대한임상벙리사회지 : 제 17 권제 1 호 1935 혈청내 HBs Ag 와 HBs Ab 의검출법에대한 1:1 1 교연구 인천적십자병원임상병리과 이은예 Study on the Comparison in the Detection methods of HBs Ag and ant

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동윤 풍
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1 대한임상벙리사회지 : 제 17 권제 1 호 1935 혈청내 HBs Ag 와 HBs Ab 의검출법에대한 1:1 1 교연구 인천적십자병원임상병리과 이은예 Study on the Comparison in the Detection methods of HBs Ag and anti HBs in the sera Eun Ye Lee Departl1.ent 01 Clinical Pathology, lnchon Red Cross Hospt'tal =Abstract= HBs Ag positive in the sera of 100 dases by RIA method were compared EIA, RPHA and Latex method. anti HBs :çositive in the sera of 83 cases by RIA method was compared EIA and PHA method. The results are summarized as follows; 1. Positive rate of HBs Ag in the sera 100 cases was showed RIA(100), EIA(100), and RPHA method of auscel1(100), serodia(97), hepa-s(98) hepatitis B-Latex method(92). 2. Positive rate of HBs Ab in the sera of 83 cases was showed RIA(100), EIA(99) and PHA method of Serodia(84), hepa-s(90). 3. The most sensitive method of the detection of HBs Ag and anti HBs was RIA. There were no significant difference of sensitivity of HBs Ag and anti HBs between RIA and EIA method. 되었다. 그러묘로 HBsAg 에대한 면역반응측정응 B 1. 서론 Blumberg 1 )(1965) 등이처음으로 B 형간염환자의 혈청에서 AU 항원 (Australia) 을발견한이래혹 B 형간 염바이러스표면항원 (HBs Ag) 이득이적안 B 간염의 표지자임에대한연쿠가활말히진행되어왔다. HBs Ag 의검출은 HBV(Hepatitis B Virus) 감염의원인, 진단, 예후, 면역및예방에이용되어왔으며 B 형간염바이 러스는곱만성간염 2) 은물흔 ; 간경변증및간암등치 명척인원안인자로얄려져왔 1 斗. HBV 발생에대한예 방목척오로 HBsAg 항원성 3) 에특이한 Subtype 에대 한역학적연쿠와 Vaccine 연구에도큰발전을이루게 형간염의 : 감염력유무나 B 형간염에대한역학조사 등에이용되어왔고 anti HBs 측정은 B 형간염예방 목적으로써 B 형간염 ; 섭종천의유무, Vaccination 진 행상태, 간염의예후면역성판정에많이이용되고 있다. 많은측정방법에짜라각각의예만도와특이도 가서로다르묘로이에대한검출방볍이곱속도로발 천되어왔다. HBs Ag. Ab 검출방법은그발전시기에짜라서제 1 세대, 2 세대및 3 세대법등으로나누는데제 1 세대법 응 (1 964"-'1968) 한천켈확산법안 Agar gel immunodiffusion(agid) 으로 Ouchterlony method 인데가장간 단하며득이도는높으나예만도는매우낮고제 2 세 - 32-

2 대법 (1 968 rv 1972) 은역면역천기영동법안 Counter immuno electrophoresis(cie) 법과보체결합법안 Complement fixation(cf) 뱀파 Latex agglutination 법 등으 로 1 세대법보다종더예민도가높고제 3 세대법 (1 973 rv ) 은수동혈쿠응집엽인 Passive hemagglutination (PHA) 법파 Reversvd passive hemaggluntination(rph A) 과효소면역측정법안 Enzyme immunoassay(eia) 와방사면역측정법인 Radio immunoassay(ria) 등 로써제 3 세대방법들이많이이용되고있다. 이들제 3 세대검출방법중에서방사면역측정법 (RIA) 이예 만도와득이도가가장높은것으로알려져있으냐검출 방법의조작이북 - 잡하고비경제적안단점과방사선오 염의한계점으로몇이 안되는수련병원에서만실시되 고있고효소면역측정법 (EIA) 은고가의창벼가필요 없고 RIA 와벼견할만하나시약값이벼싸 λl 중병원 에서거의실시하지뭇하고있다. 또한 RPHA 법은바 용이저렴하고검사의신속성과간펀성해문에검사법 자체에예만도와정확도가 RIA 나 EIA 보다 낮음에도 우리나라에서주로사용하고있는싶정이묘로 HBV 는 검사방법에짜는역학적연쿠와예방 요구되는바이다. 대책이절살히 이에저자는 B 바이러스간염에대 한 RIA. EIA. RPHA. PHA 방법에대한각각의특이 도와예만도를비교하여각각외검출법개선에짜른 기초자료를제시하기위해본실험을실시한바그 결과를보고하는바이다. 1. 실험재료 n. 실험재료및방법 방사면역측정법 (RIA) 으로 HBsAg 양성안혈액 100 Case 를사용하였고역시 RIA 법으로 HBsAb 양성안혈 액 83 Case 릎사용하여시행하였다. 2. 방법 RIA 는 Ausria 와 Ausab 을사용하여시행원리에 라서 HBs Ag, HEs Ab 블측정하였고 EIA 는 Auszyme<!!l H 와 Ausab n 릎사용하여시행원리에짜라 HEs Ag, HBsAb 블측정하였으며 RPHA 방볍으론 Serodia HBs Ag, Auscell, Hepa-S Ag 그리고 Hepatitis B Latex 듭 각각사용하켜 HBs Ag 양성유무블비교측정하였고 그러고 PHA 빙 - 볍으로 Sercdia HEs Ab 와 Hepa-S Ab 을사용하여각각의 Kit 방법에 유무블측정하였다. lli. 실힘성적 HEs Ag 양성풀응 Table 1, 따 따라 Anti HEs 양성 2 에서와같이 RIA 법에서 의 HBsAg 양성자요두에서 EIA 에서양성으로측정되 어일치하였고 RPHA 법에서는 RIA 와 EIA 에서아주 Strong reactivε(table 1) 임이판명되었는데 auscell. serodia, hepa-s 그러고 hepatitis B Latex 법에서각각 0, 3, 2, 8 로측정되어각각 100, 97, 98, 92 의예반도릎보였다. RPHA 법의 prozone 현 장에의한 false negative 을배제하기위해혈청을 2 배 수희석법오혹 1 : 320 배까지희석하여모두 음성이었 우나 hepa-s Ag 에서 2 Cases 에서양성으로나타녔고 Latex 볍에서 1 : 4' 0 배까지희석하여모두음성이고 1 Case 에서양성 ~ 로측정되어 HBs Ag 농도가매우높 기 해문에 prozone 현상에의한위음성반응으로나타 난것으로사료되는바이다. Table 1. Comparison of the HBs Ag Positive among C 잃 RIA, EIA, RPHA method. RIA 1 EIA RPHA Sero -- l 1 He -SDa Latex es I (CP1VI) I (O~D)! Aus 1 dia I cell 1 7,963 I 2 8, , , , , , , , , ,430 - i 12 11, , , , , , , , 564 I 20 5,408 --l , , , , , , , ,200

3 놔셨껴씨mω야써띠야찌떼원mJ 야야Jmm 이m생때찌검μM 써m엉되않야ω띠ω던 mj 야m싸야댐 값ω띠ω m?l 껴m l[/ i i p3 끼? 꺼b7, 231 6, 102 6,222 9,634 10, 342 7,6ôO 10,863 5,499 5, 722 4,980 5, , ,847 10, , ,627 12,596 7,236 16,654 10,994 13,313 14, ,508 11,906 15,252 14,402 12,296 12, ,092 13,889 13, , ,902 17, , , , , ,549 14, ,660 12,064 11, , , 580 9, ,306 14,439 mt--9 Jj4I?l 9, i? 9 9i?i 9 9 ou nu T L T γ Table 2. Comparison of Sensitivity and HEs Ag Positive rate among RPHA, Latex, EIA, RIA methods. ITO 떼 Cases i positive negative RIA I 100 I 100 I EIA 100 I 1001 R I Auscell ~ I Serodia A I Hepa-S l:-iepatitls t1-latex j ioo 100! 100 I I J I rate I rate ccases 3(3) 2(2) 8(8) HEs Ab 양성률은 Table 3, 4 에서와같이 RIA 법양 성자중 EIA 법에서는 1 case 에서 false negative 르측 정되어 99 의예만도플보여 RIA 와거위일치하였고 PHA 볍중 Serodia 법은 13 Cases 에서 negative 로측정 되어 84 의예만도를보였으며 hepa-s 법에선 8 Cases 에서 negative 로측정되어 90 의예민도릎보여각각 false negative 는 16 와 10 플보여서 RIA, EIA, PHA 법순으로예민도가나타났다. PHA 볍에서 prozone 현상에외한 false negative 를배제하기위해반복

4 생때캡μ측정파혈청의 2 배희석법으로 1 : 320 배까지희석하여 측정하였으나모두읍성으로나타남무로써검사법자 체의예만도가낮아서나타나는필연성으로사료되는 바이마. Table 3. Comparison of the Anti HBs Positive among Cases m n m mωmωωmω어야아잉 d 돼mu U mωmm mω낌찌m악껍얘ω앙m깅앓mj 않M해 J mφmria, EIA, PHA method. RIA (CP 파 ) 16,278 I 19, 958 I 18, ,266 3,433 I 1,211 9,666 1,310 12,582! 3,336 I 12, 524 I 11, , 207 3,903 12, 213 5,875 3,844 13, 298 1,902 5, 105 2,656 1, , 580 2, , 192 1, 954 2, 083 3, 724 1,655 8, 664 6, 730 7,544 2, 536 2,908 3,420 9, 075 1, OC9 EIA (O.D) o C , o PHA 씨mω{이갱딸겹꺼니끼어mω왜[U 않띠ω띠ωmm 대깅mw 따아m m mω때검앙π mm 이아않m야얘깎많m 없떠않11,624 1,384 15, , 068 3, 378 8,909 11,669 9,391 18,685 4,982 1,920 3,842 4, ,508 11,783 10, 098 1,635 13, 142 9,424 4,826 9, ,621 8,812 3,219 3, , 503 6, 059 4, , 172 9,096 1, ,009 5, 243 2, 041 I 2, 902 5,992 i , , 662 2, 140 3, 769 2, 276 ; 5,734 때 o :: o o

5 T able 4. Comparison of sensitivity and anti HBs positive rate among PHA, EIA, RIA methods. 1 Total Ca 앞 sl methods I ~ ~.~. -~~-~ I rate 1 r~ 願 te(casvees) RIA 83 EIA (1) E &r 여 ia l 83 1m f 16 (13) A I Hepa-S (8) N. 고찰 B 형간염바이러스 (hepatitis B Virus) 은혈액이주 벼개체로급 만성간염응물론간경변및간암으로 진챙되는감염원으로써 B 형간염표면항원 (HBs Ag) 와 B 형간염표면항체 (HBs Ab) 의검출은간엽전파 및예방에매우중요하다고사료되는바이다. B 형간 염바이러스 (hepatitis B Virus) 의항원성에는 HBs Ag, HBcAg 및 HBeAg 가있는데이들중 HBsAg 가혈액 내발견되면 Dane 업자의존재가능성이있으며이 Dane 업자는 DNA polymerase 을함유하묘로감염성을 갖는 B 간염바이러스의본태라고한마. 또한 anti HBs 가나타나면 B 간염바이러스의감염랙을추정할수 있고재감염에대한면역성여부와 B 헝간염의예땅 목적으로이용되어왔다. B 형간염바이러스검출뱀 에는그동안진보적안발전을해왔으며예만도로실 시펀순서에짜라서 1st, 2nd, 3rd generation_ 으로나뉘며 First generation method는 3 rv 5 의검출률로매 우예만도가낮고 Second generation method 는 30rv RPHA 법도제 3 세대법 혹 Harajima 5 ) 등은 RIA 법 과비교시예만도가바슷하다고하였 나본살험에서 는 HBs Ag 에서는 97 rv 98 로나타났고 anti HBs 에 서는 84 rv 90 로예민도가낮았다. 공혈자를대상무 로한 Barr 6 ) 등의결과에외하면 RIA로양성안 61 예중 12예에서 RPHA false negative로나타나 80 의 낮은예민도블보였고 RPHA 로음성안 8589 Case 의 plasma pool 에서 RIA 로 4 Case 의 HBs Ag 양성을발 견할수있었다고한다. 그러묘로 B 형간염바이러스 간염이만연되고있는우리나라에서건강한 B 형간염 바이러스보균자를찾아내는 Screening 검사는 RPHA 법이유효하나간질환의원인인자로써 B 형간염바 이러스감염을확진할경우와수직감염을예방키위 한임산부 HBsAg 검출, AHF 등혈액제재및혈액원 에서의수혈을목적으로한공혈자의 HBsAg 검출시는 RIA 와바견할만한 EIA 법으로대처하는것이필수척 이라고사료되는바이다. 그리고 HBs Ag 가음성안사 랍이간염예방정종의대상이되고있는데 HBsAg 양 성이더라도예방접종을하여도부작용이없으묘로 HBs Ag Screening 없이모든사람에게예방캡종을하 여도우방하다 7)8) 고하였다. 그러나본실험결과 B 형간염백신접종천에주로실시되고있는 PHA 볍외 anti HBs 검출률의정확도가낮아서 RIA 법에의한 HBs Ab 양성자 83 Cases 중 10 rv 16 가 false negative 로실제면역성이있는사랍이 8rv13 Cases 가항체를 지나지않은것으로나타나우러나라의천체캡종대 상자를추산해불해국민의부담을가중시키묘로현 재주로사용되는 PHA 법을 RIA 와벼견할만한예만도 를가진 EIA 법으로대처하는것이우리나라실정에맞 는검사법이라고사료되는바이다. -40 의검출율로예만도에있어서제 1 세대법보다약 간더높았고최근에는예만도와특이도가 97rv99 로 검출률이높은 Third generation method 안 RIA, EIA, :EUSA, RPHA 등이주로사용되고있다. 이중 RIA 법이가장예만하고정확하나방사선오염의위험과 반감기가짧기째문에유효기간역시짧으며벼싼장 비의설치등의 13 1 경제적안한계점이나타나고있다. B 형간염바이러스측정에있어본잘험에서는 RIA - 와 EIA 는바견할만한예만도를나타냈 며 RPHA') 법에서의예민도의차이는혈쿠블채취하는동물어 1 짜 라다양하다는첨, 즉 auscell, Serodia, hepa-s, Latex 법이각각 Human Cell, Chicken Cell, Sheep Cel1, Rabbit Cell types을사용한것을고려하면 RPHA도 EIA(99) 및 PHA의 Serodia(84), hepa-s(90) 로 표준화를기해서예만도의차이를줄여야할것으로 사료되는바이다 V. 결론 방사면역측정법 (RIA) 에의해 HBs Ag 양성혈액 100 Cases 를 EIA 와 RPHA 및 Latex 법으로비교측정 하였고역시 RIA 법에의해 anti HBs 양성혈액 83 Cases를사용하여 EIA와 PHA 방법으로검출성척을각각비교하여다음파같은결론을얻었다 Cases 중 HBsAg 양성률은 RIA(100), EIA (100) 및 RPHA 의 abott(100), Serodia(97), hepa-s(98) 그리고 Latex(92) 로나타났다 Cases 중 anti HBs 양성률은 RIA(100), 나타났다. 3. 예만도는 RIA 법이가장높고 EIA 법은 RIA 법파

6 비슷하였다. References 1. Blumberg B. S, Alter H]. Vinich S:A new antigen in leukemic sera. ]AMA. 191 : 541, Shulman, N. R. Hepatitis associated antigen. Amer. ]. Med., 49: 669, Krugman, S, and Giles, ]. Viral hepatitis. New lights on an cld disease. ].A.M.A., 212; 1019rv Lockyer, W.].; Large-Scale Screening for Viral Hepatitis, Medical Laboratory Sciences, 6: 107 ; Harajima N, Shioda, Y; Dection of antibodies to hepatitis B surface antigen by using HBs Ag Sensitized erythrocytes. Fujizoki; Deta series SH- 4-1, Barr, A, DQw, B.C. and Macvarish, 1.; HBs Ag Dectcion Results of Comparative Large Scale Testing of Blood Donations. Medical Laboratory Sciencεs, 36; 109, Maupas P, Guesry P; Hepatitis B vaccine, Elsevier/North-Holrand Biomedical press, Amstrdam, p. 213rv224, B 형간염바이러스 ; 바이러스학혈청학및면역 학, 녹십자, p. 15 ;

토하고자하였다. 1. 서론 1965 년 Blumberg 등에의해 Australia a Iì. tigen 이발 II. 연구재료및방법 견된이래 (Blumberg 등, 1965) HBs 항원이 B 형깐염 바이러스의표식자로서알려져왔고, 그검색을위한 어러가지띤역화학석방뱀의예만도

토하고자하였다. 1. 서론 1965 년 Blumberg 등에의해 Australia a Iì. tigen 이발 II. 연구재료및방법 견된이래 (Blumberg 등, 1965) HBs 항원이 B 형깐염 바이러스의표식자로서알려져왔고, 그검색을위한 어러가지띤역화학석방뱀의예만도 대한임상병리사회지 : 제 17 권제 1 호 19E5 B 형간염바이러스표면항원검색을위한 Latex agglutination 법에대한고찰 연세대학교원주의과대학부속기독병원임상병리파 허향숙 이경원 양용석 연세대학교외과대학임상병리과 송경순 이삼열 Evaluation of Latex Agglutination Tests for the Detection of HBs Ag>