대한병리학회지 : 제 37 권제 6 호 2003 The Korean Journal of Pathology. 2003; 37: 393-9 유방의침윤성관암종에서 p21, p53 및 bcl-2 단백의발현 조향정 윤기중 1 문형배 1 원광대학병원운영군산의료원병리과 1 원광대학교의과대학병리학교실 Expression of p21, p53 and bcl-2 Proteins in Invasive Ductal Carcinoma of the Breast Hyang-Jeong Jo, Ki-Jung Yun 1 and Hyung-Bae Moon 1 Department of Pathology, Gunsan Medical Center of Wonkwang University Hospital, Gunsan; 1 Department of Pathology, Wonkwang University School of Medicine, Iksan, Korea 접수 : 2003 년 7 월 16 일게재승인 : 2003 년 11 월 11 일 책임저자 : 조향정우 573-390 전북군산시지곡동 29-1 군산의료원병리과전화 : 063-472-5372 Fax: 063-472-5374 E-mail: hjc@kunmed.or.kr Background : This study was designed to investigate the prognostic significance of p21, p53, and bcl-2 proteins in invasive ductal carcinoma of the breast. Methods : Seventy-two cases of invasive ductal carcinoma were examined by immunohistochemical staining for p21, p53 and bcl-2 proteins. The results were correlated with clinicopathological variables, including age, tumor size, histologic grade, nuclear grade, lymph node status, estrogen receptor (ER) and progesterone receptor (PR) expression. Results : Of 72 cases, p21, p53 and bcl-2 proteins were positive in 25 (34.8%), 35 (50.0%) and 27 (37.5%), respectively. There were no statistically significant correlations between the p21 protein expression and the other clinicopathological variables. The expression of p53 protein, however, showed a significant relation to ER expression, and that of bcl-2 was positively correlated with tumor size. In survival analysis, p21, p53, and bcl-2 proteins, nuclear grade and lymph node status were associated with survival rate. Conclusions : These results indicate that p21, p53, and bcl-2 proteins might play a role in tumorigenesis of breast carcinoma. In addition, the increased expression of p21, p53, and bcl-2 proteins could be used as factors suggesting poor prognosis in breast carcinomas. Key Words : p21-p53-bcl-2-breast Neoplasms 유방암은우리나라여성에게서위암에이어그다음으로높은발생빈도를차지하고있으며, 최근에는자가검진및유방촬영술의발달로발견빈도가높아지고있다. 1 유방암종에서종양의크기와림프절전이유무가가장중요한독립적예후인자로밝혀져있지만, 2 그동안치료방법의선택과예후추정을위하여에스트로겐수용체 (estrogen receptor, ER) 와프로게스테론수용체 (pregesteron receptor, PR) 발현에의존하였다. 3 이러한유방암종의예후추정을위하여 DNA 배수성, 증식분획, Her-2/ neu와종양유전자및종양억제유전자의역할에대한연구가진행중이다. 특히, 종양의발생에서세포분열에관여하는세포주기조절인자의이상이연구의대상이되고있다. 세포주기는 cyclin/cyclin dependent kinase (cdk) 복합체와 cdk 억제인자의연합작용에의해조절된다. Cyclin/cdk 복합체는세포주기조절에관여하며, cdk 억제인자는세포주기의진행을차단하는데관여한다고밝혀졌다. 세포분열주기의변화는성장조절경로의변화를일으켜종양성전환의특징이된다. cdk 억제인자로불리는많은종류의단백들은 cyclin-cdk 복합체에결합하여 kinase를불활성화시킴으로써세포주기진행의억제를유도하는것으로밝혀졌고, cdk 억제인자중에서 p15, p16, p18, p19 단백은 cdk4, cdk6에작용하고, p21, p27, p57 단백은 cdk1, cdk2, cdk4, cdk6에작용하여세포주기의진행을억제한다고밝혀졌다. 4,5 p21 단백은 6번염색체장완에위치하며 21 kda 크기로세포주기의 G1기에서 S기로변화하는과정에작용하며, G1 단계에서세포주기를멈추게하여세포주기의진행을조절하는 cdk 억제인자로서세포의최종분화, 세포자멸사, 노화등에도관여하는것으로알려져있다. 또한 p21 단백은 p53 의존적또는비의존적방법을통해활성화된다고알려져있어정상 p53 단백기능을간접적으로반영하기도하나, p53 단백과는무관하게종양억제유전인자로서작용할수있다는가능성도제기되고있다. 6,7 17번염색체단완에있는종양억제유전자인 p53 유전자의산물인 p53 단백은, 정상세포와종양세포의증식을조절하고 DNA 393
394 조향정 윤기중 문형배 복구를유도한다. 그리고세포자멸사를일으켜손상된 DNA가복제되지않도록하여손상된세포의성장을 G1기에서정지시켜 S기로진행하는것을막는다. 그러나돌연변이로인하여 p53이기능을하지못하면종양유전자로작용하여종양발생에관여하게되며, 세포자멸사를억제하는것으로알려져있다. 8 bcl-2 단백은 18번염색체에위치한 26 kda 크기의 bcl-2 유전자의산물로정상적으로상피세포의기저층에존재하며, 세포자멸사의억제를통해세포의수명을연장시켜종양발생에관여한다. bcl-2 단백의과발현은세포자멸사를억제함으로써돌연변이및악성전환의기회를높이는것으로알려져있다. 유방암종에서 bcl-2 단백발현은분화가좋은종양이나좋은예후와관련있다는일부의연구보고가있으나, 9,10 bcl-2 단백의과발현의의미는아직정립되어있지않다. 유방암종에서 p53 단백은돌연변이등에의하여오히려종양의발생을유발하는것으로보고되고있으며, p21 단백은 p53 단백의의존적 / 비의존적방법을통하여종양억제인자로작용하는가능성에대한연구가있다. bcl-2 단백도세포자멸사를억제함으로써종양의성장에관여하는것으로연구가되고있지만, p21 단백, p53 단백및 bcl-2 단백을함께연구한보고는미비한실정이다. 이에본연구에서는유방암종에서새로운종양억제유전자로서의가능성이제기되고있는 p21 단백과 p53 단백, 그리고 bcl-2 단백발현을면역조직화학염색을통해알아보고, 이들의상관성을조사하여기존의예후인자들, 즉조직학적분화도, 핵등급, 나이, 림프절전이수, 종양의크기, ER 및 PR 발현과의상관성을비교함으로써 p21 단백, p53 단백, bcl-2 단백발현의의의를찾고자하였다. 또한환자의생존과연관시켜상관관계를알아보고자하였다. 재료와방법연구재료 1995년 1월부터 1999년 12월까지원광대학교병원에서병리조직학적으로유방의침윤성관암종으로진단받은환자중파라핀포매조직의보관상태가양호하여면역조직학적검색에적합하다고판단된 72예를대상으로하였다. 환자의나이는 30세부터 81 세로평균 47.2세였으며, 39세이하군이 19예 (26.4%), 40세에서 49세군은 29예 (40.3%), 50세에서 59세군은 14예 (19.4%), 60세이상군은 10예 (13.9%) 였다. 종양의크기는 0.5 cm에서 10 cm으로평균 3 cm였으며, 2 cm 이하의 T1이 27예 (37.5%), 2.1 cm 에서 5 cm까지의 T2가 32예 (44.4%), 5.1 cm 이상의 T3는 9예 (12.5%) 였고, 흉벽이나주변피부조직에침윤을보이는 T4가 4예 (5.6%) 였다. 림프절전이가없는 N0는 33예 (45.8%), 1개에서 3개까지림프절전이가있는 N1이 17예 (23.6%), 4개이상전이가있는 N2가 22예 (30.6%) 였다. 연구방법임상소견및병리조직학적검색대상환자의임상기록과병리검사결과를재검토하여환자의나이, 종양의크기, 전이된림프절의수, 조직학적등급, 핵등급, ER과 PR의발현유무를조사하였다. 종양의크기는 American Joint Committee on Cancer의분류 11 에의해 2 cm 이하 (T1), 2.1-5 cm (T2), 5.1 cm 이상 (T3), 흉벽이나주변피부조직에침윤을보이는경우 (T4) 로분류하였고, 전이된림프절의수는전이가없는경우 (N0), 1-3개의전이가있는경우 (N1), 4개이상의림프절에전이가있는경우 (N2) 로분류하였다. 조직학적등급은 Bloom과 Richardson의분류방법에근거한 Ellis-Elston 12 의변형적방법을사용하여핵의다형성, 유사분열의활동성과세관형성의정도에따라 1등급 ( 고분화 ), 2등급 ( 중분화 ) 과 3등급 ( 저분화 ) 으로분류하였다. 핵등급은 Black과 Speer가제안한내용을 Fisher 등 13 이수정한분류법을이용하여다형성이약한것을핵등급 1, 중간의다형성을핵등급 2, 다형성이심한것을핵등급 3으로구분하였다. 면역조직화학염색본연구에이용한일차항체들은 p21 (monoclonal, Clone DCS-60.2, 1:100, Neomarkers, Fremont, CA, USA), p53 (monoclonal, Clone DO-7, 1:100, Neomarkers, Fremont, CA, USA) 및 bcl-2 (monoclonal, Clone 8C8, 1:100, Neomarkers, Fremont, CA, USA) 를사용하였다. 4 m 두께로박절한조직편을상용화된 Probe On-Plus slide에부착하여 58 오븐에서 1시간동안건조부착시켜 xylene으로탈파라핀하고하강계열 alcohol을거친후증류수로함수시켰다. 먼저항원성회복을위하여슬라이드에부착된조직절편을 10 mm 구연산완충액 (citrate buffer ph 6.0) 에넣고 15분동안전자오븐에서끓인후꺼내어실온에서 20분동안식혔다. 그다음 endogenous peroxidase를 3% hydrogen peroxide로저지시키고 Immuno/DNA buffer로 4회세척한다음, 적당한농도로희석한일차항체를냉장고에서밤새반응시켰다. 다음날일차항체를 Immuno/DNA buffer로씻어내고 HPR/Fab Polymer conjugate (picture-plus Bulk kit. Zymed, USA) 로실온에서 30분동안반응시켰다. Immuno/DNA buffer로씻은다음 AEC single solution (Zymed, USA) 을이용하여발색시키고, Gill's hematoxylin으로대조염색을한후봉입제로봉입하였다. p21과 p53 단백은핵에적갈색으로염색되면, 그리고 bcl-2 단백은세포질이적갈색으로염색되면양성으로판정하였다. 면역조직화학염색의결과평가는고배율시야 ( 400) 에서 5시야를검경하여관찰된전체종양세포수에대한양성종양세포의백분율로표시하였다. 발현이전혀안된경우를음성, 종양세포의 1% 이상에서발현이되는경우는양성으로판정하였다.
유방의침윤성관암종에서 p21, p53 및 bcl-2 단백의발현 395 통계처리환자의나이, 종양의크기, 림프절전이수, 조직학적등급, 핵등급, ER, PR과 p21, p53 및 bcl-2 발현유무사이의관련성을 Chi-square test로검정하였다. p21, p53 및 bcl-2 발현유무사이의상호관련성을알아보기위해 Spearman의상관관계분석을하였으며, 다변량생존율분석은 Cox regression model을통해알아보았다. 통계적유의성은 p값이 0.05 미만인경우로하였고, 이와같은통계검증은 SPSS 프로그램을이용하였다. 결과조직학적소견총 72예의침윤성관암종에대하여 Ellis-Elston의변형적방법 12 으로조직학적등급을나누었을때 2등급이 43예 (59.7%) 로가장많았고, 1등급이 19예 (26.4%), 3등급이 10예 (13.9%) 였다. Fisher 등 13 이수정한분류법을이용하여핵등급을나누었을때 1등급이 15예 (20.8%), 2등급이 30예 (41.7%), 3등급이 27예 (37.5%) 였다. 병리검사결과를참고한결과 ER은총 72예가운데 42예 (58.4%) 가, PR은총 72예가운데 52예 (72.2%) 가양성이었다. 면역조직화학염색결과와예후인자와의관계 p21 단백발현과예후인자와의상관관계 p21 단백은 72예가운데 47예 (65.2%) 에서음성이었고 25예 (34.8%) 에서양성이었다 (Fig. 1). p21 단백의발현유무와환자의나이, 종양의크기, 림프절전이수, 조직학적등급, 핵등급, ER 및 PR의발현과는통계학적으로유의한상관관계가없었다 (Table 1). Fig. 1. Immunohistochemical stain of p21 shows nuclear staining in invasive ductal carcinoma, grade II. p53 단백발현과예후인자와의상관관계 p53 단백은 72예가운데 36예 (50.0%) 에서음성이었고 36예 (50.0%) 에서양성이었다 (Fig. 2). p53 단백발현은 ER 발현과유의한상관관계가있었다 (p=0.029). p53 단백발현과환자의나이, 종양의크기, 림프절전이수, 조직학적등급, 핵등급, PR Fig. 2. Immunohistochemical stain of p53 shows nuclear staining in invasive ductal carcinoma, grade III. Fig. 3. Immunohistochemical stain of bcl-2 shows cytoplasmic staining in invasive ductal carcinoma, grade II.
396 조향정 윤기중 문형배 Table 1. Correlation between expression of p21 and clinicopathologic variables in breast cancer Table 2. Correlation between expression of p53 and clinicopathologic variables in breast cancer p21 (%) Negative Negative p value p53 (%) Negative Negative p value No. of cases (%) 47 (65.2) 25 (34.8) Age (years) 0.753 39 (n=19) 13 (68.4) 6 (31.6) 40-49 (n=29) 18 (62.1) 11 (37.9) 50-59 (n=14) 10 (71.4) 4 (28.6) 60 (n=10) 6 (60.0) 4 (40.0) Tumor size (cm) 0.739 T1 (n=27) 16 (59.3) 11 (40.7) T2 (n=32) 20 (62.5) 12 (37.5) T3 (n=9) 7 (77.8) 2 (22.2) T4 (n=4) 4 (100.0) 0 Lymph node 0.764 N0 (n=33) 19 (57.6) 14 (42.4) N1 (n=17) 13 (76.5) 4 (23.5) N2 (n=22) 15 (68.2) 7 (31.8) Histologic grade 0.891 I (n=19) 14 (73.7) 5 (26.3) II (n=43) 26 (60.5) 17 (39.5) III (n=10) 7 (70.0) 3 (30.0) Nuclear grade 0.630 I (n=15) 11 (73.3) 4 (26.7) II (n=30) 18 (60.0) 12 (40.0) III (n=27) 18 (66.7) 9 (33.3) ER 0.402 Negative (n=30) 20 (66.7) 10 (33.3) Positive (n=42) 27 (64.3) 15 (35.7) PR 0.570 Negative (n=20) 13 (65.0) 7 (35.0) Positive (n=52) 34 (65.4) 18 (34.6) No. of cases (%) 36 (50.0) 36 (50.0) Age (years) 0.972 39 (n=19) 10 (52.6) 9 (47.4) 40-49 (n=29) 13 (44.8) 16 (55.2) 50-59 (n=14) 8 (57.1) 6 (42.9) 60 (n=10) 5 (50.0) 5 (50.0) Tumor size (cm) 0.844 T1 (n=27) 14 (51.9) 13 (48.1) T2 (n=32) 16 (50.0) 16 (50.0) T3 (n=9) 3 (33.3) 6 (66.7) T4 (n=4) 3 (75.0) 1 (25.0) Lymph node 0.125 N0 (n=33) 16 (48.5) 17 (51.5) N1 (n=17) 10 (58.8) 7 (41.2) N2 (n=22) 10 (45.5) 12 (54.5) Histologic grade 0.077 I (n=19) 13 (68.4) 6 (31.6) II (n=43) 21 (48.8) 22 (51.2) III (n=10) 2 (20.0) 8 (80.0) Nuclear grade 0.127 I (n=15) 11 (73.3) 4 (26.7) II (n=30) 11 (36.7) 19 (63.3) III (n=27) 14 (51.9) 13 (48.1) ER 0.029 Negative (n=30) 14 (46.7) 16 (53.3) Positive (n=42) 22 (52.4) 20 (47.6) PR 0.889 Negative (n=20) 10 (50.0) 10 (50.0) Positive (n=52) 26 (50.0) 26 (50.0) 발현과는통계학적으로유의한상관관계가없었다 (Table 2). bcl-2 단백발현과예후인자와의상관관계 bcl-2 단백은 72예가운데 45예 (62.5%) 에서음성이었고 27예 (37.5%) 에서양성이었다 (Fig. 3). bcl-2 단백발현은종양의크기와통계학적으로유의하였다 (p=0.008). 그러나환자의나이, 림프절전이수, 조직학적등급, 핵등급, ER 및 PR 발현과는통계학적으로상관관계가없었다 (Table 3). 생존율에대한다변량분석방법 (Cox 희귀모형 ) 결과, 림프절전이수, 핵등급, p21 단백, p53 단백및 bcl-2 단백이통계학적으로유의하였다 ( 전이된림프절수 ; p=0.003, 핵등급 ; p=0.029, p21 단백 ; p<0.001, p53 단백 ; p=0.001, bcl-2 단백 ; p=0.043). 림프절전이가없는예보다전이가있는예에서그리고전이된림프절수가많을수록사망률이 2.9배높았다. 핵등급은높을수록사망률이 4.7배높으며, p21 단백, p53 단백및 bcl-2 단백은발현되지않는예보다발현한경우에서사망률이각각 2.3, 1.8, 1.5배높았다 (Table 5). p21 단백, p53 단백및 bcl-2 단백발현사이의상관관계 p21 단백, p53 단백및 bcl-2 단백발현사이에는통계학적으로유의한상관관계를보이지않았다 (Table 4). 생존기간과예후인자들과의상관관계 60명의환자들에대해서는최소 3년이상조사하였으며이들의생존율은 87.1% 였다. 추적기간은 13-89개월 ( 평균 ; 48.8개월 ) 이었다. 환자의나이, 종양의크기, 림프절전이수, 조직학적등급, 핵등급, ER 및 PR 단백, p21 단백, p53 단백및 bcl-2 단백과 고찰 p21 단백은 cdk 억제인자로완전히분화된세포에서더이상의성장을하지못하도록유지하는역할과세포자멸사, 노화등에도관여한다고보고되어있다. 또한 p21 단백은 p53 단백에의해유도되어 cyclin/cdk 복합체를비활성화시켜세포주기진행을정지시키므로, p53 단백의기능을간접적으로반영하기도한다. 그러나 p53 단백과는무관하게종양억제유전자로기능할가능성
유방의침윤성관암종에서 p21, p53 및 bcl-2 단백의발현 397 Table 3. Correlation between expression of bcl-2 and clinicopathologic variables in breast cancer bcl-2 (%) Negative Negative p value No. of cases (%) 45 (62.5) 27 (37.5) Age (years) 0.434 39 (n=19) 14 (73.7) 5 (26.3) 40-49 (n=29) 17 (58.6) 12 (41.4) 50-59 (n=14) 7 (50.0) 7 (50.0) 60 (n=10) 7 (70.0) 3 (30.0) Tumor size (cm) 0.008 T1 (n=27) 22 (81.5) 5 (18.5) T2 (n=32) 17 (53.1) 15 (46.9) T3 (n=9) 4 (44.4) 5 (55.6) T4 (n=4) 2 (50.0) 2 (50.0) Lymph node 0.403 N0 (n=33) 23 (69.7) 10 (30.3) N1 (n=17) 12 (70.6) 5 (29.4) N2 (n=22) 10 (45.5) 12 (54.5) Histologic grade 0.291 I (n=19) 17 (89.5) 2 (10.5) II (n=43) 22 (51.2) 21 (48.8) III (n=10) 6 (60.0) 4 (40.0) Nuclear grade 0.237 I (n=15) 14 (93.3) 1 (6.7) II (n=30) 14 (46.7) 16 (53.3) III (n=27) 17 (63.0) 10 (37.0) ER 0.976 Negative (n=30) 19 (63.3) 11 (36.7) Positive (n=42) 26 (61.9) 16 (38.1) PR 0.235 Negative (n=20) 13 (65.0) 7 (35.0) Positive (n=52) 32 (61.5) 20 (38.5) 도제기되고있다. 6 유방암종에서 p21 단백발현율은보고자마다 26-68% 로차이가있었으며, 본연구에서는 72예중 25예 (34.7%) 에서발현율을보였다. p21 단백발현과다른예후인자와의상관관계에대한다양한보고들이있는데, Diab 등 14 은림프절전이없는예에서 p21 단백은종양의크기, 나이, ER 및 PR 발현여부및핵등급과상호관련성이없다고하였고, Caffo 등 15 은종양크기가클수록림프절전이가있고, 조직학적등급이높을수록그리고유사분열이높을수록 p21 단백은의의있게높게발현한다고하였다. 또한 Wakasugi 등 16 은림프절전이가없는경우, 조직학적등급이낮을수록 ER 발현이있는경우에서 p21 단백발현이의의가있다고하였으며, Rey 등 17 은 p21 단백발현과조직학적등급이서로연관성이있다고하였다. O'Hanlon 등 18 은림프절에전이가있는예에서 p21 단백발현은다른예후인자와상호연관성이없다고하였다. 본연구에서 p21 단백발현과예후인자와의관계를보면, 종양의크기가크거나조직학적등급과핵등급이높은경우에, 또는림프절전이가있는예에서 p21 단백발현율이높은경향을보였다. 그러나통계학적유의성은없었다. p53 유전자는세포주기내의 G1/S 기에작용하여손상된 DNA의회복을유도함으로써정상적으로세포성장과증식을 Table 4. Correlation between expression of p21, p53, and bcl-2 in breast cancer Negative (n=45) bcl-2 Positive (n=27) Negative (n=36) p53 Positive (n=36) p21 Negative (n=47) 32 15 22 25 Positive (n=25) 13 12 14 11 p value 0.286 0.490 bcl-2 Negative (n=45) 24 21 Positive (n=27) 12 15 p value 0.866 Table 5. Cox multivariate analysis of p21, p53, bcl-2 and other clinicopathlologic variables for survival rate in breast cancer Variables p value Risk ratio 95% Confidence interval Age 0.175 0.706 0.427-1.168 Tumor size 0.156 1.728 0.811-3.681 Lymph node 0.003 2.866 1.438-5.710 Histologic grade 0.255 0.409 0.088-1.910 Nuclear grade 0.029 4.702 1.174-18.833 Estrogen receptor 0.692 0.802 0.269-2.389 Progesteron receptor 0.130 0.339 0.084-1.375 p21 0.000 2.308 1.516-3.516 p53 0.001 1.812 1.294-2.319 bcl-2 0.043 1.533 1.013-2.319 조절하나 p53 유전자단백의상실이나돌연변이등에의한손상이있을때종양유전자로작용한다. 최근에는 p53 유전자변이및결손은인체의거의모든암종에서나타나는가장흔한유전자변이의한형태로인정되고있다. 본연구에서 p53 단백의발현은전제 72예의유방암종중 36예에서양성반응을보여 50.0% 의발현율을보였다. 본연구에서 p53 단백발현과예후인자와의관계를보면 ER 발현과통계학적으로유의성은있었으나, 다른예후인자와는상관관계가없었다. 이는 p53 단백발현이 ER 발현과의상관성이통계학적으로유의성이없다고보고한 Bankfalvi 등 19 과이등 20 의보고와는차이가있는것이다. 또 p53 단백발현에대한다른보고자들의연구결과를보면, 전등 21 은 p53 단백발현은림프절전이, 조직학적분화도, 생존율과는유의한상관성이없다고하였으며, Charpin 등 22 도조직학적악성도와는유의한상관성이있으나림프절전이와는유의한상관성이없으며독립된예후인자는아니라고추정하였다. 그러나 Thor 등 23 은조직학적등급과림프절전이여부가 p53 단백발현율이나환자의생존기간과상관관계가있었다고보고하여, 연구자에따라상이한결과를보임을알수있었다. bcl-2 단백은세포수명을연장시키고세포의자멸사를억제함으로써종양발생에관여한다. bcl-2 단백발현과예후인자와의상관관계에대한보고를보면서로다른결과를나타내고있
398 조향정 윤기중 문형배 다. bcl-2 단백발현이림프절전이와관련이있다는연구가있으며, 24 림프절전이가있는예에서 bcl-2 단백발현은나쁜예후와관련이있다는보고가있다. 25 그러나 bcl-2 단백발현이림프절전이유무나다른예후인자들과관련이없다는보고도있다. 26 본연구에서 bcl-2 단백은 72예중 27예에서양성반응을보여 37.5% 의발현율을보였다. 본연구에서종양의크기가클수록 bcl-2 단백의과발현을볼수있으며이것은통계학적으로유의한상관관계를보여, bcl-2 단백이종양의크기와연관성이없다는이등 27 과조등 28 의결과와는차이가있었다. 그러나림프절전이, 조직학적등급, 핵등급, ER 및 PR 발현과는상관관계가없었다. p21 단백은종양억제유전자로서, 그리고 bcl-2 단백은종양유전자로서 p53 단백과의관계에있어서상호관계가정립되지않았다. 따라서 p21 단백, p53 단백및 bcl-2 단백발현의상관관계를알아보면이들의종양발생에독립적으로또는상호작용을통해관여하는지에대하여알수있을것으로생각하였으며, 더나아가예후추정에도도움이되리라고생각하였다. 그러나본연구에서는 p21 단백, p53 단백및 bcl-2 단백의발현에서상호간의통계학적유의성은없었다. 이는 p53, p21, bcl-2 단백에대한면역조직화학염색을시행한결과 p53과 p21 단백의발현은통계학적으로유의한비례관계를보이고, p53 과 bcl-2 단백의발현은역비례관계로유의한상관관계를보여 p53 단백의기능을간접적으로시사한다는 Bankfalvi 등 19 의보고와는차이가있었다. 그러나 Rey 등 17 과 Jiang 등 29 이연구한 p21 단백과 p53 단백과의관계는무관하다는보고와, 이등 27 의 bcl-2 단백과 p53 단백과의관계는무관하다는보고와일치하는결과를보였다. 이상의연구에서유방암종에서 p53 단백과연관하여종양발생에관여하는것으로생각되었던 p21 단백과 bcl-2 단백이, 종양발생에서독립적으로작용하는것으로생각할수있었다. 또한 Cox 다변량분석결과핵등급, 림프절전이수, p21 단백, p53 단백, bcl-2 단백이의의가있었다. 핵등급이높을수록, 림프절전이가있는예에서 p21 단백, p53 단백, bcl-2 단백발현이증가할수록사망률이높아예후인자로의가능성이있다고생각한다. 참고문헌 1. Ministry of Health and Social Affairs. Report for cancer registry programme in the Republic of Korea (1998.01.01-1998.12.31), 2000. 2. Page DL. Prognosis and breast cancer: Recognition of lethal and favorable prognostic types. Am J Surg Pathol 1991; 15: 334-49. 3. Barnes R, Masood S. Potential value of hormone receptor assay in carcinoma in situ of breast. Am J Clin Pathol 1990; 94: 533-7. 4. Landberg G, Roos G. The cell cycle in breast cancer. APMIS 1997; 105: 575-89. 5. Morgan DO. Principles of CDK regulation. Nature 1995; 374: 131-4. 6. Michieli P, Chedid M, Lin D, Pierce JH, Mercer WE, Givol D. Induction of WAF1/CIP1 by a p53-independent pathway. Cancer Res 1994; 54: 3391-5. 7. Zeng YX, El-Deiry W. Regulation of p21 waf1/cip1 expression by p53- dependent pathways. Oncogene 1996; 12: 1557-64. 8. Levine AJ, Momand J, Finlay CA. The p53 tumor suppressor gene. Nature 1991; 351: 453-6. 9. Doglioni C, Dei Tos AP, Lurino L, Chiarelli C, Barbarschi M, Viale G. The prevalence of bcl-2 immunoreactivity in breast carcinomas and its clinopathological correlates, with particular reference to estrogen receptor status. Virchows Arch 1994; 424: 47-51. 10. Bhargava V, Kell DL, Rijin M, Warnke RA. Bcl-2 immunoreactivity in breast carcinoma correlates with hormone receptor positivity. Am J Pathol 1994; 145: 535-40. 11. American Joint Committee On Cancer. Cancer staging Manual. 6th ed. Chicago: Springer, 2002: 221-40. 12. Elston CW, Ellis IO. Pathological prognostic factors in breast cancer. I. the value of histochemical grade in breast cancer: experience from a large study with long-term follow-up. Histopathology 1991; 19: 403-10. 13. Fisher ER, Gergorio RM, Fisher B, Redmond C, Vellios F, Sommers SC. The pathology of the National Surgical Adjuvant Breast Project (Protocol No.4). Cancer 1975; 36: 1-85. 14. Diab SG, Yu YY, Hilsenbeck SG, Allred DC, Elledge RM. WAF1/CIP1 protein expression in human breast tumors. Breast Cancer Res Treat 1997; 43: 99-103. 15. Caffo O, Doglioni C, Veronese S, et al. Prognostic value of p21 WAF1 and p53 expression in breast carcinoma: An immunohistochemical study in 261 patients with long term follow-up. Clin Cancer Res 1996; 2: 1591-9. 16. Wakasugi E, Kobayashi T, Tanaki Y, et al. p21 and p53 protein expression in breast cancer. Am J Clin Pathol 1997; 107: 684-91. 17. Rey M, Fernandez PL, Jares P, et al. p21 WAF1/CIP1 is associated with cyclin D1 CCND1 expression and tubular differentiation but is independent of p53 overexpression in human breast carcinoma. J Pathol 1998; 184: 265-71. 18. O Hanlon DM, Kiely M, MacCommara M, et al. An immunohistochemical study of p21 and p53 expression in primary node-positive breast carcinoma. EJSO 2002; 28: 103-7. 19. Bankfalvi A, Tory K, Kemper M, et al. Clinical relevance of immunohistochemical expression of p53-targeted gene products mdm-2, p21 and bcl-2 in breast carcinoma. Pathol Res Pract 2000; 196: 489-501. 20. Lee MJ, Jeon HJ, Kim KC. Significance of expression of p16, cyclin D1, Rb, and p53 protein and correlation with clinicopathologic prognostic factors in invasive ductal carcinoma of the breast. Korean J
유방의침윤성관암종에서 p21, p53 및 bcl-2 단백의발현 399 Pathol 2000; 34: 288-99. 21. Jeon HB, Loo BH, Chae YS, Relation between p53 overexpression and established prognostic factors in breast cancer. J Korean Surg 1995; 48: 648-60. 22. Charpin C, Deviotor B, Andrac L, et al. p53 quantitative immunocytochemical analysis in breast carcinomas. Hum pathol 1995; 26: 159-66. 23. Thor AD, Moore DH II, Edgerton SM, et al. Accumulation of p53 tumor suppressor gene protein: An independent marker of prognosis in breast cancers. J Natl Cancer Inst 1992; 84: 845-55. 24. Sierra A, Lloveras B, Castellsague X, Moreno L, Garcia-Ramirez M, Fabra A. bcl-2 expression is associated with lymph node metastasis in human ductal breast carcinoma. Int J Cancer 1995; 60: 54-60. 25. Hellemans P, van Dam PA, Weyler J, van Oosterom AT, Buytaert B, Van Marck E. Prognostic value of bcl-2 expression in invasive breast cancer. Br J Cancer 1995; 72: 354-60. 26. Leek RD, Kaklamanis L, Pezzella F, Gatter KC, Harris AL. bcl-2 in normal human breast and carcinoma, association with estrogen receptor- positive, epidermal growth factor receptor-negative tumors and in situ cancer. Br J Cancer 1994; 69: 135-9. 27. Lee MJ, Jeon HJ, Kim KC. Correlation of expression of CD44, p53 and bcl-2 protein, DNA ploidy pattern, and clinicopathologic prognostic factors in invasive ductal carcinoma of the breast. Korean J Pathol 1999; 33: 1152-62. 28. Cho HD, Kim YS, Kim IS. Expression of androgen receptor, bcl-2 protein and Rb protein in breast cancers as related to prognostic factors. Korean J Pathol 1998; 32: 443-52. 29. Jiang M, Shao ZM, Wu J, et al. p21/waf1/cip1 and mdm-2 expression in breast carcinoma patients as related to prognosis. Int J Cancer (Pred. Oncol) 1997; 74: 529-34.