대한남성과학회지 : 제 29 권제 2 호 2011 년 8 월 Korean J Androl. Vol. 29, No. 2, August 2011 http://dx.doi.org/10.34/kja.2011.29.2.144 Streptozotocin 으로유발된당뇨병성백서에서복합생약제 (KBMSI-1) 가음경발기및음경해면체조직에미치는영향 1 가톨릭대학교의과대학비뇨기과학교실, 2 ( 주 ) 한국전통의학연구소 윤병일 1 ㆍ신태승 1 ㆍ우장춘 1 ㆍ김수진 1 ㆍ김효신 1 하유신 1 ㆍ김현정 2 ㆍ황성연 2 ㆍ김세웅 1 The Effects of New Herbal Formula (KBMSI-1) on the Penile Erection and Corpus Cavernosum in Streptozotocin-induced Diabetic Rats Byung Il Yoon 1, Tae Seung Shin 1, Jang Chun Woo 1, Su Jin Kim 1, Hyo Sin Kim 1, U Shin Ha 1, Hyun Jong Kim 2, Sung Yeoun Hwang 2, Sae Woong Kim 1 1 Department of Urology, The Catholic University of Korea College of Medicine, 2 Korea Bio Medical Science Institute, Seoul, Korea =Abstract= Purpose: The aim of this study was to investigate the effects of new herbal formula (KBMSI-1) on erectile dysfunction in streptozotocin-induced diabetic rat model. Materials and Methods: We used male Sprague-Dawley rats aged 12 weeks and divided into three groups; control (n=8), diabetes (DM) (n=8), DM+KBMSI-1 200 mg/kg treatment (n=8) groups. The DM groups received a single intraperitoneal injection of streptozotocin (STZ). Distilled water was administered in the control and DM group. To investigate the penile erection, intracavernosal pressure (ICP) and intracavernosal pressure/mean arterial pressure (ICP/MAP) were recorded in all groups. Serial sections of the penis were used to perform Masson s trichrome stain. We analyzed the expression of nnos and enos concentration in the isolated corpus cavernosum by western blotting. Results: Peak ICP/MAP ratio was markedly increased in the treatment group with KBMSI-1 compared with DM group (p<0.0). Masson s trichrome staining of corpus cavernosum showed increase in smooth muscle volume and the regular arrangement of collagen fibers in KBMSI-1 treatment group compared with DM group. Western blot analysis revealed that the penile expressions of nnos and enos protein were significantly higher in KBMSI-1-treated group than in DM group. Conclusions: This study showed that herbal formulation of KBMSI-1 enhances the penile erection and the level of enos and nnos expression of penile corpus cavernosum in streptozotocin-induced diabetic rat model. Key Words: Herbal, Diabetes mellitus, Penile erection 접수일자 : 2011 년 7 월 6 일, 수정일자 : (1 차 ) 2011 년 7 월 22 일, (2 차 ) 2011 년 7 월 26 일, 게재일자 : 2011 년 7 월 28 일교신저자 : 김세웅, 가톨릭대학교의과대학서울성모병원비뇨기과학교실, 서울시서초구반포동 0 번지 137-701 Tel: 02-228-6226, Fax: 02-99-7839, E-mail: ksw1227@catholic.ac.kr * 이연구는보건복지부한의약산업제품화개발지원사업의지원에의하여이루어졌음 ( 과제번호 C100003). 144
윤병일외 : 당뇨유발백서모델에서복합생약제 (KBMSI-1) 의음경발기에미치는효과 14 서 론 대상및방법 노인인구의증가와더불어당뇨병은전세계적으로중요한건강문제이며, 세계인구의 0. 2% 가앓고있는흔한질환이다. 당뇨병은단일질환으로발기부전과가장밀접한연관성이있는질환으로알려져있고, 당뇨병환자에서발기부전에이환될위험성은당뇨병이없는사람들에비해 3배이상높다고알려져있다. 1 당뇨병환자의 0% 이상에서당뇨발병시점후 10년이내에발기부전이발생하며, 당뇨병환자의 7% 는발기력에문제가있다고알려져있다. 2 정상적인발기는음경해면체로유입되는혈류의증가와유입된동맥혈에의해확장된정맥동에의해정맥환류가억제되어음경해면체가삽입이충분할정도로강직을획득하는현상으로, 발기가원활하게이루어지기위해서는혈관의구조와기능이정상이어야하며이들의이상을유발하는다양한심혈관계위험인자들은발기부전의발생과밀접하게연관되어있다고알려져있다. 1,3 당뇨병성발기부전의주요병태생리는혈관기능의이상 (vascular insufficiency) 과자율신경부전 (autonomic neuropathy) 이지만이외에도내분비기능이상, 심리적문제등의다양한병태생리를보인다고알려져있으나, 아직까지당뇨가어떠한기전으로발기부전을유발하는지에대해서는명확히밝혀지지않고있다. 당뇨병에의한발기부전의발생은다양한기전들에의해서유발되지만, 다른원인의발기부전치료와마찬가지로경구용제형 phosphodiesterase 억제제 (PDEI) 가일차치료제로사용된다. Fink 등 4 은당뇨병을지닌발기부전환자에서 sildenafil 복용후평균성교성공률은 44% 로전체환자군에서의평균성교성공률 7% 에비교할때치료성적이상대적으로낮았다고보고하였다. 홍삼, 산수유, 구기자, 오미자, 복분자및토사자등은일반인에게널리알려진자양강장제로써, 이들의단일재료및복합재료추출물은사람의음경발기기전과동일하게작용하는것으로흰쥐의동물실험에서음경발기및유지효과가입증되었다.,6 이에저자들은 Streptozotocin (STZ) 으로유발한당뇨병성백서에서복합생약제 (KBMSI-1) 가음경발기및음경해면체조직에미치는영향에대해서알아보고자하였다. 1. 복합생약제제의제조 실험에사용된복합생약제제는 KBMSI-1 로녹용 (Cervus nippon), 홍삼 (Ginseng Radix Rubra), 산수유 (Cornus officinalis Sieb. Et Zucc), 당귀 (Angelica sinensis (olive) diels), 구기자 (Lycium chinense Mill), 복분자 (Rubus coreanus Miquel), 오미자 (Schizandra chinensis Baillon), 토사자 (Cuscuta chinensis Lam), 연근 (Nelumbo nucifera), 울금 (Curcuma longa Linn), 봉밀 (Honey) 등의 11 가지생약의추출물로제조되었다 (Table 1). 이러한천연약재들은각각다른비율로총 100 g 이되게혼합하여증류수로 2 회세척한다음 4 L 증류수에 90 분간방치후 3 시간동안열수추출하였다. 가열하여얻은추출액을여과지로여과한후감압농축하여동결건조과정을거쳐봉밀을이용하여정환으로만들어시료로사용하였다. 2. 실험동물 실험동물은 ( 주 ) 샘타코바이오 ( 오산, 한국 ) 에서제공받았고 12 주령 Sprague-Dawley 를이용하여, 정상대조군 (8 마리 ), 당뇨군 (8 마리 ), 실험약물 KBMSI-1 200 mg/kg 투여군 (8 마리 ) 으로총 3 군으로나누어서실험하였다. 정상대조군을제외하고나머지군들에 STZ 0 mg/kg 을복강내주사하여당뇨로인한발기부전을유발하였으며, 4 주후에 phentotal sodium (0 mg/kg) 을복막내주사로마취하여무게를측정하고, 꼬리의정맥에서혈액을채 Table 1. Composition of herb formula (KBMSI-1) ingredients Ingredient Percentage (%) Cervus nippon Ginseng Radix Rubra Cornus officinalis Sieb. Et Zucc Angelica sinensis (olive) diels Lycium chinense Mill Rubus coreanus Miquel Schizandra chinensis Baillon Cuscuta chinensis Lam Nelumbo nucifera Curcuma longa Linn Honey 10 10 4 2. 2. 1 0
146 대한남성과학회지 : 제 29 권제 2 호 2011 취하여혈당치를측정하였다. 당뇨의확진은 serum glucose level 이 20 mg/dl 이상인경우로정의하였다. 당뇨유발후당뇨군 (n=8) 과 KBMSI-1 200 mg/kg 군 (n=8) 으로분류하였으며, needle zonde 를이용하여 4 주간하루에한번씩경구로약물투여를한후기능적평가를위해음경해면체내압변화를측정하였다. 또한음경해면체평활근의조직학적소견을평가하기위해음경해면체조직을채취하여해면체조직염색 (Masson s trichrome stainin) 을시행하였으며, 혈관내피세포의기능을알아보기위해산화질소합성효소인 enos, nnos 의발현정도를 western blot 검사를통해알아보았다. 3. 음경해면체내압측정 Tiletamine (Zoletil R ) 0.2 ml 을복강내에주사하여전신마취후앙와위에서음경을박리하여음경해면체와음경각을노출시키고복부정중절개를통하여골반내에서우측전립선외측의골반신경절을박리하여노출시켰다. 우측내경동맥을박리하여 24 G 폴리에틸렌관을삽입하여전신혈압 (mean arterial pressure, MAP) 을측정하였다. 음경해면체내압 (Intracavernosal pressure, ICP) 측정을위해 23 G 나비침을음경해면체내에유치시키고박리된신경절에양극성전기자극기를위치시킨후, 10 volt, 2.4 ma, 0. msec 의조건으로음경해면체신경을 0 초간자극하였다. 음경해면체신경자극은최소 3 회이상실시하였고신경자극시간간격은 10 분이상을유지하였다. 자극검사후음경해면체를적출하여 2 개로나누어하나는액체질소에냉동보관하였고다른하나는포르말린으로고정하였다. 당뇨대조군과실험약물 KBMSI-1 200 mg/kg 투여군의발기능을비교하는지표로최대음경해면체내압 (peak ICP), 최대음경해면체내압 / 평균동맥혈압 (ICP/MAP) 을측정하였다. 4. 조직염색및조직형태학적분석 고정된음경해면체조직절편은 PBS 로세척하고순차적농도의 ethanol 로탈수시킨후 paraffin 절편으로만들어 4 μm 절편으로잘라 gelatine-coated glass 슬라이드에올려 Masson's trichrome 염색을하여관찰하였다. Masson's trichrome 염색된슬라이드를컴퓨터를이용한조직형태학적영상분석기 (Image Pro Plus, version.0, media cybermetrics, USA) 로분석하여각슬라이드에서 100 배및 400 배 배율하에 10 1 회시야에서평균음경해면체조직내의평활근의비율을백분율로나타냈다.. 음경해면체 enos, nnos 단백질발현 - Western blot 채취한 20 mg 의조직을잘게자른후 RIPA buffer (2 mm Tris-HCl [ph 7.6], 10 mm NaCl, 1% NP-40, 1% sodium deoxycholate, 0.1% SDS, protease inhibitor cocktail) 20 ul 에조직을넣고 homogenize 를이용하여조직을으깨어서얼음에넣은후 4 o C 에 16 시간두었다. 13,000 rpm, 4 o C, 1 분동안원심분리하여상층액만새 tube 에옮기고 Bradford protein assay (Bio-Rad, CA, USA) 를사용하여정량후 70 o C 에보관하였다. 8%, 1% SDS-polyacrylamide gel 을만들어 0 μg 의 protein 을사용하여 100 V, 1. 시간전기영동하였다. 전기영동이끝난후 PVDF membrane (Millipore, Billerica, USA) 에 70 V, 2 시간 transfer 하고, % skim milk 용액으로 1 시간 blocking 하였다. enos (1:00, BD Pharmingen, San Diego, CA, USA), nnos (1:4,000, BD Pharmingen), beta-actin (1:10,000, Santa Cruz, CA, USA) 를 4 o C 에서 16 시간반응시킨후 TBST 용액으로 10 분씩 3 번세척하고, anti-mouse IgG-HRP (1:2,000, 1:,000 Invitrogen), anti-rabbit IgG-HRP (1:2,000, Invitrogen) 를실온에서 1 시간반응시키고 TBST 용액으로 10 분씩 3 번세척, ECL plus (GE Healthcare, UK) 용액으로 1 분간반응하고필름에감광하여나타난 band 의두께를비교하여단백질발현유무및그차이를확인하였다. 6. 통계학적분석 통계처리는 SPSS software (version 12.0, Windows 용 ) 를이용하였으며, 통계적유의성은 ANOVA test 로검정하여 p<0.0 를유의한것으로판정하였다. 결 1. 체중과혈당의변화 당뇨군과실험약물투여군모두에서정상대조군에비해실험 8 주째에유의한체중감소를관찰할수있었다 (p<0.0). 당뇨군과실험약물투여군사이의체중은의미있는차이를보이지않았다. 당뇨를유도한군의경우실험관찰기간동안혈당치 과
윤병일외 : 당뇨유발백서모델에서복합생약제 (KBMSI-1) 의음경발기에미치는효과 147 Table 2. Changes of body weight and fasting serum glucose level in the experimental groups Pre-DM induction 4 wk 8 wk Body weight (g) Control DM DM+KBMSI-1 Serum glucose (mg/dl) Control DM DM+KBMSI-1 321±26 333±29 329±31 103±6 102±3 10±2 428±39 379±39 367±31 108± 24±2* 277±1* 492±31 36±29* 389±3* 111±3 32±3* 31±3* DM: diabetes group, DM+KBMSI-1: diabetes group treated with KBMSI-1. *Significant statistical difference (p<0.0) from the control. Table 3. Intracavernosal pressure in the response to electrical stimulation of cavernous nerve in rats of each group Control DM DM+KBMSI-1 p-value Peak ICP (mmhg) MAP (mmhg) ICP/MAP (ratio) 43.4±3.07 123.±9.89 0.3±0.03 10.3±1.27 63.±4.1 0.16±0.02 20.70±1.10 94.46±6.09 0.22±0.02 <0.0* <0.0* <0.0* DM: diabetes group, DM+KBMSI-1: diabetes group treated with KBMSI-1, ICP: intracavernosal pressure, MAP: mean arterial pressure. *Significant statistical difference (p<0.0) from the DM group. 는지속적으로높게유지되었으며, 정상대조군과유의한차이를보였다 (p<0.0) (Table 2). 2. 음경해면체내압의변화 당뇨군과실험약물투여군간의골반신경절자극후의결과를비교분석하였다. 최대음경해면체내압은각각정상대조군에서 43.4±3.07 mmhg, 당뇨군 10.3±1.27 mmhg, DM+KBMSI-1 200 mg/kg 투여군이 20.7±1.10 mmhg 이었으며, DM+KBMSI-1 200 mg/kg 투여군에서당뇨군에비해통계적으로높은음경해면체내압을보였다 (p<0.0). 최대음경해면체내압 / 평균동맥압 (ICP/MAP) 비율은정상대조군에서 0.3±0.03, 당뇨군 0.16±0.02, DM+ KBMSI- 200 mg/kg 투여군이 0.22±0.02 이었으며, DM+KBMSI-1 200 mg/kg 투여군에서당뇨군에비해통계적으로높은음경해면체내압 / 평균동맥압을보였다 (p<0.0) (Table 3). 3. 조직학적분석 (Massons's trichrome stain) Massons's trichrome 염색을시행하여음경해면체평활근상태를관찰하였다. 당뇨군에서는음경내평활근이현저히감소한소견과함께교원섬유가증가하여조직내교원섬유가밀집된상태를보였 다. 이에비해 KBMSI-1 200 mg/kg 투여군에서는평활근양이증가하고섬유화진행이감소하는소견을보였다 (Fig. 1). 조직형태학적영상분석에서 KBMSI-1 200 mg/kg 투여군의음경해면체평활근의비율은 12.8±3.0% 로당뇨군의 9.8±4.0% 보다통계적으로유의하게증가하였다 (p<0.0) (Fig. 2). 4. 음경해면체 enos, nnos 발현 : Western blot 검사 복합생약제제경구투여에의한음경조직내 enos 및 nnos 발현양상변화를측정하기위하여 western blot 실험을통하여농도별효과를관찰하였다. KBMSI-1 200 mg/kg 경구투여한군에서당뇨군에비해 enos, nnos 발현이증가하는경향을보였다 (p<0.0) (Fig. 3). 고 전세계적으로매우많은남성들이발기부전을가지고있다. 미국의 Massachusetts male aging study 의결과를보면 2.0% 의남성이스스로발기부전을가지고있다고보고하였다. 1 발기부전이당뇨병환자에서흔히나타나는임상증상중하나라는것은 찰
148 대한남성과학회지 : 제 29 권제 2 호 2011 Fig. 1. Masson s trichrome staining of corpus cavernosum in control group (A), diabetes group (B), KBMSI-1 treatment group (C). In the diabetes group, corpus cavernosum showed reduction of smooth muscles and irregular, distorted arrangement of collagen fibers. In the KBMSI-1 treatment group, corpus cavernosum showed increases volume of smooth muscles and the regular arrangement of collagen fibers ( 100, 400). Fig. 2. Muscle distribution (muscle/collagen ratio) of penile corpus cavernosal smooth muscle. DM: diabetes group, DM+ KBMSI-1: diabetes group treated with KBMSI-1. *Significantly different (p<0.0) from DM group. 잘알려진사실이다. 7 당뇨병환자에서발생하는발기부전의병태생리학전기전은다양한것으로알려져있다. Karacan 8 은당뇨병환자에서신경인성요인과혈관인성요인이당뇨병에서발기부전을일으키는원인이라고주장하였으며, Fani 등 9 은당뇨병백서에서해면체평활근의위축과변성을보고한바있다. 이렇듯현재까지발기부전을유발하 Fig. 3. Western blot analysis showing the protein expression of enos and nnos. enos: endothelial NO synthase, nnos: neuronal NO synthase. *,**Significant different (p<0.0) from DM group.
윤병일외 : 당뇨유발백서모델에서복합생약제 (KBMSI-1) 의음경발기에미치는효과 149 는여러병태생리가알려져있으나이중혈관성병태생리가발기부전의발생에있어가장중요한역할을담당하는것으로알려져있다. 저자들의연구결과에서가장핵심적인소견은다음과같다 : (1) 복합생약제제 (KBMSI-1) 의투여가당뇨로인해손상된음경해면체평활근조직을회복시킴으로써발기능을회복하였으며 ; (2) 복합생약제제 (KBMSI-1) 의투여가 enos 및 nnos 단백질의발현을증가시켜혈관내피세포의기능을회복시킴으로써발기능을회복한것에있다. 음경발기는해면체평활근의긴장력에의해조절되는데비아드레날린성비콜린성신경전달물질과해면체내피세포에서분비되는이완물질이음경발기의중심인해면체평활근의이완에중요한역할을한다. 현재발기부전치료제로널리사용되고있는 phosphdiesterase 억제제는음경해면체의혈관내피세포의 nitic oxide (NO) 의대사에관여하는약제이다. 음경발기기전에작용하는 NO는체내에서 nitric oxide synthase (NOS) 라는효소에의해생성되며, 다양한생리학적및병태생리학적역할을지니는중요한생체활성조절물질로알려져있다. NOS 는 neuronal NOS (nnos) 와 endothelial NOS (enos) 및 inducible NOS (inos) 3종류의 isoform이존재한다. 현재여러실험결과 NO가해면체평활근이완의주매개체로알려져있으며음경해면체와음경동맥의내피에존재하는 enos와 nonadrenergic noncholinergic nerve의말단에서분비되는 nnos에의해발생한다. 10 따라서음경에서 NO의생체이용성 (bioavailability) 을높이는것은발기부전의예방과치료에있어서가장효과적인방법이라생각한다. 당뇨병에의한음경해면체조직의변화에대한연구에서발기부전을동반한당뇨병환자에서음경해면체내신경인성및내피성이완에이상이발견되었으며발기부전을동반한당뇨병환자의해면체조직의전기자극에의해 NO생성의감소와함께해면체근육의이완이감소하였음을보고하였다. 11 Podlasek 등 12 과 Cellek 등 13 은제1형당뇨쥐에서 nnos와 enos의발현이감소하였다고보고하였으며, 이는당뇨병에영향을받은음경조직에서 NOS의감퇴가발기부전의원인이될수있음을제시하고있다. 저자들은본연구에서당뇨병성발기부전환자에서생약제제의투여가발기력을회복시킬수있는지를알아보기위하여 STZ 주사에의하여당뇨 병이유발된백서모델을이용하였고그병태생리학적기전을음경해면체혈관내피세포기능에초점을맞추었다. 이를위해당뇨유발백서에서혈관내피세포의정성분석과정량분석을통해실험물질인 KBMSI-1 의내피세포기능보호효과를알아보았다. 정성분석으로시행한 Masson s trichrome staining 에서 KBMSI-1 투여군이당뇨군에비해음경내평활근양의증가와함께섬유화진행의감소를관찰할수있었으며, 정량분석으로시행한 western blot 검사에서 enos 및 nnos 단백질의발현이 KBMSI-1 투여군에서당뇨군에비해증가함을확인할수있었다. 이러한복합생약제제 (KBMSI-1) 가당뇨병성발기부전환자들에서음경해면체에서의내피세포기능을회복시킴으로써발기능회복의가능성을제시해준의미있는결과라고생각된다. 저자들의실험에사용된복합생약제제 KBMSI-1 는녹용 (Cervus nippon, 10%), 홍삼 (Ginseng Radix Rubra, 10%), 산수유 (Cornus officinalis Sieb. Et Zucc, %), 당귀 (Angelica sinensis (olive) diels, %), 구기자 (Lycium chinense Mill, %), 복분자 (Rubus coreanus Miquel, %), 오미자 (Schizandra chinensis Baillon, 4%), 토사자 (Cuscuta chinensis Lam, 2.%), 연근 (Nelumbo nucifera, 2.%), 울금 (Curcuma longa Linn, 1%), 봉밀 (Honey, 0%) 등의 11 가지생약의추출물을기본으로제조되었다. 홍삼은말초순환개선작용으로혈액순환을원활하게하는작용이있는대표적인천연물이고, 혈당강하작용과혈압강하작용및혈관내피유래이완인자가매개되어나타나는혈관확장작용을가진것으로보고되었다. 14 또한홍삼은 NO 나칼슘및칼륨통로에관여하여음경해면체평활근의이완작용을가짐으로써음경혈류증가와음경발기에효과를가진다고보고되었다. 6,1 Park 등 은구기자, 산수유, 복분자, 토사자및오미자를주성분으로복합생약제제가 NO-cGMP 경로에관여하는 NO 합성효소인 enos 및 nnos 의발현을증가시켜 cgmp 를증가시키는것을확인하였다. 저자들은당뇨유발발기부전모델에서새로운복합생약제제인 KBMSI-1 가음경발기력을개선시켰음을확인할수있었으며, 당뇨에의해감소된 enos 와 nnos 의발현이 KBMSI-1 을투여한군에서증가하였다는것은당뇨에의한혈관내피와말초신경의손상을 KBMSI-1 가보호하였음을시사한다고할수있다.
10 대한남성과학회지 : 제 29 권제 2 호 2011 결 저자들은당뇨유발발기부전모델에서새로운복합생약제제인 KBMSI-1 를경구투여로혈관내피세포기능개선에의한발기능력의회복가능성을확인하였다. 이런한연구결과를토대로혈관기능저하에따른발기부전환자들에대한임상적용의가능성을제시하였으며, 더나아가혈관기능과관련된타질환모델에적용할수있는실험적인배경을제시한연구였다. 론 REFERENCES 1) Feldman HA, Goldstein I, Hatzichristou DG, Krane RJ, McKinlay JB. Impotence and its medical and psychosocial correlates: results of the Massachusetts Male Aging Study. J Urol 1994;11:4-61 2) Vinik A, Richardson D. Erectile dysfunction in diabetes. Diabetes Reviews 1998;6:16-33 3) Andersson KE, Wagner G. Physiology of penile erection. Physiol Rev 199;7:191-236 4) Fink HA, Mac Donald R, Rutks IR, Nelson DB, Wilt TJ. Sildenafil for male erectile dysfunction: a systematic review and meta-analysis. Arch Intern Med 2002;162:1349-60 ) Park CS, Ryu SD, Hwang SY. Elevation of intracavernous pressure and NO-cGMP activity by a new herbal formula in penile tissues of aged and diabetic rats. J Ethnopharmacol 2004;94:8-92 6) Ahn TY, Kim KS, Kim CS, Park TH, Park HS. Effect of ginseng on the relaxation of the penile corpus cavernosal smooth muscle in rabbits. Korean J Ginseng Sci 1996;20:339-43 7) Minhas S, Eardley I. Diabetic impotence. In: Carson C, Kirby R, Goldstein I, editors. Textbook of erectile dysfunction. 1st ed. Oxford: Isis Medical Media Publishers; 1999;41-0 8) Karacan I. Diagnosis of erectile impotence in diabetes mellitus. An objective and specific method. Ann Intern Med 1980;92:334-7 9) Fani K, Lundin AP, Beyer MM, Jimenez FA, Friedman EA. Pathology of the penis in long-term diabetic rats. Diabetologia 1983;2:424-8 10) Rajfer J, Aronson WJ, Bush PA, Dorey FJ, Ignarro LJ. Nitric oxide as a mediator of relaxation of the corpus cavernosum in response to nonadrenergic, noncholinergic neurotransmission. N Engl J Med 1992;326:90-4 11) Saenz de Tejada I, Goldstein I, Azadzoi K, Krane RJ, Cohen RA. Impaired neurogenic and endothelium-mediated relaxation of penile smooth muscle from diabetic men with impotence. N Engl J Med 1989;320:102-30 12) Podlasek CA, Zelner DJ, Bervig TR, Gonzalez CM, McKenna KE, McVary KT. Characterization and localization of nitric oxide synthase isoforms in the BB/WOR diabetic rat. J Urol 2001;166:746-13) Cellek S, Rodrigo J, Lobos E, Fernández P, Serrano J, Moncada S. Selective nitrergic neurodegeneration in diabetes mellitus - a nitric oxide-dependent phenomenon. Br J Pharmacol 1999;128:1804-12 14) Lee HA, Sim HS, Choi KJ, Lee HB. Hypoglycemic action of red ginseng components (II). Investigation of the effect of fat soluble fraction from red ginseng on enzymes related to glucose metabolism in cultured rat hapatocytes. Korean J Ginseng Sci 1998; 22:1-9 1) Chi YD, Mah SY, Xin ZC, Choi HK. Effect of Korean red ginseng on rabbit and rat corpus cavernosal smooth muscle. Korean J Ginseng Sci 1997; 21:98-103