RESEARCH ARTICLE 신영진 1, 장현희 2, 송규용 1 * 1 충남대학교약학과, 2 경복대학교미용예술학부 Study on Anti-atopic Effects of Black Ginseng Young Jin Shin 1, Hyun Hee Jang 2, Gyu Yong Song 1 * 1 School of Pharmacy, Chungnam National University 2 School of Cosmetology, Kyungbok University Abstract The purpose of this study is to investigate the influence of black ginseng (BG) on induced IL-6, IL-8 and MCP- 1 secretion by house dust mite in THP-1 (human acute monocytic leukemia cell line) and EoL-1 (human eosinophilic leukemic cells) cell lines. The house dust mite (Dermatophagoides pteronissinus, D. pteronissinus) plays a key role in the pathogenesis of allergic diseases, including atopic dermatitis and asthma. Monocyte chemoattractant protein 1 (MCP-1), interleukin-6 (IL-6) and interleukin-8 (IL-8) play a pivotal role in mediating the infiltration of various cells into the skin of atopic dermatitis. The korean ginseng (radix and leaf) was steamed to 3 hr at 120 under high pressure. The contents of benzopyrene which was known as a tumor promoting agent were analysed. Also, the inhibitory effect of BG on the induced IL-6, IL-8 and MCP-1 secretion by D. pteronissinus extract (DpE) in THP-1 and MCP-1 cells was examined. The BG extract (radix and leaf) potently suppressed the elevated production of IL-6 and IL-8 induced by DpE treatment in THP-1 and EoL-1 cells. Among them, the crude saponin fraction of BG leaf exhibited the most potent inhibitory activity. Based on the present results, it can be suggested that the 3 hr steaming at 120 under high pressure is the most optimal processing condition and BG may be useful to develop functional food on atopic dermatitis. Keywords: Black ginseng, Anti-atopic effect, IL-6, IL-8, MCP-1 Well-Being 문화의확산으로기능성식품에대한수요가전 세계적으로증가하고있는추세이다. 고려인삼은최고급품질과효능으로세계시장에서명품대접을받고있다. 고려인삼이품질이우수한이유는한국이인삼의재배에적합한기후와토질을갖추고있고, 최고의재배기술과인삼가공기술을갖고있기때문이다. 하지만한때고려인삼은세계최고의생산및수출국으로명성을날렸지만과학적연구자료의부족으로인해외국산에비해월등한품질효과를가지고있음에도불구하고홍보에어려움이있어고려인삼의수출규모는세계시장에서경쟁 *Corresponding author: Gyu Yong Song, Department of Pharmacy, Chungnam National University, 99 Daehak-ro, Yuseong-gu, Daejeon 305-764, Republic of Korea Tel.: +82 42 821 5926, E-mail: gysong@cnu.ac.kr Received October 30, 2011; Revised January 27, 2012; Accepted February 8, 2012; Published February 28, 2012 력이떨어지게되었다. 반면미국의경우에는화기삼의성분및여러가지생리활성에대하여체계적인연구를수행함으로써세계시장에서영역을넓혀가고있다. 현재세계인삼시장의규모는 200억달러에달하며인삼의약효와효능이점차과학적으로입증되면서의약품은물론건강기능성식품으로서많이알려져있으며가공방법에따라다양한가공인삼제품이개발되어판매되고있다. 인삼은가공방법에따라서크게백삼과홍삼으로분류되는데백삼은수삼의표피를제거하여백삼가공공정에따라제조한것을말하고홍삼은수삼을증숙또는팽숙하여전분을호화시켜홍삼가공공정에따라제조한것을말한다. 최근에는새로운가공방법이많이나타났는데주로산처리 (Han et al., 1982), 효소처리 (Suzuki et al., 1998), 열처리 (Kitagawa et al., 1983) 및미생물을이용한발효처리 (Hasegawa et al., 1997) 등새로운가공방법에의한가공인삼이개발되어건강기능성식품으로주목받고있다. 따라서본연구실에서는이런시대적흐름에따라새로운고부가가치의가공인삼을개발하기위하여흑삼을제조한 91
후항암활성을확인한바있다 (Lee et al., 2006). 흑삼은제조과정을거치는동안수삼및홍삼의주성분인 ginsenoside Rg1, Re, Rb1, Rb2, Rc 및 Rd와같은사포닌의 aglycon에결합되어있는 sugar 부분이증숙과정중에가수분해되어탈수반응이일어나면서수삼이나홍삼에들어있지않거나미량들어있는 ginsenoside Rh1 (S, R), Rg6, Rg4, Rk3, Rh4, Rg3 (S, R), Rk1 및 Rg5와같은사포닌이생성된다 (Lee et al., 2006). 아토피피부염 (atopic dermatitis) 은심한소양감, 홍반, 부종, 삼출과부스럼을특징으로하는비전염성의만성염증성피부질환으로서다른알레르기질환인두드러기, 금속알레르기, 천식이나알레르기성비염등을동반하는경우가많다 ( 은희철, 1999; De et al., 2009). 아토피 (atopy) 란그리스어가어원으로 비정상적인반응, 기묘한, 뜻을알수없다 는의미를가지고있으며말그대로다양한원인에의하여복잡하게발병하고완화와재발을반복한다. 아토피피부염의발병원인은아직정확하게알려져있지않은상태이고, 임상증상도다양하게나타나기때문에발병원인이어느한가지로만설명될수는없고여러가지원인이복잡하게연관되어작용하여나타나는것으로알려져있으며주로유전적인요인, 사이토카인체계의이상과완화, Ig E의과다생성등으로인한면역적요인과알레젠, 자극물질, 먼지, 미생물과자외선등에의한환경적인요인등이있다 (Leung, 2000). 아토피피부염의주요증상은가려움증, 피부건조증, 삼출, 홍반, 부종, 발진, 진물, 부스럼딱지, 비늘같은껍질이있는피부등피부병변이다. 피부가가려워서긁게되면습진성피부병변이생기고다시더심한가려움이유발되는가려움-긁기-더가려움의악순환이반복된다. 흔히태열이라고불리는아토피피부염은어릴때잠깐앓는병이라고알려져있지만최근에는성인들에게서도많이나타나며아토피피부염의발병률은증가하는추세이며이미의학적문제를넘어서사회적문제로인식되고있다. 현재가장많이사용되고있는아토피피부염의치료제는항히스타민제, 스테로이드제등이있다. 항히스타민제는아토피피부염을완화할수있으나근본적으로치료할수없고스테로이드제는가장기본적이고효과적인아토피피부염의치료제로사용되고있지만장기간사용할경우피부위축, 당노병, 고혈압, 골다공증등여러가지부작용을일으킬수있으므로보다안전하면서도근본적으로치료할수있는아토피억제약물개발이절실히요구되고있다. 집먼지진드기 (Dermatophagoides pteronissinus, D. pteronissinus) 는아토피피부염, 천식, 비염등의대표적원인으로알려져있으며, 연구보고에따르면아토피피부염환자가집먼지진드기에노출되는경우항원에특이적인면역글로블린 E (IgE) 의증가가나타나항원에대해민감하게반응한다고알려져있다 (Friedmann, 2006; Ring & Darsow, 2001). 또한최근의연구에따르면이러한아토피를유발하는 D. pteronissinus 추출물 (D. pteronissinus extract, DpE) 이면역조절 cytokine인 IL-4와 IL-13의분비를유도하며, 상피세포에서 IL-8의분비를촉진하고, THP-1세포 (Human acute monocytic leukemia cell line) 및 EoL-1세포 (human eosinophilic leukemic cells) 에대해서 monocyte chemoattractant protein (MCP-1), IL-6, IL-8의분비를유발한다고알려져있다 (Colloff, 1992; Lee et al., 2008; Shimizu et al., 1998; Sohn et al., 2007; Tan et al., 1996; Wong et al., 2006). 따라서본연구에서는고온고압의방법을이용하여흑삼 ( 뿌리, 잎 ) 을제조한후최근에문제시되고있는발암물질인벤조피렌함량분석및흑삼의아토피를유발하는진드기추출물을 THP-1 및 EoL-1 세포에처리하여증가된 IL-6, IL-8 및 MCP-1의억제활성을측정하고자하였다. 1. 연구재료실험에사용한집먼지진드기추출물 (DpE) 은연세대학교의과대학에서, THP-1 및 EoL-1 세포주는일본세포주은행 (RCB 0641) 에서공급받아사용하였으며, 에탄올, 메탄올, 에테르, 부탄올은 ( 주 ) 삼전에서구입하였으며, RPMI-1640, fetal bovine serum (FBS) 는 Life Technologies, Inc. (Gaithersburg, USA), PBS, penicillin, streptomycin은 Gibco BRL (Grand Island, USA), 고압인삼증숙기는 Sanyo Electric Co., Ltd. (Japan), ELISA reader는 BIO-TEK ELx808 (Winooski, USA), HPLC (Waters alliance 2690 system, USA) 를, 컬럼은 Atlantis d (4.6 250 mm, 5 μm, Waters, USA), 검출기는형광검출기 (Fluorescence Detector) 를사용하였다. (1) 흑삼의제조 2010년 10월금산에서생산되어유통되는 5년근수삼을금산인삼농협에서구입한후수삼뿌리 1 kg을스크류세척기 (( 주 ) 정우기계, 한국 ) 에넣고 10분간총 3회반복해서세척하였다. 이때세척과정중에거피가되지않도록주의하였다. 세척된수삼뿌리를건조하지않고증숙할경우, 수삼뿌리가터지는경우가많으므로이를방지하기위하여 40 에서 24시간 1 차건조하였다. 24시간저온에서말린인삼뿌리를증숙기에넣고예열시간을제외하고 95 에서 6시간 1차증숙하였다. 예열시간이라함은증숙기에서수증기가세어나오는데까지의시간으로 30여분소요되었다. 열선이내장된건조기의내부온도를 60 로유지시킨후펜을돌리면서골고루인삼을 12시간 92
동안 2차건조시킨후, 다시 0.12 MPa의압력하에 120 에서 3시간 2차증숙한후건조기에서 12시간 3차건조시켜본흑삼뿌리 1 kg을제조하였다 (Lee et al., 2006). (2) 흑삼뿌리조추출물의제조상기의방법으로제조한흑삼뿌리 200 g을취하여분쇄한후 100 ml의물을넣고실온에서 5시간방치한뒤 80% 에탄올 (20% 물 ) 1 L를넣고 3시간씩 3회환류추출하였다. 추출한용액을실온까지냉각시킨후여과한뒤감압농축기를이용하여에탄올용매를제거하여흑삼뿌리에탄올가용추출물 74 g을얻어실험에사용하였다. (3) 흑삼뿌리조사포닌추출물의제조상기에서얻은흑삼뿌리조추출물 32 g에물 500 ml를넣어현탁시킨후에테르 500 ml를가하여비극성물질을제거하였다. 남아있는수층에수포화부탄올 500 ml를가하여인삼에존재하는사포닌을추출한후, 부탄올용매를감압농축기로제거하여인삼사포닌이다량함유된흑삼뿌리조사포닌추출물 7 g을얻어실험에사용하였다. (4) 흑인삼잎의제조 2010년 10월금산에서채집한 5년근인삼잎 10 kg을초음파세척기로세척한뒤건조한후흑삼의제조방법과동일한방법으로흑인삼엽을제조한뒤흑인삼잎조추출물과흑인삼잎조사포닌추출물을제조하여실험에사용하였다. 2. 흑삼의벤조피렌함량측정벤조피렌함량분석은식약청고시정량법 ( 식품의약품안전청고시제2008-51호, 2008) 에준하여측정하였다. 즉, 잘게분쇄한흑삼 ( 뿌리, 잎 ) 10 g을정확히취하여핵산 100 ml을분액여두에넣고물 : DMF 혼합액 (1:9) 50 ml를넣어균일하게흔들어섞어준다. DMF와핵산을분리한후, 핵산층에물 : DMF 혼합액 (1:9) 25 ml를넣고흔들어섞어준다음, 핵산과 DMF층을분리하였다. 이과정을 2회반복하여총 DMF 가 100 ml되도록하였다. 분리된 DMF 혼액층에 1% 황산나트륨용액 100 ml을넣고충분히섞은후핵산 50 ml를넣고추출하고다시헥산 35 ml를넣고 2회더추출하였다. 핵산층을증류수로 3회세척하여무수황산나트륨으로탈수한후 40 에서감압농축하여아세토니트릴 1 ml용해하고 0.45 μm막여과기로여과한후 HPLC에주입하여분석하였다. 컬럼은 Atlantis d을, 검출기는형광검출기를사용하였으며, 컬럼온도는 40, 이동상은물 : 아세토니트릴혼합액 (30:70), 유속은 1.0 ml/ 분이었다. 3. 아토피피부염의억제활성측정 사람의단핵구인 THP-1 ( 미국세포주은행, TIB-202) 세포 에각각 10 μm /ml 혹은 100 μm /ml 의흑삼추출물 ( 뿌리, 잎 ) 로 처리하고 0.5% FBS 및항생제 (100 U/mL penicillin, 100 μg / ml streptomycin) 가들어있는 RPMI 1640 배지에 37 에서 1 시간동안배양한후진드기항원 1 μg /ml 를 24 시간동안처 리하여 ELISA reader 를이용하여상층액에서 MCP-1/IL-6/ IL-8 의양을측정하여아토피피부염의억제활성을측정하였 다. 흑삼추출물 ( 뿌리, 잎 ) 의 MCP-1/IL-6/IL-8 억제율은다 음과같은식을통하여계산하였다. 억제율 (%) = 4. 통계처리 추출물처리후감소된 cytokine 의양 DpE 로처리후증가된 cytokine 의양 100 모든실험결과는평균 ± 표준편차로표시했으며실험군 간통계적인유의성은 GraphPad Prism program (ver. 4.0) 을이용하여 One-way ANOVA-test 후 Dunnett s Multiple Comparison Test 및 Newman-Keuls multiple range test 로확 인하였다. 1. 흑삼에존재하는벤조피렌함량 벤조피렌은 polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) 가고 온으로처리되는과정에서탄수화물, 지방, 단백질등이불완전연소할때주로생성되는데볶기, 튀김의가공과정에서생성이되나공기, 물, 토양에이미잔류할수있기때문에과일이나야채등가공하지않은식품에서도나타나기도한다. 가공과정중에발생하는벤조피렌은불에가깝게조리하거나처리시간이길어질수록발생량은증가한다고알려져있다. 이에식약청에서는식품중올리브유와식용유지, 한약재중숙지황및건지황에대한기준및시험법 (2009) 을신설하여벤조피렌의관리를강화하기에이르렀다 ( 식품의약품안전청고시제 2008-51 호, 2008). 특히벤조피렌은국제암연구소 (IARC) 에서발암물질그룹 1으로분류되고있어엄격한품질관리가요구되고있다. 숙지황을제조하는구증구포의방법은아홉번을찌고말리는과정을반복하기때문에증숙온도및건조과정중에벤조피렌이발생할확률이높아 2009년도에생약의벤조피렌기준및시험방법을제정하여벤조피렌허용기준을 5 ppb이하로규정한바있다. 이에고온고압으로제조한흑삼의벤조피렌함량을분석한 93
Table 1. Benzopyrene contents of black ginseng Group Conc. ( / ) BG radix 0.754 0.105 BG leaf 1.438 0.293 Data are means S.D. of 3 experiments. 결과를 Table 1에나타내었다. 실험결과흑삼뿌리와흑인삼잎의벤조피렌함량은각각 0.754±0.105와 1.438±0.293 ppb 로식약청에서제시한숙지황의벤조피렌허용기준 5ppb 이하를만족하는것으로나타났다. 즉고온고압에의해서흑삼을제조하는방법은적정한방법이라판단되었다. 2. THP-1세포에서집먼지진드기로유발한 IL-6, IL-8 및 MCP-1에대한흑삼추출물의억제활성아토피를유발한다고알려져있는집먼지진드기추출물을 THP-1 세포에처리하면 IL-6, IL-8 및 MCP-1이급격히증가하는아토피를유발 (Colloff, 1992, Lee et al., 2008, Shimizu et al., 1998, Sohn et al., 2007, Tan et al., 1996, Wong et al., 2006) 하는바, 최근에많은관심을받고있으며 2012년에인삼산업법에등재된흑삼의억제활성을관찰하고자하였다. 실험결과정상적인 THP-1세포에서 IL-6, IL-8 및 MCP-1의양은각각 19.4±1.4, 76.5±5.3 및 31.2±1.4 pg/ml로매우낮은수준이었으나, DpE를처리하면 IL-6, IL-8 및 MCP-1의양이급격히증가되어각각 803.9±15.7, 2012.2±54.8 및 582.6±10.4 pg/ml로증가됨을알수있었다 (Table 2). 이에비해서현재아토피환자에사용하고있는부신피질호르몬인 dexamethsone을처리하면 IL-6, IL-8 및 MCP-1의양이거의정상수준으로감소함을알수있었다. 또한흑삼뿌리추출물을처리하면 IL-6, IL-8 및 MCP-1의양이각각 607.3±17.9, 1656.5±29.4 및 194.8±6.4 pg/ml 으로유의적으로감소함을알수있었다 (p<.05). 특히흑삼뿌리추출물은 IL-6 및 IL-8에비해서선택적으로증가된 MCP-1 의양을감소시킴을알수있었다. 또한흑삼뿌리조사포닌을처리하면 IL-6, IL-8 및 MCP-1의양이각각 394.6±19.2, 1103.8±27.5 및 86.3±2.6 pg/ml으로흑삼뿌리추출물에비해서유의적으로강력하게억제함을알수있었다 (p<.01). 흑삼은이미항암활성을비롯한여러가지활성 (Kim et al., 2010; Kim et al., 2011; Lee et al., 2009) 을나타내어많은관심을받고있는가공인삼으로및홍삼의주성분인 ginsenoside Rg1, Re, Rb1, Rb2, Rc 및 Rd와같은사포닌의 aglycon에결합되어있는 sugar 부분이증숙과정중에가수분해되어탈수반응이일어나면서수삼이나홍삼에들어있지않거나미량들어있는 ginsenoside Rh1 (S, R), Rg6, Rg4, Rk3, Rh4, Rg3 (S, R), Rk1및 Rg5와같은사포닌이생성된다 (Lee et al., 2006). 본실험결과흑삼뿌리보다는흑삼뿌리조사포닌추출물이강한억제활성을나타내는것으로보아흑삼에존재하는여러가지사포닌에의해서증가된 IL-6, IL-8 및 MCP-1이감소된다고판단된다. 따라서향후흑삼에비교적많이존재하는백삼이나홍삼에미량존재하는 ginsenoside Rg3 (S, R), Rk1 및 Rg5 등의단일사포닌의억제활성을관찰할필요가있다고판단된다. 흑인삼잎추출물의경우 IL-6, IL-8 및 MCP-1의양이각각 534.5±19.9, 1394.0±26.3 및 121.7±4.7 pg/ml으로유의적으로 (p<.05) 흑삼뿌리추출물에비해서강한억제활성을나타냄을확인할수있었다. 또한흑인삼잎조사포닌추출물을처리하면 IL-6, IL-8 및 MCP-1의양이각각 284±20.4, 935.8±19.3 및 64.2±3.9 pg/ml으로유의적으로 (p<.01) 흑인삼잎추출물에비해서강한억제활성을나타내었다. 이러한결과는흑삼뿌리추출물에의한억제활성과유사한양상으로 Table 2. Inhibitory effects of black ginseng extracts on DpE-induced IL-6, IL-8 and MCP-1 levels in a THP-1 cell line Group Amount (pg/ml) IL-6 IL-8 MCP-1 Control 19.4 1.4 76.5 5.3 31.2 1.4 DpE 803.9 15.7 2012.2 54.8 582.6 10.4 Dexamethasone 21.3 1.5 132.8 10.4 29.4 6.1 Extracts of BG radix 607.3 17.9* 1656.5 29.4* 194.8 6.4* Crude saponin fraction of BG radix 394.6 19.2** 1103.8 27.5** 86.3 2.6** Extracts of BG leaf 534.5 19.9* 1394.0 26.3* 121.7 4.7* Crude saponin fraction of BG leaf 284.2 20.4** 935.8 19.3** 64.2 3.9** Data are means S.D. of 3 experiments. *p<.05, **p<.01, and ***p<.001 significantly different as compared to DpE group [One-way ANOVA followed by Dunnett s Multiple Comparison Test]. 94
조사포닌처리군의억제활성이강하였다. 따라서향후흑인삼잎에존재하는여러가지사포닌들의억제활성을측정할필요가있다고판단된다. 또한전반적으로뿌리보다는지상부인잎에의한억제활성이강함을알수있었다. 일반적으로인삼뿌리에는 3-5% 의조사포닌이존재하며, 인삼잎에는뿌리에비해서 3-5배되고, 화학구조도뿌리와거의동일할뿐만아니라뿌리에는존재하지않는성분들도존재한다고보고되어있어최근성분뿐만아니라다양한여러가지활성연구가진행되고있다 (Chang, 1998; Park et al., 2005; Wang et al., 2006; Xie et al., 2005). 본실험결과앞서설명한바와같이뿌리에비해서잎의억제활성이강한것은흑인삼잎에는흑삼뿌리에비해서사포닌이다량존재하기때문인것으로판단된다. 3. EoL-1세포에서집먼지진드기로유발한 IL-6, IL-8 및 MCP-1에대한흑삼추출물의억제활성아토피를유발한다고알려져있는집먼지진드기추출물을 EoL-1 세포에처리하면 IL-6, IL-8 및 MCP-1이급격히증가하는아토피를유발 (Colloff, 1992; Lee et al., 2008; Shimizu et al., 1998; Sohn et al., 2007; Tan et al., 1996; Wong et al., 2006) 하는바, 흑삼의억제활성을관찰하고자하였다. 실험결과는 Table 3에나타내었다. 전반적으로 THP-1 세포에대한실험결과에거의유사한양상으로억제활성을나타내었다. 즉, 정상적인 EoL-1세포에서 IL-6, IL-8 및 MCP-1 의양은각각 20.7±1.2, 98.3±10.8 및 28.3±1.2 pg/ml 로매우낮은수준이었으나, DpE를처리하면 IL-6, IL-8 및 MCP-1의양이급격히증가되어각각 596.3±14.3, 974.2± 54.8 및 396.3±4.9 pg/ml로증가됨을알수있었다. 이에비해서현재아토피환자에사용하고있는부신피질호르몬인 dexamethsone을처리하면 IL-6, IL-8 및 MCP-1의양이거의정상수준으로감소함을알수있었다. 또한흑삼뿌리추출물을처리하면 IL-6, IL-8 및 MCP-1의양이각각 304.3± 16.3, 548.4±32.8 및 174.0±8.4 pg/ml으로유의적으로감소함을알수있었다 (P<.05). 특히흑삼뿌리추출물은 THP-1 세포와마찬가지로 IL-6 및 IL-8에비해서선택적으로증가된 MCP-1의양을 50% 이상감소시킴을알수있었다. 또한흑삼뿌리조사포닌을처리하면 IL-6, IL-8 및 MCP-1의양이각각 198.8±15.4, 384.8±25.2 및 60.8±4.3 pg/ml으로흑삼뿌리추출물에비해서유의적으로강력하게억제함을알수있었다 (p<.01). THP-1 세포에대한결과와마찬가지로, EoL- 1 세포에대해서흑삼뿌리보다는흑삼뿌리조사포닌추출물이강한억제활성을나타내는것으로보아흑삼에존재하는여러가지사포닌에의해서증가된 IL-6, IL-8 및 MCP-1이감소된다고판단된다. 흑인삼잎추출물의경우 IL-6, IL-8 및 MCP-1의양이각각 205.3±17.5, 405.9±19.5 및 126.9±9.5 pg/ml으로유의적으로 (p<.05) 흑삼뿌리추출물에비해서강한억제활성을나타냄을확인할수있었다. 또한흑인삼잎조사포닌추출물을처리하면 IL-6, IL-8 및 MCP-1의양이각각 134.2±22.6, 204.8±27.4 및 36.4±4.3 pg/ml으로유의적으로 (p<.01) 흑인삼잎추출물에비해서강한억제활성을나타내었다. 특히흑인삼잎조사포닌추출물을처리하면 MCP-1의경우양성대조군으로사용한 dexamethasone과거의거의동등한수준의억제활성을나타내었다. 기존의전통적인방법인구증구포의방법이아닌고온고압의 Table 3. Inhibitory effects of black ginseng extracts on DpE-induced IL-6, IL-8 and MCP-1 levels in an EoL-1 cell line Group Amount (pg/ml) IL-6 IL-8 MCP-1 Control 20.7 1.2 98.3 10.8 28.3 1.2 DpE 596.3 14.3 974.2 54.8 396.3 4.9 Dexamethasone 20.4 0.5 102.5 9.5 30.6 4.3 Extracts of BG radix 304.3 16.3* 548.4 32.8* 174.0 8.4* Crude saponin fraction of BG radix 198.8 15.4** 384.8 25.2** 60.8 4.3** Extracts of BG leaf 205.3 17.5* 405.9 19.5* 126.9 9.5* Crude saponin fraction of BG leaf 134.2 22.6** 204.8 27.4** 36.4 4.3** Data are means S.D. of 3 experiments. *p<.05, **p<.01, and ***p<.001 significantly different as compared to DpE group [One-way ANOVA followed by Dunnett s Multiple Comparison Test]. 95
새로운방법을적용하여인삼으로부터흑삼 ( 뿌리, 잎 ) 을제조하였으며, 다음과같은결론을얻었다. 수삼을원료로하여 0.12 MPa의압력하에 120 에서 3시간증숙한후건조시켜흑삼뿌리및흑인삼잎을제조하였으며, 제조한흑삼 ( 뿌리, 잎 ) 에는식약청벤조피렌허용기준인 5 ppb 이하로검출되었다. 또한아토피를유발한다고알려져있는집먼지진드기추출물 (DpE) 을 THP-1과 EoL-1 세포에처리하였을때 IL-6, IL-8 및 MCP-1이급격하게증가하는데흑삼 ( 뿌리, 잎 ) 추출물이유의적으로증가된 IL-6, IL-8 및 MCP-1의양을강하게억제하는것을확인하였다. 또한흑삼뿌리추출물보다는흑삼뿌리조사포닌추출물이, 흑인삼잎추출물보다는흑인삼잎조사포닌추출물이강한억제활성을나타내는것으로보아억제활성을나타내는것은사포닌성분을것으로판단되었다. 한편사포닌이뿌리에비해서 3-5배정도많이존재하는흑인삼잎이흑삼뿌리보다강한억제활성을나타내었다. 이상의실험결과로부터흑삼은아토피질환에효과적으로사용될수있을것으로판단되며향후흑삼 ( 뿌리, 잎 ) 에존재하는단일사포닌의억제활성및보다구체적인작용기전에대한추가적인연구가필요할것으로판단된다. 감사의글본연구는 2010년농림부농림기술개발연구과제현장적용기술개발 ( 과제번호 110060-03-2-CG000) 의의해수행되었는바이에감사드립니다. 은희철, 피부면역학. 서울대학교출판부. p27-34, 1999. 식품의약품안전청고시제 2008-51호. 올리브유중벤조피렌잔류허용기준및시험법. 2008. Chang HK. Changes of saponin contents in Panax ginseng leaves by different harvesting months. Kor. J. Food Nutr., 11: 82-86, 1998. Colloff MJ. Ecposure to house dust mites in homes of people with atopic dermatitis. Br. J. Dermatol., 127: 322-327, 1992. De Benedetto A, Agnihothri R, McGirt LY, Bankova LG, Beck LA. Atopic dermatitis: a disease caused by innate immune defects?. J. Invest. Dermatol., 129: 14-30, 2009. Friedmann PS. The role of dust mite antigen sensitization and atopic dermatitis. Clin. Exp. Allergy, 29: 869-872, 2006. Han BH, Park MH, Han YN. Degradation of ginseng under mild acidic condition. Planta Med. 44: 146-149, 1982. Hasegawa H, Sung JH, Matsumiya S, Uchiyama M. Main ginseng saponin metabolites formed by intestinal Prevotella oris in hydrolyzing ginseng saponins. Planta Med., 63: 436-440, 1997. Kim AJ, Kang SJ, Lee KH, Lee MS, Ha SD, Cha YS, Kim SY. The chemopreventive potential and antiinflammatory activities of Korean black ginseng in colon26-m3.1 carcinoma cells and macrophages. J. Kor. Soc. Appl. Biol. Chem., 53: 101-105, 2010. Kim HJ, Lee, JY, You BR, Kim HR, Choi JE, Nam KY, Moon BD, Kim MR. Antioxidant activities of ethanol extracts from black ginseng prepared by steamingdrying cycles. J. Kor. Soc. Food Sci. Nutr., 40: 156-162, 2011. Kitagawa I, Yoshikawa M, Yoshihara M, Hayashi T, Taniyama T. Chemical studies of crude drugs (1). Constituents of Ginseng radix rubra. Yakugak Zasshi. 103: 612-622, 1983. Lee JH, Shen GN, Kim EK, Shin HJ, Myung CS, Oh HJ, Kim DH, Roh, SS, Cho W,m Seo YB et al. Preparation of black ginseng and its antitumor activity. Kor. J. Oriental Physiol. Pathol., 20: 951-956, 2006. Lee JS, Kim IS, Ryu JS, Yun CY. House dust mite, Dermatophagoides pteronissinus increase expression of MCP-1, IL-6 and IL-8 in human monocytic THP-1 cells. Cytokine, 42: 365-71, 2008. Lee MR, Yun BS, Sun BS, Liu L, Zhang, DL, Wang CY, Wang Z, Ly SY, Mo EK, Sung CK. Change of ginsenoside Rg3 and acetylcholinesterase inhibition of black ginseng manufactured by grape juice soaking. J. Gineng Res. 33: 349-354, 2009. Leung DY. Atopic dermatitis: new insights and opportunities for therapeutic intervention. J. Allergy Clin. Immunol., 105: 860-876, 2000. Park JD, Rhee DK, Lee YH. Biological activities and chemistry of saponin from Panax ginseng C. A. Meyer. Phytochem. Rev., 4: 159-175, 2005. Ring J, Darsow U. Role of aeroallergens in atopic eczema: Proof of concept with the atopy patch test. J. Am. Acad. Dermatol., 45: 49-52, 2001. Shimizu Y, Shichijo M, Hiramatsu K, Takeushi M, Nagai H. Mite antigen-induced IL-4 and IL-13 production by 96
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