등록특허 (19) 대한민국특허청 (KR) (12) 등록특허공보 (B1) (51) 국제특허분류 (Int. Cl.) A61K 36/258 ( ) A61P 3/10 ( ) A61P 35/00 ( ) A61K 9/10 (20

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여림 하
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1 (19) 대한민국특허청 (KR) (12) 등록특허공보 (B1) (51) 국제특허분류 (Int. Cl.) A61K 36/258 ( ) A61P 3/10 ( ) A61P 35/00 ( ) A61K 9/10 ( ) (21) 출원번호 (22) 출원일자 2011 년 12 월 26 일 심사청구일자 2011 년 12 월 26 일 (65) 공개번호 (43) 공개일자 2013 년 07 월 04 일 (56) 선행기술조사문헌 KR A* Ultrasonics Sonochemistry, 8(4), , pp * 는심사관에의하여인용된문헌 (45) 공고일자 2014년07월09일 (11) 등록번호 (24) 등록일자 2014년07월02일 (73) 특허권자 세명대학교산학협력단 충청북도제천시세명로 65 ( 신월동, 세명대학교 ) (72) 발명자 고성권 서울특별시성동구독서당로 62 길 43, 7 동 1001 호 ( 응봉동, 대림아파트 ) (74) 대리인 정종옥, 조현동, 진천웅 전체청구항수 : 총 2 항심사관 : 김강필 (54) 발명의명칭초음파처리를이용한인삼프로사포게닌고농도함유인삼화뢰제제및이의제조방법 (57) 요약 본발명은초음파처리를이용한진세노사이드 Rg 2, Rh 1 및 F 4 고농도함유인삼화뢰제제및이의제조방법에 관한것으로, 인삼화뢰를 1 분 ~60 분범위내의시간과 80 ~120 범위내의온도에서초음파처리하고, 상기초음파처리한인삼화뢰를건조함으로써, 홍삼제조시열에의해소량생산되는기능성물질인진세노사이드 Rg 2, Rh 1 및 F 4 을높은농도로함유하는인삼화뢰제제및이의제조방법에관한것이다. 대표도 - 도 2-1 -

2 특허청구의범위청구항 1 1 중량부의인삼화뢰를 5~300 중량부의증류수에넣고, 40분 ~50분범위내의시간동안 90 ~110 범위내의온도에서초음파처리하는단계 ; 및상기초음파처리한인삼화뢰를감압하에농축시키고동결건조하는단계 ; 를포함하여, 진세노사이드 Rg 3, Rg 5, Rh 1, Rh 4, Rk 1 및 F 4 의함량을증가시키는것을특징으로하는인삼화뢰제제의제조방법. 청구항 2 청구항 3 청구항 4 제1항에있어서, 상기초음파처리하는것은 600W의초음파발생장치를이용하는것을특징으로하는인삼화뢰제제의제조방법. 청구항 5 청구항 6 청구항 7 청구항 8 청구항 9 청구항 10 청구항 11 청구항

3 명세서 [0001] 기술분야 본발명은인삼화뢰제제및이것의제조방법에대한것으로, 특히인삼화뢰를초음파처리함으로써홍삼제 조시열에의해소량생산되는기능성물질인프로사포게닌성분의함량을늘일수있는것이다. [0002] 배경기술고려인삼 (Panax ginseng) 은신농본초경의상품에수재되어있고, 맛이달고약간따뜻하며, 상중초, 즉폐와비에작용하는대보원기요약으로우리나라의대표적인특산물이다. 고려인삼은생리활성물질로서항당뇨작용을갖는진세노사이드 Rb 2 를비롯한 30 여종의인삼사포닌 (saponins), 항암작용을갖는폴리아세틸렌, 항산화작 용을갖는페놀계화합물, 방사선방어작용을갖는인삼단백질, 면역조절작용을갖는산성다당체등을함유하고있다. 특히, 고려인삼은서양삼 (Panax quinquefolium) 에비해다량의페놀계화합물, 폴리아세틸렌및산성다당체성분을함유하고있으므로, 보다강한생리활성이기대된다. 고려인삼의주된약리성분으로알려진인삼사포닌은진세노사이드라불리는데, 동경대학의시바타 (Shibata) 그룹에의해그화학구조가확인되었다. 이와같이고려인삼에함유되어있는인삼사포닌은 30 여종으로서양삼 14 종과삼칠삼 (Panax notoginseng) 15 종에비해월등히많다. 진세노사이드는프로토파낙사디올 (protopanaxdiol) 그룹과프로토파낙사트리올 (protopanaxtriol) 그룹으로크게나누어지는데, 프로토파낙사디올그룹의주요성분은진세노사이드 Rb 1 이고, 이는중추신경억제작용을나타내며, 프로토파낙사트리올그룹의주요성분은진세노사이드 Rg 1 으로중추신경흥분작용을나타내고, 고려인삼의어댑토젠 (adaptogen) 활성에주요하게기여하는것으로알려져있다. [0003] 고려인삼은프로토파낙사디올그룹과프로토파낙사트리올그룹의함량비 ( 디올 / 트리올 ) 와진세노사이드 Rb 1 과진 세노사이드 Rg 1 의함량비 (Rb 1 /Rg 1 ) 가각각 1.96과 3.14를나타내므로, 지나친중추신경억제작용을나타내는서양삼의 2.48 및 25.96에비해균형적이면서도, 흥분적이기보다는진정적인보기작용을나타낸다. 따라서고려인삼은한방약리학적인효능으로보원기와더불어안정신 ( 安精神 ) 작용의진세노사이드 Rb 1 과익지 ( 益智 ) 의진세노사이드 Rg 1 이균형적이면서도안정신작용이강화된, 진정한의미에서의현대인들의최고의강장제라고사료된다. [0004] [0005] 지금까지확인된고려인삼의약리활성으로는심장과혈관의보강, 혈액기능의회복, 혈류개선, 동맥경화및고혈압의예방, 위장의조절기능강화, 간기능촉진및숙취제거효과, 항피로및항스트레스작용, 노화방지작용, 두뇌활동촉진작용, 항염활성, 알레르기성질환치료, 부인병, 당뇨병, 항방사선작용, 정력증강, 항종양작용, 학습능력의향상, 산화지질의생성억제, 창상치료촉진, 면역능력향상, AIDS 바이러스증식억제효과및단백질합성능력의촉진등이보고되었다. 또한, 밭에서채굴한수삼을증건한것을홍삼, 껍질과잔뿌리를제거한후일광에자연건조한것을백삼, 잔 뿌리를자연건조한것을미삼이라고한다. 특히홍삼은열에의해생성되어소량존재하는진세노사이드 Rg 3, Rg 5, Rh 1 와같은특이성분이암예방및암전이억제작용, 혈압강하작용및항산화작용이있다고하여홍삼만의 특장점으로주목받고있다. [0006] [0007] [0008] 이상설명한바와같은고려인삼은오랜기간최고의브랜드로인식되어왔지만, 현재는세계인삼시장에서 3% 정도의시장점유율을차지하고있는실정인데, 이와같은인삼산업의혁신을위해서는고부가가치인삼제품의개발이필요하다. 그럼에도불구하고지금까지의인삼제제및홍삼제제는단순추출물수준의제제가주류를이루어강장제정도의수준에서개발되었다. 그러나보다전문적이며기능성을갖는인삼제제를개발하기위해서는, 무엇보다생리활성이강하면서안전성이확보된기능성물질이고농도로함유된인삼제제의개발이필수적이라할것이다. 이러한이유로최근에들어인삼의성분중우수한효과를갖는진세노사이드 Rg 3 를다량함유한인삼제제를만 들기위한방법들도시도되어지고있다

4 [0009] 1966 년발표된시바타 (Shibata) 논문에의하면사포닌을초산등약산으로가수분해하면 C-20 의글루코시드결 합 ( 진세노사이드 Rb 1, Rb 2, Rc, Rd) 만가수분해되고프로사포제닌 (20(R&S)- 진세노사이드 Rg 3 ) 이얻어진다는사실 이발표되었으나, 이는단지표준품을만드는데그쳤다. 이와함께다른연구자들은진세노사이드 Rg 3 를다량 함유한인삼제제를만들기위해물리적인반응인고온처리혹은생화학적반응인효소처리하는방법등을사용 하고있다. [0010] 고온처리하는방법으로예를들면인삼을고온에서가열처리함으로써약효가증강된가공인삼에관한것으로 인삼을 120 내지 180 의고온에서 0.5 내지 20 시간동안가열처리하여진세노사이드 (Rg 3 +Rg 5 )/(Rc+Rd+Rb 1 + Rb 2 ) 의비율이 1 이상이되도록약효성분을증가시킨가공인삼제품및이가공식품이함유하는음료조성물에관한특허 ( 대한민국특허제192678호 ) 와사포닌글루코사이드분해효소를이용하여인삼사포닌의당기를가수분해하여희소한항암사포닌 (Rh 1, Rh 2 ) 을제조하는방법에관한특허 ( 대한민국특허제329259호 ) 등이있으며현재시중에제품으로는선삼그리고신삼으로시판되고있다. 그러나, 이방법은약효가증가되나, 제조시간이많이걸리거나고압가열기등특수장비가필요하고특히, 통상의가공온도보다고온으로가열처리해야하므로대량제조할때인삼이탄화되는경우가발생하는등제조공정의운영상어려움이많다. [0011] 진세노사이드 Rg 3 및 / 또는 Rg 5 의제조방법 ( 대한민국특허제 호 ) 과혈관이완제조성물 ( 대한민국특허제 호 ) 에서는고온에서가열처리하는대신에온화한조건하에서, 예를들면묽은광산, 또는아세트산, 타타르산, 옥살산등과같은저급유기산으로산처리하여수행하는경우에도고온에서가열처리하는반응조건과동일하게 Rg 3 등과같은유효성분이생성된다고서술되어있으나, 아세트산, 구연산과같은저급유기산을사용하여실험한결과 Rg 3 및 Rg 5 가함유된인삼제제의제조가어려우며, 성분분석시다량의불순물이함유되어있음을확인하였다 ( 대한민국특허제635025호 ). [0012] 종래식초를사용한기술로는식초를이용한인삼제제및이의제조방법 ( 대한민국특허제635025호 ), 인삼및홍삼과식초를혼합한홍삼식초의제조방법 ( 대한민국특허제244849호 ), 인삼식초의제조방법 ( 대한민국특허제 호 ) 이있으나, 이는단지미량의인삼또는홍삼을식초에혼합하여식초를생산하는데목적이있는것이거나, 진세노사이드 Rg 3 고농도함유인삼제제제조방법에관한방법이다. [0013] 발명의내용 해결하려는과제 이에본발명자들은진세노사이드 Rg 3, Rg 5, Rh 1, Rh 4, Rk 1 및 F 4 같은기능성물질을고농도로함유하는인삼제 제를제조하기위하여지속적인연구를수행해오던중, 고온에서인삼을가열처리하는가공방법과는달리, 인삼화뢰에초음파를조사함으로써홍삼제조시열에의해소량생산되는기능성물질인프로사포게닌성분 ( 예를들어, 진세노사이드 Rg 3, Rg 5, Rh 1, Rh 4, Rk 1 및 F 4 ) 을높은농도로함유하는인삼화뢰제제를개발하고자한것이다. [0014] 또한, 본발명은기존인삼보다월등히약효가증강된상기프로사포게닌성분을고농도로함유하는인삼화뢰 제제와이를경제적으로제조하는방법을제공하는데그목적이있다. [0015] 과제의해결수단상기한목적을달성하기위한본발명은 1 중량부의인삼화뢰를 5~300 중량부의증류수에넣고, 40분 ~50분범위내의시간동안 90 ~110 범위내의온도에서초음파처리하는단계 ; 및상기초음파처리한인삼화뢰를감압하에농축시키고동결건조하는단계 ; 를포함하여, 진세노사이드 Rg 3, Rg 5, Rh 1, Rh 4, Rk 1 및 F 4 의함량을증 가시키는것을특징으로하는인삼화뢰제제의제조방법이다. [0016] 여기서, 상기초음파처리하는것은 600W 의초음파발생장치를이용하는것이바람직하다

5 [0017] [0018] [0020] [0021] [0022] 한편, 본발명의다른실시형태는, 상술한바와같은제조방법에의해제조되어, 진세노사이드 (Ginsenoside) Rb 1, Rb 2, Rc, Rd, Re, Rf, Rg 1, Rg 2, Rg 3, Rg 5, Rg 6, Rh 1, Rh 4, Rk 1, Rk 3, F 1 및 F 4 의합에대하여진세노사이드 Rg 2, Rh 1 및 F 4 이 65 중량 %~85 중량 % 범위내로포함된것을특징으로하는인삼화뢰제제이다. [0023] 여기서, 상기인삼화뢰는인삼화뢰엑스 (extract) 이고, 상기인삼화뢰엑스에대하여진세노사이드 Rg 2, Rh 1 및 F 4 이 1 중량 %~10 중량 % 범위내로포함된것을특징으로하는인삼화뢰제제일수도있다. [0024] [0025] 기타실시예들의구체적인사항들은상세한설명및도면들에포함되어있다. [0026] 발명의효과 상술한바와같은본발명은인삼화뢰를초음파처리함으로써홍삼제조시열에의해소량생산되는기능성물 질인프로사포게닌성분 ( 예를들어, 진세노사이드 Rg 3, Rg 5, Rh 1, Rh 4, Rk 1 및 F 4 ) 의함량을늘일수있는효과가 있다. [0027] 또한, 본발명은인삼화뢰를증류수에넣고초음파처리함으로써, 상기프로사포게닌성분이고농도로함유되 어있는인삼화뢰제제를간단하게제조할수있는방법을제공할수있다. [0028] 도면의간단한설명 도 1 은종래의표준 (standard authentics) 진세노사이드성분의 HPLC 크로마토그램그래프이고. 도 2는본발명의일실시예 ( 실시예 1) 에따라 10분간초음파처리하는방법으로제조된인삼화뢰제제에대한진세노사이드성분의 HPLC 크로마토그램그래프이고, 도 3는본발명의일비교예 ( 비교예 1) 에따라초음파처리없이제조된인삼화뢰제제에대한진세노사이드성분의 HPLC 크로마토그램그래프이다. [0029] [0030] 발명을실시하기위한구체적인내용본발명은다양한변환을가할수있고여러가지실시예를가질수있는바, 특정실시예들을도면에예시하고상세한설명에서상세하게설명하고자한다. 그러나, 이는본발명을특정한실시형태에대해한정하려는것이아니며, 본발명의사상및기술범위에포함되는모든변환, 균등물내지대체물을포함하는것으로이해되어야한다. 본발명을설명함에있어서관련된공지기술에대한구체적인설명이본발명의요지를흐릴수있다고판단되는경우그상세한설명을생략한다. 본출원에서사용한용어는단지특정한실시예를설명하기위해사용된것으로, 본발명을한정하려는의도가 - 5 -

6 아니다. 단수의표현은문맥상명백하게다르게뜻하지않는한, 복수의표현을포함한다. 본출원에서, " 포함하다 " 또는 " 가지다 " 등의용어는명세서상에기재된특징, 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품또는이들을조합한것이존재함을지정하려는것이지, 하나또는그이상의다른특징들이나숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품또는이들을조합한것들의존재또는부가가능성을미리배제하지않는것으로이해되어야한다. [0031] [0032] 본발명은인삼화뢰열매를 1분 ~60분범위내의시간동안초음파처리하는단계 ; 및상기초음파처리한인삼화뢰를건조하는단계 ; 를포함하는프로사포게닌성분을함유하는인삼화뢰제제의제조방법이다. 즉, 본발명은초음파처리하는인삼화뢰제제의제조방법에관한것으로서, 초음파를이용하여기능성물질인인삼프로사포게닌성분 ( 예를들어, 진세노사이드 Rg 3, Rg 5, Rh 1, Rh 4, Rk 1 및 F 4 ) 을고농도로함유하는새로운개 념의인삼화뢰제제를제조하는것이다. [0033] 이와같이본발명은초음파를이용해인삼화뢰내의유효성분의변화및인삼희귀성분의함량을극대화함에 그특징이있다. [0034] [0035] [0036] [0037] [0038] 본발명에따른제조방법을더욱구체적으로설명하면다음과같다. 먼저, 본발명은인삼화뢰를 1분 ~60분범위내의시간동안초음파처리하는단계를거친다. 상기인삼은본발명의기술분야에속하는모든종류의인삼을포함한다. 본발명에서사용가능한인삼은고려인삼 (Panax ginseng) 을비롯한서양삼 (Panax quinquefolium), 삼칠삼 (Panax notoginseng), 죽절삼 (Panax japonicum) 또는파낙스베트남엔시스 (Panax vietnamensis) 와같은파낙스 (Panax) 속식물의화뢰생약, 예를들어, 서양삼화뢰, 삼칠삼화뢰, 죽절삼화뢰및이들을가공처리한경우도포함하는것이며, 이는인삼화뢰와관련된반복적인실험으로부터확인된사실에기초한것이다. 바람직하게는, 고려인삼의화뢰를이용할수있다. 그리고, 본발명은상기한인삼화뢰의진액 ( 인삼화뢰엑스 ) 을이용하는것도가능하다. 또한, 본발명은상기한인삼화뢰를 1분 ~60분범위내의시간동안초음파처리하는것이특징이다. 상기초음파처리는이기술분야에알려진다양한처리방법을사용할수있고, 예를들면발진기 600W, 진동부 600W의초음파발생장치를이용하는것이가능하다. 초음파처리는 1분 ~60분범위내의시간동안수행하는것이바람직하고, 후술하는실험예에서확인할수있는바와같이, 5~50 분범위내의시간이더욱바람직하며, 40~50 분범위내의시간동안처리하는것이가장바람직하다. [0039] [0040] [0041] 본발명의다른구체예는, 상기초음파처리를 90 ~110 범위내의고온에서수행하는것이고, 이와같이고온에서추출함으로써더욱약효가증가된인삼화뢰제제를제조할수있다. 본발명의다른구체예는, 상기초음파처리를수행함에있어서, 인삼화뢰를증류수에넣고초음파를처리하는것이다. 즉, 증류수를매개로하여인삼화뢰에초음파를더욱효과적이면서안정적으로전달하기위한것이다. 이와같이인삼화뢰를증류수에넣고초음파처리하는경우에는 1 중량부의인삼화뢰를 5~300 중량부의증류수에넣는것이더욱바람직한데, 증류수의양이상기범위미만이면초음파효과가미흡하고상기범위를초과하면증류수에의해유용성분의변화가유발될수있기때문이다. [0042] [0043] 그런다음, 본발명은상기초음파처리한인삼화뢰를건조하는단계 ; 를거친다. 건조하는시간이나방법은특별히제한되지않지만, 그중에서도상기초음파처리한인삼화뢰를진공건조기에서 1일 ~3일범위내의시간동안 30 ~50 범위내의온도로건조할수있다. 또한, 상기건조하는단계는상기초음파처리한인삼화뢰를감압하에농축시키고동결건조하는것이더욱바람직하다. 이와같이, 인삼화뢰에증류수를가하여약 100 에서초음파를 1분 ~ 60분동안처리하면, 유용한진세노사이드성분으로써 Rg 3, Rg 5, Rh 1, Rh 4, Rk 1 및 F 4 의함량이높은인삼제제를제조할수있다

7 [0044] 이와함께, 본발명의제조방법은후가공처리단계를더포함할수있다. 상기가공처리는필요에따라공지의방법에의해추출하여가공인삼추출물로만들수도있다. 즉, 인삼류를물, 저급알콜 ( 예 : 메탄올, 에탄올등 ), 저급케톤 ( 예 : 아세톤, 메틸에틸케톤등 ), 초임계유체또는이들의혼합용매를이용하여추출한후에농축시키거나또는농축된액을건조시킴으로써용매를제거하여건조된분말상의가공인삼추출물, 즉인삼을연조또는건조엑스의형태로제조할수있다. [0045] [0046] 한편, 본발명의다른실시형태는, 상술한바와같은제조방법에의해제조되어, 진세노사이드 (Ginsenoside) 를 포함하는것을특징으로하는프로사포게닌성분을함유하는인삼화뢰제제이다. 여기서, 상기진세노사이드는진세노사이드 Rb 1, Rb 2, Rc, Rd, Re, Rf, Rg 1, Rg 2, Rg 3, Rg 5, Rg 6, Rh 1, Rh 4, Rk 1, Rk 3, F 1 및 F 4 의합에대하여진세노사이드 Rg 2, Rh 1 및 F 4 이 65 중량 %~85 중량 % 범위내의고농도로포함된것이 바람직하다. [0047] 특히, 기능성물질인 Rg ~ 6.0%, Rh ~ 1.9%, 및 F ~ 1.5% 로고농도로함유되어약효가우수하 다. [0048] 즉, 상기와같은방법에의해제조되어인삼프로사포게닌을고농도로함유하는본발명에따른인삼화뢰제제 는항당뇨. 대사증후군개선, 항암, 혈압강하, 성기능개선, 간기능개선, 뇌인지기능개선, ADHD 개선, 아토피 및알레르기개선등에유용하게사용할수있다. [0049] [0050] 나아가, 본발명의인삼화뢰제제를임상적인목적으로투여시에단일용량또는 2 내지 3회의분리용량으로숙주에게투여될총일일용량은체중 1 kg당 1 내지 50 mg의범위가바람직하나, 특정환자에대한특이용량수준은사용될특정화합물, 체중, 연령, 성, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설률, 약제혼합및질환의중증도에따라변화될수있다. 본발명의화합물은목적하는바에따라주사용제제및경구용제제로투여할수있다. 주사용제제, 예를들면멸균주사용수성또는유성현탁액은공지된기술에따라적합한분산제, 습윤제또는현탁제를사용하여제조할수있다. 이때, 사용될수있는용매에는물, 링거액및등장성 NaCl 용액이있으며, 멸균고정오일은통상적으로용매또는현탁매질로서사용한다. 모노-, 디-글리세라이드를포함하여어떠한무자극성고정오일도이러한목적으로사용될수있으며, 올레산과같은지방산은주사용제제에사용할수있다. 경구투여용투여형태는캅셀제, 정제, 환제, 산제, 과립제및액제가가능하고, 특히캅셀제와정제, 액제가유용하다. 정제및환제는장피제로제조하는것이바람직하다. 고체및액체투여형태는활성성분을슈크로오즈, 락토오즈, 전분등과같은하나이상의불활성희석제, 마그네슘스테아레이트, 탈크와같은윤활제, 칼슘씨엠씨와같은붕해보조제, 결합제, 방향제, 소듐벤조에이트와같은방부제, 설탕또는과당과같은감미제및계면활성제중에서선택된담체와혼합시킴으로써제조한다. 좀더구체적으로설명하면, 활성성분이외에부형제로서전분과유당을 7:3의비율로넣고유동성증대를위하여마그네슘스테아레이트와탈크를 3% 이내로가하여충진시킴으로써캅셀제를제조할수있고, 부형제로서전분과유당을 7:3의비율로넣고결합제, 그리고붕해보조제로칼슘씨엠씨를가하여타정함으로써정제를제조할수있으며, 방향제로과일향, 방부제로소듐벤조에이트, 감미제로설탕또는과당및계면활성제를첨가하여액제를제조할수있다. [0051] 본발명은하기의실시예에의하여보다더잘이해될수있으며, 하기의실시예는본발명의예시목적을위 한것이며, 첨부된특허청구범위에의하여한정되는보호범위를제한하고자하는것은아니다. [0052] [0053] 제조예 : 인삼화뢰엑스의제조 인삼화뢰건조물각각 500g 에에틸알콜 (Ethyl alcohol) 2,500 ml를가하고, 4 회환류추출후여과한다음감압 농축하여에틸알콜인삼화뢰엑스를얻었다

8 [0054] 실시예 1~7 : 초음파를이용한인삼화뢰제제의제조 [0055] [0056] 실시예 1: 증류수로 10분간초음파처리하여, 인삼화뢰제제의제조상기제조예를통해얻은인삼화뢰엑스 1g에증류수 200ml를가하고, 이것을발진기 600W, 진동부 600W, 100 규격의소니케이터 (Sonicator) 에넣은다음, 초음파처리를 10분간시행하였다. 그리고, 이것을감압하에농축시킨후동결건조시켜서갈색의추출물을얻었다. [0057] [0058] 실시예 2: 증류수로 20 분간초음파처리하여, 인삼화뢰제제의제조 상기실시예 1 에서 20 분동안초음파처리한것을제외하고는, 상기실시예 1 의방법으로추출물을얻었다. [0059] [0060] 실시예 3: 증류수로 30 분간초음파처리하여, 인삼화뢰제제의제조 상기실시예 1 에서 30 분동안초음파처리한것을제외하고는, 상기실시예 1 의방법으로추출물을얻었다. [0061] [0062] 실시예 4: 증류수로 40 분간초음파처리하여, 인삼화뢰제제의제조 상기실시예 1 에서 40 분동안초음파처리한것을제외하고는, 상기실시예 1 의방법으로추출물을얻었다. [0063] [0064] 실시예 5: 증류수로 50 분간초음파처리하여, 인삼화뢰제제의제조 상기실시예 1 에서 50 분동안초음파처리한것을제외하고는, 상기실시예 1 의방법으로추출물을얻었다. [0065] [0066] 실시예 6: 증류수로 60 분간초음파처리하여, 인삼화뢰제제의제조 상기실시예 1 에서 60 분동안초음파처리한것을제외하고는, 상기실시예 1 의방법으로추출물을얻었다. [0067] [0068] 실시예 7: 식초로 40 분간초음파처리하여, 인삼화뢰제제의제조 상기실시예 1 에서증류수대신 2 배식초를사용하고, 40 분동안초음파처리한것을제외하고는, 상기실시예 1 의방법으로추출물을얻었다. [0069] 비교예 1 : 초음파처리없이인삼화뢰제제의제조 [0070] 인삼화뢰건조물 500g 에에틸알콜 2,500 ml를가하여 2 회환류추출후, 여과하고감압농축한다음, 에틸알콜 인삼화뢰엑스을얻었다. 그리고, 상기얻은인삼화뢰엑스를동결건조시켜서갈색의추출물을얻었다. [0071] 실험예 : HPLC 법을통한진세노사이드성분분석 [0072] [0073] 1 실험방법 상기실시예 1~7 및비교예 1 에의해얻은인삼화뢰추출물제제각 2g 에 diethylether 50 ml를가하고, 1 시간 씩 3 회진탕추출한후, 원심분리하여상등액을제거하였다

9 [0074] [0075] [0076] [0077] [0078] 그런다음, 얻은잔사에수포화 butanol 50ml를가하여 2시간씩 3회추출하고, 원심분리하여상등액을취한후여과하였으며, 이를감압농축을하여조사포닌을얻었다. 이렇게얻어진조사포닌을 HPLC법에의하여정량하였으며, 그결과를하기표 1~3에나타내었다. 2 HPLC 분석조건상술한실험방법에의해얻은결과를표품과직접비교하였다. 즉, 인삼사포닌의함량및조성을각시료당 3 회반복실험해서결과의재현성을확인하여분석하였다. 표품은 Chromadex (U.S.A.) 로부터구입한순도 99% 이상의 ginsenoside를사용하였다. 사용한 HPLC 장치는 Waters 1525 binary HPLC system (Waters, 미국 ) 이며, 컬럼은 Eurospher C18 (250*3mm) 을사용하였다. 이동상은 acetonitrile(hplc급, Sigma, 미국 ) 과 HPLC용증류수이며, acetonitrile의비율을 17 %(0 min) 에서 30 %(55 min), 40 %(80 min), 60%(135 min) 그리고 100 %(140 min) 로순차적으로늘려주고마지막으로다시 17% 로조절하였다. 전개온도는실온, 유속은분당 0.8 ml, 크로마토그램은 uv/vis Waters 2487 Dual λ Absorbance Detector (Waters, U.S.A.) 검출기를이용하여 203nm에서검출하였다. [0079] 도 1 은종래의표준 (standard authentics) 진세노사이드성분의 HPLC 크로마토그램그래프이고, 여기서각기호 의표시는아래의진세노사이드를나타낸다 ; [0080] [0081] a : Ginsenoside Rg1, b : Ginsenoside Re, d : Ginsenoside Rb1, e : Ginsenoside Rg2, c : Ginsenoside Rf, f : Ginsenoside Rh1, [0082] [0083] [0084] g : Ginsenoside Rc, h : Ginsenoside Rb2, i : Ginsenoside F1, j : Ginsenoside Rd, k : Ginsenoside Rg6, l : Ginsenoside F4, m : Ginsenoside Rk3, n : Ginsenoside Rh4 o : Ginsenoside (20S)Rg3, [0085] p : Ginsenoside (20R)Rg3, q : Ginsenoside Rk1, r :Ginsenoside Rg5. [0086] [0087] 도 2는본발명의일실시예 ( 실시예 1) 에따라 10분간초음파처리하는방법으로제조된인삼화뢰제제에대한진세노사이드성분의 HPLC 크로마토그램그래프이며, 도 3는본발명의일비교예 ( 비교예 1) 에따라초음파처리없이제조된인삼화뢰제제에대한진세노사이드성분의 HPLC 크로마토그램그래프이다. 여기에도시된바와같이, HPLC를통하여표품과직접비교해서확인하고, 평균을통계처리하여계산하였다. [0088] 하기표 1 은상술한실시예 1~7 및비교예 1 에의해얻은인삼화뢰추출물의진세노사이드함량결과이다

10 표 1 [0089] [0090] 상기표 1 에나타난바와같이, 분석한인삼사포닌은진세노사이드 Rb 1, Rb 2, Rc, Rd, Re, Rf, Rg 1, Rg 2, Rg 3, Rg 5, Rg 6, Rh 1, Rh 4, Rk 1, Rk 3, F 1, F 4 이었으며, 본발명의실시예 1~ 실시예 7 에서유용한프로사포게닌성분 ( 진세노 사이드 Rg 2, Rh 1 및 F 4 ) 이높게확인되었다. [0091] 특히, 진세노사이드 Rg 2 가가수분해되어생성될수있는진세노사이드 Rh 1 에있어서는실시예 4( 증류수로 40 분초 음파처리 ) 가 1.85% 로서가장높은함량을나타내었고, 다음으로실시예5( 증류수로 50분초음파처리 ) 가 1.78% 의함량을나타내었다. 그리고, 진세노사이드 F 4 는실시예5 가 1.53% 로서가장높은함량을나타내었으며, 다음으로실시예4가 1.52% 의함량을나타내었다. 또한, 실시예4 및실시예 5의경우, Rg 2, Rg 3, Rg 5, Rh 1, Rh 4, Rk 1 및 F 4 의함량이비교예및다른실시예보다현저하게우수하였다. 다만, 주름개선작용, 항혈전작용등의효능을나타내는진세노사이드 Rg 2 의함량에있어서는실시예1 이 6.0% 로서가장높은함량을나타내었으며, 실시예7 (5.72%), 실시예4 (5.42%) 의순으로높은함량을나타내었고, 실

11 시예 1 의함량은비교예 1 에서는확인할수없었다. [0092] [0093] 한편, 상기에서는본발명을특정의바람직한실시예에관련하여도시하고설명하였지만, 이하의특허청구범위 에의해마련되는본발명의기술적특징이나분야를이탈하지않는한도내에서본발명이다양하게개조및 변화될수있다는것은당업계에서통상의지식을가진자에게명백한것이다. 도면 도면 1 도면

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06(17-094)p fm ISSN 0377-9556 (PRINT) ISSN 2383-9457 (ONLINE) 약학회지제 61 권제 5 호 274~280 (2017) Yakhak Hoeji Vol. 61, No. 5 DOI 10.17480/psk.2017.61.5.274 종설 Short Report 증숙삼류생약의인삼사포닌성분비교 김민영 * 이재범 * 양병욱 ** 박종대 ** 고성권 *,#