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특허청구의범위청구항 1 1,3-부틸렌글리콜, C1 내지 C4의저급알코올및프로필렌글리콜중에서선택되는 1가지추출용매로추출한장딸기추출물과말의지방육을녹인후여과하여제조한마유를유효성분으로함유하는것을특징으로하는보습또는주름개선용화장료조성물. 청구항 2 삭제청구항 3 삭제청구항 4 제

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한약재품질표준화연구사업단 강활 ( 羌活 ) Osterici seu Notopterygii Radix et Rhizoma 생약연구과

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(19) 대한민국특허청 (KR) (12) 등록특허공보 (B1) (51) 국제특허분류 (Int. Cl.) A61K 8/97 (2006.01) A61Q 19/02 (2006.01) A61Q 19/08 (2006.01) A61Q 19/00 (2006.01) (21) 출원번호 10-2012-0089735 (22) 출원일자 2012 년 08 월 16 일 심사청구일자 (56) 선행기술조사문헌 JP2006117612 A KR1020090002677 A 2012 년 08 월 16 일 (45) 공고일자 2013년03월04일 (11) 등록번호 10-1238706 (24) 등록일자 2013년02월25일 (73) 특허권자 주식회사내추럴솔루션 인천광역시남동구능허대로 729, 504 호 ( 고잔동 ) 장문식 경기도수원시장안구금당로 39 번길 34, 조원주공아파트 214 동 804 호 ( 조원동 ) (72) 발명자 장문식 경기도수원시장안구금당로 39 번길 34, 조원주공아파트 214 동 804 호 ( 조원동 ) 정욱순 서울특별시송파구신천동파크리오아파트 312-2003 호 ( 뒷면에계속 ) (74) 대리인 이덕록전체청구항수 : 총 4 항심사관 : 이재영 (54) 발명의명칭섬오가피추출물을유효성분으로함유하는동백발효인퓨즈드오일, 이의제조방법및이를유효성분으로함유하는항산화, 항노화, 항염, 미백, 항주름또는항알러지용화장료조성물 (57) 요약 본발명은유효성분들의변성과손실이없는식물성오일을미생물을이용한발효를통하여변색, 변취, 열안정도, 사용감이개선되고항산화, 항노화, 항염, 미백또는항주름활성을갖는발효인퓨지드오일및그제조방법에관한것으로서, 상세하게는저온공정과오일자동화정제여과시스템 (Auto Oil Purifiterator system) 을통하여식물성오일을추출하여수득하고상기에서수득한오일을락토바실러스와크류버로마이세스락티스를동시에첨가하여발효한발효이퓨즈드오일을제공함으로써열안정성과항산화, 미백, 항주름, 항염활성을갖는화장료조성물을제공하는뛰어난효과가있다. 대표도 - 도 1-1 -

(72) 발명자 임준환 제주특별자치도제주시용담 1 동 106 번지 유근실 경기도수원시권선구호매실동 LG 삼익아파트 103-1106 유미애 경기도용인시수지구죽전 2 동동성 2 차아파트 20 6 동 705 호 엄선영 경기도수원시권선구권선동아이파크시티 201 동 1201 호 조은주 경기도수원시장안구정자 3 동한라아파트 633 동 406 호 - 2 -

특허청구의범위청구항 1 초음파추출과오일자동화정제여과장비를통하여동백씨로부터오일을추출수득하는단계와 ; 상기에서수득한오일에섬오가피을침지하여인퓨즈드오일을수득하는단계와 ; 상기에서수득한인퓨즈드오일에미생물을접종한후 40 에서 3 내지 12주동안발효하고그발효물을수득하는단계와 ; 상기에서수득한발효물을정제하는것이특징인발효인퓨즈드오일의제조방법. 청구항 2 제 1항에있어서, 상기미생물이락토바실러스 (Lactobacillus) 와크류버로마이세스 (Kluyveromyces) 임을특징으로하는발효인퓨즈드오일제조방법. 청구항 3 제 1항또는 2항의방법에따라제조된것을특징으로하는발효인퓨즈드오일. 청구항 4 제 3항기재의발효인퓨즈드오일을유효성분으로함유하는항산화, 피부노화, 염증, 미백, 주름또는알러지개선용화장료조성물. 명세서 [0001] 기술분야본발명은동백유를캐리어용매로사용하여추출한섬오가피유래아칸토익산 (acanthoic acid) 을유효성분으로함유하는발효인퓨즈드오일 (infused oil) 및그제조방법에관한것으로서, 더욱상세하게는식물성오일추출공정에있어서고온 (85~270 ) 의제조공정들을거치지않고저온공정 (temperature control technology), 식물의유효성분추출공정, 발효공정그리고오일자동화정제여과시스템 (Auto Oil Purifiterator system) 을통하여식물성오일이가지고있는유효성분들을변성과손실없이수득한발효인퓨즈드오일, 그제조방법과이를유효성분으로함유하는화장료조성물에관한것이다. [0002] [0003] 배경기술동백나무 (Camellia japonica Linne) 는중국중약대산전에동백나무를산다화라고하여맛은달고약간매우며약성은약간차며, 무독하고, 경혈, 지혈, 코피등을치료한다고기록되어있고본초강목활도에는식용으로먹을수있고, 동백유는머리에바르면윤기가난다고하였다. 또머리에바르면머리칼이끊어지는것과탈모를방지할수있으며, 목욕후몸에바르면피부건조에효과가있다고하였다. 상기동백유는감기를예방하고기관지염, 항진균성피부염화상등에쓰이며인체의면역기능을증강시킨다고도하였다. 동백씨앗에는 70% 이상의높은지방이함유되어있어우리고유의식물성기름으로지방의조성은중성지질 94.2%, 당지질 4.4% 그리고 1.4% 의인지질로구성되어있다. 동백씨앗에는트리글리세라이드함량이은행이나수박씨, 해바라기씨에비해훨씬높고호두와유해와유사한수준이다. 상기동백유의두드러진특징은총지방산의조성중에 80% 이상함유된 oleic acid 함량으로올리브유 64% 에비해매우높은것을알수있다. 동백유의 85~90% 를차지하는올레익산 (Oleic Acid) 은뛰어난항산화작용을나타내며, 그밖에팔미틴산을포함하는포화산 (9~12%) 과리놀레인산 (1~3%) 이함유되어있다. [0004] 오가피의학명은 Acanthopanax 이며 Acanto 는 ` 가시나무 를 Panax 는 만병을치료한다 는뜻을지닌다. 오가 피는인삼과같은두릅나무과에속하는낙엽활엽관목으로우리나라, 중국, 러시아등지에서자란다. 동의보감 이나본초강목에의하면 오가피의뿌리, 줄기, 가지의껍질등을오래복용하면몸을가볍게한다 하여오래 - 3 -

전부터약용으로사용되어왔으며 제 2 의인삼 으로도불린다. [0005] [0006] 한편섬오가피 (Acanthopanax Koreanm) 의경우 lignan 배당체인 syringaresinol diglycoside, acanthside D, syringoside, eleutheroside B 및 eleutheroside E, falcarindol, methyl-hexacosanoate, coniferin, pimaradiene diterpene 및 sumogaside 등의성분이함유되어있는것으로알려진다. 또항산화활성을가지는 eleutheroside B의경우에는가시오갈피와섬오가피모두존재하는것으로보고되었다. 특히섬오가피의뿌리에는다른종의오갈피에서보고된바없는 acanthoic acid( 아칸토익산 ) 가다량함유되어있으며항염증활성과간섬유화억제활성과항당뇨, 항비만, 면역증강효과등에대한연구보고가이루어져있다. 동백유를이용한종래기술은동백유를보습제로첨가하는기술에대하여대한민국공개특허제10-2012-33377호 ' 기능성화장료조성물제조방법및그화장료 ' 에개시되었고, 대한민국공개특허제 10-2010-107826호 ' 지질치환에의한손상된피부장벽복원및진정, 항염의복합작용을통한아토피증상개선용화장료조성물및그제조방법 ' 에서는피부보습, 향균, 항아토피활성을갖는동백유에관한기술을개시하였다. 또대한민국공개특허제10-2008-56370호에서는오가피추출물이함유된각질제거, 피부보습, 미백, 피부탄력증진과, 아토피피부염의완화경감용화장료조성물에대하여개시하였다. 그러나섬오가피근성분에함유된유효성분아칸토익산및오일성분을유효성분으로하는화장료조성료에관한기술은개시된바없으며, 더욱이동백유를캐리어용매로하여인퓨즈드오일 (infused oil) 을제조하는기술은전혀알려진바없다. [0007] [0008] [0009] [0010] 상기동백나무와섬오가피의유효성분들은오일성분으로서기능성식품또는약학적조성물, 화장료조성물로이용하기위해서는오일성분의추출및정제가중요한기술로여겨진다. 상기오일성분들의추출에있어서물을이용할경우오일성분들이충분히추출되지않는단점이있어유기용매를사용하여추출하였으나유기용매의유해성이문제시되어왔다. 인퓨즈드오일은상기와같은오일성분추출의문제점을해결하기위하여식물의오일성분을추출할때추출용매로써오일을사용하여추출하여수득한오일을일컫는다. 상기인퓨즈드오일은식물의오일성분을추출하기위하여용매로사용한오일의기능성성분과, 식물로부터추출된오일의유효성분이함께시너지효과를내어유효성분의함량이증대되고기능성이향상되어화장품제조시다양한제품에적용할수있는장점을가진다. 통상의천연오일의추출정제공정에서추출공정은원료를선정해분쇄후평균 120도로가열하여오일이잘추출되게한후에냉압착착유법 (expeller pressing) 을이용하여착유한다. 상기착유과정에서 85의높은열이발생하여오일성분의유실과변성을가져온다. 착유후나오는원료찌꺼기는핵산 (hexane) 과같은용매에침지하여상기원료찌꺼기에남아있는오일성분을용매추출 (solvent extraction) 한다. 상기냉압착착유법공정과용매추출을통해수득한오일은탈검 (degumming), 탈산 (deacidfication), 중화 (refining or neutralization), 탈색 (bleaching), 탈취 (deoderization) 정제공정을거친다. 상기오일정제공정은탈색, 탈취과정과탈산과중화과정이 85 ~ 270 범위의고온조건에서이루어지며수산화나트륨, 가성소다, 탄산소다등과같은화학처리에의해항산화성분과영양분이과도하게제거되면서오히려지방산의산화를촉진시켜높은변질가능성을갖고있다. 따라서천연에서고순도로정제되고항산화성분과영양성분의손실이없는오일을얻기위해서는상기공정단계의단점인고온처리, 화학물질처리공정을개선한시스템의도입이필수적이다. 발명의내용 [0011] [0012] [0013] 해결하려는과제따라서본발명의목적은, 고온처리및화학물질처리공정이없는식물성오일추출법을제공하는데있다. 본발명의다른목적은, 유효성분들의변성과손실이없는상기식물성오일을미생물을이용한발효를통하여변색, 변취, 열안정도, 사용감이개선되고항산화, 항노화, 항염, 미백, 항주름및항알러지활성을갖는발효인퓨지드오일을제공하는데있다. 본발명의또다른목적은, 상기식물성추출법을통하여수득한동백유를캐리어용매로사용하여추출한섬오가피유래아칸토익산 (acanthoic acid) 을유효성분으로함유한항산화, 항노화, 항염, 미백, 항주름및항알러지활성을갖는화장료조성료를제공하는데있다. - 4 -

[0014] 과제의해결수단본발명의상기목적은, 동백으로부터저온공정과오픈컬럼시스템 (open column system) 을통하여식물성오일을추출하여동백오일을수득하는단계와 ; 상기에서수득한동백오일에섬오가피를침지하여아칸토익산 (acanthoic acid) 을유효성분으로하는인퓨즈드섬오가피오일을수득하는단계와 ; 상기에서수득한인퓨즈드섬오가피오일을락토바실러스와크류버로마이세스락티스를동시에첨가하여발효하고그발효물을수득하는단계와 ; 상기수득한발효물을오일자동화정제여과시스템 (Auto Oil Purifiterator system) 을사용하여정제함으로써발효인퓨즈드오일을수득하는단계와 ; 상기수득한발효인퓨즈드오일의성분을분석한후그의항산화, 항노화, 항염, 미백, 항주름및항알러지활성을측정하는단계를통하여달성하였다. [0015] [0016] 발명의효과본발명은고온처리및화학물질처리공정이없는식물성오일추출법을제공하는효과가있다. 이밖에도유효성분들의변성과손실이없는상기식물성오일을미생물을이용하여발효하여변색, 변취, 열안정도, 사용감이개선되고항산화, 항노화, 항염, 미백, 항주름및항알러지활성을갖는발효인퓨지드오일을제공하는뛰어난효과가있다. [0017] 도면의간단한설명 도 1 은기존의천연오일추출정제공정과본발명천연오일추출정제방법을비교한도이다. 도 2는본발명발효인퓨즈드오일의유효성분인섬오가피유래아칸토익산 (acanthoic acid) 의 NMR( 13 C, 1 H) 스펙트럼과구조를나타낸도이다. 도 3은본발명발효인퓨즈드오일의열안정성을측정하여그결과를나타낸도이다. 도4는본발명발효인퓨즈드오일의 Intracellular ROS를측정한도이다. 도 5는본발명발효인퓨즈드오일의하이드록시라디컬소거능을측정한도이다. 도 6은본발명발효인퓨즈드오일의미백효과를측정한도이다. 도 7은본발명발효인퓨즈드오일의콜라겐합성증대효과를측정한도이다. 도 8은본발명발효인퓨즈드오일의항염효과을측정한도이다. 도 9는본발명발효인퓨즈드오일의항알러지효과를측정한도이다. [0018] [0019] 발명을실시하기위한구체적인내용 < 실시예 1 > 본발명발효인퓨즈드오일의제조및그유효성분아칸토닉산의구조동정동백원료 100g을저온공정 (temperature control technology; 이하 TCP공정이라한다 ) 을통하여 50g의오일을얻었다. 상기 TCP공정으로얻은오일 5g에섬오가피를침지한후초음파추출기를이용하여섬오가피를추출하여인퓨즈드오일을수득하였다. 상기인퓨즈드오일에 Lactobacillus균주와 Kluyveromyces균주를각각 1000CFU/g 가되도록동시에접종한후 40 에서 3 내지 12주간배양하여본발명발효인퓨즈드오일을수득하였다. 상기본발명발효인퓨즈드오일은오일자동화정제여과장비를이용하여정제된본발명발효인퓨즈드오일 20g을최종적으로수득하였다. [0020] 본발명발효인퓨즈드오일의성분분석은섬오가피의유효성분인아칸토익산 ( 화학식 1) 을지표물질로하여고속 액체크로마토그래피 (HPLC) 를이용하여분석하였다. 상기아칸토익산의 HPLC 분석조건은 Fortis C 18 (5um, 4.6Χ 150mm) 컬럼을이용하였고아세토니트릴과 0.1% 아세테이트가함유된물을부피비 1:1 비율로혼합한용매를이 동상으로하고유속 1.0 ml/min 조건에서분석하였다. 이때아카토익산의검출조건은 203 nm 였으며총분석시간은 35 분이었다. 섬오가피유래아카토익산은분석후 25 분에검출되었다. - 5 -

[0021] < 화학식 1> [0022] [0023] [0024] [0025] [0026] [0027] [0028] 실험예 1-1 본발명발효인퓨즈드오일의열안정성본발명발효인퓨즈드오일과정제수를부피비 5: 95로혼합한후, 90 의수욕에서진탕하면서 1시간마다 410 과 470 nm에서흡광도를측정하여총 5 시간동안열에대한오일의안정성을평가하였다. 실험결과, 도 3에나타난바와같이열에대한뛰어난안정성을확인할수있었다. < 실시예 2> 본발명발효인퓨즈드오일의기능성평가실험예 2-1 본발명발효인퓨즈드오일의 Intracellular ROS 측정 ; 세포내활성산소측정세포내의활성산소수준을측정하기위해 DCFH-DA(dichlorofluorescin diacetate) 염색방법을사용하였다. DCFH-DA는비극성분자로세포내들어가면서 DCFH로분해되고, 세포내의활성산소에의해녹색형광을나타내는 DCF로변한다. 따라서세포내의활성산소의농도가높을수록강한흡광도를나타내게된다. 세포내활성산소측정을위해서세포를 6 well plate에 1x10 5 cells/well로배양한다. 원하는항산화물질은 12 시간전처리하고, ROS generator인 H 2 O 2, PMS를각각처리한다. H 2 O 2, PMS의처리시간은각각 15분, 12시간으 로하였다. 세포를회수한후 HBSS 로 2 회 washing 한후, 20μM DCFH-DA 용액을 500μL 씩넣고 37 에서 30 분간 반응시킨다. 유세포분석기를통해세포의형광도를측정하였다. [0029] 실험결과본발명인퓨즈드오일은 100ug/mL 의농도에서세포내활성산소의농도를 20% 까지감소시켰다 ( 도 4). [0030] [0031] 실험예 2-2 본발명발효인퓨즈드오일의하이드록시라디컬소거능측정 Linoleic acid (25 mg/ml in EtOH) 를기질로하여 0.2 M phosphate buffer (ph 7.0) 와각시료용액을가하여 40 에서 1주일동안과산화지질을유도하였다. 과산화지질측정은반응액에 35% trichloroacetic acid와 0.75% aqueous TBA를혼합하고가열처리한후 70% trichloroacetic acid를가한다음원심분리하여그상등액을 532 nm에서흡광도를측정하였다. [0032] 불포화지방산인 linoleic acid 를이용한 TBA 법으로본발명인퓨즈드오일의항산화활성을측정한결과는도 5 와같다. 본발명인퓨즈드오일의항산화활성은 50ug/mL 에서 48% 의항산화활성을나타냈으며 100 ug/ml 에서는 100% 의뛰어난항산화활성나타냈다. [0033] [0034] 실험예 2-3 본발명발효인퓨즈드오일의미백활성 마우스흑색종세포주인 B16-F1 은 ATCC 에서구입하였으며, DMEM 에 10 % FBS 를혼합한배지를사용하여 37, 5 % CO 2 incubator 에서배양하였다. 실험과정의세포는 70 ~ 80 % 의단층배양에서실시하였다. - 6 -

[0035] B16-F1 흑색종세포를 10 % FBS 가함유된 DMEM 으로 6-well plates 에 1 10 5 cells/well 이되도록분주하여 5 % CO 2, 37 조건하에서 24 시간동안배양하였다. 배양이끝난후에배양액을제거하고본발명인퓨즈드오일 을농도별로배지에희석하여교체하고 B16-F1 흑색종에서의멜라닌분비를유도하기위해서 α-msh를처리하였다. 상기본발명인퓨즈드오일와 α-msh를처리한세포를 48 시간동안더배양하여미백효과를측정하였다. 상기실험세포들의멜라닌생성양은배양이끝난세포의배양액을제거하고 PBS로세포배양플레이트를세척한후, 10 % DMSO가함유된 1 N NaOH를첨가하여세포를플레이트로부터회수하였다. 회수된세포는 50 항온조에서반응시켜세포내멜라닌을용해되도록하였다. 상기멜라닌용해액을 ELISA reader를이용하여 490 nm에서흡광도를측정하였다. 멜라닌표준정량곡선을이용하여멜라닌양을구하였으며, 총단백질로보정하였다. 또본실험의대조군은시료를첨가하지않고 α-msh만처리하여멜라닌생성을유도한세포로하였다. [0036] α-msh 을처리한 B16-F1 흑색종세포에서의멜라닌생성억제효과를측정한결과를도 6 에나타내었다. 본발 명인퓨즈드오일은 50 μg/ml 의농도를처리하였을때, 20 % 의멜라닌생성억제효과를나타내었고 100ug/mL 에 서 30% 의뛰어난멜라닌생성억제효과를보였다. [0037] [0038] 실험예 2-4 본발명발효인퓨즈드오일의콜라겐합성증대효과 Type I pn 콜라겐의합성량측정은 ELISA kit(takara,japan) 를사용하여측정하였다. 섬유아세포를 24-well multiplate에 well당 5 10 4 개깔고, 10% FBS를첨가한 DMEM배지에 24시간정치하였다 (ph 7.4). 이후 FBS를첨가하지않은 DMEM배지에제니스테인을 10-7 M 농도로첨가하여 48시간동안배양하고상층액을회수하였다. 그후회수된상층액을이용하여 kit에서제공된 96-well plate에 coating하고, 4 에서 16시간이상방치한후, TPBS(0.1% Tween 20 in PBS) 로 3회세척하고, 3% bovine serum albumin(bsa in TBPS) 를넣고 2시간 blocking하였다. Primary antibody인 anti-collagen antibody를 37 에서 90분간처리한후, TPBS로 3회세척하였다. Secondary antibody인 anti-mouse IgG(whole mouse, alkaline phosphatase conjugated) 를 90 분간반응시킨후 TPBS로 3회세척하였다. Alkaline phosphatease substrate solution(1 mg/ml p-nitrophenyl phosphate in diethanolamine buffer) 을상온에서 30분간반응시킨후 microplate reader로 405 nm에서흡광도를측정하였다. [0039] 실험결과도 7 에나타낸바와같이본발명인퓨즈드오일은 50 μg/ml 의농도를처리하였을때, 10% 의콜라겐 생성증대효과를나타내었고 100ug/mL 에서 20% 의뛰어난콜라겐생성증대효과를보였다. [0040] [0041] 실험예 2-5 본발명발효인퓨즈드오일의항염효과실험에사용한세포는 RAW 264.7 세포 ( 생쥐대식세포주 ) 를 American type culture collection(atcc, Rockville, MD, USA) 에서분양받아사용하였다. 10% FBS(fetal bovine serum) 와 1% 항생제가포함된 DMEM(dulbecco s modified eagle s medium) 배지를사용하여 37, 5% CO 2 가공급되는배양기에서배양하였다. 세포를 well 당 1 10 5 이되도록 96 well plate에분주하고 16시간동안 37, 5% CO 2 가공급되는배양기에서세포를안정화시켰다. 안정화시킨세포에 LPS 1μg /ml와본발명발효인퓨즈드오일을농도별로처리하고 24시간동안배양한다음배양상층액 100μl와 Griess 시약 100μl를섞어흡광도 540nm에서측정하였다. Griess 시약은 0.1% naphthylethylenediamine dihydrochloride 50μl와 5% H 3 PO 4 에녹인 1 sulfanilamide 50μl를섞어조제하였다. [0042] 본발명발효인퓨즈드오일의 NO 생성억제효과를조사한결과 LPS 로염증을유도한대조군에비해 100ug/mL 의 농도로본발명발효인퓨즈드오일을세포에처리하였을때 NO 생성율이 30% 감소하는뛰어난효과를보였다 ( 도 8). [0043] [0044] 실험예 2-5 본발명발효인퓨즈드오일의항알러지효과 RBL-2H3(rat basophilic leukemia cell line) 은한국세포주은행 (Korea Cell Line Bank, KCLB) 에서분양받아 - 7 -

배양하였다. 세포의배양을위하여 10% heat-inactivated FBS (Gibco BRL, USA) 과 1% penicillin 및 streptomycin(gibco BRL, USA) 을포함한 DMEM(Gibco BRL, USA) 배양액에서배양하였다. 세포는 37, 5% CO2 조건하에서배양하였고, 세포의증식에따른과밀도현상을해소하기위하여 0.05% trypsin-edta solution(gibco BRL, USA) 을처리하여세포를부유시킨다음계대배양하였다. 알레르기즉시반응의지표인탈과립에대한억제효과를살펴보기위하여 β-hexosaminidase의분비를측정하였다. [0045] RBL-2H3 cells를 10% FBS를포함한 DMEM에현탁시킨후 48 well plate(corning, USA) 에 5 105cells/ml의세포수가되도록분주하였다. 그후 anti-dnp IgE(0.5μg/ml) 로감작하고 37 5% CO2 incubator에서 24시간배양하였다. 각 well의세포들을 Siraganian buffer(119 mm NaCl, 5mM KCl, 0.4mM MgCl2, 25mM PIPES, 40mM NaOH, ph7.2) 로 2번세척한다음각 well당 5.6mM glucose, 1mM CaCl 2 와 0.1% BSA가포함된 Siraganian buffer를첨 가하고본발명발효인퓨즈드오일을농도별 (0, 10, 50 및 100ug/mL) 로 1시간동안 37 5% CO 2 incubator에서배양한후 DNP-HSA (10μg/ml) 로처리하여 1시간동안반응시키고 ice bath에서 10분동안방치한후반응을종결시켰다. 상층액 20μl를 96 well plate에옮기고 substrate buffer (4-p-Nitrophenyl-N-acetyl-b-Dglucosaminide 1mM, sodium citrate 0.05M, ph4.5) 80μl를넣고 37 에서 30분배양시킨다음각 well당 stop solution 200μl를첨가하여반응을종결시켰다. Microplate reader (Molecular Devices Co. Ltd., USA) 를사용하여 405 nm에서흡광도를측정하였다. 본발명발효인퓨즈드오일처리군과대조군의흡광도값으로하기계산식에의해 inhibition(%) 을산출하였다. [0046] [0047] [0048] [0049] < 계산식 > Inhibition(%) =(1-T/C) 100 C: Cell (+), DNP-HSA (+), test sample (-) T: Cell (+), DNP-HSA (+), test sample (+) [0050] 항원 - 항체결합단계에서 β-hexosaminidase 분비에미치는본발명발효인퓨즈드오일의효과를살펴본결과 50ug/mL 농도에서 20% 의억제효과를나타내었고, 100ug/mL 농도에서 30% 의뛰어난억제효과를나타냈다 ( 도 9). [0051] 산업상이용가능성이상설명한바와같이본발명섬오가피추출물을유효성분으로함유하는동백발효인퓨즈드오일은변색, 변취, 열안정도및사용감이개선된효과가있고항산화, 항노화, 항염, 미백, 항주름및항알러지효과가있으므로화장원료산업상매우유용한발명인것이다. - 8 -

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