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지선 권
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1 ISSN (PRINT) ISSN (ONLINE) 약학회지제 60 권제 5 호 235~242 (2016) Yakhak Hoeji Vol. 60, No. 5 DOI /psk 종설 Short Report 댕댕이나무 (Lonicera coerulea var. edulis) 열매의항염증효과연구 김정화 조미나 ** 한주환 * 표승현 * 김태수 * 김은희 * 이재권 # 충북대학교사범대학생물교육과, * 충청북도산림환경연구소, ** 충북대학교농과대학산림치유대학원 (Received May 5, 2016; Revised September 26, 2016; Accepted October 3, 2016) Anti-inflammatory activity of the Fruits of Blue Honeysuckle Jeong Hwa Kim, Mi-na Jo**, Ju Hwan Han*, Seung Hyeon Pyo*, Tae Soo Kim*, Eun Hee Kim* and Jae Kwon Lee # Department of Biology Education, College of Education, Chungbuk National University, Cheongju , Korea *Forest Environment Research Institute, Chungbuk, , Korea **Department of Forest Therapy, Chungbuk National University, Cheongju, , Korea Abstract In this study, we demonstrated the anti-inflammatory activities of two kinds of blue honeysuckle (Lonicera caerulea var. edulis Turcz, Lonicera caerulea var. longibracteata f. ovata Hara) extracts in the LPS-stimulated macrophages. These two extracts showed non-cytotoxic activity, even at the high concentration. These two extracts of honeysuckle reduced the production of nitric oxide, cyclooxigenase-2 and pro-inflammatory cytokines. The inhibitory activities of two extracts of honeysuckle were found to be caused by blockage of NF-κB activation. Keywords Lonicera coerulea var. edulis, blue honeysuckle, anti-inflammation, macrophage, nitric oxide, cyclooxigenase-2 서 댕댕이나무 (Lonicera coerulea var. edulis) 는인동과인동덩굴속에속하는낙엽관목으로북유럽, 북아메리카, 북동아시아등에분포하며, 변종및품종의수는학자에따라차이가있으나, 9~60 여종에이른다. 1,2) 댕댕이나무의영명은통상적으로 blue honeysuckle로불리우나 honey berry, sweetberry, honeysuckle, edible honeysuckle로불리기도하며, 일본에서는 japanhaskap/ haskappu로불리운다. 3) 인동속에속하는대부분종의열매는독성이있거나식용이불가능하지만댕댕이나무를포함하여몇종에있어서는식용이가능하다. 4,5) 댕댕이나무는열매의향이좋고, 즙이많으며단맛을내는열매가열린다. 6) 또한열매에는약리작용을하는기능성추출물이다량함유되어있어, Gruia 등 (2008) 에의하면암세 # Corresponding Author Jae Kwon Lee Department of Biology Education, College of Education, Chungbuk National University, Cheongju , Korea Tel.: Fax.: chemokine@cbnu.ac.kr 론 포의활성단계에서열매를지속적으로섭취하면암세포의크기를줄여항암작용에효과가있는것으로보고하였다. 7) 댕댕이나무열매내페놀계화합물은당뇨병이나심혈관질환과같은만성질환을예방하는효과가있고, 항산화작용을돕는다. 8) 국내에서도간기능개선에효과를보이는물질이발견되었으며, 그밖에비타민, 안토시아닌및기타미량원소가풍부함이확인되어특허가출원된상태이다. 최근의연구결과에따르면염증은암을포함하여대부분의만성질환에원인으로작용할수있기때문에많은관심을받는주제중하나이다. 그러므로염증을억제하는물질은임상적으로큰의의가있다. 더욱이예로부터식용으로사용되어온천연물로부터항염증성분을찾아낸다면, 활성성분의생체독성으로부터어느정도자유로울수있으며, 부작용없이, 다각적이고균형잡힌방식으로작동할수있으므로큰장점이있을수있다. 9) 베리 (berry) 류의항염증효과또한많은연구를통하여보고된바있다. 10) 대식세포로부터생성되는일산화질소 (nitric oxide, NO) 는생체방어기전의하나로 inducible NOS(iNOS) 의촉매에의해생성되어감염에대한방어기전에관여하게되는데, NO의생성이과도할경우조직손상, 유전자변이등을야기하게된다. 11) NO 235

2 236 김정화 조미나 한주환 표승현 김태수 김은희 이재권 외에도대식세포에서생성되는 cyclooxygenase(cox) 는혈소판형성, 신장기능유지, 위벽보호등의정상적인생체기능에작용하는 COX-1과발열과통증에관여하며염증반응에발현하는 COX-2로분류된다. 12) 이와같이대식세포는염증반응에서 inos 와 COX-2 를합성하여염증성매개물질인 NO와프로스타글란딘 (prostaglandin, PG)E2의생성을유도한다. 13) 따라서염증반응으로부터생성되는 NO와 PGE2와같은물질의생성억제를확인하여항염증효과를확인할수있다. 14) 본연구에서는일반댕댕이 (NM) 열매와넓은잎댕댕이 (WL) 열매의항염증활성을비교하기위하여마우스대식세포 (RAW 264.7) 에대한세포독성, 염증관련매개물질인 lipopolysaccharide(lps) 에의하여세포의 NO생성과세포내염증관련단백질발현양상을측정함으로서항염증작용에미치는영향을살펴보았다. 실험방법에탄올추출물의제조 2종의댕댕이열매를분리하여수돗물로 2~3번씻어내고건조기를사용하여완전히건조한후파쇄기로미세하게파쇄시켜사용시까지냉동보관 ( 20 o C) 하였다. 건조물 20 g에 100% 에탄올 200 ml를가하여상온에서 4일간추출한다음추출물을거즈로 1차여과하였다. 여과액을 3000 g에서 3분간원심분리한다음, 상층액만을취하여 0.2 μm filter로여과하였다. 여과시킨추출물은감압건조기 (evaporator) 를이용하여농축하였다. 실험재료 Lipopolysaccharide(LPS) 는 Sigma Aldrich(St. Louis, MO, U.S.A.) 에서, WST-8은 Takara Bio Inc.(Takara Bio Inc, Japan) 에서, COX-2, inos, β-actin의단클론항체그리고이항체들에대한이차항체는 Santa Cruz Biotechnology, Inc.(Santa Cruz, CA, U.S.A.) 에서구입하였다. TNF-α, IL-1β, IL-6의 ELISA Kit 는 Pierce endogen(rockford, IL, USA) 에서구입하였다. 세포배양쥐대식세포주 (mouse macrophage cell line) 인 RAW 세포는한국세포주은행 (Seoul, Korea) 에서구입하였으며, Dulbecco s modified Eagle s medium(dmem, Hyclone Laboratories, Logan, UT, U.S.A.) 에 10% fetal bovine serum(fbs; Hyclone Laboratories), 100 U/mL penicillin 및 100 μg/ml streptomycin (Gibco BRL, Grand Island, NY, U.S.A.) 을혼합한배지를사용하여 37 o C, 5% CO 2 인큐베이터에서배양하였다. 세포독성측정 96 well plate에 cells/well의농도로 RAW 세포를 분주하여 24시간배양하였다. 배양후배지를제거하고, 시료의농도를 62.5~1000 μg/ml으로 1시간동안전처리후, LPS (1 μg/ml) 를첨가하였다. 28시간동안 37 o C, 5% CO 2 인큐베이터에서배양한후, WST-8 시약을각 well에첨가하고, 37 o C, 5% CO 2 인큐베이터에서 2시간정도배양하였다. 측정은 microplate reader를이용하여 450 nm에서흡광도를측정하였다. 일산화질소 (nitric oxide) 생성량측정 RAW 세포를 세포독성측정 방법과동일한방법으로배양하였다. 배양상층액중일산화질소의농도는 Griess시약 (1% sulfanilamide in 5% phosphoric acid + 1% α-naphthylamide in H 2 O) 을이용하여흡광도 550 nm에서측정하였다. 효소면역분석법 (enzyme-linked immunosorbent assay) 사이토카인을측정하기위하여 96 well plate에세포 ( cells/ml) 를 100 μl 씩분주하고시료의농도를 500 μg/ ml이되도록 1시간동안전처리한후, LPS(1 μg/ml) 를첨가하여 37 o C, 5% CO 2 incubator에서 24시간배양하였다. 24시간후배양상층액을수거하여사이토카인을측정하였다. 수거된배지는측정전까지 70 o C에서보관하였다. TNF-α, IL-1β와 IL-6는 ELISA Kit(Pierce endogen, Rockford, IL, U.S.A.) 를사용하여측정하였다. 웨스턴블럿법 (Western blot) RAW 세포를 6 well plate( cells/ml) 에시료의농도를 500 μg/ml이되도록처리하여 1시간동안전처리후, LPS(1 μg/ml) 를첨가하였다. 일정시간배양후원심분리방법으로세포를수거하였다. 회수한세포를 Proprep(Intron, Seoul, Korea) 으로분쇄하여세포추출물을준비한다. 준비된시료는 bicinchoninic acid(bca) 법으로총단백질량을구하였다. 정량된단백질을동일한농도로 12% SDS-PAGE에전기영동한후 polyvinylidene difluoride(pvdf) 막에옮기고나서 5% BSA로 2시간 blocking 하였다. β-actin, inos, COX-2 단백질의발현은각각의단클론항체를이용하여확인하였다. 통계처리실험결과는 mean±sd로나타냈으며, t-test의통계처리방법으로통계적유의성을검정하였다. 실험결과댕댕이열매추출물의 RAW 세포에대한독성 Fig. 1에서와같이실험군은 2종의댕댕이열매추출물을 62.5, 125, 250, 500, 1000 μg/ml의농도로처리하고, 음성대조군은 J. Pharm. Soc. Korea

댕댕이나무열매추출물의항염증활성비교 237 Fig. 1 Cytotoxicity of NM and WL on RAW 264.7 cells. RAW 264.7 cells were treated with various concentrations (1000~ 62.

3 댕댕이나무열매추출물의항염증활성비교 237 Fig. 1 Cytotoxicity of NM and WL on RAW cells. RAW cells were treated with various concentrations (1000~ 62.5 μg/ml) of NM or WL for 1 hour and then the cells were stimulated with 1 μg/ml of LPS. After 30 hours, cytotoxicity was determined using the WST-8 reagent. The values that are shown are the means±sds of the three independent experiments. Fig. 2 Effects of NM and WL on the NO production of the LPSstimulated RAW cells. The test samples were treated as described in Fig. 1. After 30 hours the culture supernatant was subjected to the nitric oxide assay. The values shown here are means±s.d. of three independent experiments. * Statistical significance (p < 0.01, Student's t-test) as compared with the cells treated with LPS. 무처리군 (control), 양성대조군은 LPS(1 μg/ml) 만처리하여 30 시간배양후 WST-8 을이용하여 RAW 세포에대한세포독성을비교하였다. 실험결과일반댕댕이 (Fig. 1A) 와넓은잎댕댕이 (Fig. 1B) 열매추출물모두 1000 μg/ml 까지도세포독성이나타나지않는것을관찰할수있었다. 댕댕이열매추출물이일산화질소생성에미치는영향댕댕이열매의일산화질소생성억제효과를관찰하기위하여댕댕이열매추출물을세포독성실험과동일한조건으로 RAW 세포에서처리한후세포배양상층액에서일산화질소생성량을측정하였다. Fig. 2에서확인할수있듯이무처리대조군에 서는일산화질소가생성되지않은반면, LPS 만처리한양성대조군에서 16 μm 정도의일산화질소가생성되었다. LPS에의해증가된일산화질소의생성은일반댕댕이 (Fig. 2A) 와넓은잎댕댕이 (Fig. 2B) 추출물의전처리에의해농도의존적으로감소되었다. 특히 2종댕댕이열매추출물모두 500과 1000 μg/ml 농도로처리시무처리대조군수준으로일산화질소의생성이감소되었다. 댕댕이열매추출물의 inos 발현에미치는영향댕댕이열매추출물에의한일산화질소생성억제효과의기전을분석하기위하여일산화질소생성을유도하는효소인 inos 의생성을웨스턴블럿으로확인하였다. 일반댕댕이 (NM) 와넓 Vol. 60, No. 5, 2016

238 김정화 조미나 한주환 표승현 김태수 김은희 이재권 시료를준비한후, COX-2 단클론항체를이용하여웨스턴블럿을시행하였다. Fig. 4에서와같이 LPS에의해대식세포로부터생성되는 COX-2 는일반댕댕이와넓은잎댕댕이추출물 (500 μg/ ml) 의전처리에의해감소되었다. Fig. 3 Effects of NM and WL on the inos production in the LPSstimulated RAW 264.

The total protein lysate of each cells were prepared after 6 hours and inos was detected by Western blot analysis. The expression levels of inos was compared with β-actin.

4 238 김정화 조미나 한주환 표승현 김태수 김은희 이재권 시료를준비한후, COX-2 단클론항체를이용하여웨스턴블럿을시행하였다. Fig. 4에서와같이 LPS에의해대식세포로부터생성되는 COX-2 는일반댕댕이와넓은잎댕댕이추출물 (500 μg/ ml) 의전처리에의해감소되었다. Fig. 3 Effects of NM and WL on the inos production in the LPSstimulated RAW cells. RAW cells were treated with each samples (500 μg/ml) for 1 hour and then the cells were stimulated with 1 μg/ml of LPS. The total protein lysate of each cells were prepared after 6 hours and inos was detected by Western blot analysis. The expression levels of inos was compared with β-actin. Western blot analyses using a specific antibody were performed in triplicate, and all of them showed similar results. 은잎댕댕이 (WL) 열매추출물모두비독성농도인 500 μg/ml로 RAW 세포에 1시간동안전처리한다음, LPS를첨가하고 6시간동안추가배양한후에 inos 발현을웨스턴블럿으로확인하였다. Fig. 3의결과와같이 inos의발현은 LPS의처리에의해증가되고 2종의댕댕이열매추출물처리에의해감소되었다. 대조군으로는 β-actin의발현을관찰하였다. 댕댕이열매추출물의 COX-2 생성에미치는영향다음은또다른염증지표인 COX-2의생성에대한댕댕이열매추출물의활성을실험하였다. inos 시료와동일한조건에서 Fig. 4 Effects of NM and WL on COX-2 production in RAW cells. RAW cells were treated as described in Fig. 3, harvested and used for Western blot analysis. Western blot analysis was performed in triplicate and all of them showed similar results. Anti-β-actin antibody was used as a control. Fig. 5 Effects of NM and WL on IL-6, IL-1β and TNF-α production in RAW cells. RAW cells were pretreated with 500 μg/ml of sample for 1 hour, then LPS (1 μg/ml) was added and the cells were incubated for 24 hours. The culture supernatant was subject to enzyme-linked immunosorbent assay of IL-6, IL-1β and TNF-α. The values shown are means±s.d. for three independent experiments. * Statistical significance (p < 0.01, Student's t-test) as compared with the cells treated with LPS. J. Pharm. Soc. Korea

5 댕댕이나무열매추출물의항염증활성비교 239 댕댕이열매추출물이사이토카인의발현에미치는영향대식세포에의해생성되어염증반응을유도하는전염증성사이토카인인 TNF-α, IL-1β, IL-6의생성에대한댕댕이열매추출물의항염증효과를측정하였다. 사이토카인의정량을위해세포에시료 (500 μg/ml) 를 1시간동안전처리한후, LPS를첨가하고 24시간동안배양한다음배양상층액에존재하는사이토카인의양을효소면역분석법으로분석하였다. Fig. 5에서와같이무처리대조군 (control) 은 3종의사이토카인모두매우소량생성되었다. 반면 RAW 세포는 LPS의처리에의해사이토카인들의생성을급격히증가시켰다. LPS의처리에의해증가된 TNF-α, IL-1β와 IL-6의생성은 2종의댕댕이열매추출물모두에의해유사한수준으로억제되었다. 특히 2종의추출물모두 IL-1β의생성을무처리대조군수준으로감소시켰다. 댕댕이열매추출물이 IκB의발현에미치는영향 NF-κB 는 inos 및 COX-2 의발현에관여하는세포내신호전달물질로서염증반응전반을조절하는것으로알려져있다. 정 상상태에서 NF-κB 는 IκB에의해활성이억제되어있지만염증자극을받게되면 IκB kinase의활성화에의해 IκB가분해되면서활성을나타내게된다. 15,16) 2종의댕댕이열매추출물의항염증활성이 NF-κB 신호와관련되어있는지알아보기위하여 IκB의분해정도를확인하였다. RAW 세포에일반댕댕이와넓은잎댕댕이열매추출물을 500 μg/ml로각각 1시간동안전처리한다음, LPS를첨가하고 30분또는 1시간동안추가배양한후에 IκB 양을웨스턴블럿으로측정하였다. Fig. 6에서와같이 IκB의양은 LPS의처리에의해감소된다. 그러나 2종의댕댕이열매추출물을 LPS처리전에처리함으로서 IκB 양이감소하지않고 1시간이상유지되는것을확인할수있었다. 이결과로부터 LPS에의한염증반응에는 NF-κB 가관여하고있으며, 일반댕댕이와넓은잎댕댕이추출물은이 NF-κB 신호를억제하고있음을확인할수있었다. 댕댕이열매추출물이 mitogen-activated protein kinase (MAPK) 인산화에미치는영향 MAPK(ERK, JNK, p38) 는인산화를통하여염증반응을유도하는세포내신호전달단백질이다. 17) 일반댕댕이와넓은잎댕댕이추출물이 MAPK 인산화에미치는영향을알아보기위하여 IκB의웨스턴블럿과동일한조건에서배양시간만 10분과 20분으로다르게하여실험하였다. 실험결과 (Fig. 7) 에서확인할수있듯이대조군인 ERK, JNK, p38의발현은 LPS나시료의처리와관계없이모두일정하였다. ERK, JNK, p38으로부터인산화된단백질 (p-erk, p-jnk, p-p38) 은정상상태에서는거의발현되지않지만 LPS에의해유도된염증상황에서는급격하게증가되었다. 그러나일반댕댕이와넓은잎댕댕이열매추출물을 LPS 보다먼저전처리함으로서 p-erk(10분 ) 와 p-jnk(10분, 20분 ) 의발현이미약한정도의감소를보였다. 그밖의경우에서는 MAPK의인산화억제가나타나지않았다. 고 찰 Fig. 6 Effects of NM and WL on NF-κB pathway of RAW cells. Cells were pretreated with 500 μg/ml of sample for 1 hour and then the cells were stimulated with 1 μg/ml of LPS. The total cell lysate of each cell was prepared after 30 minute (A) and 1 hour (B). The expression levels of IκB were compared with β-actin as a control. Western blot analyses using a specific antibody were performed in triplicate, and all of them showed similar results. 댕댕이열매에는비타민 (vitamin) B3, 베타인 (betaine), 카테킨 (catechins), 안토시아닌 (anthocyanin) 등의활성성분이들어있는것으로알려져있으므로, 이활성성분들의고유활성이있을것으로예상된다. 안토시아닌의항염증효과는장내막세포와백혈구실험을통하여염증성사이토카인과산화질소의생성이억제된다고보고된바있다. 18) 베타인의경우에도쥐대식세포의탐식작용을억제하고, 19) 쥐에서발암물질에의한대장염의발생을억제하여대장암을억제한다고보고된바있다. 20) 본연구에서는 in vitro 환경에서항염증활성을실험하기위하여대식세포에 LPS를처리하였다. LPS는그람음성세균의세포벽성분으로서 Toll 유사수용체 (toll like receptor) 4를통 Vol. 60, No. 5, 2016

240 김정화 조미나 한주환 표승현 김태수 김은희 이재권 Fig. 7 Effects of NM and WL on MAP kinases signaling pathways of RAW 264.7 cells. Cells were pretreated with same condition with Fig.

6 240 김정화 조미나 한주환 표승현 김태수 김은희 이재권 Fig. 7 Effects of NM and WL on MAP kinases signaling pathways of RAW cells. Cells were pretreated with same condition with Fig. 5 and the total cell lysate of each cell was prepared after 10 and 20 minute, and cell signaling proteins were detected by Western blot analysis. The expression levels of ERK, p38 and JNK were compared with phosphorylated proteins. Western blot analyses using a specific antibody were performed in triplicate, and all of them showed similar results. 해선천성면역계 (innate immune system) 에관여하는것으로알려져있다. 그러므로그람음성세균에감염될경우 LPS는대식세포를포함한백혈구에작용하여 NF-κB 나 MAP kinases 신호전달체계를통해 TNF-α 등의염증성사이토카인의분비를촉진하여강력한염증을일으키게된다. 그러므로본연구결과에제시된바와같이 LPS에의해유도된대식세포의염증반응제어효과는항염증제제개발에큰의미가있다. 21) 일산화질소는대표적인염증신호전달자로서 LPS와같은박테리아유래내독소 (endotoxin) 나, 생체내에서유래하는 IFN-γ, IL- 1β, TNF-α 등과같은면역증가물질에의해생성이유도된다. 일산화질소는 arginine을재료로하여 inos, nnoc, enos와같은일산화질소합성효소 (nitrix oxide synthase) 에의해생성이진행된다. 22) 대표적인일산화질소생성세포로는대식세포, 내피세포, 심근세포등이있으며, 18) 이렇게생성된일산화질소는다양한긍정적인생리활성의변화를초래한다. 대표적인활성으로는혈관확장및생체방어기능증가이다. 23) 일산화질소에의한면역활성증가는대식세포를포함한백혈구의암세포독성증가및 cytokine 분비촉진등을들수있다. 24) 그러나이와같은일산화질소의면역증강효과는염증반응의유도로이어지게된다. 비정상적으로과생산된일산화질소는전염증성매개체로작용하게되며관절, 위, 폐등에서염증반응을유도하고심화시키는역할을한다. 11) 본연구에서는 2종의서로다른댕댕이열매의항염증활성을일산화질소억제효과를통하여검증하였다. 본연구에서와같이일산화질소를억제하는물질의발굴은항염증 제제의개발이라는의의를부여할수있다. Cyclooxygenase(COX) 는아라키돈산 (arachidonic acid) 으로부터염증반응을심화시키는 prostaglandin과 thromboxane의생성에관여하는효소이다. COX에는 COX-1과 COX-2가염증반응의유발은 COX-2 에의해더강하게유도되는것으로알려져있으며, 평상시에는검출되지않다가염증반응에의해증가되는것으로알려져있다. 14,25) 비스테로이드항염증제 (NSAID) 는 COX 의활성을억제함으로서항염증효과를나타내게된다. 그러므로 COX를선택적으로억제하는약물은항염증제제로서적절한조건을가지고있다고할수있다. 26) 본연구의결과에의하면 2 종의댕댕이열매추출물은 LPS에의해유도된 COX-2 의생성을유의미하게억제함을확인할수있었다. 사이토카인은면역조절에관여하는단백질들을일컫는단어이다. 사이토카인중전염증성사이토카인은면역반응이시작되는시기즉염증초기에발현되어염증반응을심화시키는역할을한다. TNF-α 는대표적인전염증성 cytokine으로서대식세포에서생성되어염증반응에필요한다른인자들의생성을촉진한다. 27) 그러므로대식세포에의해유발되는염증반응의경우에는 TNF-α 의역할이더중요하다고할수있다. IL-1β 또한염증반응초기에분비되어염증을심화하는데관여하는사이토카인으로서, 림프구계열 (T 세포, B 세포, NK 세포 ) 세포들에의한염증유발에직접적으로관여한다. 28) IL-6는 TNF-α 와 IL- 1β 보다는염증을유도하는능력은약하지만염증을심화시키는능력을가지고있다. 28) IL-6는단핵구나대식세포에서분비되며 J. Pharm. Soc. Korea

7 댕댕이나무열매추출물의항염증활성비교 241 면역반응, 신경세포의기능, 조혈작용 (hematopoiesis) 등에서중요한기능을하는물질이다. 29) NF-κB 는면역관련작용기전을확인하기위한대표적인세포내부신호분자로서세포주기 (cell cycle) 의조절, 암발생과정 (oncogenesis) 등과도관련이있다. 30) 항원의유입으로인하여염증반응신호가세포내로전달되면 NF-κB 는의신호가활성화되어일산화질소와전염증성사이토카인중 TNF-α 등의유전자발현을유도함으로서염증반응은시작된다. 31) 비염증상태의세포에서 NF-κB 는억제단백질 (IκBα, IκBβ, IκBε) 과결합하여비활성형으로존재하지만, 항원의자극이전달되면 NF-κB 와 IκB 의인산화가진행되면서 IκB가분해되어 NF-κB 가핵으로전위하여 COX-2, inos 등의유전자전사를유도한다. 30) 본연구의결과에서확인할수있듯이 LPS의자극이세포에전해지면 IκB 단백질밴드가분해되면서사라지게되는데, 2종의댕댕이열매추출물을처리에의해 IκB의분해가억제되어 IκB 단백질밴드가남아있음을확인할수있었다. 비록본연구에서는 NF-κB 분자의핵내부에서의활성이억제되었음을확인하지는않았지만 IκB의분해가억제되는것으로보아 NF-κB 의신호가억제되고있음을알수있었다. 이같은결과는 2종의댕댕이열매추출물의항염증효과가 NF-κB 신호를억제함으로서나타나는것으로예측할수있었다. NF-κB 와더불어면역관련작용기전을확인하기위한대표적인세포내부신호분자로 MAP kinases가있다. MAP kinases 는 serine/threonine kinase로써 p38, ERK, JNK가속해있다. MAP kinases는박테리아의내독소와같은스트레스인자의자극에의해인산화 (phosphorylation) 되어활성화가이루어진다. 32) 많은연구결과를통하여 LPS 자극에의해발생하는염증반응에 MAP kinases가관여함이밝혀진바있다. 33) 그러나본연구결과에서는 2종의댕댕이열매추출물모두 LPS에의해증가된 p38, ERK, JNK의인산화를억제하는효과가매우약하거나없는것을확인할수있다. 이결과는단편적인연구를통하여규명된것으로서, 앞으로다양한실험방법을통하여댕댕이의항염증활성에대한 MAP kinases의역할을확인할필요가있다. 결론본논문은일반댕댕이와넓은잎댕댕이열매추출물의항염증효과를대식세포를이용하여평가하였다. 댕댕이열매추출물 2 종모두전염증성인자인일산화질소, COX-2, TNF-α, IL-1β, IL- 6의생성을억제하였다. 두댕댕이열매의활성차이는없었다. 댕댕이열매의항염증활성의기전을연구한결과일산화질소의생성억제는일산화질소의생성을유도하는효소 (inos) 의발현을억제에의한것임을확인하였다. 댕댕이열매에의한항염증활성은염증관련신호물질인 NF-κB 의신호전달억제에의한것 으로확인할수있었다. 반면 NF-κB 와함께염증성신호로서중요한작용을하는 MAPK(p38, ERK, JNK) 의신호전달은 2종의댕댕이열매추출물모두에의해약하게억제되거나억제되지않았다. 이상의결과로부터댕댕이열매추출물은항염증효과가있으며, 이효과는종간의차이가없음을확인할수있었다. 감사의말씀본연구는산림청에서시행한소득개발연구사업예산으로수행된연구입니다. References 1) Plekhanova, M. N. : Blue Haneysuckle (Lonicera caerulea L.) A new commercial berry crop for temperate climate: genetic resources and breeding. Acta Hort. 538, 159 (2000). 2) Smolik, M., Ochmian, I. and Grajkowski, J. : Genetic variability of Polish and Russian accessions of cultivated blue honeysuckle (Lonicera caerulea). Russ. J. Genet. 46, 1079 (2010). 3) Skupie nó, K., Ochmian, I. and Grajkowski, J. : Influence of ripening time on fruit chemical composition of two blue honeysuckle cultigens. J. Fruit Ornam. Plant Res. 17, 101 (2009). 4) Smolik, M., Ochmian, I. and Grajkowski, J. : Genetic variability of Polish and Russian accessions of cultivated blue honeysuckle (Lonicera caerulea). Russ. J. Genet. 46, 1079 (2010). 5) Miyashita, T., Araki, H., and Hoshino, Y :.Ploidy distribution and DNA content variations of Lonicera caerulea (caprifoliaceae) in Japan. J. Plant Res. 124, 1 (2011). 6) Malodobry, M., Bieniasz M. and Dziedzic. E. : Evolution of the yield and some components in the fruit of blue honeysuckle. Folia Hort. 22, 45 (2010). 7) Gruia, M. I., Oprea, E., Gruia, I., Negoita, V. and Farcasanu, I. C. : The antioxidant response induced by Lonicera caerulaea berry extracts in animals bearing experimental solid tumors. Molecules 13, 1195 (2008). 8) Zhao, H., Wang, Z., Ma, F., Yang, X., Cheng, C. and Yao, L. : Protective Effect of Anthocyanin from LoniceraCaerulea var. Edulis on Radiation-Induced Damage in Mice. Int. J. Mol. Sci. 13, (2012). 9) Das, S., Bordoloi, R. and Newar, N. : A Review on Immune Modulatory Effect of Some Traditional Medicinal Herbs. J. Pharm. Chem. Biol. Sci. 2, 33 (2014). 10) Joseph, S. V., Edirisinghe, I. and Burton-Freeman, B. M. : Berries: Anti-inflammatory Effects in Humans. J. Agric. Food Chem. 62, 3886 (2014). 11) Sharma, J. N., Al-Omran, A. and Parvathy, S. S. : Role of nitric Vol. 60, No. 5, 2016

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Journal of Life Science 2011 Vol. 21. No. 8. 1120~1126 ISSN : 1225-9918 DOI : http://dx.doi.org/10.5352/jls.2011.21.8.1120 μ μ μ α β Journal of Life Science 2011, Vol. 21. No. 8 1121 μ μ 1122 생명과학회지 2011,