본초학표지

大韓本草學會誌제 29 권제 2 호 (2014 년 3 월 ) Kor. J. Herbology 2014;29(2):39-45 ISSN 1229-1765(Print), ISSN 2288-7199(Online) http://dx.doi.org/10.6116/kjh.2014.29.2.39. 한약재복합추출물의인간피부섬유아세포 HS68 에대한항노화효과 신동철 1#, 김귀철 2, 송시영 1, 김희진 2, 양재찬 4, 이용화 3, 김보애 4* 1 : ( 주 ) 엔에스텍부설중앙연구소, 2 : 전라남도생물산업진흥재단나노바이오연구센터 3 : 호서대학교융합기술연구소, 4 : 목원대학교테크노과학대학생의약화장품학부 Antiaging Activity of Mixed Extracts from Korean Medicinal Herbs on HS68 Skin Fibroblast Dong-Chul Shin 1#, Gwui-Cheol Kim 2, Si-Young Song 1, Hee-Jin Kim 2, Jae-Chan Yang 4, Yong-Hwa Lee 3, Bo-Ae Kim 4* 1 : Nstech R&D Center, 270 Beon-Gil 28, Namdongseo-Ro, Namdong-Gu, Incheon 2 : Jeonnam Nano Bio Reserch Center, San 109, Samtae-Ri, Nam-myun, Jangseong-Gun, Jeollanam-Do, 515-893 3 : Hoseo University, Fusion Technology, 165, Sechul-li, Beabang-eup, Asan-city, Chungnam 4 : Mokwon University, College of Sciences & Technology, Division of Biomedicinal & Cosmetics Doanbuk-ro 88, Seo-gu, Daejeon 302-729, Korea ABSTRACT 1) Objectives : The purpose of this study was to investigate antiaging and antioxidant effects on cultured human skin fibroblast with 80% ethanol extracts of plants including of stem of Dendropanax morbifera, Corni fructus and Lycii Fructus. Methods : An ethanol extract of three medicinal plants including stem of Dendropanax morbifera, Corni fructus and Lycii Fructus. Extracts were assessed to determine the mechanism of antioxidant and antiaging activities. Antioxidant activity of extract was evaluated by two different assays as 2,2-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging and super oxide dismutase (SOD) like activities. These extracts were tested for cell viability on HS68 skin fibroblast by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide (MTT) assay. We investigated the effects of Ultraviolet-B irradiation on cytotoxicity, type 1 collagen, elastin level and oxidative damage in cultured human skin fibroblast (HS68). Recently, many studies have reported that elastin is also involved in inhibiting or repairing wrinkle formation, although collagen is a major factor in the skin wrinkle formation. Results : The extracts obtained dose-dependently increased the scavenging activity on DPPH radical scavenging activity and SOD like activity. The extracts of complex herbal medicine showed low cytotoxicity as more than 100% cell viability in 100ppm/ml concentration. HS68 fibroblasts were survived 70% at 120 mj/cm 2 UVB irradiation and treated tumor necrosis factor (TNF)-alpha. The levels of aging factors and cytotoxicity were decreased by ethanol extract of complex herbal medicine. Conclusions : These results suggest that ethanol extracts of complex medicinal plants of including of stem of Dendropanax morbifera, Corni fructus and Lycii Fructus may have value as the potential antioxidant and antiaging medicinal plant. Key words : Dendropanax morbifera, Corni fructus, Lycii Fructus, ethanol extracts, antioxidant, antiaging * 교신저자 : 김보애, 대전광역시서구도안북로 88, 목원대학교테크노과학대학생의약화장품학부 Tel : 042-829-7569 E-mail : kba@mokwon.ac.kr # 제 1 저자 : 신동철, 인천광역시남동구논현동 429-1 21B 2L ( 주 ) 엔에스텍 Tel : 032-812-0806 E-mail : shin-dc@hanmail.net 접수 :2014 년 2 월 19 일 수정 :2014 년 3 월 12 일 채택 :2014 년 3 월 19 일

40 大韓本草學會誌 Vol. 29 No. 2, 2014 서론 피부는장벽기능을하는인체의가장큰장기로서내부장기를보호하고수분과전해질의손실을막는등의보호역할을수행한다. 피부노화는나이의증가와동시에외부적인요인인각종산화물질, 대기오염, 중금속, 자외선 (ultraviolet radiation, UV) 등에항상노출되어있어손상받기쉬운조건에있다 1,2). 특히피부노화의주된원인은자외선으로, 태양광선에지속적으로노출된피부는항상자외선에노출되어있다고볼수있다. 자외선A와자외선B의경우에는피부의탄력저하, 주름형성, 홍반과같은노화현상과관련된증상이나타나며, 자외선C는피부암과같은병변이유발한다고알려져있다. 피부세포는자외선에의해쉽게손상되고있으며, 심하면일련의염증반응을일으켜피부장벽기능의소실로병원성미생물에의한 2차감염에노출되기도한다 3,4). 미용적측면에서는멜라닌 (melanin) 생성을촉진시켜기미, 주근깨와같은색소침착을유발하고, 진피층의탄력에관여하는콜라겐 (collagen) 과엘라스틴 (elastin) 의결합을약화시켜피부표면에주름이형성되므로자외선으로부터피부를보호하고자하는노력이증가하고있다 5,6). 자외선은세포내활성산소종을발생시켜산화적손상을유발하며, 자외선 B가 DNA에흡수되어 pyrimidine dimer와같은 mutagenic lesion을만들어내어돌연변이를유발하며결국유전정보의손실을야기시킨다 7). 또한장기간노출시심각한피부질병으로이어져피부세포사멸및피부암의발생으로까지이어진다 8). 피부노화에대한관심이증가되면서자외선으로부터피부를효과적으로방어할수있는천연소재발굴에대한다양한연구가시도되고있다 9). 천연소재의범위는내륙식물에서부터해양동식물까지광범위하게포함된다. 아직까지천연소재를기존의합성자외선차단성분으로완벽하게대체할수는없겠으나천연에서유래한소재는다양한항산화물질을포함하고있으므로자외선차단화장품에활용될시자외선으로부터유도될수있는피부손상을효과적으로방지하는데도움을줄수있다고사료된다. 황칠나무 (Dendropanax morbifera) 는두릅나무과황칠나무속으로동아시아, 말레이반도, 중앙및남아메리카등에약 75종이분포되어있으며우리나라에는 1종이분포되어있다. 현재까지황칠나무에대하여연구된바로는자연의금색을나타내는공예품에사용하는도료의원료와황칠나무잎추출물분획에서항암, 항산화, 간세포재생, 당뇨치료효과, 경조직세포재생등과방향성분의신경계에대한진정작용과강장작용이있으며, 황칠로부터얻은추출물에서멜라닌을생성하는티로시나제 (tyrosinase) 의활성억제기능으로미백효과에도움을준다고알려져있다 10). 이러한황칠은신약개발및기능성소재등새로운치료제로서의가능성을높여주고있다. 산수유 (Corni fructus) 는층층나무과에속하는산수유나무 (Cornus officinalis) 의과육으로, 가을에성숙한붉은색열매의씨를제거하고건조한과육을산수유라하며, 예로부터우리나라를비롯하여중국과일본등에서중요한한약재로많이사용되고있다 11). 산수유에대한연구로는산수유열매의렉틴성분, 영양성분, 산수유종자의항당뇨효과, 물추출물의힝히스타민효과, 부종억제효과, 납에의한조직손상억제에미치는효과, 항균효과, 티로시나아제저해작용, 항산 화및항암효과등이보고되고있으나 12,13) 이에대한체계적인연구가미흡한실정으로산업적활용연구가많이진행되어야할것으로사료된다. 구기자는구기자나무 (Lycium chinense Miller) 또는영하구기 ( 寧夏枸杞, Lycium barbarum Linne) 의열매로서예로부터민간치료제로사용해왔으며항산화효과, 항균효과, 면역증진, 항암효과, 모발성장촉진등의다양한연구가보고되고있다 14). 대표적으로한약재구기자의주성분중대한약전에서는구기자의정량기준을베타인 (betaine) 의함량으로설정하고있다. 따라서본연구에서는한방소재인황칠나무, 산수유, 구기자를이용하여항산화및항노화효능이있는기능성화장품소재를위한 in vitro 실험을적용하였으며긍정적인결과를얻었기에보고하는바이다. 재료및방법 1. 재료 1) 약재및시약전라남도신안군흑산면에서자생하는황칠나무의줄기, 전라남도구례군산동면에서자생하는산수유, 전라남도진도군의신면에서자생하는구기자를산지에서구입하여건조한후분쇄기 (HMF-502, 한일전기 ) 로분쇄한다음분말을 14mesh 분체를통과한것만을실험재료로사용하였다. 실험에사용한시약은일급시약을사용하였다. 2) 시료추출분쇄한황칠나무, 산수유, 구기자를상온에서 80% 에탄올을용매로하여상온에서추출하여실험에이용하였다. 획득한시료를 1차농축하고 2차로동결건조하여본연구에사용하였다. 동결건조하여분말화된시료를 10% dimethyl sulfoxide (DMSO) 에용해하여 0.45μl필터에필터링후다시농도별로세포배양액또는 PBS 완충용액에희석하여최종시료로사용하였다. 복합소재의비율은황칠나무 : 산수유 : 구기자를 2 : 3 : 1의비율로정하여추출하였으며이는항산화실험에서가장효능이우수한것을기준으로비율을선정한것이다. 추출물에대한추출조건과 in vitro 실험은최소 3회이상반복실험을수행하였다. 2. 방법 1) DPPH 라디칼소거활성측정 DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 는그자체가매우안정한 Free radical로서 517nm에서특정적인광흡수를나타내는진한보라색의화합물이다. 그러나 Radical 소거활성이있는항산화제에의해정량적으로탈색됨으로항산화활성을쉽게측정할수있다. 이 Radical 에의한소거활성은지질과산화억제활성을비롯한항산화활성과상관관계를보이므로항산화제검색에널리이용되고있다. 추출물의항산화활성측정 (Electron donating abilities, EDA) 은 Blois의방법을변형하여측정하게되는데, 각시료용액 2.0 ml에 0.2 mm의

한약재복합추출물의인간피부섬유아세포 HS68 에대한항노화효과 41 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) 0.5 ml를넣고교반한후 30분간방치한다음 517 nm 에서흡광도를측정한다. 2) Superoxide dismutase (SOD) 유사활성측정추출물의 SOD 효소활성은 SOD assay Kit-WST를이용하여지시대로측정하였음. 96-well plate에추출물을넣고 WST-1 (2-(4-iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4- disulfophenyl)-2h-tetrazolium, mono-sodium salt) 과 xanthine oxidase working solution 을첨가한후 37 에서 20분간 incubation 한후 microplate reader에서 450 nm 파장을측정한다. 현을확인하였다. 5) MMP-1 저해활성측정 피부섬유아세포를 2 10 6 개 / 2 ml의세포를 6-well plate에접종한뒤각 well에추출물농도별로첨가하여 CO 2 배양기에서 24시간동안배양하였으며, 이때 MMP-1의활성을높이기위하여 TNF-α를 10 ng/ ml의농도로첨가하였다. 세포의배양액을수거하여실험에사용하였으며, Gross B. E. 의방법에따라 Matrix Metalloproteinase-1 Biotrack activity Assay Kit (Amersham Bioscience) 을이용하여 plate reader로 450 nm에서흡광도를측정하였다. 3) 세포배양인간섬유아세포주인 HS68 (human skin fibroblast) 세포배양을위한 Dulbecco's modified Eagel's medium (DMEM), fetal bovine serum (FBS) 및항생제 (penicillin /streptomycin) 는 Gibco사 (Grand Island, NY, USA) 제품을구입하여사용하였다. DMEM에 10% FBS, 100 U/ ml penicillin 및 100 μg / ml streptomycin을혼합한배지를사용하였고, 37, 5% CO 2 조건의 incubator 에서배양하였다. 4) 세포생존률측정 (MTT assay) 배지를제거하고 MTT solution (MTT [3-(4,5- dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide]) 을넣고 24시간동안 37, 5% CO 2 incubator에서배양하였다. 배양후 MTT solution 을제거하고생성된 formazan crystal을 DMSO에녹여 Titertek Multiskan Automatic ELISA microplate reader로 570 nm에서흡광도를측정하였다. 5) 자외선조사자외선 B 조사로인한세포독성및산화적세포사멸에대한추출물의항노화효과를확인하기위해서 UVB를다음과같은조건으로처리하였다. 이때 HS68 세포를 48-well plate에 4 10 4 cells/well 로분주한다음 24시간후에 FBS를포함하지않는배지로교환하여 24시간동안배양하였다. 이후배지를제거하고 PBS로 washing 하고, 그후 PBS 200 μl를 well에분주후자외선조사장치 (Ultra-Violet Products Ltd., Upland, CA, USA) 를사용하여 UVB를 120 mj/cm 2 로조사하였다. 자외선 B 조사후에 PBS를제거하고배지로교환한후추출물을처리한다음 24시간후에변화를측정하였다. 6) Elastase 저해활성측정시료의 elastase 저해활성은 James 의방법에따라측정하였음. 즉, 0.05 M Tris-HCl buffer (ph 8.2) 에기질인 0.5 mm N-succinyl-Ala-Ala-Ala-pnitroniline (Sigma) 를용해시킨후시료와효소인 elastase (1 unit/ ml, Sigma) 용액을첨가하였고, 이혼합액을 25 에서 10분간반응시킨후 ELISA reader를이용하여 415 nm에서흡광도를측정하였다. 7) 통계처리결과통계처리는평균 ± 표준편차로나타내었으며, 평균치간의유의성은 Student's test를이용한후 P값이 0.05미만일때유의한것으로판정하였다. 결과 1. 세포생존율에미치는영향한방복합에탄올추출물이피부섬유아세포독성에미치는영향을측정한결과 100ppm 에서세포독성을나타내지않았으며, 200ppm 이상에서는세포생존율이 80% 대로감소하였다 (Fig. 1). 또한항산화제로광범위하게사용되고있는 BHT (butylated hydroxy toluene) 와 vitamin C를대조군으로이용하여에탄올추출물의효능을비교하였으며 BHT의세포독성을 MTT assay로평가한결과 0.1ppm에서는독성을나타내지않았으며 0.3ppm부터 50% 이하의세포생존율을나타내었다. Vitamin C는 0.1ppm에서는독성을나타내지않았으며 5ppm부터 50% 이하의세포생존율을나타내었다. 6) TypeⅠcollagen 발현측정 TRIzol Reagent 를이용하여 total RNA를추출하였으며추출한 RNA로부터 cdna를합성하였으며, 효소들의유전자발현을비교측정하기위하여 PCR을수행하였다. PCR 조건은 95 에서 5분간진행한후 95 에서 30초, 53-61 에서 1분, 72 에서 1분을 40 cycle 진행한후 72 에서 5분간더반응시켰다. 각 PCR 산물들은 edithium bromide 를포함하고있는 1.5% agarose gel에서 50 V로전기영동한후 type 1 collagen 과 type 1 procollagen 노화관련유전자발 Fig. 1. Cell viability of dependent on concentration from EtOH extracts of Dendropanax morbifera, Corni fructus and Lycii Fructus. Data were presented as them ± S.D. **; P<0.01 compared with negative control.

42 大韓本草學會誌 Vol. 29 No. 2, 2014 2. DPPH 라디칼소거활성에미치는영향한방복합에탄올추출물의항산화활성은 DPPH 라디칼에대한시료의환원력으로측정하였다. DPPH는보라색을띠며화학적으로안정화된자유라디칼을가지고있는수용성물질로전자를받게되면흡광도가감소하며, 환원력이있는물질과만나전자를내어주면 DPPH 라디칼이소멸되어특유의보라색이옅은노란색으로변하는것을측정한다. 이러한원리를바탕으로 DPPH 라디칼소거능을측정한결과추출물의경우농도의존적으로 DPPH 라디칼에대한시료의환원력이증가하는것을관찰할수있었다 (Fig. 2). 게생성된활성산소종으로인하여콜라겐과엘라스틴등의탄력섬유에지질과산화가일어나비정상적인교차결합및사슬절단으로발생하게된다. 특히, 반복적인자외선노출로피부의 matrix metalloproteinases (MMPs) 가증가하게되면, 이는피부의콜라겐을분해하여피부주름생성을촉진하게된다. 즉, 피부의주름은콜라겐의합성과분해의불균형에기인하며특히광노화된피부의경우콜라겐합성이감소하고분해효소의활성이증가되어있는특성이나타난다. 본실험에서 HS68 세포에자외선 B를노출시킨경우 type Ⅰ collagen 및 type Ⅰ procollagen 의 mrna 합성이현저히감소되었으나, 추출물을처리하였을때 type Ⅰ collagen 및 type Ⅰ procollagen의 mrna 합성이증가한것을관찰할수있었다 (Fig. 4). 광노화에의한 collagen 의감소는깊은주름과같이피부노화징후와직접적으로연관이있고할수있다. Fig. 2. DPPH radical scavenging activity(%) of dependent on concentration from EtOH extracts from three medicinal plants including stem of Dendropanax morbifera, Corni fructus and Lycii Fructus, BHT and vitamin C 3. SOD 유사활성검증추출물의 SOD 효소활성은 SOD assay Kit-WST를이용하여지시대로측정하였으며, 그결과한방복합에탄올추출물처리군에서농도의존적으로항산화효능을나타남을알수있었다 (Fig. 3). Fig. 4. Effect of EtOH extract from herbals complex on the mrna level of type Ⅰcollagen and type Ⅰ procollagen in HS68 human skin fibroblasts after UVB irradiation. Data were presented as them ± S.D. **; P<0.01 compared with negative control, ##; P<0.01 compared with positive control, #; P<0.05 compared with positive control. 5. MMP-1 저해활성효능 Fig. 3. SOD like activity(%) of dependent on concentration from EtOH from three medicinal plants including stem of Dendropanax morbifera, Corni fructus and Lycii Fructus, BHT and vitamin C 4. UVB 산화적손상에대한항노화효능 피부진피층의콜라겐은섬유아세포에의해생성되며, 엘라스틴, 글리코사미노글리칸, 당단백등과함께세포외기질의대부분을구성하게된다. 피부노화의특성으로는피부의탄력성감소, 주름, 기미등을들수있으며, 이들은과도하 한방복합추출물을이용하여세포독성에미치지않는 100ppm 으로세포에전처리하였으며, 비교군으로서 Vitamin C도세포독성을나타내지않는 0.1ppm으로전처리하였다. 그결과 MMP-1활성도를높이기위해처리되었던 TNF-α 를단독으로처리한군은 MMP-1 수준이현저히증가한것을관찰할수있었으며, 반면추출물을처리한군에서는 MMP-1 수준이 TNF-α 단독처리군보다유의하게감소되었으며, 이는추출물이 collagen 분해에영향을미치는 MMP-1의활성을억제함으로써피부노화억제에도움을줄수있음을의미한다 (Fig. 5).

한약재복합추출물의인간피부섬유아세포 HS68 에대한항노화효과 43 Fig. 5. MMP-1 activities of extracts in human dermal fibroblast from EtOH extracts of Dendropanax morbifera, Corni fructus and Lycii Fructus. ##; P<0.01 compared with positive control. 6. Elastase 저해활성효능 본연구에서는황칠나무, 산수유, 구기자복합에탄올추출물의주름예방효능에대해분석하기위해 elastase 저해활성을조사하였다. 그결과에탄올추출물 100ppm/ ml에서 35.2±5.7 의저해활성을나타났으며 vitamin C보다는낮은활성을나타내었으나농도가 1000배차이나므로에탄올추출물이농도에비례하여우수한효능을나타냄을알수있었다 (Table 1). Table 1. Elastase Inhibitory Effects from EtOH Extracts of three medicinal plants including stem of Dendropanax morbifera, Corni fructus and Lycii Fructus. Elastase inhibitory(%) Concentration (ppm/ ml ) EtOH ext. (100) Vitamin C (0.1) 35.2±5.7 75.5±2.4 고찰 Reactive oxygen species (ROS) 는세포내의 DNA와 RNA를손상시키고, 사이토카인, 단백질합성, 효소, 대사활성에작용하여산화적스트레스를가함으로서유전정보의변화및질병을유발하게하는중요한인자이다 15). 외부적요인으로써광노화유발인자와자유라디칼, 호르몬의변화, 영양상태의불균형, 수면부족, 스트레스, 생활환경등은자연노화인자로서노화와밀접한관련이있는것으로알려져있다. ROS는끊임없이생성되지만건강한사람의경우 ROS와항산화물질이체내에서균형을이루어건강을유지하게된다. 항산화물질은 ROS의손상으로부터인체를보호하는데 vitamin, carotenoids, bilirubin, albumin 과같은 radical scavenging antioxidants 와항산화효소들이대표적이다 16). 즉인체내부는항산화방어시스템을갖추고있어유해한각종산화적스트레스로부터대응하여항상성 (homeostasis) 을끊임없이유지하려고한다 17). 항산화방어시스템은효소에의한방어기전과비효소성항산화방어기전의두가지형태로구분된다 18,19). 특히, 효소에의한방어기전은 catalase (CAT) 와 superoxide dismutase (SOD) 등을대표적으로들수있다. 이에본연구에서는추출물의항산화효능을검증하기위하여 DPPH 라디칼소거능과 SOD유사활성을관찰하였으며, 추출물의농도에비례하여높은항산화효능을나타 내었다. 산화에의한피부손상은다양한노화징후즉잔주름, 굵은주름, 색소침착, 피부건조증등의증상과밀접한관련이있어항노화에있어서산화에적극적으로억제하는것이중요하다. 피부의진피층에다량존재하는 collagen 은피부건조중량의 90% 이상을차지하는주요구성단백질이다. 즉피부의 collagen 의분해는결합조직의탄력을저하시켜주름생성되는직접적인영향을미치게된다. Collagen의분해와관련된분자기작으로전사인자인 AP-1(activating protein-1) 에의해유도되는 MMPs (matrix metalloproteinases) 에의해서세포외기질과 type I procollagen 의분해가일어나주름생성과같은노화현상이나타난다 20,21). MMP family 중 MMP-1은 collagen 을분해하는 protease 로서피부노화와직접적으로관련되는데, MMP-1의활성을억제하여 collagen 의분해를감소시키면, 피부조직의탄력이유지되어주름생성을예방할수있으므로 MMP-1 활성을저해하는천연소재에대한연구가증가되고있는추세이다. 본연구에서는항노화소재로서황칠나무, 산수유, 구기자복합소재를에탄올추출하여 MMP-1 활성저해활성을평가한결과 TNF-α를단독으로처리한군보다 MMP-1의활성이약25% 감소된것을확인하였으며, 이는항노화관련화장품이나건강기능성식품에적용되기에적절하다고사료된다. Elastin 은피부세포외기질을구성하는성분중의하나로진피내피부탄력을유지한다. 이에반해 Elastase 는기질단백질인 elastin 의분해와관련되며, collagen 분해에도비특이적으로작용하여피부조직파괴의직접적인원인이되어피부의주름및탄력성소실등을유발한다. 그러므로 elastase 저해제는피부주름을개선하는작용을하며 urosolic acid 등이 elastase 저해제로알려져있다 22). 본연구에서복합소재에탄올추출물은 elastase 저해활성을나타내었으며, 이는피부의주름을개선하는항노화기능성소재로서의가능성을나타낸다. 복합생물소재 3종 ( 황칠나무, 산수유, 구기자 ) 을이용한에탄올추출물의항산화및세포독성, 항노화 (Type Ⅰ Collagen), MMP-1 저해활성, Elastase 저해활성등에대한효력시험을수행한결과전체적으로농도의존적으로활성이나타남을알수있었으며, 이는대조군인 Vitamin C보다활성은높지않으나농도비례평가하였을시우수한것으로나타난다. 추후본결과를적극적인활용을위하여식품의약품안전청의 기능성화장품의유효성평가를위한가이드라인 에따라수행되었으므로화장품원료로서의사용가치가높다고사료된다. 결론 본연구는황칠나무, 산수유, 구기자복합에탄올추출물의항산화및항노화효능을조사하였고다음과같은결론을얻었다. 1. 추출물은피부섬유아세포에서높은안전성을나타내었으며, 농도의존적으로 DPPH radical scavenging activity 와 SOD-like activity 가증가하는것을관찰할수있었다.

44 大韓本草學會誌 Vol. 29 No. 2, 2014 2. HS68 세포에자외선 B를노출시킨경우 type Ⅰ collagen 및 type Ⅰ procollagen의 mrna 합성이현저히감소되었으나, 추출물을처리하였을때 type Ⅰ collagen 및 type Ⅰ procollagen의 mrna 합성이증가한것을관찰할수있었다. 3. 추출물을처리한군에서는 MMP-1 수준이 TNF-α 단독처리군보다감소되었으며, elastase 저해활성측정에서도농도에비례하여우수한효능을나타냄을알수있었다. 따라서황칠나무, 산수유, 구기자복합에탄올추출물은대조군에비하여낮은세포독성을나타내며농도의존적으로항산화과항노화효능을나타내므로피부개선에도움을주는기능성화장품에활용할수있는좋은소재라사료된다. 감사의글 본연구는전라남도생물산업진흥재단 3G-Bio연계친환경생물소재고도화사업연구비지원으로수행되었으며, 이에감사드립니다. Referenses 1. Chung JH, Seo JY, Choi HR. Lee MK, Youn CS, Rhie G, Cho KH, Kim KH, Park KC, Eun HC. Modulation of skin collagen metabolism in aged and photoaged human skin in vivo. J Ivest Dermatol. 2001 ; 117 : 1218-24. 2. Lee WJ. Structure and function. J Skin Barrier Research. 2006 ; 8 : 10-7. 3. Lea T, Michael S, Claudia P, Michael F, Viktor M, Markus S, Wolfgang T and Jorg R. Cutaneous Photosynthesis of Vitamin D: An Evolutionary Highly-conserved Endocrine System that Protects against Environmental Hazards Including UV-radiation and Microbial Infections. Anticancer Research. 2006 ; 26 : 2743-8. 4. Arnold HL, Odom RB, James WD. Andrew's Disease of the skin : Clinical Dermatology. 8th rev. ed. Philadelphia:WB Saunders. 1990 : 28-9. 5. Shimoda N, Mutou Y, Shimura N, Tsukimoto M, Awaya A, Kojima S. Effect of heterocyclic pyrimidine compounds on UVB-induced cell damage in human keratinocytes and on melanogenesis in mouse B16 cells. Biol Pharm Bull. 2010 ; 33 : 862-8. 6. Gilchrest BA. Skin aging and photoaging: an overview. J Am Acad Dermatol. 1989;21:610-3. 7. Lee MH, Cho YH. Viability of Cultured Human Keratinocyte and Melanocyte after UVB Exposure. Korea J dermatol. 1997;35(2):258-65. 8. Svobodova A, Walterova D, Vostalova J. Ultraviolet light induced alteration to the skin. Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc Czech Repub. 2006 ; 150 : 25-38. 9. Chang MS, Ko EB, Lee HJ, Kim JS, Kim JS, Jee SW, Kim HY, Yeom MH, Kim DH, Kim HK, Park SK. The Effects of Nelumbo nucifera on Utraviolet-B Irradiated human Keratinocytes. Korea J Herbology. 2011;26(2):45-9. 10. Mo JH, Oh SJ. Tyrosinase Inhibitory Activity and Melanin Production Inhibitory Activity of the Methanol Extract and Fractions from Dendropanax morbifera Lev. Korea J Society for Aesthetics and Cosmetology. 2013 ; 11(2) : 275-80. 11. Tian G, Zhang T, Yang F, Ito Y. Separation of gallic acid from Cornus officinalis Sieb. et Zucc by high-speed counter-current chromatography. J Chromatography A. 2000 ; 886 : 309-12. 12. Yang L, Wang Z, Huang L. Isolation and structural characterization of a polysaccharide FCAP1 from the fruit of Cornus officinalis. Carbohydr Res. 2010 ; 345(13) : 1909-13. 13. Liu X, Han ZP, Wang YL, Gao Y, Zhang ZQ. Analysis of the interactions of multicomponents in Cornus officinalis Sieb. et Zucc. with human serum albumin using on-line dialysis coupled with HPLC. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2011 ; 879(9-10) : 559-604. 14. Lee YG, Kim JK. The study of the oriental medicine extract on the hair growth effect. Korea J Herbology. 2004 ; 19(2) : 83-90. 15. Hur SK, Kim SS, Heo YH, Ahn SM, Lee BG, Lee SK. Effect of the grapevine shoot extract on free radical scavenging activity and inhibition of pro-inflammatory mediator production in raw 264.7 macrophages. J Applied Pharmacology. 2001 ; 9 : 188-93. 16. Roberforid M, Calderon PB. Free radicals and oxidation phenomena in biological system. New York : Marcel Dekker, Inc. 1995 : 193-236. 17. Bickers DR1, Athar M. Oxidative Stress in the Pathogenesis of Skin Disease. J Invest Dermatol. 2006 ; 126(12) : 2565-75. 18. Sen CK. Oxidative and antioxidants in exercise. J Appl Physiol. 1995 ; 79(3) : 675-86. 19. Tsan MF. Superoxide dismutase and pulmonary oxygen toxicity. Int J Mol Med. 2001 ; 7(1) : 13-9. 20. Kang TH, Park HM, Kim YB, Kim H, Kim N, Do JH, Kang C, Cho Y, Kim SY. Effects of red ginseng extract on UVB irradiation-induced skin aging in hairless mice. J Ethnopharmacol. 2009 ; 123(3) : 446-51.

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