한방재활의학과학회지제 19 권제 3 호 2009 년 07 월 ) JOnlRhbMd 2009;193):15-32 獨活寄生湯및中性瘀血藥鍼이좌골신경압좌손상백서의통증과신경재생에미치는영향 이상규 원재균 염승룡 이수경 송용선 권영달 원광대학교한의과대학한방재활의학과교실 * Th Ec o Dokgng-Duhuoqhng-ng ) nd Jul Phu on Pn Conol nd Nv Rgnon n h Cuh-nducd Scc Nv Injuy o h R Modl Sng-Gyu L, OMD, J-Kyun Won, OMD, Sung-Ryong Yom, OMD, Su-Kyung L, OMD, Yung-Sun Song, OMD, Young-Dl Kwon, OMD Dp o Onl Rhblon Mdcn, Collg o Onl Mdcn, Won-Kwng Unvy Objcv: ThpupoohSudywodnyhcoDokgng-Duhuoqhng-ng)ndJulphuonpnconol ndnvgnoncuhnjuynccnv Mhod: Nuophcpnwnducdbycuh-nducdmodloghccnvAnmlgwdvddolow;GⅠ:nomnconol g,gⅡ :xpmnlgdwhdokgng-duhuoqhng-ng),gⅢ :xpmnlgdwhjul phu,ndgⅣ :xpmnlgdwhdokgng-duhuoqhng-ng)ndjulphuto vlupnnny,chgwobvdpwwhdwlhholdndmmunocvyonhc-obondpcvmnn vhou,,hd,ndhdytovlunvgnon,howobvdsfisccfunconlindx)ndgap-43gowhaocd Pon43)chmnnvnhndhnhdy Rul: 1PwwhdwlhholdohmchnclmulmdhgncndncbwngⅣ ndhconolgvdyohxpmn 2PwwhdwlhholdohhmlmulmdhgncndncbwngⅠ ndⅢ,Ⅰ ndⅣ,Ⅱ ndⅣ 3Inmmunohochmclponoc-o,mp,hmmunocvyolgwdcdgdulyEpcly,gⅣ w obvdhlowhdy 4ThdncoccunconndxnchgwgncnlybwngⅠ ndⅢ,Ⅰ ndⅣ,Ⅱ ndⅣ 14dy,nd bwngⅠ ndⅢ,Ⅰ ndⅣ,Ⅱ ndⅣ,Ⅲ ndⅣ 21dy 5InmmunohochmclponoGAP-43,lghdhghGAP-43mmunocvyh14dyompo-njuyndgⅣ howd hghmmunocvy Concluon: Bdonbovhul,popodhDokgng-Duhuoqhng-ng)ndJulphumybhlpul mnnnuophcpnndnvgnonnmodl Kywod:Dokgng-Duhuoqhng-ng),Julphu,Nuophcpn,Nvgnon 접수 :2009 년 7월 1일, 수정 :2009 년 7월 20 일, 채택 :2009 년 7월 23 일 교신저자 : 권영달, 광주시남구주월동 543-8 번지원광대학교광주한방병원한방재활의학과교실 Tl:062)670-3452,Fx:062)670-6767,E-ml:kwonyd@wokwngck 15
한방재활의학과학회지제 19 권제 3 호 2009 년 07 월 ) Ⅰ 서론 신경계는형태학적으로뇌와척수로구성된중추신경계및신경절과신경섬유로구성된말초신경계로구분되며, 말초신경은압좌 cuh), 압박 compon), 신장 chng) 그리고결출 vulon) 에의해손상받기쉽고, 이때운동신경과감각신경세포의감소, 느리고불충분한축삭생성과중추신경계의지속적인변화를초래하여 1), 결과적으로심한신경병증성통증 nuophcpn) 과더불어감각및운동신경의손상을발생시킨다 2) 신경병증성통증은신경계의일차성병변또는기능이상에의해유발되는통증 3) 으로, 증상의다양성을보여치료에있어기존신경차단중심의방법으로는접근이어려운경우가있으며, 최근에는항경련제 cbmzpn,phnyon), 항부정맥제 mxln), 삼환계항우울제 mpyln) 등과같이이온통로의방전을막는약제 4) 가사용되고있지만진정, 현기증, 운동실조등의부작용이빈번하고, 간의미세효소를유도하여약물대사에영향을주며, 심할경우간독성, 재생불량성빈혈, 혈소판감소증등을수반하는경우가있어 5) 사용에많은제한이따른다 통증과감각장애는한의학적인관점에서는痺證의범주로볼수있는데, 痺證은인체의陽氣陰精不足의內因과風寒濕熱之邪의外因으로인해발병이되며크게實痺와虛痺로구분한다 實痺는風痺, 寒痺, 濕痺, 熱痺, 頑痺로나누고虛痺는氣血虛痺, 陰虛痺, 陽虛痺로나누어實痺는祛邪의治法을, 虛痺는扶正의治法을사용한다 6) 이에저자는신경손상에의한통증치료에서虛實의구분에따른치료가차이가있음을가정하고實證의치법으로活血祛瘀止痛작용이있는中性 瘀血藥鍼을, 虛證의치법으로益肝腎補氣血止痺痛의효능이있는獨活寄生湯을정하여痺證의虛實을망라한효과를살펴보고자하였다 獨活寄生湯은獨活, 桑奇生등 15 종의약물로구성된처방으로備急千金要方 7) 에肝腎兩虧, 氣血不足, 感受風寒濕邪, 腰膝冷痛, 肢節屈伸不利, 或麻痺不仁, 畏寒喜溫을치료한다하여痺證에사용되었고, 특히肝腎陽虛證, 氣血兩虛證을동반한경우多用하며임상에서는坐骨神經痛, 척추나사지의退行性關節疾患, 强直性脊椎炎등에일반적으로응용된다 中性瘀血藥鍼은梔子, 玄胡索, 沒藥, 乳香, 桃仁, 赤芍藥, 丹蔘, 蘇木등의化瘀시키는약물로구성된瘀血治療처방 8) 으로경락학설에의거하여선용된약물을유관부위, 압통점혹은체표에촉진으로나타나는양성반응점에주입함으로써생체의기능을조정하고병리상태를개선시키며, 상처부위가冷한경우에사용하여祛瘀止痛하는溫性瘀血藥鍼이나, 熱이심하고腫脹이있을때에사용하는冷性瘀血藥鍼에비하여비교적性이완만한약재들로구성되어 9) 임상적으로多用한다 신경병증성통증치료를위한신경병증백서모델을이용한연구로오공약침에대한이등 4) 의보고, 상지 桑枝 ) 약침에대한이 10) 의보고, 홍삼에대한김등 11) 의보고, 자하거및수종에대한조 12) 의보고등이있으나獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼이통증조절과신경재생에대한행동학적및분자생물학적인기전에대한명확한연구는없는실정이다 이에, 실험적으로유발된좌골신경압좌손상백서모델을통해獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼을적용하여말초신경손상초기에나타나는통증조절과신경재생에대한효과를기계적자극과열자극에대한반응, 좌골신경기능지수 SccFunconl 16
獨活寄生湯및中性瘀血藥鍼이좌골신경압좌손상백서의통증과신경재생에미치는영향 Indx;SFI),c-o 와 GAP-43 단백질의발현정도를통해알아보고자하였다 Ⅱ 실험재료및방법 1 실험재료및약재 1) 실험동물본실험에서는체중이약 250±50g 의 Spgu- Dwly 계백서 8 주령, 웅성, 대한실험동물 ) 를각군당 35 마리씩할당하여 140 마리를사용하였다 사육실온도는 25±1, 습도 55±10% 를유지하였으며, 명암은 12 시간주기로하였다 고형사료 삼양주식회사,Ko) 와물은자유롭게먹도록하였다 실험군설정은대조군 Conol,n=35), 中性瘀血藥鍼군 JulPhu,n=35), 獨活寄生湯군 Dokgng-Duhuoqhng -ng),n=35), 中性瘀血藥鍼과獨活寄生湯동시적용군 JulPhu+Dokgng -Duhuoqhng-ng),n=35) 으로나누었다 Tbl Ⅰ) 행동반응평가를위한통각역치평가 유발 5시간후,1 일후,3 일후,5 일후 ) 와좌골신경기능지수평가 유발 7일후,14 일후,21 일후 ) 그리고면역조직화학염색검사를위해각시간대에 5마리씩희생시켜표본을제작하여검사하였다 TblⅠ) 2) 약재실험에사용된약재는원광대학교광주한방병원에서구입한후정선해서사용하였고, 獨活寄生湯의구성약물은方藥合編 13) 에수록된처방을근거로하였으나桑寄生은眞品을구하기어 려워斛寄生을대용하였고防風은植防風을사용 하였다 1 첩의분량및생약명은다음과같다 TblⅡ) TblⅠClconoEchG G No Invnon Ⅰ n=20nvcuhnjuywhnomn Nvcuhnjuynd d wh Ⅱ n=20 Julphu Nvcuhnjuynd d wh Pn Ⅲ n=20 Dokgng-Duhuoqhng-ng) Nvcuhnjuynd d wh Ⅳ n=20 Dokgng-Duhuoqhng-ng) ndjulphu Ⅰ n=15nvcuhnjuywhnomn Nvcuhnjuynd d wh Ⅱ n=15 Julphu Nv Nvcuhnjuynd d wh Ⅲ n=15 gnon Dokgng-Duhuoqhng-ng) Nvcuhnjuynd d wh Ⅳ n=15 Dokgng-Duhuoqhng-ng) ndjulphu TblⅡPcponoDokgng-Duhuoqhng -ng) HblNm PhognocNm Amoung) 독활 獨活 ) RdxAlCod 60 백작약 白芍藥 ) RdxPonLclo 60 당귀 當歸 ) RxAnglcGgn 60 곡기생 斛寄生 ) LonhuYdok 60 숙지황 熟地黃 ) RhzomRhmnn 40 천궁 川芎 ) RhzomCnd 40 인삼 人蔘 ) RdxGnng 40 백복령 白茯苓 ) Po 40 우슬 牛膝 ) RdxAchynh 40 두충 杜仲 ) CoxEucomm 40 진교 秦艽 ) RdxGnnMcophyl 40 세신 細辛 ) HbA 40 식방풍 植防風 ) Pucdnum Jponcum 40 육계 肉桂 ) CoxCnnmon 40 감초 甘草 ) RdxGlycyhz 30 TolAmoun 670 2 실험방법 1) 검액의조제 17
한방재활의학과학회지제 19 권제 3 호 2009 년 07 월 ) 獨活寄生湯 10 첩분량인 670g 을 3,000 ml플 라스크에증류수 1,500 ml와함께 120 분가열하 고전탕액을여과지로여과하여 5,000pm 으로 30 분간원심분리하여상청액을취하였다 그후 oyvcuum vpooeyela CoJpn) 에 넣어감압농축한후 zyilshin Co Ko) 로동결건조시켜 13266g 수득율 198%) 을얻어검액으로사용하였다 냉동건조하여분 말로제조한후獨活寄生湯분말을 600 mg / kg씩 증류수에용해하여 1 일 1 회경구투여하였다 2) 藥鍼의조제 中性瘀血藥鍼 JulPhu) 의 4 첩분량 256gTblⅢ) 을세척단계를거쳐 증류수 1250 ml 와배합하여전탕기 pnonc M8GA18M,PnoncJpn) 에 2 시간전탕한후 찌꺼기는따로분리하고, 전탕액을무균실에있 는증류추출기 pujp900,humncopoon, Ko) 에넣고전탕하여 1000ml 의약침액을얻 었다 얻어진약침액을냉각과정을거쳐 045 μm, 02 μm여과지 wmncold,chn) 로 2 회 여과한후멸균된용기에일정용량주입하였고, 밀봉하여멸균기 DBE33B, 신진엔지니어링,Ko) 에다시고압멸균과정을거친후시료를준비하 였다 TblⅢPcponoJulPhu HblNm PhognocNm Amoung) 치자 梔子 ) GdnFucu 7600 현호색 玄胡索 ) CoydlTub 3200 유향 乳香 ) Olbnum 3200 몰약 沒藥 ) Myh 3200 도인 桃仁 ) PcSmn 2300 적작약 赤芍藥 ) PonRdxRub 2300 단삼 丹蔘 ) SlvMlohzRdx 2300 소목 蘇木 ) SppnLgnum 1500 TolAmoun 25600 3) 좌골신경손상유발실험동물의전신마취를유도하기위하여럼푼 Rompun, 바이엘코리아 ) 과염산케타민 Kmn HCL, 유한양행 ) 을 1:1 로혼합하여복강내주사 3 ml / kg ) 하였다 통증유발에대한회피반응유무를통해마취여부를확인한후실험동물을수술대에고정하여, 좌골신경압좌손상을위해우측대퇴부의내측, 후측및외측을削毛하였다 우측후대퇴부의피부를 2cm절개하고주위조직의손상을최소화하여좌골신경을노출시킨후 3단계로힘을가할수있는지혈겸자 hmoc ocp,cl) 를이용하였다 압박시압박이외의자극으로부터손상방지를위하여부드러운플라스틱으로겸자를씌운상태에서압좌를실시하였다 각실험동물에동일한좌골신경손상모델을적용하기위하여지혈겸자끝에서 5mm내측에표시를하여 2단계의힘으로 30 초간동일부위와동일시간에신경을압박하도록하였다 압좌후상처를봉합한후, 감염방지를위한피부소독을실시하여케이지에넣어안정시켰다 4) 獨活寄生湯의투여및藥鍼의적용獨活寄生湯분말을백서 1마리당 600 mg / kg씩 1일 1회경구투여하였고, 中性瘀血藥鍼은좌골신경손상측華陀夾脊穴에 01 ml / 마리씩 1일 1 회주사하였다 5) 통증억제및신경재생효과 1) 유해자극을이용한통각역치평가 1 기계적자극에의한통각과민반응 Touch T TM SnoyEvluo) 백서는바닥이그물철망으로된아크릴상자 20 25 13cm) 에넣고바닥에서 35cm 높게 18
獨活寄生湯및中性瘀血藥鍼이좌골신경압좌손상백서의통증과신경재생에미치는영향 설치한후그아래에경사거울을설치하여동물의행동반응을효과적으로관찰할수있도록하였다 기계적자극은 vonfylmnnoh CoMdclInc,USA) 를수직방향으로세워신경손상을유발한우측발제 3중족골부위에자극하였으며,10,14,20,40,60,80,100, 150 및 260g 의 bndngoc 를갖는 vonfy lmn 로각각 5회자극할때적어도 3회이상능동적으로발을회피하는반응을유발하는최소한의 bndngoc 를찾아서기계적자극에대한회피반응역치 pw whdwlmchncl hhold:pwt,g) 로하였다 14) VonFylmn 의 bndng oc 가백서체중의 10% 를초과하면능동적인회피반응이아니라발과다리전체를수동적으로밀어올리는결과를초래하기때문에 260g 을사용가능최대 bndngoc 로하였다 15) 회피반응은자극시발바닥을들거나, 핥거나, 털거나, 도망가는현상을양성반응으로간주하였다 2 열자극에의한통각과민반응열성통각과민반응평가는 PlnT R 을사용하였고, 실험동물은아크릴상자 20 25 13 cm) 에넣어 5분간안정을시킨후신경손상을유발한우측발아래에적외선열방사장치 열원 50, 족저부아크릴판전도열 46 ) 를위치시켜회피반응을보이기까지의시간을 01 초단위로측정하여 5분간격으로 2회반복회피반응의잠복기를구하였다 회피반응의잠복기는열자극을가한시간부터회피가일어나는시간으로하였고, 조직손상때문에장치의 cu-o 시간은 30 초로하였다 SFI) 는보행궤적분석 wlkngcknly) 으로운동기능의회복정도를평가하는방법으로서, Bn 등 16) 의방법을이용하였다 목재로제작하여보행복도는크게암실 25 12 16cm) 과보행통로 40 8 7cm) 로구성하였고, 족문을얻기위하여바닥에종이를깔았다 족문을얻기위해검정색잉크 잉크, 성림교역, 서울 ) 를백서의양측후족의족저부에바르고, 백서가보행통로를지나암실로들어가도록하여한쪽족문이최소 5개이상분명하게찍힐때까지반복하여보행궤적을분석하였다 보행궤적분석을위한측정변수는 1 뒷꿈치에서발가락끝까지의거리 pnlngh:pl),2 첫번째발가락에서다섯번째발가락까지의거리 opd:ts),3 두번째발가락에서네번째발가락까지의거리 nmdy opd:it) 이며, 본항목들을좌골신경비압좌측 N;Noml) 과좌골신경압좌측 E;Expmnl) 으로하여 NPL,NTS,NIT, EPL,ETS 및 EIT 등의기호로코드화하였다 g1) 각각의변수를신경손상후측정치에서손상전측정치를뺀후손상전측정치로나누어요인값 co) 을구하였다 좌골신경기능지수 SFI) 는 pnlngh coplf),opd co TSF) 및 nmdyopdcoitf) 의 3가지요인값을산출공식에서계산하여운동기능의평가척도로이용하였다 좌골신경기능지수는정상쥐의경우에그수치가 0에근접하고, 완전손상일경우에는 -100 에가까워진다 산출공식은다음과같다 2) 좌골신경기능지수를이용한기능적평가 좌골신경기능지수 cc unconlndx, 19
한방재활의학과학회지제 19 권제 3 호 2009 년 07 월 ) PnlnghcoPLF)=EPL-NPL)/NPL TopdcoTSF)=ETS-NTS)/NTS InmdyopdcoITF)=EIT-NIT)/NIT SFI=-383 PLF)+1095 TSF)+133 ITF)-88 TS PL IT g1thccunconndx PL:pnlngh,TS:opd,IT:nmdyo pd 3) 조직학적검사 간과신장의손상유무를관찰하기위해통상 적인 H & E 염색을실시하였다 Xyln 과알코 올을이용하여탈파라핀과함수과정을거친후 흐르는물에 3 분간수세하였다 Hmoxyln 용 액에 5 분간핵염색후다시수세하여 Eon 용 액으로 3 분간세포질염색을실시하였으며, 알코 올농도순으로탈수과정을거친후 Xyln 을이 용한청명과정을거친다음, 봉입을실시하였다 봉입한조직을광학현미경 OlympuBX50,Jpn) 을이용하여간과신장의조직을관찰하였다 4) 면역조직화학적검사 1 척수표본제작 좌골신경손상유발전, 유발 5 시간후,1 일후, 3 일후,5 일후에각군당 5 마리씩을전신마취 제인럼푼 Rompun, 바이엘코리아 ) 으로복강주사 06 mg / kg ) 하여마취한후, 심장관류를통해 09% NCl 용액으로관류수세하였고, 혈액이제거된후 에 4% 중성파라포름알데하이드 pomldhyd) 로관류하여조직전고정을실시하였다 고정된 실험동물로부터좌골신경 ccnv) 이분지되 는요척수영역을분리한후,24 시간동안 4% 파 라포름알데하이드로후고정을실시하였다 L4, L5 요척수부위를취하여에탄올을이용한탈수 dhydon) 과정과자일렌 xyln) 을이용한청명 clnng) 과정을거쳐파라핀포매 pnmbddng) 를실시하였다 제작된파라핀블록 pnblock) 은미세절단기 Sku2040,Jpn) 을이용하여 5μm두께로절단후슬라이드를제작하였다 2 c-o 및 GAP-43 단백질발현측정통증억제효과검정을위한 c-o 단백질발현정도와신경재생효과검정을위한 GAP-43 단백질발현정도를관찰하기위해면역조직화학법을실시하였다 박절한조직절편은 phophbud lnpbs) 으로여러번세척한후남아있는고정액성분을제거하기위하여 1%odum boohydd 로 1시간처리하였다 면역조직화학염색을위한전처리과정으로 03% 의과산화수소용액에 20 분간처리하였다 다시 PBS 로여러번세척한후 Novon SupABC KNovocLb,BnonLn, UK) 를사용하여 Nomlblockngum 을 20 분간배양하고각각 1:1,000 으로희석한 nc-o 항체 bcm,7963,uk) 와 ngap-43 항체 bcm, 47510,UK) 로 4 에서 24 시간처리한후 PBS 로세척하고희석된바이오티닐이차항체액 dlud bonyld condy nbody oluon) 으로 30 분간배양하였다 다시 PBS 로세척하고 Novon SupABC Rgn 로 30 분간배양하고 PBS 로세척하였다 발색을위해 DABSocLd,BUF021B, UK) 에 10 분간적용후 My'Hmoxyln Sgm,MHS-32,USA) 으로대조염색 counnng) 을실시하였으며, 흐르는물에 5분간수세하고슬라이드표본을건조시킨후통상의탈수과정을거쳐관찰할수있도록봉입하였다 6) 면역조직화학적분석및평가 20
獨活寄生湯및中性瘀血藥鍼이좌골신경압좌손상백서의통증과신경재생에미치는영향 면역조직화학적분석및평가는광학현미경 OlympuBX50,Jpn) 에장착된 CCD 카메라 Foculu,Gmny) 와개인용컴퓨터를연결시켜 Img-popluv40owndowmd cybnc,usa) 를사용하여 c-o 와 GAP-43 의면역반응을관찰하였다 3 통계처리및분석본연구의통계학적분석은 SPSS120vo Wndow R 을사용하였다 각집단간행동반응결과값의측정시기에따른차이를확인하기위하여일원배치분산분석 on-wyanova) 을시행하였고, 사후검정 pohoc) 으로 Tuky HSD 를실시하였다 분석시유의수준은 α=005 로설정하여검정하였다 Tbl ⅣTm Cou ofoowhdwlthhold ohmchnclsmulmongg Tm G hou/dy) Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ p-vul p 238±492 238±492 238±492 238±492 1000 5h 144±036 228±100 216±107 24±089 0337 1d 216±107 32±109 28±109 40±141 0136 3d 48±109 52±179 56±167 72±179 0137 5d 64±167 84±089 88±109 120±274 0001 ) Alvluhowdmn±SD ):gncndncbwnⅠnd Ⅳ,Ⅱ nd Ⅳ,Ⅲ ndⅣ Ⅰ :Conolg Ⅱ :Julphug Ⅲ :Dokgng-Duhuoqhng-ng)g Ⅳ :Julphu+ Dokgng-ng Duhuoqhng-ng)g ) Ⅲ 실험결과 1 獨活寄生湯및藥鍼의통증억제효과 1) 기계적자극에의한통각과민반응통증억제효과에대한분석으로기계적자극에따른통각과민반응에대한분석에서좌골신경손상유발전, 유발 5시간후,1 일후,3 일후까지는군간의차이는없었으나, 유발 5일후 p<0001) 에서군간에유의한차이가나타났다 사후검정에서는유발 5일후에 Ⅰ군과 Ⅳ군,Ⅱ 군과 Ⅳ 군,Ⅲ 군과 Ⅳ군사이에서유의한차이가나타났다 TblⅣ,g2) g2tmcouooowhdwlhholdoh mchnclmulmongg ):gncndncbwnⅠndⅣ,Ⅱ nd Ⅳ,Ⅲ ndⅣ p<0001 2) 열자극에의한통각과민반응 통증억제효과검정으로열적자극에따른통 각과민반응에대한분산분석에서좌골신경손상 유발전과 1 일후에는군간의차이는없었으나, 유발 5 시간후 p<005),3 일후 p<001),5 일후 p<0001) 에서는군간에유의한차이가나타났 다 사후검정에서는유발 3 일후와 5 일후에 Ⅰ 군과 Ⅲ 군,Ⅰ 군과 Ⅳ 군,Ⅱ 군과 Ⅳ 군사이에서 유의한차이가나타났다 TblⅤ,g3) 21
한방재활의학과학회지제 19 권제 3 호 2009 년 07 월 ) Tbl ⅤTm Cou ofoowhdwlthhold ohthmlsmulmongg Tm hou/dy) G Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ p-vul p 286±105 2946±0562912±0982882±117 0730 5h 1232±1261396±0721242±1011388±077 0020 1d 1688±1431814±1511774±0761874±089 0136 3d 1894±0952024±078 213±102 2274±199 0002 ) 5d 2102±1082266±1342386±1282490±129 0001 b) Alvluhowdmn±SD ),b):gncndncbwnⅠndⅢ,Ⅳ,Ⅱ ndⅣ Ⅰ :Conolg Ⅱ :Julphug Ⅲ :Dokgng-Duhuoqhng-ng)g Ⅳ :Julphu+ Dokgng-ng Duhuoqhng-ng)g ) b) 서모든실험군들이강한양성반응을보였고 Tbl Ⅵ,g4), 유발 1 일후에 Ⅲ 군과 Ⅳ 군은 5 시간 후에비해감소된양상을보였다 TblⅥ,g 5) 유발 3 일후에 Ⅰ 군과 Ⅱ 군은 1 일에비해감 소된양상을보였고,Ⅳ 군은현저히감소됨을보 였다 TblⅥ,g6) 유발 5 일후에 Ⅱ 군,Ⅲ 군과 Ⅳ 군은 3 일에비해현저히감소됨을보였다 TblⅥ,g7) TblⅥChngoc-oImmunocvyonJul Phu nd Dokgng-ng Duhuoqhng-ng)nSpnlCodmongG Tm hou/dy) G Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ 5h +++ +++ +++ +++ 1d +++ +++ ++ ++ 3d ++ ++ ++ + 5d ++ + + - -:Ngv,+:Mld,++:Mod,+++:Sv Ⅰ :Conolg Ⅱ :Julphug Ⅲ :Dokgng-Duhuoqhng-ng)g Ⅳ :Julphu+Dokgng-ng Duhuoqhng-ng)g g3tmcouooowhdwlhholdoh hmlmulmongg ),b):gncndncbwn ⅠndⅢ,Ⅳ, Ⅱ ndⅣ *p<005, p<001, p<0001 A B 3) c-o 의면역조직화학반응 통증억제효과검정으로유발 5시간후,1 일후, 3일후,5 일후에척수후각에서 c-o 의면역조직화학법을적용하여조직학적소견을비교관찰하였다 좌골신경손상유발 5시간후 c-o 의면역반응을관찰한결과, 척수후각 RxdⅠ,Ⅱ 영역에 C D g4immunocvywhc-onbodyn5hou A:Conolg,B:Julphu g,c:dokgng-duhuoqhng-ng)g, D:JulphundDokgng -Duhuoqhng-ng)g, 200 22
獨活寄生湯 및 中性瘀血藥鍼이 좌골신경 압좌손상 백서의 통증과 신경 재생에 미치는 영향 2獨活寄生湯의 신경재생효과 1) 좌골신경 기능지수를 이용한 기능적 평가 A B 신경재생효과를 알아보기 위해 기능회복 정도 SFI ) 를 사 를 평가할 수 있는 좌골신경 기능지수 용하였다일원 분산분석에서 좌골신경손상 유발 7일 후에는 군 간의 차이는 없었으나,유발 14일 D C g5i mmuno c v yw hc on body n1dy A:Con olg,b:j ulph u g,c:dok g ng Duhuoq hng ng)g, D:J ulph u nddok g ng Duhuoq hng ng)g, 200 p<0 00 1) 와 21 일 후 p<0 0 01) 에서는 군 간에 후 유의한 차이가 나타났다사후검정에서는 유발 14 일 후에 Ⅰ군과 Ⅱ군,Ⅰ군과 Ⅲ군,Ⅰ군과 Ⅳ 군,Ⅱ군과 Ⅳ군 사이에 유의한 차이가 나타났고, 유발 21일 후에는 Ⅰ군과 Ⅱ군,Ⅰ군과 Ⅲ군,Ⅰ 군과 Ⅳ군,Ⅱ군과 Ⅳ군,Ⅲ군과 Ⅳ군 사이에 유 의한 차이가 나타났다 T bl Ⅶ, g8) A B D C g6i mmuno c v yw hc on body n3dy A:Con olg,b:j ulph u g,c:dok g ng Duhuoq hng ng)g, ulph u nddok g ng D:J Duhuoq hng ng)g, 200 A Tbl ⅦT m Cou osc c Func on I ndx mongg G T m pvul hou /dy) Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ 68 5 2±2 366 7 97±0 8 466 70 ±0 7366 5 0±0 93 0 7d 096 62 9 8±3 325 7 42±1 7 854 08 ±2 6351 3 2±2 73 0 14d 001) 21d 34 8 6±1 463 0 14±1 7 128 49 ±1 7424 8 9±2 13 0 001b) Al lvl u how dm n±sd ): gn c nd nc b w nⅠndⅢ,Ⅳ,Ⅱ ndⅣ b): gn c nd nc b w nⅠndⅢ,Ⅳ,Ⅱ ndⅣ, Ⅲ ndⅣ olg Ⅰ :Con Ⅱ :J o ngo uhyulph u g Ⅲ :Do k hw l g ng ng Duhuo q h ng ng)g Ⅳ :J o ngo uhyulph u + Do k hw l g ng ng Duhuo q h ng ng)g B b) ) D C g7i mmuno c v yw hc on body n5dy A:Con olg,b:j ulph u g,c:dok g ng Duhuoq hng ng)g, D:J ulph u nddok g ng Duhuoq hng ng)g, 200 g8t mc ou o c c u nc on nd x mongg o up ): gn c nd nc b wnⅠndⅢ,Ⅳ,Ⅱ ndⅣ b): gn cnd nc b wn Ⅰnd Ⅲ,Ⅳ,Ⅱ ndⅣ,Ⅲ ndⅣ p <0 001 23
한방재활의학과학회지 제19권 제3호 2009년 07월) 2) GAP-43의 면역조직화학 반응 신경재생 효과를 알아보기 위해 유발 7일 후, A:Con olg,b:j ulph u g,c:dok g ng Duhuoq hng ng)g, D:J ulph u nddok g ng Duhuoq hng ng)g, 200 일 후,2 1일 후에 척수에서 GAP4 3의 면역조 14 직화학법을 적용하여 조직학적 소견을 비교 관찰 하였다 좌골신경손상 유발 7일 후 GAP43 의 면역반 응을 관찰한 결과,Ⅲ군과 Ⅳ군은 약한 양성반응 A B C D 을 보였고,Ⅰ군과 Ⅱ군은 좀 더 약한 양성반응 T bl Ⅷ, g9) 유발 1 4일 후에 Ⅰ 을 보였다 군,Ⅱ군과 Ⅲ군은 7일에 비해 증가된 양상을 보 였고, 특히 Ⅳ군은 현저히 증가됨을 보였다 Tbl Ⅷ, g10) 유발 2 1일 후에 모든 실험군 들이 14 일 후에 비해 강한 양성반응을 보였다 Tbl Ⅷ, g11) g10i mmuno c v yw hgap43n body n14dy A:Con olg,b:j ulph u g ng Duhuoq hng ng)g, g,c:dok D:J ulph u nddok hw l g ng Duhuoq hng ng)g, 200 Tbl Ⅷ Chng o GAP43 I mmuno c v y on Jul Ph u nd Dok g ng Duhuoq hng ng) nsp nlco dmongg G Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ 7d ± ± + + 14d + + ++ +++ 21d ++ ++ +++ +++ ±:Sl gh,+:m l d,++:mod,+++:s v Ⅰ :Con olg Ⅱ :J o ngo uhyulph u g Ⅲ :Do k hw l g ng ng Duhuo q h ng ng)g Ⅳ :J o ngo uhyulph u +Do k hw l g ng ng Duhuo q h ng ng)g T m dy) A B C D g11i mmuno c v yw hgap43n body n21dy A:Con olg,b:j ulph u g ng Duhuoq hng ng)g, g,c:dok D:J ung ong ouhy ulph op unc u nddok g ng Duhuoq hng ng)g, 200 A B 3조직학적 검사 1) 간독성 검사 藥鍼과 獨活寄生湯이 간독성에 미치는 영향을 C D g9i mmuno c v yw hgap43n body n7dy 24 일 후에 간을 추출하여 H 알아보기 위해 유발 21 & E 염색을 통해 변화를 관찰하였다그 결과,
獨活寄生湯 및 中性瘀血藥鍼이 좌골신경 압좌손상 백서의 통증과 신경 재생에 미치는 영향 실험군 모두에서 정상적인 소견을 보여 藥鍼과 獨活寄生湯이 간을 손상시키지 않음을 알 수 있 g1 2) 었다 H & E n,a :Con olg,b :Jul ph u g,c :Dok g ng ng Duhuoq hng ng) g, D : Jul ph u nddok g ng Duhuoq hng ng)g, 100 Ⅳ 고 찰 A B 통증은 국제통증학회 I n n on la oc on 에 따르면 침해수용성 통 o hs udyop n) 증 noc c p v ) 과 신경병증성 통증 n u op h c p n) 으로 나누고 있다침해수용성 통증은 유해 C D g12h ol og cl nd ngol v h21dy H & E n,a :Con olg,b :Jul ph u g,c :Dok g ng ng Duhuoq hng ng) g, D : Jul ph u nddok g ng Duhuoq hng, 100 ng)g 자극이 말초침해수용체를 활성화하여 초래되는 것으로 정의하며,이는 유해자극에 대한 경보와 보호기능으로 이러한 기능을 벗어난 환자의 시달 림은 NS AI D Non o d lan n l mm o yd ug ; 비스테로이드 항염제),op o d 아편유사제)등의 진통제와 신경차단으로 잘 조절할 수 있다반면 에 신경병증성 통증은 신경계통의 손상 등의 1 차 2) 신장독성 검사 적인 병변 또는 신경기능 변화가 원인이 되어 초 藥鍼과 獨活寄生湯이 신장독성에 미치는 영향 래되는 것으로 정의하며,증상의 다양성을 보여 을 알아보기 위해 유발 2 1일 후에 신장을 추출하 치료에 있어 기존 신경차단 중심의 방법으로는 여 H & E 염색을 통해 변화를 관찰하였다그 c b m z p n, 접근이 어렵고,최근에는 항경련제 결과,실험군 모두에서 정상적인 소견을 보여 藥 ph ny o n),항부정맥제 m x l n ),삼환계항우 鍼과 獨活寄生湯이 신장을 손상시키지 않음을 알 울제 m p yl n )등과 같이 이온 통로의 방전 수 있었다 g1 3) 을 막는 약제 가 사용되고 있다 1 7) 4) 신경병증성 통증은 중추신경 손상과 말초신경 손상에 의해 올 수 있고,중추신경손상은 뇌졸중, 다발성경화증,뇌 및 척수의 외상에 의해 초래되 며,말초신경 손상은 말초신경의 일시적 압박이 A B 나 신전에 의해 초래되거나 다발성 신경병증,포 착성 신경병증,대상포진 같은 신경병변에 의해 18) 초래된다 고 알려져 있으나 그 발생기전은 불확 실하여 동물모델을 통해 연구가 진행되고 있다 C D g13h ol og cl nd ngok dny h21dy 신경병증성 통증의 발생 기전을 연구하기 위 19) n n 과 X 의 만성적 압박 한 동물 모델은 B 25
한방재활의학과학회지제 19 권제 3 호 2009 년 07 월 ) 손상모델,Slz 20) 의좌골신경결찰모델,Km 과 Chung 13) 의척수신경결찰모델,DLo 등 21) 의좌골신경동결모델, 총비골신경 commonponl nv) 은남겨두고, 경골신경 blnv) 과비복신경 ulnv) 은손상시킨 L 등 22) 의모델등이있으나본연구에서사용한지혈겸자를이용한압좌손상모델 23) 은손상의정도에대한일관성이있으며실험에대한타당성과신뢰도가높은것으로알려져있으며, 임상에서신경병증성통증환자들에서나타나는통각과민, 이질통및자발통과유사한행동학적징후를보여최근많은연구에이용되는모델 24) 이다 통증과감각장애는한의학적인관점에서는痺證의범주로볼수있는데, 痺證은 素問 痺論 25) 에서 風寒濕三氣雜至合而爲痺也 라최초로언급된후로그원인에대한제가의학설들이종합되어현재痺證의辨證은크게實痺와虛痺로나눈다 實痺의경우주로 內經 의병인분류방법인行痺 風痺 ), 痛痺 寒痺 ), 着痺 濕痺 ), 熱痺, 頑痺 瘀血痺 ) 로나누고, 虛痺인경우임상적으로氣血虛痺, 陰虛痺, 陽虛痺등으로나누었으나 6) 이러한분류방법들은학습을위한기초적인것이고임상에서는복합되어나타나는것이대부분이다 이에저자는痺證의원인을虛實로크게구분하여實痺는祛邪의治法을, 虛痺는扶正의治法을사용한다는전제하에實證의치법으로실용주의적학풍을가진明 淸代의醫家들중王淸任의 醫林改錯, 唐容川의 血證論, 張錫純의 衷中參西錄 에서痺證은屬瘀者가많다고주장한것 6) 에착안하여活血祛瘀止痛작용이있는中性瘀血藥鍼을배정하고, 虛證의치법으로風寒濕痺證에도사용하는등완전한虛證處方이라고할수는없지만 方藥合編 에서虛痺에사용하는處方 26) 으로언급된바이에착안하여益肝腎補氣血止痺痛의효능이있는獨活寄生湯 을배정하여그각각의효과를살펴보고자하였 다 獨活寄生湯은 千金要方 7) 에최초로기재되 어있으며十全大補湯에서白朮을거하고牛膝, 秦凡, 杜冲, 細辛, 獨活, 防風을가한것으로 治 肝腎虛弱, 筋攣骨痛, 脚膝偏枯, 冷痺 라고하여 痺와脚氣, 四肢癱, 腰痛등에사용하였고, 최근 에는腰脊損傷後期 27), 慢性關節炎 28), 坐骨神經痛 29), 中風癱瘓 30), 小兒痲痺 28) 등에사용하여消炎鎭 痛 31), 筋痿縮抑制 32) 등의효과를인정받고있는 약물이다 中性瘀血藥鍼은活血祛瘀止痛작용에解熱, 消炎작용이강화된瘀血치료처방으로 약물을유 관부위, 압통점혹은체표에촉진으로나타나는 양성반응점에주입함으로써생체의기능을조정 하고병리상태를개선시켜주며이전에임상이나 실험적연구에서이용된바로는요통 33), 견비통 34), 경추편타손상 35), 경항통 36), 요각통 37) 등의통 증질환및자궁내막증 38), 골절초기골유합 39), 통 증억제와신경재생에관한실험연구 40) 등이있다 본연구에서사용하는華陀夾脊穴은經外奇穴로 제 1 경추에서제 5 요추까지각극돌기의양방 05-1 촌에위치한다 해부학적으로는극돌기와횡돌기 사이의근육속에있으며혈위의부위가다르므 로근육도다르다 보통삼층으로이루어져있으 며, 천층에는승모근, 광배근이, 중층에는상후거 근, 하후거근이, 심층에는척추기립근, 횡돌극근 등이있다 해당척추분절의내부장기와연관된 효능을가지며, 특히제 11 흉추에서제 2 요추사이 의華陀夾脊穴은요추부, 천추부의질환을치료 하는효능을가진다 41) 華陀夾脊穴의활용범위는 비교적광범위하며대개경맥의분포, 신경근이 나척수분절의분포, 혈위의압통유무와반응물 등을판단해서혈위를선택운용할수있다 특 히 T1 에서 S2 의華陀夾脊穴을이용해서요추부, 26
獨活寄生湯및中性瘀血藥鍼이좌골신경압좌손상백서의통증과신경재생에미치는영향 천골부의질환을치료한다 42) 좌골신경에압좌손상을유발시켰을때정도의차이는있겠으나일반적으로신경내막관 ndonul ub) 의연속성은유지되고축삭은손상되는축삭절단의상태가된다 이경우시간의경과에따라신경손상부위이하로 Wln 변성이라고부르는변성과정이초래된다 43) 백서의경우신경손상후 3-4 일이지나면신경의흥분성이소실되는초기탈신경기가약 1주까지나타나며, 그이후로는전기연접전달 phpcnmon) 기전이나축삭발아를통한신경의자발적인재생과정을거치게된다 44) 본연구에서는좌골신경손상유발후 3주에걸쳐회복양상을추적관찰함으로써, 신경손상후 1주에이르는초기탈신경기로서의통증역치변화와,1주에서 3주에이르는좌골신경재생으로나타나는기능회복의정도를측정하였다 동물실험에서통증정도와진통효과를검사하는방법으로는통각행동을회피하는행동학적검사방법인꼬리회피반응,hopl 검사,VonFy 검사,pnpck 검사,cold pl 검사등과전기생리학적으로신경전도속도를측정하는방법이많이사용되고있으며 45), 말초신경손상후통증반응을평가하는방법들중신경전도속도검사는침습적인방법으로장기간의연구에는적합하지않고 46),DKonng 등 22) 에의해개발된회피검사 whdwl) 는비침습적인방법으로감각신경의회복을평가하는데신뢰성이입증된방법이다 본연구에서는獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼이좌골신경압좌손상으로인한통증이시간대별로어떻게변화시키는지알아보기위해기계적자극과열자극에대한발회피반응의잠복기를측정하였다 기계적자극에따른통각과민반응에대한일원분산분석에서좌골신경손상유발전, 유발 5 시간후,1 일후,3 일후까지는군간의차이는없었으나, 유발 5일후 p<0001) 에서군간에유의한차이가나타났다 사후검정에서는유발 5일후에대조군과獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼동시적용군 p<0001), 中性瘀血藥鍼군과獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼동시적용군 p<0001), 獨活寄生湯군과獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼동시적용군 p<0001) 사이에서유의한차이가나타났다 또한, 열적자극에따른통각과민반응에대한일원분산분석에서는좌골신경손상유발전과 1 일후에는군간의차이는없었으나, 유발 5시간후 p<005),3 일후 p<001),5 일후 p<0001) 에서는군간에유의한차이가나타났다 사후검정에서는유발 3일후에는대조군과獨活寄生湯투여군 p<001), 대조군과獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼동시적용군 p<001), 中性瘀血藥鍼군과獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼동시적용군 p<001) 사이에서유의한차이가나타났고, 유발 5일후에는대조군과獨活寄生湯투여군 p<0001), 대조군과獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼동시적용군 p<0001), 中性瘀血藥鍼군과獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼동시적용군 p<0001) 사이에서유의한차이가나타났다 이는좌골신경압좌손상백서의통증감소에있어서獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼이효과적임을입증하는결과라고할수있다 말초에유해자극을가하면이에대한정보는 Aδ 와 C섬유에의해척수의세포로전송되며, 수분내에척수후각에서 c-omrna 가급격히발현되고,1-2 시간에최고조에이르며, 이러한 c-o 양성신경원의증가는급성유해자극을전달하는척수의 Ⅰ,Ⅱ 층에국한된다고알려져있다 47) 그러나통증을일으키지않는감각자극에의해서는척수후각에서 c-o 가발현되지않는다 48) 본연구에서獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼이 27
한방재활의학과학회지제 19 권제 3 호 2009 년 07 월 ) 좌골신경압좌손상으로인한 c-o 단백질발현을시간대별로어떻게변화시키는지관찰한결과, 압좌손상후 5시간에모든실험군들의척수천층부인 Ⅰ,Ⅱ 층에서 c-o 발현이크게증가하는것을관찰할수있었다 이는통증자극이척수후각으로전해졌기때문으로해석할수있다 대조군은압좌손상후시간이경과함에따라면역반응양성세포수가느리게감소하는반면, 獨活寄生湯군, 中性瘀血藥鍼군, 獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼동시적용군은 c-o 면역반응양성을나타내는세포수의감소를보였고, 獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼동시적용군의 c-o 발현감소가더욱현저함을관찰하였다 말초신경손상초기에 c-o 의발현이급속히증가하였다가獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼의효과에의해 c-o 의발현이감소한것과특히獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼동시투여가효과가있었던것은기계적, 열적자극에대한통각과민반응검사결과와도일치하는결과라할수있고이것은한의학적으로扶正과祛邪의治法을동시에사용하는것이통증의감소에효과적인것으로해석할수있다 한편, 본연구에서는신경재생의초기단계를연구하는데가장적당한방법으로알려진백서의좌골신경압좌손상모델에서회복양상을객관적으로평가하기위하여좌골신경기능지수 SFI) 를이용하였다 49) 이는좌골신경이손상된환측과손상을입지않은건측의발바닥길이의차이를이용하여좌골신경손상의회복정도를측정하는방법으로어두운주행로가정상적인주행형태에대한분석을어렵게하고족흔을얻는과정에서재현성이떨어지는단점이있지만좌골신경의운동기능을평가하기위한보편적인연구방법이다 50) Bn 등 15) 이수정한 SFI 는양측이정상인경우에는 0이고, 환측의좌골신경이완전히손상되었을때는수치가 -100 으로나타나게된다 본 연구에서의각실험군은압좌손상후 7일후에군간차이는확인할수없었으며, 압좌손상후 14 일째와 21 일째에각각유의한차이를나타냈다 p<0001)14 일째에는대조군과中性瘀血藥鍼군 p<005), 獨活寄生湯군 p<0001), 獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼동시적용군 p<0001), 中性瘀血藥鍼군와獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼동시적용군 p<005),21 일째에는대조군과中性瘀血藥鍼군 p<005), 獨活寄生湯군 p<0001), 獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼동시적용군 p<0001), 中性瘀血藥鍼군와獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼동시적용군 p<0001), 獨活寄生湯군과獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼동시적용군 p<005) 에서통계학적으로유의한차이를보였다 따라서실험기간동안獨活寄生湯군, 中性瘀血藥鍼군, 獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼동시적용군에서좌골신경기능지수의감소를확인할수있었으며, 특히獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼동시적용군은다른군에비해현저한차이를나타냈다 GAP-43Gowh-ocd pon) 은신경세포의발생및재생과정동안유전자발현이증가되는단백질로서, 신경세포의가소성과정동안신경말단의발아량을조절하며신경재생의조절자역할을한다 51) GAP-43 은신경세포체에서합성되어성장이일어나는신경말단부위로빠르게운반되어축삭의성장에중요한역할을담당하고, 최종신경세포접합부형성이후에는급격히감소하여신경재생의표식자로이용된다 52) Tzl 등 53) 은 GAP-43 단백질은좌골신경손상후축삭에서분비되고, 축삭성장에중요한영향을미친다는것을입증하였고,Plnng 등 54) 은슈반세포에서 GAP-43 발현은좌골신경손상후급속하게증가한다고보고하였다 본연구에서獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼이좌골신경압좌손상으로인한척수전각에서의 GAP-43 발현을 28
獨活寄生湯및中性瘀血藥鍼이좌골신경압좌손상백서의통증과신경재생에미치는영향 시간대별로어떻게변화시키는지관찰한결과, 좌골신경손상유발 7일후에는獨活寄生湯군과獨活寄生湯中性瘀血藥鍼동시적용군은약한양성반응을보였고, 대조군과中性瘀血藥鍼군은좀더약한양성반응을보였다 유발 14 일후에대조군, 中性瘀血藥鍼군과獨活寄生湯군은 7일에비해증가된양상을보였고, 특히獨活寄生湯中性瘀血藥鍼동시적용군은현저히증가됨을보였다 유발 21 일후에모든실험군들이 14 일후에비해강한양성반응을보였다 이는獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼이운동기능회복을촉진시키고 GAP-43 의발현을증가시켜신경재생에유효함을기능적이고분자생물학적으로증명하는결과이고한의학적으로扶正과祛邪의治法을동시에사용하는것이신경의재생에도효과적임을확인한결과로사료된다 獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼에대한안전성검사로실험종료일에간과신장의조직학적검사결과아무런이상소견은없었고, 정상적인대사가이루어졌음을확인할수있었다 이상의실험결과로獨活寄生湯및中性瘀血藥鍼이좌골신경압좌손상백서에서통증억제와신경재생을촉진시키는데유의한효과가있음을증명할수있었다 Ⅴ 결론 본연구는獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼이좌골신경압좌손상백서모델에서말초신경손상후통증과신경재생에미치는효과를알아본결과, 다음과같은결론을얻을수있었다 1 기계적자극에따른통각과민반응은좌골신경손상유발 5일후 p<0001) 에서군간유 의한차이가나타났다 그중獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼을동시에적용한군이대조군에비해유의한차이를보였다 2 열적자극에따른통각과민반응은좌골신경손상유발 5시간후 p<005),3 일후 p<001), 5일후 p<0001) 에서군간유의한차이가나타났다 그중獨活寄生湯투여군과獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼동시적용군이대조군에비해유의한차이를보였다 3c-o 에대한면역조직화학법을실시한결과시간이경과함에따라면역반응이줄어들었으며특히, 獨活寄生湯및中性瘀血藥鍼을동시에적용한군에서유발 3일째되는날의미있는면역반응이감소됨을확인할수있었다 4 신경재생과관련된행동학적평가에서獨活寄生湯투여군, 獨活寄生湯및中性瘀血藥鍼동시적용군모두대조군에비해유의한차이를보였다 5GAP-43 에대한면역조직화학법을실시한결과실험군들에서 GAP-43 에대한강한면역반응을관찰할수있었고특히,14 일째獨活寄生湯및中性瘀血藥鍼동시적용군에서대조군에비해가장두드러진면역반응이관찰되었다 6 獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼이간및신장독성에미치는영향을알아보기위해가장장기간치료적중재를실시한 21 일군에서간및신장을추출하여 H & E염색을통해조직의변화를관찰한결과대조군및실험 29
한방재활의학과학회지제 19 권제 3 호 2009 년 07 월 ) 군모두에서정상적인소견이관찰되었다 이상의실험결과를통하여獨活寄生湯과中性瘀血藥鍼이좌골신경압좌손상백서모델에서통증조절과신경재생에효과가있음을입증하였고, 특히獨活寄生湯및中性瘀血藥鍼동시적용이뚜렸한효과가있음을확인하였다 추후에임상적인연구가이루어진다면말초신경손상에보다적극적으로사용될수있을것으로생각된다 참고문헌 1RodguzFJ,CbAV,NvoXRgnon nd unconlcovyolowngpphl nvnjuydug Dcovy Tody2004;1 :177-85 2vnMnNLU,BkkJH,HmFPT, HldPJM,Gpn WHExcnng mpov unconl covy nd moo nvconducon vlocyccnv cuh lon n h Ach Phyc Md Rhb1997;78:70-7 3McFln BV,WghA,O'Clghn J, Bnon HA:Choncnuophcpn nd conolbydugpholth1997;75 :1-19 4 이삼로, 김성철, 구성태, 김성남, 황우준, 이건목, 조남근, 임규상 백서에서오공약침이신경병증성통증에미치는영향 대한경락경혈학회지 2004;212):47-67 5Emln G,MlouxJMPhologcl mngmn o plpy: mchnm o con, phoknc dug ncon, nd nw dug dcovy poblinj ClnPholTh1998;36:181-94 6 전국한의과대학심계내과학교실 심계내과학 서울 : 서원당 1999:212,436-47 7 손사막 천금요방 서울 : 대성문화사 1984:166-7 8 대한약침학회 약침요법시술지침서 서울 : 대한약침학회 2000:161-2 9 대한약침학회편저 약침요법총론 서울 : 대한약침학회 1999:284,313 10 이동노 상지약침이좌골신경재생에미치는영향 대한침구학회 1998;151):333-42 11 김영인, 김광진 좌골신경압박에의한신경장애성통증이미치는홍삼의효과 충남의대잡지 1995;222):209-23 12 조현경 자하거및수종의한약재가좌골신경손상시신경재생에미치는효과 대전대학교한의과대학박사학위논문 2005 13 黃度淵 對譯證脈 方藥合編 서울 : 南山堂 1992 :132-3 14Km SH,ChungJMAnxpmnlmodl opphlnuophypoducdbygmnl pnlnvlgonnhpn1992;50 :355-63 15ChplnSR,MlmbgAB,YkhTLEccy opnlnmda cpo ngonm n omln hyplg nd nv njuy vokd lodyn n h JPhol ExpTh1997;280:829-38 16BnJR,McknnonSE,HunDAFunconl vluon o compl cc, ponl, ndpooblnvlonnh PlRconSug1989;83:129-38 17MkyHPpdbyhIASPubcomm onxonomyclconochoncpn: dcponochoncpnyndomnd dnonopnmpn1986;3:1-226 30
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