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신선초를혼합한과채주스의알코올대사효소활성에미치는영향 9 알코올섭취시산화에의해생성된일차대사산물인아세트알데하이드는숙취의주요한인자로, 생성된과량의아세트알데하이드는간독성을촉진시킬뿐만아니라혈압저하와두통, 메스꺼움, 맥박의증가, 발한, 홍조, 오심, 구토등의숙취증상을일으킨다 [8]. 과음과빈번한음주문화의특성을가진우리나라에서는다양한숙취해소음료및생약추출물을함유한기능성식품이개발되어시판되고있으나뚜렷한체내알코올분해효과를나타내는것은많지않다 [9]. 또한미나리 [10], 배 [11], 오미자 [12], 헛개나무열매 [13], 복어 [14], 민들레 [15], 전복 [16] 등식품의알코올분해효과에관한다수의연구가보고되었으나, 채소 과일혼합주스의알코올분해효과에관한연구는미비한실정이다. 본연구에서는한국인이주로주스로만들어섭취하는채소, 과일 9 종을선별하여알코올분해대사효소인 ADH 와 ALDH 의활성을 in vitro 에서분석하였다. 알코올분해효소활성이높은재료를선별하고혼합주스를제조한후알코올분해효소활성및알코올대사시발생되는자유라디칼제거가능성을확인하였다. 따라서저속착즙방법으로혼합한채소 과일혼합주스의항산화능및알코올대사효소인 ADH 와 ALDH 의활성에미치는영향을 in vitro 에서확인하고자하였다. 2. MATERIALS AND METHOD 2.1. 실험재료및주스제조본실험에사용한당근, 딸기, 방울토마토, 브로콜리, 신선초, 양배추, 청포도, 케일, 포도등은김해대형마트에서구입하였다. 구입한각재료는깨끗이씻어절단한후저속주스기 (Hurom Co., Ltd., Gimhae, Korea) 로착즙하였다. 당근, 딸기, 방울토마토, 브로콜리, 신선초, 양배추, 청포도, 케일, 포도의착즙수율은각각 50, 80, 75, 30, 60, 65, 80, 65, 80% 이었고, 딸기, 방울토마토, 청포도, 포도의수율이높은것으로나타났다. 신선초방울토마토주스 (ACJ) 는신선초 80 g, 방울토마토 70 g 을, 신선초청포도주스 (AGJ) 는신선초 80 g, 청포도 65 g 을착즙하여각각 100 ml 의 ACJ 및 AGJ 를제조하였다. 2.2. In vitro에서 ADH 및 ALDH 효소활성측정준비된채소, 과일주스는 850 g에서 20분간원심분리한후상등액을취하여 ADH 및 ALDH 시료로사용하였다. 9종의채소 과일주스의 ADH 활성측정은 Blandino 등 [17] 의방법을변형하여측정하였다. 증류수 1.4 ml, 1.0 M Tris- HCl buffer (ph 8.8) 750 µl, 20 mm NAD + 300 µl, ethanol 300 µl, 착즙주스 100 µl, ADH 150 µl를 30 o C에서 5분간방치시킨후분광광도계 (Libra S22, Biochrom Co., Cambridge, England) 를이용하여 340 nm에서 5분동안흡광도변화를측정하였다. 이때시료를첨가하지않은것을대조구로하여상대활성 (%) 을나타내었다. 9종의채소 과일주스의 ALDH 활성측정은 Bostian과 Betts [18] 의방법을변형하여측정하였다. 증류수 2.1 ml, 1.0 M Tris-HCl buffer (ph 8.0) 300 µl, 20 mm NAD + 100 µl, 0.1 M acetaldehyde 100 µl, 3.0 M KCl 100 µl, 0.33 M 2- mercaptoethanol 100 µl, 착즙주스 100 µl과 ALDH 100 µl 를넣고 30 에서 5분간방치한후, 5분동안 340 nm에서흡광도변화를측정하였다. 이때시료를첨가하지않은것을대조구로하여상대활성 (%) 으로나타내었다. 2.3. 총폴리페놀함량측정채소 과일주스의총폴리페놀함량은 Folin 과 Denis [19] 의방법을일부변형하여측정하였다. 착즙한주스와 100% 메탄올을 1:4 로혼합하여 2 시간동안추출한후 4 o C 에서 850 g 로 20 분간원심분리한후상등액을취하여추출물로사용하였다. 400 µl 의추출물에 50% Folin-Ciocalteu's phenol reagent 200 µl 를첨가하고 3 분뒤 2% Na 2 CO 3 400 µl 를첨가하고실온에서방치시켰다. 1 시간후 750 nm 에서흡광도를측정하였다. 총폴리페놀함량은 gallic acid 를표준물질로하여표준곡선으로부터정량하였다. 2.4. DPPH 라디칼소거능측정채소 과일주스의 DPPH 라디칼소거능은 Blois 의방법 [20] 에따라측정하였다. 준비된채소 과일주스는 850 g 에서 20 분간원심분리한후상등액을취하여시료로사용하였다. 200 µl 의착즙주스에 0.3 mm DPPH 용액 800 µl 를첨가한후실온에서방치시켰다. 10 분후 525 nm 에서흡광도를측정하였고표준품으로는 L-ascorbic acid 를사용하였다. 2.5. 통계처리모든실험결과는평균 ± 표준편차로나타내었다. 각군의평균치의유의성검정은일원성분산분석 (ANOVA) 를사용하여실시하였고, Tukey's test 에의해 p<0.05 수준에서실시하였다. 통계분석은 Statistics Analysis Systems (SAS) 통계프로그램 (ver 9.2, SAS Institute, Cary, NC, USA) 을이용하였다. 3. RESULTS AND DISCUSSION 3.1. 채소 과일주스의 ADH 및 ALDH 활성 9 종의채소 과일주스의 ADH 및 ALDH 활성은 Fig. 1 에나타내었다. ADH 활성을측정한결과, 대조구의흡광도값이 100% 일때신선초주스 (125.5±4.3%), 방울토마토주스 (141.9 ±7.0%), 청포도주스 (132.8±8.5%), 케일주스 (102.0±3.0%) 가 100% 이상의 ADH 활성을나타내었다. 당근주스, 브로콜리주스, 양배추주스, 딸기주스, 포도주스는 ADH 활성에영향을주지않았다. ALDH 활성을측정한결과, 청포도주스 (120.7±3.5%), 신선초주스 (112.6±3.0%), 방울토마토주스 (108.5±6.5%) 를첨가한경우주스를첨가하지않은대조구 (100%) 에비해 ALDH 활성을촉진시키는것으로나타났다.

10 Korean Society for Biotechnology and Bioengineering Journal 31(1): 8-13 (2016) Fig. 1. Alcohol dehydrogenase and aldehyde dehydrogenase activities of fruits juice and vegetables juice. A, carrot juice; B, strawberry juice; C, broccoli juice; D, Angelica keiskei juice; E, cabbage juice; F, green grape juice; G, kale juice; H, cherry tomato juice; I, grape juice. Values are presented as mean±sd. Each bar with different letters is significantly different at p<0.05. 당근주스, 브로콜리주스, 양배추주스, 케일주스, 딸기주스, 포도주스의경우 ALDH 활성에영향을주지않았다. 알코올은체내에서 ADH 에의해아세트알데하이드로분해되고다시 ALDH 에의해아세테이트를생성한후이산화탄소와물로분해된다. 천연물의알코올분해효소활성을측정한결과에의하면오미자발효음료 [12], 헛개나무 [13], 매실즙 [21], 감태 [22], 콩나물 [23] 등은 ADH 활성을촉진시켜알코올분해에도움을주는것으로보고되었다. 특히헛개나무 [13], 매실즙 [21], 감태 [22] 등은 ADH 및 ALDH 활성을모두촉진시키는것으로나타났다. 알코올대사에 1 차적으로작용하는 ADH 활성이촉진될경우체내알코올을빠르게분해할수있으나아세트알데하이드생성이증가하게된다. 아세트알데하이드는두통, 메스꺼움, 구토, 현기증등의숙취증상을동반하고알코올에의한간손상주요유발인자로작용한다 [7]. 따라서 ALDH 활성을촉진시켜혈중아세트알데하이드를신속하게제거하는것이숙취증상을완화시키는데도움이될수있다. 본연구에서 ADH 및 ALDH 활성을촉진시키는것으로나타난신선초주스, 방울토마토주스, 청포도주스를혼합과채주스재료로최종선정하였다. 3.2. 혼합과채주스의 ADH 및 ALDH 활성신선초방울토마토주스 (ACJ) 와신선초청포도주스 (AGJ) 를제조한후 ADH 및 ALDH 활성을측정한결과는 Fig. 2 에나타내었다. 대조구의 ADH 활성을 100% 로나타내었고 ACJ 와 AGJ 의 ADH 활성은각각 163.8±4.3, 148.2±6.9% 로나타나 Fig. 2. Alcohol dehydrogenase and aldehyde dehydrogenase activities of ACJ and AGJ. ACJ, juice mixed Angelica keiskei and cherry tomato; AGJ, juice mixed Angelica keiskei and green grape. Values are presented as mean±sd. Each bar with different letters is significantly different at p<0.01. 대조구에비해유의적으로높았다 (p<0.01). ACJ 와 AGJ 의 ALDH 활성은각각 185.6±9.5, 161.1±4.8% 로대조구 (100%) 에비해유의적으로높게나타났다 (p<0.01). 본연구에서 9 종의채소 과일주스의알코올분해효소활성을측정한결과신선초주스, 방울토마토주스, 청포도주스가 ADH, ALDH 활성을촉진시키는것으로나타났고, 이를활용한혼합과채주스의경우각각의단일재료주스보다 ADH 및 ALDH 활성촉진효과가더욱우수하였다. ADH 및 ALDH 에의한알코올대사시 NAD + 가 NADH 로전환되어 NAD + /NADH 비율은감소하게되고그결과 ADH 및 ALDH 활성은저해된다. 따라서 NADH 에서 NAD + 로재산화를촉진시키면알코올분해효소활성증가에의한알코올및아세트알데하이드분해가촉진될수있다. NAD + 의재산화는아미노산, 무기질, 과당등에의해조절되어지는데이러한요인들이상호작용함으로써효소활성이더욱촉진되는것으로보고되었다 [10]. 아미노산중아스파르트산과알라닌은 NAD + 의재산화에의한 NAD + /NADH 비율을증가시켜 ADH 활성을촉진시킨다 [24]. Cha 등 [25] 은아르기닌과메티오닌이 ADH 와 ALDH 활성을촉진시켜알코올분해효

신선초를혼합한과채주스의알코올대사효소활성에미치는영향 11 과가우수할것이라고보고하였다. 일반적으로숙취개선효과가우수하다고알려진콩나물의아스파르트산, 알라닌, 아르기닌, 메티오닌함량은각각 755, 147, 130, 49 mg/100 g fresh weight 로보고되었다 [26]. 신선초의아스파르트산, 알라닌, 아르기닌, 메티오닌함량은각각 334, 59, 151, 44 mg/ 100 g fresh weight 로 [26] 알코올대사에관여하는아미노산함량이비교적높아알코올분해효소활성을촉진시키는데기여하는것으로사료된다. 또한 ADH 활성은 Ca 2+, Zn 2+, Co 2+ 등과같은무기질성분에의해영향을받는것으로알려져있다 [27]. 신선초의칼슘함량은 235 mg/100 g fresh weight 으로높은수준으로알코올대사를촉진시키는데기여하는것으로사료된다. 토마토의주요생리활성물질인라이코펜은 NAD + 의재산화를촉진시킨다 [28,29]. Kim 등 [28] 의연구에서고지방식사와토마토와인을섭취시킨흰쥐에있어서혈장및간조직의알코올대사효소활성이증가되었고이는토마토와인에풍부한라이코펜때문인것으로보고하였다. 라이코펜은알코올대사과정에서 NAD + 손실을완화시켜알코올대사를원활하게하는데도움이되는것으로나타났다 [29]. 따라서 ACJ 와 AGJ 는신선초, 방울토마토, 청포도의상호작용으로인해알코올분해효소활성을더욱촉진시켜체내알코올및아세트알데하이드를분해하는데도움을주어숙취개선효과를나타내는것으로사료된다. 3.3. 혼합과채주스의총폴리페놀함량 ACJ 와 AGJ 의총폴리페놀함량을측정한결과는 Fig. 3 에나타내었다. ACJ 와 AGJ 의총폴리페놀함량은각각 111.1±1.6, 100.8±2.9 mg/dl 로나타났다. 폴리페놀은플라보노이드, 페놀산등을총칭하며식물계에널리분포되어있으며특히채소, 과일, 차, 커피등에많이함유되어있다 [30]. 폴리페놀화합물은강력한항산화물질로활성산소생성및 DNA 의산화적손상을억제하는것으로보고되었다 [31]. 신선초는쿼세틴 [32], 쿠마린 [33] 등을함유하고있어신선초를베이스로한혼합주스의폴리페놀함량또한높게나타났다. 따라서총폴리페놀함량이높은 ACJ 와 AGJ 는활성산소생성을억제하여알코올섭취로인한간세포손상을예방할것으로사료된다. 3.4. 혼합과채주스의 DPPH 라디칼소거능 ACJ 와 AGJ 의 DPPH 라디칼소거능은 Fig. 4 에나타내었다. ACJ 와 AGJ 의 DPPH 라디칼소거능을측정한결과각각 62.0±0.5, 61.3±0.4% 로나타났고, 표준품인 ascorbic acid 는 94.1±0.3% 로나타났다. ACJ 와 AGJ 의 DPPH 라디칼소거능은표준품대비각각 65.9, 65.1% 로항산화효과가우수한것으로나타났다. 알코올대사과정중 ADH 에의해생성된아세트알데하이드로부터 O 2 -, OH 등의활성산소들이생성된다 [15]. 이러한활성산소는지질과산화물을생성하여간의섬유화를유발 Fig. 3. Total polyphenol contents of ACJ and AGJ. ACJ, juice mixed Angelica keiskei and cherry tomato; AGJ, juice mixed Angelica keiskei and green grape. Values are presented as mean±sd. ns, not significant. Fig. 4. DPPH radical scavenging activity of ACJ and AGJ. ACJ, juice mixed Angelica keiskei and cherry tomato; AGJ, juice mixed Angelica keiskei and green grape. Values are presented as mean±sd. Each bar with different letters is significantly different at p<0.01. 시키고간조직의단백질변성과지방간을촉진시키며간세포의 DNA 변이를유도하여간세포손상의원인물질로작용한다 [34,35]. 따라서간세포손상을예방하기위해서는활성산소생성을억제하는것이중요하다. DPPH 라디칼소거활성은총폴리페놀함량에많은영향을받는것으로보고되었다 [36,37]. Choi 등 [38] 의연구에서포도주스, 토마토주스, 귤주스, 자몽주스등의 DPPH 라디칼소거능이우수하였으며특히고속착즙기에비해저속착즙기로착즙한채소 과일주스의항산화효과가더욱우수한것으로나타났다. 이는저속착즙기로착즙한주스의경우폴리페놀함량이높아항산화효과를증가시키는것으로보고하였다. 본연구에서는 ACJ 와 AGJ 의총폴리페놀함량이높은것으로나타났으며이는 DPPH 라디칼소거활성을증가시키는데기여하는것으로사료된다. 따라서 ACJ 와 AGJ 는활성산소를효과적으로소거하여산

12 Korean Society for Biotechnology and Bioengineering Journal 31(1): 8-13 (2016) 화스트레스를감소시키고알코올로인한간손상을예방하는데도움을줄것으로사료된다. 4. CONCLUSION 혼합과채주스의숙취개선효과를규명하기위하여알코올분해효소활성이우수한재료를선정하였고이를활용한혼합과채주스를제조한후알코올분해효소활성및항산화능을조사하였다. 저속착즙한 9 종의채소 과일주스의알코올분해효소및알데하이드분해효소활성을측정한결과대조구의흡광도값이 100% 일때신선초주스, 방울토마토주스, 청포도주스가 100% 이상의 ADH 및 ALDH 활성을나타내어알코올분해효소활성을촉진시키는것으로나타났다. 신선초방울토마토주스 (ACJ) 와신선초청포도주스 (AGJ) 를제조한후알코올분해효소및알데하이드분해효소활성을측정한결과단일재료주스보다알코올분해효소활성을더욱높이는것으로나타나알코올분해효소활성촉진효과를확인하였다. 신선초방울토마토주스와신선초청포도주스의총폴리페놀함량이높았으며, DPPH 라디칼소거능또한우수한것으로나타났다. 따라서신선초방울토마토주스와신선초청포도주스는알코올분해효소활성을촉진시키고알코올대사과정에서활성산소생성을억제시켜숙취개선및알코올로인한간손상을억제하는데도움을줄것으로사료된다. Acknowledgements 이논문은경상남도항노화바이오산업육성사업 ( 과제번호천연물 6) 의연구비지원에의해수행되었습니다. REFERENCES 1. Ministry of health and welfare, Korea centers for disease control and prevention (2012) Korea health statistics 2011; Korea National Health and Nutrition Examination Survey (KNHANES V-2). Cheongju, Korea. 2. Organization for economic cooperation and development, OECD stat. http://www.oecd.org. (2014). 3. Korea institute for health and social affairs (2013) The current status and cause of the addiction problem, Health welfare policy forum 6: 30-42, Sejong, Korea. 4. Gill, K., Z. Amit, and B. R. Smith (1996) The regulation of aldehyde consumption in rats: the role of alcohol-metabolizing enzymescatalase and aldehyde dehydrogenase. Alcohol 13: 347-353. 5. Lieber, C. S. and L. M. Decarli (1970) Hepatic microsomal ethanol-oxidizing system. In vitro characteristics and adaptive properties in vivo. J. Biol. Chem. 245: 2505-2512. 6. Pemberton, P. W., A. Smith, and T. W. Warnes (2005) Non-invasive monitoring of oxidant stress in alcoholic liver disease. Scand. J. Gastroenterol. 40: 1102-1108. 7. Albano, E. (2002) Free-radicals and alcohol-induced liver injury. pp. 153-190. In: Sherman CDIN, Preedy VR, Walsin PR (ed). Ethanol and liver. Taylor and Francis, London, UK. 8. Swift, R. and D. Davidson (1998) Alcohol hangover: mechanisms and mediators. Alcohol Health Res. World 22: 54-60. 9. Chu, L. Y., Y. S. Nam, S. I. Cho, S. H. Yim, Z. C. Chung, J. S. Bang, U. D. Sohn, J. M. Kim, M. S. Kim, K. H. Koo, Z. C. Chung, and J. H. Jeong (2010) Effects of Curcuma long gum preparation on the blood alcohol level and hangover. Korean J. Clin. Pharm. 20: 1-8. 10. Kang, B. K., S. T. Jung, and S. J. Kim (2002) Effects of vegetable extracts by solvent separation on alcohol dehydrogenase activity from Saccharomyces cerevisiae. Korean J. food Sci. Technol. 34: 244-248. 11. Lee, H. S., T. Isse, T. Kawamoto, H. W. Baik, J. Y. Park, and M. Yang (2013) Effect of Korean pear (Pyruspyrifolia cv. Shingo) juice on hangover severity following alcohol consumption. Food Chem. Toxicol. 58: 101-106. 12. Cho, E. K., H. E. Cho, and Y. J. Choi (2010) Inhibitory effects of angiotensin converting enzyme and α-glucosidase, and alcohol metabolizing activity of fermented Omija (Schizandra chinensis Baillon) beverage. J. Korean Soc. Food Sci. Nutr. 39: 655-661. 13. Park, E. M., E. J. Ye, S. J. Kim, H. I. Choi, and M. J. Bae (2006) Eliminatory effect of health drink containing Hovenia dulcis Thunb extract on ethanol-induced hangover in rats. J. Korean Soc. Food Cult. 21: 71-75. 14. Kim, D. H., D. S. Kim, and J. W. Choi (1994) The effect of puffer fish extract on the acetaldehyde metabolism in rat. J. Korean Soc. Food Nutr. 23: 187-191. 15. Noh, K. H., J. H. Jang, J. J. Kim, J. H. Shin, D. K. Kim, and Y. S. Song (2009) Effect of dandelion juice supplementation on alcoholinduced oxidative stress and hangover in healthy male college students. J. Korean Soc. Food Sci. Nutr. 38: 683-693. 16. Kang, S. G., K. S. Ham, I. C. Kim, S. J. Kim, and H. L. Kim (2006) The effect of chronic degenerative disease prevention and functionality in Haliotis discus hannai. Abalone Functionality Report. Chonranam-Do, Korea. 17. Blandino, A., I. Caro, and D. Cantero (1997) Comparative study of alcohol dehydrogenase activity in flor yeast extracts. Biotechnol. Lett. 19: 651-654. 18. Bostian, K. A. and G. F. Betts (1978) Rapid purification and properties of potassium-activated aldehyde dehydrogenase from Saccharomyces cerevisiae. Biochem. J. 173: 773-786. 19. Folin, O. and W. Dennis (1912) On phosphotungstic-phosphomolybdic compounds as color reagents. J. Biol. Chem. 12: 239-243. 20. Blois, M. S. (1958) Antioxidant determination by the use of stable free radicals. Nature 181: 1199-2000. 21. Hwang, J. Y., J. W. Ham, and S. H. Nam (2004) Effect of Maesil (Prunus mume) juice on the alcohol metabolizing enzyme activities. Korean J. Food Sci. Technol. 36: 329-332. 22. Cho, E. K. and Y. J. Choi (2010) Physiological activities of hot water extracts from Ecklonia cava Kjellman. J. Life Sci. 20: 1675-1682. 23. Sung, H. M., H. J. Jung, S. G. Yun, T. Y. Kim, G. Y. Kim, and J. Y. Wi (2014) Effect of a soy-sprout beverage prepared with high-con-

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