대한엄상병리사회지 : 제 25 권 1 호 1993 Low Density Lipoprotein 의실측치와계산치에관한조사 서울의과학연구소서울임상병리검사센터 김언규, 정재련, 이경옥, 셔덕규, 이규범 Key wods : LDL, Calculated value, Determi

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진근 마
5 years ago
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1 대한엄상병리사회지 : 제 25 권 호 99 Low Density Lipoprotein 의실측치와계산치에관한조사 서울의과학연구소서울임상병리검사센터 김언규, 정재련, 이경옥, 셔덕규, 이규범 Key wods : LDL, Calculated value, Determinated value.. 서르르 '- 시약으로 Quantolip 침전시약을사용하였다. 이침전시약중에는 tris HCl buffer(ph 7.4) LDL 이동맥경화의발병에커다란원인의중에 dextran sulphate 가함유된것이다. 이것 하나인점은잘알려져있는사실이다. 그러나은혈청중의 HDL 과 VLDL 을침전시킨후상 HDL~holesterol 을위주로한연구가많이진청중의 LDL 을측정하는원리이다. 행되어왔고 LDL~holester 이측정은그연구가 HDL 만큼많지않다. m. 검사결과 본연구에서는 LDL 침전시약으로 LDL 을 실제측정한치와계산산출한치와비교를하 4 세이상대상인원의 ch 이 esterol 평균치는 고또한편문헌적조사를하여보았다 8. mg/dg ::!:::22. mg/dg(max 22, Min 2), triglyceride 는 6.mg/dg ::!:::7.4 mg/dg(max 97, II. 검사방법과대상 Min 9), HDL~holestero 치는 48.4::!:::.8 mg/ dg (Max 8, Min 2), 실제측정된 LDL~holes 서울의과학연구소에서 99 년 4 월에종합 terol 치는. mg/dg::!::: 2.7 mg/dg(max 58., 검진검사를받은사람중건강하다고판정된 4 세이상의남녀 ( 남자 77 명, 여자 76 명합계 25 명 ) 를대상으로 serum cholesterol ( enzyme 법 ), triglyceride( enzyme 법 ), HDL~holesterol (precipitation 과 enzyme 법 ), LDL~holester 이 ( 계산법 ), LDL~holesterol (precipitation 과 enzyme 법 ) 및 Lp(a) (precipitation 과 enzyme 볍 ) 를측정하여검토하였다. 이외 cardiac risk f actor 를 total cholesteo l/hdl~holesterol ratio 와 LDL~holestero l/hdl~hol esterol ratio 로구하 여보았다 (Table ). 한편 ch 이 esterol 치와 triglyceride 치가상승된 이상자 5 명에관해서도같은종목에한하여 조사하였다 (Table 2). LDL precipitation reagent B ) 는 Immuno AG Min 6. 이, 계산된 (TC - HDL-C - TG /5.Friedewald 등의계산식 ) LDL~holester이치는.7 mg/dg::!::: 9.6 mg/dg(max 55.2, Min 68.4), 및 Lp(a) 는 7.mg/dg::!:::2.mg/dg(Max 8., Min.) 를보였다. 또한 total cholestero l/hdl~holester 이 ratio 와 LDL~holestero l/hdl cholester 이 ratio 로산출한 cardiac risk f actor 는 Table. 과같다. 남녀별성적은남자대상인원 77 명의 cholester 이평균치 84. mg/dg ::!:::2.2 mg/dg(max 22, Min 2), triglyceride 6.mg/dg::!:::7.9 mg/dg(max 97, Min 9), HDL~holesterol 49. :i:.8mg/dfl(max 8, Min 2), 실제측정한 LDL~holesterol 치는 2.9 mg/ dg ::J: 9.8 mg/ dg (Max 58, Min 62), 계산된 LDL~holesterol 치 - 44-

2 Table. Serum lipids results for male and female adults (SCL Laboratory April 99.) Age T-Cho. TG. HDL 김. LDL-m. LDL--cal. LDL--caI2. LP(a). TC/HDL. Ms-Cal.. 뻐 --Ca. 2. Total Mean Std Max Min Male Mean Std Max Min Femal Mean Std Max Min Cardiac Risk Factors for adults(total cho l. /HDL 컨 ho l.) Cardiac Risk Factors for adults(ldl-cho l./hdl 킹 ho l.) T -cho : Total cholesterol TG : Triglyceride HDL-C : High density lipiprotein cholesrterol LDL-m or LDLms : Low density lipoprotein cholesterol, measured directly LDL-cal or LDLcal : Low density lipoprotein cholesterol calculated, Friedewald formula LDL 킨 al2 : Low density lipoprotein ch 이 esterol calculated, DeLong formula TC/HDL : Total ch 이 estero l/hdl-c hlesterol ratio Ms-Call or Meas-Ca : Measured LDL-cholesterol컨 alculated LDL(Friedewald formula) Ms-Cal2 : Measured LDL-킨 holesterol-c aculated LDL(DeLong formula) LDL/HDL: LDL-cholesterol/HDL-cholesterol ratio T able 2. Serum lipids results for high chol. & high TG subjects adults SCL Laboratory 99 July cases Age T.Chol. TG HDL-C LDLms LDLca Meas~al chol.hdl. LDL/HDL Mean Std Max Min Cardiac Risk Factors for high chol. & TG subject(tc/hdl) Cardiac Risk Factors for high chol. & TG subject(ldl/hdl)

$는 l. 7mg/d~ ::t 9.6mg/d~(Max 55, Min 68), 및 Lp(a) 는 7.5 mg/d~ 士 2. mg/d~(max 8., l\tin 이를보였다. 여자대상인원 76 명의 cholester 이평균치는 7. mg/d~ ::t 2.5 mg/d~(max 22, Min 이, triglyceride 6.mg/d~ ::t 6.$

3 는 l. 7mg/d~ ::t 9.6mg/d~(Max 55, Min 68), 및 Lp(a) 는 7.5 mg/d~ 士 2. mg/d~(max 8., l\tin 이를보였다. 여자대상인원 76 명의 cholester 이평균치는 7. mg/d~ ::t 2.5 mg/d~(max 22, Min 이, triglyceride 6.mg/d~ ::t 6.2mg/d~(Max 95, Min 9), HDL -c holester 이 46.8 ::t.7 mg/d~ (Max 8, Min 2), 실제 측정한 LDL-choester 이치는.mg/d~ ::t 2. 2mg/d~(Max 44, Min 6 이, 계산된 LDL-c holester 이치는 5.mg /d~ ::f:: 9.9 mg/d~(max 45, Min 68), 및 Lp(a) 는 6.8mg/dP ::t 2.2mg/d~(Max 8., Min.) 를보였다. 한편 total ch 이 estero l/hdl 컨 holester 이 rat.io 는전체대상에서.9 ::t.88 ( SD 범위 4.79 내 응용하게되었다고한다 (Friedewald). 우리들은 Friedwald 식을사용한계산치와실측치와의연관성을알아보기위하여본조사를실시하였으며, 차이가많이나는것은 Table 에서보듯이 LDL 이 -5 mg/dp 에서 ::f:: 2 mg/dp 까지도있으나일반적으로 - mg/d~ 에서 + mg/ dp 정도의범위내에서빈도가가장높아대략유사한측정치를나타내고, 상관계수 )'=.96 이었고, 회기식은 Y =.899X -6.25을보였다 (Fig. ). 한편 LDL 측정치와 LDL 계산식에의하여구한값과의차이에대한도표및상관도는 Table 과 Fig 및 Fig 4 와같다. 이그림에서나타내듯이 Friedewald 식은거의유사한치를보이므로계산식의사용은타당하다고생각되었다. 그러나 hypertriglyceridemia 의경 지.) 을보였고, 남자.9 ::t.9( lsd 범위 우에는 Table 4 와같이 2mg/dP 이상대상자 4.82 내지.2) 와여자.84 ::t.8( lsd 범위 4.6 내지.5) 를보였다. 반면 LDL-cholesterol/HDL-cholesterol 치는전체대상이 2.9 ::t.7 (SD 범위 4.9 내지. 69) 을보였고, 남 를계산하여보아도많은차이를보여서실용화하기에는어렵다고생각되었다. 또한 hypercholesterolemia 의경우에도역시많은차이를나타내어사용하기에는어려웠t:} (Table 5). 자 2.4 ::!::.7 (SD 범위.4 내지. 72) 를, 자 2. i:.67 을보였다. 여 Lipoprotein 은지질과단백의복합체를말하 며그의특성에따라몇가지의분획으로나눈 다음은 cholest.erol 및 triglyceride 가이상적 으로높은치를나타낸대상 5 명에서같은 항목을측정하여역시비교하였다 (Tabel 2). 계산식은, total cholesterol-hdl-cholesterol-triglyceride/5 의 ratio(friedewald. 972) 와, total cholesterol-hdl-cholersterol-triglyceride/6.5 의 ratio(de-long. 986) 를 비교하였 q(table 2,, 4, Fig. ). 다. 각분획을측정하는방법에는밀도구배에 기초를둔방법, 전기영동도에의한방법, 입 자 slze 에기초를둔방법등이있다. 일반적으 로잘이용되는방법에는밀도에기초를둔분 획법에따라이름지어진것이다. 즉초저비중리포단백 (very low density lipoprotein, VLDL), 저비중리포단백 (low density lipoprotein, LDL), 고비중리포단백 (high density lipoprotein, HDL) 이 N. 고찰현재까지 LDL-c holester이치에대한측정은복잡하여간편하게계산으로구하는 Friedewald 식을사용하여왔다. 그러나계산식으로구하는방법에는실제측정한결과와차이가생기는일이많다고본다. 특히이상치에대하여서는더욱그러하다고한다. 그러나이계산식으로구한 LDL cholesterol 농도와초원심법으로직접구한농도와의상관관계는.94 나.99 라는높은상관이인정되어설지계산에 정상적으로존재한다. 특정질환상태 (hyperlipoproteinemia 등 ) 에서는 VLDL 과 LDL 의 lipoprotein 과 intermediate density lipoprotein (I DL) 이증가하는수가있다. LDL은 ch이 esterol을간으로부터다른말초조직으로운반하는주요한운반체이다. LDL 의대부분은 VLDL로부터유리된다. 크기는비교적균칠한구상으로 2-25A 이며지방성분은지칠 75% 와단백질 25%, 지질성분중 cholesterol ester 5-4 %, f ree cholesterol 7- %, phospholipid 5--2%, TG 7"'-'% 로구성되어있다. Cholesterol ester 및 fatty acid 는 - 46-

4 경 섬 2 염 n 딩 LDL calculated (mg/ d~) Fig.. LDL measured vs calculated values 5 노 i 5 口 5 OJP 口 (Difference of LDL-Cholesterol) 口 디 口 디 디 n n n n 디 n o LDL val. difference(mg/d~) Fig.. LDL diff. meas. vs calcul. values (Difference of LDL-Cholesterol) 때~{ 디mω%ωmω야ωφFig. 2. LDL measured vs calcujated vajues (The Difference of LDL) Table. Data diff. of measured and calculated normal cases LDL-LDLcal

5 2 g4 뇨 n- m밍- J~:. I ,. l i Diff erence values (mg/ da) Fig 톨 Diff. val. of Meas.-Calculated LDL (Hypertriglyceridemia cases) Table 4. Hyper-TG. cases. Diff. of meas.--calculated LDL Frie-dewald method Hyper-TG q n J Diff. values 2 Hyper-TG u n 나 l {잉@ σ@ι2 n b Aa Fig.5. l I 톨... 톨 -6 Table. 5 Hypercholesterolemia cases of meas. calculated LDL Friedewald method Diff.values H w m o Hyperchol. - % 톨 -6 9? i I I Difference values(mg/dll) 4 Diff. val. of Meas. - Calculated LDL (Hypercholestrolemia cases)

6 주로 linoleic acid 이고, apoprotein 성분은주로 apo B- 이다. 당뇨병환자에게서 LDL 이높은것은인정되어있으나그원인은잘알려져있지않다. 가수분해되어유리 cholesterol 이되어세포구성성분의한가지로이용된다. 한편 receptor 비의존성 LDL 대사는대부분 macrophage 에의하여수행되어소위 Goldstein 고혈압상태에서는생체내성분, 특히단백 이비효소적으로 glycate 되는점이알려져있 고, 최근 LDL 도 glycation 을받아그의생리적 의의에관하여논의되고있는데아직결론을 얻지못하고있다고한다. 는정확하고간편한측정 그중한이유로서 방법이없다는점이 생각된다. 검사실에서할수있는혈중 glycated LDL 의 측정법을개발하는일은 LDL 대 사의동태를해명하는데유용하다고들한다. Glycated LDL 에관해서는각종측정법이개 발되어있는데, 최근 Hb 에 결합되어있는 glucose 의 diol 기를 m-aminophenyl borate 를결합 시킨 agarose columne 을사용하여분리하는방 법과, affinity chromatography 법에 의한 glycated Hb 의측정법이보고되고있다. 이방법은 특이항혈청또는 polyviny lsulf a te 등을이용하 고있다. 분리된 LDL 을적용하는 glycated LDL 측정법이개발되면간편성이 우수한방 법으로서검사실에서이용가능성이있다고판 단된다. 생체내에서 LDL 의이화는주로 receptor 의 존성경로와 receptor 비의존성경로에따른다. 씨등이제창한 scavenger 경로를거친다. 이 와같이 LDL 은두가지의주된경로에따라 대사된다. 지질의 이상증을간단히분류하자면 Fredrickson 의분류에서 I 형은 chylomicron, IIa 형은 LDL, IIb 형은 VLDL 과 LDL, III 형은 IDL 내지 β- VLDL(broad ß-band 가있다 ). IV 형은 VLDL, V 형은 chylomicron 과 VLDL 이증가한다. LDL ch 이 esterol 의 증가가동맥경화진행에 주요원인이된다는점은많은연구에서인정 되어서고지혈증치료를위해 임상지표로이 용되게되었다. Cholesterol 은혈청중에서 apoprotein 과결합하여서몇 개의분획으로나 뉘어존재하고있다. 즉 HDL, LDL, IDL, VLDL, chylomicron 등이다. 어느분획의 lipoprotein 이증가되어있는가에따라임상적의 의가달라지므로 serum ch 이 esterol 치를알고자 할경우혈청중의총량뿐만아니라어느분 획중의 cholestrol 이어느정도존재하는가를 측정하는일은필요하다. 특히 LDL ch 이 esterol 의 증가가동맥겸화를촉진하는점에서동맥경 화의예방과치료에중요한지표로인정되고 앞의것은세포표면에존재하는 apo.b 에특이있다. LDL ch 이 esterol 을직접측정하는방법으 적으로친화성을가진 receptor 를거쳐서수행로는초원심법으로 LDL 를분리하여그중 된다. 이 LDL receptor 는생체내의각조직표 ch 이 esterol 을측정하는방법, lipoprotein 침전 면세포에서볼수있다. 예를들면사람섬유시약을사용하여각분획으로분리하여 choles- 아세포는세포한개당 2 만내지 5 만개의 re- terol 을측정하는방법등이있지만, 972 년 ceptor 를가지고있다한다. 이 receptor 에대한 LDL 의결합은 apo.b 의 lysine 이나 argmme 잔기를거쳐서이루어진다. Lysine 잔기를무수초산이나 deketone 이나 cyanoborohydride 로처리한 LDL 은 receptor 와 의결합을일으키지않는다. 세포는그의구성성분으로써 cholesterol 을 필요로하며 LDL 의 이화는세포내 cholesterol endocytosis 에중요한역할을하고있다. 세포 내로 endocytosis 된 LDL 은 lysosome 에서 apo. B 는 amino acid 로분해되며, ch 이 esterol ester 는 뾰m Friedewald, Levy, Fredrickson 등은공복시혈 청중의 cholesterol(tc), triglyceride(tg) 및 HDL cholesterol 농도를알면계산식으로 LDL cholesterol 농도를구할수있다는점을발표 하였다. 이계산식은, Friedewald 의식에따르 면 다음과같은내용으로표현된다. 여기에서 는 TG < 4 mg/ dg 의경우에만사용된다. 이것 은 VLDL 중의 TG 와 ch 이 esterol 의 비율이거 의 5 : 로일정하다는점이근거로되어있고 혈액중 TG 농도를 /5 로함으로서 VLDL ch 이 esterol 를구하고있다. 따라서 I 형혹은 V

7 형고지혈증이나식후의혈청등 cholesterol 이 존재하는경우에는 LDL ch 이 esterol 을구할수 가없다. III 형지혈증등 IDL 이대단히많이 증가되어있는경우에도오차가커져서이계 산식을사용하는것은부적당하다. 정상인, n a 형, n b 형, IV 형고지혈증에서도이계산식으로 LDL cholesterol를구할수있다. 이계산식은 TG 농도의영향으로 LDL cholesterol 이낮게 계산되기쉽고 /5 TG 보다도 /6.5 TG 로하 는것이바람직하다는보고도있다 (DeLong. 7l 986). 기타다음과같은계산식도있다. LDL ---C = TC-HDL-C-TG[.2 - (. x TG) ]. 또한 TC/TG 비율을사용하는계산식도발표 되어있다. 직접 LDL cholester 이을구하는방법의하나 로침전법이있다. 64 mmol/l sod. citrate, ph 5.4 에 5, U/L 의 heparin mmol/l tris HCl, ph 7.4 에 dextran sulfate( 분자량 5, ) 을넣은것, 딩 ) 5 mmol/l Na2 EDT A. ph 4.2 에 g /L polyvinyl ether 을넣은것등이 있다. 이러한세가지의방법을비교하여, Siekmeier 등의보고에따르면측정의분산이 작은것은 heparin 을사용하는방법과 dextran sulfate 를사용하는방법의두가지이며, 또한 dextran sulfate 법은 TG 혈증의경우 LDL 의침 전이불충분하다고한다. 이러한침전법은고 TG 혈증등에서는측정정도가충분하지못하 여일반화되지는옷하고있다. LDL 를구성하는 apoprotein 은 apo. B 가대 부분으로다른 lipoprotein 은 apo. B 이외몇가 지의 apoprotein 을갖고있으므로 apo. B 를이 용한 LDL 농도측정도시도되고있다. LDL cholesterol 이 rng/dl? 이상의환자는 주의가요구되며 6 mg/dl? 이상은높은 risk 영역에해당하여치료가필요하다고한다. Receptor 와 lipoproteins 의 LDL 에관해서는 우선 apo. B lipoprotein 을생각할수있는데 apo. B receptor 는 LDL receptor 라고도말하며, LDL 을특이적으로인식하여결합하고세포내 흡수 ( endocytosis) 에관여하는세포막기능고 분자이다. 이러한수용에대한연구는많이진 행되고있다 2, ) 그결과첫번째, familial hypercholesterolemia (FH) 에서는 apo. B rèceptor 익유전적결손, 혹은발현이상으로발생되 는질병으로판명되었고, 이질환의치료법이확립되었다. 두번째는 apo. B receptor가생체 에서 LDL 을중심으로 lipoprotein 대사및세 포내 cholesterol 조절에중요한역할을하는 것이명백하여져서일반적인동맥경화증의발 증이나예방에귀중한자료를얻게되었다. 세 번째는세포외의 ligand 룰효과적으로흡수하 는계통으로써, receptor-mediated endocytosis 의존채를확인할수있게하여그의세포생 물학적보편성이인정되었다. V. 걸론 LDL-c holesterol 치의계산차와측정치의상 관을조사하여그의실용성을확인하였다. 지 질치가정상범위내에서계산식은실제측정치 와유사하여설용할수가있으며, 지질치가높은경우에는 Friedewald 식이나 DeLong 식이모 두상당한차이가있어실측치를사용하는것 이좋으며 cardiac risk f actor 등의계산에는 설측치를이용하는것이타당하다고생각되었다. - 5-

8 A Study for Actually Determined Value and Calculated Value of Low Density Lipoprotein Kim, Won Kyu., Jeong, Jae Lin., Lee, Kyung Ock., Seo, Deok Kyu., Lee, Kyu Beom. Seoul Medical Science Institute Seoul Clinical Laboratories ABSTRACT Assayed value of LDL cholesterol was compared with calculated value of LDL cholesterol by Friedewald and DeLong etc, determine its clinical usefulness. When the lipid profiles are in the normal ranges, the calculated value correlated well enough to the assayed value to be clinically useful. However, when the lipid profiles are abnormally high, the values of two methods did not correlate well to be useful. Therefore it is considered that the Cardiac Risk Factor should be determined by actually assaying the LDL cholesterol. References. Friedewald. W. T., Levy, R. I., and Fredrickson, D. S. : Estimation of the concentration of low density lipoprotein cholesterol in plasma without use of the preparative ultracentrifuge. Clin. Chern., 8 : 499, Brown, M. S. and Goldstein, J. L. : How LDL receptor influence cholesterol and atherosclerosis. Scientific American, 25 : No.5, Brown, M. S. and Goldstein, J. L. : A Receptor-mediated pathway for cholesterol homeostasis. Science, 22: 4-47, Lipid Biochemistry. M. I. Gurr and J. L. Harwood. Champman & Hall Howard, B. V., Abbott, W. F., Beltz, W. F., et al. : The effect of non-insulindependent diabetes on very low density lipoprotein and low density lipoproetin metabolism in man. Metabolism (in press). 6. Kissebah, A. H., Alfarsi, S., Evans, D. J. and Adams, P. W. : Plasma low density lipoprotein trasport kinetics in noninsulin--dependent diabetes mellitus. J. Clin. Invest., 7 : 655, DeLong, D. M., DeLong, E. R., Wood, P. D., Lippel, K., and Rifkind, B. M. : A comparison of methods for the estimation of plasma low-and very low-density lipoprotein cholesteol. The lipid Reserach Clinics Prevalence Study. JAMA. 256 : 272, The Lipid Research Clinics Coronary Primary Prevention Trial Results. JAMA : 25 : 5-74,

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