대한피부미용교육학술지제1권제1호 11 천연식물추출물의항산화력과미백작용의상관관계연구 한영숙동남보건대학피부미용과정은선아주대학교피부과학교실 Abstract A study of correlation between antioxidant activity and whitening effect of plant extracts Han, Young-Sook Department of Cosmetology, Dongnam Health College Jung, Eun-Seon Department of dermatology, Ajou university school of medicine Cutaneous hyperpigmentations including melasma, freckles and senile lentigines are common pigmentary disorders to humans that become more prominent with aging, especially among Asians. Melanogenesis is the enzymatic and nonenzymatic oxidative reaction which initiates from stable tyrosinase. The regulation of melanogenesis has focused on factors affecting tyrosinase, which catalyzes the rate-limiting step of the melanogenic phathway. Antioxidants could play some roles in inhibiting melanogenesis through reduction of oxidative stress. In this study several plant extracts(strawberry, dropwort, crown daisy, chinese quince, cinnamon, lavender, parsley, marigold, kiwi, arnica, licolice, eleltherococus senticosus), which are known to have anti oxidant effect, examined free radical scavenging activity and their effects on melanogenesis using cell proliferation assay, tyrosinase activity assay, and melanin content assay in B16 melanoma cells. The plant extracts arnica, eleltherococus senticosu, chinese quince, lavender, marigold, cinnamon showed more than 5 inhibition of free radical production at the below concentration of 300 μg /ml. The plant extracts of strawberry, dropwort, crown daisy, chinese quince, cinnamon, lavender, parsley showed inhibitory effect on melanogenesis Mechanism of melanogesis inhibition was noted through inhibitory action of tyrosinase There was no significant relation between radical scavenging activity of plant extracts and inhibitory action of melanogenesis. 본연구는 2003 년도동남보건대학연구비지원에의하여수행된것임.
12 Ⅰ. 서론 피부색소형성은자외선이나신호전달물질등 의외부적또는내부적요인들에의해멜라닌생 성이증가되면서일어난다. 지금까지미백제개발 은주로멜라닌생성효소인티로시나제를억제하 거나멜라닌세포수의감소등을통해, 멜라닌세 포에직접적으로작용하는기전으로이루어졌다. 그러나멜라닌생성에관여하는다양한경로와그 에관련한인자들이밝혀지면서, 이들멜라닌생 성경로와이에관련된인자들의작용억제에도관 심을두게되었다. 특히피부색소형성의주요원 인인자외선에의해발생된활성산소가피부색소 형성을촉진한다는메커니즘이밝혀지면서이들 활성산소를소거하는것이멜라닌색소형성억제 에효과적이라는연구보고가있다 1,2. 이에따라항 산화물질은연속적인산화과정에의해생성되는 멜라닌색소형성을막을수있을뿐아니라활성산 소를소거를통해서도멜라닌색소형성을막을수 있는미백물질로인식하게되었다. 특정약리작용을가진식물은국내에 500여종 이알려져있으나대부분이피부에미치는효과 가검증되지않은상태이다 8. 식물의천연추출물 은항염증작용, 자외선흡수, 피부보습작용, elastase 와 collasenase 등의효소억제, 활성산소 소거, 티로시나제억제, ATP 생성증가, 그리고 경피흡수를증가시키는등의다양한기전을통 하여피부의기능을보호할수있는효과를나타 낸다. 최근천연물질을이용한미백물질탐색이 활발히진행되고있다. 2001 년 11월기준미백활 성성분의특허공개분 170건중천연식물추출물 이 44% 를차지하는등 95년이후부터연평균 16% 의꾸준한성장세를보이고있다 4. 본연구에 는항염증효과를가진것으로알려진 12가지식 물을실험에사용했으며그중대표적식물의성 분과특징은다음과같다. 딸기(Fragaria ananassa Duchesne) 의추출물 (strawberry extract) 은말린산 (malic acid), 시트 르산(citric acid), 당(sugar), 점액질 (mucilage), 펙틴(pectin), 목질섬유, 물등을함유하며, 또한 미백작용을하는것으로알려진아스코르빈산 (ascorbic acid) 을가지고있다. 딸기추출물이가 진항산화기능은노화에관련된퇴행성질병억제 와햇빛에탄부위를진정시키는작용을하는것 으로알려져있다 5-7. 키위(Actinidia arguta) 는비타민 C가많고섬 유질, 비타민 E, 칼륨이다량함유되어있는과일 이다. 키위에함유되어있는비타민 C는기미와 주근깨를예방하고, 혈관의노화방지및스트레스 해소에효과가있다 6. 미나리 (Oenanthe javanica Dc.) 는주로한국 일본중국타이완말레이시아인도 등의습 지에서서식하며전초에플라보노이드 (flavonoid), 콜린(choline), 정유가포함되어있고, 퀴놀린계의 알칼로이드로루타민 (rutamine) 과 γ- 파가린 ( γ -fagarine), 쿠마린 (coumarine) 등도함유하고있 다. 민간에서는전초를염증약으로사용하여왔 다. 그외에비타민 E, eugenyl beta-d-glucopyranoside, pinoresinol beta-d-glucopyranoside, oenanthoside A, 2,3-methylenedioxy-5- allylphenyl beta-d-glucopyranoside 등의항산화 성분을가지고있다 8,9. 쑥갓(Chrysanthemum coronarium L) 의전초에 는항산화효과를나타내는 flavonoid 계열의유도 체성분이많이발견되고있는데그성분들로는 caffeic acid, chlorogenic acid, 3,5- dicaffeoylquinic acid, 4-succinyl-3,5- dicaffeoylquinic acid, emodin, thiophene(n
대한피부미용교육학술지제1권제1호 13 isobutyl-6-(2-thiophenyl)-2,4-hexadienamide 1,8-dihydroxyanthroquinone, quercetin and its glycosides, rutin 및 isoquercetin 등이있다. 쑥갓 에포함되있는비타민 C 와카로티노이드, 그외 풍부한항산화성분들은심장혈관계질병을예방 하고, chrysancorin 은항균작용이있는것으로 보고되고있다 -12. 모과(Chenomels siensis Koehne) 의주요성분 은 saponin, 유기산, flavonoid, tannin 등이있다. 모과잼에는현재미백물질로널리사용되고있 는알부틴성분외에도 phenol 계화합물인퀘르세 틴(quercetin) 유도체들과 caffeoylquinic acid 유도 체들을함유하고있다 13. 파슬리 (Petroselinum crispum Nym.) 는플라보 노이드계열의항산화성분들을많이함유하고 있어활성산소를제거하며쿠마린성분은항균효 과를가지고있다 14,15. 메리골드 (calendula or marigold, Calendula officinalis) 는플라보노이드, 올레노인산 (oleanoic acid) 의글루코시드 (glucoside), 카로티노이드 (carotinoid), 페놀산 (phenolic acid), 트리터펜노이 드(triterpenoid) 를포함하고있고, 그중에서트리 터펜노이드 (triterpenoid) 가항염증작용에중요 한역할을하는것으로알려져있다. 피부에서는 유연제로치료, 진정, 방부, 항가려움, 항염증성 질이있는것으로알려져있다 6,8,15,17. 엉거시 (arnica, Arnica montana) 는아르니신 (arnicin), 휘발성오일, 탄닌, 퓰린(phulin), 세스 퀴테르펜락톤(sesquiterpene lacton), 플라보노이 드, 쿠마린등을함유하고있으며그중세스퀴테 르펜락톤이항염증작용에중요한역할을한다. 피부에서는방부, 수렴, 항염, 순환촉진등의효과 를가지고있는것으로알려져있다 5,18,19. 계피(Cinnamomum cassia) 는녹나무과의계피 나무의뿌리와껍질에서채취한것으로맵고향 기가있으므로약용되거나과자의향료로이용되 어왔다. 계피의매운맛의성분은 sanshool I, II이 며 hyperin, sanshoamide, tannin, citronellal, b-phellanderne, dipentene, geraniol, xanthoxylin, berberine 등을함유하고있다. 발한, 해열, 체온 조절등의효과가있으며관절염을완화시키는 것으로알려져있다 8. 라벤더 (Lavendula L.) 는피로회복과숙면을위 해서취침전에목욕제나허브차로이용되고, 에센 셜오일은향수, 화장품, 비누등의부향제로사용 되고있다. 라벤더오일은살균, 소독, 방부작용이 있고피부세정효과가있는것으로알려져있다 6. 감초(Glycyrrhiza uralensis Fisch) 의글라브리 딘(glabridin) 성분은티로시나제억제를통해멜 라닌합성을억제하는동시에항염증효과를나 타내는것으로알려져있다 20. 이에반해감초뿌리 에 5~24% 정도로존재하는글리시리진 (glycyrr- hizin) 은티로시나제발현과활성을증가시켜멜 라닌생성을촉진시킨다는연구결과도있다 21. 화장품의자연지향성경향과더불어이들식물 유래천연추출물을이용한기능성화장품연구는 더욱활발해질것으로전망된다. 본연구는항산 화물질을함유하고있는것으로알려진수종의 식물을선택하여이들의항산화능력과미백능력 의상관관계를알아보았다. Ⅱ. 실험방법 1. 활성산소종소거력측정 실험물질의환원능력에따라 1,1-diphenyl- 2-picrylhydrazyl(DPPH, Sigma) 의흡광도가변 하는데항산화제의환원능이클수록 DPPH 의흡 광도가감소한다. 200μ M DPPH메탄올용액 900
14 μl과에탄올에 1%(v/v) 농도로희석시킨약물 0 μl을함께넣고상온에서 30 분간반응시킨다. 반 응이끝나면분광광도계 (Model-3550, Bio-Rad Lab, Richmond, CA) 로 540nm 에서흡광도를측 정한다. 약물을녹인용매역시 1%(v/v) 농도로에 탄올에희석시킨후 DPPH 메탄올용액과반응시 킨후측정된흡광도값을각약물에대한대조군 으로쓴다 22. 2. B16 melanoma 세포배양 B16 melanoma 세포를 RPMI1640 기본배지에 1 fetal bovine serum, 1% penicillin strepto- mycin 을첨가한배지로 37, 5% CO2 조건에서 배양한다. 배양중의배지는 3일에한번씩갈아준 다 23. 3. 세포형태관찰- 위상차현미경 항산화물질이 B16 melanoma cell의형태학적 변화에미치는영향을관찰하기위한방법으로 항산화물질을처리하고각각 3일간배양하면서 각세포들의형태학적특성을지속적으로위상차 현미경을이용하여관찰하고사진을찍는다. 4. 세포증식측정 항산화물질이멜라닌세포증식을억제하는지의 작용을관찰해본다. 60mm culture dish 에 2 4 /dish 농도로세포 를배양하고, 세포부착을확인한뒤실험물질을 처리한다. 배지는이틀에한번씩바꿔준다. 실험 물질처리 3일째되는날 0.25% Trypsin-EDTA 용액을처리하여세포를수확한다. 수확된세포진 탕액중 500ul 를떠서 Isotone 용액 ml 과균일하 게섞은후 Coulter counter(zm, Coulter Co.,England) 로세포수를세어준다. 5. Dopa-Oxidase 측정 멜라닌생성과정중도파에서도파퀴논으로전 환될때참여하는 dopa-oxidase 활성억제정도를 측정한다. 60mm culture dish 에 2 4 /dish 농도 로세포를배양하고, 세포부착을확인한뒤실험 물질을처리한다. 실험물질처리 3일째되는날 0.25% Trypsin-EDTA 용액을처리하여세포를수 확하고 Coulter counter 로세포수를세어준다. 실 험물질처리군당 2 5 세포를 1.7ml tube 에각각 나눠담고여기에 1mM L-Dopa(Sigma Chemical Co., St, Louis, Missouri) 가든 세포분쇄용액 0ul 을넣고 1시간동안 37 에서반응시킨다. 분 광광도계로 6. 멜라닌양측정 490nm에서흡광도를측정한다 24. 식물추출물이멜라닌생성을억제했는지의작 용을알수있다. 60mm culture dish에 2 4 /dish 농도로세포를배양하고, 세포부착을 확인한뒤실험물질을처리한다. 실험물질처리 3 일째되는날 하여세포를수확하고 0.25% Trypsin-EDTA 용액을처리 Coulter counter 로세포수 를세어준다. 각처리군별로 2 5 세포수당 0ul 의 1N NaOH 용액을넣고세포를녹인다 (3 7, 12hr). 세포가완전히녹은 sample 의흡광도 를측정전합성멜라닌 (Sigma. Chemical Co., St, Louis, Misso) mg 을 1N NaOH ml 에녹여 stock solution(1mg/ml) 을제조한뒤 700 μg/ml, 300 μg/ml, 0 μg/ml, 70 μg/ml, 30 μg/ml, μg/ml, 7 μg/ml, 3ug/ml, 1 μg/ml, 0.1 μg/ml, 0ug/ml 농도로 희석하여 standard solution 을만든다. Sample 과 standard solution 을 96well assy plate 에넣고 490nm 에서분광광도계로흡광도를측정한다. 측 정된흡광도값은합성멜라닌으로작성된표준 직선에적용하여멜라닌양으로환산한다 25.
대한피부미용교육학술지제1권제1호 15 Group-1 %DPPH scavenging activity 11 9 7 5 3 1 CQ : chinese quince( 모과 ) LA : lavender( 라벤더 ) CN : cinnamon( 육계 ) MG : marigold ( 금송화 ) ES : eleutherococcus senticosus( 오갈피 ) AN : arnica ( 엉거시 ) 30 0 300 Conce ntration ( μg/ml) Group-2 % DPPH scavenging activity 7 5 3 1 ST: straw berry ( 딸기 ) KW : kw i( 키위 ) DW : dropw ort( 미나리 ) CD : crow n daisy( 쑥갓 ) PAR : parsley ( 파슬리 ) LC : licolice ( 감초 ) 30 0 300 00 Conce ntration ( μg/ml) Fig 1. DPPH radical scavenging activity of plant extracts Data are represented as inhibition percentage. Group 1 scavenged more than 5 of free radical at lower concentration(between μg/ml and 300 μg/ml) CQ: chinese quince ( 모과), LA: lavender ( 라벤더 ), CN: cinnamon ( 계피), MG: marigold ( 금송화), ES: eleutherococcus senticosus( 오가피 ), AN: arnica ( 엉거시 ), N=4 Group 2 scavenged less than 5 of free radical at higher concentration (between 300 μg/ml and about 900 μg/ml) ST: strawberry ( 딸기), KW: kiwi ( 키위), DW: dropwort ( 미나리 ), CD:crown daisy ( 쑥갓), PAR: parsley ( 파슬리), LC: licolice ( 감초), N=4 Ⅲ. 결과 1. 식물추출물의활성산소소거력측정(Fig. 1) 300 μg/ml 농도를중심으로 300 μg/ml 이하농 도에서활성산소를 5 이상소거시키는식물추 출물은소거력순서대로아르니카 > 오가피 > 모 과 > 라벤더 > 메리골드 > 육계등이있었다. 특 히아르니카와오가피, 라벤더, 모과는 0 μg/ml 농도에서각각 85%, 82%, 79% 및 72% 의활성산
16 Control chinese quince ( 모과 ) Fig 2. Effect of plant extracts on morphology of B16 melanoma cells 소소거력을보였고, 메리골드와육계는 300 μg /ml 농도에서 64% 및 55% 의소거력을보였다. 이에반해나머지식물추출물은비교적고농도 인 300 μg/ml 에서 이하의활성산소소거력 을보였으며 00 μg/ml 까지농도를높였을때 딸기와감초가각각 56%, 53% 의활성산소소거 력을보였다. 2. 식물추출물이 B16 melanoma 세포형태에미 치는영향 (Fig. 2) 식물추출물이 B16 melanoma 세포형태에미치 는영향을알아보기위해 12가지식물추출물을 B16 melanoma 세포에처리한후 inverted microscope 을통해세포모양을관찰하였다. 가장 큰모양변화를보인것은모과추출물을처리한 세포로아무것도처리하지않은군에비해세포 크기가커지고배양접시바닦에납작하게퍼져 있는것을관찰할수있었다. 모과처럼큰모양 변화는없으나세포크기가커진것으로라벤다, 아르니카, 오가피처리군이관찰되었다. 세포모 양에변화가있는세포에서세포가뜨거나비정 상적인형태변화를보인것은없었다. 3. 식물추출물이 B16 melanoma 세포증식에 미치는영향 (Table 1, Fig 3) 식물추출물의실험농도는 μg/ml, 0 μg/ml, 00 μg/ml 농도에서시작했다 ( 식물추출물의 stock solution 농도는 working solution 농도의 배로만들었다. Stock solution 은 mg/ml 이 상의농도에서는시료를용해시켜처리하기힘들 었다). 00 μg/ml 농도에서현미경관찰시세포 가뜨거나처음깔아준숫자보다세포수가줄어 드는 cytotoxicity 효과를보인라벤더, 오가피, 감 초, 아르니카, 메리골드등은최고농도를 0 μg /ml 로조정했다. 0 μg/ml 농도에서도 cytotoxicity 를보인육계는 30 μg/ml 로조정해서 실험을실시하였다. 실험결과모든식물추출물은농도의존적으로 세포증식을억제하는결과를보였다. 특히모과는 00 μg/ml 율을 농도에서대조군과비교해세포증식 73% 억제했는데, 처리마지막날세어준세포 수가초기에깔아준세포수의 배정도늘어난 것으로보아, 이런효과가실험기간중모과에의 한세포독성때문은아닐것으로생각된다. 그밖 에세포증식억제력이큰순서대로나열하면다 음과같다. 육계(30 μg/ml) 억제, 라벤더 (0 μg/ml) 27% 억제, 미나리 (00 μg/ml) 34% 억제, 쑥갓(00 μg/ml) 31% 억제, 파슬리 (00 μg/ml) 23% 억제, 딸기(00 μg/ml) 억제효과를보 였다.
대한피부미용교육학술지제1권제1호 17 Melanin contents assay - group I (B16 melanoma cells 3 일처리 ) 1 % Control control 0 00 0 00 0 00 0 00 30 0 0 00 ST DW CD CQ CN LA PAR Melanin contents assay-group II (B16 melanoma cells 3 일처리 ) % Control 1 1 1 control 0 00 0 0 0 0 KW AN ES MG LC Fig 3. Effect of plant extracts on proliferation of B16 melanoma cells B16 melanoma cells were counted with Coulter counter after 3days of treatment of plant extracts as described in materials and methods. Results are expressed as percentages of control, and data reported are mean ± SD of at least three independent experiments done in duplicate. P<0.05, Dose of concentration; μg/ml ST: strawberry, DW: dropwort, CD: crown daisy, CQ: chinese quince, CN: cinnamon, LA: lavender, PAR: parsley, KW: kiwi, AN: arnica, ES: eleutherococcus senticosus, MG: marigold, LC: licolice 4. 식물추출물에의한 B16 melanoma 세포 내 dopa oxidase 1, Fig 4) 활성도의변화 (Table 대조군과비교해 dopa oxidase 활성억제효과 가뛰어난식물추출물들로는미나리 (00 μg/ml), 쑥갓(00 μg/ml), 라벤더 (0 μg/ml), 모과(00 μg /ml) 가관찰되었고이들의억제율은미나리 (00 μg/ml) 64%, 쑥갓(00 μg/ml) 63%, 라벤 더(0 μg/ml) 53%, 모과(00 μg/ml) 49% 의억 제율을보였다. 그밖의의미있는 dopa oxidase
18 Dopa oxidase activ ity-group I (B16 melanoma cells 3 일처리 ) 1 % Control control 0 00 0 00 0 00 0 00 30 0 0 ST DW CD CQ CN LA PAR Dopa oxidase activ ity-group II (B16 melanoma cells 3 일처리 ) % Control 1 1 control 0 00 0 0 0 0 KW AN ES MG LC Fig. 4. Effect of plant extracts on dopa oxidase activity of B16 melanoma cells B16 melanoma cells were treated for 3 days with dose of plant extracts as described materials and methods. Results are expressed as percentages of control and data reported are mean ± SD of at least three independent experiments done in duplicate. P<0.05, Dose of concentration; μg/ml Group I; ST: strawberry, DW: dropwort, CD: crown daisy, CQ: chinese quince, CN: cinnamon, LA: lavender, PAR: parsley Group II; KW: kiwi, AN: arnica, ES: eleutherococcus senticosus, MG: marigold, LC: licolice 활성억제율을보인식물추출물들은파슬리 (00 μg/ml) 42%, 딸기(00 μg/ml) 가 34% 억제, 육계 (30 μg/ml) 37% 억제효과를보였다. 나머지감초, 오가피, 아르니카, 메리골드등은 dopa oxidase 활성억제에유의한영향을미치지못하는것으로 관찰되었다. 5. 식물추출물에의한 B16 melanoma 세포내멜라닌양의변화 (Table 1, Fig 5) 대조군과비교해멜라닌생성을 5 이상억
대한피부미용교육학술지제1권제1호 19 Melanin contents assay - group I (B16 melanoma cells 3 일처리 ) 1 % Control control 0 00 0 00 0 00 0 00 30 0 0 00 ST DW CD CQ CN LA PAR Melanin contents assay-group II (B16 melanoma cells 3 일처리 ) % Control 1 1 1 control 0 00 0 0 0 0 KW AN ES MG LC Fig. 5. Effect of plant extracts on melanin contents of B16 melanoma cells B16 melanoma cells were treated for 3 days with dose of plant extracts as described materials and methods. Results are expressed as percentages of control and data reported are mean ± SD of at least three independent experiments done in duplicate. P<0.05, Dose of concentration; μg/ml Group I; ST: strawberry, DW: dropwort, CD: crown daisy, CQ: chinese quince, CN: cinnamon, LA: lavender, PAR: parsley Group II; KW: kiwi, AN: arnica, ES: eleutherococcus senticosus, MG: marigold, LC: licolice 제한식물추출물들로는미나리 (00 μg/ml), 쑥갓 (00 μg/ml), 모과(00 μg/ml) 가관찰되었고이 들의억제율은미나리 (00 μg/ml) 68%, 쑥갓 (00 μg/ml) 74%, 모과(00 μg/ml) 75% 의억제 율을보였다. 그밖의의미있는멜라닌생성을 억제율을보인식물추출물들은딸기 (00 μg/ml) 가 27% 억제, 육계(30 μg/ml) 13% 억제, 라벤더 (0 μg/ml) 41% 억제, 파슬리 (00 μg/ml) 36% 억 제효과를보였다. 나머지감초, 오가피, 아르니카, 메리골드등은멜라닌양변화의미있는영향을 미치지못하는것으로관찰되었다. 식물추출물에 의한멜라닌생성억제효과는동수의세포를모
20 Table 1. Effects of plant extracts on B16 melanoma cells Plant extracts(group 1) % control cell proliferation dopa oxidase activity melanin contents Stawberry ( 딸기) 00 μg/ml ± 5 66% ±13 73% ± 9 Dropwart ( 미나리 ) 00 μg/ml 66% ± 36% ±14 32% ± 6 Crown daisy ( 쑥갓) 00 μg/ml 69% ± 5 37% ± 8 26% ± 5 Chinese quince ( 모과) 00 μg/ml 27% ± 1 51% ±24 25% ±13 Cinnamon ( 육계) 30 μg/ml ± 6 63% ± 2 87% ± 1 Lavender ( 라벤더) 0 μg/ml 73% ± 5 47% ±14 49% ±16 Parsley ( 파슬리 ) 00 μg/ml 77% ±11 58% ± 8 65% ± 4 Plant extracts (group 2) % control cell proliferation dopa oxidase activity melanin contents Kwi ( 키위) 00 μg/ml 82% ± 5 93% ± 9 1% ± 21 Arnica ( 아르니카 ) 00 μg/ml 68% ± 9 83% ± 1% ± 26 Eleutherococcus senticosus ( 오가피 ) 00 μg/ml 86% ± 6 84% ± 9 134% ± 6 Marigold ( 메리골드 ) 0 μg/ml 94% ± 2 86% ± 3 98% ± 18 Licolice ( 감초) 0 μg/ml 96% ± 4 86% ± 3 94% ± 19 Group 1: plant extracts which showed inhibitory effect on melanogenesis. Group 2: plant extracts which showed non inhibitory effect on melanogenesis. Values represent means ± SD of at least three independent experiments. Cells were treated for 3days with plant extracts at a dose of /ml, 0 /ml, and 00 /ml. μgμgμg P<0.05 compared to the control. 은세포펠렛사진으로도확인이된다. 즉미나리, 쑥갓, 모과, 딸기, 라벤더, 파슬리등의펠렛색깔 이옅어진결과를통해멜라닌생성이억제되었 음을확인할수있었다. Ⅳ. 고찰 항산화효과와미백효과의연관성 본실험을통하여 B16 melanoma 세포에서식 물추출물의항산화력과세포독성은서로긴밀한 관계가있는것으로관찰됐다. 활성산소소거력이 높게나온오가피, 엉거시, 메리골드, 육계등이 00 μg/ml 에서 B16 melanoma 세포에세포독성 을보였고모과역시높은세포증식억제율을보 인반면활성산소소거력이낮은그룹에속하였 던딸기, 미나리, 쑥갓, 파슬리등은 00 μg/ml 농도에서세포독성을보이지않았고세포증식도 이내로활성산소소거력이큰그룹보다그 영향이작았다. 이는 melanoma 세포가낮은수준 의 catalase activity 와 glutathion 을유지하고있 기때문에 melanoma 세포내급격한산화와환 원의환경변화가생기면빨리안정한물질로전
대한피부미용교육학술지제1권제1호 21 환하지못해만성적산화스트레스에시달리며쉽 게손상을입기때문일것으로생각된다 26. 세포독성을보이지않는농도에서멜라닌억제 력을비교해보았을때활성산소소거력이높게 나온오가피, 엉거시, 메리골드등이멜라닌생성 을억제하지못하는것으로나온데반해활성산 소소거력이낮은쑥갓과미나리의멜라닌생성 억제력은뛰어난것으로관찰되었다. 따라서식물 추출물의활성산소소거력과미백효과사이의연 관성은발견할수없었다. 이번실험에서미백효 과를보인식물추출물은활성산소소거를통하는 것보다산화환원에민감한구조인항산화물질 이티로시나제의활성부위인구리이온과결합하 여티로시나제작용을억제하는경로를거쳤을 가능성이높다. 실제로티로시나제활성억제력이 뛰어났던미나리 (00 μg/ml), 쑥갓(00 μg/ml), 라벤더 (0 μg/ml), 모과(00 μg/ml) 가멜라닌생 성억제력도뛰어난것으로관찰되었다. 이들식 물은항산화효과를나타내는다양한성분중에 서티로시나제효소를억제할수있는유효성분 이다량포함되어있을것으로사료된다. 식물추 출물안에는수많은성분들이다양한비율로존 재하고있기때문에어떤효과를가진유효물질 을찾는것은어려운과정이다. 또한식물성분 중효과를나타내는유효물질이하나의성분으로 써단독으로작용할수도있지만여러성분들의 상호작용을통해서만그효과가나타날수도있 다. 따라서보다과학적이고체계적인연구를위 해서는식물추출물의분리정제기술이필요하다. 앞으로식물추출물의분리정제기술과연계하여 각추출물중효과를나타내는유효물질을검색 하고, 검색된유효물질을다시멜라닌세포에실 험하여이들의작용기전을밝히는과정을시행해 야할것으로생각된다. 참고문헌 1. Thbin D, Thody AJ,: The superoxide anion may mediate short but not long term effects of ultraviolet radiation on melanogenesis. Exp Dermatol 3:99-5, 1994. 2. EK Bernadette, D Marianne, P Bernhard. Protective effect against sunburn of combined systemic ascorbic acid(vitamin C) and α -tocopherol(vitamin E). J Am Acad Dermatol 38:45-48, 1998. 3. 이길호, 한방의학백과, 서울출판사, 1993. 4. 장업신문 389 호, 3월 28 일, 2002. 5. 하병조, 화장품학, 수문사, 1999. 6. 김귀정, 유병수, 화장품성분사전, 정담, 1998. 7. Joseph JH: Long term dietary strawberry, spinach, or vitamin E supplementation retards the onset of age related neuronal signal transduction and cognitive behavioral deficts. J Neurosci 1:8047-55, 1998. 8. 문관심, 약초의성분과이용, 일월서각, 1999. 9. Fujita T, Kadoya Y, Aota H, Nakayama M: A new phenylpropanoid glucoside and other constituents of Oenanthe javanica. Biosci Biotechnol Biochem 59:526-8, 1995.. Takenaka M, Nagata T, Yoshida M: Stability and bioavailability of antioxidants in garland (Chrysanthemum coronarium L.). Biosci Biotechnol Biochem 64:2689-91, 2000. 11. Gins VK, Kolesnikov MP, Kononkov PF, Trishin ME, Gins MS: Oxyanthraquinones and flavonoids from garland chrysanthenum. Prikl Biokhim Mikrobiol 36:344-53, 2000. 12. Wang H, Ye XY, Ng TB: Purification of
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