114 / 실크단백질섭취와표피의 Sphingoid Bse 함량변화 균작용 의 상처 치유 효능 등이 보고되고 있다 건선염과 아토피 피부염은 표피 장벽 이상으로 나타나는 대 표적인 피부 질환으로 피부 건조화가 주요 증상이다 현행 치 료법은 호르몬 제재 나 자외선 요법 의학

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114 / 실크단백질섭취와표피의 Sphingoid Bse 함량변화 균작용 의 상처 치유 효능 등이 보고되고 있다 건선염과 아토피 피부염은 표피 장벽 이상으로 나타나는 대 표적인 피부 질환으로 피부 건조화가 주요 증상이다 현행 치 료법은 호르몬 제재 나 자외선 요법 의학적 치료 가 시행되고 있으나 이들의 부작용에 대한 보고들과 더불어 피부 건강은 영 양과도 밀접한 관련이 있다는 인식 변화에 따라 특정 식이소재 의 피부에 대한 효능 연구가 국내외로 활발히 진행되고 있다 특히 여러 식품 소재 중 실크 단백질은 세리신 과 피 브로인 으로 구성되며 이 의 표면을 감 싸고 있는 구조로 피부 건조화를 개선하는 기능성 식이소재로 각광받고 있다 세리신은 그 자체로 자연보습인자 역할을 하는 을 전체 아미노산의 수준으로 함유하고 있으며 그 외 다른 극성 아미노산으로 구성되어 있다 반면 피브로인은 - 함유량이 로 세리신에 비해 낮지만 으로 상호전 환 될 수 있는 을 함유하고 있다 이런 피부친화형 소재인 실크 단백질을 이용하여 기능성 화 장품 미용 비누 등이 개발되어 있고 실크단백질의 수분보유 능력 주름방지 피부암 억제 효과 상처치유 효과 가 보 고되었다 그러나 이들 실크 단백질의 피부에 대한 효능은 대부 분 도포에 의한 것으로 실크 단백질의 섭취에 의한 피부 효능 보고는 본 연구자의 사전연구에서 제한적으로 이루어져 있다 의 표피장벽유지 기능 및 아토피 피부염 건선염을 비 롯한 여러 피부 질환에서의 농도 감소에 대한 보고와 더불어 사전 연구에서는 실크단백질 특히 세린신의 식이 공급 이 아토피 피부염 동물 모델인 표피에서 함 량을 증가시킴을 보고하였다 그러나 실크 단백질의 식이 공급 과 세라마이드 기본 구성 골격인 및 인산화 대 사체와의 연관성에 대한 연구는 이루어지지 았다 따라서 본 연 구에서는 실크단백질 세린신 또는 피브로인의 식이공급이 아토 피 동물 모델 표피에서 세라마이드의 기본 골격 인 와 의 함량 변화를 초래하는지 알아보고자하였으며 또한 와 의 함량 변화가 이들 인산대사체인 와 의 함량 변화와 병행되는지 또한 검증하고자 하였다 재료및방법 재료및시약 -erythro-so -erythro-s - - 은 로부터 공급 받았다 는 에서 구입하였다 - 과 은 - 와 - 에서 공급받았다 과 - - 는 에서 구입하 였다 와 은 에서 구입하 였다 와 은 와 - 에서 구입하였다 다른 시료들은 에서 구 입하였다 실크단백질시료준비실크단백질은 가잠 Bomyx. mori 을 상엽으로 사육하여 얻은 누에고치를 정련하여 준비하였다 실크단백질 은 부분적으로 수정된 일반 정련 과정에 의해 추출되었는데 먼저 누에고치 당 리터의 물을 첨가하고 에서 시간 가열한 후 필터링 μ 및 동결 건조 과정을 거쳐 평균 분자량 내외의 실 크단백질 세리신을 회수하였다 세리신 단백질이 제거된 생 사에 배량의 의 마르셀 비누 및 의 혼합 용 액을 첨가하고 에서 분간 처리한 후 증류수로 번 정도 같은 작업을 반복하여 충분히 수세하였다 이 과정 후 얻어진 단백질 의 용해는 등 의 방법에 따라 제조하 였다 필터링 μ 을 하여 잔유물을 제거한 후 동결건조 과정을 거쳐 평균분자량 내외의 실크단백질 을 얻었다 실험동물의사육 주령의 수컷 마리와 주령의 수컷 마리를 으로부터 공급받았다 사육실의 온도는 ± 습도는 ± 를 유 지하였고 매일 광주기와 암주기가 시간이 되도록 조절하였 다 는 아토피 피부염 동물 모델로 공기 청정 시설 이 없는 일반 환경에서 자연적으로 아토피 피부염을 유발시켰 다 실험동물은 모두 적응기 동안 - 의 정상식이 및 물을 liitum 방법으로 공급하였고 그 후 는 난괴법으로 군으로 나누었다 즉 실크단백질을 첨가하지 않 은 정상식이를 주간 공급받은 군 음성대조군 과 및 건조 분말을 각각 전체 식이무게 수준으 로 식이에 혼합하여 주간 공급하는 군과 군을 실험군으로 하였다 또한 실크단백질을 첨가하지 않은 정상식이를 주간 공급받은 를 정상대조군으로 군 군 하였다 각 실험군의 식이조성은 과 같다 는 에 유전자 조작을 통하여 공기청정 시설 이 없는 환경에서 아토피 피부염이 자연 유발되도록 한 동물 모델이기에 정상식이를 공급한 를 정상대조군 으로 하였다 체중, 식이섭취량, FER 평가측정체중 및 식이 섭취량은 매주 월요일 오전의 일정 시간에 측 정하였다 은 주간의 체충 증가량을

한국영양학회지 (Koren J Nutr) 2012; 45(2): 113 ~ 120 / 115 Tle 1. Composition of experimentl diets (g/kg dry diet) Ingredient Group 1) Csein 2) 230 230 220 220 Sericin - - 10 - Firoin - - - 10 L-cystine 3 3 3 3 Corn oil 100 100 100 100 Cellulose 50 50 50 50 Vitmin mix 3) 10 10 10 10 Minerl mix 4) 35 35 35 35 Sucrose 200 200 200 200 Corn strch 372 372 372 372 1) Group C: BALB/c mice were fed with control diet s norml control; group CA, S nd F: NC/Ng mice were fed with control diet s topic control (group CA) or diets contining 1% sericin extrct (group S) or 1% firoin extrct (group F) 2) Csein (nitrogen 6.25), 870 g/kg 3) mix #310025(Dytes Inc, Bethlehem, PA, USA): Nicin 3 g/kg, Clcium pntothente 1.6 g/kg, Pyridoxine HCl 0.06 g/kg, Thimine HCl 0.6 g/kg, Rioflvin 0.6 g/kg, Folic cid 0.2 g/kg, Biotin 0.2 g/kg, Vitmin E Acette (500 IU/g) 15 g/kg, Vitmin B12 (0.1%) 2.5 g/kg, Vitmin A Plmitte (500,000 U/g) 0.8 g/kg, VitminD3 (400,000 IU/g) 0.25 g/kg, Vitmin K1/DextroseMix (10 mg/g) 7.5 g/kg nd Sucrose 967.23 g/kg 4) Slt mix composition: AIN-93 slt mix #210025 (Dytes Inc, Bethlehem, PA, USA): Clcium Cronte 357 g/kg, Potssium Phosphte (monosic) 196 g/kg, Potssium Citrte H2O 70.78 g/kg, Sodium Chloride 74 g/ kg, Potssium Sulfte 46.6 g/kg, Mgnesium Oxide 24 g/kg, Ferric Citrte U. S. P 6.06 g/kg, Zinc Cronte 1.65 g/kg, Mngnous Cronte 0.63 g/kg, Cupric Cronte 0.3 g/kg, Potssium Iodte 0.01 g/kg, Sodium Selente 0.01025 g/kg, Ammonium Prmolydte 4H2O 0.00795 g/kg, Sodium Metsilicte 9H2O 1.45 g/kg, Chromium Potssium Sulfte12H2O 0.275 g/kg, Lithium Chloride 0.0714 g/kg, Boriccid 0.0815 g/kg, Sodium Fluoride 0.0635 g/kg, Nickel Cronte 0.0318 g/kg, Ammonium Vndte 0.066 g/kg, nd Finely powdered sucrose221.026 g/kg 동일기간 섭취한 식이량으로 나누어 산출하였다 표피샘플준비 주간의 식이 공급 후 동물을 희생하고 얻어진 피부조직은 와 혼합용액 에서 시간 동안 처리하여 표피를 분리하였다 단백질정량분리한 표피를 와 함께 으로 분쇄하고 얻어진 상층액은 를 표준으로 한 - 를 이용하여 에서 흡광도를 측정 하여 단백질을 정량하였다 표피 Sphingoid se 추출얻어진 표피조직에 및 이 함유된 - 를 가한 후 을 이용하여 분쇄하였다 의 이 함유된 메탄올 과 혼합용액 을 연속적으로 첨가한 후 분 동안 원심분리하여 를 함유한 하층액을 추출하였다 를 함유한 메탄올을 첨가하여 에서 한 시간 동안 한 후 동량의 및 μ 을 연속적으로 가하였다 다시 에 서 분 동안 원심분리 후 얻어진 하층액은 으로 번 세척한 후 질소가스 아래서 건조시켰다 표피 Sphingoid ses-1-phosphtes 탈인산화및추출 - - 은 에 의해서 탈인산화되어 로 전환된다 메탄올에 녹인 에 μ μ μ μ 을 첨가 하여 교반한 후 분 동안 원심 분리 하였다 상 층액에 와 μ - 을 혼합하고 에서 시간 동안 교반 - R 하였 다 μ 을 첨가하여 분간 교반하고 에서 분간 원심분리하였다 얻어진 하층액은 μ 로 번 세척한 후 에서 건조 시킨 후 보 관하였다 HPLC 를이용한표피 sphingoid se 정량 μ 을 첨가하여 에서 분간 하고 실온에서 용해된 을 μ 와 반응 한 후 실온에서 분 동안 교반하였다 유도체샘플을

116 / 실크단백질섭취와표피의 Sphingoid Bse 함량변화 을 이용하여 분석하였다 분석은 - - μ 을 이용하였다 는 - 혼합하여 사용하였고 은 로 조절하였다 은 - 을 이용하여 과 에 서 측정하였다 농도는 다양한 농도의 를 이용하여 로 정량하 였다 또한 - - 농도는 인 를 이용하여 측정하였다 측정 된 및 인산화 대사체의 농도는 - μ 로 나타내었다 통계분석실험 결과의 자료는 - 을 이 용하여 통계 처리하였다 결과는 각 군별 평균과 표준오차로 나타내었고 각 실험군간의 비교는 로 분석한 후 로 < 수준에서 검증 하였다 결 체중, 식이섭취량, FER 평가측정실험동물의 평균 체중 증가량 및 식이 섭취량은 에 제시하였다 체중 증가량은 군간 유의적 차이가 없었으며 로 구성된 군의 식이 섭취량은 로 구성된 군에 비해 유의적으로 낮았다 그러나 군을 포함한 모든 실험군의 식이 효율 체중증가량 식이섭취량 은 유의 적 차이가 없었다 의식이공급이표피의 sphingoid se 농도에미치는효과 군 표피의 과 농도는 에 제시하였다 과 군의 농도는 군에 못 미쳤으나 그 감소는 미비하였다 군과 군의 농도는 군에 비해서 유의적으로 높게 나타 났으며 군과는 유사하였다 군과 군간의 농도는 유사하 였다 군의 농도는 군에 비해서 현저히 낮았으며 군의 농도는 군과 유사하였으나 군의 농도는 군 수준에는 못 미쳤다 실크단백질의식이공급이표피의 So/S rtio 에미치는효과 군의 은 군에 비해서 현저히 높았으며 이는 군의 현저한 농도 감소에 기인한 것으로 파악된다 군 및 군의 는 모두 군 보다 낮았는데 군은 군보 다 높은 반면 군은 이 군과 유사하였다 실크단백질의식이공급이표피의 Sphingoid se-1-phosphtes 함량에미치는효과 군의 및 의 농도는 다른 군에 비해서 현저히 높았 으나 군을 비롯한 군 및 군에서의 이들 농도는 유사하 였다 고 사전 연구에서 실크단백질의 식이 공급이 표 피의 를 증가시켰으며 본 연구에서 실크단백질의 식이 공급이 의 기본 골격인 와 인산화 대 사체들의 함량 변화에 미치는 영향을 살펴보았다 수준의 및 을 주간 식이 공급한 결과 는 보다 식이 섭 취량은 적었으나 체중 변화는 군간 차이가 없었으며 도 군 간 유의성이 없었다 의 기능 및 표피 장벽 유지에 대한 관련성 은 최근 연구들에 의해 보고되고 있으나 아토피 피부염과 관련하여 식이섭취에 대한 변화 보고는 전무한 실정이다 본 실 험 결과는 표피의 는 의 - 의 진전과 연관성이 있는 것으로 나타났다 정상대 조군과 비교하였을 때 아토피 대조군인 군의 농도는 현저 히 감소하였다 비록 농도와 의 직접적인 연관성 찰 Tle 2. Weight gin, food intke nd FER of groups for 10 weeks Group 1) Weight gin (g/week) 0.37 ± 0.05 2) 0.47 ± 0.08 0.51 ± 0.11 0.51 ± 0.13 Food intke (g/week) 19.26 ± 0.41 32.10 ± 1.13 30.49 ± 0.30 30.25 ± 0.59 FER 3) 0.020 ± 0.003 0.014 ± 0.002 0.017 ± 0.003 0.017 ± 0.004 1) Group C: BALB/c mice were fed with control diet; group CA, S nd F: NC/Ng mice were fed with control diet (group CA) or diets contining 1% sericin extrct (group S) or 1% firoin extrct (group F) for 10 weeks 2) Vlues re expressed s mens ± SEM (n = 10). Mens with different lpheticl letters in the sme row re significntly different ccording to duncn s multiple rnge test t p < 0.05 3) FER; Food Efficiency Rtio = gin of ody weight (g)/mount of food intke (g)

한국영양학회지 (Koren J Nutr) 2012; 45(2): 113 ~ 120 / 117 8 8 7 7 6 6 C I8 Sphingosine (nmol/μgprotein) 5 4 3 C I8 Sphingosine (nmol/μgprotein) 5 4 3 2 2 1 1 0 0 Fig. 1. Levels of C18 Sphingoid ses in the epidermis of mice. C: BALB/c mice were fed with control diet, group CA, S nd F: NC/ Ng mice were fed with control diet (group CA) or diets contining 1% sericin extrct (group S) or 1% firoin extrct (group F) for 10 weeks. Sphingoid ses were extrcted from epiderml homogentes of ech groups nd nlyzed using HPLC. Vlues re presented s Mens ± SEM (n = 10). Mens with different lpheticl letters re significntly different ccording to duncn s multiple comprison t p < 0.05. C 18 So/S rtio 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0 C Fig. 2. Rtio of C18So/S in the epidermis of mice. Group C: BALB/ c mice were fed with control diet, group CA, S nd F: NC/Ng mice were fed with control diet (group CA) or diets contining 1% sericin extrct (group S) or 1% firoin extrct (group F) for 10 weeks. Vlues re presented s Mens ± SEM (n = 10). Mens with different lpheticl letters re significntly different ccording to duncn s multiple rnge test t p < 0.05. 에 대한 연구는 보고되어 있지 않으나 본 연구에서 농도의 감소는 에서의 de 억제로 인 한 합성 감소와 간접적으로 연관이 있을 것으로 여겨진다 하지만 군의 농도는 군과 유사하며 환자의 표피에 서 농도의 감소가 나타난 사전 연구와 일치하지 않았다 대조적으로 이 함유된 식이를 공급한 군과 군의 및 농도는 군에 비해서 높으며 군과 유사하였 다 이러한 결과는 실크단백질의 식이 공급이 표피 장 벽과 보습에 중요한 지질인 의 분해산물이자 합성 또는 재 합성 기질인 와 함량을 증가시켜 - 의 발 달을 방해하는 것으로 제안된다 또한 다른 연구에 의해 의 과 의 가 알 려졌다 이러한 선행 연구를 통해 본 실험의 결과 역시 와 가 피부 표면의 미생물 감염에 대항하는 역할을 할 수 있는 것 c 으로 사료된다 군에서 은 함량의 현저한 감소와 함께 군에 비해서 현저히 높았다 이는 가 아토피 피부염에서 증가된다고 보고된 선행 연구와 일치하며 군에서 의 증가는 함량의 감소보다는 소수성 성질을 가진 의 급격한 감소로 인하여 세포막의 투과성이 증가하여 와 같은 외부 물질의 침입으로 인한 피부막의 파괴로 인하여 유도 된 것으로 사료된다 군의 현저한 함량 감소와 대조적으로 군과 군의 함량은 군과 유사한 수준으로 증가되어 있었는데 특히 군의 함량 증가 더욱 컸다 이는 군과 군의 완만한 함량 증가와 더불어 군과 군의 을 군에 비해서 유의적으로 감소시키는 결과를 초래하였다 아토피 피부염 유도 또는 실크단백질의 식이 공급에 의한 및 함량의 절대적인 변화도 의미있는 지표이나 세포막 투과성을 감소시키는 기능을 감안하면 는 세포막이 투과성과 관련된 발병 및 치료 효과의 중요한 지표가 될 수 있을 것으로 사료된다 아토피 피부염 유발은 표피의 및 함량 특히 함량의 현저한 감소를 초래하였으며 실크단백질 의 식이 공급은 아토피 피부염 유발에 의해 현저히 야기된 감소를 다소 완화시켜 그 결과 감소를 초래하였다 - - 은 에 의해서 부터 생성되는데 와 관련된 대사과정은 크게 밝혀지지 않았다 본 실험 결과 군의 농도가 군에 비해서 유의적으로 낮게 나타났다 의 기능은 아직 명확하지 않으나 세포이동을 촉진하는 중요한 인자 및 상처회복의 조절 인자인 의 감소로 군의 세포막의 회복을 지연하는 것으로 사료된다 또한 군과 군의 농도는 유사한 것으로 나타났다 이 결과는

118 / 실크단백질섭취와표피의 Sphingoid Bse 함량변화 0.50 0.50 0.45 0.45 C I8 Sphingnine-1-phosphte (nmol/μgprotein) 0.40 0.35 0.30 0.25 0.20 0.15 0.10 C I8 Sphingnine-1-phosphte (nmol/μgprotein) 0.40 0.35 0.30 0.25 0.20 0.15 0.10 0.05 0.05 0.00 0.00 Fig. 3. Levels of C18 Sphingoidse-1-phosphtes in the epidermis of mice. Group C: BALB/c mice were fed with control diet, group CA. S nd F: NC/Ng mice were fed with control diet (group CA) or diets contining 1% sericin extrct (group S) or 1% firoin extrct (group F) for 10 weeks. Sphingoid se-1-phosphtes of epiderml homogentes were first dephosphorylted y lkline phosphtse t 37ºc then seprted sphingoid ses were extrcted nd nlyzed using HPLC. Vlues re presented s mens ± SEM (n = 10). Mens with different lpheticl letters re significntly different ccording to duncn s multiple rnge test t p < 0.05. 군의 와 농도가 변화한 경우 이들의 인산화대사체인 및 함량이 감소 또는 증가의 변화를 수반할 것이라고 예상한 본 실험의 연구 목적에 부합하지 않는다 과 - 에 의해서 상호 전환되는 반응인 과 또는 과 의 관계에서 - - 의 농도는 아토피 피부염에서 크게 감소하나 세포와 조직의 항상성을 유지하기 위하여 조절됨이 보고되었느나 - - - 의 농도는 실크 단백질인 이나 의 식이 공급에 의해서는 변화가 초래되지 않았다 는 세라마이드의 분해 산물로 효소에 의한 인산화 대사체로 전환될 뿐 아니라 에 의해서 다시 로 재전환되므로 실크 단백질의 식이 공급에 의해 변화가 초래되지 않은 - - - 의 농도에 대한 해석은 및 과 단백질발현 및 활성 변화 측정과 함께 추후 심도있게 이루어져야 한다 실크 단백질은 수분보유능력 주름방지 피부암 억제 효과 상처치유효과 등과 관련하여 피부 건강에 관련된 - 과 기능성 화장품으로 개발되어 있다 이러한 영향은 의 에 의해 나타난다 세리신은 그 자체로 자연보습인자 역할을 하는 이 전체 아미노산 중에서 만큼 함유하고 있으며 피브로인은 함유량이 로 세리신에 비해 낮지만 으로 상호전환 될 수 있는 을 만큼 함유하고 있다 따라서 이러한 고함량의 을 함유한 실크단백질을 피부 친화적인 소재로 강조할 수 있다 실크단백질의 효능에 관련된 연구는 진행되고 있으나 연구형태를 제외한 실크단백질의 식이 섭취에 의한 효능 연구 와 와 그 대사체의 피부와의 연관성에 대한 연구는 아직 제한적이다 그러므로 본 연구는 실크단백질의 식이공급이 미치는 영향에 대한 것으로 의의를 갖는다 - 및 의 식이 공급은 의 분해산물이자 합성 또는 재합성하는 기질인 와 함량을 증가시키고 세포막 투과성의 중요한 지표인 감소를 초래하는 긍정적인 효능을 나타내었다 요약및결론 최근 대사과정에서 유도되는 와 그 대사체가 와 마찬가지로 표피장벽기능 및 수분유지에 중요한 역할을 나타내고 있다 본 연구에서는 아토피 피부염 동물 모델인 에 실크 단백질 과 을 식이 공급 후 피부의 와 그 조성 변화를 분석하였으며 결과 주간의 실험 기간 동안 에 실크 단백질 과 을 식이 공급한 군 및 군의 식이효율은 아토피 피부염 대조군 군 과 유의적 차이가 없었다 군에서는 와 농도가 군에 비해 감소하였는데 특히 감소가 더욱 현저하였다 실크 단백질 - 과 을 식이 공급한 군 및 군에서는 농도가 증가하였으며 특히 을 식이 공급한 군에서 현저히 증가하였다 그 결과 은 군에서 크게 증가하였으며 군 및 군에서는 군에 비해 낮았는데 특히 을 식이 공급한 군에서 더욱 낮았다 실크 단백질 과 을 식이 공급이 과 에는 영향을 주지 않았다

한국영양학회지 (Koren J Nutr) 2012; 45(2): 113 ~ 120 / 119 이상의 결과를 종합해볼 때 에서 실크단백질 의 식이 공급은 표피 장벽과 보습에 중요한 지질인 의 분해 산물이자 합성 또는 재합성하는 기질인 함량을 증가와 병행하여 아토피 피부염에서 증가된다고 보고된 를 감소시켰다 궁극적으로 실크단백질은 표피장벽 기능에 긍정적 인 영향을 보임으로써 향후 아토피 피부염 개선을 위한 기능성 소재로써 활용 가능성이 높다고 사료된다 Literture cited 1) Coderch L, López O, de l Mz A, Prr JL. Cermides nd skin function. Am J Clin Dermtol 2003; 4(2): 107-129 2) Brtke N, Hnnun YA. Bioctive sphingolipids: metolism nd function. J Lipid Res 2009; 50 Suppl: S91-S96 3) Biel DJ, Aly R, Shinefield HR. Antimicroil ctivity of sphingosines. J Invest Dermtol 1992; 98(3): 269-273 4) Vogler R, Suer B, Kim DS, Schäfer-Korting M, Kleuser B. Sphingosine-1-phosphte nd its potentilly prdoxicl effects on criticl prmeters of cutneous wound heling. J Invest Dermtol 2003; 120(4): 693-700 5) Elis PM, Wood LC, Feingold KR. Epiderml pthogenesis of inflmmtory dermtoses. Am J Contct Dermt 1999; 10(3): 119-126 6) Horn EJ, Domm S, Ktz HI, Lewohl M, Mrowietz U, Krglle K; Interntionl Psorisis Council. 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