Ver.4 (KR) All about RT (cdna Synthesis) 8-11 Munpyeongseo-ro, Daedeok-gu, Daejeon 34302, Republic of Korea Tel: (Korea) (Internatio

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1 Ver.4 (KR) All about RT (cdna Synthesis) 8-11 Munpyeongseo-ro, Daedeok-gu, Daejeon 34302, Republic of Korea Tel: (Korea) (International) sales@bioneer.com

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3 Selection chart of Bioneer s cdna synthesis products RT Kits Application AccuPower RT AccuPower CycleScript RT AccuPower RocketScript RT AccuPower RocketScript Cycle RT AccuPower RocketScript RT, RNase H Minus Standard RT High Efficiency RT RT of Secondary Structured RNA Long kb RNA One-step RT-PCR Kits Application AccuPower RT-PCR AccuPower RocketScript RT-PCR AccuPower Dual-HotStart RT-PCR AccuPower Dual-HotStart RT-PCR (with UDG) AccuPower RocketPlex RT-PCR Standard RT-PCR RT-PCR of Secondary Structured RNA High Specificity & Sensitivity RT-PCR Multiplex RT-PCR Prevent Aircontamination of PCR Products One-step RT-qPCR Kits Application AccuPower Dual-HotStart RT-qPCR AccuPower GreenStar RT-qPCR RT-qPCR by Taqman Probe Method RT-qPCR by dsdna Binding Dye Method High Specificity & Sensitivity RT-qPCR RT Enzymes Application M-MLV RTase CycleScript RTase RocketScript RTase RocketScript RTase, RNase H Minus Standard RT High Efficiency RT RT of Secondary Structured RNA RT of long kb RNA 3

4 Bioneer Technology for high performance in cdna synthesis Cycle Temperature Reverse Transcription (CTRT) cdna 합성효율을극대화하기위한순환적역전사반응 고온에서 2 차구조형성을해소하여 full-length cdna 합성에적합 Primer 가포함되어있어 Template RNA 첨가만으로 cdna 합성 CTRT (Cycle Temperature Reverse Transcription) 는기존의역전사온도인 42 C 반응의한계를극복하고자바이오니아가독자적으로개발한특허기술입니다. 역전사효소에안정화제를첨가하여고온 (55 C) 에서활성을유지할수있기때문에, 저온에서 primer annealing을유도하고고온에서 template RNA 2차구조형성을해소할수있도록 2-3단계의순차적인온도조건을주는순환적역전사반응입니다. Conventional RT vs Bioneer s CTRT CTRT technology-applied products Product Name AccuPower CycleScript RT PreMix Cat. no K-2044 ~ K AccuPower RocketScript Cycle RT PreMix K-2201 ~ K-2204 CycleScript Reverse Transcriptase E-3131 ~ E-3132

5 Bioneer Technology for high performance in cdna synthesis RocketScript Reverse Transcriptase 고온에서도안정하게활성을유지하는 RTase 로서, 복잡한 2 차구조 RNA 의 cdna 도효과적으로합성 높은신장성및민감도를통해미량의 RNA 만으로도 cdna 합성가능 cdna 합성에서가장많이사용하는 M-MLV RTase 는열안정 성이낮아 42 C 에서 cdna 합성을진행하므로복잡한 2 차구 조를가진 RNA 의 cdna 합성이어렵습니다. 이를해결하기위해바이오니아는 50 C 이상의높은온도에 서활성을가지는 RocketScript Reverse Transcriptase 를개발하였습니다. 이제품은고객의실험조건에맞게 42 ~ 70 C 의다양한온도에서 cdna 합성이가능합니다. RocketScript technology-applied products Product Name Cat. no AccuPower RocketScript RT PreMix K-2101 ~ K-2104 AccuPower RocketScript Cycle RT PreMix K-2201 ~ K-2204 AccuPower RocketScript RT PreMix, RNase H Minus K-2221 ~ K-2224 AccuPower RocketScript RT-PCR PreMix K-2501 ~ K-2504 AccuPower RocketPlex RT-PCR PreMix K-2211 ~ K-2214 AccuPower Dual-HotStart RT-PCR PreMix K-6710 ~ K-6715 AccuPower Dual-HotStart RT-PCR PreMix (with UDG) K-6714 ~ K-6715 AccuPower GreenStar RT-qPCR PreMix / Master Mix (2X) K-6400 ~ K-6403 AccuPower Dual-HotStart RT-qPCR PreMix / Master Mix (2X) K-6704 ~ K-6707 RocketScript Reverse Transcriptase E-3141 ~ E-3142 RocketScript Reverse Transcriptase, RNase H minus E-3161 ~ E

6 Bioneer Technology for high performance in RT-PCR & RT-qPCR Dual-HotStart Technology RT 와 PCR/qPCR 반응에모두 hotstart 기술을적용하여비특이적반응최소화 10 copy 미만의 RNA 도검출가능한뛰어난민감도 한튜브내에서 cdna 합성과증폭을진행하여편리한 one-step RT-PCR & RT-qPCR Dual-HotStart Technology Inactive PPase Temp. increase Pi Pi RocketScript RTase Activated PPase Free Mg 2+ Free Mg2+ RT Reaction starts mrna 1 st hotstart reaction: Hotstart RT 기존 hotstart방식과는다른바이오니아만의 enzyme-mediated hotstart 방식으로저온에서발생하는비특이적반응물을제거하여정확한 cdna 합성결과를나타내며, annealing 단계이후에발생하는 PCR 저하현상을막아증폭효율이뛰어납니다. Dual-HotStart 기술에적용된 RocketScript RTase는 50 C 이상의온도에서활성을가지기때문에 enzyme-mediated hotstart를실현시키는핵심요소입니다. Inactive DNA polymerase Taq antibody Temp. increase Activated DNA polymerase + PCR Reaction starts Amplification of new DNA strands cdna 2 nd hotstart reaction: Hotstart PCR & qpcr cdna 증폭과정에는 antibody-based hotstart 방식의 HotStart Taq DNA polymerase 를적용하여, 상온에서는활성이없다가 95 C 에서활성화되어특이성이높은 PCR 산물을얻을수있습니다. Dual-HotStart technology-applied products 6 Product Name Cat. no AccuPower Dual-HotStart RT-PCR PreMix K-6710 ~ K-6713 AccuPower Dual-HotStart RT-PCR PreMix (with UDG) K-6714 ~ K-6715 AccuPower Dual-HotStart RT-qPCR PreMix / Master Mix (2X) K-6704 ~ K-6707

7 AccuPower RT PreMix 표준 cdna 합성 AccuPower RT PreMix 는 RNA 를 template 로하여 cdna 를합성 할때, reverse transcriptase, RNase inhibitor 등 cdna 합성에필 요한구성물질들을 PreMix type 으로건조시킨제품입니다. 따라 서실험자는 RNA, primer 및 D.W. 만을첨가하여 R T 반응을수 행할수있습니다. M-MLV Reverse Transcriptase 의 RNase H + 기 능에의해 cdna 합성후 template RNA 를제거해주기때문에 PCR 반응시잔존하는 template RNA 에의한영향을최소화하 였습니다. Ease-of-Use : cdna 합성에필요한모든구성물질이포함되어있어, 증폭하 고자하는 RNA, primer 및 D.W. 만을첨가하여바로 RT 반응을수행할수있습니다. cdna 합성이끝난반응물은 AccuPower PCR PreMix 을이용하여곧바로 PCR 반응을수행할수있습니다. Application - First-strand synthesis of cdna from RNA molecules (RT) - Random priming reaction - cdna library construction - Probe labeling - mrna 5 -end mapping by primer extension analysis - PCR - Real-Time qpcr Specifications - DNase activity: No - RNase activity: No - Fragment size: ~ 9 kb Experimental Data Stability : AccuPower RT PreMix 는반응혼합액에특수안정화물질을첨 가한뒤건조시킴으로써장기간보관가능하도록안정성을증 가시켰습니다. Reproducibility : 재현성있는결과를위해바이오니아의전제품은엄격한 ISO 품질시스템하에서생산됩니다. Reliability Test : 모든 template RNA 로부터정확하게 cdna 합성이가능하며재현성있는결과를확인할수있습니다. Figure 1. AccuPower RT PreMix 의민감도실험 (target : 5 - UTR region of HCV) Lane 1 : DNA Ladder (BM corp.) Lane 2 : negative control Lane 3, 4 : HCV positive serum Lane 5 : HCV negative serum 7

8 AccuPower CycleScript RT PreMix 높은효율의 cdna 합성 AccuPower CycleScript RT PreMix (dt20, dn12, or dn6) 는순환온도역전사반응 (CTRT, Cyclic Temperature Reverse Transcription) 이적용된제품입니다. 세계적으로인정받은순환온도역전사반응은합성효율을증가시킬뿐아니라 full-length cdna 합성에효과적입니다. 순환온도역전사반응은저온 (15 ~ 40 C) 에서 primer annealing 이진행되고고온 (50 ~ 55 C) 에서 template RNA 의 2 차구조형성을풀어주는 2~3 개 step 을 반복적으로적용하여기존의 42 C 역전사반응보다높은효율로 cdna 를합성할수있습니다. 반응에적합한농도의 Oligo dt20, dn6, dn12 primer 가포함된 제품을선택할수있어서사용자는 template RNA 만넣어손쉽게 cdna 를합성할수있습니다. Application - Sequencing single and double-strand DNA or RNA - Random priming reaction - cdna library construction - Probe labeling - mrna 5 -end mapping by primer extension analysis - PCR - Real-Time qpcr Specifications - DNase activity: No - RNase activity: No - Fragment size: ~ 9 kb Experimental Data Flexible Reaction Conditions : 순환온도역전사반응과더불어 22~55 C 내의단일온도에서역 전사반응이가능합니다. High Stability : 안정화물질이포함된건조제품으로 RTase의열안정성증가로 55 C까지역전사반응이가능하여 productivity를증가시켰습니다. Controllable Reaction Time : 반응시간은증폭하려는유전자의 copy 수와크기에따라달라질수있습니다. High copy gene의경우, 10분의역전사반응으로도충분한양의 cdna를합성할수있습니다. Figure 1. 단일온도역전사반응조건과순환온도역전사반응조건의비교 42 C 와 55 C 의단일온도역전사반응과 37 C, 50 C 2 step 순환온도역전사반응입니다. HeLa 세포에서 total RNA 를추출하여 human transferrin receptor 유전자의 800 bp, 1.5 kb, 2.0 kb, 2.6 kb fragment 를확인했습니다. AccuPower CycleScript RT PreMix series (dt20 & dn12) 는단일온도역전사반응조건보다순환온도역전사반응조건에서뛰어난증폭효율을보입니다. Reproducibility : 재현성있는결과를위해바이오니아의전제품은엄격한 ISO 품 질시스템하에서생산됩니다. 8 Ease-of-Use : Primer 를비롯한 cdna 합성에필요한모든구성물질이포함되어있어, 증폭하고자하는 RNA 와 D.W. 만을첨가하여바로 RT 반응을수행할수있습니다.

9 AccuPower RocketScript RT PreMix 2 차구조 RNA 의 cdna 합성 AccuPower RocketScript RT PreMix 는바이오니아가단백질공학을적용하여개발한 Thermostable RTase (RocketScript Reverse Transcriptase) 를사용하여기존에어려웠던복잡한 2 차구조 RNA 의 cdna 합성을효과적으로수행할수있는제품 입니다. M-MLV RTase 는고온에서활성을잃어저온 (42 C) 에서 RT 를 수행해야되기때문에 2 차구조 RNA 의 cdna 합성이어렵습니 다. 열안정성을가진 RocketScript RTase 는고온 (70 C) 에서도활성을유지하여 2 차구조 RNA 를풀어내기때문에 full-length cdna 합성에용이합니다. Thermostable Activity : 70 C 에서도활성을갖는뛰어난열안정성의 RocketScript RTase 적용으로 2 차구조 RNA 의 cdna 합성에적합합니다. cdna 합성온도는 42 ~ 70 C 까지고객의실험조건에맞게다 양한온도로설정할수있어효과적으로 cdna 를합성할수있 습니다. Reproducibility : 재현성있는결과를위해바이오니아의전제품은엄격한 ISO 품 질시스템하에서생산됩니다. Ease-to-Use : Thermostable Reverse Transcriptase, RNase inhibitor 등 cdna 합성에필요한모든구성물질이포함되어있어, 증폭하 고자하는 RNA, primer 및 D.W. 만을첨가하여바로 RT 반응을 수행할수있습니다. Application - First-strand synthesis of cdna from RNA molecules (RT) - Random priming reaction - cdna library construction - Probe labeling - mrna 5 -end mapping by primer extension analysis - PCR - Real-Time PCR Specifications - DNase activity: No - RNase activity: No - Fragment size: ~ 10 kb Experimental Data Figure 1. AccuPower RocketScript RT PreMix 와타사 M-MLV RTase 를이용한민감도비교테스트 HeLa 세포로부터 GAPDH 유전자를 AccuPower RocketScript RT PreMix 와타사 M-MLV RTase 로역전사하여민감도를비교하였습니다. 각 100 ng 부터 1/10 희석하여 10 fg RNA 를사용하였고, 동량 loading 하여전기영동수행한결과입니다. Lane 1: 10 fg Human total RNA from HeLa cell Lane 2: 100 fg Human total RNA from HeLa cell Lane 3: 1 pg Human total RNA from HeLa cell Lane 4: 10 pg Human total RNA from HeLa cell Lane 5: 100 pg Human total RNA from HeLa cell Lane 6: 1 ng Human total RNA from HeLa cell Lane 7: 10 ng Human total RNA from HeLa cell Lane 8: 100 ng Human total RNA from HeLa cell 9

10 AccuPower RocketScript Cycle RT PreMix 높은효율로 2 차구조 RNA 의 cdna 합성 AccuPower RocketScript Cycle RT PreMix 는바이오니아가개발한 Thermostable RTase (RocketScript Reverse Transcriptase) 와순환온도역전사반응 (CTRT, Cyclic Temperature Reverse Transcription) 기술이융합된차세대 cdna synthesis 용제품 입니다. 이제품은고온 (70 C) 에서도활성을유지할수있는 RocketScript RTase 를순환온도역전사반응에사용하기때문에 더높은온도에서역전사반응을진행하여강한 2 차구조를가진 RNA 들도효과적으로 full-length cdna 로합성할수있습니다. 반응효율이높아 10 fg 의 human total RNA 에서도성공적으로 cdna 합성을할수있습니다. 반응에적합한농도의 Oligo dt20, dn6, dn12 primer 가포함된 제품을선택할수있어서사용자는 template RNA 만넣어손쉽게 cdna 합성을할수있습니다. Application - First-strand synthesis of cdna from RNA molecules (RT) - Random priming reaction - cdna library construction - Probe labeling - mrna 5 -end mapping by primer extension analysis - PCR - Real-Time PCR Specifications - DNase activity: No - RNase activity: No - Fragment size: ~ 10 kb Experimental Data Sensitivity & Efficiency : 순환온도역전사반응과 Thermostable RTase (RocketScript RTase) 의융합기술은민감도와효율을증가시켜 cycle 수를조 절하여낮은농도의 RNA 로부터손쉽게 cdna 를합성할수있 습니다. Thermostable Activity : 70 C 에서도활성을갖는뛰어난열안정성의 RocketScript RTase 적용으로 2 차구조 RNA 의 cdna 합성에적합합니다. cdna 합성온도는 42 ~ 70 C 까지고객의실험조건에맞게다 양한온도로설정할수있어효과적으로 cdna 를합성할수있 습니다. Flexible Reaction Conditions : 순환온도역전사반응과더불어 22~55 C 내의단일온도에서역 전사반응이가능합니다. Figure 1. AccuPower RocketScript Cycle RT PreMix 와 M-MLV RTase 를이용하여 cdna 합성후, 각 target 유전자를증폭하여비교한결과 cdna 합성조건 : 각각 42 C, 50 C, 60 C 에서 1 시간 incubation, 95 C 에서 5 분 deactivation M: 100 bp DNA Ladder (Cat. no, D-1030) A: M-MLV Reverse Transcriptase B: AccuPower RocketScript Cycle RT PreMix with Oligo dt20 Lane 1: 100 ng Human total RNA from HeLa cell Lane 2: 10 ng Human total RNA from HeLa cell 10 Ease-of-Use : Thermostable Reverse Transcriptase, RNase inhibitor, primer 등 cdna 합성에필요한모든구성물질이포함되어있어 증폭하고자하는 RNA 와 D.W. 만을첨가하여바로 RT 반응을 수행할수있습니다. Reproducibility : 재현성있는결과를위해바이오니아의전제품은엄격한 ISO 품질시스템하에서생산됩니다.

11 AccuPower RocketScript RT Premix, RNase H Minus Long RNA 의고효율 cdna 합성 AccuPower RocketScript RT PreMix, RNase H Minus 는바이오니아에서독자적으로개발한 RocketScript RTase, RNase H Minus 를사용한제품입니다. RNase H activity 는 cdna 합성 시에 cdna 와 hybrid 된주형의 RNA 를제거하는역할을하는데 너무강력한 RNase H 의활성을갖게되면 cdna 합성신장 부위에도영향을주기때문에긴 size 의 cdna 를합성할수없게됩니다. AccuPower RocketScript RT PreMix, RNase H Minus 는독자적유전공학기술을이용하여 RNase H 활성을제거하여 long target RNA 의 cdna 합성에유용하며신장성및민감도가 뛰어나 1 pg 의 human total RNA 에서도성공적으로 cdna 를 합성할수있습니다. 또한 RocketScript Reverse Transcriptase (RNase H Minus), RNase inhibitor 등 cdna 합성에필요한물질들을반응 tube 에 건조시켜 template RNA 및 primer, D.W. 의첨가만으로손쉽게 cdna 를합성할수있는편리한제품입니다. Thermostable Activity: 70 C 에서도활성을갖는뛰어난열안정성의 RocketScript RTase 적용으로 2 차구조 RNA 의 cdna 합성에적합합니다. cdna 합성온도는 42~70 C 까지다양한온도로설정할수있어 효과적으로 cdna 를합성할수있습니다. Eliminated RNase H activity: RocketScript RTase, RNase H Minus 는 cdna 합성과정에서 생성되는 RNA/DNA hybrid 를분해하는 RNase H 활성이없어긴 target RNA 의 cdna 합성에적합하고높은민감도를가지므로 낮은농도의 RNA 에서도향상된성능으로증폭할수있습니다. Application - First-strand synthesis of cdna from RNA molecules (RT) - Random priming reaction - cdna library construction - Probe labeling - mrna 5 -end mapping by primer extension analysis - PCR - Real-Time qpcr Specifications - DNase activity: No - RNase activity: No - RNase H activity: No - Fragment size: ~ 12.5 kb Experimental Data Figure 1. Performance of the AccuPower RocketScript RT PreMix, RNase H Minus in two-step RT-PCR. 500 bp~11 kb 의 RNA 를이용하여 cdna 합성후, PCR 결과확인 M1: Lambda/Hind III marker (Cat. no, D-1050) M2: 1 kb DNA Ladder (Cat. no, D-1040) Sensitivity: 민감도가뛰어나 1 pg 의 human total RNA 에서도효과적으로 cdna 를합성할수있습니다. Ease-of-Use: Thermostable Reverse Transcriptase, RNase inhibitor, primer 등 cdna 합성에필요한모든구성물질이포함되어있어, 증폭하고자하는 RNA 와 D.W. 만을첨가하여바로 RT 반응을수행할수있습니다. Reproducibility: 재현성있는결과를위해바이오니아의전제품은엄격한 ISO 품질 시스템하에서생산됩니다. Figure 2. High synthesis rate at 50 C using Bioneer AccuPower RocketScript RT PreMix, RNase H Minus. M: 1 kb DNA Ladder (Cat. no, D-1040) Lane 1: RT 10 min Lane 2: RT 20 min Lane 3: RT 30 min Lane 4: RT 60 min 11

12 AccuPower RT-PCR PreMix 표준 One-step RT-PCR AccuPower RT-PCR PreMix 는 low-copy RNA (viral RNA) 나 mrna 를주형으로하는 cdna 합성과 PCR 의 2 단계반응을한 tube 내에서연속적으로수행함으로써간편하고경제적으로 실험할수있는 one-step RT-PCR 제품입니다. RT-PCR 에사용되는모든시약을동결건조시키는바이오니아의 특허기술을적용하여안정성이뛰어나며, 재현성이높은 실험결과를얻을수있습니다. 각 tube 에 1 회사용분량이분주된 single use 제품으로써 master mix 제품의반복사용에따른 cross contamination 을 방지할수있습니다. Application - First-strand synthesis of cdna from RNA molecules (RT) - RT-PCR - cdna library construction - Gene expression analysis Specifications - 5 -> 3 exonuclease : No - 3 -> 5 exonuclease : No - 3 A overhang : Yes - Fragment size: ~ 5 kb Ease-of-Use: cdna 합성과증폭에필요한모든구성물질이포함되어있어, 증폭하고자하는 RNA, primer 및 D.W. 만을넣어바로 one-step RT-PCR 을수행할수있습니다. 또한, 전기영동에필요한 tracking dye 및침강제가포함되어있어별도로 loading buffer 를넣을 필요가없습니다. Reproducibility : 재현성있는결과를위해바이오니아의전제품은엄격한 ISO 품질시스템하에서생산됩니다. Stability : AccuPower RT-PCR PreMix 는 PCR 반응혼합액에특수안정화 물질을첨가한뒤건조시킴으로써장기보관을위한안정성을 증가시켰습니다. Experimental Data Figure 1. AccuPower RT-PCR PreMix 와타회사제품의 RT-PCR 제품을이용한민감성비교테스트 PSTVd 10 9 ~10 3 copy 로 RT-PCR 을하여동량을전기영동한결과입니다. Lane 1: 10 9 copy Lane 2: 10 8 copy Lane 3: 10 7 copy Lane 4: 10 6 copy Lane 5: 10 5 copy Lane 6: 10 4 copy Lane 7: 10 3 copy Lane 8: NTC Reliability Test : 모든 template RNA 로부터정확하게 RT-PCR 이가능하며재현성 있는결과를확인할수있습니다. 12 Figure 2. Human Total RNA 를단계별희석하여 AccuPower RT-PCR PreMix 의 4 반복재현성을확인 Lane 1: 10 ng Human total RNA from HeLa cell Lane 2: 1 ng Human total RNA from HeLa cell Lane 3: 100 pg Human total RNA from HeLa cell Lane 4: 10 pg Human total RNA from HeLa cell

13 AccuPower RocketScript RT-PCR PreMix 2 차구조 RNA 의 One-step RT-PCR AccuPower RocketScript RT-PCR PreMix 는바이오니아가개발한 Thermostable RTase (RocketScript Reverse Transcriptase) 와 Top DNA polymerase, dntp, reaction buffer 등을동결건조시킨 one-step RT-PCR 제품입니다. RocketScript Reverse Transcriptase 를이용하여고온에서 RT 반응을수행함으로써 RNA 2 차구조가강하게형성된 template RNA 에서도효과적으로 RT- PCR product 을얻을수있습니다. RocketScript Reverse Transcriptase 는신장성이매우뛰어나 low copy RNA 로부터 cdna 를높은효율로합성할수있습니다. 각 tube 에 1 회사용분량이분주된 single use 제품으로써 master mix 제품의반복사용에따른 cross contamination 을방지할 수있습니다. Application - First-strand synthesis of cdna from RNA molecules (RT) - RT-PCR - cdna library construction - Gene expression analysis Specifications - 5 -> 3 exonuclease : No - 3 -> 5 exonuclease : No - 3 A overhang : Yes - Fragment size : ~ 6 kb Experimental Data Long kb RT-PCR : Human total RNA 100 ng 으로 full-length size 가 5.2 kb (target: human TFRC) target 도 one-step RT-PCR 이가능합니다. Sensitivity : AccuPower RocketScript RT-PCR PreMix 은 cell, tissue 등에 서추출한 human total RNA 의 10 pg (target:ß-actin) 에서도 one-step RT-PCR 이가능한제품입니다. Thermostable Activity : 70 C 에서도활성을갖는뛰어난열안정성의 RocketScript RTase 적용으로 2 차구조 RNA 의 cdna 합성에적합합니다. cdna 합성온도는 42 ~ 70 C 까지고객의실험조건에맞게다 양한온도로설정할수있어효과적으로 cdna 를합성할수있 습니다. Figure 1. AccuPower RocketScript RT-PCR PreMix 와타사 RT-PCR kit 를이용한민감도비교실험 100 ng~10 pg 까지 1/10 씩 serial dilution 한 2 차구조 RNA template 를이용하여 RT-PCR 을수행하였습니다. 각제품에맞는조건으로수행했을때, RocketScript 가타사대비 1/10~1/10000 농도에서도증폭이가능합니다. Lane 1: 10 ng Human total RNA from HeLa cell Lane 2: 1 ng Human total RNA from HeLa cell Lane 3: 100 pg Human total RNA from HeLa cell Lane 4: 10 pg Human total RNA from HeLa cell Reproducibility : 재현성있는결과를위해바이오니아의전제품은엄격한 ISO 품 질시스템하에서생산됩니다. Ease-of-Use : Thermostable Reverse Transcriptase, RNase inhibitor 등 cdna 합성에필요한모든구성물질이포함되어있어, 증폭하고자하는 RNA, primer 및 D.W. 만을첨가하여바로 RT-PCR 반응을수행할 수있습니다. 또한, 전기영동에필요한 tracking dye 및침강제가 포함되어있어별도로 loading buffer 를넣을필요가없습니다. 13

14 AccuPower Dual-HotStart RT-PCR PreMix 높은특이성, 민감도로복잡한 2 차구조 RNA 의 One-step RT-PCR AccuPower Dual-HotStart RT-PCR PreMix 는종래에비특이 적으로일어나는역전사반응의문제점들을근본적으로개선한 HotStart 역전사기술이적용된제품입니다. 원하는 RNA 만선택적으로역전사하므로민감도가획기적으로개선되어 template RNA 양이극미량인시료에효과적입니다. 또한선택적 으로역전사된 cdna 에 Hotstart PCR 반응을수행하여원하는 target 유전자를고감도로정확하게검출할수있는 one-step RT-PCR 제품입니다. 고감도 one-step RT-PCR 제품을이용하여 RNA 를대상으로하는각종바이러스검사및 gene expression 분석실험등에유용하게사용할수있습니다. 각 tube 에 1 회 사용분량이분주된 single use 제품으로써 master mix 제품의 반복사용에따른 cross contamination 을방지할수있습니다. Application - Low copy viral/bacterial pathogen load determination in an earlier stage - Low copy mrna amplification - Low copy target RNA quantification - RNA amplification for microarray and NGS Specifications - 5 to 3 exonuclease : Yes - 3 to 5 exonuclease : No - 3 A overhang: Yes - Fragment size: ~ 3 kb Experimental Data Specificity : Pyro-Hotstart RT 반응과 Hotstart PCR 을이용한세계최초 Dual-HotStart RT-PCR 반응은 target 유전자만을정확하게검 출할수있도록최적화된제품입니다. Sensitivity: 일반적으로검출이어려운극미량의 target template가고농도의 RNA에포함되어있는시료에서도검출이가능하며, 반응성이우수하여다양한종류의 PCR inhibitor를포함하고있는혈액, 토양시료의 template RNA에서도정확한 RT-PCR 결과를얻을수있습니다. Figure 1. AccuPower Dual-HotStart RT-PCR PreMix 와경쟁사 RT- PCR kit 를이용하여고농도의간섭 RNA 속에포함된 target RNA 에대해특이성비교결과. Lane 1 : HCV 10 7 Lane 2: HCV 10 6 Lane 3: HCV 10 5 Lane 4: HCV 10 4 Reproducibility: 바이오니아의전제품은엄격한 ISO 품질시스템하에서생산 됩니다. 14 Ease-of-Use: Thermostable DNA polymerase, RTase, dntps 등 RT-PCR 반 응에필요한모든구성물질이포함되어있어, template RNA 와 primer 만을첨가하여 RT-PCR 반응을수행할수있습니다. 또한, 전기영동에필요한 tracking dye 및침강제가포함되어있어별 도로 loading buffer 를넣을필요가없습니다. Figure 2. AccuPower Dual-HotStart RT-PCR PreMix 와경쟁사 RT- PCR kit 을이용하여 PGK1 gene 에대해 RT-PCR 후, 민감도비교결과. Lane 1: 10 ng of human RNA Lane 2: 1 ng of human RNA Lane 3: 100 pg of human RNA Lane 4: 10 pg of human RNA

15 AccuPower Dual-HotStart RT-PCR PreMix (with UDG) 높은특이성, 민감도로 2 차구조 RNA 의 One-step RT-PCR, 반복적인 PCR 에의한오염방지 AccuPower Dual-HotStart RT-PCR PreMix (with UDG) 는종래에비특이적으로일어나는역전사반응의문제점들을근본적으로개선한 hotstart 역전사기술과 PCR 실험시야기될수있는 carryover contamination 이나 crossover contamination 문제를해결하는 uracil DNA glycosylase system 을함께적용한제품입니다. 본제품은 primer-dimer 형성을최소화하여반응특이성과 PCR 증폭효율을높임과동시에위양성문제를해결하여각종바이러스검사및 gene expression 분석실험에유용하게사용할수있는고감도 one-step RT-PCR 제품입니다. 각 tube 에 1 회사용분량이분주된 single use 제품으로써 master mix 제품의반복사용에따른 cross contamination 을방지할수있습니다. Prevention of Carryover Contamination : 임상진단이나실험시, PCR 반응에있어심각한문제를야기할수있는 crossover contamination 이나 carry over contamination 을최소화할수있습니다. Uracil DNA Glycosylase 는 DNA 가닥내 N-glycosylic 결합을가수분해함으로써 uracil 을제거하는기능을갖고있으므로 dutp 를이용하여 PCR 을수행하여야합니다. 역전사과정에서 uracil DNA glycosylase 가활성화되어 uracil 이섞인가닥을제거하고, PCR 과정에서불활성화됩니다. Application - Low copy viral/bacterial pathogen load determination in an earlier stage - Low copy mrna amplification - Low copy target RNA quantification - RNA amplification for microarray and NGS Specifications - 5 to 3 exonuclease : Yes - 3 to 5 exonuclease : No - 3 A overhang: Yes - Fragment size: ~ 3 kb Experimental Data RNA template (not including uracil base) Specificity : Pyro-Hotstart RT 반응과 Hotstart PCR 을이용한세계최초 Dual-HotStart RT-PCR 반응은비특이적반응을제거하여 target 유전자만을정확하게검출할수있도록최적화된제품입니다. Sensitivity : 일반적으로검출이어려운극미량의 target RNA template 이포함되어있는시료에서도검출이가능합니다. Figure 1. AccuPower Dual-HotStart RT-PCR PreMix(with UDG) 와 AccuPower Dual-HotStart RT-PCR PreMix을이용하여 uracil base에 의한 carryover contamination 방지확인실험. Lane 1: 10 7 Lane 2: 10 6 Lane 3: 10 5 Lane 4: 10 4 Lane 5: 10 3 Lane 6: 10 2 Lane 7: 10 Lane 8: NTC Reproducibility : 바이오니아의전제품은엄격한 ISO 품질시스템하에서생산됩니다. Ease-of-Use : Thermostable DNA polymerase, RTase, dntps 등 RT-PCR 반응에필요한모든구성물질이포함되어있어, template RNA, primer 및 D.W. 만을첨가하여 RT-PCR 반응을수행할수있습니다. 또한, 전기영동에필요한 tracking dye 및침강제가포함되어있어별도로 loading buffer 를넣을필요가없습니다. 15

16 AccuPower RocketPlex RT-PCR PreMix 한튜브에서한반응으로여러 Target 을동시검출하는 Multiplex RT PCR AccuPower RocketPlex RT-PCR PreMix 는하나의 tube 내에서 두개이상의 target gene 의 cdna 합성과 PCR 을연속적으로 수행할수있도록고안된제품입니다. 최대 10 개 target RNA 를 동시에 one-step RT-PCR 할수있습니다. M-MLV RTase 는고온 에서활성을잃어저온 (42 C) 에서 RT 를수행해야되기때문에 강한 2 차구조 RNA 의 cdna 합성이어렵습니다. 바이오니아가 개발한열안정성을가진 RocketScript RTase 는고온 (70 C) 에서도활성을유지하여 2 차구조 RNA 를풀어내기때문에 fulllength cdna 합성에용이합니다. 각 tube 에 1 회사용분량이 분주된 single use 제품으로써 master mix 제품의반복사용에 따른 cross contamination 을방지할수있습니다. Application - Multiplex RT-PCR - Low copy detection - Gene expression analysis Specifications - 5 -> 3 exonuclease : No - 3 -> 5 exonuclease : No - 3 A overhang : Yes - Fragment size : ~ 1 kb Experimental Data Multiplex Performance : 하나의 tube 내에 1 ~ 10 개의원하는 primer 만첨가하면동시에최대 10 개의 target gene 에대하여 cdna 합성및증폭이가능합니다. Thermostable Activity : 70 C 에서도활성을갖는뛰어난열안정성의 RocketScript RTase 적용으로 2 차구조 RNA 의 cdna 합성에적합합니다. cdna 합성온도는 42 ~ 70 C 까지고객의실험조건에맞게다 양한온도로설정할수있어효과적으로 RT-PCR 을수행할수 있습니다. Specificity : HotStart Top DNA polymerase 를이용하여 PCR 반응에있어 특이성을높였습니다. Figure 1. AccuPower RocketPlex RT-PCR PreMix 를이용한 Single RT-PCR and Multiplex RT-PCR 과실험 M: 25/100 bp Mixed DNA Ladder (Cat. no. D-1020) Reproducibility : 재현성있는결과를위해바이오니아의전제품은엄격한 ISO 품 질시스템하에서생산됩니다. 16 Ease-of-Use : Thermostable DNA polymerase, dntps 등 RT-PCR 반응에필요한모든구성물질이포함되어있어, template RNA, primers 및 D.W. 만첨가하여 multiplex PCR 반응을수행할수있습니다. 또한, 전기영동에필요한 tracking dye 및침강제가포함되어있 어별도로 loading buffer 를넣을필요가없습니다.

17 AccuPower GreenStar RT-qPCR PreMix & Master Mix dsdna Binding Dye 방식의 One-step RT-qPCR AccuPower GreenStar RT-qPCR PreMix & 2X Master Mix 는다양한종류의시료에서원하는 target 유전자를정확하게검출할수있는제품입니다. ds DNA binding dye 를이용한 qpcr 제품으로, 매사이클마다형광값을측정하여실시간으로유전자 증폭을모니터링할수있습니다. 극미량의 template RNA 에서도 target RNA 의 cdna 만선택적으로합성하여 RT-qPCR 결과를얻을수있으므로, 각종 RNA 바이러스검사및 gene expression 정량분석실험등에유용하게사용할수있습니다. 본제품은 동결건조된 PreMix type 또는 2X freezed Master Mix type 으로 제공됩니다. Specifications - 5 -> 3 exonuclease activity: Yes - 3 -> 5 exonuclease activity : No - 3 A overhang : Yes Experimental Data High Sensitivity & High Specificity : 일반적으로검출이어려운극미량의 target template 가고농도의 RNA 에포함되어있는시료에서도검출이가능합니다. Hotstart PCR 을이용한 qpcr 반응은정확한 target 유전자만을검출할수 있도록최적화되었습니다. Instrument Compatibility : Master Mix type 은여러종류의실시간 PCR 장비에대해최적 화된결과를얻을수있습니다. Reproducibility : 재현성있는결과를위해바이오니아의전제품은엄격한 ISO 품질시스템하에서생산됩니다. Ease-of-Use : Thermostable DNA polymerase, RTase, dntps 등 RT-qPCR 반응에필요한모든구성물질이포함되어있어, template RNA, primers, D.W. 만첨가하여 RT-qPCR 반응을수행할수있습니다. Application - Low copy viral/bacterial pathogen load determination in an earlier stage - Low copy mrna amplification - Low copy target RNA quantification - RNA amplification for microarray and NGS RNA (ng) BIONEER Supplier A Supplier B NTC UD Figure 1. AccuPower GreenStar RT-qPCR PreMix 와경쟁사 one-step RT-qPCR master mixture 성능비교 Target gene: CTN1 Instrument: Exicycler 96 V4 AccuPower GreenStar RT-qPCR PreMix는비특이적반응없이정확하게 target RNA를검출합니다. 17

18 AccuPower Dual-HotStart RT-qPCR PreMix & Master Mix RT 와 qpcr 에 Hotstart 기술을적용하여높은특이성 / 민감도로 One-step RT-qPCR AccuPower Dual-HotStart RT-qPCR PreMix 는종래에비특 이적으로일어나는역전사반응의문제점들을근본적으로개선 한 Hotstart 역전사기술을적용한제품입니다. 그리고형광염료 가표지된 dual-labeled probe 를이용한 qpcr 제품으로, 매사 이클마다형광값을측정하여실시간으로유전자증폭을모니터 링할수있습니다. 극미량의 template RNA 에서도 target RNA 의 cdna 만선택적 으로합성하여 RT-qPCR 결과를얻을수있으므로, 각종 RNA 바 이러스검사및 gene expression 정량분석실험등에유용하게 사용할수있습니다. 본제품은동결건조된 PreMix type 또는 2X freezed Master Mix type 으로제공됩니다. High Sensitivity & High Specificity : 일반적으로검출이어려운극미량의 target template 가고농도의 RNA 에포함되어있는시료에서도검출이가능합니다. Pyro- Hotstart RT 반응과 Hotstart PCR 을이용한세계최초 Dual- HotStart RT-qPCR 반응은정확한 target 유전자만을검출할수 있도록최적화되었습니다. Multiplexing : 여러종류의형광 dye (probe) 와호환성이뛰어나여러종류의 target gene 을검출할수있습니다. Reproducibility : 재현성있는결과를위해바이오니아의전제품은엄격한 ISO 품질시스템하에서생산됩니다. Application - Low copy viral/bacterial pathogen load determination in an earlier stage - Low copy mrna amplification - Low copy target RNA quantification - RNA amplification for microarray and NGS Specifications - 5 -> 3 exonuclease activity: Yes - 3 -> 5 exonuclease activity : No - 3 A overhang : Yes Experimental Data Dual-HotStart Conventional HotStart Concentration Concentration Figure 1. AccuPower Dual-HotStart RT-qPCR PreMix를이용한 specificity 비교 HCV target RNA를 10 6 부터 10 copy까지 1/10씩 serial dilution하여 human total RNA의간섭을확인했습니다. Human total RNA 는 single hotstart method에서비특이반응의영향을크게받지만, Dual-HotStart RT-qPCR PreMix는정확하게 target RNA만을역전사증폭하였습니다. Nonspecific bands Target Ease-of-Use : Thermostable DNA polymerase, RTase, dntps 등 RT-qPCR 반응에필요한모든구성물질이포함되어있어, template RNA, primers, probe 및 D.W. 만첨가하여 RT-qPCR 반응을수행할 수있습니다. 18

19 cdna 합성을위한다양한 Reverse Transcriptase ** M-MLV Reverse Transcriptase 표준 cdna 합성 Moloney Murine Leukemia Virus (M-MLV) 로부터유래되었으며, RNA dependent DNA polymerase 로써 RNA 를주형으로 first strand cdna 를합성할수있습니다. - Optimized 5X buffer : 길이가긴 cdna 합성이 10 분이내에, 최대 9 kb 까지가능합니다. - Reproducibility : 재현성있는결과를위해바이오니아의전제품은엄격한 ISO 품질시스템하에서생산됩니다. **CycleScript Reverse Transcriptase 높은효율의 cdna 합성 CycleScript Reverse Transcriptase (CTase) 는고순도로정제된역전사효소에안정화물질을첨가하여, 55 C 에서도활성이유지되어고온에서도 cdna 합성이가능합니다. - Stability : RNase, DNase & proteinase free 한 reverse transcriptase (M-MLV) 에안정화물질을첨가하여효소의열안정성을높였습니다. - High Efficiency : 저온에서 RNA 에대한 primer annealing 을유도하고, 고온에서 RNA template 의 2 차구조를해소하여 cdna 합성율의증가와 full length cdna 합성이가능합니다. **RocketScript Reverse Transcriptase 복잡한 2 차구조 RNA 의 cdna 합성 RocketScript RTase 는 thermostable activity (42 ~ 70 C) 를갖고있어강한 2 차구조를갖는 complex 구조 RNA 도효과적으로 full-length cdna 합성을할수있습니다. - Thermostable Activity : 50 C 이상의높은온도에서도활성을갖는 Reverse Transcriptase 로 42 ~ 70 C 까지고객의실험조건에맞게다양한온도에서 RT 반응을수행할수있어효과적으로 cdna 를합성할수있습니다. **RocketScript Reverse Transcriptase, RNase H Minus 긴 RNA 의고효율 cdna 합성 Rocketscript Reverse Trascriptase, RNase H Minus 는 RNase H 의활성을제거하여 12.5 kb 의긴 RNA 도효과적으로 full-length cdna 로합성할수있습니다. - Long cdna Synthesis: RNase H 의활성을제거하여 ~12.5 kb 까지효과적으로 cdna 를합성할수있습니다. - High Sensitivity: 1 pg 의미량 RNA 도증폭하는뛰어난민감도를보입니다. 19

20 AllInOneCycler Thermal Block 세계최고속 PCR Machine AllInOneCycler 는바이오니아에서자체개발하고, 특허등록한 특수재질의 thermal block 과독창적인온도제어알고리즘을 채용하여 ramp rate ( 최대 9.5 C/sec) 를획기적으로증가시킨 유전자증폭기기로, 현재까지출시된 standard format 의 thermal cycler 중가장빠른온도조절기능을가지고있습니다. 또한, 하나의본체에 6 종류의 thermal block 을교체하여사용할 수있도록설계되어있어사용자의실험목적또는실험분야에 맞춰 thermal block 을선택할수있습니다. Figure 1. AllInOneCycler 와경쟁사제품의구동시간및증폭결과비교 96 Well-normal block 96 Well - fast block M M M M Fastest Ramping Rate: Ramp rate 가최대 9.5 C/sec 로실험시간이단축되었습니다 (Figure 1). Excellent Accuracy & Uniformity: 독창적인온도제어알고리즘으로정밀한온도제어가가능해, 재현성있는결과를얻을수있습니다 (Figure 2). Thermal Gradient Function: Gradient 기능을이용하여한번에최적의실험조건을찾을수 있습니다. 384 Well-normal block Figure well 과 384-well block 에서의 PCR 결과를통한온도균일성을확인 Interchangeable Thermal Block: 96-well/384-well/slide block 을실험목적에따라교체하여 사용할수있습니다. 20 Easy-to-use Interface: 편의성을강조한사용자인터페이스를통해사용이쉽습니다.

21 Exicycler 96 Real-time Quantitative Thermal Block Superior 5-color Real-time Quantitative PCR System 5-multiplex PCR: Well 간광학편차를기구적으로해결하는바이오니아의 LT 기술을이용하여, 일반적으로편차보정을위해사용되는 reference dye 가필요하지않으므로 5 채널의형광을모두 활용할수있어 real 5-multiplex PCR 이가능합니다. Temperature Gradient Function: 40~75 C 범위에서 1~20 C 까지온도 gradient 가가능하여 최적의 PCR annealing 온도를한번에찾을수있습니다. Exicycler 96 은 96 well 동시검출방식의 Real-time PCR 장비입니다. 바이오니아의특허인 Light Tunnel ( 이하 LT ) 기술과편광을이용한형광검출기술로광학적민감도와정확도를높이고 96 well 간의 Ct 편차를최소화하여 reference dye 에의한 normalization 없이각 well 당 5 채널의형광값을정밀하게분석할수있습니다. 또한 10~10 9 copies 의넓은 detection range 로저농도및고농도의시료에서 DNA 검출이가능합니다. 분석소프트웨어는 Absolute Quantification, Relative Quantification, SNP genotyping, Existence/Nonexistence 모드를제공하여간편하게 viral load analysis, 유전자발현분석, SNP genotyping 등다양한분야의실험분석이가능합니다. Technology of Exicycler 96 편광을이용한형광검출기술 : 시료로조사되는빛이 plate 또는장비에반사되어발생되는노이즈를편광필터로제거하여광학적민감도와정확도를높인바이오니아고유의특허기술입니다. Dichromic mirror Conventional Optics Light (Unpolarized) Noise signal Detector Bioneer s patented polarizing optics Light (Unpolarized) Polarizer Polarizer Minimized noise Detector High Sensitivity & Accuracy: 편광을이용한형광검출특허기술 (Figure 1) 을적용하여반사광에의한노이즈를최소화하여민감도와정확도를향상시켰습니다. 또한 LT 특허기술 (Figure 2) 을적용하여조사하는광원을모든 well 에균일하게변환하여, 어떤 well 에서 PCR 하여도 Ct 값편차가 0.3 cycle 이내로유지됩니다. Improved Thermal Block Ramp Rate: Thermal block 의온도제어기술개발로 ramp rate 가향상되어, PCR 반응에걸리는시간을당사기존모델대비 40% 이상 줄였습니다. Excellent Accuracy & Uniformity: 온도편차가 ±0.3 C 이내로 thermal block 의정확성및균일성이 우수합니다. Figure 1. 편광을이용한형광검출기술. LT 기술을이용한 Well 간 Ct 편차제거 : 집광렌즈에모인광원을균일한면광원으로변환함으로써모든 well 에서편차를 0.3 Ct 이내로감소시켜, reference dye 를사용하지않아도정확한결과를얻을수있는바이오니아고유의특허기술입니다. Figure 2. LT 기술적용으로모든 well 에서 0.3 Ct 이내의편차를보임. 21

22 Ordering Information Cat. no Product Name K-2041 AccuPower RT PreMix, 96 rxn K-2044 AccuPower CycleScript RT PreMix, dt20, 96 rxn K-2101 AccuPower RocketScript RT PreMix, 96 rxn K-2201 AccuPower RocketScript Cycle RT PreMix, 96 rxn K-2221 AccuPower RocketScript RT PreMix, RNase H Minus, 96 rxn K-2055 AccuPower RT-PCR PreMix, 96 rxn K-2501 AccuPower RocketScript RT-PCR PreMix, 96 rxn K-2211 AccuPower RocketPlex RT-PCR PreMix, 96 rxn K-6710 AccuPower Dual-HotStart RT-PCR PreMix, 96 rxn K-6714 AccuPower Dual-HotStart RT-PCR PreMix (with UDG), 96 rxn K-6400/6403 AccuPower GreenStar RT-qPCR PreMix, 96 rxns / Master Mix (2X), 2.5 ml K-6704/6707 AccuPower Dual-HotStart RT-qPCR PreMix, 96 rxns / Master Mix (2X), 2.5 ml E-3121 M-MLV Reverse Transcriptase, 10,000 units E-3131 CycleScript Reverse Transcriptase, 10,000 units E-3141 RocketScript Reverse Transcriptase, 10,000 units E-3161 RocketScript Reverse Transcriptase, RNase H Minus 10,000 unit A-2041 AllinOneCycler 96 well PCR System A Exicycler 96 (Ver.4) Real-Time Quantitative Thermal Block Related Products (PCR PreMix) 22 Cat. no Product Name K-2012 AccuPower PCR PreMix, 96 rxn K AccuPower PCR PreMix (with UDG), 96 rxn K-5050 AccuPower HotStart PreMix, 96 rxn K AccuPower HotStart PreMix (with UDG), 96 rxn K-2611 AccuPower PyroHotStart Taq PreMix, 96 rxn K-2022 AccuPower Pfu PreMix, 96 rxn K-2301 AccuPower HotStart Pfu PreMix, 96 rxn K-2631 AccuPower ProFi Taq PCR PreMix, 96 rxn K-2111 AccuPower Multiplex PCR PreMix, 96 rxn K-2115 AccuPower Gold Multiplex PCR PreMix, 96 rxn K-6100 AccuPower DualStar qpcr PreMix, 96 rxn K-6210 AccuPower GreenStar qpcr PreMix, 96 rxn K-6600 AccuPower Plus DualStar qpcr PreMix, 96 rxn E-3100 Top DNA Polymerase, 500 unit E-2011 Taq DNA polymerase, 500 unit E-3150 HotStart DNA polymerase, 250 unit E-2015 Pfu DNA Polymerase, 250 unit E-2201 ProFi Taq polymerase, 250 unit E-2017 HotStart Taq polymerase, 250 unit 더많은제품정보를원하시면

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24 Contact Us Bioneer Corporation 8-11 Munpyeongseo-ro, Daedeok-gu Daejeon, 34302, Republic of Korea Tel: (Korea: ) Fax: Bioneer Inc Marina Village PKWY, Suite 110 Alameda, CA 94501, USA Toll Free: Fax: Bioneer R&D Center Korea Bio Park BLDG #B Daewangpangyo-ro, Bundang-gu, Seongnam-si Gyeonggi-do, 13488, Republic of Korea Tel: Fax: AccuPower is a trademark of Bioneer Corporation. Copyright Bioneer Corporation. All Rights Reserved.