생물학무기신속진단시약개발 에스디신상택
I. 기업소개 II. 생물학무기신속진단시약소개 III. 연구개발의내용 IV. 시약성능평가 V. 개발의의의
I. 기업소개 - 회사연혁 SD 바이오라인 HIV 1/2 유럽 CE 인증획득 인도지사설립 벤처코리아 2007 년대통령상수상 2007 년 10 월 2008 년 10 월 회사설립 2006 년 4 월 1999 년 2 월 99' 00' 01' 02' 03' 04' 05' 06' 07' 08' 09' 10' 11' 12'
I. 기업소개 - 회사연혁 Alere 와인수합병 세계최초 WHO (Malaria Ag P.f) PQ 완료 이디오피아아프리카지사설립 2011 년 8 월 포브스아시아 3 년연속 200 대유망기업선정 2010 년 1 월 2010 년 12 월 2009 년 9 월 99' 00' 01' 02' 03' 04' 05' 06' 07' 08' 09' 10' 11' 12'
I. 기업소개 - 제품소개 감염성질환진단 암표지자진단 마약오남용진단 성호르몬성진단 세계최초개발 ( 조류독감, 사스, 뎅기항원 / 항체동시진단, 신종인플루엔자진단시약등 )
I. 기업소개 - 생산능력 바이오컨텐츠개발기술확보 원료물질생산 반제품생산 완제품생산
I. 기업소개 - 판매망 세계적인판매망확보 (135 개국 160 개대리점 ) Europe 27 countries Middle 20 countries America 28 countries Africa 42 countries Asia 18 countries
I. 기업소개 - 인증현황 ISO 13485:2003
I. 기업소개 - 인증현황 CE MARK WHO contracts : Malaria contracts : HIV
I. 기업소개 - 전시및세미나
II. 생물학무기신속진단시약소개 SD 제품구성 (1) 사용설명서 1개 (2) 멀티판넬디바이스 25개 (3) 공통반응액 25 bottle (1.5ml/bottle) (4) 검체채취용면봉 25개
II. 생물학무기신속진단시약소개 사용방법
II. 생물학무기신속진단시약소개 국내진단키트개발현황 1) 탄저신속진단키트개발 (2002 년도보건원학술연구용역사업 ) 2) 생물학무기진단키트개발 - 6 종동시탐지키트개발 (2003 년도중기청구매조건부신제품연구개발사업 ) 3) 백시니아바이러스단클론항체개발 (2004 년도보건원학술연구용역사업 ) 4) 생물테러병원체및독소다중키트개발 -9 종동시탐지키트개발 (2005 년도보건원학술연구용역사업 ) 5) 생물독소분석식별기 (BTDS) 개발 ( 국방과학연구소 ) 생물학정찰차장착용생물학무기 10 종동시진단티켓개발
II. 생물학무기신속진단시약소개 해외진단키트개발현황 1) 미국 Alexeter Technologies 사의 BTA KIT 탄저, 부루세라, 야토병, 페스트, 리신, 보툴리눔, SEB 등 6 종래피드진단키트및판독기 2) 미국 New Horizons Diagnostics 사의 SMART KIT 탄저, 콜레라, 야토병, 페스트, 리신, 보툴리눔, 포도상구균 B 독소등 6 종의래피드진단키트및샘플수집기구 3) 미국 Response Biomedical Corp. 사의 RAMP TEST 탄저, 리신, 보툴리눔독소, 폭스바이러스등 4 종형광래피드진단키트및판독기
III. 연구개발의내용 1. 목표탄저포자, 보툴리눔독소 (A, B, E), 리신, 페스트균, 부루세라균, SEB 콜레라균 (O1,O139), 툴라레미아균, 살모넬라및천연두균을동시에검출할수있는다중탐지키트개발 ANT RIC PES SEB SAL BOT CHO FRA BRU SMA
III. 연구개발의내용 2. 세부목표 POCT : 현장에서별도의검사장비없이손쉽게검사가능한래피드 TEST 판넬 : 10종 13작용제 ( 탄저포자, 보툴리눔A,B,E, 리신, 콜레라O1,O139 페스트, 야토병, SEB, 부루세라병, 살모넬라, 천연두 ) TYPE : lateral-flow immunochromatographic assay 시간 : 10-15분 민감도 : 균체인경우 10^4 10^5cfu/mL, 독소인경우 10-50ng/mL 특이도 : 교차반응및방해물질판넬과비특이반응없음 ( 균체인경우 10^8cfu/mL, 독소인경우 100ug/mL) 보존 : 실온에서 2년이상
III. 연구개발의내용 3. 연구개발체계도 질병관리본부 - 균체및독소항원제공 - 평가시험 - 진단키트일선기관보급 SD 생산본부 SD 연구소 SD 품질관리 - 멀티판넬디바이스설계 - 생산공정확립 - 진단키트생산 - 항체개발 - 제제화시험 - 진단키트개발 - 표준검체제조및관리 - 평가시험 - 생산키트품질관리
III. 연구개발의내용 4. 연구개발흐름도 균체및독소항원 자료조사 개발디자인미팅 표준검체제조 면역원준비 항체개발 제제화 멀티판넬디바이스제작 진단키트생산 평가시험 롯트별품질관리
III. 연구개발의내용 5. 연구개발 - 1) 면역원확보 균체및독소들농도성상 탄저 ( Bacillus anthracis ) 보툴리눔 ( Botulinum toxin A ) 리신 ( Ricin ) 포도상구균 B 독소 ( Staphylococcal enterotoxin B ) 부루셀라 ( Brucella abortus ) 페스트 ( Yersinia pestis ) 백시니아 ( Vaccinia virus ) 야토 ( Francisella tularensis ) 콜레라 ( Vibrio cholerae) 천연두 ( Fox virus) 10 9 cfu/ml 0.1 mg/ml 0.26 mg/ml - OD:1.5 10 6 cfu/ml - 10 10 cfu/ml 10 7 cfu/ml - 불활화부유액 투명, 무색액체 투명, 무색액체 투명, 담황색액체 불활화부유액 불활화부유액 불활화부유액 불활화부유액 불활화부유액 불활화부유액 질병관리본부 - 병원체방어연구실 - 장내세균팀 - 간염, 폴리오바이러스팀 - 인수공통감염팀
III. 연구개발의내용 5. 연구개발 - 1) 면역원확보 항원종류 균체 LPS 항원 야토병균, 콜레라균, 부루세라균 독소항원 보툴리눔 (A, B, E), 리신 유전자재조합항원 페스트 F1 항원, 리신항원 균체포자 탄저포자 ( 탄저포자표면항원 ) 균체항원 페스트, 부루세라균
III. 연구개발의내용 5. 연구개발 - 2) 항체개발 Primed B-cell Myeloma cell PEG 세포배양 복강내인젝션 복수생산 HAT selection 복수채취 정제 항체 QC
III. 연구개발의내용 5. 연구개발 - 2) 항체개발 번호 항원 클론개발 1 탄저포자 2002년학술연구용역과제결과물 2 보툴리눔독소 2003년학술연구용역과제결과물 3 야토병균 LPS 특이항체개발완료 ( 클론 20개 ) 4 콜레라균 O1 Inaba, O1 Ogawa, O139 공통항체개발 ( 클론 15 개 ) O1 Ogawa 특이항체개발 ( 클론 20 개 ) O1 Inaba 특이항체개발 ( 클론 10 개 ) O 139 특이항체개발 6 페스트균 F1 특이항체개발 ( 클론 20개 ) 7 부루세라균 B. abortus, melitensis, suis 공통항체개발 ( 클론 10개 ) 8 리신독소 특이항체개발 ( 클론 20 개 ) 9 SEB 특이항체개발 ( 클론 10 개 ) 10 천연두 2004년학술연구용역과제결과물
III. 연구개발의내용 5. 연구개발 - 3) 금접합체개발
III. 연구개발의내용 5. 연구개발 - 4) 제제화 (1) Immuno-Chromathgraphy 의기본원리 골드입자 분석물질 ( 예, 탄저균또는보툴리눔독소등 ) 샘플패드 검사선 대조선 흡습패드
III. 연구개발의내용 5. 연구개발 - 4) 제제화 (2) 표준검체제조 ( 가 ) 종류 양성표준검체 ; 저, 중, 고양성검체 음성표준검체 ; 공통반응액 ( 나 ) 용도 - 제제화시험 (Matching Pair 선별용 ) - 평가시험 ( 민감도, 특이도, 안정성시험용, 타사시약비교시험용 ) - 완제품롯트별품질관리시험
III. 연구개발의내용 5. 연구개발 - 4) 제제화 (3) Matching Test 표준검체를이용하여정제된각항체에대해 matching test를실시하여최적의멤브레인검사선용및금접합체용항체 pair 선별 [Matching Test 실시예 ] C 클론 01 클론 02 클론 03 클론 04 D - 저 중 고 - 저 중 고 - 저 중 고 - 저 중 고 클론 01 - - - - 1+ 1+ 1+ 1+ - - - - - +- 1+ 2+ 클론 02 - +- 1+ 2+ - - - - - +- 1+ 2+ - +- 1+ 2+ 클론 03 - - - - 1+ 2+ 3+ 3+ - - - - - +- 1+ 2+ 클론 04 - +- 1+ 2+ - 1+ 2+ 3+ - +- 1+ 2+ - - - -
III. 연구개발의내용 5. 연구개발 - 4) 제제화 (4) 교차반응시험-Matching test를실시하여선별된검사선용및금접합체용 항체에대해교차반응시험을실시하여특이적클론선별 번호 균체및독소 시험최고농도 1 탄저포자외기타바실러스균 1x10^8cfu/mL 2 보툴리눔독소 (A,B,E) 외 기타클로스트리디움균 100ug/mL 1x10^8cfu/mL 3 부루세라균 (Brcella spp) 1x10^8cfu/mL 4 야토병균 1x10^8cfu/mL 5 콜레라균외기타비브리오균 1x10^8cfu/mL 6 페스트균외기타 Yersinia 균 1x10^8cfu/mL 7 리신 100ug/mL 8 SEB 100ug/mL 9 E. coli 1x10^8cfu/mL 10 H. pylori 1x10^8cfu/mL 11 기타그람음성세균 1x10^8cfu/mL
III. 연구개발의내용 5. 연구개발 - 4) 제제화 (5) 제제화시험 (1) 공통반응액제조시험 ; 완충용액종류및농도별, ph값별, detergent 종류및농도별생물학적및화학적안정제종류및농도별시험을거쳐최적의공통반응액결정 (2) 멤브레인종류 (pore size별 ) 및검사선용항체농도시험 (3) 금접합체패드및샘플패드처리시험 ; 항산화제, 동물혈청등 (4) 금접합체제조시험 - 40nm 크기의금접합체용용액제조 - 금접합체용액 1ml 당항체 10ug씩결합 - K 2 CO 3 용액으로작정 ph 조절후 PEG 용액으로반응정지
IV. 시약성능평가 1. 민감도평가 ( 국립보건연구원병원체방어연구실및 SD 품질관리부 ) 번호 균체및독소 검출한계 1 탄저포자 10^5cfu/mL 2 보툴리눔독소 (A, B, E) 10ng/mL 3 리신 50ng/mL 4 페스트균 10^5cfu/mL 5 부루세라균 10^5cfu/mL 6 SEB 10ng/mL 7 콜레라균 (O1,O139), 10^5cfu/mL 8 툴라레미아균 10^5cfu/mL 9 살모넬라균 10^5cfu/mL 10 천연두균 10^5cfu/mL
IV. 시약성능평가 Anthrax Spore 1x10^5 CFU/ml Botulinum Toxin A 50ng/ml Brucella melitenis 3x10^6 CFU/ml Poxvirus 1x10^5 CFU/ml
IV. 시약성능평가 Ricin 50ng/ml SEB 10ng/ml Tularemia 1 x 10^5 CFU/ml Y. Pestis 1 x 10^5 CFU/ml
IV. 시약성능평가 V. Cholerae O1 Ogawa 1 x 10^5 CFU/ml V. Cholerae O1 Inaba 1 x 10^5 CFU/ml
IV. 시약성능평가 2. 특이도평가 ( 방해물질 ) 번호 방해물질목록 시험최고농도 1 Sucrose 10% 용액 2 BSA 100ug/ML 3 Baking Powder 포화부유액 4 Flour 포화부유액 5 Skim Milk 10% 용액 6 Detergent 원액 7 House Dust 포화부유액 8 Soil 포화부유액 9 Human Serum 5배희석액
IV. 시약성능평가 항목 콜레라 O1 Ogawa 콜레라 O1 Inaba 탄저포자보툴리눔 A 툴라레미아폭스바이러스 음성 1x10^5/ml 음성 1x10^5/ml 음성 1x10^5/ml 음성 1x10^5/ml 음성 1x10^5/ml 음성 1x10^5/ml 검체희석액음성양성음성양성음성양성음성양성음성양성음성양성 탈지분유음성양성음성양성음성양성음성양성음성양성음성양성 밀가루음성양성음성양성음성양성음성양성음성양성음성양성 세제음성양성음성양성음성양성음성양성음성양성음성양성 설탕음성양성음성양성음성양성음성양성음성양성음성양성 애기분음성양성음성양성음성양성음성양성음성양성음성양성 토양음성양성음성양성음성양성음성양성음성양성음성양성 항목 SEB 리신페스트 B. abortus B. melitensis B. suis 음성 10 ng/ml 음성 50ng/ml 음성 1x10^5/ml 음성 1x10^7/ml 음성 1x10^7/ml 음성 1x10^7/ml 검체희석액 음성 양성 음성 양성 음성 양성 음성 양성 음성 양성 음성 양성 탈지분유 음성 양성 음성 500ng/ml 음성 양성 음성 양성 음성 양성 음성 양성 밀가루 음성 양성 음성 양성 음성 양성 음성 양성 음성 양성 음성 양성 세제 음성 양성 음성 양성 음성 양성 음성 양성 음성 양성 음성 양성 설탕 음성 양성 음성 양성 음성 양성 음성 양성 음성 양성 음성 양성 애기분 음성 양성 음성 양성 음성 양성 음성 양성 음성 양성 음성 양성 토양 음성 양성 음성 양성 음성 양성 음성 양성 음성 양성 음성 양성
IV. 시약성능평가 2. 특이도평가 ( 교차반응 ) 번호 균체및독소 시험최고농도 1 탄저포자외기타바실러스균 10^8cfu/mL 2 보툴리눔독소 (A,B,E) 100ug/mL 3 기타클로스트리디움균 10^8cfu/mL 4 부루세라균 (Brcella spp) 10^8cfu/mL 5 야토병균 10^8cfu/mL 6 콜레라균외기타비브리오균 10^8cfu/mL 7 페스트균외기타 Yersinia 균 10^8cfu/mL 8 리신 100ug/mL 9 SEB 100ug/mL
IV. 시약성능평가 3. 외산시약과의비교시험 (1) 미국 NHD 사의 SMART KIT (2) 미국 AT 사의 BTA KIT
IV. 시약성능평가 3. 외산시약과의비교시험 Pathogen B.anthracis ATCC14578 B.anthracis #71 Company SD Smart BTA 1x10 8 cfu + + + 1x10 7 cfu + + +/- 1x10 6 cfu + + - 1x10 5 cfu + +/- - 1x10 4 cfu +/- - - 1x10 8 cfu + + + 1x10 7 cfu + + + 1x10 6 cfu + + +/- 1x10 5 cfu + +/- - 1x10 4 cfu +/- - - C T S SD, Anthrax Kit C T S NHD, Smart Anthrax Kit
V. 개발의의의 1. 국내생물학무기진단 / 탐지키트제작기술의독자성확보 2. 군부대및보건관련기관에검사시약보급 3. 생물학무기공격에대한조기탐지능력구축 4. 향후판독기기개발에적용
감사합니다