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민식 위
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1 Polymer(Korea), Vol. 39, No. 4, pp (2015) ISSN X(Print) ISSN (Online) 약물전달시스템으로서폴리에틸렌글리콜기반세바스산디아크릴레이트마이크로젤개발 김진구 홍익대학교바이오화학공학과 (2015 년 4 월 12 일접수, 2015 년 4 월 25 일수정, 2015 년 4 월 25 일채택 ) Development of Polyethylene Glycol-Sebacic Acid Diacrylate Microgels as a Drug Delivery System Jinku Kim Department of Bio and Chemical Engineering, Hongik University, Sejong , Korea (Received April 12, 2015; Revised April 25, 2015; Accepted April 25, 2015) 초록 : 본연구에서는생분해성고분자인 polyethylene glycol(peg) sebacic acid diacrylate(pegsda) 기반마이크로젤을합성하고이를이용하여약물전달시스템으로서의응용가능성에대하여살펴보았다. 먼저에멀젼중합을통하여 PEGSDA 마이크로젤을합성하고모델약물인 Texas red dextran(trd) 와 bone morphogenetic protein-2(bmp-2) 를이용하여마이크로젤내에함침하고그분포를측정한결과젤내에균일하게분포되는것을확인하였다. 약물방출속도를측정한결과기존의 PEGSDA 벌크젤에비하여초기방출속도를추가적으로감소시켜서방형용출이가능한것을확인하였다. 또한용출된 BMP-2 의생활성을측정하기위하여 W 세포를이용하여마이크로젤로부터용출된 BMP-2 의세포증식및 alkaline phosphatase(alp) 활성을측정하였다. 그결과 PEGSDA 마이크로젤은세포독성이발견되지않았으며용출된 BMP-2 의경우, 그활성을잘유지하는것을관찰하였다. 마지막으로마이크로젤표면에세포를배양한결과세포가잘부착되는것을확인함으로써세포전달시스템으로서의가능성도타진하였다. Abstract: In this study, polyethylene glycol (PEG) based microgels were fabricated and evaluated their potential as a drug carrier. Polyethylene glycol sebacic acid diacrylate (PEGSDA) microgels were synthesized using emulsion polymerization and Texas red dextran (TRD) or bone morphogenetic protein-2 (BMP-2) was incorporated into the PEGSDA microgels. The drugs were homogeneously distributed throughout the PEGSDA microgels. TRD and BMP-2 release profiles from the microgels showed much less initial burst release compared to the PEGSDA bulk gels, thus it is possible to achieve sustained release of drugs of interest using the microgels. The bioactivities of BMP-2 released from the microgels were measured by proliferation and alkaline phosphatase (ALP) activity of W (bone marrow stromal cell line) cells cultured in the presence of the released biomolecules. As a results, there were any detrimental effects on proliferation of the cells, and ALP activity of bone marrow stromal cells treated with BMP-2 released from PEGSDA microgels showed well maintained bioactivity of BMP-2. In addition, the bone marrow stromal cells were cultured on the surface of the microgels and the cells were well attached to the microgels, which shows another possible use of the microgels as a cell delivery system. Keywords: PEG based microgel, tissue engineering, regenerative medicine, drug delivery system. 서 최근선진국을중심으로활발하게연구되기시작한조직공학및재생의학은의 치의학 - 생명 - 공학의융합학문으로써궁극적으로는손상된인체조직이나장기를복구하고질병치료를통해삶의질의향상과생명을연장시키는데기여를할것으로예상되고있다. 1 따라서그중요성이날로더해가 론 To whom correspondence should be addressed. jnkukim@hongik.ac.kr 2015 The Polymer Society of Korea. All rights reserved. 고있으며, 인체조직이나장기복구를위해인체의성분과유사한성분으로구성된인공제품소재의제조를위한연구가활발하게진행되고있다. 2,3 특히, 2000 년대에들어서면서미국메드트로닉사 (Medtronic corp.) 가조직공학을기반으로개발한 인퓨즈 (INFUSE) 라는제품은, 골형성단백질 (rhbmp-2) 을함침한콜라젠스펀지를이용하여제조된것으로, 4 요추골용해 (lumbar spine fusion) 에임상적으로주로사용되어왔으며, 기존골재생및치료에사용된자가골이식 (autograft), 동종골이식 (allograft) 및합성골이식 (synthetic graft) 등의임상분야에다양하게사용되 677

2 678 김진구 어왔다. 5,6 하지만, 최근에수행된보고서에따르면, INFUSE를임상용도로사용시몇가지부작용과불안전성이있는것으로보고되었으며, 7 이에대한원인은아직명확히밝혀지지는않았지만, 임상효과를나타내기위하여다량의약물사용 (1 내지 3 mg/l) 되는점과콜라젠스펀지에약물이불균등하게분포되는점등이원인일것으로추측되고있다. 8,9 상기한바와같은문제점을해결하기위해서, 연구자들은폴리에틸렌글리콜 -디아크릴레이트(polyethylene glycol diacrylate, PEGDA) 와같은합성하이드로젤을제조하여이를약물전달체로사용하는기술내용을개시한바있다. 10 그러나합성하이드로젤인 PEGDA는생분해되지않을뿐만아니라기계적물성이약하고팽윤율이지나치게높아조직공학지지체나약물전달시스템으로의사용에제약이있다. 11,12 이에따라, 균일한분포로전달약물을포함하고, 약물방출속도를조절함으로써약물사용을최소화할수있으면서도체내에서생분해되는특성을나타내는새로운약물전달시스템을개발할수있는소재에대한연구가필요한실정이다. 이러한문제를해결하기위하여기존의 PEGDA에소수성분자인 sebacic acid와같은 dicarboxylic acid를첨가함으로써기계적강도를높이고고분자 backbone에에스터기를도입함으로써생분해성고분자를합성할수있었다. 12,13 한편, 마이크로입자형태로만들어진하이드로젤 ( 마이크로젤 ) 의약물전달시스템 (drug delivery system, DDS) 으로의개발이최근활발히이루지고있는데, 벌크젤과비교할때, 생활성분자의서방형용출및용출속도및용출량의조절이더용이하다는장점이있다고보고한바있다. 14,15 따라서본연구에서는기존에합성한 PEGSDA를기반으로미세입자 (microparticle, MP) 제조법의하나인에멀젼중합법을이용하여생분해성 PEGSDA 마이크로젤 (microgel) 을합성하고제조된 PEGSDA 마이크로젤의약물전달시스템으로서의가능성을분석하였다. 이를위하여 PEGSDA 고분자를먼저합성하고 water-in-oil(w-o) 에멀젼중합법을이용하여 PEGSDA 마이크로젤을제조하였다. 그러고마이크로젤에모델약물인 texas red dextran(trd) 및골재생에널리이용되는 recombinant human bone morphogenetic protein-2 (rhbmp-2) 을함침하여함침효율및용출속도를측정하였다. 그리고용출된 BMP-2의생활성을골수기질세포 (bone marrow stromal cells) 를통하여분석하였다. 또한 PEGSDA 마이크로젤의 DDS 성능을비교하기위하여대조군으로생체재료에널리사용되는 PLGA 마이크로입자를제조하고, 비교군으로 PEGSDA 벌크젤을합성하여성능을비교분석하였다. 실 험 재료. 모든화합물은 Sigma-Aldrich Co. 에서구입하였다. Figure 1. Chemcial structure of polyethylene glycol sebacic acid diacryate (PEGSDA). PEGSDA 생분해성고분자합성. PEGSDA(Figure 1) 를기존의알려진방법대로합성하였다. 12 먼저분자량 1000 Da에해당하는 PEG 단량체와 sebacoyl chloride를 triethylamine (TEA) 촉매하에반응시켜 (0 o C) PEG sebacic acid(pegs) 를합성한다. 그리고합성한 PEGS에 acrylolyl chloride를 PEGS에첨가하기위하여 PEGS를합성할때와마찬가지조건에서 PEGSDA를합성한다. 합성된 EPGSDA는 petroleum ether를이용하여침전시키고 rotary evaporator를이용하여건조시킨다. 최종적으로만들어진 PEGSDA를테트라하이드로퓨란 (tetrahydrofuran, THF) 용매하에서폴리스티렌 (polystryrene) 을기준고분자로하는 gel permeation chromatography(gpc, agilent) 를이용하여분자량과분자량분포를측정하였고, 합성된고분자를분석하기위하여 CDCl 3 용매 (tetramethylsilane, TMS를기준물질로사용 ) 에샘플을용해하여 proton nuclear magnetic resonance( 1 H NMR, 300 MHz, Jeol) spectrometer, 그리고 zinc selenide attenuated total reflection (ATR) 이장착되어있는 Fourier transform infrared spectroscopy(ftir, Nicolet) 을이용하여분석하였다. PEGSDA 마이크로젤및 PLGA 마이크로입자합성및분석. PEGSDA 마이크로젤을 water-in-oil(w-o) 방법을이용하여합성하였다. 16 PEGSDA 고분자 ( 수평균분자량 (M n ): 9500 Da, 질량평균분자량 (M w ): 12150, polydispersity index, PDI: 1.28) 를 PBS 용액에용해시키고 (25 wt%) redox 라디칼개시제 (0.3 M ammonium persulfate와 0.3 M ascorbic acid) 를 PEGSDA 수용액에넣고용해시킨다. 이후용액을미네랄오일 (1.5% sorbitan monooleate과 0.5% polyoxyethylene sorbitanmonooleate) 에한방울씩떨어뜨린다. 가교결합을교반기 ( 교반속도 300 rpm) 약 30분간진행시킨다. 이후만들어진 PEGSDA 마이크로젤을차가운아세톤으로세정하고동결건조시킨다. 비교군인 PLGA 마이크로입자는이중에멀젼중합방법 (water-in oil-in-water, W-O-W) 을사용하여합성하였다. 17 제조된마이크로입자의크기를분석하기위하여광학현미경 (axiovert) 을사용하여입자를촬영하고그크기를이미지분석프로그램 (analyze v7.0) 을통하여분석하였다. Drug Encapsulation 및 Drug Release 분석. 모델약물인 texas red dextran(trd) 와 rhbmp-2(wyeth) 각각 500 mg 과 50 µg을상온에서 1 ml PEGSDA 마이크로젤수용액에함침시킨다. 또한동일량의약물을비교군인 PLGA 마이크로입자에함침시킨다. 함침후입자내의약물분포를확인 폴리머, 제 39 권제 4 호, 2015 년

3 약물전달시스템으로서폴리에틸렌글리콜기반세바스산디아크릴레이트마이크로젤개발 679 하기위하여공초점현미경 (Zeiss LSM510, Carl Zeiss) 을통하여마이크로젤입자내의약물분포를측정하였다. 약물을함침시킨후용출속도를측정하기위하여약물이함침된수용액을 incubator(37 o C) 에넣고정해진시간동안 (TRD: 4 주, rhbmp-2: 3 주 ) 약물농도를 UV spectrophotometer (TRD 농도측정, Molecular Device) 와 ELISA(rhBMP-2 농도측정, R&D systems) 를이용하여측정하였다. 용출된 BMP-2 의생활성. PEGSDA 마이크로젤로부터용출된 BMP-2 의생활성을측정하기위하여생쥐로부터추출한골기조세포 (W-20-17) 를사용하였다. 먼저세포를 cells/ cm 2 의밀도로 24 well TCPS 에넣고 37 o C 에서 24 시간배양시킨다. 배양액을교체한후, BMP-2 를함침한마이크로입자가들어있는 transwell(6.5 mm diameter, 3.0 µm pore size, Corning) 을세포가배양되어있는배양용기상단에부착한다. 3 일후배양액을회수하고 DNA-free 탈이온수를이용하여배양용기를세척한후 -80 o C 에서보관한다. 마이크로입자가들어있는트렌스웰은즉시새로운배양용기 ( 세포가 24 시간배양되어있음 ) 로이동시킨다. 이과정을 21 일간반복한다. 배양된세포수를측정하기위하여세포수를계산할수있는세포내 DNA 량을 Picogreen DNA 정량 kit(molecular Probes) 를사용하여측정하였다. 한편, alkaline phosphatase (ALP) 활성은기존에알려진방법에의하여측정하였다. 18 먼저 20 µl 의알칼리작업버퍼와 80 µl 의세포용해액 (lysate), 그리고 100 µl 의기질용액을 96 well 플레이트에첨가한다. 플레이트를 37 o C 에서 1 시간동안저장후 100 µl 0.3 N NaOH 용액을첨가하여반응을종료시킨다. 각웰의흡광도를 405 nm 에서측정하고 ALP 활성을샘플내에존재하는단백질의총량으로환산한다. 세포용액에존재하는단백질총량은 Bradford 단백질정량법을이용하여측정하였다. 마이크로젤표면세포배양. 마이크로젤표면에세포를배양하기위하여먼저마이크로젤을 70% 에탄올을이용하여세척후 24 well 플레이트바닥에넣는다. 그리고 W 세포 (50000 cells/cm 2 ) 를투여한다. 배양 24 시간후마이크로젤표면에세포가부착되어있는지를확인하기위하여공초점현미경을통하여이미지를촬영하였다. 결과및토론 PEGSDA 고분자합성및분석. PEGSDA 합성결과 FTIR 스펙트럼을통하여 1730 cm -1 근처에서 ester 기특성피크가나타나는것을확인할수있었고 1 H NMR 분석결과 (Figure 2) 1~3 ppm 사이에서나타나는 sebacic acid 특성피크와 5.9, 6.2 및 6.4 ppm 에서나타나는 acrylate 특성피크를확인할수있었다. 따라서 PEGSDA 고분자가성공적으로합성되었음을알수있었다. PEGSDA 및 PLGA 마이크로젤합성및분석. PEGSDA Figure 2. Representative 1 H NMR spectrum of PEGSDA. 마이크로젤및 PLGA 마이크로입자를에멜젼방법으로합성한결과를 Figure 3(A) 와 (B) 에각각나타내었다. 그리고이들의평균입자크기및입자크기분포를 Figure 3(C) 와 (D) 에나타내었다. PEGSDA 와 PLGA 입자모두비슷한크기 (~85 µm) 를가지는것을알수있지만입자크기분포의경우, PEGSDA 는비교적작은입자 (>60 µm) 가 40% 가까이차지하는반면, PLGA 의경우, 중간크기의입자 ( µm) 가대부분을이루는것을알수있다 (Figure 3). 물론입자크기는가교결합하기전고분자용액의농도또는고분자분자량을조절함으로써변화를줄수있을것이다. 약물함침및용출속도분석. 합성한 PEGSDA 마이크로젤을약물전달시스템으로사용하기위하여모델약물 (TRD) 과실제골재생에임상용으로사용되는 rhbmp-2 를마이크로입자에각각함침하고, 약물함침의효율을측정한결과 PEGSDA 및 PLGA 마이크로입자모두 60% 이상의높은함침률을보이는것을알수있다 (Figure 4(A)). 모델약물인 TRD 와실제약물인 rhbmp-2 두약물간의함침효율은비슷하게나타나는것을알수있다. 또한 PEGSDA 벌크젤과비교한경우에도함침효율에는유의성이나타나지않았다. 한편, 약물의입자내분포를확인하기위하여모델약물 (TRD) 을 PEGSDA 마이크로젤에함침하여공초점현미경을이용하여 PEGSDA 마이크로젤이미지를측정하였다 (Figure 4(B)). 그결과, 입자전반에걸쳐고르게분포하는것을알수있었다. 따라서본연구에서제조한 PEGSDA 마이크로젤은기존약물시스템 ( 예 : absorbed collagen sponge, ACS) 의단점중의하나인약물의불균일분포를해결할수있으리라기대된다. 19 TRD 및 rhbmp-2 방출비교. TRD 및 rhbmp-2 를 PEGSDA 벌크젤및마이크로젤, 그리고대조군인 PLGA 마이크로입자에함침한후시간에따른방출속도를측정하였다 (Figure 5). Polymer(Korea), Vol. 39, No. 4, 2015

4 680 김진구 Figure 3. (A) Morphology of PEGSDA microgels; (B) PLGA microparticles; (C) particle size distribution of PEGSDA microgels; (D) PLGA microparticles. Figure 4. (A) Percent drug encapsulation efficiency of each drug carrier; (B) confocal microscopic image of TRD loaded PEGSDA microgels. Error bars represent means±standard deviation. Figure 5. Cumulative drug release (%) from (A) TRD; (B) rhbmp-2. Error bars represent means±standard deviation. 폴리머, 제 39 권제 4 호, 2015 년

5 약물전달시스템으로서폴리에틸렌글리콜기반세바스산디아크릴레이트마이크로젤개발 681 측정결과, TRD 의경우전반적으로 rhbmp-2 에비하여 initial burst release 가큰것을알수있다. 또한 PEGSDA 하이드로젤의경우기존에조직공학에서널리이용되는 PEGDA 하이드로젤에비하여팽윤율 (swelling ratio) 이낮고, 그결과초기방출속도를현저히감소시키는것을알수있는데, 12 본연구에서사용된 PEGSDA 마이크로젤을사용할경우, 초기방출속도를추가적으로감소시킬수있는것으로나타났다. 따라서생물학적활성 (bioactivity) 비교를통하여 PEGSDA 마이크로젤의우수성을입증할수있다면약물전달시스템으로서의가능성이매우클것으로기대된다. 용출된 BMP-2 의생활성. PEGSDA 마이크로젤로부터 3 일간격으로 21 일동안용출된 BMP-2 가생활성을유지하는지알아보기위하여 W 세포 ( 쥐골수기질세포 ) 를사용하였다. 20 W 세포의경우, 비교적빠른시간에 ALP 와같은골분화단백질을다량배출시킬수있는것으로알려져있다. 21 용출된단백질의생활성을비교하기위하여비교군으로 BMP-2 가함침된 PEGSDA 벌크젤과 PLGA 마이크로입자를사용하였으며또한대조군으로 TCPS 에서배양된세포를사용하였다. 생활성은세포증식 (proliferation) 과대표적인골분화단백질인 ALP 활성을측정하였고이를 BMP-2 가없는 TCPS 에서배양된세포의생활성으로표준화 (normalized) 하였다 (Figure 6). BMP-2 가존재하지않는 TCPS 에서자란세포와비교하였을때, 각각의전달시스템으로부터용출된 BMP-2 존재하에서자란세포의밀도가 %(TCPS: 100% 기준 ) 사이에있는것을알수있다. W 세포의경우, 배양 3 일경과후 TCPS 배양용기내에서거의완전히합류 (confluent) 하는것으로보인다. 각실험군의경우, 세포증식에있어서눈에보이는경향성이나통계학적유의성은전실험기간에걸쳐보이지않는것으로나타난다. 이는 PEGSDA 벌크젤의경우, in vitro 와 in vivo 환경에서생체적합성이있다고알려져있기때문에, 이를사용하여마이크로젤을제조한경우에도별다른 in vitro 의경우, 세포독성이나타나지않음을알수있다. 12,22 한편, ALP 활동성의경우, BMP-2 부재하에서배양된세포가생성하는 ALP 양보다각각의전달체로부터용출된 BMP-2 존재하에서배양된세포의경우, 현저하게많은양의 ALP 를생성하는것을볼수있다 (Figure 6(B)). 특히, PEGSDA 벌크젤의경우, 초기 9 일간의 ALP 생성량이다른실험군에비하여현저하게높은것을알수있는데이는앞에서보여준것처럼 PEGSDA 벌크젤로부터의 BMP-2 용출량이현저하게높은결과에서기인한다고사료된다. 또한각실험군으로부터용출된 BMP-2 존재하에서배양된세포가배출한 ALP 양이대조군과비교할때현저하게많은것을알수있으므로용출된 BMP-2 의생활성이잘유지되고있다고사료된다. 마지막으로 PEGSDA 마이크로젤의세포전달시스 Figure 6. (A) Periodic cell proliferation; (B) ALP activity of W cells on TCPS in the presence or absence of released BMP-2 from different carriers. Error bars represent means±standard deviation for n=4. 템으로서의가능성을타진하기위하여마이크로젤존재하에세포를배양하였다. 세포배양 24시간경과후마이크로젤입자표면에부착된세포를공초점현미경으로측정하였다 (Figure 7). 현미경이미지에서나타나는바와같이 PEGSDA 마이크로젤표면에다수의세포가부착되어있는것을알수있다. 이는이전연구에서살펴본바와마찬가지로 RGD 펩타이드와같은어떠한세포부착을위한표면처리없이도세포가부착되는것으로매우고무적인현상이라고할수있다. 일반적으로세포부착은생체재료가체내에도입될때, 혈청내에존재하는 fibronectin 또는 vitronectin과같은세포외기질단백질의흡착을통하여이루어지는데 23 PEG 기반물질의경우, 잘알려진친수성으로인하여표면처리없이세포부착이어려운것으로알려져왔다. 24 하지만, PEGSDA의경우고분자기본구조에존재하는소수성기 (sebacic acid) 의존재로인하여세포부착단백질의흡착을유도하여세포부착이가능한 Polymer(Korea), Vol. 39, No. 4, 2015

682 김진구 참고문헌 Figure 7. Microscopic image of W-20-17 cells cultured on PEGSDA microgels. 것으로사료된다.

6 682 김진구 참고문헌 Figure 7. Microscopic image of W cells cultured on PEGSDA microgels. 것으로사료된다. 12 물론추가적인연구를통하여 in vitro 및 in vivo 물성을좀더살펴보아야하겠지만, 본연구에서제조한 PEGSDA 마이크로젤의경우, BMP-2 와같은생활성분자나세포등의전달시스템으로가능성을보여준다고할수있겠다. 결 본연구에서는 PEGSDA 생분해성고분자를기반으로하여마이크로젤을제작하여약물전달시스템으로서의가능성을타진하여보았다. 에멀젼중합을통하여마이크로젤을합성하고모델약물인 TRD 와실제약물인 BMP-2 를함침한결과마이크로젤내에균일하게분포하는것을확인할수있었다. 또한용출속도를측정한결과, 지속가능한서방형용출을보이는것을관찰하였다. 그리고용출된 BMP-2 의생활성을세포증식과 ALP 활성을측정하여분석하였는데그결과 PEGSDA 마이크로젤이세포증식에세포독성과같은어떠한부정적영향을주지않는것을알수있었고용출된 BMP-2 또한그생활성을유지하는것으로보인다. 마지막으로마이크로젤표면에세포배양한결과 RGD 펩타이드와같은표면처리없이세포가잘부착되는것을확인하였다. 따라서 PEGSDA 마이크로젤을조직공학이나재생의학에필수적인약물이나세포전달시스템으로사용될수있을것으로보인다. 감사의글 : 본연구는홍익대학교신임교수연구지원비에의하여지원되었음. 론 1. L. G. Griffith and G. Naughton, Science, 295, 1009 (2002). 2. P. C. Bessa, M. Casal, and R. L. Reis, J. Tissue Eng. Regen. Med., 2, 1 (2008). 3. H. D. Zegzula, D. C. Buck, J. Brekke, J. M. Wozney, and J. O. Hollinger, J. Bone Joint Surg. Am., 79A, 1778 (1997). 4. A. S. Greenwald, S. D. Boden, V. M. Goldberg, Y. Khan, C. T. Laurencin, R. N. Rosier, and C. B. Implants, J. Bone Joint Surg. Am., 83A, 98 (2001). 5. Y. Khan, M. J. Yaszemski, A. G. Mikos, and C. T. Laurencin, J. Bone Joint Surg. Am., 90A, 36 (2008). 6. D. M. Smith, A. M. Afifi, G. M. Cooper, M. P. Mooney, K. G. Marra, and J. E. Losee, J. Craniofac. Surg., 19, 1315 (2008). 7. E. J. Carragee, E. L. Hurwitz, and B. K. Weiner, Spine J., 11, 471 (2011). 8. T. A. Einhorn, J. Bone Joint Surg. Am., 85A, 82 (2003). 9. M. C. Simmonds, J. V. Brown, M. K. Heirs, J. P. Higgins, R. J. Mannion, M. A. Rodgers, and L. A. Stewart, Ann. Intern. Med., 158, 877 (2013). 10. J. J. Mao, Biol. Cell, 97, 289 (2005). 11. J. L. Drury and D. J. Mooney, Biomaterials, 24, 4337 (2003). 12. J. Kim, K. W. Lee, T. E. Hefferan, B. L. Currier, M. J. Yaszemski, and L. Lu, Biomacromolecules, 9, 149 (2008). 13. J. Kim, M. J. Yaszemski, and L. Lu, J. Biomed. Mater. Res., 90, 1010 (2009). 14. S. V. Vinogradov, Curr. Pharm. Des., 12, 4703 (2006). 15. M. Dadsetan, K. E. Taylor, C. Yong, Z. Bajzer, L. Lu, and M. J. Yaszemski, Acta Biomater., 9, 5438 (2013). 16. J. Kim, M. J. Yaszemski, and L. C. Lu, Tissue Eng. Part C- Methods, 15, 583 (2009). 17. D. H. R. Kempen, L. C. Lu, X. Zhu, C. Kim, E. Jabbari, W. J. A. Dhert, B. L. Currier, and M. J. Yaszemski, J. Biomed. Mater. Res. Part A, 70A, 283 (2004). 18. D. H. R. Kempen, L. Lu, T. E. Hefferan, L. B. Creemers, A. Maran, K. L. Classic, W. J. A. Dhert, and M. J. Yaszemski, Biomaterials, 29, 3245 (2008). 19. R. Visser, P. M. Arrabal, J. Becerra, U. Rinas, and M. Cifuentes, Biomaterials, 30, 2032 (2009). 20. J. Kim, T. E. Hefferan, M. J. Yaszemski, and L. Lu, Tissue Eng., 15, 2299 (2009). 21. R. S. Thies, M. Bauduy, B. A. Ashton, L. Kurtzberg, J. M. Wozney, and V. Rosen, Endocrinology, 130, 1318 (1992). 22. J. Kim, M. Dadsetan, S. Ameenuddin, A. J. Windebank, M. J. Yaszemski, and L. C. Lu, J. Biomed. Mater. Res. Part A, 95A, 191 (2010). 23. A. S. Sawhney, C. P. Pathak, and J. A. Hubbell, Macromolecules, 26, 581 (1993). 24. J. A. Hubbell, Bio-Technology, 13, 565 (1995). 폴리머, 제 39 권제 4 호, 2015 년

Journal of Life Science 2011, Vol. 21. No μ μ

Journal of Life Science 2011 Vol. 21. No. 8. 1120~1126 ISSN : 1225-9918 DOI : http://dx.doi.org/10.5352/jls.2011.21.8.1120 μ μ μ α β Journal of Life Science 2011, Vol. 21. No. 8 1121 μ μ 1122 생명과학회지 2011,