대한진단검사의학회지제 26 권제 3 호 2006 Korean J Lab Med 2006;26:192-7 원저 진단면역학 Modified Antigen Capture ELISA 검사를이용한항혈소판특이항체의검출 김현정 오은지 김자영 박연준 한경자 가톨릭대학교의과대학진단검사

대한진단검사의학회지제 26 권제 3 호 2006 Korean J Lab Med 2006;26:192-7 원저 진단면역학 Modified Antigen Capture ELISA 검사를이용한항혈소판특이항체의검출 김현정 오은지 김자영 박연준 한경자 가톨릭대학교의과대학진단검사의학교실 Detection of Platelet Specific Antibodies by Modified Antigen Capture ELISA Test Hyunjong Kim, M.D., Eun-Jee Oh, M.D., Jayoung Kim, M.D., Yeon-Joon Park, M.D., and Kyungja Han, M.D. Department of Laboratory Medicine, The Catholic University of Korea, College of Medicine, Seoul, Korea Background : Autoimmune thrombocytopenia (AITP) is characterized by autoantibody-induced platelet destruction. Although several studies have shown that pathogenic autoantibodies are mainly IgG directed platelet glycoproteins (GP), a platelet GP specific test is not available in clinical laboratories. The aim of this study was to evaluate the clinical usefulness of a Modified Antigen Capture Enzyme-linked immunosorbent assay (MACE) test in the diagnosis of AITP. Methods : We investigated fifty-seven patients who showed a platelet count lower than 100 10 9 /L and underwent a bone marrow examination. They were classified into primary AITP (P-AITP) (n=21), secondary AITP (S-AITP) (n=15), and non-immune thrombocytopenia (NITP) (n=21) by bone marrow findings and clinical diagnosis. Platelet GP (IIb/IIIa, Ia/IIa, Ib/IX, IV)-specific antibodies and anti- HLA class I antibody were detected by MACE test. Results : Among 57 samples, platelet GP specific antibodies were detected in 8 (22.2%) of 36 patients with AITP and 1 (4.8%) of 21 patients with NITP. The specificities were as follows: (n=4), GP Ia/IIa (n=5), GP Ib/IX (n=3) and GPIV (n=2). Of the nine patients with platelet GP specific antibodies, four (44.4%) had more than two platelet GP specific antibodies. The sensitivity, specificity, positive predictive value and negative predictive values of the MACE test for AITP were 22.2%, 95.2%, 88.9%, 41.7%, respectively. A previous transfusion history was associated with a higher detection rate of anti-hla class I antibodies (P<0.05). Conclusions : The MACE test is a convenient method to detect platelet GP specific antibody and is very specific to diagnose AITP. In clinical practice, even though it is not sensitive, the MACE test would be useful in differentiating AITP from NITP. (Korean J Lab Med 2006;26:192-7) Key Words : Autoimmune thrombocytopenia, Modified Antigen Capture ELISA test (MACE), Platelet glycoprotein specific antibody, Antiplatelet antibodies 서 론 접 수 : 2005년 11월 9일 접수번호 : KJLM1900 수정본접수 : 2006년 4월 5일 게재승인일 : 2006년 4월 6일 교신저자 : 오은지 우 137-701 서울시서초구반포동 505 가톨릭대학교강남성모병원진단검사의학과 전화 : 02-590-2221, Fax: 02-592-4190 E-mail: ejoh@catholic.ac.kr * 본연구는가톨릭대학교강남성모병원 2005 년도임상의학연구비의일부지원에의해이루어진것임. 자가면역성혈소판감소증 (autoimmune thrombocytopenia, AITP) 은혈소판당단백 (platelet glycoproteins, PLT GP) IIb/ IIIa, Ib/IX, IV, Ia/IIa 등에대한자가항체가혈소판표면의항원에결합하여세망내피계에서혈소판이파괴되는질환이다 [1]. 항혈소판항체검출을위한방법으로서, 1950년대부터진단에이용된응집, 보체활성은혈소판활성도를측정하여환자혈청내항혈소판인자를검출하며, 예민도와재현성이낮다 [2]. 1970년대에는 192

MACE 검사를이용한항혈소판특이항체의검출 193 혈청내혈소판관련면역글로불린 (platelet associated immunoglobulin, PAIG) 을검출하여예민도를향상시켰으나, 비특이물질에대한위양성이많아특이도가떨어지는단점이있다. 1982년 van Leeuwen 등 [3] 이 AITP 환자의혈소판에서추출한항체가 PLT 에대한항체임을보고한이후, AITP의진단에서당단백 Ib/IX, IIb/IIIa, IV, Ia/IIa 등에대한특이항체검출의중요성과함께혈소판당단백특이항체 (platelet glycoprotein specific antibody, PLT GPsAb) 의검출방법이소개되었다 [4-7]. 대표적인 PLT GPsAb 검출방법은 monoclonal antibodyspecific immobilization of platelet (MAIPA) 로서 AITP 진단을위한특이도가높으나, 검사술식이복잡하고표준화된방법이없어임상검사실에서널리이용되지못하고있는실정이다 [8]. 한편, PLT GPsAb는자가면역혈소판감소증외에도혈소판동종면역에의한혈소판수혈불응증의원인이되기도한다 [9-11]. 저자들은 AITP 환자와비면역성혈소판감소증 (nonimmune thrombocytopenia, NITP) 환자의혈장에서상품화된 kit 인 Modified Antigen Capture ELISA (MACE) 를이용하여 4가지의 PLT GPsAb (glycoprotein IIb/IIIa, Ia/IIa, Ib/IX, IV) 와항- HLA class I 항체를검출하고, 임상적의의를분석하였다. 내원하여골수검사를시행한혈소판감소증환자 57명을대상으로하였고, AITP 36명, NITP 21명으로구분하였다. 36명의 AITP 환자중특발성 AITP (Primary AITP, P-AITP) 군에는 1) 혈소판수가 100 10 9 /L 이하로감소되고, 2) 골수검사에서거핵구수가정상이거나증가된소견을보이며, 3) 이차성면역질환이나약제관련성이없고, 4) B형간염, C형간염, 사람면역결핍바이러스등의감염증거가없는 21명이포함되었다. 이차성 AITP (secondary AITP, S-AITP) 군에는 1) 이차성면역질환이나, 약제, 감염등과관련되어혈소판수가 100 10 9 /L 이하로감소되고, 2) 골수검사에서거핵구가정상이거나증가된소견을보이는 15명을포함하였다. S-AITP 환자의원인질환은바이러스감염 6예, 폐결핵 2예, 전신성홍반성낭창 4예, 류마티스관절염 1예, 기타자가면역성질환 2예였고, NITP 환자 21명의원인질환은급성백혈병 (n=6), 재생불량성빈혈 (n=8), 고형종양의골수침범 (n=4), 골수이형성증후군 (n=2), 다발성골수종 (n=1) 등이었다. 환자의의무기록을조사하여검체채취당시의혈소판수치, 수혈력등을조사하였다 (Table 1). 대상환자가운데항암치료중이었던경우는 6예 ( 급성백혈병 3예, 재생불량성빈혈 1예, 고형종양의골수침범 2예 ) 였고, 골수이식을받은환자는포함되지않았다. 1. 대상 대상및방법 2001 년 1 월부터 2005 년 7 월까지가톨릭대학교강남성모병원에 Table 1. Main features of 57 patients with AITP and NITP AITP P-AITP S-AITP Total NITP N 21 15 36 21 Male:Female 1.1 2.0 1.4 1.6 Age (years)* 52.3±1.9 38.6±9.0 49.2±12.7 63.0±16.0 Platelets count*, 37.0±31.7 57.1±27.0 45.3±31.4 56.5±23.7 10 9 /L Previous transfu- 4 (19.0) 7 (46.7) 11 (30.6) 12 (57.1) sion, N (%) Platelet GP- 5 (23.8) 3 (20.0) 8 (22.2) 1 (4.8) specific antibody, no (%) 2 2 4 0 GP Ia/IIa 2 2 4 1 GP Ib/IX 2 1 3 0 GP IV 1 1 2 0 Anti-HLA class I 11 (52.4) 9 (60.0) 20 (55.6) 21 (100) antibody, no (%) * mean±sd Abbreviations: AITP, autoimmune thrombocytopenia; NITP, non-immune thrombocytopenia; P-AITP, primary autoimmune thrombocytopenia; S- AITP, secondary autoimmune thrombocytopenia; GP, glycoproteins. 2. 방법 MACE kit (GTI, Brookfield, WI, USA) 를이용하여 PLT, Ia/IIa, Ib/IX, IV와 HLA class I에대한특이항체를조사하였다. 대상검체는골수검사당시채취한 EDTA 혈장을이용하였으며, 검사전까지 -70 에보관하였고, 검사직전에해동하여사용하였다. 모든검사는제조사의지침대로하였다. MACE는정상인 platelet Human anti-platelet Cell lysis ALP-labeled antihuman lgg Murine MoAb specific to platelet Fig. 1. Detection of platelet specific IgG antibodies to platelet glycoproteins (GP) IIb/IIIa, Ia/IIa, Ib/IX, IV or HLA class I ( in this example) by MACE assay. Washed platelets were first incubated with human plasma (containing anti-platelet in this sample). The antibody-sensitized platelets were then lysed and the supernatant was added to a microplate precoated with murine monoclonal antibodies (MoAb) specific to platelet GP or HLA class I. Any human IgG bound to the GP or HLA class I antigen were detected with a alkaline phosphatase (ALP) conjugated antihuman IgG and substrate solution.

194 김현정 오은지 김자영외 2 인 의혈소판과환자혈장을반응시킨후용해시켜혈장내의혈소판특이항체에감작된 PLT GP을제조하고, 이를 PLT GPsAb가코팅된 microplate에첨가하여 noncompetitive sandwich ELISA 방법으로혈소판항체를검출하는방법이다 (Fig. 1). 본연구에서는정상인의혈소판을이용하였으나, 환자의혈소판을용해하여이용할경우환자의혈소판에부착된혈소판특이항체검출도가능하다. 1) 혈소판특이항체에감작된혈소판당단백제조정상인 80명의검체를모아제조한혈소판풍부혈장을 cell resuspension and preservative solution으로 1회세척한후 50% 혈소판부유액을만들고, 혈소판부유액 10 L와환자혈장 100 L 를 37 에서 45분간반응시켰다. 세척후에 cell lysis buffer 200 L로혈소판을용해시켜, 혈소판특이항체에감작된 PLT GP 부유액을만들었다. 50% 혈소판부유액은 2-8 에서일주일간보관하면서재사용이가능하다. 2) Modified Antigen Capture ELISA (MACE) PLT, Ia/IIa, Ib/IX, IV와 HLA class I 항원에특이적인마우스단클론항체가각각코팅되어있는 microplate well에 PLT GP 부유액 50 L를접종후 37 에서 45분간반응시켰다. 4회세척후 alkaline phosphatase conjugated IgG 용액 50 L를첨가하여 37 에서 45분간반응시키고, 세척후에기질용액 (p-nitrophenyl phosphate, PNPP) 100 L씩을첨가하여 30분간실온, 암실에서반응시켰다. 반응정지액 100 L를첨가한후 405 nm에서흡광도를측정하였다. 혈소판특이항체각각에대한양성대조와음성대조를검사하였고, 음성대조흡광도의 2배이상의흡광도를보이는검체를양성으로판정하였다. 결 총 57예중 PLT, Ia/IIa, Ib/IX, IV에대한특이항체가한가지라도검출된경우는 9예 (15.8%) 였으며, 항-HLA class I 항체는 41예 (71.9%) 에서양성이었다. PLT GPsAb 양성 Table 2. Characteristics of specific platelet GP antibodies in eight patients with AITP and one patient* with NITP GPIIb/IIIa GPIa/IIa GPIb/Ix GPIV N - - - + 1 - - + - 1 - + - - 1* - + + - 2 + - - - 2 + + - - 1 + + - + 1 Abbreviations: GP, glycoproteins; AITP, autoimmune thrombocytopenia; NITP, non-immune thrombocytopenia. 과 인 9예중 8예는 AITP (8/36, 22.2%), 1예는 NITP (1/21, 4.8%) 환자로서, AITP 환자에서높은빈도를보였으나통계적으로유의한차이는없었다 (P=0.18). 또한 AITP 환자중 P-AITP와 S- AITP 사이에도 PLT GPsAb 양성률의유의한차이는없었다 (23.8% vs. 20.0%, P>0.5) (Table 1). PLT GPsAb가양성인 9예는 PLT (4예), Ia/IIa (5예), Ib/IX (3예), IV (2예) 에대한특이항체로서, 이중 2가지이상의 PLT GPsAb 양성인경우가 4예 (44.4%) 였다 (Table 2). AITP 진단을위한 MACE 검사의예민도, 특이도, 양성예측률, 음성예측률은각각 22.2%, 95.2%, 88.9%, 41.7% 였다. 항-HLA class I 항체는 AITP 환자 36예중 20예 (55.6%) 에서검출되었으며, P-AITP (52.4%) 와 S-AITP (60.0%) 군사이에유의한차이는없었다 (Table 1). NITP 환자의경우, 21명모두에서항-HLA class I 항체가검출되어 100% 의양성률을보였다. 과거수혈력이있는환자 23명과수혈력이없는환자 34명의항-HLA class I 항체양성률은각각 91.3% (21/23), 58.8% (20/ 34) 으로두군사이에유의한차이가있었다 (P<0.05). 수혈력이있는환자 23명중 3명에서항-HLA class I 항체와 PLT GPsAb 가동시에검출되었다. 고찰 AITP 환자에서혈소판항체의검출률은검사에사용되는항원, 검체의종류, 측정방법, 환자의임상상태, 면역억제제의투여, 비장절제술시행여부등에따라 10-97% 까지다양하게보고되고있다 [12-15]. 현재국내에서는혈소판항체의검출을위해간접면역형광법, 효소면역법, 유세포분석기를이용한면역형광법등 [12, 15-20] 이주로이용되고있으며, 특이도와민감도가모두높은통일된검사방법은없는실정이다. 1987년 Kiefel과 McMillan 등 [4, 5] 이혈소판표면당단백과혈소판항체의결정기항원의연관성을밝힌이래 PLT GPsAb 검출을위한다양한방법이소개되었다. 이러한 PLT GPsAb 검출방법으로는각당단백에대한단클론항체를이용한 Immunobead 법, MAIPA, MACE 방법등이있으며, 최근 Fabris 등 [21] 은 AITP 진단을위한 MACE의예민도와특이도를각각 60% 와 97% 로보고하였다. 국내에서는 PLT 와당단백 Ib/IX 에대한단클론항체를이용하여자가제조한 MACE 방법이보고된바있으나 [12, 19], 시간과노력이많이들고검사의표준화가어려워통상적인혈소판항체검사로이용되지못하고있는실정이며, PLT GP Ia/IIa, IV에대한특이항체의검출은보고된바가전혀없다. 본연구에서는혈장에서의 PLT GPsAb 검출을위해상품화된 MACE kit를이용하여 PLT, Ib/IX 뿐아니라 PLT GP Ia/IIa, IV에대한항체및항 HLA class I 항체를검출하고, 임상적의의를분석하였다. 본연구에서혈소판수가 100 10 9 /L

MACE 검사를이용한항혈소판특이항체의검출 195 이하인 57명의혈소판감소증환자의혈장에서 PLT GPsAb를검출한결과, 항-HLA class I 항체의양성률은 71.9% 였고, PLT GPsAb 양성률은 15.8% 로낮았다. 또한 AITP (n=36) 와 NITP (n=15) 군으로구분하였을경우, MACE 검사의 AITP 진단을위한예민도, 특이도, 양성예측률, 음성예측률은각각 22.2%, 95.2 %, 88.9%, 41.7% 로서, 특이도와양성예측률은기존의보고에서와같이우수하였으나 [21, 22], 예민도와음성예측률은매우낮았다. 이는환자의혈청또는혈장으로시행하는간접적인검사방법자체의민감도가낮기때문으로생각되며, 혈장내에서검출되는자가항체는혈소판과먼저결합하고남은여분의항체가검출되는것이므로, 혈소판결합항체를직접법으로측정하는것보다낮은양성률을나타낸다 [12]. 현재국내에서는혈소판보다혈청이나혈장의보존과처리가용이하여혈소판항체검사의검체로많이이용되고있고, 본연구에서도보관된혈장검체를이용하여간접적으로혈소판특이항체를검출하였다. 그러나항체검출률을높이기위해서는환자의혈소판에결합된항체를직접법으로측정하는것이유용하다. 따라서, 본연구에서사용한 MACE kit를이용하여정상인의혈소판풍부혈장대신, 환자의혈소판과혈장을사용하면혈소판결합항체의직접검출이가능하므로, 이에대한추가연구가필요할것으로생각한다. 본연구에서 AITP 환자를 P-AITP와 S-AITP로구분할경우, 각각 23.8% 와 20.0% 의 PLT GPsAb 검출률을보여두군사이에차이가없었으나, Fabris 등 [21] 은 S-AITP에서 P-AITP에비해높은검출률을보고하여본연구결과와차이가있었다. 이는연구대상군의차이와본연구에서의낮은검출률때문으로생각된다. PLT GP 종류에따른특이항체의양성빈도는 PLT GP IIb/IIIa 4예, Ia/IIa 5예, Ib/IX 3예, IV 2예로서 PLT GP의특이성에따른빈도의차이는없었다. PLT GPsAb 양성인 9예중동시에 2가지이상의당단백에대한항체가검출되는경우가 4예 (44.4%) 로서, Fabris 등 [21] 이 MACE방법으로혈소판에부착된항체를검출한결과 (53-54%) 와비슷하였다. 한편, Davoren 등 [23] 은 PakAuto (GTI, Brookfield, WI) 를이용하여, 항체양성혈소판감소증환자 114명중 90명 (79%) 에서 2가지이상의 PLT GP에대한항체를직접법으로검출하였다. 비록특정 PLT GP 에대한항체양성이가지는임상적또는병리학적의의는확실히정립되지않았지만, 본연구결과 에대한항체외에도 GP Ia/IIa, Ib/IX, IV에대한항체가비슷한빈도로검출되었으므로, AITP 진단을위한 PLT GPsAb 검사에는다양한 PLT GP 항원이포함되어야하겠고, 특정당단백에대한혈소판항체양성이가지는임상적의의는추가연구가필요하다고생각한다. 본연구에서항-HLA class I 항체의양성률이 71.9% 로높았고, AITP 환자에서 55.6%, NITP 환자에서 100% 가검출되었으며, 과거수혈력이있는환자에서수혈력이없었던환자에비해항-HLA class I 항체양성률이유의하게높았다. 위재호등 [16] 은수혈력이있는악성질환환자의혈소판항체생성률을 52.5% 로보고하였는데, 본연구에서도 NITP 환자의대부분이혈액종 양환자로서많은양의수혈을받은것과관련이있을것으로추정된다. 한편수혈력이없으나항-HLA class I 항체양성인 20 예 (AITP 11예, NITP 9예 ) 의경우, 수혈이외임신등에의한동종항체또는 non-hla 항체에의한교차반응, 수혈력조사의부정확성등의가능성이있다. AITP의원인인자가항체는 PLT GP에대한항체로알려져있으나, 동종면역에의한동종항체의경우, 60-80% 는항-HLA class I 항체이고일부에서 PLT GPsAb가원인인것으로알려져있다 [9-11]. 따라서, 혈장에서의항-HLA 항체검출은 AITP 와 NITP의감별에는이용이불가능하고, 동종면역에의한혈소판감소증진단및 AITP 환자의혈소판수혈불응증진단에이용될수있을것으로생각된다. 또한, 임신, 수혈력등동종면역가능성이있는환자에서 PLT GPsAb가검출될경우에는자가항체인지동종항체인지의구별이불가능한데, 본연구에서도수혈력이있는 23명중 3명의 AITP 환자에서항-HLA class I 항체와 PLT GPsAb가동시에검출되었다. 이러한예에서는환자의혈소판을이용한직접법으로 PLT GPsAb를검출하면진단에도움이되리라생각한다. 결론적으로 MACE 방법은 PLT GPsAb 검출을위한비교적편리한방법이고, AITP 진단을위한특이도가높으므로임상적유용이가능하리라생각한다. 그러나혈장에서의항체검출률이낮으므로, 예민도의증가를위해혈소판결합항체검출에대한추가연구가필요하다. 요약배경 : 자가면역성혈소판감소증 (AITP) 에서혈소판의당단백에대한 IgG 항체가병인에중요하다. 그러나이에대한측정은검출방법이복잡해널리이용되지못하고있다. 저자들은 AITP 진단을위한혈소판당단백특이항체 (PLT GPsAb) 의임상적유용성을살펴보았다. 방법 : 혈소판수가 100 10 9 /L 이하이며골수검사를시행한환자 57명을대상으로하였다. 골수검사결과와임상기록분석을통해구분된, 일차성혈소판감소증 (primary AITP, P-AITP) 환자 21명, 이차성혈소판감소증 (secondary AITP, S-AITP) 환자 15명, 골수에서생산이감소된비면역성혈소판감소증 (nonimmune, NITP) 환자 21명을포함하였다. Modified Antigen Capture ELISA test (MACE, GTI, USA) 를이용하여, 냉동보관된혈장검체내에서항-, Ia/IIa, Ib/IX, IV 항체 4가지와항-HLA class I 항체를검출하였다. 결과 : 총 57예중 PLT GPsAb는 AITP 환자의 22.2% (8/36), NITP 환자의 4.8% (1/21) 에서양성을보였다. PLT GPsAb 양상은, 4예, GP Ia/IIa 5예, GP Ib/IX 3예, GP IV 2예였다. PLT GPsAb 양성 9예중 4예에서 2가지이상의 PLT GP에대한항체양성이었다. P-AITP와 S-AITP 사이에 PLT-

196 김현정 오은지 김자영외 2 인 sag 양성률의유의한차이는없었다 (23.8% vs. 20.0%, P>0.05). AITP 진단을위한 MACE 검사의민감도, 특이도, 양성예측률, 음성예측률은각각 22.2%, 95.2%, 88.9%, 41.7% 이었다. 수혈기왕력이있는환자에서항-HLA class I 항체의양성률이높았다 (P<0.05). 결론 : MACE 검사는 PLT GPsAb검출을위한편리한방법으로서 AITP 진단을위한특이도가높으므로, AITP와 NITP를구별하는데유용하리라생각된다. 참고문헌 1. Kelton JG and Gibbons S. Autoimmune platelet destruction: idiopathic thrombocytopenic purpura. Semin Thromb Hemost 1982;8:83-104. 2. Warner M and Kelton JG. Laboratory investigation of immune thrombocytopenia. J Clin Pathol 1997;50:5-12. 3. van Leeuwen EF, van der Ven JT, Engelfriet CP, von dem Borne AE. Specificity of autoantibodies in autoimmune thrombocytopenia. Blood 1982;59:23-6. 4. McMillan R, Tani P, Millard F, Berchtold P, Renshaw L, Woods VL Jr. Platelet-associated and plasma anti-glycoprotein autoantibodies in chronic ITP. Blood 1987; 70:1040-5. 5. Kiefel V, Santoso S, Kaufmann E, Mueller-Eckhardt C. Autoantibodies against platelet glycoprotein Ib/IX: a frequent finding in autoimmune thrombocytopenic purpura. Br J Haematol 1991;79:256-62. 6. Hou M, Stockelberg D, Kutti J, Wadenvik H. Antibodies against platelet GPIb/IX, GPIIb/IIIa, and other platelet antigens in chronic idiopathic thrombocytopenic purpura. Eur J Haematol 1995;55:307-14. 7. Cordiano I, Salvan F, Randi ML, Ruffatti MA, Steffan A, Girolami A, et al. Antiplatelet glycoprotein autoantibodies in patients with autoimmune diseases with and without thrombocytopenia. J Clin Immunol 1996;16:340-7. 8. Kiefel V, Santoso S, Weisheit M, Mueller-Eckhardt C. Monoclonal antibody-specific immobilization of platelet antigens (MAIPA): a new tool for the identification of platelet-reactive antibodies. Blood 1987;70:1722-6. 9. Klein HG, Anstee DJ, ed. Mollison s Blood transfusion in clinical medicine. 11th ed. Massachusetts: Blackwell Science, 2005: 570-89. 10. Skouri H, Bettaieb A, Fromont P, Elomri H, Ennabli S, Bierling P. Platelet and granulocyte alloimmunisation in multitransfused Tunisian patients. Eur J Haematol 2005;75:248-51. 11. Rebulla P. A mini-review on platelet refractoriness. Haematologica 2005;90:247-53. 12. Kim HO, Lim HS, Kim MJ, Cho SR, Lee JW, Nahm CH, et al. Detection of platelet antibodies in the thrombocytopenic patients by modified antigen capture ELISA: A comparative study with thrombomatch EIA and flow cytometry. Korean J Hematol 1996;31:373-81. ( 김현옥, 임환섭, 김문정, 조성란, 이정운, 남정현등. 혈소판감소증환자에서혈소판항체검출을위한 Modified Antigen Capture ELISA 방법의적용 : Thrombomatch EIA, Flow cytometry 검사방법과의비교. 대한혈액학회지 1996;31:373-81.) 13. Nomura S, Yanabu M, Soga T, Kido H, Fukuroi T, Yamaguchi K, et al. Analysis of idiopathic thrombocytopenic purpura patients with antiglycoprotein IIb/IIIa or Ib autoantibodies. Acta Haematol 1991; 86:25-30. 14. Hou M, Stockelberg D, Kutti J, Wadenvik H. Antibodies against platelet GPIb/IX, GPIIb/IIIa, and other platelet antigens in chronic idiopathic thrombocytopenic purpura. Eur J Haematol 1995;55:307-14. 15. Han KS, Park MH, Kim HO. Comparison of platelet antibody detection methods. Korean J Blood Transfusion 1991;2:1-9. ( 한규섭, 박명희, 김현옥. 혈소판항체검출법의비교. 대한수혈학회지1991;2:1-9.) 16. Wee JK, Kim KH, Kim AS, Jeong KC, Han JY, Kim JM. A study of platelet antibody by using flow cytometry. Korean J Clin Pathol 1995; 15:317-26. ( 위재호, 김경희, 김아성, 정기철, 한진영, 김정만. 유세포분석기를이용한혈소판항체에관한연구. 대한임상병리학회지 1995;15:317-26.) 17. Kim HO, Kim JJ, Kim HS, Kwon OH, Lee SY. A comparative study of three detection methods for antiplatelet antibodies : ELISA, PSIFT, LCT. Korean J Blood Transfusion 1991;2:11-8. ( 김현옥, 김진주, 김현숙, 권오헌, 이삼열. 혈소판항체검출을위한세가지검사결과의검토 : 효소면역법, 혈소판부유면역형광법, 림프구독성검사. 대한수혈학회지 1991;2:11-8.) 18. Oh DJ, Park MH, Cho HI. Detection of serum platelet antibodies using the microplate enzyme immunoassay. Korean J Hematol 1989; 24:103-11. ( 오덕자, 박명희, 조한익. 효소면역측정법을이용한혈청내혈소판항체검출. 대한혈액학회지 1989;24:103-11.) 19. Um TH, Han KS, Kim DC, Hwang YS, Kim DS, Kim SI. Detection of platelet-specific antibodies employing modified antigen capture ELISA (MACE). Korean J Blood Transfusion 1995;6:123-9. ( 엄태현, 한규섭, 김대철, 황유성, 김두성, 김상인. 변형항원포획효소면역검사법 (MA- CE) 을이용한혈소판특이항체의검출. 대한수혈학회지 1995;6:123-9.) 20. Furihata K, Nugent DJ, Bissonette A, Aster RH, Kunicki TJ. On the association of the platelet-specific alloantigen, Pena, with glycoprotein IIIa. Evidence for heterogeneity of glycoprotein IIIa. J Clin Invest 1987;80:1624-30. 21. Fabris F, Scandellari R, Randi ML, Carraro G, Luzzatto G, Girolami A. Attempt to improve the diagnosis of immune thrombocytopenia by combined use of two different platelet autoantibodies assays (PAIgG and MACE). Haematologica 2002;87:1046-52. 22. Fabris F, Scandellari R, Ruzzon E, Randi ML, Luzzatto G, Girolami A. Platelet-associated autoantibodies as detected by a solid-phase

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