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영철 석
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1 366 Hyeok-Jae Lee, et al. Evaluation of Urine Sediment Preparation Difference for Microscopic Examination ORIGINAL ARTICLE Korean J Clin Lab Sci. 2017;49(4): pissn eissn Study on the Difference of Urine Sediment Preparation for Microscopic Examination Hyeok-Jae Lee 1, Chul Park 2, Min-Young Seo 1 1 Department of Biomedical Laboratory Science, Gwangju Health University, Gwangju, Korea 2 Department of Biomedical Laboratory Science, Gwangyang Health College, Gwangyang, Korea 현미경검사를위한요침사표본제작에따른차이연구 이혁재 1, 박철 2, 서민영 1 1 광주보건대학교임상병리과, 2 광양보건대학교임상병리과 Urinalysis is considered to be easier and simpler than other tests. It has been known to cause no burden to patients, while offering important information on diagnosing, treating, and determining the prognoses of kidney and urinary tract diseases. Urinary sediments are usually performed by microscopic examination of centrifuged urine by technologist. The guidelines proposed by the Korean Association of External Quality Assessment Service are actually different from those actually practiced by medical institutions and taught to biomedical students in textbooks. Therefore, we verified whether different sediment preparation methods lead different test results. Specimens that tested positive from the occult blood and leukocyte esterase in the urine dipstick test were randomly selected for a microscopic examination. The differences in the urine sediment preparation affected the sediment concentrations, which influenced the cell grade and cell number per HPF. The first factor in determining the sediment concentration is the centrifugal force. Many medical institutions use 1,500 rpm as the centrifugal speed without considering the radius of the centrifuge; such a value may not be accurate for 400 G. Consequently, there were differences in urine concentrations, which influenced the results. The second factor is the amount of sediment in urine. Different amounts of the remaining supernatant led to different sediment concentration factors, again, causing different results. Furthermore, not only by using a pipette to obtain an accurate amount as stipulated, but also by roughly obtaining a drop, the microscopic examination using such a volume of sediment examined affected the results. Therefore, this study highlights the importance of standardization of urine sediment preparation procedures to promote consistency and accuracy across institutions. Key words: Microscopic examination, Urine sediment preparation, Cell grade, Standardization Corresponding author: Hyeok-Jae Lee Department of Biomedical Laboratory Science, Gwangju Health University, Bungmun-daero, Gwangsan-gu, Gwangju 62287, Korea Tel: Fax: primo-uomo@ghu.ac.kr This is an Open Access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution Non-Commercial License ( which permits unrestricted non-commercial use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited. Copyright 2017 The Korean Society for Clinical Laboratory Science. All rights reserved. Received: October 18, 2017 Revised: October 25, 2017 Accepted: October 26, 2017 서론일상적인소변검사 (routine urinalysis) 는소변의채취가용이하여환자에게주는부담이적으며, 매우간편한시약을사용하여간단한검사방법으로검사가이루어진다. 뿐만아니라검 사에소요되는시간이짧아임상적으로매우빈번히시행되는검사이다. 소변검사는건강인또는환자의진료과정에서건강진단이나질병의유무등을반영하는보편화된기본검사가운데하나로검사결과는임상적으로매우중요하다. 일상적인소변검사는물리, 화학적성상검사, 요침사현미경검사 (manual

2 Korean J Clin Lab Sci. Vol. 49, No. 4, December microscopy) 영역으로나눌수있다 [1]. 임상에서소변의화학적성상검사에있어초기에는다양한검사방법및시험지등을사용하였으나현재는다항목동시측정시험법인요시험지봉검사 (dipstick urinalysis) 법을주로이용하고있다. 요시험지봉검사법은매우간편하기때문에모든의료기관에서널리사용되고있다 [2]. 시험지봉검사는소변에존재하는다양한산화물질, 환원물질, 착색물질등의영향을받아위양성또는위음성반응이흔하게발생할수있어결과의해석에주의해야한다 [3]. 소변에는요소 (urea), 크레아티닌 (creatinine) 등과같은유기성분들과무기성분인각종염류, 인산염등이존재하며혈구, 원주, 상피세포및각종결정체등이출현한다 [4]. 요시험지봉검사의잠혈반응 (occult blood) 이나 leukocyte esterase 검사로는요중적혈구나백혈구의존재만을추측할수있다. 따라서요침사현미경검사는원심분리한요에서얻은침사물을현미경으로관찰하여유형성분의유무와결정체등을확인감별하고양을판정하여신장과요로계통의질환진단및치료효과판정뿐만아니라각종대사이상질환, 전신성질환의조기발견을위한목적으로임상에서가장흔하게시행되는기본검사중하나이다 [4-7]. 요침사현미경검사는원심분리한요를현미경으로검경하는방법으로현재까지널리시행되고있으나수작업이많이요구되고정밀도가떨어지며, 검사시간이다소오래걸리는등의단점을가지고있다 [8]. 또한현미경의사용법에대한능숙함이필요하고표준화된요침사표본제작과침사물의종류를감별할수있는전문적인지식및숙련도가요구되며, 판독방법의차이에따른주관적인해석으로재현성이떨어지며검사의정도관리가쉽지않아서오류발생할가능성이높을뿐만아니라검사실간표준화가어렵다 [5,9-11]. 최근에는검사결과의정확도와표준화정도를향상시키기위해유세포분석원리 (flow cytometry) 를바탕으로한 Sysmex UF-100 (Sysmex, Kobe, Japan) 과이미지분석기술 (image based analysis system) 을바탕으로한 Iris iq 200 system (Iris Diagnostics, Chatsworth, CA, USA) 등과같은여러종류의자동화장비가규모가큰의료기관에도입되어운용되고있다 [12]. 2015년대한임상검사정도관리협회요경검학분과에서실시한추계학술대회에서제시한요경검가이드라인제안에따른표본제작과실제의료기관에서시행되고있는표본제작과정이상이하고임상병리학을전공하는학생들이사용하고있는여러교과서들의내용도서로다른부분이많았다. 따라서본연구는검사의질관리차원에서서로다른표본제작으로인해검사결과에차이가있는지확인하고자하였다. 재료및방법 1. 연구대상전남순천소재 H 병원외래및입원각과에서의뢰한환자의요검체를사용하였다. 검사의뢰된검체중요시험지봉검사에서잠혈반응과 leukocyte esterase 검사에서양성으로확인된검체를무작위로선정하여 30분이내에요침사현미경검사를시행하였다. 2. 연구방법요중적혈구와백혈구를확인하기위한검체는요시험지봉검사에 Uriscan Pro Semi-automatic Urine Analyzer (YD diagnostic, Yongin, Korea) 를이용하여요시험지봉검사를실시하였다. 각항목이양성 (1+ 정도 ) 이고세포의변성을최소화시키기위해 사이의비중 (specific gravity) 과 사이의 ph 결과를보인 10개검체를선별하여각각서로혼합하여본연구에필요한검체량 ( 약 250 ml) 으로조제하여표본제작및경검에사용하였다. 표본제작을위한원심분리에는 Hanil FLETA 5 (Hanil, Gimpo, Korea) 로 swing type의 rotor이며, 반경이 160 mm인원심분리기를사용하였다. 원심관은눈금이있는원추형플라스틱관을사용하였으며, 상청액을버린후침사량이일정하게남을수있도록약 30초정도 rack에꽂아둔후각방법에서제시한절차대로제작하였다. 경검오차를최소화하기위해임상경력 10년이상의숙련된기술을가지고있다고사료되는검사자 5명이각자의표본을제작하여경검하였다. 구경이 22 mm인 Nikon ECLIPSE E400 (Nikon, Tokyo, Japan) 현미경으로각방법에따라제작된표본을약확대 (low power field, 100배 ) 에서전시야를관찰한후강확대 (high power field, 400배 ) 에서 12 시야를경검하여이중최소값과최대값을보인시야의결과값을제외하고 10시야결과를가지고적혈구 (red blood cell, RBC) 와백혈구 (white blood cell, WBC) 의평균 (mean) 과표준편차 (standard deviation) 을산출하였다. 검경결과의해석은 2014년도에대한진단검사의학회에서발행한진단검사의학제5판 (laboratory medicine fifth edition) 에의거하여 grading system ( 등급체계 ) 로보고하였다 [1]. 1) 대한임상검사정도관리협회 2015년요경검가이드라인원심관에 10 ml의소변을넣고 400 G (relative centrifugal force, RCF) 에서 5분간원심분리한후상청액을버리고남은양이 330±100 L되게한다. 침사물을잔여요와균등히혼합

3 368 Hyeok-Jae Lee, et al. Evaluation of Urine Sediment Preparation Difference for Microscopic Examination 한후 pipette를이용하여 slide glass에 20 L을옮긴후 18 mm 18 mm cover slip를덮어침사가균등히분포되도록한후약확대에서전시야를관찰한후강확대에서최저 10시야이상을관찰한후세포 ( 적혈구, 백혈구 ) 수의평균을구하였다. 2) Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) POCT 10 원심관에 12 ml의소변을넣고 400 G에서 5분간원심분리한후상청액을버리고남은양을가볍게흔들어잘섞은후 1방울을슬라이드에떨어뜨리고현미경으로우선저배율에서전체적으로관찰한후고배율에서 10시야이상을경검하였다. 그러나최종침사량이나농축정도가제시되어있지않아서시험관을순간적으로약 1초간거꾸로하여상청액을버린후여분의상청액과침사물을잘혼합한다음한방울을 slide 위에떨어뜨린후 cover glass를덮고경검하였다. 3) 진단검사의학 2014년제5판원심관에 10 ml의소변을넣고 G에서 5분간원심분리하여상청액을버린후남은양이 1 ml (10배농축 ) 또는 0.5 ml (20배농축 ) 가되게한후가볍게흔들어잘혼합시킨다. 침사물 1방울을슬라이드에점적하여침사가균등히분포되도록한후약확대에서전시야를관찰한후강확대에서최저 10시 야이상을관찰한후세포수의평균을구하였다. 4) 요화학및체액검사 2011년제2판원심관에 ml의소변을넣고 2,000 rpm (revolution per minute) 으로 5분간원심분리한후침사물이부유되지않게상청액을제거하여소변과침사물이정확히 1 ml이되게한다. 침사물을균등히부유시킨후 1 방울을 slide glass에떨어뜨린후 cover slip를덮어약확대에서전시야를관찰한후강확대에서최저 10시야이상을관찰한후세포수의평균을구하였다. 3. 결과기준과보고단위실제임상에서사용되고있는정성적인결과보고는혈구등의세포, 결정체와세균등은강확대에서원주는약확대에서시야당평균개수를보고하거나 grade 단위로보고하는것이일반적이다 (Table 1). 4. 통계분석자료의통계처리는 SPSS version 18.0 (SPSS, Chicago, USA) 통계프로그램을이용하였다. 검체에대한적혈구와백혈구분포는평균과표준편차로분석하였으며, 검사방법에따른검사자간의적혈구및백혈구평균비교는 t-test와 ANOVA test 를시행하였다. 모든통계량의유의수준은 p<0.05로하였다. Table 1. Cell and cast grading system Grade Cells/HPF Grade Casts/LPF Grade 1 <1 Grade 1 <1 Grade Grade Grade Grade Grade Grade Grade 5 30 Grade Grade 6 1/2 of field of view Grade 6 20 Abbreviations: HPF, high power field; LPF, low power field. Source: Textbook of Laboratory Medicine, 5th ed, 결과 1. 적혈구에대한각방법비교동일한검체를 4가지방법으로표본을제작하여적혈구를비교하였다. 대한임상검사정도관리협회에서는 grade 4, CLSI POCT 10은 grade 5, 진단검사의학서적에서는 2명의검사자에서 grade 3 결과와 3명의검사자에서 grade 4를보였으며, 요화학및체액검사서적방법으로는 1명의검사자에서 grade 4 결과와 4명의검사자에서 grade 3 결과를보였다. 4가지방법 Table 2. Comparison of each methods between manual microscopy Method KAEQAS RBC S 14.5± ± ± ± ±3.4 CLSI POCT 10 RBC S 35.8± ± ± ± ±4.2 Textbook of Laboratory Medicine RBC S 6.7± ± ± ± ±1.5 Textbook of Urinalysis and Body fluids RBC S 9.4± ± ± ± ±2.9 Abbreviations: KAEQAS, Korean Association of External Quality Assessment Service; CLSI POCT 10, Clinical and Laboratory Standards Institute Point-of-Care Testing 10; RBC, red blood cell.

4 Korean J Clin Lab Sci. Vol. 49, No. 4, December 중 CLSI POCT 10에서평균값이가장높았으며, 4가지방법간의평균값은통계적으로유의한차이가있었다 (p<0.001) (Table 2). 2. 백혈구에대한각방법비교동일한검체를 4가지방법으로표본을제작하여백혈구를비교하였다. 대한임상검사정도관리협회에서는 grade 4, CLSI POCT 10은 grade 5, 진단검사의학서적에서는 grade 3 결과를보였으며, 요화학및체액검사서적방법으로는 1명의검사자에서 grade 2 결과와나머지 4명에서 grade 3 결과를보였다. 4가지방법중 CLSI POCT 10에서평균값이가장높았으며, 4 가지방법간의평균값은통계적으로유의한차이가있었다 (p<0.001) (Table 3). 3. 원심력차이에따른비교원심분리속도를 1,500 rpm으로고정하고반경을 120 mm, 160 mm, 200 mm로가정하여 RCF=1.12 Radius (rpm/ 1,000) 2 식에서각각의 RCF값을구한후 Hanil FLETA 5 (160 mm) 원심분리기를사용하여아래의조건별로원심분리하여대한임상검사정도관리협회에서제시한방법으로표본을제작하여원심력에따른차이를비교하였다. 302 G에서적혈구는 5 명의검사자모두 grade 3 결과를보였고, 백혈구도 5명의검사 자모두 grade 4 결과를보였다. 403 G에서적혈구는 5명의검사자모두 grade 3 결과를보였고, 백혈구는 5명의검사자모두 grade 4 결과를보였다. 마지막으로 504 G에서적혈구는 5명의검사자모두 grade 3 결과를보였으며, 백혈구는 1명의검사자는 grade 3를 4명의검사자는 grade 4 결과를보였다. 원심력차이에따라검사방법간의적혈구평균값은통계적으로유의한차이가있었으며 (p<0.001), 백혈구평균값은 1번검사자와 4 번검사자에서검사방법간통계적으로유의한차이를보이지않았다 (Table 4). 4. 상청액제거후침사량비교대한임상검사정도관리협회에서제시한표본제작방법으로원심관에 10 ml의소변을넣고 400 G에서 5분간원심분리후상청액을버리고침사물의양이 0.3 ml ( 농축계수 : 33) 과 1.0 ml ( 농축계수 : 10) 되게하여서로비교하였다. 실제로는대한임상검사정도관리협회에서제안한침사량은 0.33 ml 이었으나정확한용량측정이힘들어 0.3 ml로설정하여검사하였다. 0.3 ml에서적혈구는 5명의검사자모두 grade 3 결과를보였고, 백혈구는 5명의검사자모두 grade 5 결과를보였다. 1.0 ml 에서적혈구는 5명의검사자모두 grade 2 결과를보였고, 백혈구는 5명의검사자모두 grade 4 결과를보였다. 상청액제거후침사량에따른검사방법간적혈구와백혈구의평균값은검사 Table 3. Comparison of each methods between manual microscopy Method KAEQAS WBC S 12.3± ± ± ± ±2.4 CLSI POCT 10 WBC S 32.3± ± ± ± ±1.8 Textbook of Laboratory Medicine WBC S 7.4± ± ± ± ±1.3 Textbook of Urinalysis and Body fluids WBC S 4.3± ± ± ± ±1.8 Abbreviation: WBC, white blood cell. Table 4. Comparison of each centrifugal conditions between manual microscopy Centrifugation condition 120 mm, 1,500 rpm (302 G) RBC S 5.6± ± ± ± ± mm, 1,500 rpm (403 G) RBC S 7.3± ± ± ± ± mm, 1,500 rpm (504 G) RBC S 8.5± ± ± ± ± mm, 1,500 rpm (302 G) WBC S 10.3± ± ± ± ± mm, 1,500 rpm (403 G) WBC S 11.6± ± ± ± ± mm, 1,500 rpm (504 G) WBC S 12.0± ± ± ± ±1.5 p-value <0.001 <

5 370 Hyeok-Jae Lee, et al. Evaluation of Urine Sediment Preparation Difference for Microscopic Examination 자모두 0.3 ml에서가장높았으며, 통계적으로유의한차이가있었다 (p<0.001) (Table 5). 5. Slide glass 에떨어뜨린침사량차이대한임상검사정도관리협회에서제시한표본제작방법으로원심관에 10 ml의소변을넣고 400 G에서 5분간원심분리후상청액을버리고침사물의양이 0.3 ml 되게하였다. 잔여요와균등히혼합한후 pipette 를이용하여 slide glass 에각각 12 L, 20 L, 35 L을옮긴후 18 mm 18 mm cover slip를덮어침사가균등히분포되도록한후침사량의차이에따른결과를서로비교하였다. 12 L에서적혈구, 백혈구검경에있어 5명검사자모두 grade 3 결과를보였다. 20 L에서적혈구, 백혈구검경에있어 5명검사자모두 grade 4 결과를보였다. 마지막으로 35 L에서적혈구는 5명의검사자모두 grade 4 결과를보였으며, 백혈구는 1명의검사자는 grade 5를나머지 4명의검사자는 grade 4 결과를보였다. Slide glass에떨어뜨린침사량에따른검사방법간적혈구와백혈구의평균값은검사자모두 35 L에서가장높았으며, 통계적으로유의한차이가있었다 (p<0.001) (Table 6). 고찰지난수십년동안과학기술의발달로자동화, 전산화가급속도로이루어지면서진단검사와같은의료분야에많은영향을주었다. 요검사분야도많은발전을거듭해왔으나요침사보다요정성검사의자동화가상당히이루어져검사의질향상, 업무의효율성등여러가지측면을향상시켰으며, 결과보고시간단축에도상당한도움이되었다 [13]. 그러나대한임상검사정도관리협회요경검학분과에서실시된전국요검사정도관리현황을통해서알수있듯이요침사부분의표준화와정도관리는매우어려운난제중의하나라고하였다 [14]. 유세포분석법이나이미지분석법이적용된자동화요침사검사기기가개발보급됨에따라현미경으로요침사를관찰해야하는절대적빈도가줄어든것은사실이다. 이러한요침사자동화분석장비를이용하여검사를수행할경우침사결과의정량화, 높은재현성을얻을수있어보다객관적인검사결과를제공할뿐만아니라처리능력이높아생산성향상을기대할수있다. 또한미량으로도측정이가능하므로신생아등의검체에도용이한장점이있다 [12,15]. 현재는기기의고가로인하여경제성때문에보편적사용은어려우나정도관리등의필요성증가로앞으로도입이점점증가할것이며, 향후요침사자동화가상당히진행될것으로기대된다 [14]. 그러나여러가지현실적인문 Table 5. Comparison of the difference between each volume of residual sediment after removal of supernatant (concentration factor, CF) Volume of residual sediment (CF) 0.3 ml (33) RBC S 9.1± ± ± ± ± ml (10) RBC S 4.0± ± ± ± ± ml (33) WBC S ml (10) WBC S 16.3± ± ± ± ±1.6 Table 6. Comparison of the difference between each volume of sediment dropped on the slide Sediment volume dropped 12 L RBC S 7.0± ± ± ± ± L RBC S 10.4± ± ± ± ± L RBC S 20.6± ± ± ± ± L WBC S 9.1± ± ± ± ± L WBC S 14.5± ± ± ± ± L WBC S 30.9± ± ± ± ±2.8

6 Korean J Clin Lab Sci. Vol. 49, No. 4, December 제로상급의료기관을제외한절대다수의의료기관에서의요침사자동화기기의사용을기대하기는어렵다. 따라서요현미경검사는여전히수기법으로표본을제작하여현미경을통해검사자의눈으로판독해야할것이다. 요침사현미경검사는표본제작의표준화와정도관리가어렵고판독에주관적인견해가개입될수있어검사실, 검사자간요침사결과에차이가발생할수있다. 동일한환자라도결과가제각각다를수있어정확도및재현성에문제가발생할수있다. 따라서정확도와재현성을높이기위해서는숙련된검사자가요구된다. 또한요경검표본제작시원심분리속도및시간, 요검체량, 침사량등의여러요인에의해 cell grade에영향을준다 [16]. 표본제작의표준화를위해 2015년도에대한임상검사정도관리협회추계학술대회에서제안한요경검가이드라인을살펴보면, 원심관에소변 10 ml을넣은후 400 G로 5분간원심분리시킨후 20 L 침사물을 slide glass에떨어뜨린후 mm cover slip으로덮고경검하도록제안하였다. 1996년대한임상검사정도관리협회임상경검학분과위원회에서국내요검사실태조사자료에의하면그당시요침사실시기관수가 262 기관이었고, 요침사표본제작을위한원심속도는 1,500 rpm을사용하는기관이 63.2% (158 기관 ), 요침사잔류량은 0.1 ml이 25.4% (66 기관 ), 0.2 ml이 37.3% (97 기관 ), 0.3 ml이 16.9% (44 기관 ) 로조사되었다 [6]. 대한임상검사정도관리협회요경검학분과에의해 2008년도에 627기관을대상으로실시한원심분리기반경, 원심분리속도, 잔사량 ( 농축계수 ) 등을조사한결과에의하면, 원심분리기반경은 125 mm에서 190 mm까지다양하였고, 원심력은평균 501 G (130 G 1,145 G) 로나타났으며, 33 기관 (12.5%) 에서 400 G 이하, 144 기관 (54.8%) 에서 400 G 550 G를 86 기관 (32.7%) 에서 550 G 이상을사용하고있었으며, 침사량은적게는 0.2 ml에서많게는 1.0 ml로다양하였다. 정확한판독만큼이나중요한사항은요침사현미경검사를위한표본제작이라고할수있을것이다. 각의료기관의요현미경검사지침서와실제시행되고있는과정을확인한바에의하면, 요농축배수를결정짓는인자가운데하나인원심분리속도에있어서도 rpm을사용하는기관과 G를사용하는기관으로나뉘어져있었다. 중, 소형의료기관뿐만아니라대형의료기관에서도 rpm 단위를주로사용하고있었으며, 원심속도는대부분 1,500 rpm 있었다. G를사용하고있는기관은일반적으로 400 G, 450 G, 500 G 중한가지를선택하여적용하고있었다. 대한진단검사의학회임상화학분과위원회와대한임상화학회에서최근에실시한요침사검사의표준화를위한기초자료수 집결과에서도 16 기관중 11 기관에서 G를 500 G 이상은 3 기관, 400 G 이하는 2 기관으로조사되었다. 임상병리학을전공하는학생들의교과서에는주로 G로많이제시되어있었으며, 마찬가지로이들셋중하나가제시되어있었다. 1,500 rpm은원심분리기의반경이 160 mm인경우에 G로환산했을때 403 G에해당된다. 대한임상검사정도관리협회요경검학분과의 2008년도조사에의하면, 원심분리기반경이 125 mm에서 190 mm까지다양하였다. 이처럼각기관에서사용하는원심분리기의반경이제각각인점을고려해볼때대부분의의료기관에서사용하는 1,500 rpm은실제 302 G에서 479 G까지다양할거라는해석이가능하다. 원심분리속도가요농축에영향을준다고알려져있어서세가지조건으로설정하여실험하였다. 적혈구와백혈구모두검사자에서같은 grade 를보였으나, 시야당평균개수보고방식으로는약간의차이가있음을확인할수있었다. 통계적으로도원심력차이에따라적혈구평균값은유의한차이가있었으며 (p<0.001), 백혈구평균값도 3명의검사자에서유의한차이를보였다. 따라서회전수가똑같아도원심분리기의반경에따라원심관바닥에걸리는원심력이다르기때문에회전수를산출하는공식에대입하여해당기관의원심분리속도를반드시구하여사용해야할것으로사료된다. 요농축배수를결정짓는또다른중요한인자는요침사량이다. 대부분의료기관의표준안은요 10 ml을원심관에넣고원심분리후상청액을버리고 1 ml을취하라고되어있으나, 실제검사시피펫으로일일이 1 ml을취하기가쉽지않고피펫팅과정에서침사물이풀어질수도있어시험관을순간적으로약 1초간거꾸로하여상청액을버린후다시바로세워여분의상청액이흘러모이게한후잘혼합한다음한방울 ( ml) 을 slide 위에떨어뜨린후 cover glass를덮고경검한다고기록되어있었으며, 실제로이대로시행하고있었다. 대한진단검사의학회임상화학분과위원회와대한임상화학회에서최근에실시한요침사검사의표준화를위한기초자료수집결과를보면최종침사물의량이 9기관에서 0.5 ml ( 농축계수 : 20), 1 기관에서 0.4 ml ( 농축계수 : 25), 3 기관에서 0.2 ml ( 농축계수 : 50), 기타는 4기관으로조사되었다. 이처럼표본제작에사용되는침사량의양이검사실마다다름을확인할수있었다. 본연구에서도침사량차이에따른결과변화를확인하였다. 실제대한임상검사정도관리협회에서제안한침사량은 0.33 ml이었으나, 정확한용량측정이어려워 0.3 ml로설정하여실험하였다. grade 단위로보고하는방식에서는 1 grade 정도의차이를보였고, 시야당평균개수를보고하고방식에서

7 372 Hyeok-Jae Lee, et al. Evaluation of Urine Sediment Preparation Difference for Microscopic Examination 는약 2배정도의차이가있었음을확인할수있었다. 통계적으로도검사방법간적혈구와백혈구의평균값은유의한차이가있었다 (p<0.001). 대부분의검사실에서원심관을순간적으로약 1초간거꾸로하여상청액을제거한다고하였다. 이는검사자마다제거하는상청액에차이가발생하여남는침사량의농축배수가달라져서결과에영향을미칠수있을것이다. 뿐만아니라대부분의검사실에서침사량을잘부유시킨후한방울을 slide 위에떨어뜨린후경검한다고하였으나, 한방울의정확한용량이정해져있지않았다. 대한진단검사의학회임상화학분과위원회와대한임상화학회에서최근에실시한요침사검사의표준화를위한기초자료수집결과에서도 18 기관중 17 기관에서 slide glass에떨어뜨리는양이정해져있지않았다고보고하였다. 따라서본연구에서도검사자간떨군용량의차이로인해서결과에영향을주는지확인하였다. 떨어뜨린용량이증가하면결과값도같이증가하는것을확인할수있었다. grade 단위로보고하는방식에서는 1 grade 정도의차이를보였지만, 시야당평균개수보고에서는용량에따라적게는 2배, 많게는 4배정도의차이가있었음을확인할수있었다. 통계적으로도검사방법간적혈구와백혈구의평균값은유의한차이가있었다 (p<0.001). 대략적으로원심관을거꾸로잡고 slide glass 위에뚝쳐서한방울을떨군후경검한다고했는데이는검사자마다떨군용량의차이가많이발생할수있어결과에더큰영향을줄것으로사료된다. 그러나본연구에서는몇가지제한점이있다. 첫째, 동일한조건하에서많은검체를대상으로실험이진행되기어려운현실적관계로연구결과의일반화에한계가있다. 또한시간이경과할수록세포들의변성이나용해등으로인한영향에대해고려하지못하였다. 둘째, 검사자각자가표본을제작하여약확대에서세포의분포정도를확인후경검을하였으나, 같은검체내에서도세포의분포정도가달라서검사자간어떤시야를선택하여경검하느냐에따라서도서로다른결과가도출될수있는제한점이있다. 통계의유의성을나타내려면충분한검체의검사결과와제한점들을보완하는연구가포함된다면좀더정확한결과를얻을수있을것으로기대된다. 그럼에도불구하고요침사현미경적검사에있어결과에영향을미치는중요한인자는상청액을버린후남는침사물의양 ( 농축계수 ) 과부유시켜 slide glass에떨어뜨린침사량이었다. 원심분리속도도결과에영향을주는것으로확인되었다. 따라서일관성있고보다정확한검사결과를위해반드시 2015년대한임상검사정도관리협회추계학술대회에서제안한표본제작과정으로표준화가이루어져야할것이며, 제안한요경검가이 드라인을모든의료기관에서잘준수할수있도록협회의지속적인관심과홍보가필요할것이다. 또한요화학교과서들도일관성있게통일하여임상병리학을전공하는학생뿐만아니라교수자들의혼란도없애는노력도필요하다고사료된다. 요약 소변검사는다른검사에비해쉽고간편하면서도환자에게부담이없는검사로신장및요로계질환의진단, 치료및예후결정에중요한정보를제공한다. 요침전물은일반적으로원심분리된소변을검사자가현미경을통한검경에의해이루어진다. 대한임상검사정도관리협회에서제안한가이드라인과실제로의료기관에서시행되고있는내용이다르고임상병리학을전공하는학생들이사용하고있는서적에제시된내용도서로차이가있었다. 따라서요침전물표본제작에따른차이가검사결과에영향을주는지확인하기위하여. 요시험지봉검사에서잠혈반응과백혈구에스터라아제검사결과양성으로확인된검체를무작위로선별하여현미경적검사를시행하였다. 요침전물표본제작차이는요농축배수에영향을주어 cell grade나시야당평균세포수결과에영향을미쳤다. 침전물의농도를결정짓는첫번째요소는원심력이다. 그러나많은의료기관에서원심분리기반경을고려하지않는채 1,500 rpm을사용하고있었으며이는 400 G라는정확한원심력을얻을수없었다. 결과적으로요농축에있어차이가발생하여결과에도영향을미쳤다. 두번째요소는요침사물의양이다. 제거하고남은요의상청액의양은요침사물의농축계수에영향을주어다른결과를초래하였다. 뿐만아니라피펫을사용하여제시된정확한용량을취하지않고대략적으로한방울을떨어뜨린후경검했을때도결과에영향을주었다. 따라서일관성있고보다정확한검사결과를위해반드시표본제작과정이표준화가되어야할것이다. Acknowledgements: This paper was supported by Gwangju Health University in 2016 ( ). Funding: None Conflict of interest: None REFERENCES 1. Kim KD. Urinalysis and body fluid analysis. Korean society for laboratory medicine, Laboratory Medicine. 5th ed. Seoul: E-public; Chap Shin SY, Kwon MJ, Woo HY, Park HS, Kim YJ. Preliminary eval-

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석사논문.PDF ABO Rh A study on the importance of ABO and Rh blood groups information in Public Health 2000 2 1 ABO Rh A study on the importance of ABO and Rh blood groups information in Public Health 2000 2 2 ABO Rh