발색반응을이용한인플루엔자진단용시약 ( 고위험성감염체유전자검사시약 ) 평가가이드라인

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1 발색반응을이용한인플루엔자진단용시약 ( 고위험성감염체유전자검사시약 ) 평가가이드라인

2 개정이력서 발색반응을이용한인플루엔자진단용시약 ( 고위험성감염체유전자검사시약 ) 평가가이드라인

3 본가이드라인은발색반응을이용한인플루엔자진단용시약 고위험성감염체유 전자검사시약 평가에대한가이드라인이며 현재까지의경험과과학적사실에근 거한것이므로새로운과학적근거가있을경우또는관련규정의개정에따라추후변경될수있습니다 또한본가이드라인은현재의발색반응을이용한인플루엔자진단용시약 고위 험성감염체유전자검사시약 평가에대한일반적인해석을기술하고있는것으로서 법적효력이있는사항이아니며 개별사항에따라다르게해석할수있음을알려드립니다 가이드라인이란대외적으로특정한사안등에대하여식품의약품안전처의입장을 기술한것임 ( 식품의약품안전처지침등의관리에관한규정 _ 식약처예규 ) 1. 관련법규등 의료기기법 의료기기법시행규칙 의료기기허가 신고 심사등에관한규정 식약처고시 의료기기품목의소분류및등급 식약처공고 의료기기의안정성시험기준 식약처고시 의료기기임상시험계획승인에관한규정 식약처고시 의료기기임상시험기본문서관리에관한규정 식약처고시 의료기기임상시험기관지정에관한규정 식약처고시 의료기기제조및품질관리기준 식약처고시 2. 문의처 본가이드라인에대한의견이나문의사항이있을경우식품의약품안전평가원체외진단기기과로문의하시기바랍니다 전화 팩스 - 3 -

4 1. 서론 2 2. 용어정의 신청서기재항목및기술문서제출자료 허가 인증신청서기재항목 기술문서심사를위한제출자료 인플루엔자바이러스진단용시약성능시험에대한상세사항 결핵진단용시약성능시험에대한상세사항 참고문헌 69 70

5 1. 서론 배경 등온증폭법 (Isothermal DNA amplification) 은일본, 유럽등세계적으로는신속검출기법으로알려져있으나국내에서는잘알려지지않은분자생물학적검출기법이다. 분자생물학적증폭으로는중합효소연쇄반응법 (PCR, polymerase chain reaction) 이가장많이알려져있으며분자생물학의발전을주도한방법이기도하다. 그러나중합효소연쇄반응법은값비싼증폭장비, 실험자의방법이해및숙련도, 전기영동장비와유해시약등의사용등을수반함으로인하여국내식품업계의품질관리용으로는효율적이지못하다. 그러나등온증폭법은기존의전용장비없이비교적간단하게실험을진행할수있다. 등온증폭법은증폭산물이루프 (loop) 형태를띠어루프매게등온증폭법 (LAMP, loop-mediated isothermal amplification) 이라고한다. LAMP의가장큰특징은등온에서유전자의증폭이이루어진다는점으로, 온도의구배가필요한일반 PCR 법에비하여등온조건은몇가지이점을가지고있다. 먼저온도조절이필요없기때문에상대적으로반응시간이짧아진다. 따라서좀더빠른시간내에유전자증폭을가능하게한다. 또한온도변화에따른 DNA손실및손상이없기때문에증폭효율이매우높고, 등온조건에서의증폭은 LAMP가다른검출방법들과달리현장성을가질수있다는장점이있다. 일정한온도만유지하면되기때문에고가의장비가필요없이항온수조등간단한장비만을가지고도반응이가능하다. 따라서 LAMP를이용한다면굳이실험실내에서의환경이아니더라도현장에서특정유전자의검출이가능해진다. 표 1은 Conventional PCR, Real-time PCR, 그리고 LAMP 방법의장단점을비교설명한표이다. (Rev Med Virol Nov-Dec 18(6) ) - 2 -

6 표 1. 여러유전자증폭법의장점과단점비교 일반유전자증폭법실시간유전자증폭법루프매개유전자증폭법 장점 살아있는샘플의없어도분리및진단가능 조기확증진단 널리사용되는분자진단형식 유전자증폭동안검출됨 발생하는증폭에대한실시간모니터링 양적바이러스를검출하는데용이 폐쇄튜브작업에의해서낮은오염 형광화학에의한민감도증가 많은양의처리가가능 서열증폭기가필요하지않고등온필드기반유전자증폭 수조및가열블록으로증폭가능 실시간일뿐만아니라정량적 높은증폭효율및민감도 육안시각적모니터링이가능 정성분석 단점 종점검출만가능 증폭후오염이잘됨 낮은유전자복사본과민감도 소요시간이길다 (3-4h) 서열증폭기가필요하고젤분석시스템이필요하다 고가의검출장비및소모품 형광프로브가필요 복잡한프라이머디자인 (3쌍의프라이머 ) HPLC 등급순도의 2개의긴프라이머 일부국가에서제한된시약및장비 1. 국내 외진단경향 ( 가 ) 국내결핵진단관련경향 결핵의진단에대하여최근여러가지지침이발표되었음. ( 대한결핵및호흡기학회및질병관리본부의결핵관리지침 ) 결핵진단에있어항산균도말검사와흉부 X-선촬영을제일우선순위로진단을수행함 확진을위하여가검물을이용하여결핵균배양을수행함 (4-8 주의기간소요 ) 최근에는확진까지의기간을단축하기위하여단백질분석및유전자분석과같은분자적인방법을도입 환자전혈에서결핵을진단할수있는인터페론감마분비검사 (Interferon-γ releasing assay) 가검물에서세균유전자추출후유전자증폭에의해서확인하는결핵유전자증폭검사를수행 - 3 -

7 표 2. 국내결핵진단방법 진단방법 특 징 검채 진단시간 민감도 X-선촬영 예측진단으로사용됨 5분 항산균도말검사 결핵균과비결핵균구분이어려움 객담 1시간 30% 항산성염색 결핵균과비결핵균구분이어려움 객담 1-2시간 40% 인터페론검사 보조진단으로사용됨 혈액 1-2시간 배양검사 확진용으로이용되며, 시간이오래걸림 객담 4-8주 >95% 핵산증폭검사 민감도는높지만특이도는진단과정에 따라변함. 보조진단으로평가됨 객담 3-4 시간 50~95% ( 나 ) 국내인플루엔자진단경향 국내에서인플루엔자바이러스에대한진단은신속항원검사를이용한검사를대부분수행 3차병원에서면역형광법및핵산증폭검사를이용한진단을수행 표 3. 국내인플루엔자진단방법 진단방법 특징 진단시간 민감도 신속항원검사 바이러스항원검출 30분 10-70% 면역형광법 바이러스항원검출 2-4시간 47-93% 바이러스배양방법 바이러스분리 2-10일 핵산증폭검사 바이러스 RNA 검출 2-4시간 86~100% 표 4. 국내인플루엔자 A/B 항원검출용신속진단키트 ( 식약처허가품목 ) 품 명 회사명 구분 허가일자 바이오라인인플루엔자항원 ( 주 ) 에스디 국내제조 2005/03 나노사인인플루엔자 A/B 항원 ( 주 ) 바이오랜드 국내제조 2007/03 바이오트레이서인플루엔자에이앤비 ( 주 ) 바이오포커스 국내제조 2008/08 디렉티젠이지플루에이앤비 ( 주 ) 벡톤디킨슨코리아 수입 2006/10 바이넥스나우인플루엔자 A&B ( 주 ) 메듀나우 수입 2007/06 인플루 -에이 + 비레스피 -스트립 ( 주 ) 아산제약 수입 2008/05 현재국내유통되고있는진단키트는기존인플루엔자에대한민감도는 80-90% 내외이나신종인플루엔자에대한민감도는평가되지않음 국내유통되는진단키트는신종인플루엔자감염을선택적으로진단할수없음 - 4 -

8 ( 다 ) 국외결핵진단관련동향 세계보건기구를중심으로미국, 영국, 유럽에서도결핵의진단과치료에관한진료지침을발표 세계보건기구및미국질병관리본부에서결핵진단지침은우리나라의진단과정과비슷하지만진단기술에대해서좀더깊게서술되어있음 국제보건기구에서도새로운분자적진단방식에대한장단점을평가한후빠른진단을위해서장비와키트에대해서소개하고있음. 미국질병관리본부에서추천하는결핵진단보조로는튜버큘린피부검사, 인터페론분비검사및결핵항체진단키트를사용하고있음. 최근에는결핵유전자를이용한증폭검사의민감도를높여보조적인진단이아닌확진을위한진단방법으로사용하려하고있으며, 미국질병관리본부에서진단목적으로추천하고있는상황 ( 라 ) 국외인플루엔자진단경향 미국질병관리통제본부가기존인플루엔자신속진단키트가신종인플루엔자에대해 10-70% 의민감도를보여, 진단결과음성이나오더라도신종인플루엔자의감염을배제할수없다고발표 또한각각의제조사별진단키트에대한특징을발표함 FDA에서인플루엔자바이러스진단에대한가이드라인및특징에대해서도발표 항원을이용한진단보다빠르고민감도가높은유전자를이용한진단을추천 - 5 -

9 표 5. 유전자를이용한인플루엔자진단키트 품명회사명진단타입검체진단시간 CDC human influenza virus Real-time RT-PCR Diagnostic A/B typing kit CDC human influenza virus Real-time RT-PCR Diagnostic A typing kit CDC human influenza virus Real-time RT-PCR Diagnostic A/H5 typing kit CDC human influenza virus Real-time RT-PCR Diagnostic B Lineage Genotyping assay 미국질병관리본부 A 및 B 콧물 4 시간 미국질병관리본부 A 콧물 4 시간 미국질병관리본부 A 및 B 콧물 4 시간 미국질병관리본부 A 및 B 콧물 4 시간 Cepheid Xpert Flu assay Cepheid A 및 B 콧물 1 시간 Cepheid Xpert Flu/RSV XC assay Cepheid A 및 B 콧물 1 시간 esensor Respiratory Viral Panel Clinical Micro Sensors, Inc. A 및 B 콧물 8 시간 ( 마 ) 최근고위험군질병에대한진단경향 기존고위험군질병진단에대한진단시간이긴것이단점이어서진단시간단축및정확도와민감도가높은진단기술에대한연구가활발히이루어짐. 최근유전자를이용한결핵및인플루엔자진단개발에대한연구가이루어짐. 표 6. 결핵진단최근연구경향 저널정보연구내용연구결과및성과 J Korean Med Assoc 57(1), 27-33, 2014 J Micro Method 109, 74-78, 2015 Veterinary Journal 204, , 2015 International Medicine 54(11), , 2015 다제내성결핵의진단과치료결핵의빠르고정확한진단을위한실시간형광등온증폭법의개발. 결핵진단을위한빠른진단방법의조사결핵진단을위한등온증폭법 : 증례보고 약제내성결핵세균이갖고있는내성유전자를 PCR을이용하여검출형광을이용한실시간등온증폭법이기존진단법보다신속하고민감도및특이도가높게나타남. 유전자증폭기를이용한방법 100% 특이도에 80% 의민감도를보여기존방법보다빠르고정확한결핵진단을할수있음. 기존 PCR법은폐외결핵진단에어려움이있지만등온증폭법은신속하고민감하게진단할수있음

10 표 7. 인플루엔자진단을위한최근연구경향 저널정보연구내용연구결과및성과 BMC Vet Res 10(213),1-8, 2014 J Clin Microbiol 52(9), , 2014 Virology journal 12(69), 1-6, 2015 동온증폭법을이용한바이러스의신속하고민감한검출인플루엔자 A 및 B형바이러스검출을위한등온증폭법조사 multiplex 실시간유전자증폭법을이용한인플루엔자 A 바이러스검출 등온증폭법은바이러스검출에있어서민감도및특이도가 100% 이며신속하게바이러스를감별할수있음등온증폭법인 Alere i test법은빠르고정확한인플루엔자 A 및 B 바이러스를감별할수있음. multiplex 실시간유전자증폭법을이용한인플루엔자 A 바이러스검출이기존 PCR방법보다신속하고특이도가높았음. 2. LAMP 방법의원리및특징 ( 가 ) LAMP 반응원리 루프매게등온증폭법 (Loop-mediated isothermal amplification assay, LAMP) 은기존의 PCR법과유사하지만기존의 PCR법이변성 (denaturation), 접합 (annealing), 신장 (extension) 등의세가지단계를거치면서온도의변화를주어야하는반면, LAMP를포함한등온증폭법은일정한온도에서접합및신장이가능하다. 검사하는균마다다르지만증폭반응을위하여등온조건으로약 60 내지 65 정도범위내에서한가지온도가사용되며기존 PCR법에서는 1쌍의 primer를사용하지만 LAMP법은 2쌍또는 3쌍의프라이머를사용하여특이도를훨씬높였다. 증폭산물의양역시 PCR법에비해약 1,000배정도높다. LAMP 반응에는기존의 PCR에서사용되는 Taq DNA polymerase 대신 Geobacillus stearothermophilus에서분리한 Bst DNA polymerase가사용된다. Bst DNA polymerase large fragmen는 5ʹ-3ʹ polymerase활성을보유하고있으나 5ʹ-3ʹ exonuclease 활성을보유하고있지않다. Bst DNA polymerase large fragment 는 strand displacement 활성이높아서프라이머에의하여시작된새로운 DNA의중합반응동안에세번째 DNA strand를대체하여새롭게생성된단일 DNA strand가그다음단계의 primer접합과 DNA 중합반응에이용될수있도록한다. Bst DNA polymerase 는매우높은활성을갖고있기때문에짧은시간내에상당량의분자량이큰 DNA 를합성할수있다. 이 Bst DNA polymerase의중합반응은약 60 내지 65 에서가장잘일어나므로한가지온도조건하에서도대상 DNA를대량으로증폭할수있으므로 LAMP 방법에있어서주요한핵심요소로이용된다

11 ( 나 ) LAMP 반응기작 (4개의 primer에의한 Dumbell structure와 Stem-loop형증폭 ) Forward internal primer (FIP), F3 primer와 backward internal primer (BIP), B3 primer가 target으로하는 DNA 단편의왼쪽과오른쪽방향에접합할수있다. 그러므로 forward 방향으로 3 부분 (FIP에의한 2 부분과 F3에의한 1 부분 ) 과 backward 방향으로 3 부분 (BIP에의한 2 부분과 B3에의한 1부분 ) 에각각접합할수있다. 그러므로결과적으로기존 PCR방법에서사용되는 forward primer에의한 1 부분접합과 backward primer에의한 1 부분접합하는방법보다접합부분이더많아서 DNA 중합반응시에선택성을더높일수있다. 그리고증폭과정에서생성된아령모양 DNA구조에 FIP와 BIP가양쪽방향에서접합하여증폭이계속적으로이루어지면 Stem-loop DNA 구조를이루면서증폭이계속적으로이루어진다. Loop primer는 LAMP 과정중에만들어지는 DNA의양을더욱대량으로증폭시키기위하여선택적으로반응에첨가되어사용될수있다. LAMP 반응과정동안에 template DNA 분자로부터 Bst DNA polymerase에의하여 strand displacement 및 polymerization 반응을통하여생성되는 DNA 산물이형성되는 mechanism을 step-by-step으로아래에그림을통하여설명. 단계 1 처음이중가닥 DNA는 65 온도에서동적평형환경에있다. LAMP primer중하나는이중가닥의목표 DNA에붙을수있다. 그때, LAMP 방법으로단일가닥 DNA로만들며, 연장시키는 DNA 중합효소에이용해서증폭 (PCR과다른점 ). 이중가닥 DNA를단일가닥으로해체되는데열변성이필요다. 다음증폭메커니즘은단일가닥으로된주형 DNA에 forward inner primer(fip) 가붙는것에서시작된다. 단계 2 단일가닥으로해체하는 DNA 중합효소의활성을및합성능을통해서 F2 부분에서주형 DNA 의 3ʹ 에서 5ʹ 으로합성된다

12 단계 3 FIP 의바깥부분에서 F3 primer 가 F3c 부분에붙고이중가닥 DNA 가해체되면서주형 DNA 가합성된다. 단계 4 F3 primer 와주형 DNA 로부터합성된이중가닥 DNA 가형성된다. 단계 5 F3 primer로부터합성된상보 DNA로인하여, FIP가부착된상보DNA는단일가닥으로존재한다. 이때단일가닥으로존재하는상보DNA는 F! 과 F1c 부분에의해서 stem-loop 구조를형성한다. 단계 6 단계 5에서형성된단일가닥의상보 DNA는 backward inner primer(bip) 를시작으로 DNA가합성되고 B3 primer가연이어서 DNA가합성된다. BIP가붙은 DNA는 3ʹ에서시작하여합성된다. 이로인하여 loop 구조가직선구조 DNA로형성되고다른 DNA는 BIP에의해서다시 loop 구조를형성한다

13 단계 7 위의단계를거치면서이중가닥 DNA 가합성이되며, loop 구조상보 DNA 또한양쪽모두 loop 구조를형성한다. 단계 8 양쪽 loop 구조를갖는 DNA 또한 FIP 와 BIP 에의해서계속증폭된다

14 ( 다 ) LAMP 에사용되는염료 LAMP 반응시사용되는대표적으로사용되는염료는다음과같다. 이름분자구조특징 Hydroxylnaphtol blue 발색반응에사용됨 금속이온을만나면 파란색을나타냄 Calcein 형광반응에사용됨 Mg 과부착하여 녹색형광을나타냄 SYBR green II 형광반응에사용됨이중가닥 DNA 사이에부탁하여녹색형광을나타냄 Ethidium bromide 형광반응에사용됨이중가닥 DNA 사이에부탁하여주황형광을나타냄

15 ( 라 ) LAMP 반응결과의판독일반적으로 end-point analysis PCR반응의결과는 PCR반응산물들을전기영동상에서분리한후분리된 DNA band의강도및크기를통해서원하는 PCR반응결과를얻었는지확인한다. LAMP반응의결과는다음과같이대표적인 2가지방법으로확인할수있다. 첫째는 fluorescence 시약을첨가하지않은경우로서, 반응액에있는 calcein은 Mn 2+ 이온과강한결합을하고있으며증폭이진행됨에따라생성된 pyrophosphate는 Mn 2+ 또는 Mg 2+ 과결합하여흰색침전물을형성한다. 이때흰색침전물이충분히생성되면육안으로관찰하거나혹은 LAMP전용혼탁도계를사용하여 real-time으로탁도를측정하여 LAMP반응정도를파악한다. 둘째는형광염료또는발색염료를첨가한경우로서, 형광물질인 calcein 또는 hydroxynaphtol blue은 Mn 2+ 과결합할경우각각형광이나오지않거나, 보라색을띤다. 증폭반응이진행됨에따라 dntp에서 pyrophosphate가생성된다. Mn 2+ 은 calcein보다 pyrophosphate와의결합이훨씬강하며, 반응이진행됨에따라 Mn-pyrophosphate 결합물이생기고 Mg-Calcein 또는 Mg-hydroxylnaphtol blue는형광세기의증가또는파란색을띠게된다. 이때형광강도를 UV-lamp하에육안으로관찰하거나, 보라색의진하기에따라서 LAMP 반응정도를파악한다. 또한형광물질이직접이중가닥 DNA 사이에붙어서형광을나타내는 SYBR green 이나 ethidium bromide 를이용하는방법도있다

16 2. 용어정의 간섭 (Interference) 분석물질의농도나강도가명백함에도검출시약이나신호자체에비특이적으로반응하는물질의존재로인해일어나는인위적인증가나감소 검출시스템의비특이성에서기인하기도하고, 반응지시약반응의억제, 분석대상 ( 효소 ) 의억제, 또는검체에의해발생하는바이어스의다른원인에기인하기도한다. 경계사이클 (Threshold cycle, Ct) 배경값수준의형광신호를벗어난사이클수를의미하는것 정량 PCR에서검출반응은형광신호가축적되는것을인식하는방식으로이루어진다. 경계사이클수는초기검체량과반비례의관계를가지고있다. 교차반응 (Cross-reactivity) 항원이외에공유되거나유사한또는동일한항원결정기를가진항원과항체와특 이적으로반응하는현상 기질 (Matrix) 분석물질을제외한물질시스템의모든구성성분 보정물질, 표준물질, 검체의기질은평형을최대화하고비특이반응정도가보정과검체검사간에동등하다는것을보증하기위해동등해야한다. 바이어스 (Bias) 검사결과의예상치와허용된기준치사이의차이 변성 (Denaturation) 고유의구조또는고분자구성의소실로이중가닥 DNA나 RNA의이차구조가거의없는단일가닥으로의전환 a) 변성은가열, ph 의증가또는포름아미드, 요소등의첨가에의해일어난다. b) 변성된핵산분자는프라이머나프로브와의부합을위해사용될수있다. 보정물질 (Calibration material / Calibrator)

17 측정과정을보정하기위해또는검체의반응을비교하기위해서사용되는알려진정량적 / 정성적특성 ( 예 : 농도, 활성도, 강도, 반응성 ) 을갖는물질이나장치 a) 보정물질에서분석물질양은그의제조과정에서확인된한계 (limit) 내에있으며, 분석법의반응과측정되는특성과의관계를설정하는데사용될수있다. b) 보정물질은국가또는국제표준물질이나참고물질에소급성을가져야한다. c) 분석물질의다른양을갖는보정물질은보정곡선을설정하는데사용될수있다. d) 일차 와 이차표준 이란용어는보정물질을지칭하는용어로 WHO와 ISO 에서사용되고있다. 분석물질 (Analyte) 검사실이수행하는검사의물질또는구성요소 비특이도 (Nonspecificity) 분석하려는물질외에다른물질과항원이반응하는정도 비특이도는보통분석물질이아닌물질에결합하고, 반응하는항체, 효소, ionophore, 시약에의해발생한다. 신호 / 측정신호 (Signal / Measurement signal) 측정량으로표현되고기능적으로연관된수량 역가 (Titer) 주어진시스템에서정해진결과를내는데필요한희석율에상당하는수치또는방사면역측정법에서주어진조건하에방사표지분석물질의특정백분율이결합하는항체의희석 역가는주로분석물질농도에비례한다. 위양성결과 (False-positive result / False positive, FP) 질병이나증상이없는상태에서이를시사하는양성검사결과 위음성결과 (False-negative result / False negative, FN) 질병이나증상이없는상태에서이를시사하는음성검사결과

18 임상적민감도 (Clinically Sensitivity) 실제로질병이있는대상에서검사를통해 질병이있다고 진단하는확률을의미 TP( 진양성 ), TN( 진음성 ), FP( 위양성 ), FN( 위음성 ) 민감도 (%) = 100 TP / (TP+FN) 임상적특이도 (Clinically specificity) 특정질환을가지고있지않은사람들중검사결과가음성으로나오는비율 TP( 진양성 ), TN( 진음성 ), FP( 위양성 ), FN( 위음성 ) 임상특이도 (%) = 100 TN / (TN+FP) 정밀도 (Precision) 규정된조건하에서얻은별개의검사결과간의일치도 (ISO ) 규정된조건하에서얻어진독립적인검사결과들가운데일치도의근사성 (ISO ). 정밀도는전형적으로숫자값으로표현되지않지만비정밀도 ( 반복측정값결과들의표준편차또는변이계수 ) 라는용어로정량적으로표현된다. 정밀도는무작위오차의분포에만의존하며, 참값또는특정값과는관련이없다.(ISO ) 정성분석 (Qualitative assay) 분석물질의농도가아니라단지분석물질의있고없음을알려주는검사시스템 양성검사결과는검사신호가분석역치를넘는것만을의미하고양성 cut-off는진단민감도와특이도의인위적조합에의해구해진다. 양성검사신호는대상군혈액내에검사된알레르기항원특이 IgE 항체의존재와관련되어야한다. 정확도 (Accuracy) 측정치와참값사이의일치평가 중합효소연쇄반응 (Polymerase chain reaction, PCR) DNA 또는 RNA 분절을다량으로복제하는방법 가장흔히사용되는 DNA 증폭방법은올리고뉴클레오티드프라이머및 DNA중합효소를사용하여가열, 냉각과정을반복하여 DNA를복제한다

19 등온중합효소연쇄반응 (Isothermoal PCR) Bst polymerase를이용하여특정일정한온도에서 DNA 또는 RNA 분절을다량으로복제하는방법 가열, 냉각과정이필요없이 Bst polymerase가 60 근처에서 DNA를단일가닥으로해체하며, 올리고뉴클레오티드프라이머에의해서 DNA를증폭시킴. 참고물질 / 참고제작 (Reference material / Reference preparation, RM) 1) 하나또는그이상의특성값이충분히균일하고기구의보정, 측정방법의평가또는물질에값을할당하기위해서사용되는물질 2) 인증참고물질 (CRM) 기술적으로입증된과정에의해공인되었고인증서나다른인증기관에의해발행된서류가있거나추적가능한하나또는그이상의값을갖는참고물질 a) 인증참고물질은 인증서가있는참고물질로서하나또는그이상의특성값이절차에따라공인되며, 그절차는특성값이표현되는단위의정확한구현에대한추적을할수있고, 그것에대해각공인된값은신뢰의명시된수준에서의불확실성과함께한다. 라고정의한다. b) 표준참고물질 (SRM) 은인증참고물질 (CRM) 의한이름으로서과거에국립표준원 (NBS) 으로알려졌던미국정부기관으로, 국립표준기술연구소 (NIST) 에의해인증되고배포되는인증참고물질의상품명이다. 특이도 / 분석특이도 (Specificity / Analytical specificity) 정량검사에서측정하고자하는물질만측정되고검체내다른물질은측정되지않는 분석법의능력 효능, 역가, 잠재력 (Potency) 정의된방법에서주어진항체농도와기질항원에대한결합성을나타내는항체의 특성또는항원농도를나타내는항원용액의특성 회복 - 회수 (Recovery) 검체에동일물질의알고있는양을첨가한후분석물질농도의증가를확인 분석물질이첨가되지않은혈청검체와첨가된혈청검체로분석물질의증가가

20 첨가된양과동등한지를분석한다. 첨가된물질의양을확인하는정확도는회수실험에필수적이며 100% 회수가이상적이다. 회수실험의다른형태는희석-회수분석이다

21 3. 신청서기재항목및기술문서제출자료 허가 인증신청서 명칭 ( 제품명, 품목명, 모델명 ) 분류번호 ( 등급 ) 모양및구조 원재료 제조방법 사용목적 사용방법 사용시주의사항 포장단위 저장방법및사용기간 시험규격 제조원 ( 수입또는제조공정전부위탁의경우 ) 허가 ( 인증 ) 조건 비고 기술문서에관한자료 개발경위, 측정원리 방법및국내외사용현황에관한자료 원재료및제조방법에관한자료 사용목적에관한자료 저장방법과사용기간또는유효기간에관한자료 성능시험에관한자료 체외진단용의료기기의취급자안전에관한자료 이미허가 인증받은제품과비교한자료

22 3. 허가 인증신청서기재항목 명칭 1. 제조 ( 수입 ) 업소명 제품명, 품목명, 모델명을각각기재한다. 가. 제품명을기재하는경우에는 제조 ( 수입 ) 업소명 제품명, 품목명, 모델명 을각각기재한다. 이때, 제조 ( 수입 ) 업소명은생략할수있고제품명은두개이상인정한다. 나. 제품명을기재하지아니하는경우에는 제조 ( 수입 ) 업소명 품목명, 모델명 을각각기재한다. 2. 제품명은이미허가 인증 신고를받거나받았었던의료기기의제품명과동일하여서는아니된다. 다만, 다음의어느하나에해당하는경우에는그러하지아니한다. 가. 허가 인증 신고가취소된의료기기와사용목적, 작용원리및원재료등이동일한의료기기로서취소된날로부터 1년이지난경우나. 동일한제조 ( 수입 ) 업자가허가 인증 신고취하후동일한제품을허가 인증 신고하는경우다. 서로다른수입업자가제조원이같은동일한제품을수입하는경우에수입업소명을병기하여구분하는경우 단, 기허가 인증제품과사용목적이유사하여허가받은제품의상품명에문자, 단어, 숫자등을붙여상품명을기재하는것은동일제조사제품에한하여가능함

23 [ 명칭예시 ] 오송진단오송결핵 IVD 고위험성감염체유전자검사시약 Fast MTB-LAMP 제조 ( 수입 ) 업소명제품명품목명모델명 오송진단고위험성감염체유전자검사시약 Fast H1N1-LAMP 제조 ( 수입 ) 업소명품목명모델명 3. 분류번호 ( 등급 ) 의료기기품목의소분류및등급 에따라해당제품의품목분류번호와등급을 기재한다. [ 별첨기재시의예 ] < 제품명 > 1. 품목명 : 고위험성감염체유전자검사시약 2. 모델명 : Fast MTB-LAMP 3. 품목분류번호 : D 등급 : 3등급

24 모양및구조 1. 모양및구조-작용원리해당제품을개발하기위하여적용한원리등을포함하여기재한다. 필요한경우측정항목에대한임상적배경을포함한다. 가. 임상의의 : 해당체외진단용시약의측정항목에대한진단적임상배경등을기재한다. 나. 측정원리 : 해당체외진단용시약의측정원리를기재한다. 예시 1: 본제품은일반적인호흡기감염의검체준비과정을거쳐, RNA 를역 전사후, 등온기기를이용한핵산증폭및발색반응과정을통해호흡기검체의 Human influenza virus Type A (H1N1) RNA 를검사하는시약이다. 본검사는 Internal Control 을이용하여각각의검체에대한검사효율을감시할수있으며, Bst 효소와 3쌍의프라이머를이용하여밀폐된튜브에서검체를증폭하고육안으로도확인가능하여증폭산물에의한오염가능성을줄일수있다. 예시2: 본제품은일반적인호흡기감염의검체준비과정을거쳐, 등온기기를이용한핵산증폭및발색반응과정을통해호흡기검체의 Mycobacterium tuberculosis DNA를검사하는시약이다. 본검사는 Internal Control 을이용하여각각의검체에대한검사효율을감시할수있으며, Bst 효소와 3쌍의프라이머를이용하여밀폐된튜브에서검체를증폭하고육안으로도확인가능하여증폭산물에의한오염가능성을줄일수있다. 2. 모양및구조-외형만일체외진단용의료기기 ( 시약 ) 과별도의구성품을포함하고자할경우, 별도판매구성품에대하여추가로외관사진및설명 ( 성상등 ) 을제시한다. 가. 외관설명 : 고형의구성제품에대해서는모양 구조 중량등을, 액상또는분말의시약에대해서는색, 성상, 액성, 냄새등을기재한다. 나. 외형사진 : 제품을육안으로식별할수있도록제품의전제및구성하는시약을확인할수있는컬러사진을첨부한다

25 예시본제품은체외진단용의료기기 ( 시약 )(PCR master-mix, H1N1 oligonucleotide, RT-Premix regents, H1N1 positive control) 와구성품 (RNase/DNase free tube) 로구성된다. 1) 체외진단용의료기기 ( 시약 )(Fast MTB-LAMP) 번호명칭세부구성외관상특징 1 H1N1 oligonucleotide 2 RT Pre-mix 3 PCR Master-mix 3쌍의프라이머혼합용액및버퍼로구성인플루엔자역전사효소및 dntp로구성 DNA 증폭을위한효소, dntp 및발색시약으로구성 무색투명한액상시약 무색투명한액상시약 투명내지약한녹색액상시약 4 H1N1positive control H1N1 복제 DNA 무색투명한액상시약 2) 구성품 : RNase/DNase free tube : 0.5ml 투명한플라스틱튜브 ( 총 50 개 )

26 모델명 : Fast H1N1-LAMP 본제품은체외진단용의료기기 ( 시약 )(LAMP master-mix, MTB oligonucleotide, MTB positive control) 와구성품 (RNase/DNase free tube) 로구성된다. 1) 체외진단용의료기기 ( 시약 )(Fast MTB-LAMP) 번호명칭세부구성외관상특징 1 MTB oligonucleotide 2 LAMP Master-mix 3쌍의프라이머혼합용액및버퍼로구성 DNA 증폭을위한효소, dntp 및발색시약으로구성 무색투명한액상시약 투명내지약한녹색액상시약 3 H1N1positive control H1N1 복제 DNA 무색투명한액상시약 2) 구성품 : RNase/DNase free tube : 0.5ml 투명한플라스틱튜브 ( 총 50 개 ) 그림 1. 외관사진작성의예

27 원재료 1. 다음의표를사용하여구성시약의명칭, 배합목적, 성분명, 분량, 규격등을포함하여작성한다. - 별도포장판매구성품이있을경우, 모양및구조-외형과같이별도의표를사용하여원재료를기재 - 다중성분이포함된구성품은구성품별성분을제시표 9. 원재료기재예시 일련 번호 명칭 배합목적 원재료명 또는성분명 분량규격비고 가. 명칭 해당구성제품의일반명칭을기재한다. 보조시약을포함하여키트또는세트로되어있는경우에는구성시약별로일반명칭을기재한다. 두세트이상이함께사용되어하나의사용목적을달성하는경우에는세트별로구분하여기재한다. 나. 배합목적체외진단용의료기기 ( 시약 ) 의특성에맞게각성분의배합하는목적을기재한다. 다. 원재료명및성분명각구성시약의일반명또는화학명을기재한다. 라. 분량각성분의분량 ( 역가, 소요량등 ) 및단위 (ml, mg, v/v, w/v, w/w 등 ) 기재하고범위를설정할수있다. 주성분 ( 중합효소, 역전사효소, 프라이머및프로브등 ) 의분량은농도와편차로표시하되, 주성분이외의성분의경우 적량 으로표시가능하다. * 특히, 중합효소의경우, 활성도 (u/λ 등 ) 를기재하고단위의정의도제시한다. 마. 규격규격란에는원재료에대한규격이있는경우당해규격 (KP, USP 등 ) 을기재하고, 규격이없는경우자사규격등을기재한다. LAMP 프리믹스, 프라이머, 프로브등은 별도규격 으로작성한다. 바. 비고

28 비고란에는각구성시약의총량및수량등을기재한다. 표 10. 원자재작성의예 일련 번호 명칭배합목적원재료분량규격비고 1 H1N1 oligonucleotide 주성분 보조성분 F primer mix R primer mix 2 pmol/ul 5 pmol/ul 별도규격 TE buffer (1 M Tris-HCl 자사적량 ph8.0, 0.1M EDTA)) 규격 500ul /vial, 1 개 2 RT Pre-mix 보조성분 0.2 mm dntps 적량 주성분 random primer 2 pmol/ul 주성분 Reverse transcriptase 2 U/ul 보조성분 TE buffer (1 M Tris-HCl ph8.0, 0.1M EDTA)) 적량 자사규격 500ul /vial, 2개 보조성분 200mM Tris-HCl(pH8.8) 적량 3 LAMP Master-mix 보조성분 1 mm dntps 적량 주성분 Bst polymerase 2 U/ul 주성분 xx dye 2.5 pg/ul 보조성분 25 mm MgCl2 적량 자사규격 500ul /vial, 2개 보조성분 500mM KCl 적량 4 H1N1 Positive control 대조물질 influenza viruse DNA plamid 2.5 pg/ul 보조성분 TE buffer (1 M Tris-HCl ph8.0, 0.1 M EDTA)) 적량 자사규격 360ul /vial, 1개 표 11. 주성분의별도규격작성의예 구성성분명명칭염기서열타겟유전자부위분자량 (Dalton) 분량 프라이머 F mix 프라이머 R mix FA 30mer AAA gene FB 12mer BBB gene FC 11mer CCC gene RA 31mer AAA gene RB 13mer BBB gene RC 11mer CCC gene pmol/ul 5 pmol/ul

29 제조방법 1. 제조원의제조방법에따른다. 라고기재한다. 단, 다음각호에해당하는경우 에는해당사항을추가하여기재한다. 사용방법 1. 사용목적은검사대상, 검체종류, 검사항목, 측정원리및결과판정방법 ( 정성또는정량등 ) 등을구체적으로기재한다. 예시 - 결핵의심환자의객담에서결핵을루프-매개등온증폭법으로정성하여결핵감염진단에도움을주는체외진단용의료기기 - 인플루엔자의심환자의타액에서인플루엔자 A/B를역전사후루프-매개등온증폭법으로정성하여인플루엔자 A형및 B형의감염진단에도움을주는체외진단용의료기기 - 근거가불명확하거나모호하고광범위한의미의표현을사용하면안되며, 중복되거나지나치게강조한표현, 오해또는남용의우려가있는표현등을사용하면안된다. - 하나의시약이두개이상의사용목적및성능을갖는경우, 각각의사용목적과성능을모두기재한다. 가. 검사대상 : 결핵또는인플루엔자감염의심환자나. 검체종류 : 해당제품의적용이가능한검체의종류를기술한다. 사람의혈청, 혈장, 전혈 ( 정맥, 모세관 ), 타액및기타체액등을포함한다. 1) 검체의유형을필요에따라개별검체또는혼주검체로분류하여작성할수있다. 혼주검체의경우혼주할수있는검체의수를기술한다. 다. 검사항목 1) 검출하고자하는바이러스의종류및유전자형 (genotype), 유전자아형 (subtype), 혈청형 (serotype) 을분류하여기재한다. 2) 검출대상이되는물질 ( 해당바이러스의 DNA, RNA 등 ) 을기재한다. 라. 측정원리 1) 측정에사용된검사원리를명시한다

30 예시 : 루프 - 매개등온증폭법 마. 결과판정방법 ( 정성또는정량등 ): 검사목적및해당제품의특성에따라정성, 정량, 반정량검사용등을명확하게기재한다. 2. 성능가. 근거자료를바탕으로사용설명서에수치적으로제시된성능기재해당제품의특성에맞는성능을기재하되, 추상적이고불명확한성능배제나. 사용설명서에제시된성능이없거나사용설명서가제작전인경우, 제품의특성에맞는성능을제시 표 12. 성능작성의예 성능항목내용 검증된방법 진단적민감도와특이도 양성 음성 양성진양성 (18) 위양성 (2) 음성위음성 (3) 진음성 (17) 합계 진양성 + 위음성 (21) 위양성 + 진음성 (19) 합계 진양성 + 위양성 (20) 위음성 + 진음성 (20) 특이도 / 민감도분석적특이도 - 민감도계산 = 100 진양성 진양성 위음성 - 특이도계산 = 100 진음성 위양성 진음성 - 확립된양성퍼센트계산 ( 양성예측가치 ) = 100 진양성 진양성 위양성 - 확립된음성퍼센트계산 ( 음성예측가치 ) = 100 진음성 진음성 위음성 - 위의결과를토대로계산하여제품의특이도및민감도에대한수치를표시한다. - 특이도표시예시 결핵 ( 또는인플루엔자 ) 양성검체 XXX 를유전자발색진단시약으로검사하였을대, 모두양성의값을확인할수있었으며, 검체유전자는각각 XXX copies/ml 과 xxx copies/ml 일경우유전자발색시약 (XXXXXXXX 상품명또는시약명 ) 으로검를수행 하였을때양성을나타내었다. 검사결과에영향을미칠것으로예측되는다음과같은간섭물질이포함된검체를사 용하여 3 번이상반복검사한결과본제품은아래의물질의이하농도에서는간섭반 응을일으키지않는다. 헤모글로빈 : 1000 mg/dl, 빌리루빈 : 40 mg/dl, 단백질 : 150 mg/dl, 인지질 : 300 mg/dl

31 분석적민감도 검사결과에영향을미칠것으로예측되는간섭물질이포함된 75 개의양성검체를사 용하여 3 번이상반복검사한결과본제품은 74 개의검체에서양성판정을얻었다. 분 석적민감도는 99% 였다. 농도에따른검체시험및양성율 ( 인플루엔자, IU/ml) HI H1N % 100% 100% 100% 100% 81.4% 51.2% 33.1% 0% 농도에따른검체시험및양성율 ( 결핵, copies/ml) TB % 100% 100% 100% 82.6% 42.2% 19.7% 0% 0% 재현성 결핵 ( 또는인플루엔자 ) 검출검사를 intra-assay 및 inter-assay 방법으로재현성검사를수행하 였으며, 음성검체, 양성검체 (2 가지농도 ) 로 3 명의검사자에의해서 10 일간수행하였다. 평균 S/CO 값, SD 값, %CV 값이아래와같다 검체 평균 S/CO Intra-assay Inter-assay 표준편자 %CV 표준편자 %CV 음성검체 copies/ml의결핵 copies/ml의결핵 copies/ml의 H1N copies/ml의 H1N 잠재교차반응체가포함되었을때교차반응성에따른간섭은없었다. 잠재교차반응미생물 / 바이러스 교차반응성 Epstein Barr virus Herpes simplex type 1 Herpes simplex type 2 Cytomegalovirus Human Herpes virus 6 Varicella-Zoster virus Vaccinia virus Hman HBV Candida albicans Streptococcus pneumoniae Stphylococcus epdermidis Pseudominas aeruginosa

32 사용방법 1. 검체준비및저장방법, 검사전준비사항, 검사과정, 결과판정및정도관리등을아래와같이포함하여체외진단용시약을중심으로사용방법을기술한다. 가. 검체준비및저장방법 1) 검체대상및채취방법, 검체종류별사용가능한항응고제, 사용되는검체의종류별필요분량, 검체보관조건, 방법및사용기한, 냉동및해동된검체의사용가능성및제한, 검체전처리과정 ( 원심분리조건등 ) 에대하여기재한다. 나. 검사전준비사항시험전시약조제가필요한경우조제방법및조건, 검사에필요한기구및조건등을기재한다. 1) 적용되는체외진단기기의제조사및모델명을기재한다. 2) 검사키트의사용조건 ( 온도또는습도등 ) 을기재한다. 3) 필요한경우, 시약의성능과판정에영향을줄수있는기기및소프트웨어의회사명, 모델명등을기재 4) 필요한경우, 보정물질에대한설명및방법에대하여기재한다. 다. 검사과정 1) 시험방법이구분되어있는경우는각각을구분하여검사과정 ( 반응시간, 온도조건, 세척과정및건조조건등 ) 및결과판독과정 ( 파장, 판독시간, 방법등 ) 을상세하게기재한다. 라. 결과판정 1) 양성, 음성, 경계값 (equivocal), 미확정 (indeterminate), 무효 (invalid) 등의예측되는모든경우의시험결과를판정하는기준과해석을제시한다. 2) 경계값 (equivocal), 미확정 (indeterminate) 또는무효 (invalid) 결과를어떻게처리해야하는지에대한지침을제시한다. 3) 그대로보고하는지재검사가필요한지여부 4) 재검사는동일검체로하는지, 동일원검체를다시처리하는지, 재채취하는지여부 5) 처음의결과와재검결과를조합하여결과를판독하는경우의알고리즘을제시 환자검체의검사결과를판독하기전에확인해야할대조물질및보정결과확인절차에대해제시한다

33 정량검사의검출한계또는정량한계등에따른보고가능범위에대하여제시하고, 정성검사인경우, 정성값판정등의기준을제시한다. 예시 : 18개월미만의소아에서는인플루엔자 RNA가양성이라도생후 4주이후에채취한새로운검체로실시한이차바이러스검사를통해양성임을확인하여야한다. 마. 정도관리사용자가정도관리를할수있는방법을제시한다. 제공하는정도관리물질과그물질의목표값이있을경우, 제시된기준값에적합함을확인하는과정을제공하고, 정도관리결과가적합하지않을때제시할수있는대책을기술한다. 사용시주의사항 1. 다음의사항을포함하여기재한다. 가. 체외진단용으로사용해야함을명시한다. 나. 일반적인실험실안전지침및생물학적위험물질 ( 검체, 감염가능성물질및폐기물등 ) 취급시안전등의주의사항을기재한다. 다. 경고사항, 제품취급및보관상의주의, 적용상의주의, 결과판정상주의및제품폐기시주의등에관한사항을명시한다. - 구성시약중유해물질이포함될경우이에대한경고사항을기재한다. - 검체및키트취급및보관상의주의사항 ( 온도, 습도의영향등 ) 을명시한다. - 임상적용대상및미적용대상을포함하여적용상의주의사항및결과판정상주의사항을기재한다. - 검사에영향을미치는내용 ( 간섭및교차반응물질, 위양성및위음성도 ) 등을기재한다. - 사용한검체및키트의처리및폐기방법및주의사항을기재한다. - 일회용의경우재사용하지않도록주의사항을기재한다. 라. 다른의료기기와결합하여사용하는경우, 적절한조합에대한정보를제공한다

34 포장단위 체외진단용의료기기 ( 시약 ) 의포장단위는취급상용이한최소단위로정하여기재하며, 제조의경우 자사포장단위, 수입의경우는 제조원포장단위 로기재할수있다. 저장방법및사용기간 1. 저장방법은체외진단용의료기기 ( 시약 ) 의특성을고려하여안정성이보장될수있도록검증된자료에의한구체적인보관조건 ( 온도, 습도, 차광, 밀폐등 ), 사용기간 ( 유효기간 ) 등을병기하여야한다. 가. 키트또는세트의제품인경우, 구성품별로보관조건을기재하고, 사용기간 ( 유효기간 ) 이서로다른경우가장짧은기간으로기재한다. 나. 일회용체외진단용의료기기 ( 시약 ) 가아닐경우, 개봉후시약의저장방법 ( 온도, 습도, 차광, 밀폐, 보관용기등 ) 및사용기간 ( 유효기간 ) 등이포함되도록한다. 다. 시약의조제가필요할경우조제후보관조건및사용기간 ( 유효기간 ) 을기재한다. 표 13. 저장방법및사용기간작성의예 유효기간구성시약개봉여부보관조건 ( 제조일로부터 ) H1N1 oligonucleotide RT pre-mix LAMP master-mix H1N1 positive control 미개봉제조일로부터 12개월 -20 이하, 밀봉개봉개봉후 3개월미개봉제조일로부터 12개월실온 (4-30 ), 밀봉개봉개봉후 3개월조제후실온 (4-30 ) 조제후 12시간이내미개봉제조일로부터 12개월실온 (4-30 ), 밀봉개봉개봉후 2개월 미개봉 제조일로부터 12개월 개봉 -20 이하, 밀봉 개봉후 2개월 비고완제품완제품완제품완제품

35 시험규격 1. 시약의품질관리에적정을기할수있도록제품의특성에따라성능등을고려하여, 제조단위별로적용할수있는시험규격을명시한다. 2. 시험규격은제조사의품질관리시험자료에따라자사가설정한시험항목, 시험기준, 시험방법을기재한다. 가. 시험항목 1) 완제품의최종품질관리에따른성능시험을포함한다. 2) 분석적성능시험 ( 민감도, 특이도, 재현성등 ) 을포함하는것을권장하고, 그외자사가설정한시험항목을설정할수있다. 나. 시험기준 1) 시험결과의적부판정의기준이되는기준치의허용범위를명확히기재하여야하며, 시험결과가온도 습도등주위조건에영향을받는경우에는그조건을명시하여야한다. 다. 시험방법 1) 시험방법은순서에따라시험결과를정확히산출할수있도록구체적, 개조식으로기재한다. 2) 표준물질이사용된경우, 고, 중, 저역가를포함한각각최소 3개이상의표준물질을사용할것을권장하고해당표준물질명을기재한다. - 저농도표준물질인경우, 정량및정성검출한계를근거로하여설정한다. - 표준물질의농도는재현성, 직선성, 최소검출한계를고려하여설정한다. - 표준물질농도는가능하면임상적으로중요한농도여야한다

36 표 14. 최종품질관리에따른성능시험작성의예 시험항목시험기준시험방법 외관검사 민감도평가 튜브내이물질유무, 라벨인쇄상태, 구성품순서및누락여부등의이상여부를확인한다음성대조군 : 특정흡광도값이상으로올라가는지 noise 가없는지확인한다. 양성대조군 : 특정흡광도값이아래범위에포함되는지확인한다. 표적흡광도음성대조군 <0.040 양성대조군 >0.060 검체 : 제품에포함되어있는양성대조액 (MFDS 양성대조군 ) 과음성대조액 (RNase-free water) 을사용한다. 육안으로확인한다사용설명서의시험방법에따른다. 사용방법의검사과정에따라음성대조군 6회양성대조군 6회반복시험하여평균값을갖고평가한다. 제조원 1. 수입품의경우제조원의제조국, 제조사명및주소를기재한다. 2. 모든제조공정을위탁하여제조하는경우에는제조의뢰자와제조자의상호와주소를 모두기재한다. 다만, 제조자가외국회사일경우에는제조국을추가로기재한다. 예시 제조의뢰자 상호 : 오송의료 ( 주 ) 주소 : 충청북도청원군오송읍오송생명 2로 197 제조자 상호 : FDA 제조국 : 미국 주소 : new hampshire Ave, Silver Spring, MD 20993, USA

37 4. 기술문서심사를위한제출자료 1. 원칙가. 기술문서등의심사를받고자하는자는의료기기법시행규칙 [ 별지제8호서식 ] 에따라작성하여야한다. 나. 첨부자료등을식품의약품안전처장이정한전용프로그램으로작성된전자적기록매체 (CD USB 저장장치등 ) 와함께제출한다. 다. 해당제품의특성상첨부자료의일부가불필요한경우, 그사유를구체적으로기재하여야한다. 라. 외국의자료는주요사항을발췌한한글요약문및원문을첨부하여야하며, 필요한경우에한하여번역물을요구할수있다. 다만, 영어외의외국어자료는공증된전체번역문을첨부하여야한다. 마. 이미허가 인증받은제품과비교한본질적동등비교표를제출하여첨부하여야한다. 2. 시험자료의요건 ( 임상시험자료제외 ) 가. 인정범위 1) 식약처장이지정한시험검사기관에서발급한시험성적서 2) 해당의료기기에대하여경제협력기구 (OECD) 회원국에허가당시제출되어평가된시험에관한자료로서해당정부또는정부가허가업무를위임한등록기관이제출받아승인하였음을확인한자료또는이를공증한자료 3) 의료기기제조 수입및품질관리기준 또는이와동등이상의규격에따른제조사의품질관리시스템하에서실시된시험자료 4) 대학또는연구기관등국내 외의전문기관에서시험한것으로서해당전문기관의장이발급하고그내용 ( 전문기관의시험시설개요, 주요설비, 연구인력구성, 시험자의연구경력등을포함한다 ) 을검토하여타당하다고인정할수있는시험자료

38 나. 기재내용 1) 업체명및주소 2) 시험성적서일련번호및각페이지와전체페이지번호 3) 시험검사품의모델명, 제품명 ( 해당경우에한함 ) 4) 시험일자및시험성적서발급일자 5) 시험책임자의서명또는직인 6) 시험기준및시험방법단, 규격이없는경우이에대한설정사유 7) 시험검사품채취및방법에대한사항 ( 시험을위한별도전처리가필요한경우에한함 ) 8) 시험환경요인 ( 시험결과에영향을주는경우에한함 ) 다. 추가기재내용 ( 대학또는연구기관등국내외전문기관에서시험한자료의경우 ) 1) 시험시설개요 : 전문기관의명칭, 주소, 인증현황, 검사기능분야, 연구인력구성, 주요설비목록등이기재되어있어야함 2) 주요설비 : 시험검사에사용된장비명칭, 장비사양, 검교정기록서등에대한사항이기재되고관련증빙자료를함께제출하여야함 3) 연구인력구성 : 시험검사를실시한전문기관담당부서에속한연구인력들에대한정보가기재되어야함 4) 시험자의연구경력 : 시험검사를실시한시험자가해당검사를하기에적합한전공, 경력등을가지고있는지에대해기재하고, 해당전문기관에서규정한요건에적합한시험자가시험하였는지에대한자료를제출 라. 이미허가 인증받은제품과비교한자료 1) 제출되는 이미허가 인증받은제품과비교한자료 ( 의료기기의허가 신고 심사등에관한규정 [ 별지제5호서식 ]) 의체외진단용의료기기의본질적동등품목비교표 ) 를이용하여이미허가 인증받은사항과비교한다. 2) 의료기기의허가 신고 심사등에관한규정 [ 별표 8의2] 체외진단용의료기기의기술문서등제출자료의범위 판단표에따라제출자료가면제될수있다

39 개발경위, 측정원리 방법및국내 외사용현황에관한자료 1. 개발경위가. Mycobacterium tuberculosis 및그외의 mycobacteria와인플루엔자바이러스에의해발생된감염과관련된질병이나증후군의설명자료및개발배경이포함된논문, 문헌, 기초연구결과등의자료를제출한다. 나. 해당제품의적응증에준하여감염의진단방법, 환자의추적등을구분하여관련된설명자료를첨부한다. 다. 프라이머 프로브, 표적등을설정한방법과근거를제시한다. 2. 측정원리및방법가. 해당세균및바이러스 (Mycobacterium tuberculosis, human influenza virus type A, B) 의검출대상 (DNA, RNA 등 ) 을검출하는데사용한방법및측정원리를설명하는자료를제출한다. 나. 제품개발및자사제품성능에관련된문헌자료를제출한다. 다. 제품검사원리에대한기술및관련문헌, 논문등의자료를제출한다. 3. 국내 외에서사용현황가. 국내 외에서사용현황에관해제출할자료는다음의사항을포함한다. 1) 외국의판매또는허가현황및제조품목허가경위등과관련된자료 2) 사용시보고된측정오류 : 외국에서시판중인제품의경우, 제품안전성및성능과관련된유해사례보고요약 3) 제조국에서사용되지않는경우는그사유 원재료및제조방법에관한자료 1. 원재료의성분또는분량을확인할수있는근거자료가. 해당시약 ( 각구성품포함 ) 의성분과분량을확인할수있는자료나. 원료물질의주반응시약중중합효소 (bacteria) 혹은역전사효소의기원 (AMV, M-MLV 등 ) 및활성도를확인할수있는자료

40 다. 프라이머, 프로브에대한자료 ( 염기서열 ) 라. 원료물질의품질확인근거자료 2. 제조공정의흐름도를포함한제조공정에관한자료가. 제조공정의흐름도를간략하게기술하고제조단계별주요시험내용및완제품의품질관리시험에대한내용을포함하여제출한다. 나. 자사의원료물질 ( 프라이머, 프로브, 효소등 ) 을사용할경우, 제조방법을간략하게기술한다. 다. 일부구성제품이 OEM제조품인경우, 구성품의제조원 ( 제조자의상호와주소 ) 을확인할수있는자료도포함한다. 사용목적에관한자료 1. 허가신청서에기재한해당제품의사용목적의세부사항 ( 검사대상, 검체종류, 검사항목, 측정원리및결과판정방법 ( 정성또는정량등 ) 등 ) 에대한근거자료를제출한다. 2. 해당제품의제품설명서를제출한다. 저장방법과사용기간 ( 유효기간 ) 에관한자료 1. 완제품및개봉후시약의안정성에관한자료로서저장방법, 사용기간등에대한시험성적서를제출한다. 2. 구성제품별로구분하여안정성시험자료를제출한다. 3. 시험성적서는평가계획, 시험간격, 허용기준, 결과등의내용을포함한다. 4. 안정성시험시에는식약청 의료기기의안정성시험기준 의내용을참고한다. 5. 저장및사용기간 ( 유효기간 ) 에대한시험은완제품 3 로트, 개봉후 1로트이상의시험성적서를제출한다. 6. 제품사용방법과관련하여해당되는경우, 개봉후의유효기간에관한자료를포함한다.(on-board, reconstitution, open vial/bottle). 7. 수송조건 ( 환경및운반조건변화 ) 을고려에따른안정성자료의제출을권장한다. 8. 저장방법및사용기간 ( 유효기간 ) 에대한시험자료는시험성적서의인정범위내의

41 자료이어야한다. 성능시험에관한자료 1. 성능시험에관한자료는다음의자료를포함한다. 가. 분석적성능시험자료분석적성능시험자료에는다음의평가항목을포함한다. 1) 분석적민감도 ( 판정기준치 (cut-off value), 최소검출한계, 측정범위등 ) 2) 분석적특이도 ( 교차반응등 ) 3) 정밀도 ( 반복, 재현성등 ) 4) 정확도나. 임상적성능시험자료 1) 임상적민감도 2) 임상적특이도다. 완제품의품질관리시험성적서 (3배치 1회이상또는 1배치 3회이상 ) 라. 분석적성능시험에사용된표준물질에관한자료마. 검체보관및취급상 ( 온도, 습도등 ) 의조건설정근거자료바. 국내 외허가제품과의상관성시험에대한자료 체외진단용의료기기의취급자안전에관한자료 1. 구성시약중인간혈액유래물질이포함되었을경우에는사람면역결핍바이러스 (HIV), C형간염바이러스 (HCV), B형간염바이러스 (HBV) 가음성또는불활화하여감염력이없음을입증하는자료를제출한다. 2. 유해물질 ( 독성, 가연성등 ) 등취급자안전및적합성을확인한자료를제출한다

42 5. 인플루엔자바이러스진단용시약성능시험에대한지침 분석적성능시험자료 - 분석적성능시험자료의작성시준수사항 의료기기국제조화기구 (Global Harmonization Task Force, GHTF) 에서체외진단의료기기의허가제도및적용에대하여국제적인조화수준으로조율을위한최종권고안의발표로여러나라에서이를지침을삼고있음. 병원체유전자를이용한진단시약은직접적으로환자를대상으로하는것이아니기때문에특수성을고려한다. 분석적성능시험자료는시험성적서의인정범위내의자료이어야한다. 1. 분석적민감도 - 다른아형 ( 유전자형 ) 및변이체등이포함하도록한다. 가. 최소검출한계 (Limit of detection) 1) 일반사항가 ) 표준물질, 국제표준품을이용하여측정할것을권장하며, 일관되게검출되는최소농도값으로설정할수있다. 95% 검출률을보이는최저바이러스핵산농도를최소검출한계 (limit of detection, LoD) 로설정하는것이보편적이다. 나 ) 표준물질, 국제표준품을구할수없는항목이나아형의경우에는국내 외허가된체외진단분석기용시약과의비교시험성적서를첨부한다. 다 ) 정량검사에서최소정량한계와최소검출한계가같다면, 정량범위의근거자료로대체할수있다. 2) 시험물질가 ) 표준물질, 국제표준품, 상용패널등특성이명시되어있는물질을사용하여평가할것을권장한다. (WHO International Standard, Sero-conversion panel, Low Titer Performance Panel, Mixed Titer Performance Panel, Combo Performance Panel, Genotype performance Panel 등 ) 나 ) 인플루엔자바이러스 RNA 검체의비율을최소 5단계이상계대희석한검체를검사하여분석적민감도를판정한다

43 RNA 검체희석시에는성상이안정적으로유지될수있도록일반적인 RNA 추출에사용되는용액을이용한다. 다 ) 희석시에는음성인사람의검사대상검체를희석액으로사용한다. 측정가능한검체의종류별로시험하여결과를제시한다. 3) 시험방법가 ) 추정되는검출한계의주변농도근처농도중의최소 3개의희석검체는검체당 24회이상반복검사한다. 나 ) 총시험건수중 95% 에서양성으로판정될수있는검체의농도를 probit analysis로산정하여, 최소검출한계를결정한다. 계산된값이실제로측정되지않은농도라면실제측정농도중계산값과가장가까운높은값의농도로결정하거나, 계산값에대해 95% 검출되는지를시험을통해재확인한다. 4) 결과제시가 ) 통계적으로유효한검출한계치와설정에사용된검체의종류, 검체수, 반복회수, 계산법을함께제시한다. 나 ) 검체유형별 ( 검체의종류및양 ), 인플루엔자바이러스종류별 (type, subtype 및 serotype) 로설정된최소검출한계를제시한다. 다 ) 유전자분석용시약의최소검출한계는 IU/(m)L로표기하는것을권장하나, IU로표기할수없는항목이나아형은 copies/ml로표기한다. 나. 판정기준치 (Cut-off value) 1) 양성과음성의판정기준치를결정한근거자료를제시한다. 2) 측정항목, 측정원리, 판독방법등에따라판정기준치의설정방법이달라질수있으므로전문가그룹의자문등을거칠것을권장한다. 3) 판정기준치가최소검출한계의산출을근거로설정된경우해당자료로대신할수있다. 4) 판정기준치가공란한계 (limit of blank, Lob) 의산출을근거로설정된경우결과분포및설정방법을명시한다. 5) 분자유전제품의판정기준치는루프매개등온증폭법에서흡광도및형광도값또는카피수 (copy number) 등으로설정한다

44 6) 검사과정에서판정기준치를산정하는방법을명시한다. 7) 경계범위 (gray zone 또는 equivocal zone) 가있을경우이를설정한근거를제시한다. 판정기준치의설정이임상적판정기준치 ( 민감도, 특이도 ) 를바탕으로한경우타당한이상적근거를제시한다. ( 임상적성능시험자표의작성시준수사항참고 ) 다. 측정범위 (Measurement range) 1) 일반사항가 ) 정성검사는생략할수있다. 나 ) 측정범위는기존의알려진농도값을해당검사가정확하게재현해낼수있는농도범위를말하며최소정량한계는측정범위의가장낮은농도를제시한다. 다 ) 측정항목, 측정원리, 결과산출방법등에따라측정범위를평가할때사용하는물질과희석방법, 결과평가방법이달라질수있으므로시험을고려할때전문가그룹의자문등을거칠것을권장한다. 라 ) 측정범위이상의값을희석하여보고할수있는지여부와희석에사용할수있는희석액을명시하고, 그근거를제시해야한다. 마 ) 고역가검체에의한간섭반응등에대한자료를포함해야한다. 2) 시험물질가 ) 시험물질은측정법에적합한기질 (matrix) 를가진물질이어야한다. 나 ) 표준품에비교된참고물질로적합한 matrix 성상과목표치를알고있는물질의사용을권장한다. 다 ) 참고물질을구할수없는경우, 측정하고자하는물질에대한농도가알려진고농도의임상검체를이용한다. 라 ) 임상검체를구할수없는경우, 측정하고자하는물질을포함하지않는검체에해당물질을일정농도로 spiking하여사용한다. 기질및농도가잘알려진물질을사용하여야한다. 마 ) 희석에사용하는음성검체나 spiking할음성검체는기질효과를고려하여

45 해당제품의대상이되는음성검체를사용하여야한다. 3) 시험방법가 ) 고농도검체와음성검체를혼합하여제조하거나, 고농도의검체를계단희석하여시험물질을제조한다. (4개이상의다양한농도로구성한다 ) 나 ) 예상되는측정범위의상한값과하한값을포함하여야하며, 임상적으로중요한농도등이포함되어야한다. 다 ) 분석대상물질이객관적정량이가능한순수물질을얻기가극히어려운경우에는최소검출한계측정을생략할수있다. 단, 이러한경우에도정성검사는공란한계 (LoB) 를제시해야한다. 라 ) 공란한계 : 분석물질이없는검체를 20회이상반복측정한평균값에표준편차의 1.65배를더한값을구한다. 다 ) 각농도별로 3회이상측정하되동일한로트의시약으로시행한다. 4) 결과제시가 ) 예측치와실측치간의차이와농도별재현성을제시한다. 라. 유전형 아형별검출 정량효율 1) 일반사항가 ) 평가가능한검체또는표준물질을확보할수있는범위내에서각유전형및아형의검출및정량효율을평가하고, 결과를제시한다. 나 ) 평가가능한검체또는표준물질을확보할수없는유전형 아형에대해서는프라이머 프로브의디자인이각유전형및아형을검출할수있도록고안되었음을제시할수있다. 다 ) 검출한계 에서유전형및아형별검출 정량효율을평가한경우에는그자료로대체할수있다. 2) 시험물질가 ) 인플루엔자의정성검사는인플루엔자 subtype별 10개이상의양성검체의결과를제시할것을권장한다. 다 ) 인플루엔자의특성상계절적특성을고려하여인플루엔자염기서열을갖는플라스미드를이용하여유전형및아형별검출효율을측정할수있으며,

46 이에사용된염기서열및플라스미드에대한정보등필요한증명서류를제출하여야한다. 3) 결과제시가 ) 평가된각유전형 아형별검출 정량의결과를제시한다. 나 ) 검출률또는정량의효율면에서차이를보이는유전형 아형이존재하면, 이를명시해야한다. 2. 분석적특이도가. 일반사항 1) 간섭반응을일으킬수있는물질에대하여시험한뒤, 결과를제시하고, 이를주의사항에반드시기록하여야한다. 2) 간섭반응은검체의유형, 측정항목, 측정원리, 처리시약등에따라다양하므로해당검사 ( 루프매개등온증폭법 ) 의잠재적간섭물질등시험결과에영향을줄수있는인자에대해검토하고, 자료를제시하여야한다. 3) 간섭물질은검체내부또는외부요인일수있다. 간섭물질의가능성이있는모든물질의목록을제시하고자료를제공한다. 대표적인간섭물질은환자가섭취한물질 ( 흔히사용되는약물, 음식, 술, 비타민등 ), 검체처치에첨가된물질 ( 타액내물질 ) 등이다. 4) 호흡기감염체검체의상태를반영하는지표를포함하도록한다. 5) 각분석물질에대한간섭물질의영향을평가하기위해다음과같은 4가지형태의세트를준비한다. 가 ) 분석물질약양성검체 ( 간섭물질없음 ) 나 ) 분석물질약양성검체 + 간섭물질다 ) 분석물질음성검체 + 간섭물질라 ) 분석물질음성검체 ( 간섭물질없음 ) 나. 시험물질 1) 측정대상이되는검체와동일한기질의검체를이용하거나임상검체를구하기힘들경우재조합 plasmid를활용할수있다. 음성의검체에 spiking하여제조하여활용할수있다

47 다. 시험방법 1) 검체의종류, 간섭물질의종류, 간섭물질의농도, 분석물질의농도, 검체의제조방법 ( 예 : 간섭물질을 spike한검체, 자연적으로높은간섭물질을함유한검체등 ) 등에대한실험방법을제공한다. 2) 사용검체의종류가다양하다면검체의종류별로자료를제출한다. 3) 검체에영향을줄수있는간섭물질의목록을작성하고각간섭물질별자료를제출한다. 4) 간섭물질을함유한검체와간섭물질을함유하지않은검체의결과를비교한다. 5) 분석물질 ( 해당유전자 ) 이음성이고, 간섭물질을포함한검체도검사하여위양성결과를보이는지확인한다. 6) 높은농도의간섭물질에영향을받지않는경우는더이상의평가를시행하지않아도되고, 영향을받는경우는간섭물질을희석하여재검사한다. 7) 각검체별로 3번반복검사를시행한다. 라. 결과제시 1) 간섭물질을함유한검체와간섭물질을함유하지않은검체의결과값을제시한다. 2) 경향이있다면경향을기술한다. ( 예 : 높은농도의 X물질은분석물질의결과를감소시킴 ) 3. 정밀도 ( 반복, 재현성등 ) 가. 일반사항 1) 동일검체를일정기간동안반복측정한결과를분석하여정밀도자료를제시한다. 2) 단일기관에서실시한정밀도 ( 반복성 ) 와다수의임상기관에서실시한재현성으로구분하여평가한다. 3) 각평가수행기관은평가를시행하기전에검사방법에익숙해지는시기를거친다음평가를수행하도록한다. 가. 반복성 ( 기관내정밀도 )

48 1) 시험물질가 ) 측정하고자하는물질을포함하는검체나, 표준품에준한물질을사용할수있다. 나 ) 임상검체를구할수없는경우에는측정하고자하는물질 ( 유전자 ) 을포함하지않는타액에해당물질을일정농도로 spiking하여사용한다. 다 ) 측정범위를포함하는두가지이상의농도의물질을선택한다. 라 ) 정성검사의경우음성, 양성, 판정기준치주변값의검체를모두포함하도록한다. 마 ) 제품내에포함된정도관리물질을이용한평가를포함하는것을권장한다. 2) 시험방법가 ) 시행기관은검사특성에맞추어일정기간동안매일반복측정하는계획을수립하여시행한다. 나 ) 20일이상동안 ( 반드시연속 ) 매일 2회의수행, 각수행당 2회이상반복측정하는것을권장한다. 3) 결과제시가 ) 시험결과및정밀도를나타내는다음지표들을제시한다. - 검사내정밀도 (repeatability or within-run precision) - 검사간정밀도 (between-run precision) - 날짜간정밀도 (between-day precision) - 검사실내정밀도 (between-laboratory) 나. 재현성 1) 시험물질가 ) 반복성평가와동일하다. 2) 시험방법가 ) 검사장소 ( 기관 ) 간, 장비간, 검사자간, 로트간정밀도자료를제시한다. 나 ) 장소간정밀도를위해두군데이상의기관 ( 제조사포함 ) 에서평가한다. 다 ) 5일이상 ( 반드시연속 ), 매일 2회이상, 매검사마다 2회이상반복검사를실시하는것을권장한다. 라 ) 각장소마다다수의검사자가평가에참여하도록한다

49 마 ) 여러추출법이적용되는경우다양한추출법이평가에포함되도록계획을수립한다. 3) 결과제시가 ) 검사장소간, 장비간, 검사자간, 로트간재현성 (Reproducibility) 자료를제시한다. 나 ) 유전자분석용시약의경우필요에따라통계처리과정에서로그변환을할수있다. 4. 정확도가. 일반사항 1) WHO international reference standard 물질등국제표준품, 상용패널, 제조사제조표준물질등특성이명시되어있는물질을사용하여평가할것을권장하며, 최소 2회반복측정한다. 2) 표준물질의목표결과와실측결과경우를제시한다. 3) 시약의표준화를위해사용된방법을기술한다. 4) 보정물질 (calibrator) 의설정농도, 소급성 (traceability) 에대해기술한다. 5) 양성및음성대조물질의제조방법, 설정농도및반복측정결과를기술한다. 5. 교차반응가. 일반사항다른관련성있는핵산과특정의대상이되는바이러스감염및다른바이러스의핵산등에의한교차반응성을평가하여야한다. 나. 시험물질 1) 교차반응을일으킬수있는핵산을포함하는임상검체를이용하여교차반응성을평가하며, 임상적으로나타날수있는고농도를사용할것을권장한다. 평가되어야할핵산은아래사항들을포함하여야한다. 각해당항목에대해양성검체를확보할것을권장하나, 검체확보가어려울경우, 음성타액에바이러스를 spiking하여사용할수있다. 가 ) 인간유전체핵산 (Human genomic DNA) 나 ) 임상검체에오염가능한상재균

50 다 ) 유사한임상상에서원인이될수있는다른병인체 (pathogen) 라 ) 유전적으로유사한바이러스마 ) 측정항목별로포함되어야할것은다음과같다. 인플루엔자검사시약 : 다음표는교차반응에추천되는세균및바이러스로이중양성검체 10개이상양성검체가포함될것을권장한다. 표 15. 인플루엔자검사시약의교차반응연구를위한추천된미생물및바이러스 연번 미생물 연번 미생물 1 Adenovirus 15 Escherichia coli 2 Adenovirus 16 Hemophilus influenzae 3 Human coronavirus 17 Lactobacillus sp. 4 Cytomegalovirus 18 Legionella spp 5 Enterovirus 19 Moraxella catarrhalis 6 Epstein Barr Virus 20 Mycobacterium tuberculosis 7 Human parainfluenza 21 Mycoplasma pneumoniae 8 Measles 22 Neisseria sp. 9 Human metapneumovirus 23 Pseudomonas aeruginosa 10 Mumps virus 24 Staphylococcus aureus 11 Rhinovirus 25 Staphylococcus epidermidis 12 Bordetella pertussis 26 Streptococcus pneumoniae 13 Chlamydia pneumoniae 27 Streptococcus pyogenes 14 Corynebacterium sp. 28 Streptococcus salivarius 다. 시험방법 1) 준비된시험물질을 3회반복측정한다. 2) 위양성율을계산한다. 위양성을보이는검체에대해원인을분석조사한다. 3) BLAST search 등을통해프라이머및프로브의유사염기서열을조사한다. 라. 결과제시 1) 교차반응평가에사용된양성물질의종류, 농도, 측정한원시자료 (raw data) 를제시한다. 2) 교차반응을보이는물질의종류와빈도를제시한다

51 임상적성능시험자료 임상적성능시험자료의작성시준수사항 - 체외진단용의료기기 ( 시약 ) 의성능및유효성을입증하기위하여사람에서유래된검체를대상으로시험한자료로서임상적민감도와임상적특이도를평가한다. - 판정기준치의설정이임상적판정기준치 ( 민감도, 특이도 ) 를바탕으로한경우, 타당한임상적근거를제시한다. 이경우, 실험대상인구에대한자료 ( 인구통계 / 선택기준 / 배제기준 / 전체숫자 ) 와 ROC 분석등과같은통계적방법등을제시한다. 가급적독립적인두개이상의임상시험을근거로설정되어야하며, 임상평가를토대로판정기준치가수정되었다면수정된판정기준치를이용하여재평가가필요하다. - 질병의진단이검사의주된목적이아니어서임상적민감도와임상적특이도를평가하기어려운경우, 검사의임상적유효성을보여주는임상적자료를제출하도록한다. - 민족적요인의차이가있어외국임상적성능시험을그대로적용하기가어렵다고판단되는경우, 국내에서우리나라사람유래의검체를대상으로한자료를추가제출해야한다. 한국인인구집단을포함하여수행한결과이어야하며, 국 - 임상적민감도및특이도평가중결과가불일치한경우, 아래의방법등으로불일치한검체에대한원인을분석하여야한다. 추가검사수행 다른방법이나표지자의이용다. 환자의임상상태나진단명검토 추적검사수행 - 신선검체를사용하는것을원칙으로하나, 충분한수의신선검체를확보하기어려울경우, 냉동검체를사용할수있다. 내유병율을고려하여야한다. - 임상적성능시험자료는다음중어느하나에해당하는자료이어야한다. 식약처장이지정한임상시험기관에서시험한자료 외국자료로서그내용을검토하여실시기관의신뢰성이인정되고 [ 의료기기임상시험관리기준 ] 에의하여실시한것으로판단되는자료 해당의료기기에대하여경제협력개발기구 (OECD) 회원국에허가당시제출되어평가된임상적성능시험자료로서해당정부또는정부가허가업무를위임한등록기관이제출받아승인하였음을확인한자료또는이를공증한자료

52 과학논문인용색인 (Science Citation Index) 에등재된전문학회지에게재된자료 - 임상적성능시험자료중식약처장이지정한임상시험기관및 의료기기임상시험관리기준 에의해실시되고실시기관의신뢰성이인정되는외국자료는다음의사항을포함해야한다. 임상시험방법 피험자의선정기준, 제외기준및목표한피험자의수 사용방법과그설정사유 비교시험용의료기기를사용하는경우, 그선택사유 병용사용의유무 관찰항목, 측정항목, 임상검사항목, 측정기준및검사방법 유효성평가기준, 평가방법및해석방법 임상결과 임상시험의성적 ( 임상례계획수, 실제대상수, 완료된수, 중도탈락자수및이유등을포함 ) 증례기록요약 기타임상시험성적의확인에필요한자료 임상평가 1. 임상적민감도가. 시험물질 1) 다양한농도를포함한양성임상검체와타액전환패널을이용하여평가한다. 2) 임상검체인경우, 양성또는음성임을확인할수있는자료를제출한다. ( 예, 기허가진단제품또는확진검사방법으로확인된자료나양성임을확인가능한서류등 ) 3) 양성검체는각질환의다양한임상단계및아형 ( 유전자형, 변이체등 ) 이포함되도록한다. 4) 임상적민감도평가를위해시험해야할일반적인권장감사의목적유병률을고려하여통계적으로타당한근거를제시한다. 나. 시험방법 1) 임상적민감도란질환이환자군에서판정기준에의해양성결과를보이는환자의비율이다. 양성으로규명된검체를양성으로판정한비율을산정한다

53 2) 피험자선정 / 제외기준, 검체종류와수, 바이러스유전자형및아형별수, 시험상주의사항, 통계분석법등을미리확립한다. 3) 평가전에결과해석에대한알고리즘및불일치한경우추가검사등의원인분석방법을미리확립하고이를명시한다. 4) 선택한비교평가방법을명시하고, 선택한사유를기술한다. 다. 결과제시 1) 질환이있음과없음 ( 임상적참값 ) 을규명한방법, 대상군 ( 환자선택기준 / 배제기준, 환자수 ), 질환단계및항체양상, 아형 ( 유전형, 변이체, 아형등 ), 검체의종류등검체에대한상세한자료를제공한다. 2) 시험방법, 통계방법등에대한자세한실험방법을제공한다. 3) 양성검체임을확인한방법을제시한다. 4) 불일치한검체에대해원인을분석한자료를제출하고, 해석을제시한다. 5) 계산된민감도및 95% 신뢰구간을제시한다. 2. 임상적특이도가. 시험물질 1) 무작위헌혈자또는임상적으로분석대상바이러스의감염또는결핵감염이없음이확인된임상검체를이용하여평가한다. 무작위헌혈자검체란, 확보할수있는일련의헌혈자전체의검체로, 임의의기준으로선택하거나초회헌혈자를배제해서는안된다는것을의미한다. 2) 검체는적용하고자하는대상인구집단을반영하여야한다 3) 임상적특이도평가를위해시험해야할일반적인권장검체수는검사의목적, 유병률을고려하여통계적으로타당한근거를제시한다. 나. 시험방법 1) 피험자선정 / 제외기준, 검체종류와수, 시험상주의사항, 통계분석법등을미리확립한다. 2) 평가전에결과해석에대한알고리즘및불일치한경우추가검사등의원인분석방법을미리확립하고이를명시한다. 3) 선택한비교평가방법을명시하고, 선택한사유를기술한다

54 다. 결과제시 1) 시험방법, 통계방법등에대한자세한실험프로토콜을제공한다. 2) 불일치한검체에대해원인을분석한자료를제출하고, 해석을제시한다. 3) 계산된특이도및 95% 신뢰구간을제시한다. 완제품의품질관리시험성적서 1. 완제품의품질관리시험성적서 (3배치 1회이상또는 1배치 3회이상 ) 를제출한다. 2. 시험규격설정에따른시험기준및방법에관한자료와표준물질이사용된경우, 이에관한자료를제출한다 ( 단표준물질에관한자료와중복될경우이를생략 ). 3. 시험항목은품질의동등성을입증할수있는항목 ( 민감도, 특이도, 정밀도등 ) 설정을권장한다. 분석적성능시험에사용된표준물질에관한자료 1. 국제표준물질혹은타사표준물질을구매하여사용한경우, 아래의자료를제출한다. 가. 국제표준품또는기타사용된표준물질의확인서 (certificate) 나. 출처및근거자료 2. 자사표준물질을제작하여사용할경우, 다음의자료를제출한다. 가. 표준물질의농도별설정기준을입증할수있는시험자료및결과분석자료나. 표준물질관리방법및관리기록서 ( 정도관리포함 ) 검체보관및취급상 ( 온도, 습도등 ) 의조건설정근거자료 1. 시험결과를근거로하여, 검사에이용할수있는검체의취급방법, 보관조건및방법, 사용기간, 주의사항등에대하여기재한다. 이는원심분리조건등을포함한검체전처리과정및냉동및해동된검체의사용가능성및제한점등을포함한다. 2. 검체취급및보관조건에대한시험결과를제시한다. 이는제시된시간, 온도, 습도등의항목에대해유효하다고제시도니구간중몇단계에대해동일한검사결과를보임을입증해야한다. 이시험은제시된구간의양측한계치이상에서평

55 가된결과이어야하며조건변화에따른결과의변화를제시하고평가에사용된만족기준을함께기록한다. 3. 시험에사용된방법, 검체수, 검체범위, 표준농도, 계산법, 통계처리법, 허용기준, 결과등을요약하여제시한다. 상관성평가 1. 일반사항가. 국내외허가된체외진단용의료기기 ( 시약 ) 과의상관성을확인할수있는비교시험성적서를포함하여야한다. 다만, 측정원리및측정항목이새로운경우동일목적으로사용되는제품과비교할수있다. 나. 성능시험과정에서기허가제품과비교검사를실시하였다면그자료를정리하여상관성검사의결과로제시할수있다. 다. 추가적으로상관성평가가필요할경우, 아래의원칙을따른다. 2. 시험물질검체가. 다양한역가의표준물질과통계적으로해석가능한임상검체수를포함하여비교시험을수행한다. 나. 임상검체는기허가된방법이거나여타검증된방법으로검사되어검체의이력등이밝혀진검체를사용할것을권장한다. 다. 임상검체의경우다양한임상상을포함하는검체를포함하여비교하도록한다. 라. 정량검사의임상검체는측정범위내의다양한농도가포함되도록하고, 최소 40개이상의검체를시험하여야한다. 3. 시험방법가. 해당제품과측정원리및항목이가장유사한국내허가제품또는외국허가제품 ( 국내허가제품이없을시 ) 과의비교시험을실시한다. 나. 가능한 2개이상의회사제품과비교시험할것을권장한다. 다. 비교제품은각제품의사용방법에따라서시험한다. 라. 정량검사의경우각검사를 2회이상반복수행을권장한다. 마. 결과가불일치하는경우, 다른검사를통해불일치의원인을분석하고이에대한자료를제공하여야한다. 불일치의원인을분석할때는가능한확진방법

56 ( 염기서열분석검사등 ) 과비교한다. 4. 결과제시가. 전체결과및특이환자그룹이있다면그룹별결과를제시한다. 나. 정량검사에대해서는기울기, 절편 ( 신뢰구간과함께 ), 상관계수및의학적결정치에서의편향을제시한다. 다. 정성또는반정량검사에대해서는양성과음성검체에대한비교검사와의 % 일치도를제시 ( 신뢰구간과함께 ) 한다. 라. 결과가불일치하는경우불일치의원인분석에대한자료를제출한다

57 6. 결핵진단용시약성능시험에대한지침 분석적성능시험자료 - 분석적성능시험자료의작성시준수사항 의료기기국제조화기구 (Global Harmonization Task Force, GHTF) 에서체외진단의료기기의허가제도및적용에대하여국제적인조화수준으로조율을위한최종권고안의발표로여러나라에서이를지침을삼고있음. 병원체유전자를이용한진단시약은직접적으로환자를대상으로하는것이아니기때문에특수성을고려한다. 분석적성능시험자료는시험성적서의인정범위내의자료이어야한다. 1. 분석적민감도가. 최소검출한계 (Limit of detection) 1) 일반사항가 ) 표준물질, 국제표준품을이용하여측정할것을권장하며, 일관되게검출되는최소농도값으로설정할수있다. 95% 검출률을보이는최저바이러스핵산농도를최소검출한계 (limit of detection, LoD) 로설정하는것이보편적이다. 나 ) 표준물질, 국제표준품을구할수없는항목이나아형의경우에는국내 외허가된체외진단분석기용시약과의비교시험성적서를첨부한다. 다 ) 정량검사에서최소정량한계와최소검출한계가같다면, 정량범위의근거자료로대체할수있다. 2) 시험물질가 ) 표준물질, 국제표준품, 상용패널등특성이명시되어있는물질을사용하여평가할것을권장한다. (WHO International Standard, Sero-conversion panel, Low Titer Performance Panel, Mixed Titer Performance Panel, Combo Performance Panel, Genotype performance Panel 등 ) 나 ) 결핵 DNA 검체의비율을최소 5단계이상계대희석한검체를검사하여분석적민감도를판정한다

58 다 ) 희석시에는음성인사람의검사대상검체를희석액으로사용한다. 측정가능한검체의종류별로시험하여결과를제시한다. 3) 시험방법 1) 추정되는검출한계의주변농도근처농도중의최소 3개의희석검체는검체당 24회이상반복검사한다. 2) 총시험건수중 95% 에서양성으로판정될수있는검체의농도를 probit analysis로산정하여, 최소검출한계를결정한다. 계산된값이실제로측정되지않은농도라면실제측정농도중계산값과가장가까운높은값의농도로결정하거나, 계산값에대해 95% 검출되는지를시험을통해재확인한다. 4) 결과제시가 ) 통계적으로유효한검출한계치와설정에사용된검체의종류, 검체수, 반복회수, 계산법을함께제시한다. 나 ) 검체유형별 ( 검체의종류및양 ), 결핵균종류별로설정된최소검출한계를제시한다. 다 ) 유전자분석용시약의최소검출한계는 IU/(m)L로표기하는것을권장하나, IU로표기할수없는항목이나아형은 copies/ml로표기한다. 나. 판정기준치 (Cut-off value) 1) 양성과음성의판정기준치를결정한근거자료를제시한다. 2) 측정항목, 측정원리, 판독방법등에따라판정기준치의설정방법이달라질수있으므로전문가그룹의자문등을거칠것을권장한다. 3) 판정기준치가최소검출한계의산출을근거로설정된경우해당자료로대신할수있다. 4) 판정기준치가공란한계 (limit of blank, Lob) 의산출을근거로설정된경우결과분포및설정방법을명시한다. 5) 분자유전제품의판정기준치는루프매개등온증폭법에서흡광도및형광도값또는카피수 (copy number) 등으로설정한다. 6) 검사과정에서판정기준치를산정하는방법을명시한다. 7) 경계범위 (gray zone 또는 equivocal zone) 가있을경우이를설정한근거를제시한다

59 판정기준치의설정이임상적판정기준치 ( 민감도, 특이도 ) 를바탕으로한경 우타당한이상적근거를제시한다. ( 임상적성능시험자표의작성시준수사 항참고 ) 다. 측정범위 (Measurement range) 1) 일반사항가 ) 정성검사는생략할수있다. 나 ) 측정범위는기존의알려진농도값을해당검사가정확하게재현해낼수있는농도범위를말하며최소정량한계는측정범위의가장낮은농도를제시한다. 다 ) 측정항목, 측정원리, 결과산출방법등에따라측정범위를평가할때사용하는물질과희석방법, 결과평가방법이달라질수있으므로시험을고려할때전문가그룹의자문등을거칠것을권장한다. 라 ) 측정범위이상의값을희석하여보고할수있는지여부와희석에사용할수있는희석액을명시하고, 그근거를제시해야한다. 마 ) 고역가검체에의한간섭반응등에대한자료를포함해야한다. 2) 시험물질가 ) 시험물질은측정법에적합한기질 (matrix) 를가진물질이어야한다. 나 ) 표준품에비교된참고물질로적합한 matrix 성상과목표치를알고있는물질의사용을권장한다. 다 ) 참고물질을구할수없는경우, 측정하고자하는물질에대한농도가알려진고농도의임상검체를이용한다. 라 ) 임상검체를구할수없는경우, 측정하고자하는물질을포함하지않는검체에해당물질을일정농도로 spiking하여사용한다. 기질및농도가잘알려진물질을사용하여야한다. 마 ) 희석에사용하는음성검체나 spiking할음성검체는기질효과를고려하여해당제품의대상이되는음성검체를사용하여야한다. 3) 시험방법가 ) 고농도검체와음성검체를혼합하여제조하거나, 고농도의검체를계단희석

60 하여시험물질을제조한다. (4개이상의다양한농도로구성한다 ) 나 ) 예상되는측정범위의상한값과하한값을포함하여야하며, 임상적으로중요한농도등이포함되어야한다. 다 ) 분석대상물질이객관적정량이가능한순수물질을얻기가극히어려운경우에는최소검출한계측정을생략할수있다. 단, 이러한경우에도정성검사는공란한계 (LoB) 를제시해야한다. 라 ) 공란한계 : 분석물질이없는검체를 20회이상반복측정한평균값에표준편차의 1.65배를더한값을구한다. 다 ) 각농도별로 3회이상측정하되동일한로트의시약으로시행한다. 4) 결과제시가 ) 예측치와실측치간의차이와농도별재현성을제시한다. 라. 유전형 정량효율 1) 일반사항가 ) 평가가능한검체또는표준물질을확보할수있는범위내에서각유전형의검출및정량효율을평가하고, 결과를제시한다. 나 ) 평가가능한검체또는표준물질을확보할수없는유전형에대해서는프라이머 프로브의디자인이각유전형및아형을검출할수있도록고안되었음을제시할수있다. 다 ) 검출한계 에서유전형및아형별검출 정량효율을평가한경우에는그자료로대체할수있다. 2) 시험물질가 ) 결핵의정성및정량검사는 M. tuberculosis 및 M bovis의핵산을포함한고, 균주별 10개이상의양성검체의결과를제시할것을권장한다. 다 ) 검체를구할수없는경우결핵의염기서열을갖는플라스미드를이용하여유전형검출및정량효율을측정할수있으며, 이에사용된염기서열및플라스미드에대한정보등필요한증명서류를제출하여야한다. 3) 결과제시가 ) 평가된각유전형검출 정량의결과를제시한다

61 나 ) 검출률또는정량의효율면에서차이를보이는유전형이존재하면, 이를명 시해야한다. 2. 분석적특이도가. 일반사항 1) 간섭반응을일으킬수있는물질에대하여시험한뒤, 결과를제시하고, 이를주의사항에반드시기록하여야한다. 2) 간섭반응은검체의유형, 측정항목, 측정원리, 처리시약등에따라다양하므로해당검사 ( 루프매개등온증폭법 ) 의잠재적간섭물질등시험결과에영향을줄수있는인자에대해검토하고, 자료를제시하여야한다. 3) 간섭물질은검체내부또는외부요인일수있다. 간섭물질의가능성이있는모든물질의목록을제시하고자료를제공한다. 대표적인간섭물질은환자가섭취한물질 ( 흔히사용되는약물, 음식, 술, 비타민등 ), 검체처치에첨가된물질 ( 타액내물질 ) 등이다. 4) 호흡기감염체검체의상태를반영하는지표를포함하도록한다. 5) 각분석물질에대한간섭물질의영향을평가하기위해다음과같은 4가지형태의세트를준비한다. 가 ) 분석물질약양성검체 ( 간섭물질없음 ) 나 ) 분석물질약양성검체 + 간섭물질다 ) 분석물질음성검체 + 간섭물질라 ) 분석물질음성검체 ( 간섭물질없음 ) 나. 시험물질 1) 측정대상이되는검체와동일한기질의검체를이용하거나임상검체를구하기힘들경우재조합 plasmid를활용할수있다. 음성의검체에 spiking하여제조하여활용할수있다. 다. 시험방법 1) 검체의종류, 간섭물질의종류, 간섭물질의농도, 분석물질의농도, 검체의제조방법 ( 예 : 간섭물질을 spike한검체, 자연적으로높은간섭물질을함유한검체등 ) 등에대한실험방법을제공한다

62 2) 사용검체의종류가다양하다면검체의종류별로자료를제출한다. 3) 검체에영향을줄수있는간섭물질의목록을작성하고각간섭물질별자료를제출한다. 4) 간섭물질을함유한검체와간섭물질을함유하지않은검체의결과를비교한다. 5) 분석물질 ( 해당유전자 ) 이음성이고, 간섭물질을포함한검체도검사하여위양성결과를보이는지확인한다. 6) 높은농도의간섭물질에영향을받지않는경우는더이상의평가를시행하지않아도되고, 영향을받는경우는간섭물질을희석하여재검사한다. 7) 각검체별로 3번반복검사를시행한다. 라. 결과제시 1) 간섭물질을함유한검체와간섭물질을함유하지않은검체의결과값을제시한다. 2) 경향이있다면경향을기술한다. ( 예 : 높은농도의 X물질은분석물질의결과를감소시킴 ) 3. 정밀도 ( 반복, 재현성등 ) 가. 일반사항 1) 동일검체를일정기간동안반복측정한결과를분석하여정밀도자료를제시한다. 2) 단일기관에서실시한정밀도 ( 반복성 ) 와다수의임상기관에서실시한재현성으로구분하여평가한다. 3) 각평가수행기관은평가를시행하기전에검사방법에익숙해지는시기를거친다음평가를수행하도록한다. 가. 반복성 ( 기관내정밀도 ) 1) 시험물질가 ) 측정하고자하는물질을포함하는검체나, 표준품에준한물질을사용할수있다. 나 ) 임상검체를구할수없는경우에는측정하고자하는물질 ( 유전자 ) 을포함하지않는타액에해당물질을일정농도로 spiking하여사용한다

63 다 ) 측정범위를포함하는두가지이상의농도의물질을선택한다. 라 ) 정성검사의경우음성, 양성, 판정기준치주변값의검체를모두포함하도록한다. 마 ) 제품내에포함된정도관리물질을이용한평가를포함하는것을권장한다. 2) 시험방법가 ) 시행기관은검사특성에맞추어일정기간동안매일반복측정하는계획을수립하여시행한다. 나 ) 20일이상동안 ( 반드시연속 ) 매일 2회의수행, 각수행당 2회이상반복측정하는것을권장한다. 3) 결과제시가 ) 시험결과및정밀도를나타내는다음지표들을제시한다. - 검사내정밀도 (repeatability or within-run precision) - 검사간정밀도 (between-run precision) - 날짜간정밀도 (between-day precision) - 검사실내정밀도 (between-laboratory) 나. 재현성 1) 시험물질가 ) 반복성평가와동일하다. 2) 시험방법가 ) 검사장소 ( 기관 ) 간, 장비간, 검사자간, 로트간정밀도자료를제시한다. 나 ) 장소간정밀도를위해두군데이상의기관 ( 제조사포함 ) 에서평가한다. 다 ) 5일이상 ( 반드시연속 ), 매일 2회이상, 매검사마다 2회이상반복검사를실시하는것을권장한다. 라 ) 각장소마다다수의검사자가평가에참여하도록한다. 마 ) 여러추출법이적용되는경우다양한추출법이평가에포함되도록계획을수립한다. 3) 결과제시가 ) 검사장소간, 장비간, 검사자간, 로트간재현성 (Reproducibility) 자료를제시한다

64 나 ) 유전자분석용시약의경우필요에따라통계처리과정에서로그변환을할수있다. 4. 정확도가. 일반사항 1) WHO international referece standar 물질등국제표준품, 상용패널, 제조사제조표준물질등특성이명시되어있는물질을사용하여평가할것을권장하며, 최소 2회반복측정한다. 2) 표준물질의목표결과와실측결과경우를제시한다. 3) 시약의표준화를위해사용된방법을기술한다. 4) 보정물질 (calibrator) 의설정농도, 소급성 (traceability) 에대해기술한다. 5) 양성및음성대조물질의제조방법, 설정농도및반복측정결과를기술한다. 5. 교차반응가. 일반사항다른관련성있는핵산과특정의대상이되는바이러스감염및다른바이러스의핵산등에의한교차반응성을평가하여야한다. 나. 시험물질 1) 교차반응을일으킬수있는핵산을포함하는임상검체를이용하여교차반응성을평가하며, 임상적으로나타날수있는고농도를사용할것을권장한다. 평가되어야할핵산은아래사항들을포함하여야한다. 각해당항목에대해양성검체를확보할것을권장하나, 검체확보가어려울경우, 음성혈청 ( 또는혈청 ) 에바이러스를 spiking하여사용할수있다. 가 ) 인간유전체핵산 (Human genomic DNA) 나 ) 임상검체에오염가능한상재균나 ) 유사한임상상에서원인이될수있는다른병인체 (pathogen) ( 상동 ) 다 ) 유전적으로유사한바이러스라 ) 측정항목별로포함되어야할것은다음과같다. 결핵검사시약 : 다음표는교차반응에추천되는세균및바이러스로이중양성검체 10개이상양성검체가포함될것을권장한다

65 표 16. 결핵검사시약의교차반응연구를위한추천된미생물및바이러스 연번 미생물 연번 미생물 1 Adenovirus 17 Hemophilus influenzae 2 Human influenza virus 18 Lactobacillus sp. 3 Human coronavirus 19 Legionella spp 4 Human parainfluenza 20 Moraxella catarrhalis 5 Enterovirus 21 Mycobacterium leprae 6 Epstein Barr Virus 22 Mycobacterium avium 7 Human parainfluenza 23 Mycobacterium absecenssu 8 Measles 24 Mycobacterium flavescens 9 Human metapneumovirus 25 Mycoplasma pneumoniae 10 Mumps virus 26 Neisseria sp. 11 Respiratory syncytial virus 27 Pseudomonas aeruginosa 12 Rhinovirus 28 Staphylococcus aureus 13 Bordetella pertussis 29 Staphylococcus epidermidis 14 Chlamydia pneumoniae 30 Streptococcus pneumoniae 15 Corynebacterium sp. 31 Streptococcus pyogenes 16 Escherichia coli 32 Streptococcus salivarius 다. 시험방법 1) 준비된시험물질을 3회반복측정한다. 2) 위양성율을계산한다. 위양성을보이는검체에대해원인을분석조사한다. 3) BLAST search 등을통해프라이머및프로브의유사염기서열을조사한다. 라. 결과제시 1) 교차반응평가에사용된양성물질의종류, 농도, 측정한원시자료 (raw data) 를제시한다. 2) 교차반응을보이는물질의종류와빈도를제시한다

66 임상적성능시험자료 임상적성능시험자료의작성시준수사항 - 체외진단용의료기기 ( 시약 ) 의성능및유효성을입증하기위하여사람에서유래된검체를대상으로시험한자료로서임상적민감도와임상적특이도를평가한다. - 판정기준치의설정이임상적판정기준치 ( 민감도, 특이도 ) 를바탕으로한경우, 타당한임상적근거를제시한다. 이경우, 실험대상인구에대한자료 ( 인구통계 / 선택기준 / 배제기준 / 전체숫자 ) 와 ROC 분석등과같은통계적방법등을제시한다. 가급적독립적인두개이상의임상시험을근거로설정되어야하며, 임상평가를토대로판정기준치가수정되었다면수정된판정기준치를이용하여재평가가필요하다. - 질병의진단이검사의주된목적이아니어서임상적민감도와임상적특이도를평가하기어려운경우, 검사의임상적유효성을보여주는임상적자료를제출하도록한다. - 민족적요인의차이가있어외국임상적성능시험을그대로적용하기가어렵다고판단되는경우, 국내에서우리나라사람유래의검체를대상으로한자료를추가제출해야한다. 한국인인구집단을포함하여수행한결과이어야하며, 국내유병율을고려하여야한다. - 임상적민감도및특이도평가중결과가불일치한경우, 아래의방법등으로불일치한검체에대한원인을분석하여야한다. 추가검사수행 다른방법이나표지자의이용다. 환자의임상상태나진단명검토 추적검사수행 - 신선검체를사용하는것을원칙으로하나, 충분한수의신선검체를확보하기어려울경우, 냉동검체를사용할수있다. 내유병율을고려하여야한다. - 임상적성능시험자료는다음중어느하나에해당하는자료이어야한다. 식약처장이지정한임상시험기관에서시험한자료 외국자료로서그내용을검토하여실시기관의신뢰성이인정되고 [ 의료기기임상시험관리기준 ] 에의하여실시한것으로판단되는자료 해당의료기기에대하여경제협력개발기구 (OECD) 회원국에허가당시제출되어평가된임상적성능시험자료로서해당정부또는정부가허가업무를위임한등록기관이제출받아승인하였음을확인한자료또는이를공증한자료

67 과학논문인용색인 (Science Citation Index) 에등재된전문학회지에게재된자료 - 임상적성능시험자료중식약처장이지정한임상시험기관및 의료기기임상시험관리기준 에의해실시되고실시기관의신뢰성이인정되는외국자료는다음의사항을포함해야한다. 임상시험방법 피험자의선정기준, 제외기준및목표한피험자의수 사용방법과그설정사유 비교시험용의료기기를사용하는경우, 그선택사유 병용사용의유무 관찰항목, 측정항목, 임상검사항목, 측정기준및검사방법 유효성평가기준, 평가방법및해석방법 임상결과 임상시험의성적 ( 임상례계획수, 실제대상수, 완료된수, 중도탈락자수및이유등을포함 ) 증례기록요약 기타임상시험성적의확인에필요한자료 임상평가 1. 임상적민감도가. 시험물질 1) 다양한농도를포함한양성임상검체와타액전환패널을이용하여평가한다. 2) 임상검체인경우, 양성또는음성임을확인할수있는자료를제출한다. ( 예, 기허가진단제품또는확진검사방법으로확인된자료나양성임을확인가능한서류등 ) 3) 양성검체는각질환의다양한임상단계및아형 ( 유전자형, 변이체등 ) 이포함되도록한다. 4) 임상적민감도평가를위해시험해야할일반적인권장감사의목적유병률을고려하여통계적으로타당한근거를제시한다. 나. 시험방법 1) 임상적민감도란질환이환자군에서판정기준에의해양성결과를보이는환자의비율이다. 양성으로규명된검체를양성으로판정한비율을산정한다. 2) 피험자선정 / 제외기준, 검체종류와수, 바이러스유전자형및아형별수,

68 시험상주의사항, 통계분석법등을미리확립한다. 3) 평가전에결과해석에대한알고리즘및불일치한경우추가검사등의원인분석방법을미리확립하고이를명시한다. 4) 선택한비교평가방법을명시하고, 선택한사유를기술한다. 다. 결과제시 1) 질환이있음과없음 ( 임상적참값 ) 을규명한방법, 대상군 ( 환자선택기준 / 배제기준, 환자수 ), 질환단계및항체양상, 아형 ( 유전형, 변이체, 아형등 ), 검체의종류등검체에대한상세한자료를제공한다. 2) 시험방법, 통계방법등에대한자세한실험방법을제공한다. 3) 양성검체임을확인한방법을제시한다. 4) 불일치한검체에대해원인을분석한자료를제출하고, 해석을제시한다. 5) 계산된민감도및 95% 신뢰구간을제시한다. 2. 임상적특이도가. 시험물질 1) 무작위헌혈자또는임상적으로분석대상바이러스의감염또는결핵감염이없음이확인된임상검체를이용하여평가한다. 무작위헌혈자검체란, 확보할수있는일련의헌혈자전체의검체로, 임의의기준으로선택하거나초회헌혈자를배제해서는안된다는것을의미한다. 2) 검체는적용하고자하는대상인구집단을반영하여야한다. 3) 임상적특이도평가를위해시험해야할일반적인권장검체수는검사의목적, 유병률을고려하여통계적으로타당한근거를제시한다. 나. 시험방법 1) 피험자선정 / 제외기준, 검체종류와수, 시험상주의사항, 통계분석법등을미리확립한다. 2) 평가전에결과해석에대한알고리즘및불일치한경우추가검사등의원인분석방법을미리확립하고이를명시한다. 3) 선택한비교평가방법을명시하고, 선택한사유를기술한다. 다. 결과제시

69 1) 시험방법, 통계방법등에대한자세한실험프로토콜을제공한다. 2) 불일치한검체에대해원인을분석한자료를제출하고, 해석을제시한다. 3) 계산된특이도및 95% 신뢰구간을제시한다. 완제품의품질관리시험성적서 1. 완제품의품질관리시험성적서 (3배치 1회이상또는 1배치 3회이상 ) 를제출한다. 2. 시험규격설정에따른시험기준및방법에관한자료와표준물질이사용된경우, 이에관한자료를제출한다 ( 단표준물질에관한자료와중복될경우이를생략 ). 3. 시험항목은품질의동등성을입증할수있는항목 ( 민감도, 특이도, 정밀도등 ) 설정을권장한다. 분석적성능시험에사용된표준물질에관한자료 1. 국제표준물질혹은타사표준물질을구매하여사용한경우, 아래의자료를제출한다. 가. 국제표준품또는기타사용된표준물질의확인서 (certificate) 나. 출처및근거자료 2. 자사표준물질을제작하여사용할경우, 다음의자료를제출한다. 가. 표준물질의농도별설정기준을입증할수있는시험자료및결과분석자료나. 표준물질관리방법및관리기록서 ( 정도관리포함 ) 검체보관및취급상 ( 온도, 습도등 ) 의조건설정근거자료 1. 시험결과를근거로하여, 검사에이용할수있는검체의취급방법, 보관조건및방법, 사용기간, 주의사항등에대하여기재한다. 이는원심분리조건등을포함한검체전처리과정및냉동및해동된검체의사용가능성및제한점등을포함한다. 2. 검체취급및보관조건에대한시험결과를제시한다. 이는제시된시간, 온도, 습도등의항목에대해유효하다고제시도니구간중몇단계에대해동일한검사결과를보임을입증해야한다. 이시험은제시된구간의양측한계치이상에서평가된결과이어야하며조건변화에따른결과의변화를제시하고평가에사용된

70 만족기준을함께기록한다. 3. 시험에사용된방법, 검체수, 검체범위, 표준농도, 계산법, 통계처리법, 허용 기준, 결과등을요약하여제시한다. 상관성평가 1. 일반사항가. 국내외허가된체외진단분석기용시약과의상관성을확인할수있는비교시험성적서를포함하여야한다. 다만, 측정원리및측정항목이새로운경우동일목적으로사용되는제품과비교할수있다. 나. 성능시험과정에서기허가제품과비교검사를실시하였다면그자료를정리하여상관성검사의결과로제시할수있다. 다. 추가적으로상관성평가가필요할경우, 아래의원칙을따른다. 2. 시험물질검체가. 다양한역가의표준물질과통계적으로해석가능한임상검체수를포함하여비교시험을수행한다. 나. 임상검체는기허가된방법이거나여타검증된방법으로검사되어검체의이력등이밝혀진검체를사용할것을권장한다. 다. 임상검체의경우다양한임상상을포함하는검체를포함하여비교하도록한다. 라. 정량검사의임상검체는측정범위내의다양한농도가포함되도록하고, 최소 40개이상의검체를시험하여야한다. 3. 시험방법가. 해당제품과측정원리및항목이가장유사한국내허가제품또는외국허가제품 ( 국내허가제품이없을시 ) 과의비교시험을실시한다. 나. 가능한 2개이상의회사제품과비교시험할것을권장한다. 다. 비교제품은각제품의사용방법에따라서시험한다. 라. 정량검사의경우각검사를 2회이상반복수행을권장한다. 마. 결과가불일치하는경우, 다른검사를통해불일치의원인을분석하고이에대한자료를제공하여야한다. 불일치의원인을분석할때는가능한확진방법 ( 염기서열분석검사등 ) 과비교한다

71 4. 결과제시가. 전체결과및특이환자그룹이있다면그룹별결과를제시한다. 나. 정량검사에대해서는기울기, 절편 ( 신뢰구간과함께 ), 상관계수및의학적결정치에서의편향을제시한다. 다. 정성또는반정량검사에대해서는양성과음성검체에대한비교검사와의 % 일치도를제시 ( 신뢰구간과함께 ) 한다. 라. 결과가불일치하는경우불일치의원인분석에대한자료를제출한다

72 참고문헌 1. Denter for Devices and Radiological Health in FDA Class II Special Controls Guideline: Nucleic Acid-Based In Vitro Diagnostic Devices for the Detection of Mycobacterium tuberculosis Complex in Respiratory Specimens. 2. Office of In vitro Diagnostic Device Evaluation and Safety in FDA Establishing the performance characteristics of In vitro diagnostic devices for the detection or detection and differentiation of influenza viruses, Guidance for industry and FDA staff. 3. Center for Devices and Radiological Health in FDA Guidance for the content of Premarket submissions for software contained in medical devices; Guidance for Industry and FDA staff. 4. Center for biologics Evaluation and Research in FDA In the Manufacture and Clinical Evaluation of In Vitro Tests to Detect Nucleic Acid Sequences of Human Immunodeficiency Viruses Types 1 and 2; Guidance for Industry. 5. Centeri for Devices and radiological health in FDA Nucleic Acid Based In Vitro Diagnostic Devices for Detection of Microbial Pathogens; Draft Guidance for Industry and FDA Staff. 6. Clinical and Laboratory Standards Institute User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline. EP12-A2. 7. Clinical and Laboratory Standards Institute Molecular Diagnostic 8. Clinical and Laboratory Standards Institute User Verification of performance for precision and trueness; Approved Guideline. EP14-A5. 9. Stability testing of in vitro diagnostic reagents (ISO 23640)

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104 순번 대상자 번호 발생기관 시작일 이상 발생명 이상 반응 발생일 연구자 확인일 중대함 정도 인과관 계 대상자 최종상태 1 AAAA BBBB CCCC DDDD EEEE FFFF GGGG

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111 ( 피험자또는피험자의대리인에게제공되는정보, 동의서서식, 피험자설명문및그밖의문서화된정보는의료기기법시행규칙별표3 의료기기임상시험관리기준제7호아목10) 에서정한다음의 20 가지정보사항으로기재한다 )

112 임상시험과관련하여발생한손상에대한피험자의치료비및치료방법등을제공하는원 칙과절차를수립하여제시한다. 피해자보상에대한규약에는보상기준, 보상제외기준, 보상절차, 보상방법, 보상수준등을포함하여기술한다. 다만, 해당임상시험과상관없이내원한환자의일상적검사에서획득한잔여검체를이용하여체외진단용의료기기 ( 시약 ) 의유효성 ( 성능 ) 을평가하는임상시험으로피험자에대한직접적인영향 ( 인체위해도 ) 이없는경우라면해당임상시험의피해자보상에대한규약은상기내용을기술하여 피해자보상에대한규약 은별도로규정하지않음을기술한다. 피해자보상규약에는적용대상이되는경우와보상제외의기준을가능한한구체화하도록한다. 임상시험을하려는자는임상시험의참여로인하여임상시험대상자의신체적인손상 ( 사망포함 ) 이발생한경우에대상자에게보상한다. 임상시험과신체적인손상과의인과관계가인정되지않는경우 ( 즉, 임상시험참여로인한손 상 이아닌경우 ) 는보상의대상에서제외할수있다. 임상시험의참여로인한대상자의신체적손상이발생할경우, 금전적보상에대하여확 정되기전이라도임상시험책임자 ( 위임받은시험담당자 ) 를통한적절한치료또는치료기회 를우선적으로제공한다. 임상시험용의료기기에의해발생한이상사례나이상사례처치과정에서발생된손상이있는경 우도보상대상으로고려한다. 해당이상사례로인한손상이예상되었으며임상시험대상자 ( 피험자 ) 가자발적으로해당임 상시험참여에동의하였다하더라도보상의대상으로고려한다. 임신부가임상시험대상자 ( 피험자 ) 로참여하는임상시험에서태아에게 임상시험참여로 인한손상 이발생한경우, 해당태아를임상시험대상자 ( 피험자 ) 로간주하고, 보상의대상 으로고려한다. 임상시험중이아니어도일어났을것이라고예상되거나판단되는사고또는사건등에기인한 것은보상의대상에서제외될수있다. 임상시험대상자 ( 피험자 ) 또는그보호자의시험자의지시사항및임상시험계획서미준수, 고의 또는중대한과실로발생한손상은보상액을줄이거나또는보상의대상에서제외될수있다. 임상시험책임자가임상시험대상자 ( 피험자 ) 에게발생한손상에대하여적절한의학적처치 를수행하여회복된경우는보상의대상에서제외할수있다