), 7.23(d, J=8.8Hz, 2H), 7.36(m, 1H). [0643] 실시예 5-4: 4-(N- 에틸 -N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조산 [0644]

114 [0645] 4-(N-(4-메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조산 ( 실시예 5-1b) (160 mg, 0.5 mmol) 및세슘카보네이트 (325 mg, 1 mmo l) 을마이크로웨이브바이알에넣고, 2 ml DMF 에용해시켰다. 에틸요오다이드 (155 mg, 1 mmol) 을반응혼합물에첨가했다. 반응물을마이크로웨이브반응기에넣고 165 에서 5분동안가열했다. 반응혼합물을에틸아세테이트에용해시키고, 물로세정했다. 유기층을황산나트륨상에서건조시키고, 진공하에서증발시켰다. 조생성물을 6N NaOH( 수성 )/ 테트라하이드로푸란 (3 ml) 의 4/1 용액에용해시키고, 실온에서 6시간동안교반했다. 용액을 3N HCl ( 수성 ) 로약 ph 3 로산성화하고, 생성물을에틸아세테이트로추출했다 (3x, 75 ml). 배합된유기추출물을황산나트륨상에서건조시키고, 진공하에서농축했다. 잔류물을메탄올 (3 ml) 에서취하고, 역상 HPLC ( 물중 5-95 % 아세토니트릴구배 : 25분 ) 로정제했다. 화합물은 20 μm 의 IC 50 으로 ht2r14을억제 하는것으로알려졌다. 수율 35%. MS M+H 계산치 , 실측치 [0646] 화합물은 10 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0647] 실시예 5-5: 4-(N- 벤질 -N-( 푸란 -2- 일메틸 ) 설파모일 ) 벤조산 [0648] [0649] [0650] 4-(N-( 푸란-2-일메틸 ) 설파모일 ) 벤조산 ( 실시예 5-2b) (140 mg, 0.5 mmol) 및세슘카보네이트 (325 mg, 1 mmol) 을마이크로웨이브바이알에넣고, 2 ml DMF 에용해시켰다. ( 브로모메틸 ) 벤젠 (170 mg, 1 mmol) 을반응혼합물에첨가했다. 반응물을마이크로웨이브반응기에넣고 165 에서 5분동안가열했다. 반응혼합물을에틸아세테이트에용해시키고, 물로세정했다. 유기층을황산나트륨상에서건조시키고, 진공하에서증발시켰다. 조생성물을 6N NaOH( 수성 )/ 테트라하이드로푸란 (3 ml) 의 4/1 용액에서용해시키고, 실온에서 6시간동안교반했다. 용액을 3N HCl ( 수성 ) 으로약 ph 3 으로산성화하고, 생성물을에틸아세테이트로추출했다 (3x, 75 ml). 배합된유기추출물을황산나트륨상에서건조시키고, 진공하에서농축했다. 잔류물을메탄올 (3 ml) 에서취하고, 역상 HPLC ( 물중 5-95 % 아세토니트릴구배 : 25분 ) 로정제했다. 수율 35 %. MS M+H 계산치 372.4, 실측치 화합물은 4.6 μm의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0651] 실시예 5-6: 4-(N-( 푸란 -2- 일메틸 )-N-(3- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조산 [0652] [0653] [0654] 1-( 브로모메틸 )-3- 메톡시벤젠및 4-(N-( 푸란 -2- 일메틸 ) 설파모일 ) 벤조산 ( 실시예 5-2b) 로부터실시예 5-5 와같 이제조했다. 수율 35 %. MS M+H 계산치 402.3, 실측치 화합물은 10 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다

115 [0655] 실시예 5-7: 4-(N-( 푸란 -2- 일메틸 )-N-(2- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조산 [0656] [0657] [0658] 1-( 브로모메틸 )-2- 메톡시벤젠및 4-(N-( 푸란 -2- 일메틸 ) 설파모일 ) 벤조산 ( 실시예 5-2b) 로부터실시예 5-5 와같 이제조했다. 수율 35%. MS M+H 계산치 402.3, 실측치 화합물은 12 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0659] 실시예 5-8: 4-(N-(4- 프로폭시벤질 )-N-( 푸란 -2- 일메틸 ) 설파모일 ) 벤조산 [0660] [0661] 4-시아노-N-(4-프로폭시벤질 )-N-( 푸란-2-일메틸 ) 벤젠설폰아미드 ( 실시예 5-8a) (300 mg, 0.8 mmol) 을디옥산 /1.5 N 수성 NaOH (100 ml) 의 1/1 혼합물에서 80 에서 16시간동안교반했다. 혼합물을냉각하고, 1N 수성 HCl (100 ml) 로산성화하고, 에틸아세테이트로추출했다 (3x, 75 ml). 배합된유기추출물을황산나트륨상에서건조시키고, 여과하고, 로토바프상에서농축했다. 고형물을에틸아세테이트 / 헥산 ( 약 1/9) 로분쇄하고, 여과로수집하여 4-(N-(4-프로폭시벤질 )-N-( 푸란-2-일메틸 ) 설파모일 ) 벤조산 (165 mg, 63 %) 를백색고형물로서얻었다. NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 0.94(t, J=7.6Hz, 3H), 1.70(m, J=6.8Hz, 2H), 3.87(t, J=6.4Hz, 2H), 4.23(s, 2H), 4.27(s, 2H), 6.13(d, J=2.8Hz, 1H), 6.27(m, 1H), 6.84(d, J=6.8Hz, 2H), 7.11(d, J=8.8Hz, 2H), 7.39(m, 1H), 7.87(d, J=6.8Hz, 2H), 8.05(d, J=6.8Hz, 2H), 13.45(bs, 1H). [0662] 화합물은 2.5 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0663] [0664] 실시예 5-8a : 4-시아노-N-(4-프로폭시벤질 )-N-( 푸란-2-일메틸 ) 벤젠설폰아미드 : 4-시아노벤젠-1-설포닐클로라이드 (600 mg, 2.9 mmol) 을 DCM (100 ml) 중 N-(4-프로폭시벤질 )-1-( 푸란-2-일 ) 메탄아민 ( 실시예 5-8b) (685 mg, 2.9 mmol) 및트리에틸아민 (455 mg, 4.5 mmol) 의교반용액에첨가하고반응물을 2시간동안교반했다. 반응물을물 (200 ml) 로희석하고, DCM 으로추출했다 (3x, 75 ml). 배합된유기추출물을황산나트륨상에서건조시키고, 여과하고, 로토바프상에서농축했다. 잔류물을실리카겔크로마토그래피 ( 헥산중 10% 에틸아세테이트 ) 로정제하여 4-시아노-N-(4-프로폭시벤질 )-N-( 푸란-2-일메틸 ) 벤젠설폰아미드 (500 mg, 50 %) 를회색이도는백색고형물로서얻었다. NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 0.95(t, J=7.2Hz, 3H), 1.70(m, J=6.4Hz, 2H), 3.88(t, J=6.4Hz, 2H), 4.25(s, 2H), 4.28(s, 2H), 6.15(d, J=3.2Hz, 1H), 6.27(m, 1H), 6.84(d, J=6.8Hz, 2H), 7.11(d, J=8.8Hz, 2H), 7.39(m, 1H), 7.93(d, J=6.4Hz, 2H), 8.01(d, J=6.4Hz, 2H). [0665] [0666] 실시예 5-8b : 4 N-(4-프로폭시벤질 )-1-( 푸란-2-일 ) 메탄아민 : 메탄올 (50 ml), 트리메틸오르토포르메이트 (10 ml) 및 AcOH ( 약 1 ml) 의혼합물중 4-프로폭시벤즈알데히드 (5 g, 31 mmol) 및푸르푸릴아민 (3.9 g, 40 mmol) 을실온에서질소대기하에서 16시간동안교반했다. 나트륨보로하이드라이드 (1.4 g, 35 mmol) 을 4번에 30분에걸쳐 ( 발열반응 ) 첨가했다. 반응물을추가 2시간동안실온에서교반했다. 용매를로토바프상에서제거하고, 잔류물을에틸아세테이트 (150 ml) 에서취했다. 유기상을물 (200 ml) 로세정하고, 수성상을에틸아세테이트로역추출했다 (2x, 100 ml). 배합된유기층을농축하고, 잔류물을실리카겔 ( 약 2% 트리에틸아민을갖는헥산중 70 % 에틸아세테이트 ) 로정제하여 N-(4-프

116 로폭시벤질 )-1-( 푸란 -2- 일 ) 메탄아민 (5.3 g, 75 %) 를황색오일로서얻었다. NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 1.03(t, J=7.2Hz, 3H), 1.79(m, J=6.4Hz, 2H), 3.71(s, 2H), 3.76(s, 2H), 3.90(t, J=6.8Hz, 2H), 6.17(d, J=3.2Hz, 1H), 6.32(m, 1H), 6.85(d, J=8.4Hz, 2H), 7.22(d, J=8.8Hz, 2H), 7.37(m, 1H). [0667] [0668] 추가화합물을실험적으로테스트하고실측한결과, ht2r14 쓴맛수용체의억제제로서비교적고수준의유효성 을갖는다. 테스트결과는하기의표 B 에나타나있다. [ 표 B] [0669] [0670] 실시예 5-10: 4-(N-(4- 플루오로벤질 )-N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조산 [0671] [0672] 메틸 4-(N-(4-플루오로벤질 )-N-(4-메톡시벤질) 설파모일 ) 벤조에이트 ( 실시예 5-10a) (3.7 g, 8.3 mmol) 을 MeOH/THF (1:1.5, 30 ml) 에서용해시키고, 수성 NaOH (3 N, 15 ml) 으로처리했다. 혼합물을실온에서밤새교반한다음, MeOH 및 THF 을진공에서제거했다. 수득한수성용액을 6 N 수성 HCl 로약 ph 3 으로산성화하고, EtOAc로추출했다 (3x40 ml). 배합된유기층을물및염수로세정하고, 황산나트륨상에서건조시키고, 농축했다. 조생성물을 EtOH 으로부터재결정으로정제하여순수 4-(N-(4-플루오로벤질 )-N-(4-메톡시벤 질 ) 설파모일 ) 벤조산을백색결정질고형물 (2.1 g, 58.6%) 로서얻었다. MS (M-H, 428.1); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.66(s, 3H), 4.23(s, 2H), 4.26(s, 2H), 6.72(d, 2H, J=8Hz), 6.95(m, 6H), 7.92 (d, 2H J=8Hz), 8.07(d, 2H, J=8 Hz). [0673] 화합물은 1.97 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0674] [0675] 실시예 5-10a: 메틸 4-(N-(4-플루오로벤질 )-N-(4-메톡시벤질) 설파모일 )-벤조에이트메틸 4-(N-(4-메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조에이트 ( 실시예 5-10b) (4.3 g, 12.8 mmol) 을아세톤 (70 ml) 에용해시켰다. 세슘카보네이트 (8.57g, 25.6 mmol) 및 (4-플루오로벤질브로마이드 (1.76 ml, mmol) 을첨가하고, 혼합물을실온에서밤새교반했다. 유기염을여과제거하고아세톤을진공에서제거했다. 잔류물을에틸아세테이트에재용해시키고, 물및염수로세정하고, 그다음, 유기층을황산마그네슘상에서건조시키고, 농축했다. 조생성물을에틸아세테이트 / 헥산에의한재결정으로정제하여순수메틸 4-(N-(4-플루오로벤 질 )-N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조에이트 (3.7 g, 65 %) 를백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (400MHz, CDCl 3 ): δ, ppm: 3.77(s, 3H), 3.98(s, 3H), 4.27(s, 2H), 4.28(s, 2H), 6.74(d, 2H, J=8Hz), 6.92(m, 4H), 7.03(m, 2H), 7.88 (d, 2H J=8Hz), 8.16(d, 2H, J=8 Hz)

117 [0676] [0677] 실시예 5-10b: 메틸 4-(N-(4-메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조에이트. 디클로로메탄 (40 ml) 중메틸 4-( 클로로설포닐 ) 벤조에이트 ( 실시예 5-10c) (4 g, mmol) 의용액에 0 에서빙조에서 (4-메톡시페닐) 메탄아민 (2.56 ml, mmol) 및트리에틸아민 (2.38 ml, 17.1 mmol) 을첨가했다. 그다음, 빙조를제거하고, 혼합물을, 추가 2시간동안교반하면서실온으로가온했다. 완결시, (TLC 40 % 에틸아세테이트 / 헥산으로모니터 ), 용매를진공에서제거했다. 잔류물을에틸아세테이트 (200 ml) 에재용해시키고, 1N HCl ( 수성, 20 ml), 물 (20 ml) 및염수 (20 ml) 로세정한다음, 황산마그네슘상에서건조시켰다. 용액을농축하고, 뜨거운에틸아세테이트 / 헥산에의한재결정으로생성물을정제하여순수메틸 4-(N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조에이트 (4.3 g, 74.8 %) 를백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.67(s, 3H), 3.78(s, 3H), 3.93(s, 2H), 6.78(m, 2H), 7.09(m, 2H), 7.87(m, 2H), 8.08(m, 2H), 8.25(br, s, 1H). [0678] [0679] 실시예 5-10c: 메틸 4-( 클로로설포닐 ) 벤조에이트디클로로에탄 (10 ml) 중 4-클로로설포닐벤조산 (5 g, 23 mmol) 및티오닐클로라이드 (20 ml) 을 80 로 2시간동안가열했다. 반응혼합물을회전식증발기를통해농축하여갈색을띤고형물로서얻었다. 고형물을 5분동안얼음상에서냉각시키고, 아주차가운메탄올 (40 ml) 을, 0 에서 5분동안교반하면서첨가했다. 반응혼합물을실온으로가온하고, 추가 10분교반했다. 아주차가운물 (40 ml) 을첨가하고, 여과로수집한백색 고형물을생성하고, 진공하에서건조시켜순수메틸 4-( 클로로설포닐 ) 벤조에이트 (4.5 g, 84 %) 를얻었다. 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.84(s, 3H), 7.70(d, 2H, J=8.4Hz), 7.93(d, 2H, J=8.4Hz). [0680] 실시예 5-11: 4-((N- 벤질 -4- 메틸페닐설폰아미도 ) 메틸 ) 사이클로헥산 - 카르복실산 [0681] [0682] [0683] 100 ml 의 2,2-디메톡시프로판중 4-( 아미노메틸 ) 사이클로헥산카르복실산 (1.57 g, 10 mmol) 의현탁액에 HCl (10 ml, 36% 수성 ) 을첨가했다. 혼합물을실온에서 18시간동안교반한다음, 농축했다. 잔류물을최소량의 MeOH 에용해시키고, 디에틸에테르를첨가하여메틸 4-( 아미노메틸 ) 사이클로헥산카르복실레이트의 HCl 염을회색이도는백색고형물로서침전시켰다. 이물질을추가의정제또는특성규명없이사용했다. 5 ml 의디클로로메탄중메틸 4-( 아미노메틸 ) 사이클로헥산카르복실레이트 (208 mg, 1 mmol) 의 HCl 염의혼합물에 0 에서빙조에서트리에틸아민 (360 μl, 2.58 mmol) 및 4-메틸벤젠-1-설포닐클로라이드 (190 mg, 1 mmol) 을첨가했다. 빙조를서서히실온으로가온하고, 밤새교반했다. 용매를진공에서제거했다. 잔류물을에틸아세테이트 (20 ml) 에재용해시키고, 1N HCl (5 ml), 물 (5 ml) 및염수 (5 ml) 로세정한다음, 황산마그네슘상에서건조시키고, 농축했다. 이러한조생성물 (162 mg, 0.5 mmol) 을아세톤 (5 ml) 에재용해시키고, 탄산칼륨 (110 mg, 0.79 mmol) 및 (4-플루오로페닐) 메탄아민 (1.76 ml, mmol) 으로처리했다. 혼합물을가압용기에서 80 에서밤새교반한다음, 냉각하고, 유기염을여과제거했다. 아세톤을진공에서제거하고, 잔류물을에틸아세테이트에재용해시키고, 물, 그다음염수로세정했다. 유기층을황산마그네슘상에서건조시키고, 농축했다. 조생성물 (162 mg, 0.4 mmol) 을 MeOH/THF (1:1.5, 10 ml) 에용해시키고, 수성 NaOH (10N, 400 μl ) 로처리했다. 혼합물을 100 에서 20분동안마이크로웨이브에서교반하고, 그다음, MeOH 및 THF 을진공에서제거했다. 잔류물을 6 N 수성 HCl 로약 ph 3 으로산성화하고, EtOAc로추출했다 ; 배합된유기층을물및염수로세정하고, 황산나트륨상에서건조시키고, 농축했다. 조생성물을 EtOH 으로부터재결정으로정제하여순수 4-((N-벤질-4-메틸페닐설폰아미도 ) 메틸 ) 사이클로헥산카르복실산을백색고형물 (120 mg, 74%) 로서 얻었다. MS (M+H, 402); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 0.68(m, 2H)), 0.91(m, 2H), 1.06 (br, s, 1H), 1.50 (d, 2H), 1.72(d, 2H), 2.0(1H), 2.41(s, 3H), 2.86(m, 2H), 4.21(s, 2H), 7.30(m, 5H), 7.43(m, 2H),

118 7.73(m, 2H), 11.97(br, s, 1H). [0684] 화합물은 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0685] 실시예 5-12: 4-(N-(3- 플루오로벤질 )-N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조산 [0686] [0687] [0688] 메틸 4-(N-(4-메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조에이트 ( 실시예 5-10b) (500 mg, 1.49 mmol), 3-플루오로벤질브로마이드 (280 mg, 2.98 mmol), 및세슘카보네이트 (971 mg, 2.98 mmol) 을 DMF (12 ml) 에넣고, 90 에서 4시간동안교반했다. 용액을실온으로냉각시키고, 물 (200 ml) 로희석하고, 에틸아세테이트 (3x, 100 ml) 로추출했다. 배합된유기층을황산마그네슘상에서건조시키고, 여과하고, 진공하에서농축했다. 잔류물을실리카겔크로마토그래피 ( 헥산중 % 에틸아세테이트 ) 로정제하여메틸 4-(N-(3-플루오로벤질 )-N-(4-메톡시벤질) 설파모일 ) 벤조에이트 (528 mg, 80 %) 를백색고형물로서얻었다. 메틸 4-(N-(3-플루오로벤질 )-N-(4-메톡시벤질) 설파모일 ) 벤조에이트 (500 mg, 1.12 mmol) 을 MeOH/THF (1:1, 40 ml) 에용해시키고, 수성 NaOH (10 N, 8 ml) 의용액으로처리했다. 혼합물을실온에서밤새교반한다음, MeOH 및 THF 을회전식증발로제거했다. 수득한수성용액을 EtOAc (10 ml) 로세정하고, 6 N 수성 HCl ( 약 15 m L) 로약 ph 4 로산성화했다. 수성용액을 EtOAc로추출했다 (3x, 40 ml) 및배합된유기층을물, 염수로세정하고, 황산마그네슘상에서건조시키고, 농축했다. 조생성물을 EtOH 으로부터재결정으로정제하여표제화합물 4-(N-(3-플루오로벤질 )-N-(4-메톡시벤질) 설파모일 ) 벤조산을백색결정질고형물 (150 mg) 로서수율 30 % 로 얻었다. MS (M-H, 428.1); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.65(s, 3H), 4.27(s, 2H), 4.29(s, 2H), (m, 7H), 7.20(m, 1H), 7.95(d, 2H, J=8 Hz); 8.10(d, 2H, J=8 Hz). [0689] 실시예 5-13: 4-(N- 벤질 -N-(2,4- 디메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조산 [0690] [0691] (2,4- 디메톡시페닐 ) 메탄아민, 메틸 4-( 클로로설포닐 ) 벤조에이트 ( 실시예 5-10c) 및벤질브로마이드로부터실시 예 5-10 과같이제조했다. MS (M-H, ); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.50(s, 63H), 3.66(s, 3H), 4.20(s, 2H), 4.34(s, 2H), 6.29(s, 1H), 6.33(d, J=8.0Hz, 1H), 6.91(d, J=8.8Hz, 1H), (m, 5H), 7.80(d, J=8.0Hz, 2H), 8.01(d, J=8.4Hz, 2H), 13.49(s, 1H). [0692] 실시예 5-14: 4-(N-(3- 클로로벤질 )-N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조산 [0693]

119 [0694] 메틸 4-(N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조에이트 ( 실시예 5-10b) 및 1-( 브로모메틸 )-3- 클로로벤젠로부터실시예 5-10 과같이제조했다. MS (M-H, 444.1); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.69(s, 3H), 4.30(m, 4H), (m, 8H), 7.99(m, 2H), 8.13(m, 2H). [0695] 화합물은 1.88 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0696] 실시예 5-15: 4-(N- 벤질 -N-(2,4,6- 트리메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조산 [0697] [0698] (2,4,6- 트리메톡시페닐 ) 메탄아민, 메틸 4-( 클로로설포닐 ) 벤조에이트 ( 실시예 5-10c) 및벤질브로마이드로부터 실시예 5-10 과같이제조했다. MS (M-H, ); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.45(s, 6H), 3.69(s, 3H), 4.26(s, 2H), 4.28(s, 2H), 5.98(s, 2H), (m, 5H), 7.82(d, J=8.0Hz, 2H), 8.07(d, J=8Hz, 2H), 13.49(s, 1H). 원소분석 ( 실측치, %): C 61.05; H 5.49; N 2.98; ( 계산치, %): C61.13; H 5.34 및 N 2.97 [0699] 화합물은 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0700] 실시예 5-16: 4-((N- 벤질 -N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 메틸 ) 벤조산 [0701] [0702] 메틸 4-(N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조에이트 ( 실시예 5-10b) 및벤질브로마이드로부터실시예 5-10 과같이 제조했다. MS (M-H, 424.1); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.72(s, 3H), 4.18 (d, 2H), 4.55(s, 2H), 6.83(m, 2H), 7.12(m, 2H), 7.21(m, 2H), 7.28(m, 3H), 7.43(m, 2H), 7.93(m, 2H). [0703] 실시예 5-17: 4-(N-(4- 메톡시벤질 )-N- 프로필설파모일 ) 벤조산 [0704] [0705] 메틸 4-(N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조에이트 ( 실시예 5-10b) 및 n- 프로필브로마이드로부터실시예 5-10 과 같이제조했다. MS (M-H, 362.1); 1 H NMR (400MHz, CDCl3): δ, ppm: 0.70(m, 3H), 1.35(m, 3H), 3.08(m, 2H), 3.73(s, 3H), 4.31(s, 2H), 6.83(m, 2H), 7.17(m, 2H), 7.93(m, 2H), 8.23(m, 2H). [0706] 화합물은 3.75 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다

120 [0707] 실시예 5-18: 4-(N-(4- 메톡시벤질 )-N- 페닐설파모일 ) 벤조산 [0708] [0709] 아닐린, 메틸 4-( 클로로설포닐 ) 벤조에이트 ( 실시예 5-10c) 및 1-( 클로로메틸 )-4- 메톡시벤젠로부터실시예 5-10 과같이제조했다. MS (M-H, 396.1); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.66(s, 3H), 4.73(s, 2H), 6.78(d, J=8.4Hz, 2H), 7.00(d, J=7.6Hz, 2H), 7.12(d, J=8.0Hz, 2H), 7.24(d, J=8.0Hz, 2H), 8.11(d, J=8.4Hz, 2H), 13.49(s, 1H). [0710] 실시예 5-19: 4-(N-(4- 메톡시벤질 )-N- 펜에틸설파모일 ) 벤조산 [0711] [0712] 2- 페닐에탄아민, 메틸 4-( 클로로설포닐 )- 벤조에이트 ( 실시예 5-10c) 및 1-( 클로로메틸 )-4- 메톡시벤젠로부터실 시예 5-10 과같이제조했다. MS (M-H, 424.1); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 2.51(m, 2H), 3.23(m, 2H), 3.74(s, 3H), 4.31(s, 2H), 4.31(s, 2H), 6.92(m, 2H), 6.98(m, 2H), (m, 5H), 7.85(m, 2H), 8.06(m, 2H). [0713] 화합물은 4.58 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0714] 실시예 5-20: 4-((N-(4- 플루오로벤질 )-4- 메틸페닐설폰아미도 ) 메틸 )- 사이클로헥산카르복실산 [0715] [0716] 1-( 브로모메틸 )-4- 플루오로벤젠, 4-( 아미노메틸 ) 사이클로헥산카르복실산및 4- 메틸벤젠 -1- 설포닐클로라이드로부 터실시예 5-11 과같이제조했다. MS (M+H, 420); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 0.71(m, 2H)), 0.95(m, 2H), 1.15 (br, s, 1H), 1.51 (d, 2H), 1.76(d, 2H), 2.0(1H), 2.40(s, 3H), 2.85(m, 2H), 4.22(s, 2H), 7.14(m, 2H), 7.32(m, 2H), 7.40(m, 2H), 7.69(m, 2H), 11.93(br, s, 1H). [0717] 화합물은 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다

121 [0718] 실시예 5-21: 4-((4- 아세트아미도 -N- 벤질페닐설폰아미도 ) 메틸 )- 사이클로헥산카르복실산 [0719] [0720] 아세트아미도벤젠 -1- 설포닐클로라이드, 4-( 아미노메틸 ) 사이클로헥산카르복실산및벤질브로마이드로부터실시 예 5-11 과같이제조했다. MS (M+H, 445.2); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 0.65(m, 2H), 0.68(m, 2H), 1.05(m, 1H), 1.48(m, 2H), 1.70(m, 2H), 1.92(m, 1H), 2.00(s, 3H), 2.82(s, 2H), 4.21(s, 2H), 7.27(m, 5H), 7.76(m, 4H), 7.62(m, 2H), 10.1(s, 1H), 11.93(br, s, 1H). [0721] 화합물은 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0722] 실시예 5-22: 4-((N-(4- 플루오로벤질 ) 페닐설폰아미도 ) 메틸 )- 사이클로헥산카르복실산 [0723] [0724] 벤젠설포닐클로라이드, 4-( 아미노메틸 )- 사이클로헥산카르복실산및 1-( 브로모메틸 )-4- 플루오로벤젠로부터실시 예 5-11 과같이제조했다. MS (M+H, 406); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 0.77(m, 2H), 0.94(m, 2H), 0.98(m, 2H), 1.50(m, 2H0, 1.75(m, 2H), 1.77(m, 1H), 2.80 (d, 2H), 4.28(s, 2H), 7.20(m, 2H), 7.38(m, 2H), 7.62(m, 2H), 7.70(m, 1H), 7.88(m, 2H), 11.93(br, s, 1H). [0725] 화합물은 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0726] 실시예 5-23: 4-(N-( 사이클로헥실메틸 )-N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 )- 벤조산 [0727] [0728] 메틸 4-(N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조에이트 ( 실시예 5-10b) 및사이클로헥실메탄아민로부터실시예 5-10 과 같이제조했다. MS (M-H, 416.1); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 0.63(m, 2H), 0.87(m, 3H), 0.94(m, 1H), (m, 5H), 1.70(m, 2H), 2.86(m, 2H), 3.70(s, 3H), 4.22(s, 2H), 6.84(m, 2H), 7.16(m, 2H), 7.91(m, 2H), 7.62(m, 2H), 8.09(m, 2H). [0729] 화합물은 3.47 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다

122 [0730] 실시예 5-24: 4-((N-(4- 플루오로벤질 )-1- 페닐메틸설폰아미도 ) 메틸 )- 사이클로헥산카르복실산 [0731] [0732] 페닐메탄설포닐클로라이드및메틸 4-( 아미노메틸 ) 사이클로헥산카르복실레이트및 1-( 브로모메틸 )-4- 플루오로 벤젠로부터실시예 5-10 과같이제조했다. MS(M-H, 418); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 0.639(m, 2H), 0.897(m, 2H), 1.034(m, 1H), (d, broad, 2H, J=11.2Hz), (d, broad, 2H, J=11.2Hz), 1.961(m, 1H), 2.828(d, 2H, J=7.6Hz), 4.207(s, 2H), 4.449(s, 2H), (t, 2H, J=9.2Hz), 7.377(m, 7H), 12 (s, broad, 1H) [0733] 화합물은 9.57 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0734] 실시예 5-25: 4-(N-(2- 시아노벤질 )-N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조산 [0735] [0736] 메틸 4-(N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 )- 벤조에이트 ( 실시예 5-10b) 및알파 - 브로모 -o- 톨루니트릴로부터실시예 5-10 과같이제조했다. MS(M-H, 435.1); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.664(s, 2H), 4.348(s, 2H), 4.498(s, 2H), 6.728(d, 2H, J=8.4Hz), 7.036(d, 2H, j=8.4hz), (t, 2H, J=9.2Hz), 7.548(t, 1H, J=7.6Hz), 7.640(d, 1H, J=7.6Hz), 8.003(d, 2H, J=8Hz), 8.139(d, 2H, J=8.4Hz), (s, broad, 1H). [0737] 화합물은 4.61 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0738] 실시예 5-26: 4-(N-(4- 아세트아미도벤질 )-N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조산 [0739] [0740] 메틸 4-(N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조에이트 ( 실시예 5-10b) 및 N-(4-( 클로로메틸 ) 페닐 ) 아세트아미드로부터 실시예 5-10 과같이제조했다. MS (M-H, 467.1); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 2.0(s, 3H), 3.69s, 3H), 4.23(s, 4H), 6.78(d, 2H, J=7.6Hz), 6.98(m, 4H), 7.41(d, 2H, J=8Hz), 7.94(d, 2H, J=8Hz), 8.09(d, 2H, J=8Hz), 9.90(s, 1H)

123 [0741] 실시예 5-27: 4-(N-( 푸란 -3- 일메틸 )-N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조산 [0742] [0743] 110 mg 의 1-( 푸란-3-일 )-N-(4-메톡시벤질) 메탄아민 ( 실시예 5-27a) 을 DCM (5 ml) 중메틸 4-( 클로로설포닐 ) 벤조에이트 ( 실시예 5-10c) (117 mg, 0.5mmol) 및트리에틸아민 (100 μl ) 과혼합했다. 혼합물을밤새실온에서교반하고, 농축했다. 잔류물을에틸아세테이트 (20 ml) 에재용해시키고, 1N HCl ( 수성, 2mL), 그다음, 물 (5 ml) 및염수 (5 ml) 로세정한다음, 황산마그네슘상에서건조시켰다. 조생성물을분취 TLC (40 % 에틸아세테이트 / 헥산 ) 로정제하여메틸4-(N-( 푸란-3-일메틸 )-N-(4-메톡시벤질) 설파모일 ) 벤조에이트를백색고형물로서얻었다. 실시예 5-10에기재된비누화로 4-(N-( 푸란-3-일메틸 )-N-(4-메톡시벤질) 설파모일 ) 벤조산을백색결정 질고형물 (68 mg, 64 % 수율 ) 로서얻었다. MS (M-H, 400.1); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.72(s, 3H), 4.13(s, 2H), 4.26(s, 2H), 5.99(s, 1H), 6.87(m, 4H), 6.87(d, 2H, J=8.8Hz), 7.13(d, 2H, J=8.8Hz), 7.39(s, 1H), 7.49(s, 1H), 7.95(d, 2H, J=8.4Hz), 8.09(d, 2H, J=8.8Hz). [0744] [0745] 실시예 5-27a: 1-( 푸란-3-일 )-N-(4-메톡시벤질) 메탄아민 MeOH (20 ml) 중 3-푸르알데히드 (5 mmol, 437 μl ) 및 (4-메톡시페닐) 메탄아민의혼합물을실온에서밤새교반한다음, 나트륨보로하이드라이드 (300 mg, 7.89 mmol) 을서서히첨가했다. 수득한혼합물을실온에서 15분동안교반하고, NaOH (1 N, 수성 ) 으로급랭시켰다. 메탄올을진공에서제거하고, 수득한슬러리를에틸아세테이트에재용해시키고, 그다음, 물, 염수로세정하고, 황산나트륨상에서건조시키고, 농축했다. 실리카겔크로마토그래피 ( 에틸아세테이트 : 헥산 7:3) 로정제하여 1-( 푸란-3-일 )-N-(4-메톡시벤질) 메탄아민을오일로서얻 었다. MS (M+H, ); 1 H NMR (400MHz, CDCl3): δ, ppm: 3.64(s, 2H), 3.74(s, 2H), 3.80(s, 3H), 6.39(m, 1H), 6.86(m, 1H), 6.88(m, 1H), 7.23(m, 1H), 7.25(m, 1H), 7.35(m, 1H), 7.38(m, 1H). [0746] 실시예 5-28: 4-(N,N- 디벤질설파모일 ) 벤조산 [0747] [0748] 디벤질아민및메틸 4-( 클로로설포닐 )- 벤조에이트 ( 실시예 5-10c) 로부터실시예 5-27 과같이제조했다. MS (M- H, 380.1); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 4.52(s, 4H), 7.10(m, 4H), 7.25(m, 6H), 8.00(d, 2H, J=8.4Hz), 8.15 (d, 2H J=8.4Hz), 13.5 (s, broad, 1H). [0749] 화합물은 7.74 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0750] 실시예 5-29: 4-(N-(4- 메톡시벤질 )-N- 메틸설파모일 ) 벤조산 [0751]

124 [0752] 1-(4- 메톡시페닐 )-N- 메틸메탄아민및메틸 4-( 클로로설포닐 )- 벤조에이트 ( 실시예 5-10c) 로부터실시예 5-27 과 같이제조했다. MS (M-H, 335.1); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 2.51(s, 3H), 3.71(s, 3H), 4.05(s, 2H), 6.88 (d, 2H), 7.18 (d, 2H), 7.91 (d, 2H); 8.13 (d, 2H). 원소분석 : ( 실측치 ): C 57.47%, H 4.77% 및 N 4.31%; ( 이론적 ): C 57.30%, H 5.11% 및 N 4.18% [0753] 실시예 5-30: 4-(N,N- 비스 (4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조산 [0754] [0755] 비스 (4- 메톡시벤질 ) 아민및메틸 4-( 클로로설포닐 )- 벤조에이트 ( 실시예 5-10c) 로부터실시예 5-27 과같이제조 했다. MS (M-H, 440.1); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.68(s, 6H), 4.20(s, 4H), 6.77 (d, 4H, J=10Hz), 6.98 (d, 4H, J=10Hz), 7.92 (dd, 2H J=8Hz), 8.06(dd, 2H, J=8 Hz). 원소분석 ( 실측치 ): C 62.45%, H 5.19% 및 N 3.06%; ( 이론적 ): C 62.57%, H 5.25% 및 N 3.17% [0756] 화합물은 4.14 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0757] 실시예 5-31: 4-(N-(2- 플루오로벤질 )-N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조산 [0758] [0759] 메틸 4-(N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 )- 벤조에이트 ( 실시예 5-10b) 및 1-( 브로모메틸 )-2- 플루오로벤젠로부터실시 예 5-10 과같이제조했다. 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.66(s, 3H), 4.29(s, 2H), 4.37(s, 2H), 6.72(d, 2H, J=8Hz), (m, 6H), 7.93(d, 2H, J=8Hz), 8.08(d, 2H, J=8Hz). [0760] 실시예 5-32: 4-(N-(2,5- 디플루오로벤질 )-N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 )- 벤조산 [0761] [0762] 메틸 4-(N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 )- 벤조에이트 ( 실시예 5-10b) 및 2-( 브로모메틸 )-1,4- 디플루오로벤젠로부터 실시예 5-10 과같이제조했다. 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.66(s, 3H), 4.31(s, 2H), 4.33(s, 2H), (m, 7H), 7.95(d, 2H, J=8Hz), 8.09(d, 2H, J=8Hz)

125 [0763] 실시예 5-33: 4-(N-(2,3- 디플루오로벤질 )-N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조산 [0764] [0765] 메틸 4-(N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 )- 벤조에이트 ( 실시예 5-10b) 및 1-( 브로모메틸 )-2,3- 디플루오로벤젠로부터 실시예 5-10 과같이제조했다. 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.30(s, 3H), 4.29(s, 2H), 4.32(s, 2H), 6.87(d, 2H, J=8Hz), (m, 5H), 7.95(d, 2H, J=8Hz). 8.05(d, 2H, J=8Hz). [0766] 실시예 5-34: 4-(N-(3- 메톡시벤질 )-N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 )- 벤조산 [0767] [0768] 메틸 4-(N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조에이트 ( 실시예 5-10b) 및 3- 브로마이드로부터실시예 5-10 과같이제조 했다. MS (M-H, ); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.58(s, 3H), 3.68(s, 3H), 4.24(s, 2H), 4.25(s, 2H), 6.50(s, 1H), 6.64(d, J=4Hz, 1H), 6.73(m, 1H), 6.77(d, J=8Hz, 2H), 7.00(d, J=8Hz, 2H), 7.12(t, J=8Hz, 1H), 7.94(d, J=8Hz, 2H), 8.09(d, J=8Hz, 2H), 13.49(s, 1H). [0769] 화합물은 2.46 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0770] 실시예 5-35: 4-(N- 벤질 -N-(4- 메톡시페닐 ) 설파모일 ) 벤조산 [0771] [0772] 4-(N-(4- 메톡시페닐 ) 설파모일 )- 벤조에이트 ( 실시예 5-35a) 및벤질브로마이드로부터실시예 5-10 과같이제조 했다. MS (M-H, 396); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.66(s, 3H), 4.75(s, 2H), 6.76(d, J=8Hz, 2H), 6.90(d, J=8Hz, 2H), 7.23(m, 5H), 7.74(d, J=8Hz, 2H), 8.11(d, J=8Hz, 2H), 13.51(s, 1H). [0773] [0774] 실시예 5-35a: 4-(N-(4-메톡시페닐 ) 설파모일 ) 벤조에이트디클로로메탄 (10 ml) 중 4-메톡시벤젠아민 (580 mg, 4.71 mmol) 및트리에틸아민 (1.48 ml, 10.7 mmol) 에메틸 4-( 클로로설포닐 ) 벤조에이트 (1.00 g, 4.28 mmol) 을첨가했다. 이혼합물을 16시간동안실온에서교반했다. 반응물을디클로로메탄 (50 ml) 으로희석하고, 계속해서물, 10 % 시트르산, 및염수로세정했다. 유기물을황산나트륨상에서건조시키고, 로토바프로농축했다. 수득한조물질을, 용리액으로서 100 % 디클로로메탄을사용하여실리카겔상에서크로마토그래피를수행하여 4-(N-(4-메톡시페닐 ) 설파모일 ) 벤조에이트를백색결정질고형물 (400 mg, 30 % 수율 ) 로서얻었다

126 [0775] 실시예 5-36: 4-(N-(3,4- 디플루오로벤질 )-N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조산 [0776] [0777] N-(3,4- 디플루오로벤질 )(4- 메톡시페닐 )- 메탄아민 ( 실시예 5-36a) 및메틸 4-( 클로로설포닐 ) 벤조에이트 ( 실시예 5-10c) 로부터실시예 5-10 과같이제조했다. MS (M-H, 446); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ ppm: 3.69(s, 3H), 4.20(s, 4H), 6.73(d, J=8.8Hz, 2H), 6.93(m, 2H), 6.98(d, J=8.8Hz, 2H), 7.22(m, 1H), 7.74(d, J=8.4Hz, 2H), 7.99(d, J=8.4Hz, 2H). [0778] [0779] 실시예 5-36a: N-(3,4-디플루오로벤질 )(4-메톡시페닐) 메탄아민디클로로메탄 (15 ml) 중 (4-메톡시페닐) 메탄아민 (1.77 ml, 13.6 mmol) 및아세트산 (2.7 ml, 45 mmol) 에 3,4-디플루오로벤즈알데히드 (1.0 m, 9.08 mmol) 을첨가했다. 이혼합물을마이크로웨이브에서 100 에서 15분동안가열했다. 반응물을실온으로냉각하고, 매크로포러스 (macroporous) 시아노보로하이드라이드수지 (9.8 g, 22.7 mmol) 을나누어서첨가했다. 이혼합물을실온에서 16시간동안교반했다. 수지를여과제거하고디클로로메탄으로헹구고, 유기물을, 거품이멈출때까지포화중탄산나트륨으로세정했다. 유기물을황산나트륨상에서건조시키고, 로토바프로농축했다. 수득한조물질을, 용리액으로서메탄올디클로로메탄구배를사용하여실리카겔크로마토그래피로정제하여 N-(3,4-디플루오로벤질 )(4-메톡시페닐) 메탄아민을황색을띤오일 (1.9 g, 80 % 수율 ) 로서얻었다. MS (M+H, 264); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 2.63 (br s, 1H), 3.56(s, 2H), 3.61(s, 2H), 3.71(s, 3H), 6.84(d, J=8.8Hz, 2H), 7.14(m, 1H), 7.21(d, J=8.4Hz, 2H), 7.34(m, 2H). [0780] 실시예 5-37: 4-((N-(4- 플루오로벤질 )-4- 메틸페닐설폰아미도 ) 메틸 ) 벤조산 [0781] [0782] 4-( 아미노메틸 ) 페닐카르복실산, 4- 메틸벤젠 -1- 설포닐클로라이드및 4- 플루오로벤질브로마이드로부터실시예 5-11 과같이제조했다. 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.11(s, 3H), 4.21(s, 2H), 4.24(s, 2H), (m, 6H), (d, 2H, J=8Hz), 7.63(d, 2H, J=8Hz), 7.73(d, 2H, J=8Hz). [0783] 화합물은 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다

127 [0784] 실시예 5-38: 4-((4- 카르복시 -N-(4- 메톡시벤질 ) 페닐설폰아미도 ) 메틸 )- 벤조산 [0785] [0786] 메틸 4-( 브로모메틸 ) 벤조에이트및메틸 4-(N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조에이트 ( 실시예 5-10b) 로부터실시예 5-10 과같이제조했다. 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.65(s, 3H), 4.24(s, 2H), 4.33(s, 2H), 6.71(d, 2H, J=8Hz), 6.95(d, 2H, J=8Hz), 7.14(d, 2H, J=8Hz), 7.73(d, 2H, J=8Hz), 7.89(d, 2H, J=8Hz), 8.06(d, 2H, J=8Hz). [0787] 실시예 5-39: 4-(N- 벤질 -N-(3,4- 디메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조산 [0788] [0789] (3,4- 디메톡시페닐 ) 메탄아민, 메틸 4-( 클로로설포닐 ) 벤조에이트 ( 실시예 5-10c) 및벤질클로라이드로부터실시 예 5-10 과같이제조했다. MS (M-H, ); 1 H NMR (400MHz, CD 3 OD): δ, ppm: 3.59(s, 3H), 3.76(s, 3H), 4.30(s, 2H), 4.36(s, 2H), 6.51(d, 1H, J=1.7Hz), 6.60(m, 1H), 6.76(d, 1H, J=8.2Hz), 7.12(m, 2H), 7.21(m, 3H), 7.95(d, 2H, J=8.6Hz), 8.18(d, 2H, J=8.6 Hz). [0790] 화합물은 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0791] 실시예 5-40: 4-(N-(3,4- 디메톡시벤질 )-N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조산 [0792] [0793] (3,4- 디메톡시페닐 ) 메탄아민, 메틸 4-( 클로로설포닐 ) 벤조에이트 ( 실시예 5-10c) 및 4- 메톡시벤질브로마이드로부 터실시예 5-10 과같이제조했다. MS (M-H, ); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.49(s, 3H), 3.67(s, 3H), 3.68(s, 3H), 4.20(s, 2H), 4.22(s, 2H), 6.41(d, 1H, J=1.4Hz), 6.58 (dd, 1H, J1 = 8.2Hz, J2 = 1.4Hz), 6.78(m, 3H), 7.02(d, 2H, J=8.6Hz), 7.94(d, 2H, J=8.4Hz), 8.09(d, 2H, J=8.4 Hz). [0794] 화합물은 1.47 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다

128 [0795] 실시예 5-41: 4-(N-(3- 플루오로 -4- 메톡시벤질 )-N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 )- 벤조산 [0796] [0797] 4-( 브로모메틸 )-2- 플루오로 -1- 메톡시벤젠및메틸 4-(N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조에이트 ( 실시예 5-10b) 로부 터실시예 5-10 과같이제조했다. MS (M-H, ); 1 H NMR (400MHz, CD 3 OD): δ, ppm: 3.73(s, 3H), 3.80(s, 3H), 4.24(s, 2H), 4.28(s, 2H), 6.75(m, 4H), 6.88(m, 1H), 6.97(d, 2H, J=8.6Hz), 7.88(d, 2H, J=8.3Hz), 8.14(d, 2H, J=8.3 Hz). [0798] 화합물은 1.11 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0799] 실시예 5-42: 4-((4- 하이드록시 -N-(2- 메톡시벤질 ) 페닐설폰아미도 ) 메틸 )- 벤조산 [0800] [0801] [0802] 4-(N-(2-메톡시벤질 ) 설파모일 ) 페닐아세테이트 ( 실시예 5-42a) (50 mg, 0.15 mmol) 을아세톤 (1.0 ml) 에서용해시키고, 그다음, 세슘카보네이트 (97 mg, 0.30 mmol) 및메틸 4-( 브로모메틸 ) 벤조에이트 (38 mg, 0.17 mmol) 을첨가했다. 혼합물을실온에서밤새교반한다음, 유기염을여과제거했다. 아세톤을진공에서제거하고, 잔류물을에틸아세테이트에재용해시키고, 물, 그다음염수로세정했다. 유기층을황산마그네슘상에서건조시키고, 농축했다. 조생성물을용리액으로서에틸아세테이트 / 헥산에의한칼럼크로마토그래피로정제하여메틸 4-((4-아세트옥시-N-(2-메톡시벤질 ) 페닐설폰아미도 ) 메틸 ) 벤조에이트를얻었다. 메틸 4-((4-아세트옥시-N-(2-메톡시벤질 ) 페닐설폰아미도 ) 메틸 ) 벤조에이트 ( 조 ( 粗 )) 을 THF (1.0 ml) 에용해시키고, 수성 NaOH (1N, 2.0 ml, 2.0 mmol) 로처리했다. 혼합물을 1시간동안환류했다. 완결시, THF 를진공에서제거하고, 수득한수성용액을 6 N 수성 HCl 로약 ph 3 로산성화했다. 수성상을 EtOAc로추출하고 (2x15 ml), 배합된유기층을물, 염수로세정하고, 황산나트륨상에서건조시키고, 농축했다. 조생성물을역상 HPLC 로정제하여 10.8 mg 의표제화합물 (2 단계에걸쳐 15% 수율 ) 을얻었다. MS (M-H, 426.1); 1 H NMR (400MHz, 아세톤 -d6): δ, ppm: 3.65(s, 3H), 4.37(s, 2H), 4.43(s, 2H), 6.79(m, 2H), 7.01(d, 2H, J=8.0Hz), 7.17(m, 2H), 7.28(d, 2H, J=7.9Hz), 7.73(d, 2H, J=8.0Hz), 7.87(d, 2H, J=7.9 Hz). [0803] 화합물은 2.56 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0804] [0805] 실시예 5-42a: 4-(N-(2-메톡시벤질 ) 설파모일 ) 페닐아세테이트 5.0 ml 의디클로로메탄중 4-( 클로로설포닐 ) 페닐아세테이트 ( 실시예 5-42b) (531 mg, mmol) 의용액을빙조에서 0 냉각했다. (2-메톡시페닐) 메탄아민 (325 μl, mmol) 및트리에틸아민 (347 μl, mmol) 을첨가했다. 그다음, 빙조를제거하고, 혼합물을실온으로가온하고, 2시간동안교반했다. 반응혼합물을농축하고, 조생성물을칼럼크로마토그래피 ( 헥산 / 에틸아세테이트 = 90/10 내지 30/70) 로정제하여순수 4-(N-(2- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 페닐아세테이트 (743 mg, 89 %) 를백색고형물로서얻었다. MS (M+H, 336.1) 1 H

129 NMR (400MHz, CDCl 3 ): δ, ppm: 2.32(s, 3H), 3.71(s, 3H), 4.18(d, 2H, J=5.8Hz), 5.15(t, 1H, J=5.8Hz), 6.71(d, 1H, J=8.2Hz), 6.82(br t, 1H, J=7.4Hz), 7.07(br d, 1H, J=7.4Hz), 7.10(d, 2H, J=8.7Hz), 7.19(br t, 1H, J=7.8Hz), 7.74(d, 2H, J=8.7 Hz). [0806] [0807] [0808] 실시예 5-42b: 4-( 클로로설포닐 ) 페닐아세테이트 g (36.08 mmol) 의 4-하이드록시벤젠설폰산을 30 ml 의아세트산무수물및 15 ml 의아세트산의혼합물에용해시키고, 6시간동안환류했다. 휘발성물질을증발시키고, 고진공하에서밤새두었다. 수득한조생성물을 100 ml 의 DCM 에용해시키고, 4.72 ml 의옥살릴클로라이드 (54.12 mmol) 및 139 μl의 DMF (1.804 mmol) 로 0 에서처리했다. 가스발생이멈출때까지교반을계속한다음, 반응물을농축하고, EtOAc 에용해시켰다. 유기층을 2 N 황산으로 2회세정하고, 염수및황산마그네슘으로건조시켰다. 농축하여 g 의 4-( 클로로설포닐 ) 페닐아세테이트를짙은흑색오일로서얻었는데, 이는결국고형화된다 (2단계에걸쳐 83 % 수율 ). 1 H-NMR (400MHz, CDCl3 ): δ, ppm: 2.35(s, 3H), 7.37(d, 2H, J=8.9Hz), 8.06(d, 2H, J=8.9 Hz). 13 C-NMR (100 MHz, CDCl 3 ): δ, ppm: 21.13, , , , , [0809] 실시예 5-43: 4-((4- 하이드록시 -N-(3- 메톡시벤질 ) 페닐설폰아미도 ) 메틸 )- 벤조산 [0810] [0811] (3- 메톡시페닐 ) 메탄아민및메틸 4-( 브로모메틸 ) 벤조에이트로부터실시예 5-42 과같이제조했다. MS (M-H, ); 1 H NMR (400MHz, 아세톤 -d6): δ, ppm: 3.66(s, 3H), 4.32(s, 2H), 4.40(s, 2H), 6.65 (br s, 1H), 6.73(m, 2H), 7.05(d, 2H, J=8.5Hz), 7.12(t, 1H, J=8.0Hz), 7.27(d, 2H, J=8.0Hz), 7.82(d, 2H, J=8.5Hz), 7.88(d, 2H, J=8.0 Hz). [0812] 화합물은 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0813] 실시예 5-44: 4-((4- 하이드록시 -N-(4- 메톡시벤질 ) 페닐설폰아미도 ) 메틸 )- 벤조산 [0814] [0815] (4- 메톡시페닐 ) 메탄아민및메틸 4-( 브로모메틸 ) 벤조에이트로부터실시예 5-42 과같이제조했다. MS (M-H, ); 1 H NMR (400MHz, 아세톤 -d6): δ, ppm: 3.73(s, 3H), 4.27(s, 2H), 4.35(s, 2H), 6.76(d, 2H, J=8.0Hz), 7.04 (d, 4H), 7.24(d, 2H, J=7.8Hz), 7.79(d, 2H, J=8.2Hz), 7.88(d, 2H, J=7.8 Hz)

130 [0816] 화합물은 3.43 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0817] 실시예 5-45: 4-((N-(3- 플루오로벤질 )-4- 하이드록시페닐설폰아미도 ) 메틸 ) 벤조산 [0818] [0819] (3- 플루오로페닐 ) 메탄아민및메틸 4-( 브로모메틸 ) 벤조에이트로부터실시예 5-42 과같이제조했다. MS (M-H, 414.1), 1 H NMR (400MHz, 아세톤 -d6): δ, ppm: 4.37(s, 2H), 4.42(s, 2H), 6.94(m, 3H), 7.06(d, 2H, J=8.3Hz), 7.21(m, 1H), 7.28(d, 2H, J=7.6Hz), 7.81(d, 2H, J=8.3Hz), 7.87(d, 2H, J=7.6 Hz). [0820] 화합물은 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0821] 실시예 5-46: N- 벤질 -N-(4- 메톡시벤질 )-4-(1H- 테트라졸 -5- 일 ) 벤젠 - 설폰아미드 [0822] [0823] N-벤질-4-시아노-N-(4-메톡시벤질 ) 벤젠설폰아미드 ( 실시예 5-46a, 400 mg, 1 mmol) 및트리메틸주석아지드 (400 mg, 2 mmol) 을톨루엔 (10 ml) 에서용해시키고, 150 에서 3시간동안마이크로파처리했다. 추가 2 당량의트리메틸주석아지드를첨가하고, 반응물을 150 에서추가 3시간동안마이크로파처리했다. 혼합물을냉각하고, 여과하여 MEOH/ 진한 HCl (50 ml : 20 ml) 에서가수분해된조주석테트라졸을얻었다. 물을첨가하고, 수득한침전물을여과로수집했다. 생성물을무수에탄올및물로재결정화하여 N-벤질-N-(4-메톡시벤질 )- 4-(1H- 테트라졸 -5- 일 ) 벤젠 - 설폰아미드를백색고형물로서얻었다. MS (M+H, ); 1 H NMR (400MHz, DMSOd6): δ, ppm: 3.65(s, 3H), 4.27(s, 2H), 4.30(s, 2H), 6.75(d, J=8.4Hz, 2H), 6.98(d, J=8.4Hz, 2H), 7.08(m, 2H), 7.20(m, 3H), 8.05(d, J=8.4Hz, 2H), 8.22(d, J=9.2Hz, 2H). [0824] 화합물은 3.67 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0825] [0826] 실시예 5-46a: N-벤질-4-시아노-N-(4-메톡시벤질 ) 벤젠설폰아미드. 4-시아노벤젠-1-설포닐클로라이드 (600 mg, 3 mmol) 을디클로로메탄 (15 ml) 중 N-벤질-1-(4-메톡시페닐 ) 메탄아민 ( 실시예 5-46b, 750 mg, 3.3 mmol) 및트리에틸아민 (500 mg, 3.6 mmol) 의용액에첨가했다. 반응물을실온에서 4시간동안교반한다음, 로토바프상에서농축했다. 조생성물을실리카겔상에서정제하여 N-벤질-4- 시아노 -N-(4- 메톡시벤질 ) 벤젠 - 설폰아미드를백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.68(s, 3H), 4.26(s, 2H), 4.31(s, 2H), 6.75(d, J=8.4Hz, 2H), 6.97(d, J=9.2Hz, 2H), 7.07(m, 2H), 7.21(m, 3H), 7.98(d, J=8.4Hz, 2H), 8.04(d, J=8.8Hz, 2H). [0827] [0828] 실시예 5-46b: N- 벤질 -1-(4- 메톡시페닐 ) 메탄아민. 4- 메톡시벤즈알데히드 (5 g, 35 mmol) 및벤질아민 (3.8 g, 35 mmol) 을디클로로에탄 (125 ml) 중나트륨트리

131 아세톡시보로하이드라이드 (10.4 g, 49 mmol) 에첨가했다. 반응물을실온에서 2시간교반한다음, 농축했다. 혼합물을디클로로메탄 (200 ml) 으로희석하고, 포화수성탄산수소나트륨 (200 ml), 염수 (200 ml) 로세정하고, 황산마그네슘상에서건조시켰다. 조아민을농축하고, 실리카겔크로마토그래피 ( 헥산중 70% 에틸아세테이트 ) 로정제하여 N-벤질-1-(4-메톡시페닐 ) 메탄아민을오일로서얻었다. 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.59(s, 2H), 3.64(s, 2H), 3.71(s, 3H), 6.86(d, J=8.8Hz, 2H), 7.28(m, 7H). [0829] 실시예 5-47: 2-(4-(N- 벤질 -N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 페닐 ) 아세트산. [0830] [0831] 메틸 2-(4-( 클로로설포닐 ) 페닐 ) 아세테이트 ( 실시예 5-47a), 4- 메톡시벤즈알데히드및벤질아민로부터실시예 5-27 과같이제조했다. MS (M-H, ); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.66(s, 3H), 3.72(s, 2H), 4.18(s, 2H), 4.22(s, 2H), 6.73(d, J=8.4Hz, 2H), 6.91(d, J=8.4Hz, 2H), 7.02(m, 2H), 7.19(m, 3H), 7.49(d, J=8.4Hz, 2H), 7.80(d, J=8Hz, 2H). [0832] [0833] 실시예 5-47a: 메틸 2-(4-( 클로로설포닐 ) 페닐 ) 아세테이트. 2-(4-( 클로로설포닐 ) 페닐 ) 아세트산 (600 mg, 2.6 mmol) 을티오닐클로라이드 (3 ml) 에첨가하고, 80 에서 1 시간동안가열했다. 반응혼합물을농축하고, 빙조에서 0 로냉각하고, 얼음같이차가운메탄올을적가했다. 혼합물을 30분동안교반하고, 농축하여메틸 2-(4-( 클로로설포닐 ) 페닐 )-아세테이트를오일로서얻 었다. 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.57(s, 3H), 3.65(s, 2H), 7.21(d, J=8Hz, 2H), 7.55(d, J=8Hz, 2H). [0834] 실시예 5-48: 4-((N- 벤질 -4- 카르복시페닐설폰아미도 ) 메틸 ) 벤조산. [0835] [0836] 메틸 -4-( 클로로설포닐 ) 벤조에이트 ( 실시예 5-10c), 벤질아민및메틸 4-( 브로모메틸 ) 벤조에이트로부터실시예 5-10 과같이제조했다. MS (M+H, ); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 4.29(s, 2H), 4.34(s, 2H), 7.03(m, 2H), 7.12(m, 2H), 7.68(d, J=8Hz, 2H), 7.94(d, J=8.8Hz, 2H), 8.06(d, J=8.8Hz, 2H), 13.03(s, 2H)

132 [0837] 실시예 5-49: 4-( 벤질 (4- 메톡시벤질 ) 카르바모일 ) 벤조산 [0838] [0839] 4-( 클로로카보닐 ) 벤조에이트및 N-벤질-1-(4-메톡시페닐 ) 메탄아민로부터실시예 5-27과같이제조했다. 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.72(d, J=7.6Hz, 3H), 4.26(s, 1H), 4.30(s, 1H), 4.50(s, 1H), 4.55(s, 1H), 6.89(m, 2H), 7.02(m, 1H), 7.10(m, 1H), 7.10(m, 1H), 7.20(m, 1H), 7.28(m, 4H), 7.55(m, 2H), 7.96(m, 2H), 13.13(s, 1H). [0840] 실시예 5-50: 4-(N-(4- 플루오로 -3- 메톡시벤질 )-N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 )- 벤조산 [0841] [0842] 4-( 브로모메틸 )-4- 플루오로 -3- 메톡시벤젠및메틸 4-(N-(4- 메톡시벤질 ) 설파모일 ) 벤조에이트 ( 실시예 5-10b) 로부 터실시예 5-10 과같이제조했다. MS (M-H, ); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.59(s, 3H), 3.67(s, 3H), 4.25(s, 2H), 4.25(s, 2H), 6.62(m, 2H), 6.77(d, J=8.4Hz, 2H), 7.02(m, 3H), 7.97(d, J=8Hz, 2H), 8.01(d, J=8.8Hz, 2H), 13.49(s, 1H). [0843] 화합물은 1.65 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0844] [0845] 추가화합물을실험적으로테스트하고실측한결과, ht2r14 쓴맛수용체의억제제로서비교적고수준의유효성 을갖는다. 테스트결과는하기의표 C 에나타나있다. [ 표 C] [0846]

133 [0847]

134 [0848]

135 [0849]

136 [0850]

137 [0851]

138 [0852]

139 [0853] [0854]

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153 [0868]

154 [0869]

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156 [0871]

157 [0872]

158 [0873]

159 [0874]

160 [0875]

161 [0876]

162 [0877] [0878] 실시예 6-1: (Z)-3-(5-(2,5- 디메톡시벤질리덴 )-4- 옥소 -2- 티옥소티아졸리딘 -3- 일 ) 프로판산 [0879] [0880] 3-(4- 옥소 -2- 티옥소티아졸리딘 -3- 일 ) 프로판산 (200 mg, 1 mmol), 2,5- 디메톡시벤즈알데히드 (168 mg, 1 mmol) 및피페리딘 (0.3 ml) 을에탄올 (3 ml) 에서배합하고, 마이크로웨이브에서 100 에서 10 분동안가열했다. 반 응물을냉각하고, 고형물을여과로수집하고, 에틸아세테이트 / 헥산 (1/1) 로세정하고, 에탄올로부터재결정화 하여 85 % 수율의표제화합물 (309 mg, 갈색 - 오렌지색고형물 ) 을얻었다. MS (M+H, 284); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 2.57 (t, 2H)), 3.74 (s, J=6.8Hz, 3H), 3.84(s, 3H), 4.19 (t, 2H), 6.90(s, 1H), 7.10(s, 2H), 7.86(s, 1H). [0881] 화합물은 2.75 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다

163 [0882] 실시예 6-2: (E)-2- 시아노 -3-( 푸란 -2- 일 )-N-(5- 페닐 -1,3,4- 티아디아졸 -2- 일 ) 아크릴아미드 [0883] [0884] [0885] 5-페닐-1,3,4-티아디아졸-2-아민 (600 mg, 3.3 mmol), 시아노아세트산 (300 mg, 3.6 mmol), 및 EDC-HCl (861 mg, 4.5 mmol) 을아세토니트릴 (15 ml) 에서실온에서 2시간동안교반했다. 혼합물을수성 1N HCl 로희석하고, 수성상을에틸아세테이트로추출했다. 배합된유기추출물을황산나트륨상에서건조시키고, 여과하고, 진공에서농축했다. 잔류물을에틸아세테이트 / 헥산 (1/9) 로분쇄하여 2-시아노-N-(5-페닐-1,3,4-티아디아졸-2-일 ) 아세트아미드를백색고형물로서얻었는데, 이는추가정제없이사용되었다. 312 mg 의 2-시아노-N-(5-페닐-1,3,4-티아디아졸-2- 일 ) 아세트아미드및 150 μl의푸란-2-카르브알데히드를 2.5 ml 의 DMF 에서혼합하고, 마이크로웨이브에서 150 에서 15분동안가열했다. 5 ml 의물을첨가하고, 수득한침전물을수집하고, 물 (4x) 로세정하여조생성물을얻었다. 에탄올로부터재결정화하여 180 mg 의순수생성 물을갈색고형물로서얻었다. MS (M+H, 323); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 6.82(m, 1H)), 7.43 (d, 1H), 7.49(m, 4H), 7.87(m, 2H), 8.15(s, 1H), 8.22 (br, s, 1H). [0886] 화합물은 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0887] 실시예 6-3: N-(2,3- 디하이드로벤조 [b][1,4] 디옥신 -6- 일 )-1,4- 디메틸 -2,3- 디옥소 -1,2,3,4- 테트라하이드로퀴녹살 린 -6- 설폰아미드 [0888] [0889] 1,4-디메틸-2,3-디옥소-1,2,3,4-테트라하이드로퀴녹살린 -6-설포닐클로라이드 ( 실시예 6-3a, 450 mg, 1.6 mmo l) 을디클로로메탄 (10 ml) 중 2,3-디하이드로벤조 [b][1,4] 디옥신-6-아민 (215 mg, 1.4 mmol) 및트리에틸아민 (170 mg, 1.7 mmol) 의교반용액에첨가했다. 반응물을실온에서밤새교반한다음, 농축했다. 조생성물을실리카겔크로마토그래피 ( 헥산중 0-30 % 에틸아세테이트 ) 로정제하여 N-(2,3-디하이드로벤조 [b][1,4] 디옥신- 6-일 )-1,4-디메틸-2,3-디옥소-1,2,3,4-테트라하이드로퀴녹살린 -6-설폰아미드를백색고형물로서얻었다. MS (M+H, ); 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.47(s, 3H), 3.49(s, 3H), 4.12(m, 4H), 6.55(m, 1H), 6.61(d, J=2.4Hz, 1H), 6.69(d, J=8.4Hz, 1H), 7.53(m, 1H), 7.59(d, J=2Hz, 1H), 10.00(s, 1H). [0890] 화합물은 7.71 μm 의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [0891] [0892] 실시예 6-3a: 1,4-디메틸-2,3-디옥소-1,2,3,4-테트라하이드로퀴녹살린 -6-설포닐클로라이드클로로설폰산 (3 ml) 을 65 로가열하고, 1,4-디메틸퀴녹살린-2,3(1H,4H)-디온 ( 실시예 6-3b, 1 g, 5.5 mmo l) 을 0.5시간에걸쳐나누어서첨가했다. 반응혼합물을 4시간동안교반한다음, 실온으로냉각하고, 얼음에서서히부었다. 수득한침전물을여과하고, 물로세정하여 1,4-디메틸-2,3-디옥소-1,2,3,4-테트라하이드로퀴녹 살린 -6- 설포닐클로라이드를백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.50(s, 6H), 7.25(m, 2H), 7.38(m, 4H). [0893] [0894] 실시예 6-3b: 1,4-디메틸퀴녹살린-2,3(1H,4H)-디온 DMF (200 ml) 중 NaH (2.5 g) 의용액에퀴녹살린-2,3(1H,4H)-디온 (5 g) 을나누어서첨가하고, 그다음, 메틸요오다이드 (3.8 ml) 를서서히첨가했다. 반응혼합물을실온에서 4시간동안교반한다음, 물 (200 ml) 을첨가했다. 수득한침전물을여과로수집하고, 물로세정하여 1,4-디메틸퀴녹살린-2,3(1H,4H)-디온을백색고형물로 서 95 % 수율로얻었다. 1 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 3.50(s, 6H), 7.25(m, 2H), 7.38(m, 4H)

164 [0895] 실시예 6-4: 1,4- 디메틸 -2,3- 디옥소 -N-(4-( 피리딘 -2- 일메틸 ) 페닐 )-1,2,3,4- 테트라하이드로퀴녹살린 -6- 설폰아미 드. [0896] [0897] [0898] [0899] [0900] 화합물은상업적으로이용할수있고, Ryan Scientific 로구매할수있다. 화합물은 6.14 μm의, ht2r14 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. 추가화합물을실험적으로테스트하고실측한결과, ht2r14 쓴맛수용체의억제제로서비교적고수준의유효성을갖는다. 테스트결과는하기의표 D에나타나있다. [ 표 D] [0901]

165 [0902]

166 [0903]

167 [0904]

168 [0905]

169 [0906] [0907] [0908] [0909] [0910] [0911] 표 7: 23개의쓴맛수용체에대한대표적인스크리닝결과. 실시예 5 및 6 으로부터의화합물을 23개의쓴맛수용체의패널에대하여스크리닝했다. 쓴맛수용체를상응하는작용물질로 EC80 로활성화했고, 25 μm 의농도에서상기화합물로처리했다. 데이타는하기의표에요약되어있다. 80% 이상의억제율 = % 내지 80% 의억제율 = % 내지 60% 의억제율 =

170 [0912] 20% 내지 40% 의억제율 = + [0913]

171 [0914] [0915] [0916] 실시예 7. 실시예 10-10에대한감각데이터. 개별길항물질의유효성을측정하기위해, 미각테스트를 T2R8 특이적작용물질, 관심대상화합물및참조쓴맛차단제로수행했다. 본출원인은 U.S. 가출원시리즈 No. 60/957,129 (2007년 8월 21일출원 ) 으로부터의실시예 4-8: N-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 벤조 [d][1,3] 디옥솔-5-카르복사미드의미각효과를갖는것으로증명된우수한 ht2r8 길항물질을이전에기재하였다. 거피자체및넓은스펙트럼쓴맛차단제와배합한거피의쓴맛을감소시키는것을보여주었다. 표 6에보여진바와같이, 본발명의대조길항물질 ( 실시예 10-8) 과비교할때, 실시예 10-10의 ht2r8 길항물질은감지된쓴맛를차단하기위한큰능력을보여준다. 표 6 [0917] [0918] 이실시예의미각테스트에의해설명된바와같이, 쓴맛의감지는 ht2r8 의길항물질의혼입에의해감소또는

172 제거될수있고, 실시예 10-10의길항물질은 N-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 벤조 [d][1,3] 디옥솔-5-카르복사미드 (7767) 와같은공지된쓴맛길항물질과비교할때더잠재적인유사체인것으로보인다. 쓴맛의감지는음식, 음료수및 / 또는의약과같은조성물내에 ht2r8 의길항물질의혼입에의해감소또는제거될수있다는것은틀림없는데, 여기서쓴맛은 T2R8 작용물질에의해유도된다. [0919] [0920] 실시예 8. ht2r8 의길항물질의확인길항물질을확인하기위해, 무차별적인키메라 G16g44 단백질과함께 ht2r8를안정하게발현시키는세포주는이전의특허출원에기재된바와같이산출되었다. 고처리량의분석은안정한세포주및 FLIPR (Fluorescent Imaging Plate Reader) 를사용하여행해졌다. ht2r8 의작용물질은각각의최대활성의 70-80% 이하로수용체를활성시키기위해사용되었다. ht2r8 에대해, 사용된작용물질은안드로그라폴리드 (200 μm) 였다. 길항물질을확인하기위해, 다양한화학구조를갖는화합물은작용물질과함께첨가되었다. 수용체활성의상당한감소를통계적으로야기할수있는화합물은풀링되고, 투여에따른억제곡선으로재확인된다. 골격 A 및골격 B 는 ht2r8 길항물질로서확인되었다 ( 도 1). 구체적인예는표 1에제공된다. [0921] [0922] 실시예 9. ht2r8 길항물질 실시예 9-1: 2-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이소인돌린 -1,3- 디온. [0923] [0924] 2-(1H-피라졸-4-일 ) 이소인돌린-1,3-디온 ( 실시예 9-1a) (1.5 g, 7 mmol), 4-( 클로로메틸 )-3,5-디메틸이속사졸 (1.5 g, 10 mmol), 및세슘카보네이트 (3.3g, 10 mmol) 을 DMF (20 ml) 에서 80 에서 3시간동안교반했다. 반응물을냉각하고, 물 (150 ml) 으로희석하고, 에틸아세테이트로추출했다 (3x, 75 ml). 배합된유기추출물을황산나트륨상에서건조시키고, 여과하고, 로토바프상에서농축했다. 고형생성물을에틸아세테이트 / 헥산 (1/9) 로분쇄하고, 환류무수에탄올 (30 ml) 로부터재결정화하여 2-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피 라졸-4-일 ) 이소인돌린-1,3-디온 (900 mg, 38%) 를담황색고형물로서얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 1.36(d, 3H), 2.16(s, 3H), 2.41(s, 3H, J=7.2Hz), 5.22(s, 2H), 7.81(s, 1H), (m, 4H), 8.21(s, 1H). MS M+H 계산치 실측치 융점 : 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.18 μm 의 IC 50 을가졌다. [0925] 실시예 9-1a: 1- 토실 -1H- 피라졸 -4- 아민 [0926] [0927] 1-토실-1H-피라졸-4-아민 ( 실시예 9-1b) (3g, 12.7 mmol) 및이소벤조푸란-1,3-디온 (1.9 g, 13 mmol) 을 DMF/ 아세토니트릴 (1/1) (20 ml) 에서 100 에서 1시간동안교반했다. 혼합물을냉각하고, 물로희석했다. 침전물을여과로수집하고, 추가물, 그다음, 에틸아세테이트및헥산으로세정했다. 고형생성물을고진공하에서건조시켜 2-(1H-피라졸-4-일 ) 이소인돌린-1,3-디온 (2.5 g, 92%) 를황색고형물로서얻었다. MS M+H 계산치 실측치 H NMR (CDCl 3, 400 MHz) δ (m, 6H), 13.03(bs, 1H)

173 [0928] 실시예 9-1b: 1- 토실 -1H- 피라졸 -4- 아민. [0929] [0930] MeOH (150 ml) 중 4- 니트로 -1- 토실 -1H- 피라졸 ( 실시예 9-1c) (3 g, 11.2 mmol) 및 10 % Pd/C (800 mg) 을 2 기압 의수소하에서파르 (Parr) 수소발생기상에서 3 시간동안교반했다. 혼합물을셀라이트를통해여과하고, 농 축하고, 실리카겔크로마토그래피 ( 헥산중 80% 에틸아세테이트 ) 로정제하여 1- 토실 -1H- 피라졸 -4- 아민 (1.9 g, 71%) 를분홍색고형물로서얻었다. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz) δ 2.40(s, 3H), 3.01(bs, 2H), 7.29(d, 2H, J=8Hz), 7.41(d, 1H, J=1.2Hz), 7.53(d, 1H, J=1.2Hz), 7.81(d, 2H, J=8 Hz). [0931] 실시예 9-1c: 4- 니트로 -1- 토실 -1H- 피라졸. [0932] [0933] 4-니트로-1H-피라졸 (500 mg, 4.4 mmol), 4-메틸벤젠-1-설포닐클로라이드 (840 mg, 4.4 mmol), 및트리에틸아민 (510 mg, 5 mmol) 을 DMF (25 ml) 에서 80 에서 1시간동안교반했다. 반응물을냉각하고, 물 (200 ml) 로희석하고, 에틸아세테이트 (3x, 100 ml) 로추출했다. 유기상을수성 1N HCl (200 ml) 및물 (200 ml) 로세정하고, 황산나트륨상에서건조시키고, 여과하고, 로토바프상에서농축했다. 고형물을헥산으로분쇄하여 4- 니트로 -1- 토실 -1H- 피라졸 (600 mg, 50%) 를회색이도는백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz) δ 2.40(s, 3H), 7.52(d, 2H, J=8.4Hz), 7.98(d, 2H, J=8.8Hz), 8.57(s, 1H), 9.58(s, 1H). [0934] 실시예 9-2: 2-((1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일아미노 ) 메틸 ) 벤조니트릴 [0935] [0936] DMF (3 ml) 중 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-아민-하이드로클로라이드 (100 mg, 0.44 mmol), 2-( 브로모메틸 ) 벤조니트릴 (115 mg, 0.6 mmol), 및트리에틸아민 (0.5 ml, 3.5 mmmol) 을마이크로웨이브반응기에서 80 에서 10분동안가열하고, 교반했다. 반응물을냉각하고, 물 (50 ml) 로희석하고, 에틸아세테이트로추출했다 (3x, 30 ml). 배합된유기추출물을황산나트륨상에서건조시키고, 로토바프상에서농축했다. 잔류물을에탄올 (70 ml), 물 (3 ml) 및아세트산 (1 ml) 에용해시키고, 혼합물을 2시간동안환류했다. 용액을로토바프상에서농축하고, 메탄올 (3 ml) 에서취하고, 3-1 ml 분취액중역상 HPLC ( 물중 5 내지 95% 아세토니트릴 : 16분구배 ) 로정제했다. 순수분획을배합하고, 로토바프상에서농축했다. 잔류물을에틸아세테이트 / 헥산 (1/9) 로분쇄하여 2-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 이소인돌린-1-온 (85 mg, 61%) 를순수백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 2.18(s, 3H), 2.43(s, 3H), 4.97(s, 2H), 5.18(s, 2H), (m, 3H), 7.77(s, 1H), 8.10(d, J=8Hz, 1H), 8.27(s, 1H), 9.19(bs, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 30 μm 의 IC 50 을가졌다

174 [0937] 실시예 9-3: 2-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이소인돌린 -1- 온 [0938] [0939] 2-((1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일아미노) 메틸 ) 벤조니트릴 ( 실시예 9-2) (30 mg, 0.14 mmol) 을 MeOH/ 2N 수성 NaOH (5 ml) 의혼합물에서 100 에서 30분동안마이크로웨이브반응기에서교반했다. 반응물을 1N 수성 HCl (100 ml) 로산성화하고, 에틸아세테이트로추출했다 (3x, 70 ml). 배합된유기추출물을황산나트륨상에서건조시키고, 농축했다. 잔류물을 MeOH (3 ml) 에용해시키고, ml 분취액중역상 HPLC ( 물중 5 내지 95% 아세토니트릴 : 16분구배 ) 로정제했다. 순수분획을배합하고, 농축하여 2-(1-((3,5-디메틸 이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 이소인돌린-1-온 (21 mg, 50%) 를순수백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 2.15(s, 3H), 2.41(s, 3H), 4.81(s, 2H), 5.17(s, 2H), (m, 1H), (m, 2H), 7.72(d, J=7.2Hz, 1H), 7.75(s, 1H), 8.20(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 11 μm 의 IC 50 을가졌다. [0940] 실시예 9-4: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 퀴나졸린 -2,4(1H,3H)- 디온 [0941] [0942] 아세토니트릴 (3 ml) 중 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-아민하이드로클로라이드 (75 mg, 0.33 mmol), 메틸 2-이소시아나토벤조에이트, 및트리에틸아민 (200 mg, 2 mmol) 을마이크로웨이브반응기에서 100 에서 30분동안가열했다. 반응물을냉각하고, 물 (75 ml) 로희석하고, 에틸아세테이트로추출했다 (3x, 50 ml). 배합된유기추출물을황산나트륨상에서건조시키고, 여과하고, 로토바프상에서농축했다. 잔류물을실리카겔크로마토그래피 ( 헥산중 75% 에틸아세테이트 ) 로정제하여 3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 퀴나졸린-2,4(1H,3H)-디온 (20 mg, 18%) 를옅은분홍색고형물로서얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 2.16(s, 3H), 2.40(s, 3H), 5.17(s, 2H), (m, 2H), 7.50(s, 1H), 7.66(dt, J=8, 1.2Hz, 1H), 7.92(d, J=6.8Hz, 1H), 7.95(s, 1H), 11.52(bs, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 1.5 μm 의 IC 50 을가졌다. [0943] 실시예 9-5: 1- 벤질 -3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 테트라하이드로피리미딘 -2(1H)- 온 [0944] [0945] DMF (3 ml) 중 1-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 테트라하이드로피리미딘-2(1H)- 온 ( 실시예 9-5a) (50 mg, 0.18 mmol) 및 60% 나트륨하이드라이드 (8 mg, 0.20 mmol) 을실온에서 15분동안교반한다음, 0 로냉각했다. 벤질브로마이드 (31 mg, 0.18 mmol) 을혼합물에첨가하고, 실온에서가온한다음, 2시간동안교반했다. 반응물을메탄올로급랭시키고, 농축했다. 반응물을염수 (50 ml) 로희석하고, 디클로로메탄으로추출했다 (2x, 50 ml). 배합된유기추출물을황산마그네슘상에서건조시키고, 여과하고, 로토바프상에서농축했다. 잔류물을디클로로메탄 (5 ml) 에서취하고, 실리카칼럼크로마토그래피 ( 메탄올중 100% 내지 90% 디클로로메탄 : 30분구배 ) 로정제하여 1-벤질-3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 테트 라하이드로피리미딘 -2(1H)- 온 (20 mg, 30%) 를백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ (m, 2H), 2.10(s, 3H), 2.37(s, 3H), 3.12(m, 2H), 3.55(t, J=5.8Hz, 2H), 4.48(s, 2H), 5.05(s, 2H),

175 (m, 5H), 7.49(s, 1H), 7.84(s, 1H). LC/MS; C 20 H 23 N 5 O 2 에대해계산된 [M+H]; 예상치 ; 실측 치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 1.65 μm 의 IC 50 을가졌다. [0946] 실시예 9-5a: 1-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 테트라하이드로피리미딘 -2(1H)- 온 [0947] [0948] DMF (2 ml) 중 1-(3-클로로프로필 )-3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일) 메틸 )1H-피라졸-4-일) 우레아 ( 실시예 9-5b) (200 mg, 0.64 mmol) 및 60% 나트륨하이드라이드 (28 mg, 0.71 mmol) 을 0 에서 15분동안교반한다음, 실온까지가온하고, 2시간동안교반했다. 반응물을메탄올로급랭시키고, 농축했다. 반응물을염수 (50 ml) 로희석하고, 디클로로메탄으로추출했다 (2x, 50 ml). 배합된유기추출물을황산마그네슘상에서건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔류물을디클로로메탄 (5 ml) 에서취하고, 실리카칼럼크로마토그래피 ( 메탄올중 100% 내지 90% 디클로로메탄 : 30분구배 ) 로정제하여 1-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 테트라 하이드로피리미딘 -2(1H)- 온 (84 mg, 48%) 를백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ (m, 2H), 2.10(s, 3H), 2.37(s, 3H), 3.12(m, 2H), 3.48(t, J=6.0Hz, 2H), 5.05(s, 2H), 6.57(s, 1H), 7.46(s, 1H), 7.80(s, 1H). LC/MS; C 13 H 17 N 5 O 2 에대해계산된 [M+H] 예상치 ; 실측치 [0949] 실시예 9-5b: 1-(3- 클로로프로필 )-3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 우레아 [0950] [0951] 아세토니트릴 (5 ml) 중 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-아민 (342 mg, 1.78 mmol) 및 2-클로로프로필이소시아네이트 (213 mg, 1.78 mmol) 을 65 에서 16시간동안가열했다. 반응물을실온으로냉각하고, 농축하고, 잔류물을디클로로메탄 (5 ml) 에용해시키고, 실리카칼럼크로마토그래피 ( 메탄올중 100% 내지 90% 디클로로메탄 : 30분구배 ) 로정제했다. 순수분획을배합하고, 농축한다음, 에틸아세테이트 / 헥산 (1/9) 로분쇄하여 (1-(3-클로로프로필)-3-(1-((3,5-디메틸이속사졸 -4-일) 메틸 )1H-피라졸-4-일) 우레아 (218 mg, 39%) 를백색고형물로서얻었다. LC/MS; C 12 H 16 ClN 5 O 2 에대해계산된 [M+H]; 예상치 ; 실측치 [0952] 실시예 9-6: 1- 벤질 -3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1,3,5- 트리아지난 -2- 온 [0953] [0954] 디클로로메탄 (1 ml) 중 1-벤질-5-(2,4-디메톡시벤질 )-3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일) 메틸 )-1H-피라졸-4- 일 )-1,3,5-트리아지난-2-온( 실시예 9-6a) (44 mg, 0.09 mmol), 아니솔 (9 mg, 0.09 mmol), 및 50% 트리플루오로아세트산 / 디클로로메탄용액 (1 ml) 을실온에서 2시간동안교반했다. 반응물을농축하고, 포화중탄산나트륨 (50 ml) 으로급랭시키고, 에틸아세테이트로추출하고 (2x, 50 ml), 염수 (50 ml) 로세정했다. 배합된유기추출물을황산마그네슘상에서건조시키고, 여과하고, 농축했다. 실리카칼럼크로마토그래피 ( 메탄올중 100% 내지 90% 디클로로메탄 : 30분구배 ) 로정제하여 1-벤질-3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4- 일 )-1,3,5-트리아지난-2-온 (19 mg, 62%) 를백색고형물로서얻었다. LC/MS; C 19 H 22 N 6 O 2 에대해계산된 [M+H];

176 예상치 ; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 5.84 μm 의 IC 50 을가졌다. [0955] 실시예 9-6a: 1- 벤질 -5-(2,4- 디메톡시벤질 )-3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1,3,5- 트 리아지난 -2- 온 [0956] [0957] 1-벤질-3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4- 일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 우레아 ( 실시예 9-6b) (50 mg, 0.15 mmol), 2,4-메톡시벤질아민 (26 mg, 0.15 mmol), 및포름알데히드 ( 물중 37 중량 %) (25 mg, 0.31 mmol) 을 100 에서 16시간동안가열했다. 반응물을실온으로냉각하고, 염수 (50 ml) 로희석하고, 디클로로메탄으로추출했다 (2x, 50 ml). 배합된유기추출물을황산마그네슘상에서건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔류물을실리카칼럼크로마토그래피 ( 메탄올중 100% 내지 90% 디클로로메탄 : 30분구배 ) 로정제하여 1-벤질-5-(2,4-디메톡시벤질 )-3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-1,3,5-트리아지난-2-온 (44 mg, 56%) 를오일로서얻었다. LC/MS; C 28 H 32 N 6 O 4 에대해계산된 [M+H]; 예상치 ; 실측치 [0958] 실시예 9-6b: 1- 벤질 -3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 우레아 [0959] [0960] 아세토니트릴 (5 ml) 중 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-아민 (287 mg, 1.49 mmol) 및벤질이소시아네이트 (199 mg, 1.49 mmol) 을 65 에서 16시간동안가열했다. 반응물을실온으로냉각하고, 농축했다. 잔류물을실리카칼럼크로마토그래피 ( 메탄올중 100% 내지 90% 디클로로메탄 : 30분구배 ) 및에틸아세테이트 / 헥산 (1/9) 로분쇄하여 1-벤질-3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4- 일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 우레아 (246 mg, 51%) 를백색고형물로서얻었다. LC/MS; C 17 H 19 N 5 O 2 에대해계산된 [M+H]; 예상치 ; 실측치 [0961] 실시예 9-7: 5- 벤질 -1-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-3- 펜에틸 -1,3,5- 트리아지난 -2- 온 [0962] [0963] 1-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-3- 펜에틸우레아 ( 실시예 9-7a), 포름알데히드, 및벤질 아민으로부터실시예 9-6a 와같이제조했다. 수율 : 15%. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 2.11(s, 3H), 2.37(s, 3H), 2.69(t, J=7.6Hz, 2H), 3.39(t, J=7.8Hz, 2H), 3.81(s, 2H), 4.16(s, 2H), 4.42(s, 2H), 5.05(s, 2H), (m, 10H), 7.42(s, 1H), 7.78(s, 1H). LC/MS; C 27 H 30 N 6 O 2 에대해계산된 [M+H]; 예상치 ; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 2.64 μm 의 IC 50 을

177 가졌다. [0964] 실시예 9-7a: 1-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-3- 펜에틸우레아 [0965] [0966] 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 아민및펜에틸이소시아네이트로부터실시예 9-6b 와같이제 조했다. 수율 : 29%. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 2.10(s, 3H), 2.36(s, 3H), 2.69(t, J=7.2Hz, 2H), 3.25(q, J=7.4Hz, 2H), 5.02(s, 2H), 6.00(t, J=5.8Hz, 1H), (m, 6H), 7.68(s, 1H), 8.13(s, 1H). LC/MS; C 18 H 21 N 5 O 2 에대해계산된 [M+H]; 예상치 ; 실측치 [0967] 실시예 9-8: 1-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-3- 펜에틸 -1,3,5- 트리아지난 -2,4,6- 트리온 [0968] [0969] THF (2 ml) 중 1-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-3-펜에틸우레아 ( 실시예 9-7a) (100 mg, 0.29 mmol) 을 0 로냉각하고, n-클로로카보닐이소시아네이트 (93 mg, 0.88 mmol) 을서서히첨가했다. 첨가후, 반응물을실온으로가온하고, 1시간동안교반했다. 반응물을농축하고, 잔류물을실리카칼럼크로마토그래피 ( 메탄올중 100% 내지 90% 디클로로메탄 : 30분구배 ) 로정제하여 (1-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4- 일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-3-펜에틸-1,3,5-트리아지난 -2,4,6-트리온 (100 mg, 83%) 를백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 2.13(s, 3H), 2.39(s, 3H), 2.82(t, J=5.8Hz, 2H), 3.88(t, J=8.0Hz, 2H), 5.17(s, 2H), (m, 5H), 7.44(s, 1H), 7.89(s, 1H), 11.84(s, 1H). LC/MS; C 20 H 20 N 6 O 4 에대해계산된 [M+H]; 예상치 ; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 3.03 μm 의 IC 50 을가졌다. [0970] 실시예 9-9: 1- 벤질 -3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1,3,5- 트리아지난 -2,4,6- 트리온 [0971] [0972] THF (2 ml) 중 1-벤질-3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 우레아 ( 실시예 95b) (100 mg, 0.31 mmol) 을 0 로냉각하고, n-클로로카보닐이소시아네이트 (97 mg, 0.92 mmol) 을서서히첨가했다. 첨가후, 반응물을실온까지가온하고, 1시간동안교반했다. 반응물을농축하고, 잔류물을실리카칼럼크로마토그래피 ( 메탄올중 100% 내지 90% 디클로로메탄 : 30분구배 ) 로정제하여 1-벤질-3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4- 일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-1,3,5-트리아지난-2,4,6-트리온 (112 mg, 93%) 를백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 2.12(s, 3H), 2.38(s, 3H), 4.87(s, 2H), 5.16(s, 2H), (m, 5H), 7.45(s, 1H), 7.90(s, 1H), 11.93(s, 1H). LC/MS; C 19 H 18 N 6 O 4 에대해계산된 [M+H]; 예상치 ; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 1.14 μm 의 IC 50 을가졌다

178 [0973] [0974] 실시예 10. ht2r8 길항물질 : 본발명의화합물의제조 실시예 10-1: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 [0975] [0976] 톨루엔 (100 ml) 중 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-카보닐아지드 ( 실시예 10-1a) (6 g, 25.5 mmol) 을 1시간동안환류하고, 실온으로질소대기하에서냉각했다. 글라이신메틸에스테르-하이드로클로라이드 (3.1 g, 26 mmol) 및트리에틸아민 (3.2 g, 32 mmol) 을첨가하고, 혼합물을 16시간동안환류했다. 반응물을냉각하고, 용매를로토바프상에서제거했다. 고형물을에틸아세테이트 (100 ml) 에서재용해시키고, 유기상을 1N HCl 용액으로세정했다 (2x, 150 ml). 수성상을에틸아세테이트로역추출했다 (2x, 75 ml) 및배합된유기추출물을황산나트륨상에서건조시키고, 농축했다. 수득한고형물을에틸아세테이트 / 헥산 (1/9) 로분쇄하고, 고진공하에서건조시켜 3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 이미다졸리딘-2,4-디 온 (5.2 g, 74%) 를백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 2.19(s, 3H), 2.42(s, 3H), 4.09(s, 2H), 5.06(s, 2H), 5.68(bs, 1H), 7.90(s, 1H), 8.05(1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제 하는것을보여주었고 1.7 μm 의 IC 50 을가졌다. [0977] 실시예 10-1a: 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 카보닐아지드 [0978] [0979] 아질산나트륨 (450 mg, 6.5 mmol, 물중 ) (10 ml) 을 10% 수성아세트산 (50 ml) 중 1-((3,5-디메틸이속사졸-4- 일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-카보히드라지드 ( 실시예 10-1b) (1g, 4.3 mmol) 의현탁액에 10분에걸쳐적가하고, 빙수조를통해 0 로냉각했다. 반응물을추가 15분교반한다음, 에틸아세테이트로추출했다 (3x, 75 ml). 배합된유기추출물을수성포화나트륨카보네이트 (100 ml), 그다음, 물 (100 ml) 로세정했다. 배합된유기추출물을황산나트륨상에서건조시키고, 여과하고, 농축했다. 고형생성물을에틸아세테이트 / 헥산 (1/9) 로분쇄하고, 진공에서건조시켜 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-카보닐아지드 (1g, 93%) 를백색 고형물로서얻었다. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 2.20(s, 3H), 2.44(s, 3H), 5.07(s, 2H), 7.81(s, 1H), 7.93(s, 1H). [0980] 실시예 10-1b: 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 카보히드라지드 [0981] [0982] 에틸 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 카르복실레이트 ( 실시예 10-1c) (6 g, 24 mmol) 및히드 라진 (7.5g, 240 mmol) 을 12 시간동안환류하에서 EtOH (100 ml) 에서교반했다. 용액을로토바프상에서농축 하고, 고형생성물을에틸아세테이트 / 헥산 (1/9) 로분쇄하고, 고진공하에서건조시켜 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 카보히드라지드 (5.5 g, 97%) 를순수백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 2.11(s, 3H), 2.39(s, 3H), 5.15(s, 2H), 7.81(s, 1H), 8.17(s, 1H), 9.31(bs, 1H)

179 [0983] 실시예 10-1c: 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 카르복실레이트 [0984] [0985] DMF (50 ml) 중에틸 1H-피라졸-4-카르복실레이트 (4.2g, 30 mmol), 4-( 클로로메틸 )-3,5-디메틸이속사졸 (5.1 g, 35 mmol), 및세슘카보네이트 (9.8 g, 30 mmol) 을 80 에서 12시간동안교반했다. 반응물을실온으로냉각시키고, 0.1 N HCl (150 ml) 로희석하고, 에틸아세테이트로추출했다 (3x, 75 ml). 배합된유기추출물을황산나트륨상에서건조시키고, 로토바프상에서농축했다. 고형생성물을에틸아세테이트 / 헥산 (1/9) 로분쇄하고, 여과로수집하여에틸 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-카르복실레이트 (6g, 80%) 를백색 고형물로서얻었다. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 1.34(t, J=7.2Hz, 3H), 2.19(s, 3H), 2.43(s, 3H), 4.29(q, J=7.2Hz, 2H), 5.06(s, 2H), 7.77(s, 1H), 7.91(s, 1H). [0986] 실시예 10-2: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 [0987] [0988] (+/-)- 페닐알라닌메틸에스테르하이드로클로라이드및 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 카보 닐아지드로부터실시예 10-1 과같이제조했다. 수율 : 58%. 1 H NMR ( 아세톤-d 6, 400 MHz): δ 2.17(s, 3H), 2.43(s, 3H), 3.07(dd, J=14.4, 6.4Hz, 1H), 3.20(dd, J=14, 4.4Hz, 1H), 4.53(t, J=4.8Hz, 1H), 5.18(s, 2H), (m, 5H), 7.46(bs, 1H), 7.79(s, 1H), 7.99(s, 1H). MS M+H 계산치 ; 실측치 융점 : 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.18 μm 의 IC 50 을가졌다. [0989] 실시예 10-3: (S)-5- 벤질 -3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 [0990] [0991] (S)- 페닐알라닌메틸에스테르하이드로클로라이드및 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 카보닐 아지드 ( 실시예 6a) 로부터실시예 10-1 과같이제조했다. 수율 : 13% ( 키랄크로마토그래피로부터분리됨 ) 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 2.19(s, 3H), 2.42(s, 3H), 2.88(dd, J=13.6, 9.2Hz, 1H), 3.35(dd, J=13.6, 3.6Hz, 1H), (m, 1H), 5.06(s, 2H), 5.53(bs, 1H), (m, 5H), 7.85(s, 1H), 8.01(s, 1H). LC/MS; C 19 H 19 N 5 O 3 에대해계산된 [M+H]; 예상치 ; 실측치 [α] D = (-)-136, c=0.1, 에탄올. 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.12 μm 의 IC 50 을가졌다

180 [0992] 실시예 10-4: (R)-5- 벤질 -3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 [0993] [0994] (R)- 페닐알라닌메틸에스테르하이드로클로라이드및 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 카보닐 아지드로부터실시예 10-1 과같이제조했다. 수율 : 9% ( 키랄크로마토그래피로부터분리됨 ) 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 2.19(s, 3H), 2.42(s, 3H), 2.88(dd, J=13.6, 9.2Hz, 1H), 3.35(dd, J=13.6, 3.6Hz, 1H), (m, 1H), 5.06(s, 2H), 5.53(bs, 1H), (m, 5H), 7.85(s, 1H), 8.01(s, 1H). MS M+H 계산치 ; 실측치 [α] D = (+)-124, c=0.2, 에탄올. 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.11 μm 의 IC 50 을가졌다. [0995] 실시예 10-5: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(2- 펜옥시에틸 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 [0996] [0997] 3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 이미다졸리딘-2,4-디온 ( 실시예 10-1) (200 mg, 0.7 mmol), (2-브로모에톡시) 벤젠 (200 mg, 1 mmol), 및세슘카보네이트 (325 mg, 1 mmol) 을마이크로웨이브반응기에서 85 에서 20분동안가열했다. 반응물을실온으로냉각하고, 수성 1N HCl (100 ml) 로희석하고, 에틸아세테이트로추출했다 (3x, 75 ml). 배합된유기추출물을황산나트륨상에서건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔류물을메탄올 (10 ml) 에서취하고, 역상 HPLC ( 물중 5 내지 95% 아세토니트릴 : 25분구배 ) 로정제했다. 순수분획을풀링하고, 농축한다음, 무수에탄올에서재용해시키고, 로토바프상에서농축하여 (4x), 3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-1-(2-펜옥시에틸) 이미다졸리딘-2,4-디온 (150 mg, 54 %) 를백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (CDCl , 400 MHz): δ(s, 3H), 2.41(s, 3H), 3.86(t, J=5.2Hz, 2H), 4.19(t, J=4.4Hz, 2H), 4.25(s, 2H), 5.05(s, 2H), 6.88(dd, J=9.2, 1.2Hz, 2H), 7.00(dt, J=7.6, 1.2Hz, 1H), (m, 2H), 7.89(s, 1H), 8.05(s, 1H). MS M+H 계산치 ; 실측치 융점 : 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.06 μm 의 IC 50 을가졌다. [0998] 실시예 10-6: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(3- 메톡시벤질 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 [0999] [1000] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 6) 및 3- 메톡시 - 벤질브 로마이드로부터실시예 10-5 와같이제조했다. 수율 : 55%. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 2.19(s, 3H), 2.42(s, 3H), 3.81(s, 3H), 3.85(s, 2H), 4.58(s, 2H), 5.06(s, 2H), (m, 3H), (m, 1H), 7.92(s, 1H), 8.08(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.07 μm 의 IC 50 을가졌다. [1001] 실시예 10-7: 메틸 3-((3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2,4- 디옥소이미다졸리딘

181 일 ) 메틸 ) 벤조에이트 [1002] [1003] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온및 3- 메톡시 - 벤질브로마이드로 부터실시예 10-5 와같이제조했다. 수율 : 83%. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 2.20(s, 3H), 2.43(s, 3H), 3.86(s, 2H), 3.93(s, 3H), 4.67(s, 2H), 5.07(s, 2H), (m, 2H), 7.93(s, 1H), 7.95(s, 1H), 8.03(dd, J=7.2, 1.6Hz, 1H), 8.08(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.09 μm 의 IC 50 을가졌다. [1004] 실시예 10-8: 3-((3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2,4- 디옥소이미다졸리딘 -1- 일 ) 메 틸 ) 벤조산 [1005] [1006] 3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 이미다졸리딘-2,4-디온 (500 mg, 1.8 mmol) ( 실시예 10-5), 메틸 3-( 브로모메틸 ) 벤조에이트 (456 mg, 2 mmol), 및세슘카보네이트 (650 mg, 2 mmol) 을 DMF (4 ml) 마이크로웨이브반응기에서 85 에서 20분동안교반했다. 반응물을냉각하고, 1N 수성 HCl (100 ml) 로희석하고, 에틸아세테이트로추출했다 (3x, 75 ml). 배합된유기추출물을황산나트륨상에서건조시키고, 여과하고, 농축했다. 조에스테르를메탄올 (5 ml) 에서용해시키고, 수성 NaOH (50 ml, 10 중량 %) 를첨가하고, 혼합물을실온에서 2시간동안교반했다. 반응물을 1N HCl (150 ml) 로산성화하고, 에틸아세테이트로추출했다 (3x, 75 ml). 배합된유기추출물을황산나트륨상에서건조시키고, 여과하고, 로토바프상에서농축했다. 유리산을에틸아세테이트 / 헥산 (1/9) 로분쇄하고, 진공하에서건조시켜 3-((3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-2,4-디옥소이미다졸리딘 -1-일) 메틸 ) 벤조산 (610 mg, 83%) 를백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6, (s, 3H), 2.29(s, 3H), 4.00(s, 2H), 4.59(s, 2H), 5.18(s, 2H),MHz): δ (m, 2H), 7.78(s, 1H), (m, 2H), 8.18(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 1.8 μm 의 IC 50 을가졌다. [1007] 실시예 10-9: 3-((3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2,4- 디옥소이미다졸리딘 -1- 일 ) 메 틸 )-N- 메틸벤즈아미드 [1008] [1009] 아세토니트릴 (3 ml) 중 3-((3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-2,4-디옥소이미다졸리딘 - 1-일 ) 메틸 ) 벤조산 (100 mg, 0.24 mmol) ( 실시예 10-8), 메틸아민하이드로클로라이드 (67 mg, 1 mmol), 트리에틸아민 (155 mg, 1.5 mmol), 및 EDC (57 mg, 0.3 mmol) 을마이크로웨이브반응기에서 80 에서 10분동안가열했다. 반응물을냉각하고, 수성 1N HCl (100 ml) 로희석하고, 에틸아세테이트로추출했다 (3x, 75 ml). 배합된유기추출물을황산나트륨상에서건조시키고, 여과하고, 농축했다. 조생성물을 MeOH (3 ml) 에용해시키고, 역상 HPLC ( 물중 5 내지 95% 아세토니트릴 : 25분구배 ) 로정제하여 3-((3-(1-((3,5-디메틸이속사졸

182 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2,4- 디옥소이미다졸리딘 -1- 일 ) 메틸 )-N- 메틸벤즈아미드 (25 mg, 25%) 를백색고형물로 서얻었다. MS M+H 계산치 ; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주 었고 0.14 μm 의 IC 50 을가졌다. [1010] 실시예 10-10: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(3- 하이드록시벤질 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 : [1011] [1012] 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 카보닐아지드 ( 실시예 10-1a) 및메틸 2-(3- 하이드록시벤질아 미노 ) 아세테이트 ( 실시예 10-10a) 로부터실시예 10-1 과같이제조했다. 수율 : 24%. 1 H NMR (DMSO, 400 MHz): δ 2.15(s, 3H), 2.41(s, 3H), 3.99(s, 2H), 4.45(s, 2H), 5.21(s, 2H), 6.70(m, 3H), 7.15 (m,h), 7.80(s, 1H), 8.19(s, H), 9.44(s, H). LC/MS; [M+H] 예상치 382.1; 실측치 융점 : 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 μm 의 IC 50 을가졌다. [1013] 실시예 10-10a: 메틸 2-(3- 하이드록시벤질아미노 ) 아세테이트 : [1014] [1015] 글라이신메틸에스테르 (500 mg, 4 mmol) 및 3-하이드록시벤즈알데히드 (480 mg, 4 mmol) 을 5 ml THF/ 메탄올 (1:1) 에용해시켰다. THF (4.8mL, 4.8 mmol) 중아세트산 (240 mg, 4 mmol), 및 1M 나트륨시아노보로하이드라이드를반응물에서서히첨가했다. 반응물을마이크로웨이브반응기에서 85 에서 15분동안가열하고, 실온으로냉각하고, 염을여과로제거했다. 맑은용액을농축하고, 잔류물을역상 HPLC ( 물중 10 내지 95% 아세토니트릴 : 25분구배 ) 로정제하여표제화합물을맑은겔로서얻었다. 수율 45%. MS M+H 계산치 196.1; 실측치 [1016] 실시예 10-11: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(2- 하이드록시벤질 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 : [1017] [1018] 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 카보닐아지드 ( 실시예 10-1a) 및메틸 2-(2- 하이드록시벤질아 미노 ) 아세테이트 ( 실시예 10-11a) 로부터실시예 10-1 과같이제조했다. 수율 : 28%. 1 H NMR (DMSO, 400 MHz): δ 2.12(s, 3H), 2.38(s, 3H), 4.00(s, 2H), 4.45(s, 2H), 5.17(s, 2H), 6.83(m, 2H), 7.10(m, 2H), 7.78(s, 1H), 8.16(s, H), 9.66(s, H). LC/MS; [M+H] 예상치 382.1; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.07 μm 의 IC 50 을가졌다

183 [1019] 실시예 10-11a: 메틸 2-(2- 하이드록시벤질아미노 ) 아세테이트 : [1020] [1021] 글라이신메틸에스테르및 2- 하이드록시벤즈알데하이드로부터실시예 10-10a 와같이제조했다. 수율 40%. MS M+H 계산치 196.1; 실측치 [1022] 실시예 10-12: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(4- 하이드록시벤질 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 : [1023] [1024] 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 카보닐아지드및메틸 2-(4- 하이드록시벤질아미노 ) 아세테이트 ( 실시예 10-12a) 로부터실시예 10-1 과같이제조했다. 수율 9%. 1 H NMR (DMSO, 400 MHz): δ 2.117(s, 3H), 2.383(s, 3H), 3.918(s, 2H), 4.387(s, 2H), 5.174(s, 2H), 6.719(J=8.8, d, 2H), 7.108(J=8.8, m, 2H), 7.761(s, 1H), 8.154(s, H), 9.399(s, H). LC/MS; [M+H] 예상치 382.1; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.06 μm 의 IC 50 을가졌다. [1025] 실시예 10-12a: 메틸 2-(4- 하이드록시벤질아미노 ) 아세테이트 : [1026] [1027] 글라이신메틸에스테르및 4- 하이드록시벤즈알데하이드로부터실시예 10-10a 과같이제조했다. 수율 40%. MS M+H 계산치 196.1; 실측치 [1028] 실시예 10-13: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(3- 하이드록시 -4- 메톡시벤질 ) 이미다졸 리딘 -2,4- 디온 : [1029] [1030] 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 카보닐아지드 ( 실시예 10-1a) 및메틸 2-(3- 하이드록시 -4- 메 톡시벤질아미노 ) 아세테이트 ( 실시예 10-13a) 로부터실시예 10-1 과같이제조했다. 수율 22%. 1 H NMR (DMSO, 400 MHz): δ 2.119(s, 3H), 2.383(s, 3H), 3.716(s, 3H), 3.923(s, 2H), 4.361(s, 2H), 5.117(s, 2H), 6.667(m, 2H), 6.863(J=8.4, d, 1H), 7.766(s, H), 8.159(s, H). MS M+H 계산치 412.1; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.1 μm 의 IC 50 을가졌다

184 [1031] 실시예 10-13a: 메틸 2-(3- 하이드록시 -4- 메톡시벤질아미노 ) 아세테이트 : [1032] [1033] 글라이신메틸에스테르및 3- 하이드록시 -4- 메톡시벤즈알데하이드로부터실시예 10-10a 과같이제조했다. 수 율 47%. MS M+H 계산치 226.1; 실측치 [1034] 실시예 10-14: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(3-(2- 메톡시에톡시 ) 벤질 ) 이미다졸리 딘 -2,4- 디온 : [1035] [1036] 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 카보닐아지드 ( 실시예 10-1a) 및메틸 2-(3-(2- 메톡시에톡 시 ) 벤질아미노 ) 아세테이트 ( 실시예 10-14a) 로부터실시예 10-1 과같이제조했다. 수율 27%. 1 H NMR (DMSO, 400 MHz): δ 2.12(s, 3H), 2.38(s, 3H), 3.26(s, 3H), 3.62(t, J=4.4, 2H), 3.98(s, 2H), 4.06(t, J=4.4, 2H), 4.48(s, 2H), 5.18(s, 2H), 6.86(m, 3H), 7.24(t, J=8, 1H), 7.78(s, 1H), 8.17(s, 1H). MS M+H 계산치 440.2; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.07 μm 의 IC 50 을가졌다. [1037] [1038] 실시예 10-14a: 메틸 2-(3-(2- 메톡시에톡시 ) 벤질아미노 ) 아세테이트 : [1039] [1040] 글라이신메틸에스테르및 3-(2- 메톡시에톡시 ) 벤즈알데하이드로부터실시예 10-10a 과같이제조했다. 수율 55%. MS M+H 계산치 254.1; 실측치 [1041] 실시예 10-15: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(2-( 메틸티오 ) 벤질 ) 이미다졸리딘 - 2,4- 디온 : [1042] [1043] 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 카보닐아지드 ( 실시예 10-1a) 및메틸 2-(2-( 메틸티오 ) 벤질아 미노 ) 아세테이트 ( 실시예 10-15a) 로부터실시예 10-1 과같이제조했다. 수율 67%. 1 H NMR (DMSO, 400 MHz): δ 2.12(s, 3H), 2.39(s, 3H), 2.48(s, 3H), 3.98(s, 2H), 4.54(s, 2H), 5.19(s, 2H), 7.18(m, 1H), 7.30(m, 3H), 7.79(s, 1H), 8.18(s, 1H). LC/MS; [M+H] 예상치 412.1; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.03 μm 의 IC 50 을가졌다

185 [1044] 실시예 10-15a: 메틸 2-(2-( 메틸티오 ) 벤질아미노 ) 아세테이트 : [1045] [1046] 글라이신메틸에스테르및 2-( 메틸티오 ) 벤즈알데하이드로부터실시예 10-10a 과같이제조했다. 수율 50%. MS M+H 계산치 226.1; 실측치 [1047] 실시예 10-16: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(2-(2- 메톡시에톡시 ) 벤질 ) 이미다졸리 딘 -2,4- 디온 : [1048] [1049] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(2- 하이드록시벤질 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-11) 및 2-브로모에틸메틸에테르로부터실시예 10-5 과같이제조했다. 수율 19%. 1 H NMR (DMSO, 400 MHz): δ 2.11(s, 3H), 2.08(s, 3H), 3.25(s, 3H), 3.64(t, J=3.6, 2H), 4.00(s, 2H), 4.11(t, J=3.2, 2H), 4.27(s, 2H), 5.17(s, 2H), 6.90(m, 1H), 7.00(m, 1H), 7.26(m, 2H), 7.76(s, 1H), 8.15(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.1 μm 의 IC 50 을가졌다. [1050] 실시예 10-17: 33-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(2-( 메틸설피닐 ) 벤질 ) 이미다졸리딘 - 2,4- 디온 : [1051] [1052] 20mL 마이크로웨이브바이알에서, 3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-1-(2-( 메틸티오 ) 벤질 ) 이미다졸리딘-2,4-디온 ( 실시예 10-15) (70 mg, 0.17 mmol) 및 m-cpba (58 mg, 0.34 mmol) 을디클로로메탄에 0 에서용해시켰다. 반응물을 0 에서교반하고, 4시간동안실온까지가온했다. 반응물의용매를진공하에서제거하고, 조생성물을 1mL 에탄올에용해시키고, 바리안 (Varian) HPLC (10 내지 95% 아세토니트릴 / 물 ; 25분 ) 로정제했다. 정제된분획을진공하에서증발하여표제화합물을얻었다. MS M+H 계산치 428.1; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.4 μm 의 IC 50 을가졌다. 수율 : 12 mg, 17%. [1053] 실시예 10-18: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(2- 메톡시벤질 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 : [1054] [1055] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 1-( 브로모메틸 )-2- 메톡시벤젠 (199 mg, 1 mmol) 로부터실시예 10-5 과같이제조했다. 수율 : 33%. MS M+H 계 산치 396.1; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.06 μm 의 IC 50 을가졌다

186 [1056] 실시예 10-19: 2-((3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2,4- 디옥소이미다졸리딘 -1- 일 ) 메틸 ) 벤조니트릴 : [1057] [1058] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 2-( 브로모메틸 ) 벤조니트릴로부터실시예 10-5 과같이제조했다. 수율 : 27%. MS M+H 계산치 391.1; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.5 μm 의 IC 50 을가졌다. [1059] 실시예 10-20: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(2- 메틸벤질 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 : [1060] [1061] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 1-( 브로모메틸 )-2- 메틸벤젠으로부터실시예 10-5 과같이제조했다. 수율 : 21%. MS M+H 계산치 380.1; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.1 μm 의 IC 50 을가졌다. [1062] [1063] 실시예 10-21: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(2- 플루오로벤질 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디 온 : [1064] [1065] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 1-( 브로모메틸 )-2- 플루오로벤젠으로부터실시예 10-5 과같이제조했다. 수율 42%. MS M+H 계산치 384.1; 실 측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.08 μm 의 IC 50 을가졌다. [1066] 실시예 10-22: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(2-( 트리플루오로메틸 ) 벤질 ) 이미다졸 리딘 -2,4- 디온 : [1067] [1068] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 1-( 브로모메틸 )-2-( 트리플루오로메틸 ) 벤젠으로부터실시예 10-5 과같이제조했다. 수율 : 37%. MS M+H 계산치 434.1; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.2 μm 의 IC 50 을가 졌다. [1069] [1070] 실시예 10-23: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(2- 니트로벤질 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 :

187 [1071] [1072] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 1-( 브로모메틸 )-2- 니트로벤젠으로부터실시예 10-5 과같이제조했다. 수율 22%. MS M+H 계산치 411.1; 실측 치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.07 μm 의 IC 50 을가졌다. [1073] 실시예 10-24: 3-((3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2,4- 디옥소이미다졸리딘 -1- 일 ) 메틸 ) 벤즈알데히드 : [1074] [1075] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 3-( 브로모메틸 ) 벤즈알데하이드로부터실시예 10-5 과같이제조했다. 수율 : 35%. 1 H NMR (DMSO, 400 MHz): δ 2.123(s, 3H), 2.388(s, 3H), 4.035(s, 2H), 4.631(s, 2H), 5.186(s, 2H), 7.581(m, 1H), 7.643(m, 1H), 7.787(m, 3H), 8.178(s, H), 9.997(s, H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.2 μm 의 IC 50 을가졌다. [1076] 실시예 10-25: 3-((3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2,4- 디옥소이미다졸리딘 -1- 일 ) 메틸 ) 벤조니트릴 : [1077] [1078] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 3-( 브로모메틸 ) 벤조니트릴로부터실시예 10-5 과같이제조했다. 수율 21%. MS M+H 계산치 411.1; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 1 μm 의 IC 50 을가졌다. [1079] 실시예 10-26: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(3- 메틸벤질 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 : [1080] [1081] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 1-( 브로모메틸 )-3- 메틸벤젠으로부터실시예 10-5 과같이제조했다. 수율 25%. MS M+H 계산치 380.1; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.02 μm 의 IC 50 을가졌다. [1082] 실시예 10-27: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(3- 플루오로벤질 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디 온 :

188 [1083] [1084] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 1-( 브로모메틸 )-3- 플루오로벤젠으로부터실시예 10-5 과같이제조했다. 수율 27%. MS M+H 계산치 384.1; 실 측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.06 μm 의 IC 50 을가졌다. [1085] 실시예 10-28: 1-((1,5- 디메틸 -1H- 피라졸 -3- 일 ) 메틸 )-3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 : [1086] [1087] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 3-( 브로모메틸 )-1,5- 디메틸 -1H- 피라졸로부터실시예 10-5 과같이제조했다. 수율 : 22%. MS M+H 계산치 384.1; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.3 μm 의 IC 50 을가 졌다. [1088] 실시예 10-29: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(4- 메톡시벤질 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 : [1089] [1090] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 1-( 브로모메틸 )-4- 메톡시벤젠으로부터실시예 10-5 과같이제조했다. 수율 19%. MS M+H 계산치 396.1; 실측 치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.07 μm 의 IC 50 을가졌다. [1091] 실시예 10-30: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(4- 메틸벤질 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 : [1092] [1093] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 1-( 브로모메틸 )-4- 메틸벤젠으로부터실시예 10-5 과같이제조했다. 수율 25%. MS M+H 계산치 380.1; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.06 μm 의 IC 50 을가졌다. [1094] 실시예 10-31: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(4- 플루오로벤질 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디 온 :

189 [1095] [1096] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 1-( 브로모메틸 )-4- 플루오로벤젠으로부터실시예 10-5 과같이제조했다. 수율 33%. MS M+H 계산치 384.1; 실 측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.05 μm 의 IC 50 을가졌다. [1097] 실시예 10-32: 4-((3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2,4- 디옥소이미다졸리딘 -1- 일 ) 메틸 ) 벤조니트릴 : [1098] [1099] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 4-( 브로모메틸 ) 벤조니트릴로부터실시예 10-5 과같이제조했다. 수율 21%. MS M+H 계산치 391.1; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.05 μm 의 IC 50 을가졌다. [1100] 실시예 10-33: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(3-( 하이드록시메틸 ) 벤질 ) 이미다졸리 딘 -2,4- 디온 : [1101] [1102] 3-((3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-2,4-디옥소이미다졸리딘 -1-일) 메틸 ) 벤즈알데히드 ( 실시예 10-24) (131 mg, 0.3 mmol) 을 2 ml 에탄올에용해시켰다. 용액을, 유속 1ml/ 분에서 10% Pd/C 촉매를사용하여실온에서 H-큐브 (Cube) 기구를통해통과시켰다. 수집된분획을농축하고, 2 ml 에탄올에재용해시키고 HPLC (10-95% 아세토니트릴 / 물, 25분 ) 로정제했다. 정제된분획을배합하고, 농축하여표제화합물을얻었 다. 1 H NMR (DMSO, 400 MHz): δ 2.123(s, 3H), 2.388(s, 3H), 3.978(s, 2H), 4.516(s, 2H), 5.182(s, 2H), 7.242(m, 4H), 7.779(s, 1H), 8.172(s, 1H), 8.505(s, 1H). MS M+H 계산치 396.1; 실측치 표제화합 물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.3 μm 의 IC 50 을가졌다. 수율 : 24 mg, 18%. [1103] 실시예 10-34: 1-(2- 아미노벤질 )-3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 : [1104] [1105] 3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-1-(2-니트로벤질) 이미다졸리딘-2,4-디온 ( 실시예 10-23) (126 mg, 0.3 mmol) 을 2 ml 에탄올에용해시켰다. 용액을, 유속 1ml/ 분에서 10% Pd/C 촉매를사용하여실온에서 H-큐브 (Cube) 기구를통해통과시켰다. 수집된분획을농축하고, 2mL 에탄올에재용해시키고, HPLC (10-95% 아세토니트릴 / 물, 25분 ) 로정제했다. 정제된분획을배합하고, 농축하여표제화합물을얻었다. 수율 26%. MS M+H 계산치 381.1; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.02 μm 의 IC 50 을가졌다

190 [1106] 실시예 10-35: 1-(3,4- 디메톡시벤질 )-3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 - 2,4- 디온 : [1107] [1108] 3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 이미다졸리딘-2,4-디온 ( 실시예 10-1) (275 mg, 1 mmol), (3,4-디메톡시페닐) 메탄올 (201 mg, 1.2 mmol), N,N,N,N-테트라메틸아조디카르복사미드 (344 mg, 2 mmol) 을 2 ml 무수 THF 에용해시켰다. 트리부틸포스핀 (404 mg, 2 mmol) 을첨가하고, 반응혼합물을마이크로웨이브반응기에 90 에서 5분동안두었다. 반응물을여과하고, 농축하고, HPLC (10-95% 아세토니트릴 / 물, 25분 ) 로정제하여표제화합물을얻었다. 수율 : 25 mg, 6%. 1 H NMR (DMSO, 400 MHz): δ 2.119(s, 3H), 2.385(s, 3H), 3.724(J=6.4 d, 6H), 3.946(s, 2H), 4.435(s, 2H), 5.178(s, 2H), 6.885(m, 3H), 7.776(s, 1H), 8.166(s, 1H). MS M+H 계산치 426.1; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.06 μm 의 IC 50 을가졌다. [1109] 실시예 10-36: 1-( 벤조 [d][1,3] 디옥솔 -5- 일메틸 )-3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미 다졸리딘 -2,4- 디온 : [1110] [1111] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및벤조 [d][1, 3] 디옥솔-5-일메탄올로부터실시예 와같이제조했다. 수율 : 19%. 1 H NMR (DMSO, 400 MHz): δ 2.143(s, 3H), 2.408(s, 3H), 3.977(s, 2H), 4.440(s, 2H), 5.202(s, 2H), 6.003(s, 2H), 6.897(m, 3H), 7.788(s, 1H), 8.181(s, 1H). MS M+H 계산치 410.1; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.07 μm 의 IC 50 을가졌다. [1112] 실시예 10-37: 1-(3-(( 디메틸아미노 ) 메틸 ) 벤질 )-3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다 졸리딘 -2,4- 디온 : [1113] [1114] 3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 이미다졸리딘-2,4-디온 ( 실시예 10-1) (275 mg, 1 mmol) 1,3-비스 ( 브로모메틸 ) 벤젠 (263 mg, 1 mmol), 및세슘카보네이트 (325 mg, 1 mmol) 을 2 ml DMF 에서용해시키고, 마이크로웨이브반응기에서 165 에서 5분동안가열했다. 반응물을실온으로냉각하고, 염침전물을여과로제거했다. 조생성물함유맑은용액을농축하고, 에틸아세테이트에서재용해시켰다. 유기용액을물로 2회세정하고, 그다음, 염수로세정했다. 유기층을황산나트륨상에서건조시키고증발시켜, 추가정제및특성규명없이다른단계에사용되는조생성물을얻었다. 1-(3-( 브로모메틸 ) 벤질 )-3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 이미다졸리딘-2,4-디온 ( 실시예 42a) (152 mg, 0.3 mmol), 디메틸아민 (THF 중 2 M 용액 ) (1.5 ml, 3 mmol), 및나트륨하이드라이드 (9 mg, 0.36 mmol) 을 1 ml 무수 THF 에용해시켰다. 반응물을마이크로웨이브반응기에 120 에서 5분동안두었다. 조생성물을 2 ml 에탄올에재용해시키고 HPLC (10-95% 아세토니트릴 / 물, 25분 ) 로정제하여 1-(3-(( 디메틸아미노 ) 메틸 ) 벤질 )-3-(1-((3,5-디메틸이속사졸- 4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 이미다졸리딘-2,4-디온 (16 mg, 13%). MS M+H 계산치 423.1; 실측치 표제

191 화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 1.2 μm 의 IC 50 을가졌다. [1115] 실시예 10-38: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-((1- 메틸 -1H- 피라졸 -3- 일 ) 메틸 ) 이미 다졸리딘 -2,4- 디온 : [1116] [1117] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 3-( 브로모메틸 )-1- 메틸 -1H- 피라졸로부터실시예 10-5 와같이제조했다. 수율 19%. MS M+H 계산치 370.1; 실 측치 370. 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.4 μm 의 IC 50 을가졌다. [1118] 실시예 10-39: N-(2-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-2H- 테트라졸 -5- 일 )-3- 메톡시벤즈아미드 [1119] [1120] 아세토니트릴 (3 ml) 중 2-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-2H-테트라졸-5-아민 ( 실시예 10-39a) (102 mg, mmol), 3-메톡시벤조일클로라이드 (0.065 ml, mmol) 및피리딘 (0.043 ml, mmol) 을 100 에서 1시간동안교반했다. 반응물을디클로로메탄 (30 ml) 으로희석하고, 염수 (30 ml) 로세정했다. 유기물을황산나트륨상에서건조시키고, 농축하고, 역상 HPLC ( 용매계 : 아세토니트릴 / 물 10% 내지 100% 구배 ), 25분시행 ) 로정제하여 N-(2-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-2H-테트라졸-5-일)-3-메톡시벤즈아미드를백색결정질 고형물 (60 mg, 35 % 수율 ) 로서얻었다. MS M+H 계산치 329.1, 실측치 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 2.02(s, 3H), 2.46(s, 3H), 3.81(s, 3H), 5.78(s, 2H), 7.16(m, 1H), 7.42(t, J=8Hz, 2H), 7.54(m, 1H), 11.3(s, 1H). 화합물은 1.87 μm 의, ht2r8 쓴맛수용체에대한 IC 50 을가졌다. [1121] 실시예 10-39a:2-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-2H- 테트라졸 -5- 아민 [1122] [1123] DMF (20 ml) 중 2H-테트라졸-5-아민 (1.29 g, 12.5 mmol), 4-( 클로로메틸 )-3,5-디메틸이속사졸 (1.56 ml, 12.5 mmol) 및탄산칼륨 (1.73 g, 15.5 mmol) 을, 16시간동안교반하면서 80 로가열했다. 반응물을실온으로냉각하고, 디클로로메탄 (100 ml) 으로희석하고, 염수및물로계속해서세정했다. 유기물을황산나트륨상에서건조시키고, 회전식증발로농축했다. 조생성물을실리카겔크로마토그래피 (0-10 % 구배에틸아세테이트 / 디클로로메탄 ) 로정제하여 2-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-2H-테트라졸-5-아민을백색결정질고형물 (970 mg, 40 % 수율 ) 로서얻었다. MS M+H 계산치 195.1, 실측치 195. [1124] 실시예 10-40: N-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 이미다졸 -4- 일 ) 벤조 [d][1,3] 디옥솔 -5- 카르복사미드 [1125] [1126] 디클로로메탄중 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 이미다졸 -4- 아민 ( 실시예 10-40a) (110 mg,

192 mmol), 벤조 [d][1,3] 디옥솔-5-카보닐클로라이드 (105 mg, 0.57 mmol), 및트리에틸아민 (90 μl, 0.69 mmol) 을 16시간동안교반했다. 반응물을디클로로메탄 (30 ml) 으로희석하고, 염수및물로계속해서세정했다. 유기물을황산나트륨상에서건조시키고, 회전식증발로농축했다. 조생성물을역상 HPLC ( 용매계 : 아세토니트릴 / 물, 10% 내지 100% 구배, 25분시행 ) 로정제하여 N-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-이미다졸-4-일) 벤조 [d][1,3] 디옥솔-5-카르복사미드를백색결정질고형물 (32 mg, 15 % 수율 ) 로서얻었다. MS M+H 계산치 341.3, 실측치 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 2.08(s, 3H), 2.41(s, 3H), 5.02(s, 2H), 6.07(s, 2H), 6.95(d, J=8.4Hz, 1H), 7.27(d, J=1.6Hz, 1H), 7.54(m, 3H), 10.6(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체에대한 12.1 μm 의 IC 50 을가졌다. [1127] [1128] 실시예 10-40a: 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-이미다졸-4-아민메탄올 (40 ml) 중 3,5-디메틸-4-((4-니트로-1H-이미다졸-1- 일 ) 메틸 ) 이속사졸 ( 실시예 10-40b) (1.0 g, 4.5 mmol) 및 10% Pd/C (200 mg) 을 2.5 bar 의압력하에서수소 2시간동안파르쉐이커 (Parr shaker) 상에서흔들었다. 셀라이트의플러그, 그다음, 회전식증발을통해여과하여 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-이미다졸-4-아민을황색을띤적색고형물 (800 mg, 93 % 수율 ) 로서얻었다. MS M+H 계산치 193, 실측치 193. [1129] [1130] 실시예 10-40b: 3,5- 디메틸 -4-((4- 니트로 -1H- 이미다졸 -1- 일 ) 메틸 ) 이속사졸 3,5- 디메틸 -4-((4- 니트로 -1H- 이미다졸 -1- 일 ) 메틸 ) 이속사졸을 4- 니트로 -1H- 이미다졸의알킬화에의한실시예 10-41c 와유사한방식으로제조하여 3,5- 디메틸 -4-((4- 니트로 -1H- 이미다졸 -1- 일 ) 메틸 ) 이속사졸을백색결정질고 형물 (5.0 g, 80% 수율 ) 로서얻었다. MS M+H 계산치 223, 실측치 H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ, ppm: 2.09(s, 3H), 2.43(s, 3H), 5.15(s, 2H), 7.90(d, J=1.6Hz, 1H), 8.35(d, J=1.9Hz, 1H). [1131] 실시예 10-41: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-5- 메틸이미다졸리딘 -2,4- 디온 [1132] [1133] 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-아민하이드로클로라이드 ( 실시예 10-41a) (1.0 g, 5.20 mmol), 에틸-2-이소시네이트프로피오네이트 (0.745 g, 5.20 mmol) 및트리에틸아민 (1.5 ml, 10.4 mmol) 을 EtOH (20 ml) 에서혼합했다. 반응물을 12시간동안환류한다음, 실온으로냉각했다. 용매를진공하에서제거하고, 정치시결정을형성했다. 결정물을수집하고, 헥산으로세정하여 3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-5-메틸이미다졸리딘 -2,4-디온을 80% 수율의백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ (d, 3H), 2.19(s, 3H), 2.42(s, 3H), (m, 1H), 5.06(s, 2H), 6.00(bs, 1H), 7.90(s, 1H), 8.05(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 1.3 μm 의 IC 50 을가졌다. [1134] 실시예 10-41a: 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 아민하이드로클로라이드 [1135] [1136] 3급-부틸 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일카바메이트 ( 실시예 10-41b) (592 mg, 2 mmol) 을디옥산 (20 ml) 중 4N HCl 의용액에서실온에서 2시간동안교반했다. 용매를제거하고, 잔류물을에틸아세테이트 / 헥산 (30 ml) 의 1/1 혼합물에용해시키고, 2회농축했다. 고형물을헥산으로분쇄하고, 여과로수집하여 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-아민하이드로클로라이드 (500 mg, 99%) 를백색고형물로서

193 얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 2.11(s, 3H), 2.38(s, 3H), 5.16(s, 2H), 7.51(s, 1H), 8.03(s, 1H), 10.27(bs, 3H). [1137] 실시예 10-41b: 3 급 - 부틸 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일카바메이트 [1138] [1139] 3,5-디메틸-4-((4-니트로-1H-피라졸-1- 일 ) 메틸 ) 이속사졸 ( 실시예 10-41c) (12 g, 53.8 mmol) 및 BOC 무수물 (12.8 g, 64 mmol) 을파르 (Parr) 반응용기에서 MeOH/EtOH/THF (300 ml) 의 3/1/1 혼합물에서용해시키고, 그다음, 10% Pd/C (1.5 g) 을첨가했다. 혼합물을파르 (Parr) 수소발생기에서, 2기압의수소하에서 3시간동안흔들었다. 혼합물을 3인치의셀라이트플러그를통해여과하고, 로토바프상에서농축했다. 분홍색오일은실리카겔크로마토그래피 ( 헥산중 25% 에틸아세테이트 ) 로정제하여 3급-부틸 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일카바메이트(12.6 g, 80%) 을, 정치시옅은분홍색고형물로서 고화된분홍색 / 적색오일로서얻었다. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 1.41(s, 9H), 2.10(s, 3H), 2.32(s, 3H), 4.90(s, 2H), 6.19(bs, 1H), 7.19(s, 1H), 7.50(s, 1H). [1140] 실시예 10-41c: 3,5- 디메틸 -4-((4- 니트로 -1H- 피라졸 -1- 일 ) 메틸 ) 이속사졸 [1141] [1142] 1H- 피라졸 (10 g, 147 mmol) 을조금씩진한황산 (100 ml) 에첨가하고, 빙수조를통해 0 로냉각하고, 내부 반응온도를 40 미만으로유지했다. 진한 HNO 3 (10 ml) 을, 내부반응온도를 55 미만으로유지한반응혼합물에주의하여적가했다. 그다음, 반응물을 55 로가열하고, 5시간동안교반했다. 혼합물을 0 로냉각하고, 백색침전물이형성될때까지수산화나트륨수용액 (150 ml 물중 110 g NaOH) 으로염기성 ( 약 ph 8) 으로만들었고, 용액의내부온도를 40 미만으로주의하여유지하도록했다. 백색고형물을여과로수집하고, 에틸아세테이트 / 헥산 (1/3) 로세정한다음, 진공에서건조시켜 4-니트로-1H-피라졸 (7g, 42%, 분리된수율 ) 을얻었다. 13 C NMR (DMSO-d 6, 137.0, DMF (100 ml) 중 4-니트로-1H-피라졸 (9 g, 80 mmol) 에세슘카보네이트 (26 g, 80mmol) 를첨가하고, 그다음, 4-( 클로로메틸 )-3,5-디메틸이속사졸 (12.3 g, 85 mmol) 를첨가했다. 반응혼합물을 DMF (100 ml) 에서 80 에서 30분동안교반한다음, 냉각하고, 물 (150 ml) 로희석하고, 에틸아세테이트로추출했다 (3x, 75 ml). 배합된유기층을황산나트륨상에서건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔류물을에틸아세테이트 (200 ml) 에서취하고물 (2x, 100 ml) 로세정했다. 유기층을황산나트륨상에서건조시키고, 여과하고, 농축했다. 고형생성물을에틸아세테이트 / 헥산 (1/9) 로분쇄하고, 여과로수집했다. 생성물을고진공하에서건조시켜 3,5-디메틸-4-((4-니트로-1H-피라졸-1- 일 ) 메틸 ) 이속사졸 (12g, 67%) 를담황색고형물로서로서얻었다. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 2.23(s, 3H), 2.46(s, 3H), 5.08(s, 2H), 8.02(s, 1H), 8.08(s, 1H). [1143] 실시예 10-42: 5- 벤질 -3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1- 메틸이미다졸리딘 -2,4- 디온 [1144]

194 [1145] 5- 벤질 -3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-2) 및요오도 메탄으로부터실시예 10-5 와같이제조했다. 수율 : 95%. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 2.04(s, 3H), 2.15(s, 3H), 2.96(s, 3H), (m, 2H, J=4.0Hz), (m, 1H), 5.00(s, 2H), (m, 5H, J=4.0Hz), 7.70(s, 1H), 7.87(s, 1H). [1146] 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.15 μm 의 IC 50 을가졌다. [1147] 실시예 10-43: 1- 벤질 -3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-5- 메틸이미다졸리딘 -2,4- 디온 [1148] [1149] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-5- 메틸이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-41) 및벤질 브로마이드로부터실시예 10-5 와같이제조했다. 수율 : 50%. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 1.44(s, 3H), 2.19(s, 3H), 3.88(s, 3H), 4.18(d, J=8Hz, 2H), 4.22(t, 1H, J=4 Hz)), 5.06(s, 2H), (m, 5H), 7.94(s, 1H), 8.10(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.02 μm 의 IC 50 을가졌다. [1150] 실시예 10-44: 2-(1-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2,5- 디옥소이미다졸리딘 -4- 일 ) 아세트 산 [1151] [1152] 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 카보닐아지드 ( 실시예 10-1a) 및 H-Asp-OMe 로부터실시예 10-1 와같이제조했다. 수율 : 85%. MS M+H 계산치 334.1; 실측치 [1153] 실시예 10-45: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-5- 펜에틸이미다졸리딘 -2,4- 디온 [1154] [1155] 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 카보닐아지드 ( 실시예 10-1a) 및메틸 2- 아미노 -4- 페닐부타노 에이트로부터실시예 10-1 와같이제조했다. 수율 : 15%. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ (m, 2H), 2.19(s, 3H), 2.41(s, 3H), (m, 2H), (t, 1H, J=8Hz), 5.05(s, 2H), 5.95(bs, 1H), (m, 5H), 7.95(s, 1H), 8.03(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.22 μm 의 IC 50 을가졌다

195 [1156] 실시예 10-46: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-5-(3- 페닐프로필 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 [1157] [1158] 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 카보닐아지드 ( 실시예 10-1a) 및메틸 2- 아미노 -5- 페닐펜타노 에이트로부터실시예 10-1 와같이제조했다. 수율 : 20%. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ (m, 1H), (m, 2H), (m, 1H), 2.19(s, 3H), 2.41(s, 3H), (t, J=8Hz, 2H), 4.13(bs, 1H), 5.05(s, 2H), 5.95(bs, 1H), (m, 5H), 7.95(s, 1H), 8.03(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.17 μm 의 IC 50 을가졌다. [1159] 실시예 10-47: 5-( 벤질옥시메틸 )-3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 [1160] [1161] 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 카보닐아지드 ( 실시예 10-1a) 및메틸 2- 아미노 -3-( 벤질옥 시 ) 프로파노에이트로부터실시예 10-1 와같이제조했다. 수율 : 32%. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 2.19(s, 3H), 2.43(s, 3H), (m, 1H), (m, 1H), (m, 1H), (d, J=1.6Hz, 2H), 5.05(s, 2H), 5.62(bs, 1H), (m, 5H), 7.88(s, 1H), 8.04(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.76 μm 의 IC 50 을가졌다. [1162] 실시예 10-48: 2-(1-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2,5- 디옥소이미다졸리딘 -4- 일 )-N- 페 닐아세트아미드 [1163] [1164] 3-(1-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-2,5-디옥소이미다졸리딘 -4-일) 아세트산 ( 실시예 10-44) (100 mg, 0.3 mmol), 아닐린 (33 mg, 0.36 mmol), Pybop (187 mg, 0.36 mmol) 및트리에틸아민 (0.05 ml, 0.36 mmol) 을 DMF (1 ml) 에서혼합했다. 반응물을 65 에서 4시간동안교반했다. 반응물을실온으로냉각한다음, 에틸아세테이트 (2 ml) 로희석했다. 유기상을포화중탄산나트륨용액 (2x, 2 ml), 그다음, 포화염화나트륨용액 (1 ml) 으로세정했다. 유기상을추출하고, 무수황산나트륨상에서건조시키고, 여과했다. 조생성물을 MeOH (1mL) 에서재현탁시키고, 역상 HPLC ( 물중 5-95% 아세토니트릴 ; 16분구배 ) 로정제했다. 순수분획을배합하고, 용매를로토바프상에서제거하여 2-(1-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4- 일 )-2,5-디옥소이미다졸리딘-4- 일 )-N-페닐아세트아미드를백색고형물 (50%) 로서얻었다. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 2.18(s, 3H), 2.40(s, 3H), 2.72(m, 1H), (d, 1H, J=4Hz), (d, J=8Hz, 1H), 5.04(s, 2H), 6.53(bs, 1H), (m, 1H), (m, 2H), (d, J=8Hz, 2H), 7.78(bs, 1H), 7.09(s, 1H), 8.05(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.75 μm 의 IC 50 을가졌다

196 [1165] 실시예 10-49: N- 벤질 -2-(1-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2,5- 디옥소이미다졸리딘 - 4- 일 ) 아세트아미드 [1166] [1167] 3-(1-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2,5- 디옥소이미다졸리딘 -4- 일 ) 아세트산 ( 실시예 10-44) 및벤질아민으로부터실시예 과같이제조했다. 수율 : 30%. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 2.18(s, 3H), 2.41(s, 3H), (m, 1H, J=16Hz), (m, 1H), (m, 1H), (d, J=5.6Hz, 2H), 5.04(s, 2H), 5.96(bs, 1H), 6.36(bs, 1H), (m, 5H), 7.90(s, 1H, 8.05(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 1.3 μm 의 IC 50 을가졌다. [1168] 실시예 10-50: 2-(1-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2,5- 디옥소이미다졸리딘 -4- 일 )-N- (3- 메톡시벤질 ) 아세트아미드 [1169] [1170] 3-(1-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2,5- 디옥소이미다졸리딘 -4- 일 ) 아세트산 ( 실시예 10-44) 및 (3- 메톡시페닐 ) 메탄아민로부터실시예 과같이제조했다. 수율 : 50%. LC/MS; 예상치 453; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 1.7 μm 의 IC 50 을가졌다. [1171] 실시예 10-51: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1- 메틸이미다졸리딘 -2,4- 디온 [1172] [1173] 3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 이미다졸리딘-2,4-디온 ( 실시예 10-1) (50 mg, mmol) 및세슘카보네이트 (60 mg, mmol) 을 DMF (1 ml) 에서 15분동안질소대기하에서실온에서혼합했다. 그다음, 요오도메탄 (14 mg, mmol) 을첨가하고, 반응물을추가 2시간동안계속교반했다. 물 (2 ml) 을첨가하고, 생성물을에틸아세테이트로추출했다 (1mL, 2x). 유기상을수집하고, 포화중탄산나트륨용액 (2ml, 2x) 으로세정하고, 건조시키고, 여과했다. 용매를질소흐름하에서제거한다음, 고진공하에서추가건조시켜 3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-1-메틸이미다졸리딘 -2,4-디온을백색고형 물 (42 mg, 80%) 로서얻었다. 수율 : 80%. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 2.18(s, 3H), 2.41(s, 3H), 3.06(s, 3H), 3.95(s, 2H), 5.05(s, 2H), 7.89(s, 1H), 8.05(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는 것을보여주었고 0.58 μm 의 IC 50 을가졌다

197 [1174] 실시예 10-52: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1,5,5- 트리메틸이미다졸리딘 -2,4- 디온 [1175] [1176] 3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-5-메틸이미다졸리딘 -2,4-디온 ( 실시예 10-41) (50 mg, mmol) 및 60% NaH (8 mg, mmol) 을 DMF (1 ml) 에서 30분동안혼합했다. MeI (0.04mL, mmol) 을첨가하고, 반응물을추가 4시간교반했다. 반응물을 1N HCl 로산성화하고, 에틸아세테이트 (2 ml) 로희석했다. 유기상을건조, 여과하고, 용매를질소흐름하에서제거했다. 조생성물을 MeOH (1 ml) 에서재현탁시키고, 역상 HPLC ( 물중 5 내지 95% 아세토니트릴 : 16분구배 ) 로정제했다. 순수분획을배합하고, 용매를진공하에서제거하여 3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-1,5,5-트리메틸이미다졸리딘 - 2,4- 디온을백색고형물 (25 mg, 50%) 로서얻었다. 1 H NMR (CDCl 3, (CDCl 3, 400 MHz): δ 1.45(s, 6H), 2.19(s, 3H), 2.42(s, 3H), 2.94(s, 3H), 5.05(s, 2H), 7.92(s, 1H), 8.08(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴 맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.80 μm 의 IC 50 을가졌다. [1177] 실시예 10-53: 1- 벤질 -3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 [1178] [1179] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및벤질브로마이 드로부터실시예 10-5 와같이제조했다. 수율 : 40%. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 2.18(s, 3H), 2.42(s, 3H), 3.84(s, 2H), 4.61(s, 2H), 5.06(s, 2H), (m, 5H), 7.92(s, 1H), 8.08(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.09 μm 의 IC 50 을가졌다. [1180] 실시예 10-54: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-( 피리딘 -2- 일메틸 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 [1181] [1182] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온및 2-( 브로모메틸 ) 피리딘으로부 터실시예 10-5 와같이제조했다. 수율 : 50%. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 2.19(s, 3H), 2.41(s, 3H), 4.12(s, 2H), 4.71(s, 2H), 5.05(s, 2H), (m, 4H), 7.92(s, 1H), 8.08(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.68 μm 의 IC 50 을가졌다. [1183] 실시예 10-55: 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이 미다졸리딘 -2,4- 디온 [1184] [1185] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온및 4-( 클로로메틸 )-3,5- 디메틸이 속사졸로부터실시예 10-5 와같이제조했다. 수율 : 50%. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): 2.19(s, 3H), 2.27(s,

198 3H), (d, J=5.2Hz, 6H), 3.82(s, 2H), 4.40(s, 2H), 5.05(s, 2H), 7.92(s, 1H), 8.05(s, 1H). 표제 화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.04 μm 의 IC 50 을가졌다. [1186] 실시예 10-56: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-5-(3- 메톡시벤질 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 [1187] [1188] 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-아민하이드로클로라이드 (400 mg, 2.08 mmol), 디피리딘- 2-일카보네이트 (450 mg, 2.08 mmol) 및트리에틸아민 (0.290 ml, 2.08 mmol) 을디클로로메탄 (7 ml) 에서 12 시간동안실온에서교반했다. 반응물을진공하에서농축하여 4-((4-이소시아나토-1H-피라졸-1-일 ) 메틸 )-3,5- 디메틸이속사졸을회색이도는백색고형물로서정량수율로얻었다. 에탄올 (1 ml) 을메틸 2-아미노-3-(3-메톡시페닐 ) 프로파노에이트 (68 mg, mmol) 및트리에틸아민 (0.064 ml, mmol) 와함께첨가했다. 반응물을 12시간동안환류에서교반하고, 실온으로냉각했다. 용매를질소흐름하에서제거했다. 조생성물을 MeOH (1 ml) 에서재현탁하고, 역상 HPLC ( 물중 5 내지 95% 아세토니트릴 : 16분구배 ) 로정제했다. 순수분획을배합하고, 용매를진공하에서제거하여 3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-5-(3-메톡 시벤질 ) 이미다졸리딘-2,4-디온을백색고형물로서수율 50% 로얻었다. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 2.19(s, 3H), 2.41(s, 3H), (d, J=3.2Hz, 1H), (d, J=8Hz, 1H), 3.76(s, 3H), (m, 1H), 5.05(s, 2H), 5.95(bs, 1H), (t, 1H), (m, 3H), 7.85(s, 1H), 7.99(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.13 μm 의 IC 50 을가졌다. [1189] 실시예 10-57: 5-( 사이클로헥실메틸 )-3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 [1190] [1191] 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 아민하이드로클로라이드 ( 실시예 10-41a) 및메틸 2- 아미노 - 3-사이클로헥실프로파노에이트로부터실시예 과같이제조했다. 수율 : 30%. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ (m, 2H), (m, 3H), (1H) (7H), (m, 1H), 2.19(s, 3H), 2.41(s, 3H), (m, 1H), 5.05(s, 2H), 6.01(bs, 1H), 7.91(s, 1H), 8.05(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.96 μm 의 IC 50 을가졌다. [1192] 실시예 10-58: 5-( 사이클로펜틸메틸 )-3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 [1193] [1194] 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 아민하이드로클로라이드 ( 실시예 10-41a) 및메틸 2- 아미노 - 3-사이클로펜틸프로파노에이트로부터실시예 과같이제조했다. 수율 : 50%. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ (m, 3H), (m, 6H), (m, 2H), 2.19(s, 3H), 2.42(s, 3H), (m, 1H), 5.05(s, 2H), 5.52(bs, 1H), 7.90(s, 1H), 8.06(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.31 μm 의 IC 50 을가졌다

199 [1195] 실시예 10-59: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-5-(4- 하이드록시벤질 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 [1196] [1197] 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 아민하이드로클로라이드 ( 실시예 10-41a) 및메틸 2- 아미노 - 3-(4-하이드록시페닐 ) 프로파노에이트로부터실시예 과같이제조했다. 수율 : 50%. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 2.41(s, 3H), 2.85(s, 3H), (d, 1H, J=4Hz), (d, J=4Hz, 1H), (m, 1H), 5.04(s, 2H), (bs, 1H), (d, J=12Hz, 2H), (d, J=8Hz, 2H), 7.06(s, 1H), 7.97(s, 1H), 9.43(bs, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.33 μm 의 IC 50 을가졌다. [1198] 실시예 10-60: 5-(3,4- 디하이드록시벤질 )-3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 - 2,4- 디온 [1199] [1200] 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 아민하이드로클로라이드 ( 실시예 10-41a) 및메틸 2- 아미노 - 3-(3,4- 디하이드록시페닐 ) 프로파노에이트로부터실시예 과같이제조했다. 수율 : 50%. MS M+H 계산치 398.1; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.51 μm 의 IC 50 을가 졌다. [1201] 실시예 10-61: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-5- 이소부틸이미다졸리딘 -2,4- 디온 [1202] [1203] 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 아민하이드로클로라이드 ( 실시예 10-41a) 및에틸 2- 이소시아 나토-4-메틸펜타노에이트로부터실시예 과같이제조했다. 수율 : 50%. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ (m, 8H), (m, 1H), 2.19(s, 3H), 2.41(s, 3H), (t, 1H), (5.05(s, 2H), 5.70(bs, 1H), 7.90(s, 1H), 8.05(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 1.0 μm 의 IC 50 을가졌다. [1204] 실시예 10-62: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-5- 이소프로필이미다졸리딘 -2,4- 디온 [1205] [1206] 1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 아민하이드로클로라이드 ( 실시예 10-41a) 및에틸 2- 이소시아 나토 -3- 메틸부타노에이트로부터실시예 과같이제조했다. 수율 : 30%. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ

200 (d, 3H, J=7.2Hz), (d, 3H, J=8Hz), 2.19(s, 3H), (m, 1H), 2.40(s, 3H), 4.02(s, 1H), 5.05(s, 2H), 5.53(bs, 1H), 7.90(s, 1H), 8.05(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를 억제하는것을보여주었고 1.1 μm 의 IC 50 을가졌다. [1207] 실시예 10-63: (Z)-5- 벤질리덴 -3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 [1208] [1209] 빙초산 (3 ml) 중 3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 이미다졸리딘-2,4-디온 ( 실시예 10-1) (275 mg, 1 mmol), 벤즈알데히드 (140 mg, 1.3 mmol), 및나트륨아세테이트 (205 mg, 2.5 mmol) 을마이크로웨이브반응기에서 7시간동안 185 에서가열했다. 냉각시, 혼합물을물 (100 ml) 로희석하고, 에틸아세테이트로추출했다 (3x, 50 ml). 배합된유기추출물을포화탄산나트륨수용액으로세정하고, 황산나트륨상에서건조시키고, 여과하고, 농축했다. 고형생성물을에틸아세테이트 / 헥산 (1/1) 으로분쇄하고, 고진공하에서건조시켜 (Z)-5-벤질리덴-3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4- 일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 이미다졸리딘-2,4-디온 (173 mg, 48%) 를담황색고형물로서로서얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 2.14(s, 3H), 2.40(s, 3H), 6.59(s, 1H), 5.20(s, 2H), (m, 3H), 7.66(s, 2H), 7.81(s, 1H), 8.21(s, 1H), 11.01(bs, 1H). 표 제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.34 μm 의 IC 50 을가졌다. [1210] 실시예 10-64: 4-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1- 메틸 -1,2,4- 트리아졸리딘 -3,5- 디온 [1211] [1212] 에틸 4-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-2-메틸-3,5-디옥소-1,2,4-트리아졸리딘 -1-카르복실레이트 (3.2 g, 8.8 mmol) 을 MeOH/1N 수성 NaOH (100 ml) 의 (1/1) 혼합물에서실온에서 30분동안교반했다. 혼합물을수성 1N HCl (150 ml) 으로산성화하고, 에틸아세테이트 (3x, 100 ml) 로추출하고, 황산나트륨상에서건조시키고, 여과하고, 농축하여 4-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-1-메틸-1,2,4-트리아 졸리딘 -3,5- 디온 (2.3 g, 89%) 를황색고형물로서얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 2.18(s, 3H), 2.44(s, 3H), 3.05(s, 3H), 5.17(s, 2H), 7.94(s, 1H), 8.13(s, 1H). [1213] 실시예 10-64a: 에틸 4-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2- 메틸 -3,5- 디옥소 -1,2,4- 트리아 졸리딘 -1- 카르복실레이트 [1214] [1215] 에틸클로로포르메이트 (1.3 g, 12 mmol) 을아세토니트릴 (100 ml) 중 N-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )- 1H-피라졸-4-일 )-1-메틸히드라진카르복사미드 ( 실시예 10-64b) (2.5 g, 9 mmol) 및트리에틸아민 (1.2 g, 12 mmol) 의혼합물에첨가했다. 혼합물을 1시간동안환류한다음, 냉각하고, 1N 수성 HCl (150 ml) 으로희석하고, 에틸아세테이트로추출했다 (3x, 75 ml). 배합된유기추출물을황산나트륨상에서건조시키고, 여과하고, 로토바프상에서농축했다. 고형물을에틸아세테이트 / 헥산 (1/3) 으로분쇄하고, 고진공하에서건조시켜에틸 4-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-2-메틸-3,5-디옥소-1,2,4-트리아졸리딘 -1-카 르복실레이트 (3.2 g, 94%) 를백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 1.28(t, J=7.2Hz, 3H),

201 2.13(s, 3H), 2.40(s, 3H), 3.24(s, 3H), 4.30(t, J=7.2Hz, 2H), 5.21(s, 2H), 7.73(m, 1H), 8.16(s, 1H). [1216] 실시예 10-64b: N-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1- 메틸히드라진카르복사미드 [1217] [1218] 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-카보닐아지드 ( 실시예 10-1a) (1.25 g, 5.3 mmol) 을톨루엔 (30 ml) 에서환류온도에서 40분동안교반했다. 혼합물을실온으로냉각하고, 메틸히드라진 (0.3 ml, 260 mg, 5.6 mmol) 을첨가하고, 혼합물을 30분동안환류했다. 반응물을실온으로냉각한후, 용매를로토바프상에서제거하고, 고형생성물을에틸아세테이트 / 헥산 (2/5) 로분쇄하고, 고진공하에서건조시켜 N-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-1-메틸히드라진카르복사미드 (1.1 g, 79%) 를백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 2.09(s, 3H), 2.36(s, 3H), 2.98(s, 3H), 4.61(s, 2H), 5.02(s, 2H), 7.42(s, 1H), 7.72(m, 1H), 8.78(s, 1H). [1219] 실시예 10-65: 1- 벤질 -4-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2- 메틸 -1,2,4- 트리아졸리딘 - 3,5- 디온 [1220] [1221] 4-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-1-메틸-1,2,4-트리아졸리딘 -3,5-디온 ( 실시예 10-64) (785 mg, 2.7 mmol) 을아세토니트릴 (50 ml) 에용해시켰다. 트리에틸아민 (1 g, 10 mmol) 및벤질브로마이드 (510 mg, 3 mmol) 을첨가하고, 반응물을실온에서 12시간동안교반했다. 그다음, 혼합물을로토바프상에서농축하고, 메탄올 (5 ml) 에용해시키고, 역상 HPLC ( 물중 5-95% 아세토니트릴 : 25분구배 ) 로정제했다. 순수분획을풀링하고, 농축하고, 생성물을에탄올로부터재결정화하여 1-벤질-4-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4- 일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-2-메틸-1,2,4-트리아졸리딘 -3,5-디온 (210 mg, 20%) 를백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 2.13(s, 3H), 2.39(s, 3H), 3.09(s, 3H), 4.81(s, 2H), 5.18(s, 2H), (m, 5H), 7.76(s, 1H), 8.18(s, 1H). MS M+H 계산치 381.1; 실측치 융점 : 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.02 μm 의 IC 50 을가졌다. [1222] 실시예 10-66: 1- 벤질 -4-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2- 메틸 -1,2,4- 트리아졸리딘 - 3,5- 디온 [1223] [1224] 4-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1- 메틸 -1,2,4- 트리아졸리딘 -3,5- 디온 ( 실시예 10-64) 및 1-(2- 브로모에틸 )-4- 플루오로벤젠으로부터실시예 와같이제조했다. 수율 : 14%. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 2.18(s, 3H), 2.40(s, 3H), 2.87(t, J=6.8Hz, 2H), 3.14(s, 3H), 3.83(t, J=7.2Hz, 2H), 5.03(s,

202 2H), 6.95(t, J=8.4Hz, 2H), 7.14(t, J=8Hz, 2H), 7.77(s, 1H), 7.95(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수 용체를억제하는것을보여주었고 0.01 μm 의 IC 50 을가졌다. [1225] 실시예 10-67: 4-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1- 메틸 -2-(2- 펜옥시에틸 )-1,2,4- 트리아 졸리딘 -3,5- 디온 [1226] [1227] 4-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1- 메틸 -1,2,4- 트리아졸리딘 -3,5- 디온 ( 실시예 10-64) 및 (2-브로모에톡시) 벤젠으로부터실시예 와같이제조했다. 수율 : 20%. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 2.13(s, 3H), 2.40(s, 3H), 3.15(s, 3H), 3.99(t, J=4.4Hz, 2H), 4.13(t, J=4.8Hz, 2H), 5.20(s, 2H), 6.80(d, J=8Hz, 2H), 6.90(t, J=7.1Hz, 1H), 7.22(t, J=8Hz, 2H), 7.75(s, 1H), 8.17(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 μm 의 IC 50 을가졌다. [1228] 실시예 10-68: 4-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1,2,4- 트리아졸리딘 -3,5- 디온 [1229] [1230] 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-카보닐아지드 ( 실시예 10-1a) (1g, 4.1 mmol) 을톨루엔 (100 ml) 에서 1시간동안환류했다. 반응물을실온으로냉각하고, 에틸히드라진카르복실레이트 (0.45g, 43 mmol) 을첨가했다. 반응물을가열환류하고, 1시간동안교반한다음, 냉각하고, 로토바프상에서농축했다. 잔류물을에탄올 (100 ml) 에서취하고, 탄산칼륨 (100 mg) 을첨가했다. 혼합물을 12시간동안환류한다음, 여과하고, 실온으로냉각시키고, 아세트산 ( 약 7 방울 ) 로중화시켰다. 용매를로토바프상에서제거하고, 수득한고형물을에틸아세테이트 / 헥산 (1/9) 로분쇄하여 4-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-1,2,4-트리 아졸리딘 -3,5- 디온 (0.98 g, 85%) 를회색이도는백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 2.18(s, 3H), 2.41(s, 3H), 4.98(s, 2H) 7.16(s, 1H), 7.38(s, 1H). [1231] 실시예 10-69: 4-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1,2- 디메틸 -1,2,4- 트리아졸리딘 -3,5- 디 온 [1232] [1233] 4-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-1,2,4-트리아졸리딘 -3,5-디온 ( 실시예 10-68) (100 mg, 0.36 mmol), 메틸요오다이드 (141 mg, 1 mmol), 및세슘카보네이트 (325 mg, 1 mmol) 을아세토니트릴 /DMF (5 ml) 의 2/1 혼합물에서실온에서 2시간동안교반했다. 혼합물을수성 1N HCl (100 ml) 로희석하고, 에틸아세테이트로추출했다 (3x, 50 ml). 배합된유기추출물을황산나트륨상에서건조시키고, 농축하고, 조잔류물을 MeOH 에서취하고, 역상 HPLC ( 물중 5 내지 95% 아세토니트릴 : 25분구배 ) 로정제했다. 순수분획을풀링하고, 농축하여 4-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-1,2-디메틸-1,2,4-트리아졸리딘 - 3,5- 디온 (89 mg, 80%) 를맑은반고형물로서얻었다. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 2.18(s, 3H), 2.41(s, 3H), 3.22(s, 6H), 5.04(s, 2H), 7.88(s, 1H), 8.03(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는

203 것을보여주었고 0.6 μm 의 IC 50 을가졌다. [1234] 실시예 10-70: 1,2- 디벤질 -4-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1,2,4- 트리아졸리딘 -3,5- 디 온 [1235] [1236] 4-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1,2- 디메틸 -1,2,4- 트리아졸리딘 -3,5- 디온 ( 실시예 10-69) 및벤질브로마이드로부터실시예 와같이제조했다. 수율 : 69%. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 2.14(s, 3H), 2.36(s, 3H), 4.65(s, 4H), 4.99(s, 2H), (m, 4H), (m, 6H), 7.86(s, 1H), 8.02(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.8 μm 의 IC 50 을가졌다. [1237] 실시예 10-71: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-((6-( 하이드록시메틸 ) 피리딘 -2- 일 ) 메 틸 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 [1238] [1239] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온및 6- 브로모메틸 -2- 피리딘메탄올 로부터실시예 10-5 와같이제조했다. 수율 : 35%. MS M+H 계산치 397.2; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.72 μm 의 IC 50 을가졌다. [1240] 실시예 10-72: 1-((3,4- 디메톡시피리딘 -2- 일 ) 메틸 )-3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이 미다졸리딘 -2,4- 디온 [1241] [1242] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온및 3,4- 디메톡시 -2- 클로로메틸 피리딘하이드로클로라이드로부터실시예 10-5 와같이제조했다. 수율 : 26%. MS M+H 계산치 360.2; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 1.0 μm 의 IC 50 을가졌다. [1243] 실시예 10-73: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-((6-( 테트라하이드로푸란 -2- 일 ) 메 틸 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온

204 [1244] [1245] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온및테트라하이드로푸르푸릴브로 마이드로부터실시예 와같이제조했다. 수율 : 28%. MS M+H 계산치 427.2; 실측치 표제화합 물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 1.4 μm 의 IC 50 을가졌다. [1246] 실시예 10-74: 1-( 사이클로헥실메틸 )-3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 [1247] [1248] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및브로모메틸사 이클로헥산으로부터실시예 와같이제조했다. 수율 : 20%. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 0.88(q, J=10.4Hz, 2H), (m, 3H), (m, 6H), 2.12(s, 3H), 2.38(s, 3H), 3.13(d, J=7.2Hz, 2H), 4.06(s, 2H), 5.17(s, 2H), 7.75(s, 1H), 8.14(s, 1H). MS M+H 계산치 372.2; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.28 μm 의 IC 50 을가졌다. [1249] 실시예 10-75: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-((6- 메톡시피리딘 -2- 일 ) 메틸 ) 이미다졸 리딘 -2,4- 디온 [1250] [1251] 3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 이미다졸리딘-2,4-디온 (100 mg, 0.4 mmol), (6-메톡시 -피리딘-2-일)-메탄올 ( 실시예 10-75a) (101 mg, 0.7 mmol), 트리부틸포스핀 (147 mg, 0.7 mmol), 및 1,1'-아조비스 (N,N-디메틸포름아미드) (125 mg, 0.7 mmol) 을 THF (5 ml) 에서용해시키고, 실온에서 15시간동안교반했다. 반응물을염수 (100 ml) 로희석하고, 에틸아세테이트로추출했다 (2x, 100 ml). 배합된유기추출물을황산마그네슘상에서건조시키고, 여과하고, 로토바프상에서농축했다. 잔류물을메탄올 (5 ml) 에서취하고, 역상 HPLC ( 물중 5 내지 95% 아세토니트릴 : 25분구배 ) 로정제했다. 순수분획을배합하고, 농축한다음, 에틸아세테이트 / 헥산 (1:9) 에서재용해시켰다. 용액을 5 에서 15시간동안냉각하고, 여기서백색고형물을형성했다. 침전물을수집하여 3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-1-((6-메톡시피리딘-2- 일 ) 메 틸 ) 이미다졸리딘-2,4-디온 (5 mg, 4%) 를백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 2.11(s, 3H), 2.37(s, 3H), 3.74(s, 3H), 4.17(s, 2H), 4.54(s, 2H), 5.17(s, 2H), 6.69(d, J=7.6Hz, 1H), 6.96(d, J=6.8Hz, 1H), 7.67(d, J=6.8Hz, 1H), 7.76(s, 1H), 8.17(s, 1H). MS M+H 계산치 397.2; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.23 μm 의 IC 50 을가졌다

205 [1252] 실시예 10-75a: (6- 메톡시피리딘 -2- 일 ) 메탄올 [1253] [1254] 무수메탄올 (20 ml) 중메틸-6-메톡시피리딘-2-카르복실레이트 (2g, mmol) 을질소하에서 0 로냉각하고, 나트륨보로하이드라이드 (1.36g, mmol) 을상기용액에서서히첨가했다. 반응물을 0 에서 30분동안교반시키고, 그다음, 1시간동안실온으로가온했다. 반응물을물로급랭시키고, 로토바프상에서농축했다. 반응물을염수 (100 ml) 로희석하고, 디클로로메탄 /2-프로판올용액 (2:1) 으로추출했다 (3x, 150 ml). 배합된유기추출물을황산마그네슘상에서건조시키고, 여과하고, 로토바프상에서농축하여 (6-메톡시피리딘- 2-일 ) 메탄올 (500 mg, 30%) 를오일로서얻었다. MS M+H 계산치 140.1; 실측치 [1255] 실시예 10-76: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(2- 메톡시펜에틸 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디 온 [1256] [1257] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 6) 및 2- 메톡시펜에틸 브로마이드로부터실시예 와같이제조했다. 수율 : 52%. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 2.11(s, 3H), 2.38(s, 3H), 2.80(t, J=7.2Hz, 2H), 3.51(t, J=7.2Hz, 2H), 3.75(s, 3H), 4.03(s, 2H), 5.17(s, 2H), 6.85(t, J=7.2Hz, 1H), 6.95(d, J=8.4Hz, 1H), (m, 2H), 7.73(s, 1H), 8.13(s, 1H). MS M+H 계산치 410.2; 실측치 융점 : 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.14 μm 의 IC 50 을가졌다. [1258] 실시예 10-77: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(3- 플루오로펜에틸 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 [1259] [1260] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 3- 플루오로펜 에틸브로마이드로부터실시예 와같이제조했다. 수율 : 22%. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 2.11(s, 3H), 2.38(s, 3H), 2.80(t, J=7.2Hz, 2H), 3.57(t, J=7.2Hz, 2H), 4.06(s, 2H), 5.17(s, 2H), 6.85(dt, J=8.4, 2.0Hz, 1H), 7.11(t, J=8.4Hz, 2H), 7.32(q, J=7.8Hz, 1H), 7.73(s, 1H), 8.12(s, 1H). MS M+H 계산치 398.2; 실측치 융점 : 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.06 μm 의 IC 50 을가졌다. [1261] 실시예 10-78: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1- 펜에틸이미다졸리딘 -2,4- 디온 [1262]

206 [1263] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및펜에틸브로마 이드로부터실시예 와같이제조했다. 수율 : 37%. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 2.11(s, 3H), 2.38(s, 3H), 2.83(t, J=6.4Hz, 2H), 3.55(t, J=7.4Hz, 2H), 4.03(s, 2H), 5.17(s, 2H), (m, 5H), 7.73(s, 1H), 8.13(s, 1H). MS M+H 계산치 380.2; 실측치 융점 : 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.14 μm 의 IC 50 을가졌다. [1264] 실시예 10-79: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(4- 메톡시펜에틸 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디 온 [1265] [1266] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 4- 메톡시펜에 틸브로마이드로부터실시예 와같이제조했다. 수율 : 32%. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 2.11(s, 3H), 2.38(s, 3H), 2.78(t, J=7.4Hz, 2H), 3.50(t, J=7.4Hz, 2H), 3.69(s, 3H), 4.02(s, 2H), 5.16(s, 2H), 6.84(d, J=8.4Hz, 2H), 7.15(d, J=8.4Hz, 2H), 7.73(s, 1H), 8.12(s, 1H). MS M+H 계산치 ; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.04 μm 의 IC 50 을가졌다. [1267] 실시예 10-80: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(2- 나프탈렌 -1- 일 ) 에틸 ) 이미다졸리딘 - 2,4- 디온 [1268] [1269] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 1-(2- 브로모에 틸 ) 나프탈렌으로부터실시예 와같이제조했다. 수율 : 20%. MS M+H 계산치 ; 실측치 표 제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 1.27 μm 의 IC 50 을가졌다. [1270] 실시예 10-81: 1-(2- 클로로펜에틸 )-3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디 온 [1271] [1272] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 2- 클로로펜에 틸브로마이드로부터실시예 와같이제조했다. 수율 : 25%. MS M+H 계산치 ; 실측치 표 제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.25 μm 의 IC 50 을가졌다. [1273] 실시예 10-82: 1-(3- 클로로펜에틸 )-3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디 온

207 [1274] [1275] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 3- 클로로펜에 틸브로마이드로부터실시예 와같이제조했다. 수율 : 27%. MS M+H 계산치 ; 실측치 표 제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.20 μm 의 IC 50 을가졌다. [1276] 실시예 10-83: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(2- 플루오로펜에틸 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 [1277] [1278] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 2- 플루오로펜 에틸브로마이드로부터실시예 와같이제조했다. 수율 : 24%. MS M+H 계산치 ; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.13 μm 의 IC 50 을가졌다. [1279] 실시예 10-84: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(4- 플루오로펜에틸 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 [1280] [1281] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 4- 플루오로펜 에틸브로마이드로부터실시예 와같이제조했다. 수율 : 34%. MS M+H 계산치 ; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.01 μm 의 IC 50 을가졌다. [1282] 실시예 10-85: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(3- 메톡시펜에틸 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디 온 [1283] [1284] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 3- 메톡시펜에 틸브로마이드로부터실시예 와같이제조했다. 수율 : 34%. MS M+H 계산치 ; 실측치 표 제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.16 μm 의 IC 50 을가졌다. [1285] 실시예 10-86: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(4- 하이드록시펜에틸 ) 이미다졸리딘 - 2,4- 디온

208 [1286] [1287] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 4- 하이드록시 펜에틸브로마이드로부터실시예 와같이제조했다. 수율 : 31%. MS M+H 계산치 ; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.41 μm 의 IC 50 을가졌다. [1288] 실시예 10-87: 1-(3,4- 디메톡시펜에틸 )-3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 - 2,4- 디온 [1289] [1290] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 3,4- 디메톡시 펜에틸브로마이드로부터실시예 와같이제조했다. 수율 : 36%. MS M+H 계산치 ; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.26 μm 의 IC 50 을가졌다. [1291] 실시예 10-88: 1- 벤질 -3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2- 온 [1292] [1293] DMF (3 ml) 중 1-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 이미다졸리딘-2-온 ( 실시예 10-88a) (50 mg, 0.19 mmol) 및 60% 나트륨하이드라이드 (8 mg, 0.21 mmol) 을실온에서 15분동안교반한다음, 0 로냉각했다. 벤질브로마이드 (33 mg, 0.19 mmol) 을혼합물에첨가하고, 2시간동안실온으로가온했다. 반응물을메탄올로급랭시키고, 로토바프상에서농축했다. 반응물을염수 (50 ml) 로희석하고, 디클로로메탄으로추출했다 (2x, 50 ml). 배합된유기추출물을황산마그네슘상에서건조시키고, 여과하고, 로토바프상에서농축했다. 잔류물을실리카칼럼크로마토그래피 ( 메탄올중 100% 내지 90% 디클로로메탄 : 30분구배 ) 로정제하여 1-벤질-3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4- 일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 이미다졸리딘-2-온 (21 mg, 31%) 를백색고형물로서얻었다. MS M+H 계산치 ; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.71 μm 의 IC 50 을가졌다. [1294] 실시예 10-88a: 1-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2- 온 [1295] [1296] DMF (2 ml) 중 1-(2-클로로에틸 )-3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일) 메틸 )1H-피라졸-4-일) 우레아 ( 실시예 10-88b) (115 mg, 0.39 mmol) 및 60% 나트륨하이드라이드 (17 mg, 0.42 mmol) 을 0 에서 15분동안교반한다음, 2시간동안교반하면서실온으로가온했다. 반응물을메탄올로급랭시키고, 로토바프상에서농축했다. 반응물을염수 (50 ml) 로희석하고, 디클로로메탄으로추출했다 (2x, 50 ml). 배합된유기추출물을황산마그네

209 슘상에서건조시키고, 여과하고, 로토바프상에서농축했다. 잔류물을실리카칼럼크로마토그래피 ( 메탄올중 100% 내지 90% 디클로로메탄 : 30분구배 ) 로정제하여 1-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 이미다졸리딘-2-온 (98 mg, 97%) 를백색고형물로서얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 2.10(s, 3H), 2.37(s, 3H), (m, 2H), 3.61(d, J=8.8Hz, 1H), 3.63(d, J=10.4Hz, 1H), 5.07(s, 2H), 6.71(s, 1H), 7.42(s, 1H), 7.74(s, 1H). MS M+H 계산치 ; 실측치 [1297] 실시예 10-88b: 1-(2- 클로로에틸 )-3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 우레아 [1298] [1299] 아세토니트릴 (5 ml) 중 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-아민 (419 mg, 2.18 mmol) 및 2-클로로에틸이소시아네이트 (230 mg, 2.18 mmol) 을 65 에서 16시간동안가열했다. 반응물을실온으로냉각하고, 로토바프상에서농축했다. 잔류물을실리카칼럼크로마토그래피 ( 메탄올중 100% 내지 90% 디클로로메탄 : 30 분구배 ) 로정제하고, 건조시키고, 에틸아세테이트 / 헥산 (1/9) 로분쇄하여 (1-(2-클로로에틸)-3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )1H-피라졸-4-일) 우레아 (258 mg, 40%) 를황색고형물로서얻었다. MS M+H 계산치 ; 실측치 [1300] 실시예 10-89: 1- 벤질 -4-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2-( 메톡시메틸 )-1,2,4- 트리아졸 리딘 -3,5- 디온 [1301] [1302] 1- 벤질 -4-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1,2,4- 트리아졸리딘 -3,5- 디온 ( 실시예 10-91a) 및브로모메틸메틸에테르로부터실시예 과같이제조했다. 수율 : 18%. MS M+H 계산치 ; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.02 μm 의 IC 50 을가졌다. [1303] 실시예 10-90: 1-((1,3- 디메틸 -1H- 피라졸 -4- 일 ) 메틸 )-3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 [1304] [1305] 3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 이미다졸리딘-2,4-디온 (10a)(200 mg, 0.7 mmol), 4- ( 클로로메틸 )-1,3-디메틸-1H-피라졸 (144 mg, 1 mmol), 및세슘카보네이트 (325 mg, 1 mmol) 을 2 ml DMF 에서용해시키고, 마이크로웨이브반응기에서 165 에서 5분동안가열했다. 반응물을실온으로냉각하고, 염침전물을여과로제거했다. 조생성물함유맑은용액을얻고, HPLC (10 내지 95% 아세토니트릴 / 물 ; 25분 ) 로정제하여 1-((1,3-디메틸-1H-피라졸-5-일 ) 메틸 )-3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 이미다졸 리딘-2,4-디온 (150 mg, 53%) 를담갈색고형물로서얻었다. 1 H NMR (DMSO, 400 MHz): δ 2.09(s, 3H), 2.14(s, 3H), 2.20(s, 3H), 3.70(s, 3H), 3.99(s, 2H), 4.55(s, 2H), 5.19(s, 2H), 6.06(s, H), 7.77(s, H), 8.17(s, H). MS M+H 계산치 384.2; 실측치 융점 :

210 [1306] 실시예 10-91: 1- 벤질 -4-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2- 에틸 -1,2,4- 트리아졸리딘 - 3,5- 디온 [1307] [1308] DMF (5 ml) 중 1-벤질-4-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-1,2,4-트리아졸리딘-3,5- 디온 (100 mg, 0.27 mmol), 브로모에탄 (149 mg, 1.36 mmol), 및세슘카보네이트 (355 mg, 1.1 mmol) 을 80 에서 15시간동안가열했다. 반응물을실온으로냉각하고, 염수 (50 ml) 로희석하고, 에틸아세테이트로추출했다 (2x, 50 ml). 배합된유기추출물을황산마그네슘상에서건조시키고, 여과하고, 로토바프상에서농축했다. 잔류물을 HPLC ( 물중 5 내지 95% 아세토니트릴 : 25분구배 ) 로정제하여 1-벤질-4-(1-((3,5-디메틸이속사졸- 4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-2-에틸-1,2,4-트리아졸리딘 -3,5-디온 (40 mg, 37%) 를오일로서얻었다. 1 H NMR (DMSO-d 6, 400 MHz): δ 0.97(t, J=7.2Hz, 3H), 2.13(s, 3H), 2.39(s, 3H), 3.58(q, J=6.8Hz, 2H), 4.80(s, 2H), 5.18(s, 2H), (m, 5H), 7.77(s, 1H), 8.19(s, 1H). MS M+H 계산치 ; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.04 μm 의 IC 50 을가졌다. [1309] 실시예 10-91a: 1- 벤질 -4-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1,2,4- 트리아졸리딘 -3,5- 디온 [1310] [1311] 아세토니트릴 (50 ml) 중 1-벤질-N-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일) 히드라진카르복사미드 (2.00g, 5.88 mmol), 에틸클로로포르메이트 (6.38g, mmol), 및트리에틸아민 (1.78g, mmol) 을 100 에서 48시간동안가열했다. 혼합물을 80 로냉각하고, 1 M NaOH( 수성 ) (5 ml) 을첨가하고, 반응혼합물을 1시간동안교반했다. 반응물을실온으로냉각하고, 로토바프상에서농축했다. 잔류물을디클로로메탄에용해시키고, 여과하여염을제거하고, 용액을농축하여 1-벤질-4-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4- 일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일 )-1,2,4-트리아졸리딘-3,5-디온 (1.28 g, 60%) 를황색오일로서얻었다. MS M+H 계산치 ; 실측치 [1312] 실시예 10-91b: 1- 벤질 -N-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 히드라진카르복사미드 [1313] [1314] 톨루엔 (70 ml) 중 1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸-1H-피라졸-4-카보닐아지드 (2.79 g, mmol) 을 4시간동안가열환류하여 4-((4-이소시아나토-1H-피라졸-1- 일 ) 메틸 )-3,5-디메틸이속사졸을인시투 (in situ) 얻었다. 벤질히드라진디하이드로클로라이드 (2.44 g, mmol) 및트리에틸아민 (2.29 g, mmol) 을혼합물에첨가했다. 혼합물을 100 에서추가 4시간동안가열했다. 반응물을실온으로냉각하고, 에틸아세테이트 (150 ml) 로희석하고, 셀라이트를통해여과했다. 그다음, 모액을염수 (150 ml) 로세정하고, 유기층을황산마그네슘상에서건조시키고, 여과하고, 농축했다. 잔류물을실리카칼럼크로마토그래피 ( 메탄올중 100% 내지 90% 디클로로메탄 : 30분구배 ) 로정제하여 1-벤질-N-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4- 일 ) 히드라진카르복사미드 (2.00g, 52%) 를오일로서얻었다. MS M+H 계산치 ; 실측치

211 [1315] 실시예 10-92: 1- 벤질 -4-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2-(2- 메톡시에틸 )-1,2,4- 트리아 졸리딘 -3,5- 디온 [1316] [1317] 1- 벤질 -4-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1,2,4- 트리아졸리딘 -3,5- 디온 ( 실시예 10-91a) 및 2- 브로모에틸메틸에테르로부터실시예 과같이제조했다. 수율 : 20%. MS M+H 계산치 ; 실측 치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.06 μm 의 IC 50 을가졌다. [1318] 실시예 10-93: 1- 벤질 -4-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2- 프로필 -1,2,4- 트리아졸리딘 - 3,5- 디온 [1319] [1320] 1- 벤질 -4-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1,2,4- 트리아졸리딘 -3,5- 디온 ( 실시예 10-91a) 및 1- 브로모프로판으부터실시예 과같이제조했다. 수율 : 38%. MS M+H 계산치 ; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.06 μm 의 IC 50 을가졌다. [1321] 실시예 10-94: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1-(3- 페닐프로필 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 [1322] [1323] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) 및 (3- 브로모프로 필 ) 벤젠으부터실시예 와같이제조했다. 수율 : 36%. MS M+H 계산치 394.2; 실측치 표제화합 물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.26 μm 의 IC 50 을가졌다. [1324] 실시예 10-95: 1- 벤질 -2- 부틸 -4-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 -1,2,4- 트리아졸리딘 -3,5- 디온 [1325]

212 [1326] 1- 벤질 -4-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-1,2,4- 트리아졸리딘 -3,5- 디온 ( 실시예 10-91a) 및 1- 브로모부탄부터실시예 과같이제조했다. 수율 : 22%. MS M+H 계산치 ; 실측치 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.41 μm 의 IC 50 을가졌다. [1327] 실시예 10-96: 3 급 - 부틸 3-((3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-2,4- 디옥소이미다졸리딘 - 1- 일 ) 메틸 ) 벤질카바메이트 [1328] [1329] 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디온 ( 실시예 10-1) (070 mg, mmol), 3 급 - 부틸 3-( 하이드록시메틸 ) 벤질카바메이트 (0.254 mmol, 60 mg), 디에틸아조디카르복실레이트 (0.50 mmol, 86 mg), 및 P-tBu 3 (125 ml, 0.50 mmol) 을 THF (1 ml) 에서 4 시간동안교반했다. 반응물을에틸아세테 이트 (1.5 ml) 로희석하고, 포화중탄산나트륨용액 (2x, 1.5 ml) 으로세정했다. 유기상을수집하고, 혼합물을진한질소흐름하에서. 조생성물을, 용리액으로서에틸아세테이트를사용하여실리카겔상에서칼럼크로마토그래피로정제했다. 순수분획을배합하고, 용매를로토바프상에서제거하여 3급-부틸 3-((3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라졸-4-일)-2,4-디옥소이미다졸리딘 -1-일) 메틸 ) 벤질카바메이트를백색고형물 (112 mg, 90%) 로서얻었다. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ 1.44 (s, 9H), 2.19(s, 3H), 2.42(s, 3H), 3.48(bs, 1H), 3.84(s, 2H), (d, J=6Hz, 1H), 4.60(s, 2H), 4.87(bs, 1H), 5.06(s, 2H), (m, 4H), 7.92(s, 1H), 8.08(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 0.90 μm 의 IC 50 을가졌다. [1330] 실시예 10-97: 3-(1-((3,5- 디메틸이속사졸 -4- 일 ) 메틸 )-1H- 피라졸 -4- 일 )-5-( 하이드록시메틸 ) 이미다졸리딘 -2,4- 디 온 [1331] [1332] 4-((4-이소시아네이토-1H-피라졸-1- 일 ) 메틸 )-3,5-디메틸이속사졸 ( 실시예 10-1) (784 mg, 3.6 mmol), 세린메틸에스테르하이드로클로라이드 (672 mg, 4.32 mmol) 및트리에틸아민 (1 ml, 7.2 mmol) 을톨루엔 (16 ml) 에서 8시간동안환류했다. 반응물을실온으로냉각한다음, 용액을로보바프상에서농축했다. 생성물을역상 HPLC ( 물중 5 내지 95% 아세토니트릴 : 16분구배 ) 로정제하여 3-(1-((3,5-디메틸이속사졸-4-일 ) 메틸 )-1H-피라 졸-4-일 )-5-( 하이드록시메틸 ) 이미다졸리딘-2,4-디온을백색고형물 (60 mg, 25%) 로서얻었다. 1 H NMR (CDCl 3, 400 MHz): δ(s, 3H), 2.40(s, 3H), (m, 1H), (d, J=4Hz, 2H), (t, J=4Hz, 1H), 5.03(s, 2H), 6.68(bs, 1H), 7.87(s, 1H), 7.99(s, 1H). 표제화합물은 ht2r08 쓴맛수용체를억제하는것을보여주었고 3 μm 의 IC 50 을가졌다

213 [1333]

214 [1334]

215 [1335]

216 [1336]

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218 [1338]

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224 [1344]

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229 [1349]

230 [1350]

231 [1351]

232 [1352]

233 [1353] [1354] [1355] 실시예 11. ht2r8 은 ht2r43 및 ht2r44 유전자의 " 비-미각감별사 (non-taster)" 버전 (version) 인사람에대한사카린의쓴맛의원인이된다도 6은 ht2r43, ht2r44 및 ht2r8 의변이체를발현시키는형질감염된세포에서수용체활성에대한사카린의효과및투여에따른관계를보여주고있다. ht2r8 은 " 미각감별사 (taster)" ht2r43-w35 및 ht2r44-w35 대립유전자보다시험관내분석에서사카린에덜반응하지만, " 비-미각감별사 " ht2r43-s35 및 ht2r44-r35 대립유전자보다더반응한다. Pronin 등, Curr. Biol. 17: (2007). " 미각감별사 " 대립유전자 (ht2r43-w35 및 / 또는 ht2r44-w35) 를갖는 5개의개체및 " 비-미각감별사 " 대립유전자 (ht2r43-s35 및 ht2r44-r35) 를갖는 5개의개체를유전자형분석으로선택했다. 각대상체에 6쌍의용액을제공하고, 1쌍의샘플중어떤것이더쓴맛인지를결정했다. 표 8에보여진결과에따르면, ht2r8 블록커 (blocker) Cpd-D 는 ht2r43 및 ht2r44 의 " 비-미각감별사 " 대립유전자를갖는사람에대해사카린의쓴맛을감소시키고, 그유전자의 " 미각감별사 " 대립유전자를갖는사람에대해서는효과를갖지않는다. 표 8 [1356] [1357] [1358] 본발명에의해제공되고 / 되거나본발명의방법에사용하기에적합한다른예시적인화합물은하기화학식의 화합물을포함한다. 첫번째측면에서, 화학식 (I) 의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N- 옥사이드를제공한다 :

234 [1359] [ 화학식 I] [1360] [1361] [1362] [1363] [1364] [1365] 상기화학식에서, Ar 1 은 5원또는 6원아릴, 헤테로아릴또는사이클로알킬환이고 ; m 은 0, 1, 2 또는 3 이고 ; R 1 은 SO 2 ; C=O; C=S; 또는 C=NOR 4 이고 ; X 는수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 으로이루어진군으로부터선택되고 ; [1366] 각 R 1 ' 은수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아 실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 으로이루어진군으로부터독립적으로선택 되거나 ; 또는 [1367] [1368] X 및 / 또는적어도하나의 R 1 ' 는이들이결합되는원자와함께아릴, 치환된아릴, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된사이클로알킬, 사이클로헤테로알킬또는치환된사이클로헤테로알킬환을형성하고, 여기서, 상기환은다른아릴, 치환된아릴, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된사이클로알킬, 사이클로헤테로알킬또는치환된사이클로헤테로알킬환에임의융합되고 ; R 4 내지 R 8 는수소, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬및치환된헤테로아릴알킬로이루어진군으로부터 독립적으로선택되거나, 또는 R 5 및 R 6, R 6 및 R 7, R 7 및 R 8, 는이들이결합되는원자와함께사이클로헤테로알 킬또는치환된사이클로헤테로알킬환을형성하고 ; [1369] [1370] [1371] [1372] A 및 B 는수소, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬로이루어진군으로부터독립적으로선택되고 ; b 는 0, 1, 또는 2 이다. 두번째측면에서, 화학식 (II) 의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N-옥사이드를제공한다 : [ 화학식 II] [1373] [1374] [1375] [1376] 상기화학식에서, Ar 1, Ar 2 및 Ar 3 는독립적으로 5 원또는 6 원아릴, 헤테로아릴, 또는사이클로알킬환이고 ; m 은 0, 1, 2 또는 3 이고 ;

235 [1377] [1378] [1379] n 및 p 는독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4 이고 ; r 및 t 는독립적으로 0,1 또는 2 이고 ; Y 및 Z 는 CR 6 R 7, C=O, C=S, C=NOR 6, O, NR 6, 및 S(O) b 로이루어진군으로부터독립적으로선택되고 ; [1380] [1381] R 1 은 SO 2, C=O, C=S, 및 C=NOR 4 로이루어진군으로부터선택되고 ; X 는수소, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아실, 헤테로알 킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터선택될수있고 ; [1382] X 는바람직하게는수소, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치 환된헤테로아릴알킬, CN, S(O) b R 6, CONR 6 R 7, -CO 2 R 6, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터선택된다. [1383] 각 R 1 ' 은수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아 실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되 고 ; [1384] 각 R 2 ' 은수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아 실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(OR 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되고 ; [1385] 각 R 3 ' 은수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아 실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되 거나 ; 또는 [1386] [1387] X 및 / 또는적어도하나의 R 1 ' 은이들이결합하고있는원자와함께아릴, 치환된아릴, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된사이클로알킬, 사이클로헤테로알킬또는치환된사이클로헤테로알킬환을형성하고, 여기서환은다른아릴, 치환된아릴, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 사이클로알킬, 치환된사이클로알킬, 사이클로헤테로알킬또는치환된사이클로헤테로알킬환에임의로융합되고 ; R 4 내지 R 8 은독립적으로수소, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬또는치환된헤테로아릴알킬이거나, 또는 R 5 및 R 6, R 6 및 R 7, R 7 및 R 8 은이들이결합하고있는원자와함께사이클로헤테로알킬또는치환된사이 클로헤테로알킬환을형성하고 ; [1388] b 는 0, 1, 또는 2 이다

236 [1389] [1390] 다른측면에서, 본발명은화학식 (III) 의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N- 옥사이드를 제공한다 : [ 화학식 III] [1391] [1392] [1393] [1394] [1395] [1396] 상기화학식에서, Ar 1, Ar 2 및 Ar 3 은독립적으로 5원또는 6원아릴, 헤테로아릴, 또는사이클로알킬환이고, Ar 2 및 Ar 3 는임의로제외될수있고 ; m 은 0, 1, 2 또는 3 이고 ; n 및 p 는독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4 이고 ; 각 R 1 ' 은수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되 고 ; [1397] 각 R 2 ' 은수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아 실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되 고 ; [1398] 각 R 3 ' 은수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아 실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되 고 ; [1399] R 5 내지 R 8 은독립적으로수소, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 헤테로알 킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬또는치환된헤테로아릴알킬이거나, 또는 R 5 및 R 6, R 6 및 R 7, R 7 및 R 8 은이들이결합하고있는원자와함께사이클로헤테로알킬또는치환된사이 클로헤테로알킬환을형성하고 ; [1400] [1401] b 는 0, 1, 또는 2 이다. 또다른측면에서, 본발명은하기화학식의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N- 옥사이드를제공한 다 :

237 [1402] [1403] 또다른측면에서, 본발명은하기화학식의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N- 옥사이드를제공한 다 : [1404] [1405] 또다른구현예에서, 본발명은하기화학식의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N- 옥사이드를제공 한다 : [1406] [1407] [1408] 관련측면에서, 본발명은하기화학식 (IV) 의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N- 옥사이드를제공 한다 : [ 화학식 IV] [1409] [1410] [1411] [1412] [1413] [1414] 상기화학식에서, Ar 4 및 Ar 5 은독립적으로 5원또는 6원아릴또는헤테로아릴환이고 ; W 는 CR 6 R 7, C=O, C=S; C=NOR 6 ; O, NR 6, S, SO, SO 2, 및 (CH 2 ) n 으로이루어진군으로부터선택되고 ; n 은 0, 1, 2, 또는 3 이고 ; G 는 CR 6 R 7, C=O, C=S, C=NOR 6, 및 S(O) b 로이루어진군으로부터선택되고 ; [1415] R 20 은수소, 아릴알케닐, 헤테로아릴알케닐, 아릴알킬, 헤테로아릴알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알킬, 알콕시 - 알킬, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 및치환된유도체로이루어진군으로부터선택되고 ;

238 [1416] R 21 은아릴알케닐, 헤테로아릴알케닐, 아릴알킬, 헤테로아릴알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알킬, 알콕시 - 알킬, 알케 닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 및치환된유도체로이루어진군으로부터선택되고 ; [1417] R 6 및 R 7 은수소, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 헤테로알킬, 치환된헤 테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬또는치환된헤테로아릴알킬로이루어진군으로부터 독립적으로선택되거나, 또는 R 6 및 R 7 은이들이결합하고있는원자와함께사이클로헤테로알킬또는치환된 사이클로헤테로알킬환을형성하고 ; [1418] [1419] [1420] b 는 0, 1, 또는 2 이다. 다른관련측면에서, 화학식 (V) 의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N- 옥사이드를제공한다 : [ 화학식 V] [1421] [1422] [1423] [1424] [1425] 상기화학식에서, Ar 4 및 Ar 5 은독립적으로 5원또는 6원아릴또는헤테로아릴환이고 ; n 은 0, 1, 2, 또는 3 이고 ; R 21 은아릴알케닐, 헤테로아릴알케닐, 아릴알킬, 헤테로아릴알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알킬, 알콕시 - 알킬, 알케 닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 및치환된유도체로이루어진군으로부터선택되고 ; [1426] [1427] [1428] R 35 는수소, 알킬, 및치환된알킬로이루어진군으로부터선택된다. 추가구현예에서, 본발명은화학식 (VI) 의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N-옥사이드를제공한다 : [ 화학식 VI] [1429] [1430] [1431] 상기화학식에서, R 30 은아릴알케닐, 헤테로아릴알케닐, 아릴알킬, 헤테로아릴알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알킬, 알콕시 - 알킬, 알케 닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 및치환된유도체로이루어진군으로부터선택되고 ; [1432] [1433] R 35 는수소, 알킬, 및치환된알킬로이루어진군으로부터선택된다. 한층추가적인구현예에서, 본발명은하기구조의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N- 옥사이드를 제공한다 : [1434]

239 [1435] [1436] [1437] [1438] 상기화학식에서, 각 R 은독립적으로 Cl, MeO, CN, EtO, OH, Me, -SO 2 Me, F, 또는 H 이고, n 은 0, 1, 2, 3 또는 4 이다. 또다른구현예에서, 본발명은하기구조의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N-옥사이드를제공한다 : [1439] [1440] [1441] [1442] [1443] 상기화학식에서, 각 R 은독립적으로 MeO 또는 OH 이고, n 은 0, 1, 2, 3 또는 4 이다. 또다른구현예에서, 본발명은하기구조의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N-옥사이드를제공한다 : [1444] [1445] [1446] 상기화학식에서, R 은 H, Me, Et, OCOMe, CH 2 OH, OMe, 또는 Ph 이다. 또다른구현예에서, 본발명은하기구조의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N- 옥사이드를제공한 다 :

240 [1447] [1448] 또다른구현예에서, 본발명은하기구조의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N- 옥사이드를제공한 다 : [1449] [1450] 또다른구현예에서, 본발명은하기구조의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물또는 N- 옥사이드를제공한 다 :

241 [1451] [1452] 또다른구현예에서, 본발명은하기구조의화합물을제공한다 : [1453] [1454] 하나의측면에서, 본발명은하기화학식의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물, N- 옥사이드, 또는프로드 러그에관한것이다 : [1455] [1456] [1457] [1458] [1459] 상기화학식에서, Ar 6 및 Ar 7 는서로독립적으로동일또는상이한 5원또는 6원아릴기또는 5원또는 6원헤테로아릴기이고 ; Alk 는헤테로원자에의해임의로방해된알킬기이고 ; R 36 및 R 37 는서로독립적으로동일또는상이한 H 또는알킬이거나, R 36 및 R 37 는이들이부착되어있는원자와 함께임의치환된 5 원또는 6 원헤테로사이클을형성하고 ; [1460] R 38 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된헤테로사이클 로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된아릴아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴아 미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치 환또는비치환된헤테로아릴알킬, 또는할로알킬이다. [1461] [1462] 하나의측면에서, 본발명의화합물은 5원헤테로사이클을함유한다. 하나의구현예에서, 5원헤테로사이클은히단토인또는치환또는비치환된사이클릭우레아이다. 하나의구현예에서, 히단토인은하기화학식의히단토인또는이의염, 수화물, 용매화물, N-옥사이드또는프로드러그이다 : [1463]

242 [1464] [1465] [1466] [1467] 상기화학식에서, Ar 6 및 Ar 7 은서로독립적으로동일또는상이한 5원또는 6원아릴기또는 5원또는 6원헤테로아릴기이고 ; Alk 는헤테로원자에의해임의로방해된알킬기이고 ; R 38 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된헤테로사이클 로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된아릴아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴아 미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치 환또는비치환된헤테로아릴알킬, 또는할로알킬이고 ; [1468] R 39 및 R 40 은서로독립적으로동일또는상이한 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬 알킬, 치환또는비치환된헤테로사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된아릴아미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴알킬아미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치환또는비치환된헤테로아릴알킬, 할로알킬이거나, 또는 R 39 및 R 40 는이들이부착되어있는탄소원자와함께 C=O 기또는치환또는비치환된알케닐기를형성한다. [1469] 다른측면에서, 본발명의화합물은우라졸인 5 원헤테로사이클을함유한다. 하나의구현예에서, 우라졸은하 기화학식의우라졸또는이의염, 수화물, 용매화물, N- 옥사이드또는프로드러그이다 : [1470] [1471] [1472] [1473] [1474] 상기화학식에서, Ar 6 및 Ar 7 은서로독립적으로동일또는상이한 5원또는 6원아릴기또는 5원또는 6원헤테로아릴기이고 ; Alk 는헤테로원자에의해임의로방해된알킬기이고 ; R 38 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된헤테로사이클 로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된아릴아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴아 미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치 환또는비치환된헤테로아릴알킬, 또는할로알킬이고 ; [1475] R 41 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된헤테로사이클 로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된아릴아미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴알킬아미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치환또는비치환된헤테로아릴알킬, 또는할로알킬이다. [1476] 다른측면에서, 본발명의화합물은 6 원헤테로사이클을함유한다. 하나의구현예에서, 6 원헤테로사이클은하 기화학식의 6 원헤테로사이클또는이의염, 수화물, 용매화물, N- 옥사이드또는프로드러그이다 : [1477] [1478] [1479] 상기화학식에서, R 38 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된헤테로사이클 로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된아릴아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴아 미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치

243 환또는비치환된헤테로아릴알킬, 또는할로알킬이고 ; [1480] R 42, R 43, R 44, R 45, 및 R 46 은서로독립적으로동일또는상이한 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환 된사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤 테로아릴, 치환또는비치환된헤테로아릴알킬이거나, 또는 R 42 및 R 43, 또는 R 45 및 R 46 은이들이부착되어있는 탄소원자와함께 C=O 기를형성한다. [1481] 또다른측면에서, 본발명은하기화학식의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물, N- 옥사이드또는프로드 러그에관한것이다 : [1482] [1483] [1484] [1485] 상기화학식에서, Alk 는헤테로원자에의해임의로방해된알킬기이고 ; M 1 은 N 또는 CR 49 이고, 여기서 R 49 는 H 또는치환또는비치환된알킬이고 ; [1486] [1487] M 2 은 N 또는 CR 50 이고, 여기서, R 50 는 H 또는치환또는비치환된알킬이고 ; R 36 및 R 37 은서로독립적으로동일또는상이한 H, 알킬이거나, 또는 R 36 및 R 37 는이들이부착되어있는원자 와함께임의치환된 5 원또는 6 원헤테로사이클을형성하고 ; [1488] R 38 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된헤테로사이클 로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된아릴아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴아 미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치 환또는비치환된헤테로아릴알킬, 또는할로알킬이고 ; [1489] R 47 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된알콕시, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된 아릴알킬, 또는할로이고 ; [1490] R 48 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된알콕시, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된 아릴알킬, 또는할로이다. [1491] 또다른측면에서, 본발명은하기화학식의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물, N- 옥사이드또는프로드 러그에관한것이다 : [1492] [1493] [1494] [1495] 상기화학식에서, Alk 는헤테로원자에의해임의로방해된알킬기이고 ; T 1 는 C=O 이고, Q 는 CR 51 R 52 또는 NR 51 이고, 여기서, R 51 및 R 52 은서로독립적으로동일또는상이한 H, 치환 또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된헤테로사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된아릴아미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴알킬아미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치환또는비치환된헤테로아릴알킬, 할로알킬이거나, 또는 R 51 및 R 52 는이들이부착되어있는탄소원자와함께 C=O 기또는치환또는비치환된알케

244 닐기를형성하고 ; [1496] M 1 은 N 또는 CR 49 이고, 여기서, R 49 는 H 또는치환또는비치환된알킬이고 ; [1497] [1498] M 2 은 N 또는 CR 50 이고, 여기서, R 50 는 H 또는치환또는비치환된알킬이고 ; R 38 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된헤테로사이클 로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된아릴아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴아 미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치 환또는비치환된헤테로아릴알킬, 또는할로알킬이고 ; [1499] R 47 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된알콕시, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된 아릴알킬, 또는할로이고 ; [1500] R 48 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된알콕시, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된 아릴알킬, 또는할로이다. [1501] 또다른측면에서, 본발명은하기화학식의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물, N- 옥사이드또는프로드 러그에관한것이다 : [1502]

245 [1503]

246 [1504]

247 [1505] [1506] 또다른측면에서, 본발명은하기화학식의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물, N- 옥사이드또는프로드 러그에관한것이다 :

248 [1507] [1508] 또다른측면에서, 본발명은화학식 ( 여기서, R 56, R 57, 및 Alk 는하기정의한바와같고, J 는 이탈기이다 ) 의화합물을화학식 ( 여기서, M 1 및 M 2 는하기정의한바와같다 ) 의화합물과반응시켜 NO 2 기를갖는화학식의화합물을얻고 ; [1509] NO 2 기를환원시켜서 NH 2 기를갖는화합물을얻고 ; [1510] NH 2 기를갖는화합물을화학식 ( 여기서, J 2 는이탈기이고, T 2 및 R 53 는하기정의한바와같다 ) 의 화합물과반응시키는것을포함하는, 하기화학식의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물, N- 옥사이드또는 프로드러그의제조방법에관한것이다 :

249 [1511] [1512] [1513] [1514] [1515] 상기화학식에서, Alk 는헤테로원자에의해임의로방해된알킬기이고 ; T 2 는 C=S, C=O, 또는 S(O) 2 이고 ; R 53 은치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치환또는 비치환된아릴, 또는치환또는비치환된아릴알킬이고 ; [1516] M 1 은 N 또는 CR 54 이고, 여기서, R 54 는 H 또는치환또는비치환된알킬이고 ; [1517] [1518] M 2 은 N 또는 CR 55 이고, 여기서, R 55 는 H 또는치환또는비치환된알킬이고 ; R 56 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된알콕시, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된 아릴알킬, 또는할로이고 ; [1519] R 57 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된알콕시, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된 아릴알킬, 또는할로이다. [1520] 또다른측면에서, 본발명은화학식 ( 여기서, R 47, R 48, Alk, M 1, 및 M 2 는하기정의한 바와같다 ) 의화합물을가열하여 -CON 3 기를 -N=C=O 기로전환시킨다음, 화학식 ( 여기서, J 3 는이 탈기이고, R 38, R 51, 및 R 52 는하기정의한바와같다 ) 의화합물과반응시킴을포함하는, 하기화학식의화합물 또는이의염, 수화물, 용매화물, N- 옥사이드또는프로드러그의제조방법에관한것이다 : [1521] [1522] [1523] [1524] 상기화학식에서, Alk 는헤테로원자에의해임의로방해된알킬기이고 ; R 51 및 R 52 은서로독립적으로동일또는상이한 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬 알킬, 치환또는비치환된헤테로사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된아릴아미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴알킬아미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치환또는비치환된헤테로아릴알킬, 할로알킬이거나, 또는 R 51 및 R 52 는이들이부착되어있는탄소원자와함께치환또는비치환된알케닐기를형성하고 ; [1525] M 1 은 N 또는 CR 49 이고, 여기서, R 49 는 H 또는치환또는비치환된알킬이고 ;

250 [1526] [1527] M 2 은 N 또는 CR 50 이고, 여기서, R 50 는 H 또는치환또는비치환된알킬이고 ; R 38 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된헤테로사이클 로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된아릴아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴아 미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치 환또는비치환된헤테로아릴알킬, 또는할로알킬이고 ; [1528] R 47 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된알콕시, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된 아릴알킬, 또는할로이고 ; [1529] R 48 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된알콕시, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된 아릴알킬, 또는할로이다. [1530] 또다른측면에서, 본발명은화학식 ( 여기서, R 47, R 48, Alk, M 1, 및 M 2 는하기정의한 바와같다 ) 의화합물을가열하여 -CON 3 기를 -N=C=O 기로전환시킨다음, 화학식 ( 여기서, R 38 는하기 정의한바와같다 ) 의히드라진과반응시킴을포함하는, 하기화학식의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물, N- 옥사이드또는프로드러그의제조방법에관한것이다 : [1531] [1532] [1533] [1534] 상기화학식에서, Alk 는헤테로원자에의해임의로방해된알킬기이고 ; R 52 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된헤테로사이클 로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된아릴아미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴알킬아미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치환또는비치환된헤테로아릴알킬, 할로알킬이고 ; [1535] M 1 은 N 또는 CR 49 이고, 여기서, R 49 는 H 또는치환또는비치환된알킬이고 ; [1536] [1537] M 2 은 N 또는 CR 50 이고, 여기서, R 50 는 H 또는치환또는비치환된알킬이고 ; R 38 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된사이클로알킬알킬, 치환또는비치환된헤테로사이클 로알킬알킬, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된아릴아미도알킬, 치환또는비치환된헤테로아릴아 미도알킬, 치환또는비치환된아릴알킬, 치환또는비치환된아릴알콕시, 치환또는비치환된헤테로아릴, 치 환또는비치환된헤테로아릴알킬, 또는할로알킬이고 ; [1538] R 47 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된알콕시, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된 아릴알킬, 또는할로이고 ; [1539] R 48 은 H, 치환또는비치환된알킬, 치환또는비치환된알콕시, 치환또는비치환된아릴, 치환또는비치환된 아릴알킬, 또는할로이다

251 [1540] 또다른측면에서, 본발명은화학식 ( 여기서, J 는이탈기이다 ) 의화합물을화학식 의화합물과반응시켜서생성물을얻고 ; [1541] [1542] 상기생성물을화학식 ( 여기서, J 는이탈기이다 ) 의화합물과반응시킴을포함하는, 하기화학식의화합물또는이의염, 수화물, 용매화물, N-옥사이드또는프로드러그의제조방법에관한것이다 : [ 화학식 III] [1543] [1544] [1545] [1546] [1547] [1548] 상기화학식에서, Ar 1, Ar 2 및 Ar 3 은독립적으로 5원또는 6원아릴, 헤테로아릴, 또는사이클로알킬환이고, Ar 2 및 Ar 3 는임의로제외될수있고 ; m 은 0, 1, 2 또는 3 이고 ; n 및 p 는독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4 이고 ; 각 R 1 ' 은수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되 고 ; [1549] 각 R 2 ' 은수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아 실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되 고 ; [1550] 각 R 3 ' 은수소, 할로겐, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 아실, 치환된아 실, 헤테로알킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 치환된헤테로아릴알킬, CN, NO 2, OR 6, S(O) b R 6, NR 6 R 7, CONR 6 R 7, CO 2 R 6, NR 6 CO 2 R 7, NR 6 CONR 7 R 8, NR 6 CSNR 7 R 8, NR 6 C(=NH)NR 7 R 8, SO 2 NR 5 R 6, NR 5 SO 2 R 6, NR 5 SO 2 NR 6 R 7, B(OR 5 )(OR 6 ), P(O)(OR 5 )(OR 6 ), 및 P(O)(R 5 )(OR 6 ) 로이루어진군으로부터독립적으로선택되 고 ; [1551] R 5 내지 R 8 은독립적으로수소, 알킬, 치환된알킬, 아릴, 치환된아릴, 아릴알킬, 치환된아릴알킬, 헤테로알 킬, 치환된헤테로알킬, 헤테로아릴, 치환된헤테로아릴, 헤테로아릴알킬또는치환된헤테로아릴알킬이거나, 또는, R 6 및 R 7, R 7 및 R 8 는이들이결합하고있는원자와함께사이클로헤테로알킬또는치환된사이클로헤테로 알킬환을형성하고 ;

252 [1552] b 는 0, 1, 또는 2 이다. [1553] [1554] 키메릭 G 단백질및 ht2r 유전자및폴리펩타이드의서열 로돕신태그의단백질서열 : ( 서열번호 1) [1555] [1556] G16gust44 의단백질서열 : ( 서열번호 2) [1557] [1558] [1559] ht2r8 서열 : DNA-( 서열번호 3) [1560]

253 [1561] 단백질 -( 서열번호 4) [1562] [1563] [1564] ht2r14 서열 : DNA-( 서열번호 5) [1565] [1566] 단백질 -( 서열번호 6) [1567] [1568] 상기의상세한설명은본발명의몇개의구현예를기재하였지만, 상기의기재는단지설명하기위한것이지개 시된발명을제한하는것은아닌것으로이해해야한다. 본발명은단지하기의특허청구범위에의해제한되어

254 야한다. 도면 도면 1 도면

255 도면 3 도면

256 도면 5 도면 6 서열목록 <110> Senomyx, Inc. <120> Human T2R bitterness receptors and uses thereof <130> <150> US 60/957,129 <151> <150> US 61/047,187 <151> <160> 6 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211>