Surpass the limit of Polymerase Chain Reaction (PCR) PCR Enzyme Guide High Fidelity PCR 효소 범용적인 PCR 효소 특수목적을위한 PCR 효소 - Epigenetics - Multiplex PCR -

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정민 정
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1 Surpass the limit of Polymerase Chain Reaction (PCR) PCR Enzyme Guide High Fidelity PCR 효소 범용적인 PCR 효소 특수목적을위한 PCR 효소 - Epigenetics - Multiplex PCR - Direct PCR

2 High Fidelity PCR 효소 - NGS targeted sequencing, Cloning 에추천 High Fidelity PCR 효소, 왜 PrimeSTAR GXL DNA Polymerase 일까요? PrimeSTAR GXL DNA Polymerase는 PrimeSTAR HS를업그레이드하여주형 DNA에대한비특이적인결합을억제하고, 독자적인신장인자를포함하고있어기존의 high fidelity PCR 효소에서는볼수없는뛰어난신장성을가진효소이다. 따라서기존 high fidelity PCR 효소에서는증폭이어려웠던 GC rich 타겟, 고농도 cdna의저발현유전자검출등에최적이다. 높은정확성은기본, 뛰어난증폭효율겸비 PrimeSTAR GXL DNA Polymerase (Code R050A) / GXL Premix (Code R051A) [ 최대증폭길이 ] λdna: ~ 40 kb / human gdna: ~ 30 kb 긴단편증폭 넓은 template 적용범위 독자적인신장인자가포함되어있어감도와신장성이획기적으로향상 넓은범위의주형량, Long fragment, GC-rich, repeat sequence 에도높은증폭효율 최고수준의정확성을제공 PrimeSTAR Max DNA Polymerase (Code R045A) [ 최대증폭길이 ] λdna: ~ 15 kb / human gdna: ~ 6 kb 최고의정확도 Fast PCR PrimeSTAR 시리즈중가장높은정확성을나타내는효소 특별한신장인자로 extension 시간을대폭단축, 고속 PCR 가능 PrimeSTAR 시리즈의기본효소 PrimeSTAR HS DNA Polymerase (Code R010A) [ 최대증폭길이 ] λdna: ~ 28 kb / human gdna: ~ 8.5 kb 경제적인기본 HF 효소 높은 annealing 효율 높은증폭효율을갖춘 high fidelity 효소 정확한 PCR 은기본, 높은감도와특이성으로 PCR 증폭가능 Takara PCR Enzymes for NGS Next Generation Sequencing (NGS) 해석에서매우중요한 PCR! 목적에맞게효소를선택하세요. 타겟영역증폭 PrimeSTAR GXL DNA Polymerase (Code R050A) Library amplification SeqAmp DNA Polymerase (Code ) 길이가긴타겟도 bias 없이높은커버율로정확하게증폭 PrimeSTAR GXL 타사 Long fragment용 PCR효소 M M : HBB 2 : TP53 3 : BCL2 4 : EGFR 5 : IRS1 6 : AMPD 7 : DMD M : λ-hind III digest PrimeSTAR GXL 에서는약 10 kb 의유전자영역 7 종중모든타겟에서높은효율로증폭산물을얻을수있었다. SMARTer NGS kit 에최적화된고퀄리티효소 Library 내의모든유전자를 bias 최소화하여증폭 SMARTer Stranded RNA-Seq Kit 내에포함된 SeqAmp DNA Polymerase 로 cdna library 증폭한결과, RNA input 농도와관계없이유사한수율과순도로 library 가증폭되는것을확인하였다. 스테디셀러 뛰어난민감도와최고의증폭효율을지닌 긴단편이나 GC-rich 유전자증폭에최적 가장범용적인 PCR 효소 TaKaRa Ex Taq 시리즈 TaKaRa LA Taq 시리즈 TaKaRa Taq 시리즈 2

3 특수목적을위한 PCR 효소 - Multiplex PCR, 미생물검출등에적용 복잡한 Multiplex PCR 에최적 Multiplex PCR Assay Kit Ver.2 (Code RR062A) 높은반응특이성 고감도 high-plex 고속 PCR 용효소와 primer annealing 특이성을극도로높인 buffer 의조합으로최적의 multiplex PCR 실현 최대 200 개유전자 multiplex PCR 가능 실험예 : 10 종류의프라이머를이용한 Multiplex PCR A M M 1 2 B A: Primer set 1 (122 bp ~ 1,068 bp) B: Primer set 2 (155 bp ~ 1,967 bp) M: 100 bp DNA Ladder 1 : Multiplex PCR Assay Kit Ver.2 2 : A사동일타입의제품 3 : B사동일타입의제품 : 비특이적인증폭산물 Multiplex PCR Assay Kit Ver.2 를이용하였을때, 타겟유전자 10 종에대해타사동일한타입의제품보다특이성높은증폭결과를보다짧은시간에얻을수있었다. 미생물상 ( 균총 ) 해석에최적, 업그레이드된 Taq 이포함된 Low DNA 타입 Low DNA (Code R090A) Low DNA 고감도검출 숙주유래 (E.coli) DNA 의혼입을극도로억제한 premix 타입의 PCR 효소 미생물의고감도검출, 16S 미생물상 ( 균총 ) 분석, no template control 에서의증폭등백그라운드가해석에큰영향을미치는연구에최적 실험예 : 타사동일타입제품과성능비교 Low DNA A 사효소 (Low DNA 타입 ) B 사효소 (Low DNA 타입 ) M No template No template M M No template 백그라운드증폭없음 미량의주형도 백그라운드증폭없음 검출하지못함 백그라운드증폭없음 고감도로검출 소량검출 PCR 소요시간 (35 cycles) 58 분 PCR 소요시간 (35 cycles) 1 시간 49 분 PCR 소요시간 (35 cycles) 2 시간 5 분 주형 : E. coli genomic DNA Lane 타겟 : 16S rdna (348 bp) 1 : 10 0 / 2: 10 1 / 3: 10 2 / 4: 10 3 cells 해당 M : 100 bp DNA Ladder Low DNA 는 no template control 에서도백그라운드를잘억제하면서, 미량의샘플에서타사제품보다짧은시간에고감도로검출가능하다. 동결건조된 premix Dry-down PCR 효소의기본 높은증폭효율이필요할때 정확도가중요한 PCR 시 Lyophilized HS Taq High Yield PCR EcoDry Premix High Fidelity PCR EcoDry Premix 3

특수목적을위한 PCR 효소 - Direct PCR, Epigenetics 적용 업그레이드효소로 DNA 정제없이 direct PCR MightyAmp DNA Polymerase Ver.

FTA card M1 1 2 3 1 2 3 M2 1 2 3 4 5 6 주형 : Human EDTA 처리혈액또는 Heparin 처리혈액 (5 μl /25 μl반응액 ) 타겟 : DCLRE1A 1 kb 주형 : 지름 1.2 mm의펀치로자른 Mouse Blood FTA Card/ 25 μl반응액타겟 : Hbb-b1 542 bp 1 : MightyAmp Ver.

3 에서는혈액, 동 식물조직등생체시료의 direct PCR 성능이향상되었다. 또한일반적으로 DNA 정제가필요한혈액, 구강점막, 식물의잎등을도포한 FTA 카드, NucleoCard, 종이의 direct PCR 도가능하다.

4 특수목적을위한 PCR 효소 - Direct PCR, Epigenetics 적용 업그레이드효소로 DNA 정제없이 direct PCR MightyAmp DNA Polymerase Ver.3 (Code R076A) 고성능 direct PCR Additive 별첨 FTA card, EDTA blood, heparin blood 등다양한샘플의 direct PCR 에최적 비특이적증폭이나 smear band 를억제하는 Additive 시약별도포함 실험예 : 혈액및 FTA card 의 direct PCR EDTA 처리혈액 Heparin처리혈액 FTA card M M 주형 : Human EDTA 처리혈액또는 Heparin 처리혈액 (5 μl /25 μl반응액 ) 타겟 : DCLRE1A 1 kb 주형 : 지름 1.2 mm의펀치로자른 Mouse Blood FTA Card/ 25 μl반응액타겟 : Hbb-b1 542 bp 1 : MightyAmp Ver.2 ( 기존제품 ) 2 : MightyAmp Ver.3 Additive (-) 3 : MightyAmp Ver.3 Additive (+) 4 : 자사 Taq 계열효소 5 : A사효소 6 : B사 PCR 저해물질내성효소 M1 : DL2,000 DNA Marker M2 : 100 bp DNA Ladder 기존제품 (Ver.2) 과비교하여 Ver.3 에서는혈액, 동 식물조직등생체시료의 direct PCR 성능이향상되었다. 또한일반적으로 DNA 정제가필요한혈액, 구강점막, 식물의잎등을도포한 FTA 카드, NucleoCard, 종이의 direct PCR 도가능하다. Epigenetics 연구를위한 TaKaRa EpiTaq HS (for bisulfite-treated DNA) (Code R110A) Epigenetics 연구 Uracil (U) 이포함된 DNA 증폭 Methylation specific PCR (MSP) 에최적 Bisulfite 처리 DNA 의 hot start PCR 증폭에최적 실험예 : Bisulfite 처리 DNA 의 PCR 증폭 M M 주형 : Bisulfite 처리 * 한 HeLa genomic DNA (100 ng/50 μl반응액 ) 타겟 : CDH1, MLH1, BRCA1 gene 상류의 CpG island 영역 * MethylEasy Xceed Rapid DNA Bisulphite Modification Kit (Code GE004)) 사용 1 : CDH1 (153 bp) 2 : CDH1 (297 bp) 3 : MLH1 (136 bp) 4 : MLH1 (292 bp) 5 : BRCA1 (613 bp) 6 : BRCA1 (1,017 bp) M: 100 bp DNA Laddar TaKaRa EpiTaq HS (for bisulfite-treated DNA) 는 1 kb가넘는타겟을포함, 다양한사이즈의타겟영역에서잘증폭되는것을확인하였다. Carryover 오염으로인한 false positive 방지를위한 UNG 포함 PCR Kit, UNG Plus (Code R013S) Dye 포함 premix 경제적인 dye plus premix EmeraldAmp GT Hot start PCR용 EmeraldAmp 신장시간 10초의고속 PCR용 SapphireAmp Fast 고성능 Ex Taq premix Perfectshot Ex Taq (Loading dye mix) 4

5 Takara PCR polymerase - 목적에맞는 PCR 효소선택하기 Cloning 을위한정확한 PCR 일반적인 PCR Dye plus premix 로간편한 PCR 고성능 Premix PrimeSTAR GXL Premix TaKaRa Ex Taq EmeraldAmp GT Perfect Mix Pfu 보다높은정확도와편리한 premix 의만남 고효율, 고감도의기본효소 단순증폭확인용 신장속도와특이성이업그레이드된 Taq premix PrimeSTAR Max DNA Polymerase TaKaRa Taq SapphireAmp Fast 최고의정확도 Routine PCR 에최적 고속 PCR 용 dye plus premix 동결건조타입 비특이적인증폭억제 Multiplex PCR 고속 PCR High Yield/Fidelity PCR EcoDry Premix TaKaRa Ex Taq HS Multiplex PCR Assay Kit Ver. 2 SapphireAmp Fast Tube 에동결건조되어사용이편리 최대 200 쌍의 primer 도특이성높게한번에 PCR SpeedSTAR HS DNA Polymerase Lyophilized HS Taq Anti-Taq 을사용하여비특이적증폭억제 신장시간 10 초의고속 PCR 용효소 합리적인가격의동결건조타입 DNA 정제없이 Direct PCR 식품, 환경검사에최적 Low copy 유전자증폭 (DNA-free 증폭 ) Bisulfite 처리 DNA 의증폭 MightyAmp DNA Polymerase Ver. 3 PCR Kit, UNG plus Low DNA TaKaRa EpiTaq HS (for bisulfite-treated DNA) 동, 식물, 가공식품, FFPE, FTA 카드등다양한샘플적용가능 Carryover 오염방지를위한 UNG 포함 미생물연구, low copy 유전자증폭에최적 Epigenetics 연구메틸화 DNA 분석 5

6 Takara PCR polymerase 제품리스트 Takara PCR polymerase 제품리스트 적용 High fidelity PCR High yield PCR Long PCR Routine PCR High speed PCR Dye plus master mix 분주 / 동결건조형태 Low DNA polymerase UNG로 carryover 차단 Direct PCR Epigenetics 연구 Multiplex PCR NGS library amplification 제품명 Code 용량 PrimeSTAR GXL Premix R051A / R051B 200 회 / 800 회 PrimeSTAR GXL DNA Polymerase R050A / R050B 250 U / 1,000 U PrimeSTAR Max DNA Polymerase R045A / R045B / 400 회 PrimeSTAR HS DNA Polymerase R010A / R010B 250 U / 1,000 U PrimeSTAR HS (Premix) R040A / R040B / 400 회 PrimeSTAR HS DNA Polymerase with GC buffer R044A / R044B 250 U / 1,000 U TaKaRa Ex Taq Hot Start Version RR006A / RR006B 250 U / 1,000 U TaKaRa Ex Taq RR001A / RR001B 250 U / 1,000 U TaKaRa Ex Taq (Mg 2+ free buffer) RR01AM / RR01BM 250 U / 1,000 U Premix Taq (Ex Taq Version 2.0) (500 μl x 6 tube) RR003A 120 회 PerfectShot Ex Taq (Loading dye mix) RR005A 48 회 Premix Ex Taq Hot Start Version (500 μl x 5 tube) RR030A TaKaRa LA Taq Hot Start Version RR042A / RR042B 125 U / 500 U TaKaRa LA Taq RR002A / RR002B 125 U / 500 U TaKaRa LA Taq with GC Buffer RR02AG / RR02BG 125 U / 500 U TaKaRa LA Taq (Mg 2+ buffer 첨부 ) RR002M 250 U One Shot LA PCR Mix Ver.2.0 RR 회 TaKaRa Taq Hot Start Version R007A / R007B 250 U / 1,000 U Premix Taq Hot Start Version (500 μl x 5 tube) R028A TaKaRa Taq R001A / R001B 250 U / 1,000 U TaKaRa Taq (Mg 2+ free buffer) R001AM / R001BM 250 U / 1,000 U Premix Taq (TaKaRa Taq Version 2.0) (500 μl x 6 tube) R004A 120 회 Perfect Mix R300A / R300B / 400 회 TaKaRa PCR Amplification Kit R011 SapphireAmp Fast RR350A / RR350B 160 회 / 800 회 SpeedSTAR HS DNA Polymerase RR070A / RR070B 250 U / 1,000 U TaKaRa Z-Taq R006A / R006B 200 U / 800 U EmeraldAmp GT RR310A / RR310B 160 회 / 800 회 EmeraldAmp RR300A / RR300B 160 회 / 800 회 Lyophilized HS Taq PCR Mix RR058A / RR058B 24 회 / 96 회 High Yield PCR EcoDry Premix / 회 / 48 회 High Fidelity PCR EcoDry Premix / 회 / 48 회 Low DNA R090A PCR Kit, UNG plus R013S / R013A 50 회 / 200 회 MightyAmp DNA Polymerase Ver.3 R076A / R076B 250 U / 1,000 U MightyAmp Genotyping Kit R074A 200 회 TaKaRa EpiTaq HS (for bisulfite-treated DNA) R110A / R110B 250 U / 1,000 U Multiplex PCR Assay Kit Ver.2 RR062A / RR062B / 400 회 SeqAmp DNA Polymerase / 회 / 200 회 고객 ( 제품문의 ) 대전지사 지원센터 support@takara.co.kr ( 대전 충청지역제품주문 )

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