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1 책자를 내면서 전남축산위생사업소에서는 국제수준의 최첨단 진단분석시스템을 이용 하여 결핵 브루셀라병 등 인수공통전염병과 조류인플루엔자 구제역 등 재난형 전염병에 대해 지속적으로 모니터링을 하고 있으며, 도축장 출하 가축 및 축산물 전반에 대한 안전성 검사로 축산 농가는 물론 소비자의 요구에 부응코자 최선의 노력을 다하고 있습니다. 또한 도민의 실질적인 도움이 되는 수요자 중심의 연구 라는 목표 아래 축산업 보호는 물론 가축질병 청정화와 축산물안전성 향상을 위한 기술 개발 등을 주된 내용으로 하는 시험 연구사업을 추진하고 있습니다. 이처럼 우리 소에서는 심혈을 기울여 추진해온 연구 사업을 기반으로 매년 국 내외 학술지에 논문게재를 하고 있으며, 정책건의 특허 출원 등 연구내용의 양적 질적 향상을 위해 최선의 노력을 다하고 있습니다. 축산 현장 중심의 다양한 연구 과제로 올 한 해 동안 추진해온 연구 성과를 바탕으로 이번에 발간되는 축산위생사업소 硏究결과보고서 가 축산농가는 물론 축산 기관 단체에서 유용한 자료로 활용되기를 바라며, 더 나아가 더욱 발전하는 축산위생사업소가 되기를 기대합니다. 그동안 어려운 여건에도 각종 현안 업무와 연구사업 추진에 열성을 쏟아준 직원 여러분께 감사 드리며, 아낌없는 협조를 해주신 축산업에 종사하는 모든 분들께 깊은 감사를 드립니다. 2015년 12월 전라남도축산위생사업소장 김 상 현

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3 목차 연구제목 전남지방소결핵병발생현황및국내연구동향 전남지방구제역백신접종항체형성률조사 도내가금류도축장식육미생물오염도실태에관한연구 돼지질병별적정항생제사용설정에관한연구 전남지역흑염소의네오스포라증감염실태조사 전남서부지역한우요네병유병률조사

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5 전남지방소결핵병발생현황 및국내연구동향

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7 Ⅰ. 전남지방소결핵병발생현황및국내연구동향 Ⅰ.. 전남지방소결핵병발생현황및국내연구동향 최종성 박범기 김태호 박광만 정지영 김상현 전라남도축산위생사업소 서 론 결핵은의학의발달과함께발생이크게감소하였으며그피해가작아진만큼차츰대수롭지않은질병으로인식되어가는듯하였으나최근인류의고령화, 면역억제제사용및 AIDS/HIV감염으로인해결핵발병이증가하고있어그중요성이다시제기되고있다. 1),2) 결핵은다른질병보다도사람의이환율과사망률에크게관련되어있다할수있는데 WHO통계에의하면인구의 1/3이결핵간균에감염되어있고감염인구의 10% 정도가일생동안결핵을앓고있으며연간 1~2 천만명이새로결핵에감염되고 3백만정도의사람이죽고있으며미국에서도결핵발생의감소현상은최근에반전되어 1991년신고된경우만해도 10% 증가하였다고보고하였다. 결핵은 Mycobacterium속의감염에의해발병하는만성소모성질환으로숙주범위가광범위하여사람을포함한모든동물에중요한인수공통질병이다. 특히소에발생하는소결핵은접촉, 공기, 우유를통해소뿐만아니라사람에도전염될가능성이크기때문에수의공중보건학적으로중요하다할수있다. 3),4),5),6),7),8),9) 소결핵은주로 Mycobacterium bovis에의해유발되는인수공통전염병이다. 소결핵의원인체인 Mycobacterium bovis는 M. tuberculosis complex에속하는균으로서 M. tuberculosis complex는 M. bovis이외에도 M. tuberculosis, M. pinnipedii, M. africanum, M. microti가이에속한다. 특히, M. tuberculosis와 M. bovis는그유전체가해독되었는데, M. bovis 가 M. tuberculosis보다약간작은크기로나타났으며, 두균이발현하는단백질은 4,000개정도로알려져있으며, 99.95% 이상의상동성을가진다. 소결핵에감염되면, 개체와개체간감염은주로기침에의한호흡기감염이가장위험하며, 소결핵에감염된개체의배설물이나분비물로오염된물과사료등을섭취함으로써감염된다. 한편, 결핵에감염된야생동물, 오소리, 너구리, 멧돼지, 야생노루등과의접촉이나감염된야생동물의배설물이나분비물에오염된물과사료등을섭취함으로써감염될수있다. 우리나라에서소결핵은 1913 년처음발생한것으로기록되어있고 10) 이후 1943 년부터 1995 년 사이의 13 년간을제외하고는꾸준히그발생이기록된바 1926 년에최고 38.4% 였으며이후 10% 전라남도축산위생사업소 3

8 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 이상으로높은양성률을보이다가 1950 년대는 2~3% 수준으로낮아졌고점점감소하여현재국내 소결핵은 0.15% 정도로저하되었다. 이는지속적인검진과살처분및보상정책의성과라할수 11), 12). 있다 소결핵의진단방법으로는임상증상, 피내검사, 균분리에거의의존하다최근에는혈청검사와유전자검사방법들이함께활용되고있으며주검사방법으로사용되는피내검사는개체별로주사하기위해많은인력이요구되며검진시간또한 2~3일이상소요되며비정형우결핵균에의한양성반응등의문제가있는등아직현장에서활용하기에불편함이있어새로운검사방법의개발이필요하다. 미국이나영국의경우결핵박멸에관한표준방법과법칙을제공하여국가적인박멸프로그램을실시하고있으며 3),13) 우리나라에도오래전부터소결핵근절및사람으로의전파를방지하기위해우유의살균, 피내검사양성우살처분, 도축검사시폐기등여러가지방법을국가적인정책으로동원하고있으나소결핵은쉽게근절될기미를보이고있지않은듯하다. 따라서우리나라소결핵의청정화를달성하려면검진과도축검사에의한양성우색출강화및사후관리강화, 소결핵발생농장및관련농장에대한방역조치강화와현재진단법을보완할수있는진단법의개발, 야생동물결핵에대한조사및대책마련, 지속적인검진인력확충과교육등의종합적인노력과순차적인목표수립과실행이요청된다. 질병방제의방법으로전염원전파를통제하는것은당연하며이를위해서는그전파양상과실질적인발생상황의파악이이루어져야함에도불구하고이러한연구가부족한실정으로이에본연구는 2011 년부터 2015년까지 5년동안전라남도축산위생사업소에서실시한전라남도내소결핵병검진자료를정리하고소결핵병방제를위한국내연구동향을조사하여전라남도내소결핵병의전파방지및방역에체계적인자료를제공하고소결핵병근절사업과이후관련연구에도움을주고자실시하였다. 4

9 Ⅰ. 전남지방소결핵병발생현황및국내연구동향 재료및방법 1. 공시재료 본시험에사용한시료는 2011년부터 2015년까지 5년간전라남도축산위생사업소에서한ㆍ육우및젖소를대상으로결핵병및브루셀라병방역실시요령 ( 농림축산식품부고시 호, ) 에의거검사를실시하였다. 2. 시험방법가. PPD 피내검사를위해사용한 PPD는국내동물약품업체 ( 중앙백신 ) 에서생산하여국가검정을거친 M. bovis AN5 유래 PPD-B를사용하였다. 나. 피내튜버큐린검사피내튜버큐린검사는결핵병및브루셀라병방역실시요령 ( 농림축산식품부고시 호, ) 에따라실시하였다. 즉 12개월이상의소에대해미근부추벽의피내에튜버큐린피내검사용 PPD 진단액을접종후 48~72시간사이에피부두께를측정하여접종전과접종후의종창차이가 5mm 이상이면양성, 3~5mm 이면의양성, 3mm미만은음성으로판정하였다. 다. 감마인터페론법 감마인터페론생성검사는단클론항체를사용샌드위치효소면역측정법을이용하는국내동물약품업체 ( 바이오노트 ) 에서생산한제품을제조사에서정한검사요령에의거실시하였다. 결 과 1. 소사육현황 2005년부터 2015년까지 11년동안전국및전남지역의소사육현황을조사한결과는 ( 표 1) 과같다. 전국의한ㆍ육우사육두수는 2005년 1,653,883두에서점차증가하여 2013년 2,966,384두를정점으로 2015년 2,658,630 두로감소하였으며, 농가수는 2005년 191,401 호에서점차감소하여 2015년 101,767 호로 전라남도축산위생사업소 5

10 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 집계되었으며, 젖소는 2005 년전국 496,606 두, 9,484 호에서 2015 년 424,662 두, 5,587 호로사육두수와 농가수모두감소하였다. 전라남도역시 2005 년한ㆍ육우 253,678 두 35,006 호에서 2015 년 432,234 두, 18,783 호로사육두수는 증가, 농가수는감소하였고, 젖소 37,935 두, 664 호에서 28,878 두, 341 두로전국과같이감소하였다. ( 표 1) 소사육변화 ( 단위 : 두, 호, 통계청가축동향조사 ) 연도 구분 한ㆍ육우젖소전국전남전국전남두수호수두수호수두수호수두수호수 ,653, , ,678 35, ,606 9,484 37, ,835, , ,108 35, ,785 8,918 36, ,043, , ,249 34, ,578 8,138 33, ,241, , ,040 36, ,561 7,407 30, ,481, , ,456 35, ,793 7,010 32, ,706, , ,339 34, ,350 6,742 30, ,881, , ,614 34, ,466 5,969 29, ,940, , ,445 31, ,922 5,977 28, ,966, , ,945 27, ,509 5,986 29, ,810, , ,854 22, ,974 5,867 29, ,658, , ,234 18, ,662 5,587 28, 년도우리나라지역별소사육현황은 ( 표 2) 와같다. 한ㆍ육우사육두수는경상북도가 577,024 두로 (22%) 가장많이사육하고있으며전라남도는 432,234 두 (16%) 로 2위이며, 젖소의경우경기도에서 167,209 두 (39%) 사육하고있으며전라남도는충청남도 (19%), 경상북도 (9%), 전라북도 (7%), 경상남도 (7%), 전라남도 (7%) 순이었다. 6

11 Ⅰ. 전남지방소결핵병발생현황및국내연구동향 ( 표 2) 2015 년시ㆍ도별소사육현황 ( 단위 : 두, 호 ) 시ㆍ도 구분 한육우 젖소 호수두수호수두수 전국 101,767 2,658, % 5, , % 서울특별시 % % 부산광역시 123 1,848 0% % 대구광역시 ,821 1% 19 1,390 0% 인천광역시 ,345 1% 53 2,912 1% 광주광역시 233 7,259 0% % 대전광역시 175 5,287 0% 0 0 0% 울산광역시 1,362 26,451 1% 14 1,061 0% 경기도 6, ,090 9% 2, ,209 39% 강원도 7, ,166 7% ,562 4% 충청북도 6, ,144 7% ,774 5% 충청남도 14, ,617 13% 1,116 81,486 19% 전라북도 9, ,944 12% ,594 7% 전라남도 18, ,234 16% ,878 7% 경상북도 22, ,024 22% ,744 9% 경상남도 12, ,454 10% ,528 7% 제주도 ,729 1% 45 4,272 1% 출처 : 통계청, 가축동향조사 /4분기 2. 소결핵발생현황 ( 표 3) 은최근 5년간전국과전라남도소결핵병발생현황으로전국은발생건수및발생두수모두 2011년 257건 1,687두에서 2012년 292건 1,639두, 2013년 321건 2,506두, 2014년 430건 4,109두로매년증가하다 2015년. 11월까지 269건 2,173건으로감소하였으며, 전라남도는 2011년 42건 199두, 2012년 41건 193두로비슷하다 2013년 46건 248두로약간증가하다 2014년 76건 907두로급격히증가하다 2015년. 11월말현재 47건 478건으로감소하였다. 결핵병발생현황을보면전국과전라남도모두감마인터페론검사방법을활용해한ㆍ육우에대한모니터링검사와결핵병발생농가에대한감마인터페론검사병행실시를본격실시한 2014년부터발생이급격히증가하였다. 전라남도축산위생사업소 7

12 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 ( 표 3) 최근 5 년간전국및전남지역소결핵병발생현황 ( 단위 : 건, 두수 ) 연도 계 년 2013 년 2012 년 2011 년 지역 건수두수건수두수건수두수건수두수건수두수건수두수 전국 1,569 12, , , , , ,687 전남 252 2, 전남도내지역별소결핵병발생현황을조사한결과는 ( 표 4) 와같다. 5년동안총 252건 2,025두가검색되었으며그중 46건 (18%) 이나주시에서발생하였고다음이영암군 39건 (15%), 보성군 25건 (10%), 담양군 18건 (7%), 장성군 16건 (6%) 순이었으며, 발생두수는영암군 453두 (22%), 나주시 418두 (21%), 고흥군 199두 (10%), 보성군 153두 (8%), 영광군 112두 (6%) 순이었다. 일반적으로사육두수가많은지역에서발생이많았는데장흥군과해남군이사육두수에비해발생비율이낮았다. ( 표 4) 최근 5 년간전라남도시ㆍ군별소결핵병발생현황 ( 단위 : 건, 두수 ) 연도 시군 계 년 2013 년 2012 년 2011 년 건수두수건수두수건수두수건수두수건수두수건수두수 계 % 2, % 목포시 0 0% 0 0% 여수시 4 2% 6 0% 순천시 10 4% 109 5% 나주시 46 18% % 광양시 0 0% 0 0% 담양군 18 7% 66 3% 곡성군 4 2% 4 0% 구례군 2 1% 2 0% 2 2 고흥군 13 5% % 보성군 25 10% 153 8% 화순군 10 4% 64 3% 장흥군 12 5% 44 2% 강진군 11 4% 77 4%

13 Ⅰ. 전남지방소결핵병발생현황및국내연구동향 해남군 10 4% 54 3% 영암군 39 15% % 무안군 9 4% 53 3% 함평군 10 4% 52 3% 영광군 11 4% 112 6% 장성군 16 6% 87 4% 완도군 2 1% 72 4% 진도군 0 0% 0 0% 신안군 0 0% 0 0% 품종별소결핵병발생현황은 ( 표 5) 와같다. 젖소의경우지속적인검색결과전국과전라남도 모두일정한발생양상을보이고있으나한ㆍ육우의경우는 2014 년급속히증가하였다. ( 표 5) 최근 5 년간품종별소결핵병발생현황 ( 단위 : 건, 두수 ) 계 년 2013 년 2012 년 2011 년 두수건수두수건수두수건수두수건수두수건수두수건수 계 1,569 12, , , , , ,687 전국 젖소 296 3, , 한ㆍ육우 1,273 8, , , , , ,113 계 252 2, 전남 젖소 한ㆍ육우 221 1, 국내소결핵병연구동향 1). 세균학적진단 소결핵은피내진단으로양성으로판정되었다고하더라고, 뚜렷한임상증상이나부검시육안병변이나조직학적소견이관찰되지않을수있다. 특히, PPD에대한결핵감염우의지연형과민반응을이용하여진단하는피내검사법은결핵감염초기에주로나타나는면역반응이기때문에, 주기적이고지속적인결핵검진양성우살처분정책을펼치고있는상황에서는더욱더임상증상이나육안병변이없는무병소우가빈번하게관찰될수있다. 전라남도축산위생사업소 9

14 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 그러므로양성우에대한병리조직소견관찰및결핵균특이유전자유무검사와, 세균분리 동정은결핵진단에서최종확인진단의가치를갖는표준진단법이다. 우선결핵은감염부위와감염경로를따라분포된장기와주요림프절에서주로분리되기때문에비장, 간, 폐, 기관지림프절, 악하림프절, 장간막림프절, 간문림프절, 인후두림프절, 폐문림프절, 종격동림프절등의조직을채취하여선택배지 (Lowenstein-Jensen(LJ) 배지, BM배지 ) 에조직유제액을접종한후, 16주정도배양하여균괴를확인한다. 의심균괴에대한특이유전자검사와생화학검사를통하여동정한다. 15),20) 2). 유전자진단생화학검사에의한동정의불편함을극복하기위해특이유전자를이용한진단법이개발되었다. IS(insertion sequence)6110, IS1081, MPB70(mycobacterial protein of BCG 70), MPTR(multiple tandem repeat) 등이그것이다. 특이유전자를동시에진단하여동정할수있는방법도개발되어 있다 16). 요즈음이러한유전자진단법에더나아가분자역학기법을이용하여균주의유래를추적 하고균주간근연관계를알아볼수있는방법이개발되어이용도고있다. IS6110 RFLP(retriction fragment length polymorphism), IS1081 RFLP, spoligotyping, PFGE(pulsed field gel electrophoresis), VNTR(variable number of tandem repeat) 등이그것이다 17), 18), 19), 20). 이러한기법을이용하여분리되는결핵균의근연관계를추정할수있다. 3). 지연형과민반응에의한진단소결핵의공식적인진단법은결핵의단백질을피내에접종한다음, 지연형과민반응을측정하는것이다. 지연형과민반응은특이면역세포의면역반응으로일어나는데, 결핵에감염된개체가갖고있는결핵항원기억 T 세포에의한반응의정도가결정된다는이론적인근거를가지고있다. 소결핵피내진단에이용하는균주는세계적으로 M.bovis AN5 균주가많이이용되고있다. 이러한피내진단의특이성은 74~98%, 민감성은 68~95% 로개체가처한환경에따라다양하게나타날수있는데, 이는조류결핵균, 요네병균, 환경마이코박테리아등소결핵균과공통항원을갖고있는균에감염되어있는개체에서도결핵튜버큐린에의한지연형과민반응이일어날수있기때문이다. 따라서이러한결핵튜버큐린은그민감성과특이성, 표준화를더욱향상시키기위해 OT(old tuberculin), HCSM(heat concentrate synthetic medium), PPD(purified protein derivative) 등으로발전되어왔다. 앞서도기술한바와같이, 결핵감염개체에만특이적으로반응을일으킬수있는특이항원 (MPB70 등 ) 만으로구성된피내진단액을이용한진단이시도된바있으나, 상당히낮은민감성때문에공인진단액으로사용하기에는한계가있다 21). 우리나라에서도 OT, HCSM, PPD 등에의해소결핵을진단해왔으며, 현재표준화가용이하고특이성및민감성이우수한 PPD에의하여진단하고있다. 10

15 Ⅰ. 전남지방소결핵병발생현황및국내연구동향 한편, 우형결핵 PPD만접종했을때의가양성우를제거하기위한진단법으로조형결핵균에서유래한 PPD를동시접종하여그종창차가 4mm 이상일경우에는진성결핵으로판정하며, 1~4mm의경우의양성으로판정하는진단법이선진국에서 1차검사또는 2차검사로활용되고있다 22). 하지만, 이방법은경측부의피내에시술한다는점과 2차검사에활용시 1차검사후 10일이내혹은 60일이후에접종해야한다는점등의시술상번거로움이있고, 적용하고있는나라들에서결핵근절정책의목적상특이성을높이는것보다는민감성을향상시키는것이근절정책에부합하기때문에최종개체에대한, 그리고우군에대한결핵의최종판정은비교피내검사결과와소결핵근절을위한역학적인상황을고려하여결정하고있기도하다. 그럼에도불구하고, 결핵근절프로그램의후반기에서는필수적으로적용하여단일피내반응에대한비특이반응을제거하기위한일환으로소결핵근절을효율적으로달성하기위해적용해야할필요성이있다. 현재국내에서는이를위하여나라별로달리적용하고있는각 PPD 역가에대해우리나라의 PPD 적정역가를설정하였고 23), 현재국내농장적용을통한비교피내진단법의진단기준설정과그효율에관해연구하고있다. 4). 감마인터페론조사에의한진단소결핵의주요면역반응이세포성면역반응인것을이용하여결핵 PPD로전혈을자극했을때, PPD 항원의특이적인 T 세포에의해분비되는감마인터페론양을측정하여결핵을진단하는방법이최신기법으로널리활용되고있으며, 특이성과민감성이향상된방법으로각광받고있다. 현재, 국내에서는바이오노트에서생산된제품 ( 티비페론 ) 이사용되고있다. 5). 특이항체검사에의한진단 소결핵의항체진단법은새로운항체진단법이개발되면, 그에따라연구되고시도되어왔지만, 소결핵의병성기전특성상세포성면역반응을측정하는피내진단법이소결핵진단의근간을 이루고있다. 한편, 소결핵의후반기, 즉, 결핵균이보다많이배설될수있어전염가능성이높은 시기에는체액성면액에의한항체수준이높아지기때문에소결핵의전파방지를위한수단 으로써유용한특이항원을발견하여항체진단에응용하고자연구하고있다. 우리나라에서도 소결핵항체진단으로써보체결합반응, 효소면역측정법, 면역크로마토그래피등의기법이연구 24), 25). 되어져왔다이러한 항체검사법은결핵피내진단에대한보충적인진단법으로활용할 수있으며, 특히, 우군의스크리닝검사와도축우에대한혈청검사로활용하여양성우에대해 서는그출처농장에대한추적검사용으로활용할수있을것이다. 전라남도축산위생사업소 11

16 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 결 론 2011년부터 2015년 11월까지 5년간전라남도에서발생한소결핵병에대한조사결과는다음과같았다. 5년동안총 252건 2,025두가검색되었으며감마인터페론검사방법을병행한 2013년하반기부터발생이늘어 2014년도에는 76건 907두로발생건수및발생두수모두급속히증가하였다. 대체로사육두수가많은지역이발생이많았는데발생건수로는나주시가 46건 (18%) 로가장많았으며발생두수는영암군이 453두 (22%) 로가장많았다. 하지만그중장흥군과해남군은사육두수에비해발생빈도가낮았다. 품종별발생현황은매년결핵검진을실시해온젖소는일정한발생양상을보였으나감마인터페론을활용한모니터링검사와양성에대해감마인터페론방법을병행하여검사를실시한영향으로한ㆍ육우에서 2013년하반기부터증가하다 2014년급속히증가하였다. 국내소결핵은그동안방역당국피내검진과살처분정책에힘입어 0.15% 내외의발생을 1975년이후로보이고있으며현재피내진단과감마인터페론검사및도축장에서의결핵병변검사에의해통제되고있으나한 육우의피내검진확대와새로운효소면역측정법에의한스크리닝검사법개발, 면역크로마토그래피를이용한간이검사법개발, 바이오침을이용한대량신속정밀검사법개발등이필요하며이를위해서는단백질체분석과면역학적분석을통한특이적인항원의검색과분자적수준의결핵균특성연구가반드시병행되어야한다. 또한소결핵방제에대한교육도강화해야할것이며소결핵양성개체를판정하는사후검사프로그램과양성우는물론동거우에대한사후관리와양성우출처농장추적조사가반드시강화되어야할것으로사료된다. 12

17 Ⅰ. 전남지방소결핵병발생현황및국내연구동향 참고문헌 1. Horsburg CR, Mason Ⅲ UG, Farhi DC, et al Disseminated infection with Mycobacterium avium-intracellular infection. Medicine(Baltimore). 64 : 36 ~ Miller JW, et al Tuberculosis in immunosuppressed patients. Lancet. 1 : 1176 ~ Van Soolingen D, de Haas PE, Haagsma J et al Use of various genetic markers in differentiation of Mycobacterium bovis strains from animals and humans and for studying epidemiology of bovine tuberculosis. J Clin Microbiol 32(10) : 2425~ Collins DM, de Lisle GW, Gabric DM Geo graphic distribution of restriction types of Mycobacterium bovis isolates from brush-tailed possums (Trichosurus vulpecula) in New Zealand. J Hyg 96:431~ Cousins DV, Francis BR, Gow BL, et al Tuberculosis in captive seals : bacteriological studies on an isolate belonging to the Mycobacterium tuberculosis complex. Res vet sci. 48 : 196~ Huitema H Tuberculosis in animals and man with attention to reciprocal transmission of mycobacterial infection and the successful eradication of bovine tuberculosis in cattle in Netherland. Royal Netherland Tuberculosis Association, The Hague 7. Moda G, Daborn CJ, Grange JM, et al The zoonotic importance of Mycobacterium bovis. Tuber lung dis. 77(2) : 103~ Grange JM, Yates MD Zoonotic aspects of Mycobacterium bovis infection. Vet Microbiol. 40 : 125~ Daborn C TB in humans and domestic animals in the developing world. Ibid 205~ 전무형, 한국에서주로문제되는소전염병의방역. 한국수의공중보건학회지 14(3) : 손봉환 우결핵에대한종합검토. 대한수의사회지. 23(9) : 농림수산통계연보. 1888년 ~ 1996년. 13. Tweedle NE, Livingstone P Bovin tuberculisis control and eradication programs in Australia and New Zealand Vet Microbiol 40(1-2) : 23 ~ 결핵병및브루셀라병방역실시요령 농림축산식품부고시제 호 15. Murray, P, R., Baron, E. J., Pfaller, M. A., Tenover, F. C. and Yolken, R. H. Manual of Clinical Microbiology, P 414, 7th ed. American Society for Microbiology, Washington DC, 전라남도축산위생사업소 13

18 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 16. Yeboah-Manu, D., Yates, M. D. and Wilson, S. M. Application of a simple multiplex PCR to aid in routine work of the Mycobacterium reference laboratory. J Clin Microb, 2001, 39, Feizabadi, M. M., Robertson, I. D., Cousins, D. V. and Hampson, D. J. Genomic analysis of Mycobacterium bovis and other members of the Mycobacterium tuberculosis complex by isoenzume anlaysis and pulsed-field gel electrophoresis. J Clin Microb, 1996, 34, Frothingham, R. and Meeker-O'Connell, W. A. Genetic diversity in the Mycobacterium tuberculosis complex based on variable numbers of tandem DNA repeats. Microbiology, 1998, 144, Haddad, N., Ostyn, A., Karoui, C., Masselot, M., Thorel, M. F., Hughes, S. L., Inwald, J., Hewinson, R. G. and Durand, B. Spologotyping diversity of Mycobacterium bovis strains isolated in France from 1979 th J Clin Microb, 2001, 39, 조윤성, 국내소결핵의발생및연구동향. 한국수의공중학회지 31(2) : 64 ~ Pollock, J. M., Douglas, A. J., Mackie, D. P. and Neill, S. D. Identification of bovine T-cell epotopes for three Mycobacterium bovis antigens: MPB70, 19,000 MW and MPB57. Immunology, 1994, 82, Monaghan, M. L., Doherty, M. L., Collins, J. D., Kazda, J, F. and Quinn, P. J. The tuberculin test. Vet Microb, 1994, 40, 조윤상, 김종만, 정석찬, 우승룡, 김종염, 유한상, 박용호, 안종삼. 비교피내검사와감마인터페론검사에의한우결핵의진단. 대한수의학회지, 1999, 39, 윤용덕, 김재학, 김상희, 이현수. 형광보체결합반응에의한항산성세균의동정. 가위연시험연구보고서, 1975, pp 윤용덕, 김종만, 박정문, 이민웅, 최철순. 백혈구유주억제반응및효소면역항체법에의한우결핵진단에관한연구. 농시논문집, 1990, 32,

19 전남지방구제역백신접종 항체형성률조사

20

21 Ⅱ. 전남지방구제역백신접종항체형성률조사 Ⅱ.. 전남지방구제역백신접종항체형성률조사 김기범 임종수 이승주 오은희 류철혁 김상현 전라남도축산위생사업소 서 론 구제역 (foot-and-mouth disease, FMD) 은소, 돼지, 양, 염소및사슴등과같은우제류동물에서체온이상승하고입, 혀, 유두및발굽사이에수포가형성되는급성바이러스성질병으로구제역에걸린동물은형성된수포의통증때문에발육, 운동및비유장해에따른현저한생산성의저하를일으킨다. 어린동물에서는폐사가발생하는경우도종종있는데이질병의병원성은축종에따라다양하다. FMD는동물질병중에서전염력이가장강한질병중하나로써, 발생시발생축또는발생지역우제류가축의살처분, 백신접종, 교통통제, 국제교역상불이익발생등국가경제에미치는영향이매우커서세계동물보건기구 (Office International des Epizooties, OIE) 에서지정한 List A 질병이다. FMD는 Picornaviridae 과, Aphthovirus 속에속하는 25 30nm 크기의작은 20면체의 non-enveloped RNA FMD 바이러스 (FMDV) 가원인체로 FMDV는 7종류의 serotype (O, A, C, SAT1, SAT2, SAT3, Asia1) 이각각의 serotype에면역학적으로영향을주지않고, serotype 내에서도완전한방어를하지못하는 subtype이있으며, 바이러스자체의빈번한변이, 다양한항원성으로인한백신개발의어려움등의이유로질병근절이용이하지않다. 일반적으로 FMD의확산방지를위하여살처분과 ring-vaccination 을병행실시하는데 Asia 1형을제외한다양한 serotype의 FMD가발병하고있는우간다는발생지역가축이동제한과소에게만 ring-vaccination을실시하였지만, 백신프로그램과효능에대한검사를실시하지않았고지속적인 FMD 발생이보고되고있다. 우리나라에서는 1933년충청북도와전라남북도를제외한전국에서발생하여 1934년에발생이종식된후 1934년부터 2000년 3월까지 66년간구제역발생이없어구제역청정국으로분류됐으나, 2000년 3월경기파주에서발생하여살처분과백신접종으로, 2002년과 2010년 1월, 4~5월의발생에서는강력한살처분정책등으로청정화를신속히유지하였으나, 전라남도축산위생사업소 17

22 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 2010년말안동에서발생한 FMD의경우전국적인확산으로백신접종을실시하여 2011년 3월초부터급격히발생이감소하였다가, 2014년 7월경북의성, 12월에는충북진천에서발생한이후정기적인백신접종을추진중에있다. 긴급백신의경우 50% protective dose의 6배용량 (6PD50) 으로만들어지고예방을위하여사용하는정기백신은보통 3PD50로만들어지는데, FMD의병원성과변이성등을고려하여우리나라에서는현재까지 6PD50의백신을사용하고있다. FMD의예방과확산방지를목적으로지금까지연구, 개발된백신으로는 inactivated vaccine, live vector vaccine, subunit vaccine, nucleic acid vaccine, novel attenuated vaccine 등이있다. 현재우리나라에서는소의경우 3가지 serotype (O, A, Asia1) 혼합백신을접종하고돼지의경우 1가지 serotype (O manisa + O 3039) 단가백신을접종하고있는데임상증상이없고자연감염시에만형성되는 Non structural protein (NSP) 항체가검출되지않는경우 SP 항체의형성정도로백신항체유지수준을측정하고있다. 지금까지구제역발생이없었던전남지역의소와돼지의 FMDV의 SP 항체를 ELISA법으로측정하여축종별, 사육단계별, 월별, 지역별, 성별, 연령별백신항체가조사를통해향후구제역방역대책추진과백신접종에관련한연구및정책수립시에기초자료로활용하고자본연구를실시하였다. 재료및방법 공시재료 2015년 1월부터 12월까지전남지역에서구제역백신항체검사를위해전라남도축산위생사업소에의뢰된축산농가 725호 ( 한우 174호, 돼지 551호 ) 의가축 22,423두의혈액으로부터분리한혈청을본실험에사용하였다. 이들농장에서침흘림, 수포병변등구제역의특이임상증상은없는것을확인하였으며분리한혈청은실험을실시할때까지 -20 에서냉동보관하였다가 ELISA 검사를실시하였다. 검사방법 ELISA kit를이용한 SP 항체검사 : SP 항체검사는 PrioCHECK FMDV type O ELISA kit(prionics, Netherlands) 를사용하여제조사의매뉴얼에따라실시하였으며흡광도는 SPECTRA max 340PC Microplate Reader(Molecular Devices, USA) 장비로측정하였다. 먼저흡착플레이트를실온에서 10~20분간방치한후각 well에 ELISA buffer를 90μl씩분주하였다. 준비한가검혈청과양성대조액을 10μl씩분주하여실온 (22±3 ) 에서 1시간반응시킨후검체와대조액을제거하였다. 18

23 Ⅱ. 전남지방구제역백신접종항체형성률조사 Washing solution으로 6회반복세척한다음 Conjugate를각 well에 100μl씩분주하여실온에서 1시간반응시켰다. 같은방법으로 6회반복세척한다음 TMB buffer를 100μl씩분주하여 15분간반응시킨후 Stop solution을 100μl씩분주하여반응을정지하였다. 450nm의파장에서흡광도 (Optical density, OD) 를측정하였고제조사의계산식 {100-(corrected OD450 test sample/corrected OD450 max)} 으로얻은 Percentage inhibition (PI) 수치를확인하였다. PI 수치가 50이상일경우양성, 50미만일경우음성으로판정하였다. 검사결과분석검사결과는축종별로소의경우월별, 지역별, 성별, 연령별로구분하였고, 돼지의경우사육단계별 ( 모돈, 비육돈 ), 월별, 지역별로구분하여살펴보았으며, PI 수치를이용하여 SP 항체의보유현황을분석하였다. 결과및고찰 전남지방 725개농장에서채취한 22,423점의검체에서 SP 항체는 12,974점이양성으로판정되어 58% 의양성률을나타내었다. 축종별로구제역 SP 항체가를조사한결과소의경우 1,742두중 1,722두양성으로 99% 의항체양성률을보였고, 돼지의경우 20,681두중 11,252두양성으로 54% 의항체양성률을나타내었으며이중모돈이 1,951두중 1,664두양성으로 85% 의항체양성률을보였고비육돈이 18,730두중 11,252두양성으로 51% 의항체양성률 (Table 1) 을나타내었다. Table 1. 돼지사육단계별백신항체양성률 축종구분검사두수양성두수양성률 모돈 1,951 1,664 85% 돼지 비육돈 18,730 9,588 51% 계 20,681 11,252 54% 월별구제역 SP 항체가를보면소의경우 1월, 4월, 7월, 8월, 9월, 10월, 11월에 100% 로가장높은항체양성률을보였고, 6월에 99%, 5월에 95%, 2월에 83% 의항체양성률을보였으며, 3월에 64% 로가장낮은항체양성률을나타내었다. 돼지의경우 10월에 69% 로가장높은항체양성률을보였고, 6월, 7월, 9월에 60%, 8월에 59% 순이었으며, 2월에 43% 로가장낮은항체양성률을나타내었다. 전라남도축산위생사업소 19

24 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 계절별로는소의경우가을에가장높은항체양성률을보인반면, 봄에가장낮은항체양성률을보였으며, 돼지의경우여름에항체양성률이가장높았고겨울에항체양성률이가장낮았다 (Table 2). 항체양성률저조원인으로소에서는 12~1월사이호흡기질병및설사병이다발하는시기로농가에서백신접종을기피하는것으로추정되며, 돼지에서는동절기 (12~3월) 중에최근년에양돈장에서유행하고있는돼지유행성설사병 (PED) 등발생유행으로인해농가에서구제역백신접종을소홀히하는것으로추정된다. Table 2. 축종별시기별백신항체양성률 축종시기검사두수양성두수양성률 겨울 1월 % 2월 % 99% 3 월 % 봄 4 월 % 98% 5 월 % 한우 여름 6월 % 7월 % 99% 8 월 % 9 월 % 가을 10 월 % 100% 11 월 % 소계 1,742 1,722 99% 겨울 1월 4,880 2,553 52% 2월 % 51% 3 월 3,824 2,063 54% 봄 4 월 2,267 1,163 51% 52% 5 월 1, % 돼지 여름 6월 2,686 1,617 60% 7월 1, % 60% 8 월 % 9 월 1, % 가을 10 월 % 59% 11 월 % 소계 20,681 11,252 54% 계 22,423 12,974 58% 20

25 Ⅱ. 전남지방구제역백신접종항체형성률조사 구제역 SP 항체가를지역별로나누어살펴본결과소의경우대부분의시군 ( 목포시, 순천시, 담양군, 곡성군, 화순군, 장흥군, 강진군, 해남군, 영암군, 무안군, 영광군, 장성군, 완도군, 진도군, 신안군 ) 에서 100% 의항체양성률을보였으며, 고흥군 96%, 나주시 92%, 함평군 78% 순으로낮은항체양성률을나타내었다 (Table 3). Table 3. 한우지역별백신항체양성률 축종지역검사두수양성두수양성률 목포시 % 순천시 % 나주시 % 담양군 % 곡성군 % 고흥군 % 화순군 % 장흥군 % 강진군 % 한우 해남군 % 영암군 % 무안군 % 함평군 % 영광군 % 장성군 % 완도군 % 진도군 % 신안군 % 계 1,742 1,722 99% 전라남도축산위생사업소 21

26 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 돼지의경우지역별구제역 SP 항체가는 33~70% 의다양한항체양성률을보였고그중영암군이 690두중 481두양성 70% 으로가장높은항체양성률을나타낸반면, 목포시가 91두중 30두양성 33% 으로가장낮은항체양성률을나타내었다 (Table 4). 목포시의경우도심지소규모사육농가에서사육하는돼지들로대규모사육전업농가에비해농장주의백신접종의식이낮은것으로추정된다. Table 4. 돼지지역별백신항체양성률 축종 지역 검사두수 양성두수 양성률 목포시 % 여수시 % 순천시 2,313 1,245 54% 나주시 3,062 1,751 57% 광양시 % 담양군 % 곡성군 % 구례군 % 고흥군 % 보성군 % 화순군 1, % 돼지 장흥군 % 강진군 % 해남군 1, % 영암군 % 무안군 3,567 1,625 46% 함평군 1, % 영광군 1, % 장성군 % 완도군 % 진도군 % 신안군 % 계 20,681 11,252 54% 22

27 Ⅱ. 전남지방구제역백신접종항체형성률조사 소의 FMDV SP 항체가를성별, 연령별로나누어살펴본결과암소의경우 1세이하 99%(266/269), 2세 99%(333/336), 3세 99%(300/304), 4세이상의개체에서는 100% 의항체양성률을보였고, 수소의경우 1세이하의개체는 99%(164/166), 5세이상의개체에서는 100% 의항체양성률을보였으며, 거세우의경우 1세이하의개체에서 94%(44/47), 2세는 85%(23/27), 3세는 50%(1/2) 의항체양성률을나타내었다.(Table 5). Table 5. 한우성별연령별백신항체양성률 축종성별연령검사두수양성두수양성률 % % 암 % % 한우 수 거세 % 소계 1,499 1,489 99% % % 소계 % % % % 소계 % 계 1,742 1,722 99% 구제역은현재전세계적으로발생하고있으며지역적으로동남아시아, 중동, 아프리카, 남미를상재지역으로구분할수있는데, 아프리카일부지역에서발생되는 SAT 혈청형을제외하면 O, A, Asia1형이주로발생되는혈청형이다. 최근주변국가들의구제역발생상황을살펴보면중국은 2005년부터 Asia1 혈청형이지속적으로발생하고있으며 2009년에는 A형혈청형까지발생하여심각한피해를입었고, 대만에서는 2004년이후백신접종청정국지위를받았으나 2009년돼지에서 O형혈청형이발생하였다. 전라남도축산위생사업소 23

28 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 베트남에서도 2006년대규모구제역발생으로심각한피해를입은후에도지속적으로 O, A, Asia1형의구제역이발생하고있으며, 캄보디아, 라오스, 말레이시아등동남아시아에서도 O, A 형혈청형의구제역이계속적으로발생하여우리나라의구제역방역에위협이되고있다. 특히중국에서발생한 Asia1 혈청형의경우우리나라에서확보하고있는백신주와의면역학적성상이일부다른것으로알려져있어향후백신접종을선택함에신중을기할필요가있다. 우리나라에서 2000년, 2002년, 2010년, 2014년발생한구제역역시 O, A 혈청형으로현재진행하고있는 O, A, Asia1 혈청형에대한백신접종은비교적적절한선택으로판단된다. 이번연구에서는현재까지구제역이발생하지않았던전남지역의소와돼지에대한백신항체유지수준에대하여조사하였는데그결과소는 99%, 돼지는 54%( 모돈 85%, 비육돈 51%) 의항체양성률을나타내어전체 58% 를보였다. 이는 2014년전남지역축종별백신항체양성률 ( 소 91%, 돼지 64%, 모돈 83%, 비육돈 58%) 을비교해볼때소는항체양성률이높아진반면돼지는모돈의항체양성률이약간높아진데비해비육돈의항체양성률이상당히낮아지고있음을보여준다. 시기별 SP 항체양성률은소의경우가을 100%, 겨울 99%, 봄 98%, 여름 99% 순으로높은항체양성률을보였으며, 돼지의경우방역이취약한계절인겨울 51% 과봄 52% 에서비교적낮은항체양성률을나타내고있다. 지역별 SP 항체양성률은소의경우고흥군 96%, 나주시 92%, 함평군 78% 을제외한나머지 15개시군에서 100% 항체양성률을보였고, 돼지의경우영암군 70%, 영광군 68%, 여수시 63%, 보성군 63%, 강진군 62%, 장성군 60% 등 6개시군이 60% 이상의항체양성률을보였으며, 목포시 33% 가가장낮은항체양성률을보이고있어이들취약한시군은백신접종관리가필요하다고판단된다. 소의성별연령별 SP 항체양성률은암소, 수소모두연령에관계없이 99% 이상의항체양성률을보였으며, 거세우의경우 1세이하 94%, 2세 85%, 3세 50% 의항체양성률을보이고있어거세우가암소, 수소에비해연령이높아짐에따라항체양성률이비교적낮은수치를나타내었다. 주변국에서지속적으로구제역이발생하고있는상황에서국내재발생을방지하고축산농가의피해를최소화하기위해서는항체양성률이낮은돼지 ( 비육돈 ) 와이들농장이있는취약한시군에서일정수준이상으로항체양성률을높이기위해적극적으로백신접종을유도하는대책이필요하다고판단된다. 상대적으로소는 99% 로 2014년전남지역축종별백신항체양성률을비교해볼때항체양성률이 8% 상승한것으로조사되어자발적인백신예방접종, 방역의식고취등에중점을두는것으로추정할수있었다. 24

29 Ⅱ. 전남지방구제역백신접종항체형성률조사 결 론 2015년 1월부터 12월까지전남지방에서구제역백신항체검사를위해전라남도축산위생사업소에의뢰된축산농가 725호 ( 한우 174호, 돼지 551호 ) 의농장에서채취한 22,423점의시료를대상으로 ELISA법으로실시한 FMDV SP 항체가를조사한결과는다음과같았다. 축종별항체가는소 99%, 돼지 54%( 모돈85%, 비육돈 51%) 로전체 58% 의항체양성률을보였으며, 시기별로는소의경우가을 100%, 겨울 99%, 봄 98%, 여름 99% 순으로높은항체양성률을보였고돼지의경우겨울 51% 과봄52% 에서비교적낮은항체양성률을나타내고있다. 지역별로항체가를분석해본결과소의경우고흥군 96%, 나주시 92%, 함평군 78% 을제외하고 100% 의항체양성률을보였으며돼지의경우영암군 70% 이가장높았고목포시 33% 가가장낮은항체양성률을나타내었다. 소의성별연령별 SP 항체양성률은암소, 수소모두연령에관계없이 99% 이상의항체양성률을보였으며, 거세우의경우 1세이하 94%, 2세 85%, 3세 50% 의항체양성률을나타내었다. 이상의결과는농가의적극적인백신접종을유도하고구제역백신항체유지를위해지속적인검사와교육과함께백신접종전반에대한점검이요구된다고할수있으며, 구제역에대한백신접종관련연구및정책수립, 방역대책추진, 축산농가지도등에유용한자료로활용할수있을것으로판단된다. 전라남도축산위생사업소 25

30 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 참고문헌 1. Bachrach HL Foot-and-mouth disease. Annu Rev Microbiol 22: Leforban Y Prevention measures against foot-and-mouth disease in Europe in recent years. Vaccine 17: Callis JJ, McKercher PD, Graves JH Foot and mouth disease-a review. J Am Vet Med Assoc 153: Paton DJ, Valarcher JF, Bergmann I, Matlho OG, Zakharov VM, Palma EL, THomson GR Selection of foot-and-mouth disease vaccine strains-a review. Rev Sci Tech 24: Sur JH, Shin JH, Juan L, Max Y, Ku BK, Choi KS, Kweon BJ, Sohn HJ, Ko YJ, Choi CU, Kwon CH, Kim JY, An SH, Kim KS, Moon OK, Kim JH, Choi SH, Lee HG, Hwang EK, Kim SB, Kang SS, Kim OK In vivo characterization and transmission of Korean foot-and-mouth disease virus(fmdv). korean J Res 40: Acharya R, Fry E, Stuart D, Fox G, Rowlands D, Brown F The three dimensional structure of foot-and-mouth disease virus at 2.9 A resolution. Nature 337: Pfaff E, Mussgay M, Böhm HO, Schulz GE, Schaller H Antibodies against a preselected peptide recognise and neutralise foot and mouth disease virus. EMBO J 1: Zhang L, Zhang J, Chen HT, Zhou JH, Ma LN, Ding YZ, Liu YS Research in advance for FMD novel vaccines. Virol J 8: 손준형, 황유선, 손규희등 영천지역구제역바이러스구조단백질항체가조사. 한국가축위생학회지. 38(1): 안길호, 배진규, 정광등 돼지에서구제역백신접종후항체가변화조사. 한국가축위생학회지. 36(1): Alexandersen S, Mowat N foot-and-mouth disease : host range and pathogen-alexandersen S, Zhang Z, sis. Curr Top Microbiol Immunol 288: Belsham GJ Distinctive features of foot and mouth disease virus, a member of the picornavirus family; aspects of virus protein synthesis, protein processing and structure, Prog Biophys Mol Biol 60: Pattnaik B, Subramaniam S. Sanyal A, Mohapatra JK, Dash BB, Ranjan R, Rout M Foot-and-mouth disease: Global status and future road map for control and prevention in India. Agricultural Research 1:

31 Ⅱ. 전남지방구제역백신접종항체형성률조사 14. Ayebazibwe C, Mwiine FN, Tjørnehøj K, Balinda SN, Muwanika VB, Ademun OR, Belsham GJ, Normann P, Siegismund HR, Alexandersen S The role of African buffalos(suncerus caffer) in the maintenance of foot-and-mouth disease in Uganda. BMC Vet Res 6: Mwiine FN, Ayebazibwe C, Olaho MW, Alexandersen S, Balinda SN, Masembe C, Okutut AR, Christensen LS, Sørensen KJ, Tjømehøj K Serotype specificity of antibodies against foot-and-mouth disease virus in cattle in selected districts in Uganda. Transbound Emerg Dis 57: Muleme M, Barigye R, Khaitsa ML, Berry E, Wamono AW, Ayebazibwe C Effectiveness of vaccines and vaccination programs for the control of foot-and-mouth disease in Uganda, Trop Anim Health Prod 45: Shin JH, Sohn HJ, Choi KS, Kwon BJ, Ko YJ, An DJ, Cha SH, Park JH, Jeong WS, Park JY, Choi CU, Kweon CH, SongJY, Kim JY, An SH, Kim SJ, Joo YS Molecular epidemiological investigation of foot-and-mouth disease virus in Korea in J Vet Med Sci 65(1): Hammond J. 2009a. OIE/FAO World Reference Laboratory report, April-June 2009, foot-and-mouth disease. World Reference Laboratory report, Pirbright. pp Hammond J. 2009b. OIE/FAO World Reference Laboratory report, January-March 2009, foot-and-mouth disease. World Reference Laboratory report, Pirbright. pp Park JH, Ko YJ, Kim SM, Lee HS, Lee KN, Cho IS Immunological relationships of FMD vaccine strain and Asia1 field isolate from East Asia. Korean J Vet Res 49(3): Park JH, Lee KN, Ko YJ, Lee HS, Cho IS Geographical distribution and molecular epidemiology of foot-and-mouth disease viruses of major groups. Korean J Vet Serv 32(4): 전라남도축산위생사업소 27

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33 도내가금류도축장식육미생물 오염도실태에관한연구

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35 Ⅲ. 도내가금류도축장식육미생물오염도실태에관한연구 Ⅲ. 도내가금류도축장식육미생물오염도실태에관한연구 오성규 정인호 정치곤 박현미 김상현 전라남도축산위생사업소 서 론 새정부출범이후부정 불량식품을 4대악중하나로규정하고지속적인단속과규제를강화하고있다. 이처럼식품의안전성문제특히그중쇠고기, 돼지고기및닭, 오리의가금류식육의안전성의확보문제역시점점사회문제로대두되어가고있으며, 현재이를타개하기위해축산물위생관리강화의한방안으로도축장에서 HACCP 제도를실시하고있으며, 도축장식육에대한미생물검사요령에따른미생물오염도를상시관리하고있다. 1) 이처럼도축장은생축이축산물로전환되는원료육생산장소인동시에농장에서의가축사육과축산물유통을연결하는중심이되기때문에도축장의미생물오염도실태를항시감시하여야하며, 오염방지를위해최선을다하여야한다. 축산물의생산, 가공, 유통, 판매에서최종적으로소비자에이르기까지모든과정중에서발생할수있는위해요소들을제거하여오염을최소화하려는노력이필요하며이를위해서는축산물생산의출발단계인도축과정에서의오염을최소화하는것이안전하고위생적인축산물을소비자에게공급하는최선의방법이라할수있다. HACCP을적용하는도축장에있어서식육의안전성을위협하는주요한위해요소에는생물학적, 화학적, 물리적위해요소가있다. 그중국민의건강을위협하는가장주요한위해요소는병원성미생물로알려져있다. 2) 이들세균이나곰팡이가식육의표면이나조직내로침투하게되면식육의외관, 냄새및육색에이상을초래할뿐만아니라변패등위생상위해를일으켜식용으로부적당하게된다. 도축장에서의주된위해요인은도체작업과정에서발생하는이들장내병원성미생물에의한도체오염이라할수있다.3,4) 축체는체표면이나소화관등내부에정상세균총이나병원성미생물들이존재하기때문에도축및해체과정중부주의는축산물을오염시키며비위생적인냉각수나기구, 설비등은 2차적인오염을일으킬수있는원인으로지목되고있다. 5) 가축의도살해체과정및발골과정은다단계이기때문에도체및식육에의오염은방혈단계에서방혈칼에의하여오염된후혈관을통하여오염이확산되거나박피단계와내장적출시작업자의손, 옷, 가축의가죽으로부터, 그리고내장적출시내장파열에의한내용물및분뇨의유출에의한오염가능성이가장크다. 6) 전라남도축산위생사업소 31

36 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 도축장에서도축한직후지육의표면에는보통 100 cfu/cm2 정도의호기성세균이존재한다. 7) 육류는냉장보관하더라도매평방미터당 108cfu/cm2 의호기성세균이증식하여변질될때까지세균수가증가된다. 7) 도축장에서가축의도살해체과정, 또는부분육공장에서발골정형후실시되는식육의미생물검사에서총세균수는낮으면낮을수록그식육은위생적으로안전하며, 유통가능기한이연장되지만원료육에총균수가많으면그후유통과정이아무리위생적이라할지라도유통가능기한이연장될수없다. 미생물오염수준, 저장온도 (5 ) 및저장기간의관계를보면오염수준이 103cfu/cm2에서는부패개시일이 12~14일이지만 104cfu/cm2에서는 4일경부터부패가시작되며미생물이 106cfu/cm2가되면 1~3일경부터부패가시작된다. 6) 도계전생체표면의일반세균수는 600 ~ 8,100 cfu/cm2 수준이나도계처리후에는 11,000 ~ 93,000 cfu/cm2 수준으로증가하며 8) 비위생적으로가금류도축이이루어질경우각종전염병과식중독의원인이될수있다. 9) 최근세계적으로도축미생물검사를실시하는경향이높아지고있다. 미생물검사를실시하는목적은비조리시에발생할수있는각종병원균으로부터오염을방지하고도축장의위생상태나작업과정을모니터링하기위한오염지표로서의가치가있다. 10) 또한안전하고위생적인식품의공급은국민건강과경제발전에매우중요한위치를차지하며, 그중에서도식육에대한안전성확보가가장중요하다. 이런안전성의확보는사육단계에서부터시작하여도축단계는물론유통단계까지철저하게위해요소를파악하여시정하고관리될때이루어질수있으며보다위생적이고안전한육류가공급될것이다. 사육 도축 유통중에서도도축단계에서의미생물학적위해는공중보건학상매우중요한위치를차지한다. 도축장의위생상태나작업과정을모니터링하기위한지표로서의필요성및위생적이고안전한축산물을소비자에게공급함으로서국민보건위생향상및식육의안전성확보에기여하고자 2015년도 1월부터 11월사이에전남관내 HACCP 적용가금류도축장 5개소 ( 사조화인코리아나주1 공장, 사조화인코리아나주2 공장, 농업회사법인다솔, 신성, 정다운 ) 에서도축된닭, 오리및도축공정상의도체육에대한오염지표미생물인일반세균수및대장균수를조사하였다. 재료및방법 1. 도체의미생물오염상태검사 2015년도 1월부터 11월사이에전남관내 HACCP 적용가금류도축장 5개소에서도축이완료된 12시간이내에예냉실저장상태의닭 271두, 오리 677두를무작위로선정하여공시재료로사용하였다. 32

37 Ⅲ. 도내가금류도축장식육미생물오염도실태에관한연구 2. 도축공정상의미생물오염도변화 2015년도 1월부터 11월사이에전남관내 HACCP 적용가금류도축장 5개소에서주요세척작업공정인예비세척, 워터칠러 ( 물냉각 ), 에어칠러 ( 공기냉각 ), 최종세척의각공정작업중닭 80두, 오리 242두를무작위로선정하여공시재료로사용하였다. 시료채취및준비도축된닭, 오리를대상으로하여무균적으로도체를비닐봉지에넣고멸균 BPD (Buterfield's Phosphate Buffered Dilution Water) 400ml 부은다음비닐봉지를밀봉한후 30회 ( 약 1분간 ) 반원을그리면서흔든후, 액중 40ml 만멸균용기에담아서실험에사용하였다. 실험방법오염지표세균검사인일반세균및대장균수검사는축산물의가공기준및성분규격중제3. 축산물시험방법 Ⅲ. 일반시험법 9. 미생물시험법에의하여실시하였다. 11) 건조필름법으로실험하였으며, 일반세균수및대장균건조필름배지를사용하였다. 시험용액 1ml와각단계희석액 1ml 를일반세균수건조필름배지및대장균건조필름배지에접종한후잘흡수시키고 35±1 에서 48±2시간배양한후생성된붉은집락수를계산하고그평균집락수에희석배수를곱하여일반세균수및대장균수를계산하였다. 결 과 일반세균오염도전남지역의 5개가금류도축장에서도축된닭 오리 948수에대한미생물검사를실시한결과전남에서도축되는가금류도체의일반세균수는 Table 1과같이나타났다. 일반세균수에의하여도축의등급을매기는선진국 7) 들과비교하여보면일반세균수가 1,000 CFU 이하인 excellent에속하는도체가 41.5%, 1,001~10,000 CFU에속하는 good이 37.2%, 10,001~100,000 CFU에속하는 acceptable이 20.8% 이며 1,000,001 이상으로바람직하지않은도체가 0.5% 로나타났다. 전라남도축산위생사업소 33

38 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 Table 1. Grading standard based on bacterial count in poultry meat Range, CFU*/cm2 No. of Sample % of total Cumulative % Grade** < Excellent Excellent Good Acceptable Undesirable Total * CFU : Colony Forming Unit ** : Australian Quarantine and Inspection Service 전남지역의 2 개도계장에서도계된닭 271 수에대한미생물검사는 Table 2 와같이나타났다. 일반세균수가 1,000 CFU 이하인 excellent 에속하는도체가 69%, 1,001~10,000 CFU 에속하는 good 이 26.5%, 10,001~100,000 CFU 에속하는 acceptable 이 4.5% 이며 1,000,001 이상의위생상 바람직하지않은도체는없었다. Table 2. Grading standard based on bacterial count in chicken meat Range, CFU*/cm2 No. of Sample % of total Cumulative % Grade** < Excellent Excellent Good Acceptable Undesirable Total 전남지역의 4 개도압장에서도계된오리 677 수에대한미생물검사는 Table 3 과같이나타났다. 일반세균수가 1,000 CFU 이하인 excellent 에속하는도체가 30.5%, 1,001~10,000 CFU 에속하는 good 이 41.3%, 10,001~100,000 CFU 에속하는 acceptable 이 27.5% 이며 1,000,001 이상의도체 0.7% 로조사되었다. 전남에서도축된닭 오리도체를비교해보면, 일반세균수가 1,00 CFU 이하인 excellent 에속하는도체비율은닭 69%, 오리 30.5% 로오리에비해닭의 excellent 비율이높았다. 또한닭은 excellent 에속하는비율이 69% 로가장많은반면오리는 Good 에속하는비율이 41.3% 로대부분을차지하였다. 오리에서는일반세균수모니터링검사결과권장기준인 105 CFU1) 를초과하는도체도 5 건있었다. 34

39 Ⅲ. 도내가금류도축장식육미생물오염도실태에관한연구 Table 3. Grading standard based on bacterial count in duck meat Range, CFU*/cm2 No. of Sample % of total Cumulative % Grade** < Excellent Excellent Good Acceptable Undesirable Total 월별분포를보면 Table 4,5와같이기온이높은하절기인 6~9월에대체적으로일반세균수가높은수준이다. 또한특징적으로대부분도축장에서동절기인 1월에일반세균수가높은수준을보였다. 도축장별로보면 Table4 A도계장의경우 1월에가장많은일반세균수를기록하였으며, B도계장의경우하절기가시작하는 6월에세균수가가장높았다. 이를볼때오염지표세균검사인일반세균수검사는도축장자체의위생관리수준에큰영향을받음을알수있었다. 또한 Table 5의 4개오리도축장별결과를볼때하절기 7~9월의일반세균수가가장높음을알수있다. 이는도축장의일반세균수오염도는도축장의위생상태와더불어외부온도가미치는영향이큼을알수있다. Table 4. Monthly distribution of total viable bacterial count in chicken meat Slaughterhouse Month A B CFU/cm2 Grade CFU/cm2 Grade 1 4,083 Good 4,455 Good 2 3 Excellent 508 Excellent 3 1,351 Good 268 Excellent 4 1,704 Good 504 Excellent Excellent 1,210 Good Excellent 6,013 Good 7 1,370 Good 529 Excellent 8 2,012 Good 3,458 Good 9 1,988 Good 2,542 Good Excellent Excellent - - Mean 1,314 Good 2,165 Good 전라남도축산위생사업소 35

40 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 Table 5. Monthly distribution of total viable bacterial count in duck meat Slaughterhouse Month A B C D CFU/cm2 Grade CFU/cm2 Grade CFU/cm2 Grade CFU/cm2 Grade 1 3,403 Good 5,033 Good 1,039 Good 900 Excellent Excellent 1,960 Good 15,900 Acceptable 37,500 Acceptable Excellent 1,013 Good 2,562 Good 20,543 Acceptable 4 6,682 Good 1,960 Good 2,573 Good 18,140 Acceptable 5 5,275 Good 3,300 Good 1,000 Good 43,500 Acceptable 6 3,262 Good 4,288 Good 19,075 Acceptable 53,947 Acceptable 7 5,732 Good 2,597 Good 23,025 Acceptable 138,350 Acceptable Excellent 6,073 Good 4,838 Good 19,315 Acceptable Excellent 5,739 Good 28,713 Acceptable 30,930 Acceptable Excellent 4,550 Good 20,325 Acceptable 10,608 Acceptable 11 3,743 Good 4,002 Good 50,537 Acceptable 44,068 Acceptable Mean 2,700 Good 3,683 Good 15,417 Acceptable 37,981 Acceptable 대장균오염도 전남지역의 5개가금류도축장에서도축된닭 오리 948수에대한미생물검사를실시한결과전남에서도축되는가금류도체의대장균수는 Table 6과같이나타났다. 대장균수가 10 CFU 미만에속하는도체가 72.4%, 11~100 CFU에속하는도체가 23.8%, 101~1,000 CFU에속하는도체는 3.8% 이며식약처모니터링검사권장기준 1) 인 1,000 CFU를초과하는경우는한건도없었다. Table 6. E coli distribution of poultry meat Range, CFU*/cm2 No. of Sample % of total Cumulative % < Total 전남지역의 2개도계장에서도계된닭 271수에대한미생물검사는 Table 7과같이나타났다. 대장균수가 10 CFU 미만에속하는도체가 72%, 11~100 CFU에속하는도체가 26.6%, 101~1,000 CFU에속하는도체는 1.4% 이며식약처모니터링검사권장기준 1) 인 1,000 CFU를초과하는경우는한건도없었다. 36

41 Ⅲ. 도내가금류도축장식육미생물오염도실태에관한연구 Table 7. E coli distribution of chicken meat Range, CFU*/cm2 No. of Sample % of total Cumulative % < Total 전남지역의 4 개도압장에서도압된오리 677 수에대한미생물검사는 Table 8 과같이나타났다. 대장균수가 10 CFU 미만에속하는도체가 72.6%, 11~100 CFU 에속하는도체가 22.8%, 101~1,000 CFU 에속하는도체는 4.6% 이며식약처모니터링검사권장기준 1) 인 1,000 CFU 를초과하는경우는 한건도없었다. Table 8. E coli distribution of duck meat Range, CFU*/cm2 No. of Sample % of total Cumulative % < Total Table 9 가금류대장균수월별분포에서도축장별평균값을비교했을때대장균수값이 2~5 배 정도차이가발생함은오염지표세균인대장균수는계절에따른온도변화보다는도축장자체의위생 관리수준에영향을받음을알수있었다. Table 9. Monthly distribution of total E coli count in poultry meat (CFU/cm2) Month chicken meat duck meat A B A B C D Mean 전라남도축산위생사업소 37

42 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 2015년도 1월부터 11월사이에전남소재도계장 2개소와도압장 4개소의주요세척작업공정중닭 80두, 오리 242두를무작위로선정하여미생물검사를실시한결과는 Table 10, 11과같다. 각도축장별로주요세척공정을 2군데선발한후 1차세척공정을마친도체와 2차세척공정을마친도체를선택하여미생물수치를기록하고그변화정도를조사하였다. 모든도축장에서 2차세척을끝난도체의일반세균수수치가 1차세척을끝낸도체보다전반적으로낮아졌으며, 일반세균수는식약처모니터링검사권장기준 1) 인 105 CFU를초과하는경우가공정중에는총 64건발생했지만, 모든세척작업이완료된후에는 5건으로확연히감소했음을알수있었다. Table 11을보면대장균수변화역시미생물수변화와같은세척공정을거침에따라전반적인대장균수감소양상을볼수있었지만, 도축장 D의경우에는대장균수감소현상을볼수없었다. Table 10. Microbial variation of poultry meat by total bacterial count during slaughtering Slaughterhouse Range, CFU/cm 2 1st wash ing chicken meat duck meat A B A B C D 2nd wash ing 1st wash ing 2nd wash ing 1st wash ing 2nd wash ing 1st wash ing 2nd wash ing 1st wash ing 2nd wash ing 1st wash ing 2nd wash ing < Total Table 11. Microbial variation of poultry meat by E coli count during slaughtering Range, CFU/cm 2 1st wash ing chicken meat Slaughterhouse duck meat A B A B C D 2nd wash ing 1st wash ing 2nd wash ing 1st wash ing 2nd wash ing 1st wash ing 2nd wash ing 1st wash ing 2nd wash ing 1st wash ing 2nd wash ing < Total

43 Ⅲ. 도내가금류도축장식육미생물오염도실태에관한연구 고 찰 식품에대한소비자의기호는고급화, 다양화를넘어고품질, 안정성이확보된식품으로수요가증가하고있다. 이중식품의안전성문제는소비자의기호수준을넘어점점사회문제로대두되어가고있다. 식육의안전성을위협하는주요한위해요소중국민의건강을위협하는가장주요한위해요소는병원성미생물로알려져있다. 2) 미생물에의한식육의오염방지는축산식품의위생적인처리및품질관리의기본이되는것으로미국을비롯한많은나라들이 HACCP실시의일환으로미생물검사를실시하고있으며 11) 국내에서도이를타개하는방법으로도축장에서생산되는식육에대하여미생물검사요령 1) 에따른주기적인미생물모니터링검사를통해전남의축산물먹거리안전성확보에힘쓰고있다. 식육은식육의공급원이되는가축으로부터또는각종처리과정의환경으로부터오염이발생하게된다. 12) 특히닭표면의미생물오염은살아있는닭피부의세균수보다도계과정에서 1.5~22배이상증가된다고보고된바있으며 13) 선진국에서는이에도체표면에서측정한일반세균수에의해도축의등급을매김으로미생물에의한오염도를측정하고있다. 본연구에서도도축장에서생산된닭 오리가금류에대한미생물오염을상태를조사하고도축장의위생상태및작업과정을모니터링하기위한방법으로닭 오리도체표면에서오염지표세균인일반세균수및대장균수검사를실시하였다. 일반세균수는선진국등급기준 7) 을적용시전남에서생산되는가금류도체의경우Table 1과같이 excellent인 1000이하의범위가 394건 (41.5%), Good인 1,001~10,000의범위는 351건 (37.2%), Acceptable인 10,001~100,000은 198건 (20.8%) 으로조사되었다. 1,000,001 이상으로바람직하지않은도체가 0.5% 로나타났다. 가금류표면의대장균수는 Table 6과같이대장균수가 10 CFU 미만에속하는도체가 72.4%, 11~100 CFU에속하는도체가 23.8%, 101~1,000 CFU에속하는도체는 3.8% 이며식약처모니터링검사권장기준 1) 인 1,000 CFU를초과하는경우는한건도없었다. Table 4, 5, 9를비교했을때동일축종, 계절임에도불구하고도축장마다미생물오염도수준차가큼을알수있다. 이는미생물오염량은도축후의처리방법에크게영향받음을뜻한다. 도계표면의오염지표미생물의오염연구중 McMeekin과 Tomas 14) 는도체표면의미생물오염수준은도축시사용되는기구오염과밀접한관계가있다고하였다. 또한탕지수의온도및시간 15), 냉각수의소독제유무 16) 등각도축장의작업공정및위생관리차이에따라미생물수치에변화가발생한다. 전라남도축산위생사업소 39

44 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 그리고일반적으로도축장은물사용량에따라위생적인작업수행여부를판단하고있지만세척수를많이사용한다고해서도체가반드시깨끗해지는것은아니다. 덴마크에서는내장적출이후의물사용은도리어내장적출시부주의로인한오염의확산을유발하기에오히려내장적출이후에는물사용을억제하고있다. 17) 이처럼각도축장의문제는항상서로다르며, 도축공정상에도차이가있다. 따라서잠재된위해요인에도차이가있으며이러한다양한차이가각도축장의오염지표세균수가차이를발생시키는요인이라생각된다. 도축장식육의미생물오염도실태는오염지표세균수를통해알수있다. 전남소재가금도축장의위생상태나작업과정을모니터링하기위한지표로서의필요성과위생적이고안전한축산물을소비자에게공급함으로서국민보건위생향상및식육의안전성확보에기여하고자본연구를수행하였다. 도축장의오염지표세균수는도축장의위생관리수준을반영한다. 도축장은항상청결을유지하여야하며탕박기, 내장적출기, 워터칠러등장비를깨끗하게세척하여교차오염을방지하고소독후사용하는것이원칙이다. 또한내장적출시장내용물이터지지않도록종업업의작업숙련도를향상시킴과동시에위생의식강화교육을통해설정된위생기준을철저히지키는훈련이필요하다고생각된다. 이모든것이이루어질때축산물에대한품질의위생적안전성이보장될수있을것으로사료된다. 결론 2015년도 1월부터 11월사이에전남관내 HACCP 적용가금류도축장 5개소에서도축이완료된 12시간이내에예냉실저장상태의무작위로선정된닭 271두, 오리 677두및주요세척작업공정중닭 80두, 오리 242두를무작위로선정하여도체표면에대하여일반세균수및대장균등오염지표세균을검사한결과아래와같이조사되었다. 1. 전남에서도축되는가금류도체의일반세균수는 1,000 CFU 이하에속하는도체가 41.5%, 1,001~10,000 CFU에속하는도체가 37.2%, 10,001~100,000 CFU에속하는도체가 20.8% 이며식약처모니터링검사권장기준 1) 인1,000,001 이상의도체가 0.5% 로나타났다. 2. 전남에서도축되는닭도체의일반세균수는 1,000 CFU 이하의도체가 69%, 1,001~10,000 CFU에속하는도체가 26.5%, 10,001~100,000 CFU에속하는도체가 4.5% 이며 1,000,001 부적합도체는없었다. 3. 전남에서도축되는오리도체의일반세균수는 1,000 CFU 이하속하는도체가 30.5%, 1,001~10,000 CFU에속하는도체가 41.3%, 10,001~100,000 CFU에속하는도체가 27.5% 이며 1,000,001 이상의도체는 0.7% 로조사되었다. 40

45 Ⅲ. 도내가금류도축장식육미생물오염도실태에관한연구 4. 전남에서도축되는가금류도체의대장균수는 10 CFU 미만에속하는도체가 72.4%, 11~100 CFU에속하는도체가 23.8%, 101~1,000 CFU에속하는도체는 3.8% 이며식약처모니터링검사권장기준 1) 인 1,000 CFU를초과하는경우는없었다. 5. 전남에서도축되는닭도체의대장균수는 10 CFU 미만에속하는도체가 72%, 11~100 CFU 에속하는도체가 26.6%, 101~1,000 CFU에속하는도체는 1.4% 이며식약처모니터링검사권장기준 1) 인 1,000 CFU를초과하는경우는없었다. 6. 전남에서도축되는오리도체의대장균수는 10 CFU 미만에속하는도체가 72.6%, 11~100 CFU에속하는도체가 22.8%, 101~1,000 CFU에속하는도체는 4.6% 이며식약처모니터링검사권장기준 1) 인 1,000 CFU를초과하는경우는한건도없었다. 참고문헌 1. 식품의약품안전처 식육중미생물검사요령. 식품의약품안전처고시제 호 2. 이병철 HACCP의이해. 한국식품경영개발 2 : Tompkin RB HACCP in the meat and poultry industry. Food Control 5 (3) : 153~ ICMSF HACCP in Microbiological Safety and Quality. Blackwell Sci. Pub. London : 176~ 홍종해 HACCP 제도의도입과그대응방안. 제1회수의정책개발심포지엄. 대한수의사회지 31(7) : 437~ 이무하 쇠고기냉장유통체제구축방안. 축산물유통업무관계관교육자료 : 53~ Australian Wuarantine and Inspection Service 호주농림성 8. 오유미등 도계처리단계별세균오염도및소독제효과. 경상북도가축위생시험소연보 9. Walker HW, Ayres JC Incidence and kinds of microorganisms associated with commercially dressed poultry. Appl Microbiol 4 : 345~ 권창희, 윤용덕, 정문식 초산과식염의혼합액세척이냉장우육의저온성세균에미치는영향. 한국수의공중보건학회지 15(3) : 265~ 식품의약품안전처 축산물의가공기준및성분규격. 식약처고시제 호. 전라남도축산위생사업소 41

46 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 12. 김은, 나인택, 기노준, 이정학 소와돼지도체포면에대한미생물오염도. 한국가축위생학회지 27(1) : 1~ Fromm An evaluation of techniques commonly used to quantitatively determine the bacterial population of chicken carcasses. Poult Sci 38 : 887~ McMeekin Ta, Thomas CJ Retention of bacteria on chicken skin after immersion in bacteria suspension. J Appl Bacterial 45 : 383~ Mulder R. Dorresteizin J, Van der Broex J Cross-contamination during the scalding and plucking of broilers. Br Poult Sci 19 : 61 ~ 김선희, 나기복, 양승민, 유제용, 배영재, 최영태 도계육에대한미생물오염실태조사. 한국가축위생학회지 26(3) : 221~ The Danish Meat Trade College Slaughtering of Pigs and Cattle. Education Center for Food manufacturing Industry. Roskilde 42

47 돼지질병별적정항생제사용 설정에관한연구

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49 Ⅳ. 돼지질병별적정항생제사용설명에관한연구 Ⅳ. 돼지질병별적정항생제사용설정에관한연구 김희정 김재풍 정대영 김병호 임숙경 1 김상현 전라남도축산위생사업소, 농림축산검역본부 1 서 론 국내축산분야는항생제내성관리를위해 2011년 7월부터모든배합사료에첨가하는항생제사용을전면금지하고있다. 배합사료금지후항생제사용량추이를조사한결과배합사료첨가항생제사용량은감소하였지만자가치료용항생제의사용비율은농가및대리점을통해무분별하게항생제가사용되는것으로추정되고있어사람에서문제시되는내성균증가가능성이제기되고있는것에주목해야한다. 덴마크등유럽에서는 1990년대중반부터성장촉진목적으로배합사료에첨가하는항생제를제한하는정책을추진하고있고, 덴마크에서배합사료첨가항생제금지에대한영향을평가한결과돼지이유사육단계에서증식성회장염등소화기질병발생이증가하여이로인한생산성저하등이보고되고있다. 그러나국내와달리무분별한치료용항생제사용을대비하여, 유럽에서는가축에서의효능, 사람및가축에서의중요성등에대한기초자료를토대로항생제사용에대한가이드라인을설정하고임상수의사및양돈농가에제공하여적정항생제사용을유도해오고있다. 국내에서는수의사처방제가시행되기 ( ) 이전에배합사료에첨가되어사용하는항생제가금지됨으로써전문가처방없이농가및대리점에서무분별하게항생제가사용되고있고, 축산농가및수의사가활용할수있는항생제사용에대한가이드라인이없어경험적항생제사용으로인한항생제오 남용이심각한실정이다. 이에본연구에서는국내돼지에서항생제사용현황과내성양상을분석해보고항생제배합사료급여금지후의전남지역사육단계별소화기, 호흡기질병분포및질병별원인체에대한항생제효능 내성조사를통해전남실정에맞는항생제사용가이드라인을모색하고자본검사를실시하였다. 전라남도축산위생사업소 45

50 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 재료및방법 1. 축산용항생제축종별 용도별 성분별판매실적및항생제사용현황조사 축종별, 용도별, 성분별항생제판매실적분석을통한항생제사용실태파악과양돈농가에서 호흡기, 소화기질병치료를위해주로사용되는항생제사용현황에대하여조사하였다. 2. 농가선정 2013년 6월부터 2015년 6월까지전남지역돼지사육농장 10개소를선정하였다. 일반농가 3개소와항생제제한사육농가 7개소를대상으로선정하였으며, 선정된대상농가의사육돼지를대상으로사육단계별즉포유자돈, 이유자돈, 육성돈, 모돈의분변, 비강스왑시료채취를통해검사시료로사용하였다. 대상농가의사육규모는 1,000두이하 2개소, 1,000두이상 5,000두미만 7개소, 5,000두이상 10,000두미만농가는 1개소로구분되어졌다. (Table 1) Table 1. 지역별, 사육규모별시료채취농가수 No. of pigs No. of sampling farms commercial farm organic farms* total <1, ,000~5, ,000~10, >10, * 유기축산및무항생제농가 : 농산물품질관리원에친환경축산물로인증을획득한농가임 3. 항생제배합사료급여금지후사육단계별질병발생조사돼지분변및비강스왑등을채취하여지역별, 사육규모별돼지사육단계별소화기호흡기질병발생조사를위해대장균, 살모넬라균, 브라키스피라균, 로소니아등에대한검사 (Table 2) 와흉막페렴, 파스튜렐라성폐렴, 마이코플라스마성폐렴등의호흡기질병분포조사 (Table 3) 를실시하였다. 돼지의분변을통한소화기질병검사방법 (Table 2) 은 5가지대상질병원인체에대한균분리를원칙으로하였으며, 소화기질병검사중균분리가어려운 Brachyspira spp. 는 PCR 방법을동시에사용하였으며돼지증식성회장염은 PCR로확인하였다. 46

51 Ⅳ. 돼지질병별적정항생제사용설명에관한연구 Table 2. 소화기질병검사방법 Faeces Escherichia coli Salmonella B. hyodysenteriae B. pilosicoli and Brachyspira spp. L. intracellularis MA, BA Buffered peptone 36 24h Selective agar Selective agar PCR EMB MSRV 42 24~72h BA BA MA Rambachagar 36 24h PCR PCR detection of virulence factor MA 36 24h * faeces: PCR * faeces: PCR Seropying 또한대상농가돼지의비강스왑에대한호흡기질병검사는 6 가지질병원인체에대한균 분리 (Table 3) 가실시되었고최종원인체확인은 PCR 검사 (Table 4) 를통해이루어졌다. Table 3. 호흡기질병검사방법 Nasal swab P. multocida B. brochiseptica A. pleuropneumoniae Mycoplasma spp. H. parasuis S. suis selective agar BA, G20 medium Choco agar Broth culture Choco agar BA BA,MA PCR PCR PCR PCR PCR PCR Table 4. 호흡기질병원인체확인 PCR 방법확립 P. multocida A. pleuropneumoniae common : 460bp PmA(1,044bp),PmD(657bp) common(950),app2(500),app5(1,100bp) 전라남도축산위생사업소 47

52 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 B. brochiseptica H. parasuis S. suis 643bp 821bp 294bp 4. 호흡기 소화기질병원인체항생제감수성및내성검사계절별, 사육단계별, 항생제사용유무에따른세균성질병발생과연관성분석과더불어분리된야외분리주에대한효능평가를위해국내허가제품중사용량이많은항생제와치료용중요항생제에대한 MIC( 항생제감수성검사 ) 도병행실시하였다. 결과및고찰 1. 축산용항생제총괄판매실적연도별총항생제및항콕시듐제의판매실적을살펴보면, 14년에는 635톤으로 06년판매량을조사한이래가장낮았다. 항생제판매량을보면 06년도 1,458톤, 07년도 1,527톤으로, 06년부터 07년까지는약 1,500톤내 외로판매되었다. 그러나 08년부터점차감소하여 08년 1,211톤, 09년 998톤, 10년 1,047톤으로약 1,000톤내외가판매되었다. 11년부터는 1,000톤이하로감소되어 11년 956톤, 12년 936톤, 13년 820톤, 14년 635톤으로 11년부터 4년연속 1,000톤이하로판매되었다.(Table 5) Table 5. 항생 ( 항균 ) 제판매실적총괄 ( 단위 :kg) 구분 연도별항생제판매실적 2006 년 2007 년 2008 년 2009 년 2010 년 2011 년 2012 년 2013 년 2014 년 항생제 1,373,076 1,438,486 1,136, , , , , , ,090 항콕시듐제 84,732 88,227 73,722 74,968 68,328 78,067 80,720 55,267 43,863 합계 1,457,808 1,526,713 1,210, ,167 1,046, , , , ,953 출처 : 한국동물약품협회 48

53 Ⅳ. 돼지질병별적정항생제사용설명에관한연구 일반적으로항생제판매량은그해가축사육두수, 질병발생등에따라크게달라질수있다. 4년연속 1,000톤이하로판매된기간 ( 11~ 14년) 의가축사육두수는항생제판매량이비교적높았단기간 ( 06~ 07년) 에비해, 돼지사육두수는약 1% 로감소하였지만, 소는약 25%, 닭은약 17% 증가하여전반적으로가축의사육두수증가에도불구하고판매량은크게감소하여실제농가에서사용된항생제량이감소한것으로생각된다. 2. 축종별판매실적 06년도부터 14년까지축종별항생제및항콕시듐제판매량을살펴보면, 소, 돼지, 닭및수산용등주요사육가축에서의판매량비율은소는약 5~9%, 돼지는 47~57%, 닭은 18~21%, 수산용은 15~26% 로나타나돼지에서가장많이판매되고수산용, 닭, 소의순으로조사되었다. 11년부터 47~48% 로점차감소한추세를나타내었다. 그러나수산용은 10년이전까지는 20% 이하 (15~19%) 로판매되었으나 11년부터는약 25% 로점차증가추세를나타내었다.(Table 6) Table 6. 국내축종별항생 ( 항균 ) 제판매실적 ( 단위 :kg) 구분 축종별항생제판매실적 2006 년 2007 년 2008 년 2009 년 2010 년 2011 년 2012 년 2013 년 2014 년 항생제 115, ,917 93,533 60,344 53,908 55,061 62,839 61,282 52,868 소 항콕시듐제 3,342 6,337 5,758 2,722 3,535 2,665 2,617 2,256 3,537 소계 118, ,254 99,291 63,066 57,443 57,726 65,456 63,538 56,405 돼 지 항생제 812, , , , , , , , ,936 항콕시듐제 22,943 5,874 8,226 8,383 7,329 6,545 7,656 12,301 3,619 소계 835, , , , , , , , ,555 항생제 223, , , , , , , ,580 85,783 닭 항콕시듐제 58,444 76,017 59,738 63,863 57,464 68,857 70,447 40,710 36,707 소계 281, , , , , , , , ,490 수산용 항생제 221, , , , , , , , ,503 항콕시듐제 소계 221, , , , , , , , ,503 항생제 1, ,438,486 1,136, , , , , , ,090 계 항콕시듐제 84,732 88,227 73,722 74,968 68,328 78,067 80,720 55,267 43,863 소계 1,457,808 1,526,713 1,210, ,167 1,046, , , , ,953 출처 : 한국동물약품협회 전라남도축산위생사업소 49

54 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 3. 돼지항생 ( 항균 ) 제성분별판매량 (2014 년 ) 항생제 ( 계열 ) 항생제 ( 성분 ) 2014년판수의사처자가치료 예매량방용방용 Chlortetracycline calcium 3, ,596 Chlortetracycline HCl 23,910 2,101 21,809 Tetracyclines Oxytetracycline dihydrate Oxytetracycline HCl 2, ,155 Oxytetracycline quaterary ammonium salt Sulfachloropyridazine sodium Sulfachloropyridazine 6-6 Sulfadiazine 3, ,323 Sulfadimethoxine Sulfadimethoxine sodium Sulfadoxine Sulfaguanidine Sulfonamides Sulfamerazine Sulfamethazine 9, ,566 Sulfamethoxazole 8, ,963 Sulfamethoxazole sodium Sulfamethoypyridazine Sulfamonomethoxine Sulfamonomethoxine sodium Trimethoprim 2, ,485 Sulfathiazole 15, ,609 Amoxycillin Hydrate 60,667 3,329 57,338 Amoxycillin Sodium 1, ,136 Amoxycillin trihydrate 1, ,203 Ampicillin Ampicillin hydrate 16,066 1,788 14,278 Ampicillin sodium 2, ,483 Penicillnes Ampicillin trihydrate Penicillin 1,286-1,286 Penicillin G benzathine 1, ,197 Penicillin G clemizole 1,179-1,179 Penicillin G potassium Penicillin G procaine 9, ,973 Penicillin G sodium Enrofloxacin 4,816 1,051 3,765 Quinolones Enrofloxacin -Na Flumequine Chloramphenicol Phenicols Florfenicol 41,041 2,086 38,955 Thiamphenicol Cefquinome Ceftiofur Cephems Ceftiofur HCL Ceftiofur sodium 3, ,778 Cephalexin

55 Ⅳ. 돼지질병별적정항생제사용설명에관한연구 Aminoglycosides Macrolides Polypeptides Pleuromutilins Lincosamides 출처 : 한국동물약품협회 Apramycin sulfate Dihydrostreptomycin Dihydrostreptomycin sulfate 4, ,523 Kanamycin sulfate 1, ,772 Neomycine Neomycine sulfate 2, ,744 Spectinomycin 2,045-2,045 Spectinomycin HCl Spectinomycin sulfate 2, ,456 Spectinomycin sulfate tetrahydrate Streptomycin Streptomycin sulfate 1, ,816 Spiramycin Spiramycin adipate Spiramycin embonate 1, ,108 Tylosin Tylosin phosphate 19,265 1,682 17,583 Tylosin tartrate 4, ,725 Tilmicosin phosphate 4, ,967 Colistin sulfate 4, ,631 Bacitracin zinc Enranycin Tiamulin Tiamulin hydrogen fumarate 12, ,402 Lincomycin 1,423-1,423 Lincomycin HCl 4, ,955 '14 년도돼지항생제및항콕시듐제판매량을살펴보면, 항생제성분별판매량은 Penicillin 계열과 Sulfonamides 계열항생제로각각약 96 톤이상으로가장많이판매된것으로조사되었으며, Phenicols 계열이약 40 톤, Tetracyclines 계열이약 30 톤판매된것으로조사되었다. 4. 돼지사육단계별질병분포도조사 2013년 6월부터 2015년 6월까지일반농가 3개농장, 항생제사용제한농장즉유기축산및무항생제농가로농산물품질관리원에친환경축산물로인증을획득한 7개농장등총 10개농장에대한사육단계별호흡기질병총6종 ( 흉막폐렴, 파스튜렐라폐렴, 마이코플라스마성폐렴, 전염성기관지염, 글래서병, 연쇄상구균폐렴 ) 에대해발생률을조사한결과는다음과같다 (Table 7, 8). 모든사육단계에서호흡기질병이분포하고있었으며, 그중 S. suis의분포가가장높았다. 농장및시료기준으로 S. suis 가모든사육단계에서가장높게분포하였으며, P. multocida도포유기를제외한사육단계에서분포율이높았다. 일반농가와항생제재한사용농가의호흡기질병분포상황을비교한결과, 질병발생양상은유사하였으며발생률은항생제제한사용농가에서높게나타났다. 전라남도축산위생사업소 51

56 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 Table 7. 사육단계별호흡기질병분포도 ( 농장 ) Age group Piglets Weaners Growers Finshers Age group Piglets Weaners Growers Finshers Prevalence, % (No) P. multocida A.. B.. H. parasuis S. suis pleuropneumoniae bronchiseptica M.. hyorhins C* O** C O C O C O C O C O (0/3) (1/7) (0/3) (3/7) (0/3) (3/7) (2/3) (7/7) (0/3) (0/7) (0/3) (1/7) (0/3) (5/7) (0/3) (3/7) (0/3) (6/7) (1/3) (7/7) (0/3) (0/7) (0/3) (3/7) (3/3) (7/7) (0/3) (3/7) (0/3) (5/7) (1/3) (7/7) (0/3) (4/7) (0/3) (3/7) (3/3) (7/7) (0/3) (1/7) (0/3) (2/7) (0/3) (7/7) (0/3) (4/7) (0/3) (3/7) * C, commercial farms, **O, organic farms Table 8. 사육단계별호흡기질병분포도 ( 시료 ) P. multocida A.. pleuropneumoniae Prevalence, % (No) H. parasuis S. suis B. bronchiseptica M.. hyorhins*** C* O** C O C O C O C O C O 0 (0/15) 0 (0/15) 66.7 (10/15) 6 (9/15) 5.7 (2/35) 31.4 (11/35) 54.3 (19/35) 74.3 (26/35) (0/15) (0/15) (0/15) (0/15) 14.3 (5/35) 14.3 (5/35) 2 (7/35) 11.4 (4/35) (0/15) (0/15) (0/15) (0/15) 22.9 (8/35) 31.4 (11/35) 4 (14/35) 5.7 (2/35) * C, commercial farms; **O, organic farms; *** sample pooling 33.3 (5/15) 33.3 (5/15) 2 (3/15) (0/15) 68.6 (24/35) 71.4 (25/35) 71.4 (25/35) 71.4 (25/35) (0/15) (0/15) (0/15) (0/15) (0/35) (0/35) 25.7 (9/35) 37.1 (13/35) (0/15) (0/15) (0/15) (0/15) 2.9 (1/35) 8.6 (3/35) 8.6 (3/35) 8.6 (3/35) 2013 년 6 월부터 2014 년 6 월까지일반농가 3 개농장, 항생제사용제한 7 개농장등총 10 개농장에 대한소화기질병총 4 종 ( 병원성대장균, 살모넬라균, 돼지증식성회장염, 돼지적리 ) 에대한사육단계별 발생률을조사한결과는모든사육단계에서대장균증분포가가장높이나타났으며 (Table 9, 10), 돼지 증식성회장염은육성기와비육기에서관찰되었으며살모넬라균, 돼지적리균은검출되지않았다. Table 9. 돼지사육단계별소화기질병분포도 ( 농장 ) Age group Piglets Weaners Growers Finishers Sows pathogenic Brachyspira spp. Salmonella E. coli B. hyodysenteriae Brachyspira spp. L. intracellularis C* O** C O C O C O C O (3/3) (7/7) (0/3) (0/7) (0/3) (0/7) (0/3) (0/7) (0/3) (0/7) (2/3) (7/7) (0/3) (0/7) (0/3) (0/7) (0/3) (5/7) (0/3) (0/7) (3/3) (4/7) (0/3) (0/7) (0/3) (0/7) (0/3) (4/7) (1/3) (1/7) (1/3) (3/7) (0/3) (0/7) (0/3) (0/7) (0/3) (6/7) (0/3) (1/7) (3/3) (7/7) (0/3) (0/7) (0/3) (0/7) (0/3) (4/7) (0/3) (0/7) 52

57 Ⅳ. 돼지질병별적정항생제사용설명에관한연구 * C, commercial farms; **O, organic farms; ND Not done Table 10. 돼지사육단계별소화기질병분포도 ( 시료 ) Age group Piglets Weaners Growers Finishers Sows pathogenic E. coli Salmonella Brachyspira spp. B. hyodysenteriae Brachyspira spp. L. intracellularis C* O** C O C O C O C O 53.3 (8/15) 53.3 (16/30) 36.7 (11/30) 3.3 (1/30) 3 (9/30) 10 (35/35) 10 (70/70) 12.9 (9/70) 7.1 (5/70) 10 (69/69) (0/15) (0/30) (0/30) (0/30) (0/30) (0/35) (0/70) (0/70) (0/70) (69/69) (0/15) (0/30) (0/30) (0/30) (0/30) (0/35) (0/70) (0/70) (0/70) (0/69) (0/30) (0/30) (0/30) (0/30) (0/30) (0/35) 31.4 (22/70) 35.7 (25/70) 32.9 (23/70) 23.2 (16/69) (0/15) (0/30) 3.3 (1/30) (0/30) (0/30) (0/35) (0/70) 7.1 (5/70) 2.9 (2/70) (0/69) * C, commercial farms; **O, organic farms; ND Not done 5. 돼지사육단계별항생제내성률조사주요호흡기질병의항생제내성률은다음과같다.(Table 11) 호흡기질병유래세균의항생제내성률은 S. suis를제외한대부분의세균이소화기질병유래세균에비해대체로낮게나타났다. P. multocida 도분리균주 69균주에대한항생제감수성검사결과 macrolides계항생제계항생제내성률이가장높았으며그외대부분의항생제내성률은낮았다. 일반농가와항생제제한사용농가의항생제내성률은항생제별로다소차이가있었다. S. suis 분리균주 91균주에대한항생제감수성검사결과, 대부분의항생제내성이높게나타났다. 일반농가와항생제제한사용농가의항생제내성률은항생제별로차이가있었으며, oxytetracycline 은일반농가에서높았으며 tulathromycin의내성률은항생제제한사용농가에서높았다. 농장에서분리된호흡기질병세균 P.multocida(n=69), A.pleuropneumoniae(n=10), H.parasuis(n=5), S.suis(n=91) 에대한항생제효능검사결과, 대체로감수성이높았으며특히 trimethoprim/sulfamethoxazole, Danofloxacin도대부분의균종에감수성이높게나타났다. Table 11. P. multocida, A. pleuropneumoniae, H. prarsuis, S. suis 의항생제내성률검사 Antimicrobials C* (n=18) P.multocida (n=69) O** (n=51) total (n=69) Prevalence % (no. of resistant isolates) A.pleuropneu moniae (n=10) O** (n=10) H.parasuis (n=5) O** (n=5) C* (n=4) S.suis (n=91) O** (n=87) total (n=91) Gentamicin 0() 0() 0() 6(6) 1(2) 4(10) 31(35.6) 35(38.7) Ceftiofur 0() 1(2.0) 1(1.4) 1(1) 0() 3(75.0) 58(66.7) 61(67.0) Ampicillin 0() 0() 0() 0() 0() 0() 10(11.5) 10(11.0) Penicillin 0() 4(7.8) 5(7.2) 4(4) 0() 1(25.0) 54(62.1) 55(60.4) 전라남도축산위생사업소 53

58 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 Chlortetracycline 0() 4(7.8) 4(5.8) 3(30) 1(2) 4(10) 74(85.1) 78(85.7) Oxytetracycline 0() 10(19.6) 10(14.5) 5(5) 1(2) 4(10) 0() 4(4.4) Spectinomycin 0() 0() 0() 8(8) 2(4) 0() 0() 0() Neomycin 0() 0() 0() 0() 0() 4(10) 60(69.0) 64(70.3) Trimethoprim /sulfamethoxazole 0() 0() 0() ND 0() 0() 0() 0() Sulphadimethoxine ND ND ND ND ND ND ND ND Florfenicol 7(38.9) 10(19.6) 17(24.6) 0() 2(4) 4(10) 26(29.9) 30(33.0) Tilmicosin 0() 0() 0() 4(4) 4(4) 4(10) 79(90.8) 83(91.2) Tulathromycin 0() 0() 0() ND ND 0() 78(89.7) 78(85.7) Clindamycin ND ND ND ND ND 4(10) 75(86.2) 79(86.7) Tiamulin 14(77.8) 42(82.4) 56(81.2) 9(9) 4(4) 4(10) 65((74.7) 69(75.8) Tylosin 18(100) 51(100) 69(100) 7(7) 0() 4(10) 84(96.6) 88(96.7) Danofloxacin 0() 0() 0() 0() ND 0() 0() 0() Enrofloxacin 0() 0() 0() 0() 0() 4(10) 49(56.3) 53(58.2) ND : not determined 호흡기질병유래세균의항생제다제내성률을조사한결과, 대부분의균주가 3개의이상의 subclass에내성을나타내는다제내성양상을나타내었다.(table 12) P. multocida의다제내성률항생제제한사용농가유래균주에서일반농가유래균주에비해높게분포하였으며가장빈번하게분포하는다제내성양상은 3 또는 4개의 subclass에내성을나타내는균주였다. S. suis 유래균주는대부분이 1개이상의항생제에내성을나타내었으며가장빈번하게관찰되는다제내성은 7-8개의 subclass에내성을나타내는균주였으며 10개의 subclass에내성을나타낸균주도관찰되었다. Table 12. P. multocida, A. pleuropneumoniae, H. prarsuis, S. suis 의항생제다제내성검사 Resistance pattern C* (n=18) P.multocida O** (n=51) Total (n=69) No. of resistant isolates(%) A. pleuropneum oniae O** (n=10) H. prarsuis, O** (n=5) C* (n=4) S. suis O** (n=87) Total (n=91) No resistance 0() 0() 0() 1(1) 1(2) 0() 1(1.1) 1(1.1) 1 CLSI Subclass 0() 8(15.7) 8(11.6) 0() 2(4) 0() 1(1.1) 1(1.1) 2 CLSI Subclasses 1(5.6) 23(45.1) 24(34.8) 0() 0() 0() 3(3.4) 3(3.3) 3 CLSI Subclasses 12(66.7) 12(23.5) 24(34.8) 2(2) 1(2) 0() 7(8.0) 7(7.7) 4 CLSI Subclasses 5(27.8) 8(15.7) 13(18.8) 4(4) 1(2) 0() 8(9.2) 8(8.8) 5 CLSI Subclasses 0() 0() 0() 1(1) 0() 0() 7(8.0) 7(7.7) 6 CLSI Subclasses 0() 0() 0() 2(2) 0() 0() 7(8.0) 7(7.7) 7 CLSI Subclasses 0() 0() 0() 0() 0() 1(25.0) 17(19.5) 18(19.8) 8 CLSI Subclasses 0() 0() 0() 0() 0() 2(5) 23(26.4) 25(27.5) 9 CLSI Subclasses 0() 0() 0() 0() 0() 1(25.0) 11(12.6) 12(13.5) 10 CLSI Subclasses 0() 0() 0() 0() 0() 0() 2(2.3) 2(2.2) 11 CLSI Subclasses 0() 0() 0() 0() 0() 0() 0() 0() 12 CLSI Subclasses 0() 0() 0() 0() 0() 0() 0() 0() 54

59 Ⅳ. 돼지질병별적정항생제사용설명에관한연구 주요소화기질병원인체인이유기유래병원성 E. coli에대한항생제의항생제내성률은다음과같다.(table 13) E. coli에서내성률이높았으며 cephalosprorins 와 colistin을제외한모든항생제의내성이 30% 이상을나타내었다. 테트라싸이클린과스트렙토마이신의내성이가장높게나타났으며그외젠타마이신, 클로람페니콜, 설파계항생제내성이높게나타났다. 그러나제3세대세팜계및콜리스틴의항생제내성은관찰되지않았다. Table 13. Pathogenic E. coli 의항생제내성률조사 Pathogenic E. coli Antimicrobials (n=11) C* O** total (n=2) (n=9) (n=11) Gentamicin 1(5) 4(44.4) 5(45.5) Streptomycin 1(5) 7(77.7) 8(72.7) Ampicillin 0() 8(88.9) 8(27.7) Amoxicillin/clavulanic acid 1(5) 2(22.2) 3(27.3) Ceftiofur 0() 0() 0() Ciprofloxacin 1(5) 1(11.1) 2(18.2) Nalidixic acid 0() 4(44.4) 4(36.3) Tetracycline 0() 8(88.9) 8(72.7) Neomycin 0() 4(44.4) 4(36.3) Cefoxitin 0() 2(22.2) 2(18.2) Cephalothin 1(5) 2(22.2) 3(27.3) Trimethoprim/sulfamethoxazole 0() 6(66.7) 6(54.5) Colistin 0() 0() 0() Chloramphenicol 0() 7(77.8) 7(63.6) Florfenicol 0() 6(66.7) 6(54.5) * C, commercial farms; **O, organic farms 이유기유래병원성 E. coli 에대한다제내성률을조사한결과 (Table 14), 대체로다제내성률이높았다. 검사균주중 1 개균주를제외한모든균주가 3 subclass 에내성을나타내는다제내성을나타내었으며 가장빈번하게관찰되는다제내성양상은 5 개의 subclass 에내성으로조사되었다. Table 14. Pathogenic E. coli 의다제내성률 No. of resistant isolates(%) Resistance pattern C* (n=2) O** (n=9) Total (n=11) No resistance 0() 0() 0() 1 CLSI Subclass 1(5) 0() 0(9.1) 2 CLSI Subclasses 0() 0() 0() 3 CLSI Subclasses 0() 2(22.2) 2(18.2) 4 CLSI Subclasses 0() 2(22.2) 2(18.2) 5 CLSI Subclasses 0() 3(33.3) 3(27.3) 6 CLSI Subclasses 0() 0() 0() 7 CLSI Subclasses 0() 0() 0() 8 CLSI Subclasses 0() 1(11.1) 1(9.1) 9 CLSI Subclasses 1(5) 0() 1(9.1) 10 CLSI Subclasses 0() 1(11.1) 1(9.1) 11 CLSI Subclasses 0() 0() 0() 12 CLSI Subclasses 0() 0() 0() 전라남도축산위생사업소 55

60 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 결 론 2011년 7월부터배합사료내항생제사용을전면금지후항생제사용량추이를조사한결과 11년 956톤, 12년 936톤, 13년 820톤, 14년 635톤으로 11년부터 4년연속 1,000톤이하로판매되었으며, 14년에는 635톤으로 06년판매량을조사한이래가장낮았다. 총 635톤중타축종에비해상대적으로밀집사육등사육환경이열악한돼지에서 14년사용된항생제는 311톤으로전체판매량의 49% 를차지했다. 항생제및항콕시듐제판매량을살펴보면, 항생제성분별판매량은 Penicillin계열과 Sulfonamides 계열항생제로각각약 96톤이상으로가장많이판매된것으로조사되었으며, Phenicols 계열이약 40톤, Tetracyclines계열이약 30톤판매된것으로조사되었다. 수의사처방에의한질병의직접적인치료용항생제사용보다는자가치료및예방용도로서약품도매상등을통해농가에서직접구입하여사용되고있는것으로나타나항생제의부적절한사용이여전히이루어지고있는실정이다. 2013년 6월부터 2015년 6월까지전남지역일반농가 3개소와항생제제한사육농가 7개소를대상으로사육단계별질병검사를실시하였다. 호흡기질병에주된원인체인흉막폐렴, 파스튜렐라폐렴, 마이코플라스마성폐렴, 전염성기관지염, 글래서병, 연쇄상구균폐렴에대해발생률을조사한결과연쇄상구균폐렴이모든사육단계에서가장높게분포되었으며, 파스튜렐라폐렴은포유기를제외한사육단계에서분포율이높았다. 반면, 소화기질병에서는병원성대장균, 살모넬라균, 돼지증식성회장염, 돼지적리중모든사육단계에서대장균증분포가가장높이나타났으며, 돼지증식성회장염은육성기와비육기에서살모넬라균, 돼지적리균은검출되지않았다. 주요호흡기질병유래세균중가장분포가많은연쇄상구균폐렴은대부분의항생제내성을보였으며, 특히 oxytetracycline 은일반농가에서높았으며 tulathromycin의내성률은항생제제한사용농가에서높았다. 연쇄상구균폐렴을제외한대부분은호흡기질병원인체는항생제감수성이높았으며, 특히 trimethoprim/sulfamethoxazole, Danofloxacin에감수성이높게나타났다. 소화기질병주된원인체인이유기유래병원성 E. coli에대한항생제의항생제내성률은테트라싸이클린과스트렙토마이신이가장높게나타났으며겐타마이신, 클로람페니콜, 설파계순으로나타났다. 그러나제3 세대세팜계및콜리스틴의항생제내성은관찰되지않았다. 항생제사용은돼지에서생산성증대, 돼지의건강및동물의복지를유지하는데필수적이다. 현재발생되는질병뿐만아니라미래에출현할질병에대해서도항생제의효과를유지하여지속적으로사용가능하도록보존하는것이중요하다. 이처럼농가별또는분리균주별로항생제내성양상이다르게나타나기때문에주기적으로항생제감수성검사를수행한후항생제의사용시에는국제적으로공동 56

61 Ⅳ. 돼지질병별적정항생제사용설명에관한연구 인식인 신중사용의원칙 에따라항생제의선택을신중하게해야할것이다. 항생제선택에있어우리가고려해야할요소는임상효과외에도플로로퀴놀론및세팔로스포린과같은사람에게중요하게사용하는항생제에대해서는더욱신중하게사용하려는노력이필요한것처럼본연구의결과가도내양돈농가의질병치료를위한항생제선발기준시조금이나마보탬이되기를기대해본다. 참고문헌 1. Arnold S, Gassner B, Giger T, Zwahlen R. Banning antimicrobial growth promoters in feedstuffs does not result in increased therapeutic use of antibiotics in medicated feed in pig farming.pharmacoepidemiol Drug Saf (5): Barton MD. Antibiotic use in animal feed and its impact on human health. Nutr Res Rev (2): Casal J, Mateu E, Mejia W, Martin M. Factors associated with routine mass antimicrobial usage in fattening pig units in a high pig-density area. Vet. Res : Castanon JI. History of the use of antibiotic as growth promoters in European poultry feeds. Poult Sci : Dibner JJ, Richards JD. Antibiotic growth promoters in agriculture: history and mode of action. Poult Sci : Millet S, Maertens L. The European ban on antibiotic growth promoters in animal feed: from challenges to opportunities. Vet J : Vigre H, Larsen PB, Andreasen M, Christensen J, Jorsal SE. The effect of discontinued use of antimicrobial growth promoters on the risk of therapeutic antibiotic treatment in Danish farrow-to-finish pig farms. Epidemiol Infect : Wierup M. The Swedish experience of the 1986 year ban of antimicrobial growth promoters, with special reference to animal health, disease prevention, productivity, and usage of antimicrobials. Microb Drug Resist : 전라남도축산위생사업소 57

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63 전남지역흑염소의 네오스포라증감염실태조사

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65 Ⅴ. 전남지역흑염소의네오스포라증감염실태조사 Ⅴ. 전남지역흑염소의네오스포라증감염실태조사 박민창 안규성 1 신성호 최재은 신성식 1 전라남도축산위생사업소동부지소, 전남대학교수의과대학 1 서 론 네오스포라는원충성기생충으로가축에서주로유사산을유발하여축산농가의경제적손실을야기한다. 16) 1989년미국캘리포니아지역젖소유사산의가장중요한원인체가네오스포라로밝혀졌다. 9) 또한, 네오스포라항체양성젖소는항체가없는젖소에비해유산의위험이 6배가량높다고보고되었다. 21) 국내의한우와젖소에대한네오스포라감염실태는최근까지많이조사되었으나, 1,5,6) 해부 생리학적으로유사한염소에대한조사자료는전무한실정이다. 미국에서실험적으로 Neospora caninum를인공감염시킨임신 pygmy 염소 6두중 3두에서태아흡수와사산태아발생이보고되었고, 23) 염소사산태아의뇌에서 Tissue cyst가발견되어태반감염이가능함이보고되었다. 14) 네오스포라는 1984년뇌척수염과근염으로폐사한개에서최초확인되었고, 11) 1988년에 Neospora caninum으로명명되었다. 13) 국내에서는 1997년에젖소의 6개월령유산태아에서최초보고되었고, 1) 젖소에서네오스포라에의한반복유산이일어날수있음이확인되었다. 2) 종숙주는개, 코요테, 회색늑대, 딩고등이현재까지알려졌으며, 종숙주의분변을통해충란이배출된다음경구감염으로중간숙주는감염된다. 17,18,20,25) 중간숙주는소, 양, 염소, 사슴등의가축과다양한야생동물들이며, 12,16) 특히소에서태반감염으로인한유사산의주요원인체로문제되고있으며, 10,19) 염소에서도유사산을유발한다. 15) 네오스포라의진단은간접형광항체법 (Indirect Flourescent Antibody Test ; IFAT), 7) 효소결합면역진단법 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay ; ELISA), 22) 중합효소연쇄반응 (Polymerase Chain Reaction ; PCR) 26) 등이확립되어주로활용되고있다. 본조사는전남지역흑염소네오스포라감염실태를혈청학적으로확인하여질병연구기초자료와농가방역관리에활용하기위하여실시하였다. 전라남도축산위생사업소 61

66 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 재료및방법 1. 공시혈청 2015년 6월부터 11월까지흑염소 542두의혈액을무작위로채취하였다. 전남화순군소재흑염소도축장에서 399두, 구제역혈청예찰검사용농장채혈시료 143두를각각채취하였다. 채취된혈액은혈청을분리하여 56 에서 30분간비동화하고, 검사전까지 20 에서냉동보관하였다. 도축된흑염소의연령, 성별및사육지역은축산물안전관리시스템의도축검사신청현황을기초로하였고, 농장채혈시료는가축위생방역지원본부의혈청검사의뢰내역서를기초로하였다. 2. 간접형광항체법 (IFAT) 항원이코팅된슬라이드를농림축산검역본부에서제공받아 70 에서보관하였으며, 실험전실온에서 10분간건조시킨후실험에사용하였다. 가검혈청을 Serum diluting buffer(na2hpo4 1.19g, NaH2PO4 0.22g, NaCl 8.55g, Bovine serum albumin 1g, D.W. 1L, ph 7.2) 로단계희석하고, 표준양성및음성혈청 (200배희석 ) 과 200배희석된가검혈청을각 well에 12μl씩떨어뜨린다. 습윤 Chamber에슬라이드를넣고 37 에서 30분간반응시킨다. 반응후 FA rinse buffer(na2co3 11.4g, NaHCO3 33.6g, NaCl 8.55g, D.W. 1L, ph 9.0) 에 10분간담그고가끔흔들어준다. 세척후검사 well에 Fluorecein-labeled Goat anti-bovine IgG(1:80) 를 12μl씩떨어뜨린다. 습윤 Chamber에슬라이드를넣고 37 에서 30분간반응시킨다. 반응후 FA rinse buffer에 10분간담그고가끔흔들어준다. 세척후슬라이드를꺼내어물기를최대한털어내고, 항원이코팅되지않은반대면과코팅면의가장자리물기를닦에제거한다. 슬라이드에 mounting fluid를 2~3방울떨어뜨린후커버글래스를덮고형광현미경으로관찰하여 1:200 이상에서형광을발하면양성으로판정한다. 결 과 1. 지역별항체양성률전남지역여수시등 18개시 군흑염소농가 48호 542두에대해간접형광항체법 (IFAT) 으로검사한결과, 농장양성률은 20.8%(10호 ) 였으며, 개체별양성률은 3.5%(19두 ) 였다 (Table 1). 농장양성률은해남군 (66.7%) 이가장높았으며그외영암군 (60%), 강진군 고흥군 (50%) 순이었다. 개체별양성률은고흥군 (20%) 이가장높았고, 강진군 (10.7%), 영암군 (6.5%) 순이었다. 여수시등 11개지역 17개농장의흑염소에서는양성항체가검출되지않았다. 62

67 Ⅴ. 전남지역흑염소의네오스포라증감염실태조사 Table 1. The positive rate of Neospora caninum according to region in Jeonnam province No. of farms No. of samples Region Tested Positive (%) Tested Positive (%) Yeosu 1 0 (0) 4 0 (0) Suncheon 2 0 (0) 11 0 (0) Naju 6 1 (16.7) 24 1 (4.2) Gwangyang 1 0 (0) 4 0 (0) Damyang 1 0 (0) 16 0 (0) Gokseong 1 0 (0) 4 0 (0) Goheung 2 1 (50) 20 4 (20) Boseong 3 0 (0) 77 0 (0) Hwasun 10 1 (10) 61 2 (3.3) Jangheung 3 1 (33.3) 41 1 (2.4) Gangjin 2 1 (50) 28 3 (10.7) Haenam 3 2 (66.7) (2.8) Yeongam 5 3 (60) 77 5 (6.5) Muan 1 0 (0) 4 0 (0) Hampyeong 1 0 (0) 4 0 (0) Yeongkwang 2 0 (0) 5 0 (0) Wando 3 0 (0) 11 0 (0) Shinan 1 0 (0) 45 0 (0) Total (20.8) (3.5) 2. 성별항체양성률농장에서채취한흑염소혈액중성별과나이를알수없는 92두를제외한 450두의혈액을검사한결과 15두 (3.3%) 가항체양성이었다 (Table 2). 암컷 (8.5%) 의항체양성률이가장높았으며, 수컷은전시료에서항체가검출되지않았다. Table 2. The positive rate of Neospora caninum according to sex Sex No. of samples Tested Positive (%) Male (0) Female 82 7 (8.5) Castrated (3.0) Total (3.3) 3. 연령별항체양성률 2~3 세구간의항체양성률 (11.4%) 이가장높았다. 3 세까지는연령이높을수록항체양성률이상승 하였다. 3 세초과구간은 3 건모두항체가검출되지않았다. 전라남도축산위생사업소 63

68 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 Table 3. The positive rate of Neospora caninum according to age Age No. of samples Tested Positive (%) Under 1yr 78 1 (1.3) 1~2yrs (3.0) 2~3yrs 35 4 (11.4) Over 3yrs 3 0 (0) Total (3.3) 고 찰 국내에서는약 25만두의흑염소를사육하고있고있다. 흑염소사육두수는 2012~2014년사이큰변화가없지만농가수는감소하고있어흑염소농가의규모화가진행중이다. 3) 흑염소사육은한우등의주요가축에비해시설투자비용이상대적으로적고사양관리가용이한편이다. 한해약 70만두가국내소비되고있고건강보양식품으로국산흑염소에대한선호도가높으나, 공급이부족하여호주등해외에서수입하고있으므로국내흑염소산업의성장전망은매우밝다. 흑염소사육에있어서성패를좌우하는것은흑염소의번식관련질환인유사산과어린염소의생존율이다. 국내한우와젖소의네오스포라유병률은많이보고되었으나, 흑염소에대한감염실태조사는이루어지지않았었다. 네오스포라의혈청학적검사법으로 ELISA와 IFAT가있으나, ELISA는 Sarcocystis를인공접종한개체에서교차반응이나타날수있기때문에 IFAT의정확도가더높다. 16) 따라서본조사에는 IFAT를활용하여감염실태를조사하였다. 전남지역 18개시 군의흑염소농가 48호 542두에대한네오스포라항체검사결과, 10호 (20.8%) 19두 (3.5%) 에서항체양성이나타났다. 중국에서 650두의염소를 IFAT로검사한결과 47두 (7.23%) 에서양성항체가보고되었고,24) 브라질 Minas Gerais 지역의 90 herds의 667두를검사한결과 herd 양성률 75.2% 와개체양성률 10.7% 로확인되었다.8) 전남지역흑염소의개체별항체양성률은중국과브라질에비해낮은편이며, 이것은염소의축종과사양환경의차이점에기인한것으로보인다. 해남군 (66.7%), 영암군 (60%), 강진군 고흥군 (50%) 의농장양성률이높았고, 개체별양성률은고흥군 (20%), 강진군 (10.7%), 영암군 (6.5%) 이높았다. 여수시등 11개시 군의 17개농장은양성항체가검출되지않았다. 성별양성률은암컷 (8.5%) 과거세수컷 (3.0%) 에서양성항체가검출되었으나, 수컷은전두수음성이었다. 이는흑염소사육농가별로수컷사육시거세선호도차이에의한것으로, 비거세로사육하는농가가방역관리를더욱잘한것으로보인다. 64

69 Ⅴ. 전남지역흑염소의네오스포라증감염실태조사 암컷은상대적으로오래사육되기때문에병원체에장기간노출되기때문으로추측된다. 이것은연령별양성률을확인하여도, 2~3세구간 (11.4%), 1~2세구간 (3.0%), 1세미만구간 (1.3%) 순으로높았다. 3세초과구간은전두수음성이었으나검사개체가 3두밖에되지않아표본이적었다. 이조사로전남지역의흑염소는네오스포라에감염되어있고, 이로인한유사산또는허약자축의발생이일어날것으로판단된다. 농장에서네오스포라를효과적으로차단하기위해서는종숙주인개의유입을차단하고, 반복유사산이많은농장은철저한검사를통해감염개체를도태하는것이다. 위조사결과를근거로전국흑염소농장의네오스포라에의한유사산을차단하면년간약 10억원의경제적손실을예방할수있을것으로보인다. 전남지역흑염소산업의안전한발전을위해서행정차원의방역대책과농가교육이이루어져야할것이다. 결 론 1. 전남지역 18개시 군의흑염소농가 48호 542두에대한네오스포라항체검사결과, 10호 (20.8%) 19두 (3.5%) 에서항체양성이나타났다. 2. 각시 군의농장양성률은해남군 (66.7%) 이가장높았으며그외영암군 (60%), 강진군 고흥군 (50%) 순이었다. 개체별양성률은고흥군 (20%) 이가장높았고, 강진군 (10.7%), 영암군 (6.5%) 순이었다. 여수시등 11개지역 17개농장의흑염소에서는양성항체가검출되지않았다. 3. 성별양성률은암컷 (8.5%) 의항체양성률이가장높았으며, 수컷은전시료에서항체가검출되지않았다. 4. 연령별양성률은 2~3세구간의항체양성률 (11.4%) 이가장높았다. 3세까지는연령이높을수록항체양성률이상승하였다. 3세초과구간은 3건모두항체가검출되지않았다. 5. 전남지역의흑염소는네오스포라에감염되어있고, 이로인한유사산또는허약자축의발생이일어날것으로판단되며, 전남지역흑염소산업의안전한발전을위해서행정차원의방역대책과농가교육이이루어져야할것이다 전라남도축산위생사업소 65

70 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 참고문헌 1. 김대용, 황우석, 김재훈등 (1997). Neospora 에의한소유산발생. 대한수의학회지 37(3) : 김재훈, 손현주, 황의경등 (1998). Neospora caninum 에의한젖소의반복유산. 대한수의학회지 38(4) : 농림축산식품부. 2014년기타가축통계. 4. 동물질병표준검사법 (2013). 농림축산검역본부. 5. 박애라, 하대식, 조성숙, 권영택, 박동엽, 이국천, 허정호 (2010). 경남지역내소 Neospora caninum에대한감염률조사. 한국가축위생학회지 33 : 정광, 심항섭 (2013). 경기도북부지역젖소의 Neospora caninum 항체양성률조사. 한국가축위생학회지 36(1) : 허권, 김재훈, 황우석, 황의경, 진영화, 이병천등.(1998) 간접형광항체법을이용한국내젖소의 Neospora caninum에대한혈청역학적연구. Korean J Vet Res 38(4) : Andrade Gda S, Bruhn FR, Rocha CM, de S Guimares A, Gouveia AM, Guimares AM.(2013). Seroprevalence for Neospora caninum in goats of Minas Gerais state, Brazil. Res Vet Sci. 94(3) : Anderson ML, Blanchard PC, Barr BC et al.(1991). Neospora-like protozoan infections as a major cause of abortion in Califonia dairy cattle. JAVMA 198 : 241~ Anderson ML, Picanso J, Thurmond M et al.(1992). Epidemiological investigations of bovine protozoal abortion in California dairy herds. Pro. XVII World Buiatrics Congr. and XXV Am Assoc Bovine Pract Conf Vol 2 : Bjerkas I, Mohn SF, Presthus J(1984). Unidentified cystforming sporozoon causing encephalomyelitis and myositis in dogs. Z Parasitenk 70: Donahoe SL, Lindsay SA, Krockenberger M, Phalen D, Slapeta J(2015). A review of neosporosis and pathologic fingdings of Neospora caninum. Int J for Parasitology : Parasites and Wildlife 4(2015): Dubey JP, Carpenter JL, Speer CA, Topper MJ, Uggla A(1988). Newly recognized fatal protozoan disease of dogs. J Am Vet Med Assoc 192: Dubey JP, Acland HM, Hamir AN(1992). Neospora caninum(apicomplexa) in a stillborn goat. J Parasitol 78(3) : Dubey JP, Morales JA, Villaobos P, Lindsay DS, Blagburn BL, Topper MJ(1996). Neosporosis-associated abortion in a dairy goat. J Am Vet Assoc 208(2) :

71 Ⅴ. 전남지역흑염소의네오스포라증감염실태조사 16. Dubey JP(2003). Review of Neospora caninum and neosporosis in animals. Korean J of Parasitology 41(1) : Dubey JP, MC Jenkins, C Rajendran, K Miska, LR Ferreira, J Martins, OCH Kwok, S Choudhary(2011). Gray Wolf (Canis lupus) is a natural definitive host for Neospora caninum. Veterinary Parasitology 181(2-4): Gondim LFP, MM McAllister, WC Pitt, DE Zemlicka(2004). Coyotes (Canis latrans) are definitive hosts of Neospora caninum. Int J for Parasitology 34(2): Jamaluddin AA, Case JT, Hird DW et al.(1996). Dairy cattle abortion in California : evaluation of diagnostic laboratory data. J Vet Diagn Invest, 8: King JS, Slapeta J, Jenkins DJ, Al-Qassab SE, Ellis JT, Windsor PA(2010). Australian dingoes are definitive hosts of Neospora caninum. Int J of Parasitology 40(8): Koiwai M1, Hamaoka T, Haritani M, Shimizu S, Kimura K, Yamane I(2005). Proportion of abortions due to neosporosis among dairy cattle in Japan. J Vet Med Sci 67(11) : Lally NC, Jenkins MC, Dubey JP(1996). Evaluation of two Neospora caninum recombinant antigens for use in an ELISA for the diagnosis of bovine neosporosis. Clin Diagn Lab Immunol 3 : Lindsay DS, Rippey NS, Powe TA, Sartin EA, Dubey JP, Blagburn BL(1995). Abortion, fetal death, and stillbirths in pregnant pygmy goats inoculated with tachyzoites of Neospora caninum. Am J Vet Res 56(9) : Liu ZK1, Li JY2, Pan H3(2015). Seroprevalence and risk factors of Toxoplasma gondii and Neospora caninum infections in small ruminants in China. Prev Vet Med. 118(4) : McAllister MM, Dubey JP, Lindsay DS, Jolley WR, Wills RA, McGuire AM (1998). Dogs are definitive hosts of Neospora caninum. Int J Parasitol. 28(9): McInnes LM, Ryan UM, O'Handley R, Sager H, Forshaw D, Palmer DG (2006). Diagnostic significance of Neospora caninum DNA detected by PCR in cattle serum. Vet Parasitol 142(3-4): Moeller RB(2001). Causes of caprine abortion: diagnostic assessment of 211 cases ( ). J Vet Diagn Invest. 13(3): 전라남도축산위생사업소 67

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73 전남서부지역한우 요네병유병률조사

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75 Ⅵ. 전남서부지역한우요네병유병률조사 Ⅵ. 전남서부지역한우요네병유병률조사 신동욱 유종훈 조재호 임형주 최명자 정대영 전라남도축산위생사업소서부지 서 론 요네병 (Johne`s disease) 은소, 양, 사슴등반추수및돼지에서만성장염을일으키는만성소모성질병으로, 이에따른주증상은만성의설사와사료효율의저하, 쇠약, 증체율및산유량감소, 수태율저하를나타낸다. 요네병의원인체는 Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis(map) 로 1895년독일의수의학자 Johne와 Frothingham에의해처음보고되었고, 1910년 Twort와 Ingram에의해처음으로원인균이분리되었다. 한국에서는 1983년이등 (1982) 이강원도대관령목장의수입젖소에서처음으로임상형요네병을보고하였고, 1984년전등 (1984) 이젖소에서요네병균을분리하였다. MAP는동물체내에감염되어주로장벽과장간막림프절에들어가세포면역을일으켜과민반응을유도하고장관으로단백성혈장성분이유출되어만성소모성상태가지속되며지속적인설사가일어난다. 또한요네병은감염된개체가오랜기간잠복기로진행되면서병원체를지속적으로배출하여근절이힘들고농가에큰경제적피해를주는만성질병으로국내에서는제2종가축전염병으로지정하여관리하고있다. 하지만같은제2종전염병인브루셀라, 결핵병은지속적인모니터링검사로양성축을살처분하는등근절을위한노력이정책적으로시행되고있으나요네병의경우당대, 후대검정이나육종농가검사등특정사업을통한농가의자체의뢰이외에는따로모니터링검사등을하지않고있어질병관리와농가지도에어려움이많은실정이다. 이에이번조사에서는전남서부지역한우농가의요네병에대한항체양성률을파악하여질병관리 및농가방역지도자료로활용하기위해요네병항체의혈청학적진단법인 enzyme linked immunosorbent assay(elisa) 법을이용하여조사를진행하였다. 전라남도축산위생사업소 71

76 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 재료및방법 1. 공시시료전남서부지역한우농가의항체양성률조사를위해 2015년 5월부터 2015년 11월까지목포시, 담양군, 무안군, 함평군, 영광군, 장성군, 신안군의브루셀라검사를의뢰한한우농가중조사대상농가를무작위로선정하여검사의뢰된혈액을농가당 10두씩냉동보관후요네병항체검사에사용하였다. 2. 검사방법 요네병항체검사는 Mycobacterium paratuberculosis Antibody Test Kit(IDEXX Paratuverculosis screening ELISA) 를사용하여실시하였다. 가검혈청 10 μl를혈청희석액 190 μl로 20 배희석하여 실온에서 1 시간정치하고, 희석혈청 100 μl와 20 배희석한양성대조및음성대조 100 μl를항원이 코팅된마이크로플레이트에분주한뒤실온에서 45 분간배양후 300 μl의세척액으로 3 회세척하고 HRPO-conjugate 100 μl를분주하고상온에서 30 분간배양시켰다. 다시세척액으로 3 회세척하고 TMB 100 μl를분주하고상온에서 10 분간배양하였다. 이후 stop solution 100 μl를분주하고 ELISA reader(molecular Device) 를이용하여 450nm 에서흡광도를측정 하였다. 각 plate 는표준양성과음성혈청을포함하였고검사결과는다음과같은공식에의하여 S/P% 가 45% 를초과할경우양성으로판정하였다. 검사시료 음성대조 S/P % = 양성대조 음성대조 결 과 1. 지역별양성률 전남서부지역의시군별한우사육농가 225 호 2,250 두에대해 ELISA kit 를사용하여검사한결과 Table1 과같이총 225 호 2,250 두중 64 호 (28%) 123 두 (5.4%) 가양성이었다. 72

77 Ⅵ. 전남서부지역한우요네병유병률조사 Table 1. 전남서부지역지역별요네병항체양성률 양성률 지역 농가수 두수 총검사농가 양성농가 (%) 총검사두수 양성두수 (%) 목포시 1 0 (0%) 10 0 (0%) 담양군 (30.3%) (8.2%) 무안군 (27.3%) (4.4%) 함평군 (29%) (4%) 영광군 20 5 (25%) (12.5%) 장성군 26 7 (26.9%) (3%) 신안군 17 6 (35.3%) (4.7%) 합계 (28.4%) 2, (5.4%) 지역별양성률을보면목포시가 1호 10두전체음성, 담양군이 33호 330두검사에 10호 (30%) 27두 (8%) 양성, 무안군이 66호 660두검사에서 18호 (27.3%) 29두 (4.4%) 양성, 함평군이 62호 620두검사에서 18호 (29%) 25두 (4%) 양성, 영광군이 20호 200두검사에서 5호 (25%) 25두 (12.5%) 양성, 장성군이 26호 260두검사에서 7호 (26.9%)9두(3%) 양성, 신안군이 17호 170두검사에서 6호 (35.3%) 8두 (4.7%) 양성을보였다. 2. 사육규모별양성률농가사육규모별양성률을보면 Table 2와같이 30두이하사육농가 49호중 21호양성 (42.8%) 31두이상 100두이하사육농가 108호중 31호 (28.7%), 101두이상 200두이하사육농가 50호중 11호 (22%), 201두이상 18호중 1호 (5.5%) 의양성률을보였다. Table 2. 농가사육규모별양성률 사육규모별양성률 지역 30두이하 31~100두 101~200두 201두이상 검사호수 양성호수 검사호수 양성호수 검사호수 양성호수 검사호수 양성호수 목포시 1 0 담양군 무안군 함평군 영광군 장성군 신안군 합계 전라남도축산위생사업소 73

78 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 3. 양성농가검사두수중양성두수양성농가의검사두수중양성두수는농가별 10두검사에서 1두양성농가가 34호, 2두양성농가가 21호, 3두양성농가가 4호, 4두양성농가가 2호, 7두양성농가가 1호10두전두수양성농가가 2호로나타났다. Table 3. 양성농가의검사두수중양성두수 양성농가의검사두수중양성두수 1두 2두 3두 4두 7두 10두 합계 양성농가 34호 21호 4호 2호 1호 2호 64호 고 찰 한우와젖소에서만성소모성질환을일으키는요네병은뚜렷한임상증상없이잠복기가길고병원체가지속적으로분변을통해배출되어근절과치료가어렵기때문에농가에경제적인피해를유발하는질병이다. 이와비슷한제2종가축전염병인우결핵의경우모니터링검사, 역학검사등으로양성축을색출하여살처분하는방역정책을취하고있으나요네병의경우아직은농가의개인적인민원의뢰로만검사를하고있어전반적인한우농가의요네병의항체양성률이잘알려져있지않아많은조사가필요하다. 이번조사에서는전남서부지역인목포시, 담양군, 무안군, 함평군, 영광군, 장성군, 신안군의한우사육농가 225호 2,250두를대상으로요네병항체가조사를실시하였는데지역별양성률을보면전체 225호중 64호에서양성축이나왔고 (28.4%), 검사호수가크게적은목포시를제외하고양성률이가장낮은지역인영광군이 20호중 5호 (25%), 가장높은지역인신안군이 17호중 6호 (35.3%) 로나타났다. 양성두수의경우 2,250두검사중 123두 (5.4%) 가양성으로조사되었다. 이결과를보면사육농가별양성률이각지역별로 25~35% 범위로지역별로거의차이가없었고, 개체별로는담양군, 영광군이각각 8.2%, 12.5% 로평균보다높게나타났지만, 이번조사에서농가당 10두씩검사를진행하였는데그중 95% 농가에서 4두이하로양성축이나왔고, 양성축 7두인농가가담양 1호, 10두가양성인농가는영광 2호로이세농가를제외하고보면대부분의지역이 4~6% 양성률로농가별, 개체별로봤을때지역적인차이는거의없는것으로생각된다. 사육규모별양성률은 30두이하사육농가가사육수가많은농가에비해높게나타났는데이번조사는각농가별사육 74

79 Ⅵ. 전남서부지역한우요네병유병률조사 두수대비샘플링이아닌농가별 10두씩일괄적으로검사하였기때문에조사방식에서오는원인일수도있고소규모영세농가의낮은회전율과낮은방역의식이원인일수도있을것같다. 추등 (2006) 이실시한전북지역의젖소요네병항체조사에서는 52호 260두중 22호 (42.3%) 35두 (13.5%) 가양성으로판정되었고이등 (2009) 이실시한경북지역의조사에서는한우사육농가 114호 281두중 8호 (7%) 19두 (6.8%) 가양성, 추등 (2013) 의전북지역한우의요네병항체조사에서는 263호 2,606두중 46호 (17.5%) 60두 (2.3%) 가양성으로판정되어한우사육농가가젖소사육농가에비해양성률이낮지만, 타지역에비해서는요네병양성률이약간높은것으로나타났다. 요네병은한우사육농가에서브루셀라나결핵병에비해덜알려져있는데이번연구에서보면많은한우농장에서요네병항체양성축이있는것으로조사되어좀더적극적인모니터링검사와방역대책연구가필요할것으로사료된다. 결 론 2015년 5월부터 11월까지전남서부지역의시군별한우사육농가 225호 2,250두에대해 ELISA kit를사용하여요네병항체검사한결과총 64호 123두가양성으로판정되었고지역별로보면담양군이 10호 27두, 무안군이 18호 29두, 함평군이 18호 25두, 영광군이 5호 25두, 장성군이 7호 9두, 신안군이 6호 8두가양성으로판정되었다. 각지역별요네병발생률은거의유사하여지역별차이는없는것으로나타났고, 사육규모별양성률은 30두이하사육농가 49호중 21호양성, 31두이상 100두이하사육농가 108호중 31호, 101두이상 200두이하사육농가 50호중 11호, 201두이상 18호중 1호의양성률을보였다. 참고문헌 1. 김두 요네병의진단기법개발. 농림부연구보고서 : 이방환, 임봉호, 하창수, 성홍룡 국내발생의우파라결핵병례 (Johne`s disease) 에대한임상병리학적추적조사보고. 대한수의학회자 24(1): 전윤성, 이방환, 김종배, 최철순, 김진구 우유래 Mycobactin 의존성항상성세균 (M.paratuberculosis) 의분리동정. 대한수의학회지 24(1):58-63 전라남도축산위생사업소 75

80 2015 년도축산위생사업소연구결과보고서 4. Chu KS, Kim SH, Ha YS, Lee JW Seroprevalence of paratuberculosisin Korean cattle in western Jeonbuk area, Korea. Korean J Vet serv, 2013, 36(2), Chu KS, Hyong SG, Im JC, Seo LW Seroprevalence of infection with Neospora caninum, Mycobacterium paratuberculosis, bovine leukosis and Brucella abortus of dairy cattle in Jeonbuk-Iksan area. Korean J Vet serv 30: Graham DY, Markesich DC, Yoshimura HH Mycobacteria and inflammatory bowel disease. Results of culture. Gastoenterology 92: Jeon DM, Yook SY, Lee HM, Han WS, Kang HJ, Lee JB Prevalence of M.paratuberculosis antibody in dairy cattle in Seosan-Taean areas for M.R.T.samples. Korean J vet Serv32(3): (2009) 8. Johne HA, Frothingham L Ein eigenthuemlicher Fallvon TuberKulose beim Rind, Deutche Zeitschifr Tiermed Pathol 21: Kim D, Park HW Expression of the C-termina if 34 KDa protein of Mycobacterium paratuberculosis. Korean J Vet Res 40: Lee SM, Kim MS, Jang YS, Chon RH, Park NC Seroprevalence of paratuberculosis of dairy cattle and Korean cattle in Eastern-Gyengbuk area. Korean J Vet Serv 32(2): McFadden JJ, Butcher PD, Chiiodini R, Hermon-Taylor J Crohn`s disease-isolated mycobacteriua are identical to Mycobacterium paratuberculosis, as determined by DNA probes that distinguish between mycobacterial species. J Clin Microbiol 25: Son BG, Seok JM, Jang EH, Ji DH, Shin JS, Hwang BW Prevalence of Johne`s disease from slaughtered cattle in central area of Gyeongnam province, Korea. Korean J Vet Serv, 2013, 36(1), Twort FW, Ingram GLY A method for isolating and cultivating Mycobacterium enteritidis chronicae pseudotuberculosae bovis johne and some experiments on the preparation of a diagnostic vaccine for pseudotuberculosae enteritis of bovines, Proc Royal Soc London 84: VanLeeuwen JA, Forsythe L, Tiwari A, Chartier R Seroprevalence of antibodies against bovine leukemia virus, bovine viral diarrhea virus, Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis, and Neospora caninum in dairy cattle in Saskatchewan. Can Vet J 46(1): Vary PH, Andersen PR, Green E, Hermon-Taylor J, McFadden JJ Use of highly secific DNA probes and the polymerase chain reaction to detect Mycobacterium paratuberculosis in Johne`s disease. J Clin Microbiol 28(5):

81 Ⅵ. 전남서부지역한우요네병유병률조사 2015 년도축산위생사업소연구보고서 발행일발행인 편집위원장 발행처주소전화번호팩스홈페이지 2015 년 12 월 김상현 김희정 전라남도축산위생사업소전라남도강진군작천면금강로 619 TEL) FAX) 전라남도축산위생사업소 77