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서웅 궁
6 years ago
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1 Journal of the Korea Academia-Industrial cooperation Society Vol. 13, No. 11 pp , α-glucosidase 저해제생산균주, Gluconobacter oxydans CK-2165 의특성및배양최적화 김병국 1, 서민정 1, 박지수 1, 박장오 1, 서정우 1, 김진용 2, 이선영 2, 최종근 2, 서주원 2, 이인애 2* 1 종근당바이오 ( 주 ), 2 명지대학교환경생명정보학과 Characterization and Culture Optimization of an Glucosidase Inhibitor-producing Bacteria, Gluconobactor oxydans CK-2165 Byoung-Kook Kim 1, Min-Jung Suh 1, Ji-Su Park 1, Jang-Woo Park 1, Jung-Woo Suh 1, Jin-Yong Kim 2, Sun-young Lee 2, Jongkeun Choi 2, Joo-Won Suh 2 and In-Ae Lee 2* 1 CKDBiO Research Institute 2 Division of Bioscience and Bioinformatics, Myongji University 요약본논문은당뇨병치료제로알려진 Miglitol은 α-glucosidase 저해제로, 산업적으로포도당과에탄올아민으로부터세단계의화학및생물전환과정을거쳐합성되며. acetic acid bacteria에속하는 Gluconobactor oxydans (G. oxydans) 는불완전산화를통해 1-deoxy-1-(2-hydroxyethylamino)-D-glucitol (P1) 을 Miglitol의전구체인 6-(2-hydroxyetyl) amino-6- deoxy-α-l-sorbofuranose (P2) 로생물전환시키는균주이다. 본연구에서는토양으로부터스크리닝하여선발된고효율생물전환박테리아인 CK-2165의균주를동정하고최적의발효조건을탐색하고자하였다. 16S rdna 서열과계통수분석결과 CK-2165는 G. oxydans에속하는미생물임을결정하였으며, API 20E kits를사용하여선발된균주의탄소원이용성을실험한결과 glucose, mannose, inositol, sorbitol, rhamnose, sucrose, melibiose, amygdalin, arabinose와같은탄소원에대한이용성을가진균주임을확인하였다. 또한산업적생산을위하여배양조건을최적화하였고균체를이용하여생물전환반응에중요한요소들을조사하였다. 생물전환반응을위해사용되는균체는균성장단계중후기정지기 (late-stationary phase) 에수확한균체가가장높은활성을나타내었고생물전환반응에는 MgSO 4 가필수적임을확인하였다. Abstract Miglitol, a well-known therapeutic intervention agents for diabetes, exhibits competitive inhibitory activity against α-glucosidase and it is usually produced through three sequential steps including chemical and bioconversion processes. Gluconobactor oxydans (G. oxydans) belonging to acetic acid bacteria biologically, converts 1-deoxy-1 -(2-hydroxyethylamino)-D-glucitol (P1) into a key intermidiate, 6-(2-hydroxyetyl) amino-6-deoxy-α-l-sorbofuranose (P2) by incomplete oxidation. In this study, we identified and optimized fermentation conditions of CK-2165, that was selected in soil samples by comparing the bioconversion yield. CK-2165 strain was found to be closely related to G. oxydans based on the result of phylogenetic analysis using 16S rdna sequence. Utilization of API 20 kits revealed that this strain could use glucose, mannose, inositol, sorbitol, rhamnose, sucrose, melibiose, amygdalin and arabinose as carbon sources. The culture conditions were optimized for industrial production and several important factors affecting bioconversion rate were also tested using mycelial cake. Cell harvested at the late-stationary phase showed the highest bioconversion yield and MgSO 4 was critically required for the catalytic activity. Key Words : Miglitol, Bioconversion, Gluconobactor oxydans, α-glucosidase inhibitor, Culture condition 본논문은농촌진흥청차세대바이오그린 21 연구과제 (No. PJ ) 로수행되었음. * Corresponding Author : In-Ae Lee Tel: rheeinae@mju.ac.kr 접수일 12년 10월 08일수정일 12년 10년 31일게재확정일 12년 11월 08일 5179

2 한국산학기술학회논문지제 13 권제 11 호, 서론 Acetic acid bacteria에속하는 Gluconobacter oxydans[1] 의세포막에존재하는탈수소효소들은 co-factor로서 pyrroloquinoline quinone (PQQ) 을사용하며다양한당류와알코올류들을불완전하게산화하는특징을가지고있다 [2]. 또한 quinoprotein glucose와 quinoprotein glycerol 탈수소효소들은 D-gluconate, D-mannitol, D-sorbitol등 polyols들을산화시킨다 [3-4]. 이와같이편성통기성의 alpha proteo bacteria인 acetic acid bacteria는독특한산화적능력을가지고있으며특히 ethanol을 acetate로불완전하게산화시키는능력은역사적으로식초생산에이용되었다. 최근, acetic acid bacteria는 vitamin C 합성을위한 L-sorbose 생산과제 2형당뇨병치료제인 miglitol의합성을위한전구체인 6-amino-L-sorbose 생산과정의생체촉매제로이용되고있다 [5-6]. Miglitol은 Bayer사에의해개발된 α-glucosidase inhibitor로 1996년 FDA승인을얻었으며, 현재제 2형당뇨병치료를위해 Glyset' 이라는상품명으로판매되고있다 [7]. α-glucosidase inhibitor에속하는것으로는 acarbose, voglibose, miglitol 등이있으며, miglitol은생물전환된 6-(2-hydroxyetyl) amino-6-deoxy-α-l-sorbofuranose (P2) 로부터수소화반응및 ring closure 과정을통해최종합성된다 [8]. 본연구에서는한국내다양한지역에서수집한토양샘플을사용하여 1-deoxy-1-(2-hydroxyethylamino) -D-glucitol (P1) 으로부터 P2로의생물전환활성을비교하여가장우수한생물전환활성을나타내는균주를선발하여 G. oxydans CK-2165라고명명하였고, 균체배양및생물전환효율을높이기위한최적화연구를진행하였다 [9]. 2. 재료및방법 2.1 분리균주의동정 선발된균 CK-2165의형태적관찰을위해서는그람염색과포자염색을실시하였으며, 배양균체현탁액을 API 20E (Biomereux사, France) kits에제조사의지침에따라접종하고 37 에서배양하면서 1일과 2일째각각관찰하여탄수화물이용성과생화학적특성을판별하였다. 분리균의 16S rdna 유전자염기서열을분석하기위해서분리균의총염색체 DNA를주형으로하고, 세균의 16S rdna 유전자의보존적지역의염기서열 16S-27F ; 5'-AGAGTT TGATCCTGGCTCAG-3' 와 16S-1492R ; 5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3' 을 primer로사용하여중합효소연쇄반응 (PCR) 을실시하였다. 증폭된 PCR 산물을정제하여 ABI PRISM Big Dye terminator cycle sequencing kit와 373A automatic DNA sequencer (Perkin Elmer Co., USA) 를사용하여염기서열을결정하고이를 NCBI database와 Blast 프로그램으로비교분석하였다. 2.2 균주배양을위한배지조성액체종균배양을위한배지조성으로는 glucose 10 g/l, yeast extract 20 g/l, D-sorbitol 100 g/l, K 2HPO 4 10 g/l를사용하였고, 본배양을위한배지조성으로는 yeast extract 20 g/l, D-sorbitol 100 g/l, K 2HPO 4 5 g/l, KH 2PO 4 5 g/l, polyester antiform 0.3 g/l를사용하였다. 2.3 배양조건 균주조제고체배지를분주한평판배지에적당한농도로희석한균주현탁액을도말하여 28 에서 3일간배양한후단일 colony를무균적으로선발하여사면배지에도말하고 3일간배양한다음 20% glycerol 용액에현탁하여 -70 초저온냉장고에보관후실험에사용하였다 액체배양종균배양의경우 500 ml삼각 flask에종균배양용액체배지를 100 ml씩분주하여균주현탁액을 1% (v/v) 가되도록접종하고 28 에서 200 rpm으로 시간동안진탕배양한다음본배양에사용하였다. 본배양의경우는 500 ml 삼각 flask에본배양배지를 100 ml씩분주하여종균배양액을 5% (v/v) 로접종하고, 28, 200 rpm으로진탕배양기에서 20 24시간진탕배양하였다. 배양조건및배지최적화를위하여종균량, ph에따른영향, 당이용능, PPG 2000, D-sorbitol, yeast extracts, 인산염의영향에대한실험을각각실시하였다. 2.4 생물전환배양본배양액을원심분리하여정제수로 2회세척한다음 wet cell 을생물전환배양의생촉매로사용하였다. 생물전환배지는 P1 20 g/l, MgSO 4 5 g/l, polyester antiform 0.3 g/l가되도록제조하고 500 ml삼각 flask에 100 ml씩분주하였다. 121 에서 20분간살균한다음여기에 wet cell 3 g을첨가하고 28, 220 rpm의진탕배양기에서 4일동안생물전환반응을수행하였다. 5180

3 α-glucosidase 저해제생산균주, Gluconobacter oxydans CK-2165 의특성및배양최적화 2.5 UV-spectrophotometer에의한균체성장분석 1.7 ml effendorf tube에배양액 100 μl를넣고증류수 900 μl를첨가하여 14,000 rpm에서 10분동안원심분리한후상등액을제거한다음증류수 1,000 μl를첨가하여현탁한후 Shimadzu UV-1601PC를사용하여 600 nm에서흡광도를측정하였다. 의하나다. 종균의접종량을 5, 10, 15, 20% 농도범위에서실험한결과, 그림 2에서와같이 15% 에서가장좋은균성장을확인할수있었다. 3. 결과 3.1 균주의계통수 (phylogenetic tree) 분석 CK-2165 균주의 16S rdna 서열을결정하고이를바탕으로계통수분석을실시하였다. 분석된염기서열은총 1,377 bp 였고, NCBI 탐색결과 G. oxydans속균주들과높은상동성을보였다. 특히, G. oxydans DSM 3503 (NR026118) 와 G. roseus NBRC 3990 (NR041049) 에서 99.0% 이상의가장높은상동성을나타내었으며그외 G. oxydans NBRC (AB178433), NBRC (AB178432), 그리고 NBRC (AB178430) 균주들과도높은상동성을보여주어 CK-2165가 G. oxydans속균주라는결과를얻었다 ( 그림 1). [ 그림 2] CK-2165 발효에서종균접종량 (%) 에따른효과 [Fig. 2] Effect of inoculum size(%) on CK-2165 growth ph 에따른영향 미생물배양조건에있어중요한환경적요인중의하나이며미생물의성장과효소반응에영향을미치는것은 ph이므로배지의초기 ph의영향을조사하였다. 이를위해 1.5N HCl과 1N NaOH를이용하여 ph 로각각 0.5 간격으로보정한후 121 에서 20분간살균하여실험에사용하였다. 실험결과 ph 6.0과 ph 6.5에서가장우수한균성장을보였으며, ph 7.5에서는균성장저해가심하였다 ( 그림 3). 또한, 배양초기균성장속도는 ph 6.5보다 ph 6.0에서더빠른것을관찰할수있었다. [ 그림 1] G. oxydans CK-2165 의계통수 (phylogenetic tree) 분석 ( 눈금자막대는유전적거리표시 0.01). [Fig. 1] Phylogenetic tree based on 16S rdna gene sequence of G. oxydans CK Black line indicates genetic distance, 배양조건의최적화 종균량의영향종균량은균성장속도에영향을주는중요한요인중 [ 그림 3] CK-2165 발효에서초기 ph 에따른효과 [Fig. 3] Effect of initial medium ph on CK-2165 growth 3.3 배지조성최적화 PPG 2000 의영향 플라스크배양에서는거품발생이미미하였으나발효조에서는통기교반으로인하여다량의거품이발생하였기때문에이를방지하기위하여소포제를사용하는것 5181

한국산학기술학회논문지제 13 권제 11 호, 2012 이필요하였다. 발효조에서거품제거에충분한농도인것으로확인된 polyester계의 PPG2000 0.3 g/l가균의성장에어떠한영향을주는지파악하기위하여플라스크에서확인하는실험을진행하였다. 그림 4에보이는바와같이 0.3 g/l의 PPG2000을플라스크배지에첨가하더라도균의증식과 ph 변화양상에있어서차이를보이지않았다.

4 한국산학기술학회논문지제 13 권제 11 호, 2012 이필요하였다. 발효조에서거품제거에충분한농도인것으로확인된 polyester계의 PPG g/l가균의성장에어떠한영향을주는지파악하기위하여플라스크에서확인하는실험을진행하였다. 그림 4에보이는바와같이 0.3 g/l의 PPG2000을플라스크배지에첨가하더라도균의증식과 ph 변화양상에있어서차이를보이지않았다. 따라서 PPG2000을 0.3 g/l 농도로발효조에사용하여 scale-up 실험을진행하기로하였다 탄소원종류의영향탄소원종류별로초기성장을비교하기위하여대수증식기인배양 10시간에균체성장정도를비교한결과 sorbitol, fructose에서가장높은성장을나타내었다 ( 그림 6). 5 cell growth Cell growth(od 600nm) S o rb ito l G lu c o s e Fructose G lycerol M a lto s e S u c ro s e Type of Carbon Sources G a la c to s e [ 그림 6] CK-2165 발효에서탄소원에따른균체성장의차이 [Fig. 6] Effect of carbon sources on CK-2165 growth [ 그림 4] CK-2165 발효에서 PPG2000 농도에따른효과 [Fig. 4] Effect of PPG2000 on CK-2165 growth 당이용성확인 탄소원은미생물성장에영향을미치는요인중하나이므로 G. oxydans의탄소원이용성을 API 20E kits를이용하여조사한결과그림 5와같이 glucose, mannose, inositol, sorbitol, rhamnose, sucrose, melibiose, amygdalin, arabinose를이용할수있는것을확인하였다 Sorbitol 농도의영향탄소원중 sorbitol의농도가균체성장에미치는영향을살펴보기위하여 D-sorbitol을 10, 30, 50, 70, 100 g/l 의농도로첨가하여배양하였다. 그결과그림 7에서보는바와같이 30 ~ 70 g/l의농도에서는균성장정도가대체로양호하였으며농도에따른균성장의차이는없었다. 하지만 10 g/l의경우에만저조한균성장을나타내었다. [ 그림 5] API 20E 기질패널을사용한 CK-2165 의생리적작용에따른탄소원이용성 (+), 양성 ; (-), 음성 [Fig. 5] Availability of carbon sources by CK-2165 using API 20E kits system. + and - represented positive and negative availability of carbon sources, respectively [ 그림 7] CK-2165 발효에서 D-sorbitol 농도에따른효과 [Fig. 7] Effect of D-sorbitol concentration on CK-2165 growth Yeast extract의영향질소원으로많이사용되는 yeast extract를제조사를달리하여비교해본결과별다른차이를보이지않았다. 그리고 yeast extract의농도에따른변화를그림 8에서와 5182

5 α-glucosidase 저해제생산균주, Gluconobacter oxydans CK-2165 의특성및배양최적화 같이비교해본결과 5 g/l의경우에는균성장이매우저조하였으며, 25 g/l 첨가의경우에는 35 g/l와 50 g/l 로첨가한경우보다가장높은균성장을나타내었으므로 yeast extract의첨가량은 25 g/l로결정하였다. [ 그림 8] CK-2165 발효에서 yeast extract 농도에따른효과 [Fig. 8] Effect of yeast extract concentration on CK-2165 growth 인산염 (K 2HPO 4 와 KH 2PO 4) 의영향인산염이 G. oxydans 성장에미치는영향을조사하기위해기본배지에 K 2HPO 4 의농도를조절하여 28 에서배양하였다 ( 그림 9). 그결과 5 g/l K 2HPO 4 에서균체농도가가장높았으며, 전혀첨가하지않거나 10 g/l 첨가시에는비슷한성장패턴을보였으며 25 g/l 이상농도에서는오히려균성장이저해되어최적 K 2HPO 4 농도를 5 g/l로하였다 K 2HPO 4 를 5 g/l로첨가하였을때균성장이가장우수하였으므로 5 g/l K 2HPO 4 를첨가하는조건에서 KH 2PO 4 를 0, 5, 10, 25, 50 g/l의농도로첨가하여실험을진행하였다. KH 2PO 4 의경우첨가량이증가할수록균성장이저해되는결과를나타내어 KH 2PO 4 는 G. oxydans 성장을저해하는것으로나타났다 (data not shown). [ 그림 9] CK-2165 발효에서 K2HPO4 농도에따른효과 [Fig. 9] Effect of K2HPO4 concentration on CK-2165 growth 3.4 생물전환배양 MgSO 4 농도의영향 G. oxydans에의한생물전환에있어서전환활성은 cytoplasmic membrane의바깥표면에부착된탈수소효소에의해서이루어진다 [3]. 이과정에서전환효소의보조인자 (cofactor) 로작용하는것으로알려진 Mg ++ 의효과를확인하기위하여 MgSO 4 의첨가농도를 0 10 g/l로하여실험하였다 (Figure 10). MgSO 4 가첨가되지않았을경우에도전환반응은이루어지지만첨가되었을때의생물전환율보다낮았다. 가장높은전환율을나타내는농도는 0.5 g/l이었으며 5 g/l 이상이첨가될경우에는전환율이낮아지는경향을나타냈다. 이결과를통해 MgSO 4 는전환활성에영향을미치는중요한요인임을확인하였다. Bioconversion yield(%) bioconversion yield Concentration of MgSO 4 (g/l) [ 그림 10] CK-2165 생물전환배양에서 MgSO 4 농도에따른효과 [Fig. 10] Effect of MgSO 4 on bioconversion by CK 성장단계에따른전환활성 P1에서 P2로의생물전환에이용되는균체는성장배지에서배양하여배지성분을제거한후생물전환에이용한다. 생물전환율을높이기위해서는생물전환에이용되는균체량이많아야하며균체의전환활성이가장높은성장단계를파악하여야한다. Figure 11과같이성장단계별배양액을원심분리하여배양시간에따른균체의생물전환율을비교하였다. 배양 18시간까지의균체에서는약 60% 수준의전환율이확인되었으며 24시간배양된균체에서의생물전환율이약 70% 로가장높게나타났고 30시간의균체에서는다시활성이낮아졌다. 균체성장측면에서 24시간은후기정지기에해당하며균체성장과생물전환율을고려하여 24시간배양을최적균체회수시점으로하였다. 5183

6 한국산학기술학회논문지제 13 권제 11 호, 2012 [ 그림 11] CK-2165 생물전환배양에서균체배양시간에따른효과 [Fig. 11] Effect of different growth phase on bioconversion by CK 고찰 고효율생산균주를토양으로부터스크리닝하여선발된 CK-2165 박테리아는계통수분석결과, Gluconobacter oxydans으로결정되었으며발효조건을최적화한결과종균의접종량 15%, ph 6.0의배양조건에서가장좋은균성장을나타내었다한편, 발효조배양시첨가된소포제, PPG 2000으로인한균주성장의차이는나타나지않았으며, CK-2165는 glucose, mannose, inositol, sorbitol, rhamnose, sucrose, melibiose, amygdalin, arabinose을이용할수있고, 50 g/l sorbitol, 25 g/l yeast extract, 5 g/l K 2HPO 4 에서가장우수한균성장을보였다. 또한생물전환활성에있어서 MgSO 4 의역할이매우중요하며균체성장및전환활성을고려한최적균체회수시점은후기정지기이었다. 본연구결과최적의배양및생물전환조건에서 Gluconobacter oxydans CK-2165의최종생물전환율은약 80% 이었다 [10, 11]. References [1] Prust, C., M. Hoffermeister, H. Liesegang, A. Wiezer, W. F. Fricke, A. Ehrenreich, G. Gottschalk and U. Dippenmeier "Complete genome sequence of the acetic bacterium Gluconobacter oxydans", Nat. Biotechnol. 23: pp , [2] Hiroshi H,, Tokuma F., Tomotake M., Dai K., Toshiharu Y., Kazunobu M., Keiji S. "Disruption of the Membrane-Bound Alcohol Dehydrogenase-Encoding Gene Improved Glycerol Use and Dihydroxyacetone Productivity in Gluconobacter oxydans". Boisci. Biotechnol. Biochem., 74(7), pp , 2010 [3] Keliang, G. and W. Dongzhi. "Asymmetric oxidation by Gluconobacter oxydans", Appl. Microbiol. Biotechnol. 70: pp , [4] Adachi, O., D. Moonmangmee, H. Toyama, M. Yamada, E. Shinagawa and K. Matsushita. "New developments in oxidative fermentation", Appl. Microbiol. Biotechnol. 60: pp , [5] Dippenmeier, U., M. Hoffermeister and C. Prust. "Biochemistry and biotechnological applications of Gluconobacter strains", Appl. Microbiol. Biotechnol. 3: pp , [6] Landis, B. H., J. K. McLaughlin, R.Hereen, R. W. Grabner and P. T. Wang. "Bioconversion of N-butylglucamine to 6-deoxy-6-butylamino sorbose by Gluconobacter oxydans", Org. Process Res. Dev. 6 : pp , [7] Keliang, G., Dongzhi W. "Asymmetric oxidation by Gluconobacter oxydans", Appl. Microbiol. Biotechnol. 70(2) : pp , [8] Jie Bing Zhang, Xiao Li Zhang, Duan Hao Wang, Bin Xia Zhao and Gang He "Biocatalytic regioselective oxidation of N-hydroxyethl glucamine for synthesis of miglitol", Advanced Materials Research, : pp , [9] Osao A., Yoshitaka A., Emiko S., Toshiharu Y. and Kazumobu M. "Coversion of Quinate to 3-Dehydroshikimate by Ca-Alginate-Immobilized Membrane of Gluconobacter oxydans IFO 3244 and Subsequent Asymmetric Reduction of 3-Dehydroshikimate to Shikimate by Immobilized Cytoplasmic NADP-Shikimate Dehydrogenase". Boisci. Biotechnol. Biochem., 74(12), pp , [10] Hirohide T., Wichai S., Duangtip M., Osao A. and Kazunobu M. "Molecular Properties of Membrane-Bound FDA-Containing D-Sorbitol Dehydrogenase from Thermotolerant Gluconobacter frateurii Isolated from Thailand. Boisci. Biotechnol. Biochem., 69(6), pp , [11] Arun Gupta, Vinary K. S., Qazi G. N. and Kumar a. "Gluconobacter oxydans : Its Biotechnological Applications". J. Mol. Microbiol. Biotechnol. 3(3) pp

α-glucosidase 저해제생산균주, Gluconobacter oxydans CK-2165 의특성및배양최적화 이인애 (In-Ae Lee) [ 정회원 ] 박지수

1999년 11월 ~ 2009년 10월 : 경북대학교농업과학기술연구소연구교수 2009년 11월 ~ 현재 : 명지대학교농생명바이오식의약소재사업단연구교수 생명과학,

유기화학석사 ) 2009 년 3 월 ~ 현재 : 종근당바이오중앙연구소합성연구원 김병국 (Byoung-Kook Kim) [ 정회원 ] 미생물발효, 생물공학 1993 년 2

: 연세대학교생물소재공학박사과정 박장우 (Jang-Woo Park) [ 정회원 ] 미생물발효, 생물공학 1989 년 2 월 : 고려대학교대학원농화학과 ( 농학석사 )

종근당바이오연구소발효연구실장 서민정 (Min-Jung Suh) [ 정회원 ] 미생물발효, 생물공학 2009 년 2 월 : 경북대학교농업생명과학대학동물공학과 ( 농학학사

(Jung-Woo Suh) [ 정회원 ] 1984 년 2 월 : 서울대학교생물학과 ( 이학학사 ) 1986 년 2 월 : 서울대학교대학원생물학과 ( 이학석사 ) 1986

7 α-glucosidase 저해제생산균주, Gluconobacter oxydans CK-2165 의특성및배양최적화 이인애 (In-Ae Lee) [ 정회원 ] 박지수 (Ji-Su Park) [ 정회원 ] 1999년 2월 : 충남대학교식품공학과 ( 농학박사 ) 1987년 6월 ~ 1998년 12월 : 한국생명과학연구원선임연구원 1999년 11월 ~ 2009년 10월 : 경북대학교농업과학기술연구소연구교수 2009년 11월 ~ 현재 : 명지대학교농생명바이오식의약소재사업단연구교수 생명과학, 기능성식품 환경 / 화공 / 에너지 2007 년 2 월 : 강원대학교자연과학대학물리화학과군 ( 화학학사 ) 2009 년 2 월 : 강원대학교일반대학원화학과 ( 유기화학석사 ) 2009 년 3 월 ~ 현재 : 종근당바이오중앙연구소합성연구원 김병국 (Byoung-Kook Kim) [ 정회원 ] 미생물발효, 생물공학 1993 년 2 월 : 고려대학교농화학과 1995 년 2 월 : 고려대학교농화학과발효및생화학석사 1995 년 7 월 ~ 현재 : 종근당바이오중앙연구소연구원 2007 년 3 월 ~ 현재 : 연세대학교생물소재공학박사과정 박장우 (Jang-Woo Park) [ 정회원 ] 미생물발효, 생물공학 1989 년 2 월 : 고려대학교대학원농화학과 ( 농학석사 ) 2010 년 8 월 : 고려대학교대학원농화학과 ( 농학박사 ) 1989 년 4 월 ~ 2001 년 11 월 : 종근당연구소책임연구원 2001 년 11 월 ~ 현재 : 종근당바이오연구소발효연구실장 서민정 (Min-Jung Suh) [ 정회원 ] 미생물발효, 생물공학 2009 년 2 월 : 경북대학교농업생명과학대학동물공학과 ( 농학학사 ) 2009 년 2 월 : 경북대학교농업생명과학대학응용생명과학부동물공학전공 ( 농학석사 ) 2010 년 1 월 ~ 현재 : 종근당바이오중앙연구소연구원 서정우 (Jung-Woo Suh) [ 정회원 ] 1984 년 2 월 : 서울대학교생물학과 ( 이학학사 ) 1986 년 2 월 : 서울대학교대학원생물학과 ( 이학석사 ) 1986 년 5 월 ~ 2005 년 5 월 : CJ 종합기술원수석연구원 2005 년 5 월 ~ 2007 년 9 월 : 영진약품연구소부소장 2007 년 10 월 ~ 현재 : 종근당바이오중앙연구소연구소장 미생물발효, 생물공학 5185

한국산학기술학회논문지제 13 권제 11 호, 2012 이선영 (Sun-young Lee) [ 정회원 ] 서주원 (Joo-Won Suh) [ 정회원 ] 생명과학, 미생물

명지대학교환경생명정보학과석사과정재학중 1979 년 2 월 : 서울대학교농화학과 ( 학사 ) 1986 년 9 월 : ( 미국 ) 캘리포니아대학, 식품공학 ( 석사 )

1990 ~ 현재 : 명지대학교, 생명과학정보학부교수 2011 ~ 현재 : 농생명바이오식의약소재개발사업단사업단장 미생물학, 농업생명공학, 기능성식품, 의약소재개발 김진용

) 2008 년 3 월 ~ 현재 : 명지대학교환경생명정학과박사과정 천연물분리 / 정제및구조동정, NRPS/PKS 생합성 최종근 (Jongkeun Choi) [ 정회원 ]

8 한국산학기술학회논문지제 13 권제 11 호, 2012 이선영 (Sun-young Lee) [ 정회원 ] 서주원 (Joo-Won Suh) [ 정회원 ] 생명과학, 미생물 2010 년 2 월 : 신구대학식품영양학과졸업 ( 전문학사 ) 2010 년 8 월 : 평생교육진흥원식품조리학과졸업 ( 가정학사 ) 2011 년 3 월 ~ 현재 : 명지대학교환경생명정보학과석사과정재학중 1979 년 2 월 : 서울대학교농화학과 ( 학사 ) 1986 년 9 월 : ( 미국 ) 캘리포니아대학, 식품공학 ( 석사 ) 1989 년 9 월 : ( 미국 ) 캘리포니아대학, 미생물학 ( 박사 ) ~ 현재 : 명지대학교, 생명과학정보학부교수 2011 ~ 현재 : 농생명바이오식의약소재개발사업단사업단장 미생물학, 농업생명공학, 기능성식품, 의약소재개발 김진용 (Jin-Yong Kim) [ 정회원 ] 2006 년 2 월 : 명지대학교생명과학정보학부졸업 ( 이학사 ) 2008 년 2 월 : 명지대학교환경생명정보학과졸업 ( 이학석사 ) 2008 년 3 월 ~ 현재 : 명지대학교환경생명정학과박사과정 천연물분리 / 정제및구조동정, NRPS/PKS 생합성 최종근 (Jongkeun Choi) [ 정회원 ] 1993년 2월 : 서울대학교농화학과 ( 농학사 ) 1995년 2월 : 서울대학교농화학과 ( 농학석사 ) 2006년 8월 : 서울대학교화학부 ( 이학박사 ) 2011년 9월 ~ 현재 : 명지대학교농생명바이오식의약소재개발사업단조교수 구조생물학, 화학정보학, 기능성식품및화장품 5186

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- 2 - - 1 - - 2 - - 3 - - 4 - - 5 - [ 그림 1] 산수유 [ 그림 2] 더덕 - 6 - - 7 - sample [ 그림 3] 균분리를위한접종 - 8 - PCA PCA with inoculum Slide glass [ 그림 4] Slide culture 모식도 - 9 - - 10 - Nutrient Medium Paperdisk with Antibiotics