RESEARCH ARTICLE Kor. J. Aesthet. Cosmetol., 아사이베리, 블루베리, 산수유, 오디에탄올추출물의항산화활성도비교분석 임현지 1, 이해진 1,2, 임미혜 1 * 1 대전대학교뷰티건강관리학과, 2 대전대학교동서생명과학연구센터 Antioxidant Activity of Acaiberry, blueberry, Corni, and Mulberry Hyun-Ji Lim 1, Hye-Jin Lee 1,2, Mi-Hye Lim 1 * 1 Department of Beauty & Health Care, Daejeon University 2 Traditional and Biomedical Research Center (TBRC), Daejeon University Abstract The research on the natural objects are increasing recently as the demands and concerns on the antiaging, anti-oxidant, and health rise; and changes in the recognition on the quality of life. An active oxygen, one of the major causes of aging processes, is an oxygen compound that is produced from the normal metabolism of the body cells of animals and plants. This active oxygen is good for body when it is an adequate level, or accelerate aging process by attacking normal cells. An antioxidant substance protects human body from the process of oxidation of active oxygen and delays aging process. Therefore four types of berries; Acaiberry, blueberry, Corni and Mulberry, were purchased after verifying place of origin and used as a specimen extracted and freeze-dried from the reflux condenser using 70 percent ethanol in order to study natural antioxidant substance that is playing a protective roll. Concentration levels of polyphenol and flavonoid of each extract were measured, cytotoxic was reviewed by MTT assay, and antioxidant activities were analyzed using DPPH radical scavenging and ROS scavenging. There were antioxidant activities from the 70 per cent ethanol extracts of Acai berry, Blueberry, Corni and Mulberry. There were entirely no or extremely small quantity of toxicity which leads to the higher possibility of marketable antioxidant product by controlling density of concentration. Keywords: Antioxidant, Acaiberry, Blueberry, Corni, Mulberry 최근삶의질적향상에따른인식변화및아름다움에대한 욕구가증가함에따라, 항산화와항노화에대한관심도같이증 가하고있다. 이와더불어건강에대한관심이동시에높아져 합성재료보다는천연물을선호하고있고, 소비자의요구에따 라천연물을원료로한건강기능식품및기능성화장품등의연 구가증가하는추세이다 (Lee et al., 2011). 자유라디칼 (free radical) 은노화의근본적인원인중하나로, *Corresponding author: Mi-Hye Lim, Department of Beauty & Health Care, Daejeon University, Daehak-no 62, Dong-gu, Daejeon 300-716, Republic of Korea Tel.: +82 42 280 2387, E-mail: beauty@dju.jr Received May 28, 2015; Revised June 26, 2015; Accepted June 27, 2015; Published June 30, 2015 활성산소혹은유리기라고한다. 활성산소는동식물의필연적인대사과정에서발생하는산소화합물로서적정량일경우생체내의살균작용을하기도하며신체내에서자발적으로제어할수있는항산화시스템이작동하고있지만과도하게생성되면생체내의 DNA를공격하여비정상적인세포단백질을형성하게되어인체의노화 (Hong, 2009) 를가속화시키는것뿐만아니라동맥경화 (Moon et al., 2012), 당뇨 (Kwon, 2013) 등의만성질환을유발하게된다 (Yun et al., 2009). 이러한자유라디칼을억제하고, 관련질병을예방하며, 노화를지연시키는물질을항산화제 (Min et al., 2013) 라고하며, 그중대표적인것이천연항산화제인폴리페놀및플라보노이드화합물이다 (Joo, 1988; Kim, 2014). 폴리페놀및플라보노이드특히지질의과산화를방지하며산화적스트레스 (oxidative stress) 와산화물질의원인들을제거하여세포와조직을보호하여만성질환, 성인병, 암등을예방하는데효과가있다 (Kwon, 2013; Heim et al., 2002). www.kosac.or.kr 445
Kor. J. Aesthet. Cosmetol., 아사이베리 (Euterpe oleracea Mart) 는브라질북부아마존열대우림지역인근에서생명의나무라불리며, 인체에유용한단백질과불포화지방산함량이높을뿐만아니라폴리페놀, 안토시아닌, 알파토코페롤, 글루코사민, 퀴닌산, 세로토닌, 노르에페네프린등의활성물질을함유하고있다 (Schauss et al., 2010). 또한항암, 체중감량, 항노화, 소화기능의개선효능에대한연구가보고되어져있다 (Marcason, 2009). 블루베리는북아메리카에서주로재배되며수관크기에따라 high bush blueberry (Vaccinium corymbosum) 와 low bush blueberry (V. angustifolium) 으로분류된다. 비타민 C 함량이감귤보다 1.5배많아과실이생과로이용되는부분외에가공식품소재로써다양하게사용되고있다 (Kim et al., 1996). 오디는한국의중부지방과중국에서주로재배되는낙엽교목인뽕나무의열매이다. 잘익은오디는다량의안토시아닌성분을함유하고있으며, 비타민 C 와구연산을함유하고있다 (Lee et al., 2011). 또한신장과내장그리고간장의기능을좋게하고 (Kwon, 2005), 면역력향상 (Havesteen, 1983) 에도움을주며, 항노화효능 (Kim et al., 1998) 과, 항암 (Yoo et al., 2002), 고혈압 (Lee et al., 2003) 에도효과가있다고보고되어져있다. 산수유 (Cornus officinalis, Corni) 는층층나뭇과에속하는낙엽교목으로한국, 중국, 일본일대에서주로재배되며과육과씨앗은분리하고육질은한약의재료나차에사용한다 (Jeon et al., 2008; Xu, 2004). 산수유에는 gallic acid, loganon, tartaric acid등과같은배당체등이보고된바있고 (Kim, 1999), tellimagrandin 1, tellimagandin 2등의탄닌류성분이함유되어있다 (Guilian et al., 2000). 이와같이베리류에는페놀화합물이풍부하여항산화효과가있는것으로알려져세계적으로많은관심을받고있으며 (Wang et al., 2000), 다양한연구가진행되고있으며본연구에서는아사이베리, 블루베리, 오디, 산수유의항산화효능을비교분석하고자아사이베리, 블루베리, 오디, 및산수유로부터 70% 에탄올로추출물을얻어이들추출물에대한항산화효능을객관적으로비교연구하였으며, 이를토대로하여인체에보다안전하고건강한천연항산화물질의유효성분에대한기초자료를제시하고자하였다. 로여과하였다. 여과액은감압농축하였으며, 농축된용액을동결건조하여실험에사용하기직전에농도에맞게녹여서사용하였다. 2. 총폴리페놀함량측정총폴리페놀함량측정은 Lee 등의방법을참고하여시행하였다 (Lee et al., 2014). 각각의베리를 1 ml에 50% Foiln- Ciocalteu s phenol reagent 0.5 ml를가하여실온에서 3 min 간반응시켰다. 반응용액에 Na 2 CO 3 포화용액 1 ml와증류수 7.5 ml 차례로혼합하여 30 min간정치시킨뒤, 12,000 rpm 에서 10 min간원심분리하였다. 상등액을취해 96 well plate 로옮긴뒤, 760 nm에서흡광도를측정하였다. 총폴리페놀함량은 gallic acid를표준물질로이용하여작성한검량선에따라시료의총폴리페놀함량을구하였으며측정단위로는 GAE (gallic acid equivalent)/g을사용하였다. 3. 플라보노이드함량측정 Flavonoid 함량은 Nieva 등의방법 (Nieva et al., 2000) 을응용하여측정하였다. 각샘플 0.1 ml와 80% 에탄올 0.9 ml 를혼합한혼합물 0.5 ml에 10% aluminium nitrate와 1M potassium acetate 0.1 ml 그리고 80% 에탄올 4.3 ml을가하여실온에 40 min 방치한뒤 415 nm에서흡광도를측정하였으며, quercetin을이용한표준곡선으로부터함량을구하였다. 4. DPPH 라디칼소거능측정 DPPH 라디칼소거능은 Kim 등의방법에의해시행하였다 (Kim et al., 2010). DPPH 용액은 0.2 mm이되게에탄올에용해시켰다. 0.2 mm DPPH 용액과각시료는 125 μl/ mg, 250 μl/ mg, 500 μl/ mg의농도가되게 1:2.5의비율로혼합하였으며, 37, 암실에서 30 min간반응시켰다. 반응후 517 nm에서흡광도를측정하였다. 자유라디칼소거율은아래의식에따라계산하였다. ( 대조군의흡광도-시료첨가군의흡광도 ) 소거율 (%) = 100 대조군의흡광도 1. 실험재료및시료추출본실험에서사용한산수유와오디는원산지가대한민국이며, 아사이베리는브라질, 블루베리는북미가원산지인베리를사용하였다. 각베리는 70% 에탄올을사용하여 4 h동안 60 로환류추출한후각각의추출물을여과지 (Whatman NO. 1) 5. ABTS 라디칼소거능측정 ABTS 라디칼소거능은 Bak 등의방법에의해시행하였다 (Bak et al., 2014). ABTS 용액은 7.4 mm ABTS가되게 2.6 mm potassium persulphate에용해시킨후, 암소에서 16 24 h 동안상온에방치하여양이온 (ABTS +) 을형성시켰다. ABTS + 용액은 734 nm에서흡광도값이 0.7±0.03이되도록희석하였다. 희석된 ABTS + 용액과각시료는 125 μl/ mg, 250 μl/ mg, 500 μl/ mg의농도가되게 1:20의비율로혼합하였으 446 www.kosac.or.kr
베리류에탄올추출물의항산화활성 며, 빛이차단된상온에서 10 min간반응시켰다. 반응후 734 nm에서흡광도를측정하였다. 자유라디칼소거율은아래의식에따라계산하였다. ( 대조군의흡광도-시료첨가군의흡광도 ) 소거율 (%) = (1- ) 100 대조군의흡광도 에 10 µm의 DCF-DA (2,7-diclorofluoresin diacetate) 를첨가하여 15 min 동안 37, 암소에서염색하였다. 염색후차가운 PBS를넣어세척한후 1,200 rpm에서 5 min간원심분리한다음상등액을제거하고다시 PBS 400 μl를넣어부유시켰다. 유세포분석기 (Becton Dickinson, USA) 를이용하여형광강도의세기에따른 ROS 생성변화를분석하였다. 6. 세포배양실험에사용된 RAW 264.7 세포는한국세포주은행에서구입하였으며, 세포배양은 Lee 등의방법을참고하여시행하였다 (Lee et al., 2014). 동결된 Raw 264.7 세포를해동시킨후 50 ml 튜브에옮기고, PBS 9 ml을넣어세포를부유시킨뒤 1,200 rpm에서 5 min간원심분리하여상등액을제거하였다. 세포가있는튜브에 10% FBS와 1% 항생제로조성된 DMEM 배지 1 ml을넣어부유시켰다. 100 mm dish에 9 ml의배지를넣고, 부유시킨세포 1 ml을넣어세포배양기 (37, 5% CO 2 ) 에서배양하였다. 1. 총폴리페놀함량각각의베리추출물의총폴리페놀함량은 3회이상반복측정하였으며, 그결과아사이베리는 83.8 mg GAE/g ext ( 이하 mg/g), 블루베리는 12.1 mg /g, 산수유는 37.9 mg /g, 오디는 19.2 mg /g으로나타났다 (Table 1). 이결과로부터네가지베리류중아사이베리의총폴리페놀함량이가장높은것을알수있었다. 7. 세포독성측정시료의세포독성을측정하기위하여 Skehan 등의방법으로 MTT assay를시행하였다 (Skehan et al., 1991). 배양된 RAW 264.7 세포는 24 well plate에서 well당 2 10 5 cells/ml 로이식하였으며 37, 5% CO 2 조건아래 24 h동안배양한다음 125 μg/ml 250 μg/ml 및 500 μg/ml의농도로각각의베리를농도별로나누어처리하고 24 h 배양하였다. 여기에 10 μl 의 cell viability solution을처리하고 30 min간반응시킨다음 450 nm에서흡광도의변화를측정하여대조군에대한세포생존율을백분율로표시하였다. 8. 활성산소종생성측정활성산소를측정하기위해 Kim 등의방법을참고하여시행하였다 (Kim et al., 2014). 세포에서 ROS (reactive oxygen species) 를측정하기위하여 Raw 264.7 세포를 12 well plate 에 2 10 5 cells/well이되게분주하였다. 24 h 동안배양한후, 베리시료각각을 100 μg/ml의농도와 LPS 1 μg/ml의농도를처리하여 24 h 동안배양하였다. 배양후세포를모두걷어원심분리후모은세포를차가운 PBS로 2회세척하였다. 세포 2. 플라보노이드함량각각의베리의총플라보노이드함량은 3회이상반복측정하였으며, 그결과아사이베리는 19.4 μg quercetin/ mg ( 이하 μg/ mg ), 블루베리는 21.3 μg/ mg, 산수유는 9.3 μg/ mg, 오디는 12.0 μg/ mg으로나타났다 (Table 2). 이결과로부터네가지베리류중블루베리의플라보노이드함량이가장높은것을알수있었다. 3. DPPH 라디칼소거능각베리류추출물들의 DPPH 라디칼소거율을측정한결과, 각추출물의 125 μg/ml, 250 μg/ml, 500 μg/ml의농도에서각각아사이베리는 42.1%, 50.8%, 59.4% 로나타났고, 블루베리는 25.7%, 28.9%, 32% 였으며산수유는 70.1%, 73.8%, 77.5% 였고오디는 36%, 49%, 62% 의 DPPH 소거능을나타내었다 (Figure 1). 이때대조군으로사용한 BHA는 10 μg/ml, 50 μg/ml, 100 μg/ml, 125 μg/ml, 250 μg/ml 및 500 μ g/ml의농도에서각각 83.9%, 93.3%, 94.1%, 96.7%, 99.6% 및 100% 의 DPPH 라디칼소거능을확인할수있었다. 이상의결과로부터 DPPH 라디칼소거능의경우산수유추 Table 1. The total phenolic contents of four types of berries Samples Total phenolics ( GAE (gallic acid equivalent)/g ext.) Acaiberry 83.8 2.6 Blueberry 12.1 0.8 Corni 37.9 1.0 Mulberry 19.2 3.5 Table 2. The total flavonoid contents of four types of berries Samples Total flavonoid contents ( g quercetin/ ) Acaiberry 19.4 0.6 Blueberry 31.3 0.3 Corni 9.3 0.2 Mulberry 12.0 0.1 www.kosac.or.kr 447
Kor. J. Aesthet. Cosmetol., Cell viability (%) 120 100 80 60 40 20 0 125 or 2.5 ( / ) 250 or 5 ( / ) 500 or 10 ( / ) Acaiberry Blueberry CorniM ulberry DPPH radical scavenger activity (%) 120 100 80 60 40 20 0 Acaiberry Blueberry Corni Mulberry BHA 01 05 01 00 1252 50 500 Concentration (ul/ml) Figure 1. The DPPH free radical scavenging activity of acaiberry, buleberry, corni, mulberry, and BHA. Figure 3. Effect of 70% ethanol extracts of acaiberry, buleberry, corni and mulberry on cell viability of RAW 264. 7 cell. ROS production (% of control) 120 100 80 60 40 20 0 125 or 2.5 ( / ) 250 or 5 ( / ) 500 or 10 ( / ) NorC on Acaiberry Blueberry CorniM ulberry BHA ABTS radical scavenger activity (%) 120 100 80 60 40 20 0 Acaiberry Blueberry Corni Mulberry BHA 01 05 01 00 1252 50 500 Concentration (ul/ml) Figure 2. ABTS radical scavenging activity of acaiberry, buleberry, corni, mulberry, and BHA. 출물이가장높았으며그다음으로아사이베리, 오디, 블루베리 순인것을알수있었다. 4. ABTS 라디칼소거능 각추출물의 ABTS 소거율을측정한결과, 각추출물의 125 μg/ml, 250 μg/ml, 500 μg/ml 의농도에서각각아사이베 리는 26.9%, 56.2%, 83.1% 로나타났고, 블루베리는 15.6%, 28.8%, 59.8%, 산수유는 51.6%, 71.7%, 90.5%, 오디는 20.3%, 40.1%, 61.8% 의 ABTS 소거능을나타내었다 (Figure 2). 이때대조군으로사용한 BHA 는 10 μg/ml, 50 μg/ml, 100 μg/ml, 125 μg/ml, 250 μg/ml 및 500 μg/ml 의농도 에서각각 83.9%, 93.3%, 94.1%, 96.7%, 99.6% 및 100% 의 ABTS 라디칼소거능을확인할수있었다. 이상의결과로부터 ABTS 라디칼소거능의경우에산수유가 가장높았으며그다음으로아사이베리, 오디, 블루베리순인 것을알수있었다. 5. 세포독성 각시료에대한세포독성을확인한결과본실험에서추 Figure 4. Effect of 70% ethanol extracts of acaiberry, buleberry and corni, mulberry on the ROS product in RAW 264. 7 cells treated with LPS. 2.5, 5 and 10 μg / ml of BHA were compared as a control respectively. 출된시료의세포독성은미미하거나없는것으로나타났다 (Figure 3). 6. 활성산소종 (ROS) 생성억제 ROS 생성억제를확인한결과 125 μg/ml, 250 μg/ml, 500 μg/ml 의각추출물농도에서아사이베리추출물은 27.2%, 30.4%, 34.6% 의활성산소종생성이억제하였으며, 블루베리 추출물의경우 17.3%, 23.7%, 30.2% 로억제하였고산수유추 출물의경우 19.6%, 23%, 25.8% 억제하였고, 오디추출물의 경우에 16.7%, 24.2%, 38.5% 의활성산소종생성억제율울나 타내었다 (Figure 4). 이때양성대조군으로사용한 BHA 의경 우 2.5 μg/ml, 5 μg/ml, 10 μg/ml 의농도에서각각 57.9%, 69.0%, 70.8% 의활성산소종생성억제율을나타내었다. 이상의결과로부터활성산소종의생성억제율의경우에는추 출물간에다소미세한차이를보엿으며그중에서아사이베리 추출물의활성산소종생성억제율이가장높은것을알수있 었으며경미한차이이지만산수유, 블루베리, 오디의순으로 활성산소종생성억제율을나타내는것을알수있었다. 448 www.kosac.or.kr
베리류에탄올추출물의항산화활성 대부분의천연항산화물질들은나무, 열매, 줄기, 뿌리, 잎, 꽃등의천연물에존재하며주로페놀성물질로알려져있다 (Joo, 1988). 대표적인페놀성물질은식물에함유되어있는 2 차대사물질로 phenolic hydroxyl기를가지고있으며, 천연항산화효능을갖는다 (Cuvelier et al, 1998). 또한암을비롯하여성인병등의질병예방에도움을주는것으로보고되고있다 (Kwon, 2013). 산수유는 tannin성분이함유되어떫은맛을내는데 (Kim et al., 2003), polyhydroxyl phenol로서가열시에는가수분해되는 hydrolyzable tannin은 polyol구조로당류의 hydroxl기에 gallic acid와 ellagic acid와같은 phenol기가결합된형태로되어있다고보고되어있고 (Fechtal, 1996), gallic acid의항산화와항염증등과관련된연구가많이보고되어있다 (Jeon et al., 2008). 현재합성항산화제로는 BHA (butylated hydroxy anisol), BHT (butylated hydroxy toluene), Propylgallate 등을주로사용하며, 산화방지효능과경제성은우수하다는장점이있는반면에장기적으로복용하였을때는간비대증을유발시키거나세포대사의원활한흐름을방해한다는부작용이보고되어있다 (Aruoma, 1998). 따라서실험적으로안전성이입증된천연항산화제에대한개발이점차적으로요구되고있다 (Kim et al., 2010). 본연구에서는페놀화합물이풍부하여항산화효과가있는것으로알려진베리류의항산화능을확인하기위한시도의일환으로아사이베리, 블루베리, 산수유및오디를이용하여각각의베리의항산화효능을측정하였으며, 베리들의항산화효능을비교함으로써천연항산화물질개발에있어서기초적인자료를제시하고자하였다. 아사이베리, 블루베리, 산수유및오디의각열매의항산화활성을비교분석하기위하여각시료를열수추출법과 70% 에탄올추출법으로추출하여각분획에서추출되는추출물의항산화활성을 DPPH 라디칼소거능에의해비교해본결과에탄올추출물의항산화활성이월등하게높은것을확인할수있었으며 (Lim, 2013) 이로부터베리류의항산화활성비교분석은 70% 에탄올추출물로시행하기로하였다. 한편항산화물질의대표성분인총폴리페놀의함량이증류수추출법에비하여에탄올추출법으로추출하였을때비교적높게나타낸다는선행연구가있었으며 (Jeon et al., 2008), 유기농녹차의총페놀함량을다양한용매를이용하여추출하였을때열수추출물에비하여유기용매의추출물이높은것으로보아 (Park et al., 2009) 본실험의에탄올추출시료가항산화실험에합당할것이라는점을뒷받침하고있다. 각열매들의 70% 에탄올에추출물로부터항산화성분인폴리페놀및플라보노이드성분의농도를분석한결과총폴리페 놀의경우오디가비교적높은폴리페놀함량을나타냈으며, 아사이베리, 블루베리, 산수유순으로폴리페놀의함량을나타내었다. 그러나플라보노이드의경우아사이베리가가장높은함량을나타내었고블루베리, 산수유, 오디가함량을나타내었다. 이러한결과로보아각추출물에대한폴리페놀함량이높을때플라보노이드함량이반드시큰값을나타내지않고, 플라보노이드함량이높을때폴리페놀함량이반드시큰값을나타내는것이아니라는연구결과와유사하다 (Kim et al., 2012). DPPH는보라색의안정화된자유라디칼로써항산화제와반응하게되면보랏빛이노란색으로탈색되는데, 이원리를이용하여천연물의라디칼소거능을측정한다 (Kim et al., 2010). 4 종의베리를비교한결과 125 μg/ml, 250 μg/ml, 500 μg/ ml의농도모두에서모두농도의존적인 DPPH 라디칼소거능을확인할수있었으며특히산수유의경우가장높은 DPPH 라디칼소거능을나타내는것을확인할수있었다. ABTS 라디칼소거능실험은 potassium persulfate와 ABTS 가반응하여생성된양이온 ABTS cation 라디칼이항산화제와만나면반응하는원리를이용한것으로, 청녹색인 ABTS 용액이항산화물질에의해라디칼이소거되어탈색되는정도를측정하는방법이다 (Park et al., 2013). 본연구에서아사이베리, 블루베리, 오디및산수유의 DPPH 라디칼소거능은모든베리에서농도의존적인라디칼소거능이나타났으며, 이중산수유가가장높은 ABTS 라디칼소거능을나타내는것을확인할수있었다. 선행연구에서산수유추출물의 DPPH 라디칼소거능은동량의비타민 E 보다우수하고, 환원력또한비타민 E 에비해 24배이상높아효과적인항산화작용을일으킬수있다고이미보고되어있으며 (Lim, 2010), 산수유에탄올추출물은다른일부생약재들에비해비교적높은함량의폴리페놀과플라보노이드를함유하고있다고하였고 (Jeon et al., 2008) 산수유의산화안정성이높고보고된바있어 (Kim et al., 1997) 본연구결과를뒷받침해주고있다. 아사이베리, 블루베리, 오디및산수유의세포독성을측정한결과에서오디는미미한독성을나타내었지만안전농도에포함된다고판단되어세포상의 ROS 감소를 125 μg/ml, 250 μ g/ml, 500 μg/ml의농도추출물에대하여측정하였다. ROS 는원자와분자가짝을이루지못하여남은전자가안정함을유지하기위해환원력이높아져반응성이높은상태가되는것을말하며 (Jang et al., 2010), 활성화된전자는인체내에서세포를파괴하고, 과산화지질생성및단백질손상등의영향을끼치게되며 (Kim et al., 2012), 암을비롯하여만성염증과혈관질환등의원인이된다 (Kwon, 2013). 대식세포주인 RAW 264.7 세포에서아사이베리, 블루베리, 산수유및오디시료의 ROS 생성감소능을확인한결과, 대조군을 100% 로하였을때, 베리추출물의 ROS 감소율은농도에따라모두유의성있는감 www.kosac.or.kr 449
Kor. J. Aesthet. Cosmetol., 소를나타내어전체적으로감소율이높은것으로나타났다. 특히 125 μg/ml와 250 μg/ml에서는아사이베리, 500 μg/ml 에서는오디가비교적 ROS 생성억제율이높은것으로나타났다. 산수유의경우 DPPH와 ABTS 라디칼소거능측정에서는가장소거율이높게나타났으나, ROS 생성억제율의경우네종의베리중가장낮게나타나항산화시스템에따른항산화물질의작용기작에대한연구가추후진행되어야할것으로사료되었다. 이상의결과로부터아사이베리, 블루베리, 산수유및오디의 70% 에탄올추출물은 DPPH 라디칼소거능, ABTS 라디칼소거능및 ROS 생성감소율측면에서모두항산화효능이있다는것을확인할수있었으며특히산수유의경우 DPPH 및 ABTS 라디칼소거능의활성이높았고, ROS의생성억제율은오디의추출물이가장높은것을확인할수있었다. 이결과는향후베리를이용한항산화제개발에있어서유용한자료가될수있을것이라고사료되는바이다. 본연구는항산화제개발에있어서아사이베리, 블루베리, 산수유및오디의항산화효능을객관적으로검증하기위해시행되었으며, 추출물의폴리페놀과플라보노이드성분의함량을측정하였고, 세포독성을확인하여세포상의 ROS 생성감소율을확인하여다음과같은결과를얻었다. 폴리페놀함량의측정에서비교적아사이베리, 산수유, 오디, 블루베리순서로높은함량을나타냈으며, 플라보노이드의경우는블루베리, 아사이베리, 오디, 산수유의순서로높은함량을나타냈다. DPPH와 ABTS 라디칼소거율은대조군으로사용된 BHA 의라디칼소거율에미치지는못하지만산수유, 아사이베리, 오디블루베리순서로높은소거율을나타냈으며, 각각의베리는농도에따라라디칼소거율이높은것으로나타냈다. 아사이베리, 블루베리, 산수유및오디의세포독성은 125 μg/ml, 250 μg/ml, 500 μ g/ml의농도에서미미하거나나타나지않았으며, 대식세포주의 ROS 생성감소율측정에서위의농도를측정하였다. ROS 생성감소율측정결과, 125 μg/ml, 250 μg/ml의농도에서는아사이베리가감소율이높았으며, 500 μg/ml의농도에서는오디의감소율이높았다. 그러나각베리의 ROS 감소율을비교하였을때, 큰차이를나타내지않았으며, 모든농도에서유의성있는감소를나타내었다. 결과적으로아사이베리, 블루베리, 산수유및오디추출물은항산화활성을나타내고, 실험상세포에대한독성여부도안전한것으로나타났으며추후여러가지기능성항산화가공품이나기능성화장품품질의특성을증진시키는소재로써활용가능할것으로기대되는바이다. Aruoma OI. Free radical, oxidative stress and antioxidants in human health and disease. J. Am. Oil Chem. Soc., 75: 199-212, 1998. Bak JW, Kang RY, Lee HJ, Kim DH. Effect of Cheongungdajosan-gamibang on oxidative damage and inflammation. Kor. J. Herbology, 2961-67, 2014. Cha WS, Shin HR, Park JH, Oh SL, Lee WY, Chun SS, Choo JW, Cho YJ. Antioxidant Activity of Phenol Compounds from Mulberry Fruits. Kor. J. Food Preserv., 11: 383-387, 2004. Cuvelier ME, Richard H, Berset C. Antioxidative activity of phenolic composition of pilot plant and comercial extracts of sage and rosemary. J. Am. Oil Chem. Soc., 73: 645-652, 1998. Fechtal M, Garro Galvez JM, Riedl B. Gallic acid as a model of tannins in condensation with formaldehyde. Thermochimica Acta., 274: 149-163, 1996. Guilian T, Zhang T, Yang F, Ito Y. Saparation of Gallic Acid from Cornus officinalis Siebnet Zucc by high Speed Counter Current Chromatography. J. Chromatogr., A: 886, 309, 2000. Havesteen B. Flavonoids a class of natural products of high pharmacological potency. Biochegm. Pharmacol., 32: 1141-1145, 1983. Heim KE, Tagliaferro AR, Bobilya DJ, Flavonoid antioxidants: chemistry, metabolism and structureactivity relationships. J. Nutr. Biochem., 13: 572-584, 2002. Hong JK. A Study on Skin Aging Caused by Free-Radical and on Efficacy of Antioxidant Vitamins. Kor. J. Aesthet. Cosmetol., 7: 51-62, 2009. Jang JB, Park OR, Yun TE. Review: Free Radicals, Physical Performance, Aging and Antioxidants. Korean J. Ideal Body Meridian Pathways, 2: 19-27, 2010. Jeon YH, Kim MH, Kim MR. Antioxidative, Antimutagenic, and Cytotoxic Activities of Ethanol Extracts from Cornus officianalis. J. Korean Soc. Food Sci. Nutr., 37: 1-7, 2008. Joo HK. Study on development of tea by utilizing Lycium chnense and Cornus officinalis. Kor. J. Dietary 450 www.kosac.or.kr
베리류에탄올추출물의항산화활성 Culture, 3: 377-383, 1988. Kim HL, Kim HD, Kim JG, Kwack YB, Choi YH. Effect of organic substrates mixture ratio on 2-yearold highbush blueberry growth and soil chemical properties. Kor. J. Soil Sci. Fert., 43: 858-863, 2010. Kim EJ, Choi JY, Yu mi, Kim MY, Lee SH, Lee BH. Total polyphenols, Total Flavonoid Contents, and Antioxidant Activity of Korean Natural and Medicinal Plants. Kor. J. Food Sci. Technol., 44: 337-342, 2012. Kim HS. Quality Characteristics and Antioxidant Activities of Muffins with the Acaiberry (Euterpe oleracea Mart.) powder. Sejong University, Master s Thesis, 25-26, 2012. Kim NY. Effect of Antioxidation and Inhibition of Melanogenesis from Scutellaria baicalensis Extract. Kor. J. Aesthet. Cosmetol., 12: 41-47, 2014. Kim SY, Park KJ, Lee WC. Antiinflammatory and antioxidative effect of Morus spp. fruit extract. Kor. J. Medicinal Crop. Sci., 6: 204-209, 1998. Kim TW, Kwon YB, Lee JH, Yang IS, Youn JK, Lee HS, Moon JY. A study on the antidiabetic effect of mulberry fruits. Kor. J. Seri. Sci., 38: 100-107, 1996. Kim ES, Jang HD, Kim GN. Anti-oxidative Function of Fisetin and Its Potential as an Anti-oxidant Nutri- Cosmetics. Kor. J. Aesthet. Cosmetol., 10: 515-521, 2012. Kim YD, Kim HK, Kim KJ. Analysis of nutritional components of Cornus officianalis. J. Korean Soc. Food Sci. Nutr., 32: 785-789, 2003. Kim YE, Lee YC, Kim HK, Kim CJ. Antioxidative effect of ethanol fraction for several Korean medicinal plant hot water extracts. Kor. J. Food Nutr., 10: 141-144, 1997. Kim YH. Isolation of constituents from the fruits of Cornus officinalis. Siebold, 14: 282-292, 1999. Kwon HN. Comparison of Antioxidant Effects of the Nano-encapsulated and Ethanol Extracts from Mulberry(M. alba L.) Root bark. Kor. J. Aesthet. Cosmetol., 11: 617-622, 2013. Kwon YJ. Antioxidant Activity of Phenolic Compounds isolated from Mulberry (Morus sp.) Fruit. Catholic University of Daegu, Master s Thesis, 2005. Lee EJ, Bae JH. Study on the Alleviation of an Alcohol Induced Hangover and the Antioxidant Activity by Mulberry Fruit. Kor. J. Food & Nutr., 24: 204-209, 2011. Lee HJ, Sim BY, Bak JW, Kim DH. Effect of Gamisopungsan on Inflammation and DNCB-induced Dermatitis in NC/Nga in Mice. Kor. J. Oriental Physiology., 28: 146-153, 2014. Lee MH, Kim JM, Park EJ. Antioxidant and Antigenotoxic Effects of Sansuyu Fruit (Corni fructus) Extracted with Water at Different Temperatures. J. Korean Soc. Food Sci. Nutr., 40: 149-155, 2011. Lee WJ, Kim AJ, Kim SY. The study on the functional materials and effects of mulberry leaf. Food Science and Industry, 36: 2-14, 2003. Lee YJ, Kang RY, Lee HJ, Bak JW, Kim DH. Effect of Gami-Chunggisan on Antioxidant and Pro- Inflammatory Cytokine. Kor. J. Herbology, 29: 1-8, 2014. Lim HJ. An Analysis on Antioxidant Activites of Acaiberry, Buleberry, Corni fructus and Mulberry. Dae Jeon University, Master s Thesis, 2013. Lim SH. Pharmacological studies of Corni Fructus on anti-oxidant activity. KyungHee University, Doctorial Thesis, 14-16, 2010. Marcason W. What is the Acai berry and are there health benefits. J. Am. Diet. Assoc., 109: 1968, 2009. Mim KC, Jhoo JW. Antioxidant Activity and Inhibitory Effect of Taraxacum officinale Extracts on Nitric Oxide Production. Kor. J. Food Sci. Technol., 45: 206-212, 2013. Moon JI, Kim SH, Yoo JS, Yoon YB. Effect of 12-Weeks Combined Exercise on the Free Radical, Antioxidant Capacity and Blood Vessel Elasticity in Elderly Women. Kor. J. Society for Wellness, 7: 141-154, 2012. Nieva M, Mara I, Antonio R, Marta A, Vattuone. Comparison of the free radical-scavenging activity of propolis from several regions of Argentina. J. Ethnopharmacol., 71: 109-114, 2000. Park JJ, Lee JM, Jun WJ. Radical scavenging and antiobesity effects of various extracts from turmeric. J. Kor. Soc. Food Sci. Nutr., 42: 1908-1914, 2013. www.kosac.or.kr 451
Kor. J. Aesthet. Cosmetol., Park KR, Lee SG, Nam TG, Kim YJ, Kim YR, Kim DO. Comparative Analysis of Catechins and Antioxidant Capacity in Various Grades of Organic Green Teas Grown in Boseong, Korea. Kor. J. Food Sci. Technol., 41: 82-86, 2009. Schauss, Xianli Wu. Anti-oxidant capacities of flavonoid compounds isolated from acai pulp. Food chemistry., 122: 610-617, 2010. Skehan P, Vistica DT, Scudiero D, Monks A, Pittman A, Boyd MR. Tetrazolium-based assays for cellular viability: A critical examination of selected parameters affecting formazan production. Cancer Res., 51: 2515-2520, 1991. Wang SY, Jiao H. Scavenging capacity of berry crop on superoxide radicals, Hydrogen peroxide, hydroxy radicals and singlet oxygen. J. Agric. Food Chem., 48: 5677-5684, 2000. Xu HQ, Hao HP. Effects of iridoid total glycoside from Cornus officinalis on prevention of glomerular overexpression of transforming growth factor beta 1 and matrixes in an experimental diabetes-model. Biol. Phanrm Bull., 27: 1014-1018, 2004. Yoo SK, Rhee SJ. Effects of YK-209 mulberry leaves on antioxidative defense system of liver istreptozotocininduced diabetic rats. J. Kor. Soc. Food Sci. Nutr., 31: 1065-1070, 2002. Yun MY, Bang MC, Chn CH, Cheong KJ. The Effect of Anti-oxidative and Anti-inflammatory Functional in SanDalWood oil. Kor. J. Aesthet. Cosmetol.,7: 263-274, 2009. 452 www.kosac.or.kr