03-꼬치동자개(0299)

KOREAN JOURNAL OF ICHTHYOLOGY, Vol. 20, No. 4, 255-262, December 2008 ISSN: 1225-8598 Received : October 8, 2008 Revised : December 19, 2008 Accepted : December 21, 2008 꼬치동자개 Pseudobagrus brevicorpus 인공종묘의성분화과정 오민기 박종영 * 강언종 1 양상근 1 김응오 1 조용철 1 전북대학교자연과학대학생물과학부 생물다양성연구소, 1 국립수산과학원남부내수면연구소 Sexual Differentiation in Korean Stumpy Bullhead Pseudobagrus brevicorpus Derived from Artificial Fertilization by Min-Ki Oh, Jong-Young Park*, Eon-Jong Kang 1, Sang-Geun Yang 1, Eung-Oh Kim 1 and Yong- Cheol Jo 1 (Faculty of Biological Science and Institute for Biodiversity Research, College of Natural Sciences, Chonbuk National University, Jeonju 561-756, Korea; 1 Inland Aquaculture Research Institute, NFRDI, Jinhae 645-806, Korea) ABSTRACT The endemic Korean stumpy bullhead Pseudobagrus brevicorpus is a first-grade endangered wild fish as designated by the Ministry of Environment of Korea. As part of its restoration and proliferation effort, a histological study of this fish was carried out to investigate sex differentiation and gonadal development based on F 1 generation individuals obtained by artificial breeding. On days 4~5 after hatching, a pair of genital ridges including clusters of primordial germ cells was observed between the gut and the mesonephric duct. On days 20 after hatching, the ovary began to initially differentiate and contained early oocytes with chromatin-nucleolus and peri-nucleolus stages on days 30~40 after hatching. As yolk material accumulated after day 80 from hatching, the oocytes grew increasingly large and were surrounded by a distinct follicular layer. On days 306 after hatching, the oocytes grew toward a mature ovum. In the males, the testis was distinguished by emergence of spermatogonium cells on 25 days after hatching, and day 40 after hatching it contained a small number of seminal lobes forming cysts. From 173 days after hatching, the testis consisted of numerous enlarged seminal lobes including spermatocytes and spermatids. Over 14 months after hatching, some seminal lumens were filled with spermatozoa. Key words : Endemic, Pseudobagrus brevicorpus, sex differentiation, gonadal development 서 꼬치동자개, Pseudobagrus brevicorpus는메기목 (Siluriformes) 동자개과 (Bagridae) 에속하는한국고유담수어로서낙동강의일부지역에제한적으로분포하고있는종이다 ( 김등, 2005). 최근분포지역과개체군밀도의감소로인해환경부 (2005) 와문화재청 (2005) 으로부터각각 멸종위기야생동식물 1급 과 천연기념물제455호 로지정되어특별히보호 관리되고있는종이다. 농림수산식품부산하국립수산과학원남부내수면연구소에서는꼬치동자개증식 복원연구사업의일환으로인공증식기술개발및인공종묘방류를위하여생태와초기생활사에대한연구를실시한바있다 ( 강등, 2007). 또한방 론 * 교신저자 : 박종영 Tel: 82-63-270-3344, Fax: 82-63-270-3362, E-mail: park7877@chonbuk.ac.kr 류된인공종묘가자연서식처에적응하기위한미소서식처와먹이생물등최소한의서식조건에대한연구가시행된바있다 ( 이, 2004). 그러나꼬치동자개의인공종묘에따른성적능력 (sexual ability) 에대한연구는아직까지보고된바가없다. 인공종묘에대한생식소의성분화및성적능력에관한연구는민어, Miichtys miiuy (Park et al., 2007), Cichlasoma dimerus (Meijide et al., 2005), 감성돔, Acanthopagrus schlegeli ( 이등, 1994), 망상어, Ditrema temmincki ( 이와이, 1996), 조피볼락, Sebastes schlegeli ( 이등, 1996), 미꾸라지, Misgurnus mizolepis (Kim et al., 1990), 대농갱이, Leiocassis ussuriensis ( 박등, 2001), 동자개, Pseudobagrus fulvidraco ( 김등, 2002), 줄납자루, Acheilognathus yamatsutae ( 진등, 2008) 등의어류에서잘알려져있지만, 본연구대상종인꼬치동자개에대한생물학적연구는골격 ( 이와김, 1987) 과정자미세구조 ( 김과이, 2003) 분석을통한계통 255 http://www.fishkorea.or.kr

256 오민기 박종영 강언종 양상근 김응오 조용철 유연관계에대한논의, 생태와초기생활사 ( 강등, 2007) 만이보고되어있을뿐인공종묘에대한성분화및생식소발달과정에대한연구는알려진바없다. 따라서본연구에서는인위적인교배를통해얻어진자치어를대상으로성장에따른생식세포의성분화및발달과정을조사하여이들의임성 (fertility) 여부를확인하고, 차후자연서식처에방류할인공종묘의생식학적적응에대한기초자료를얻고자한다. 재료및방법본연구에사용된꼬치동자개의자 치어는남부내수면연구소의인공종묘증식기술 ( 환경부, 2008) 에의해 2007년 6월 9일인공부화된개체들로서이들은부화후 122일째 (2007. 10. 16) 까지실내사육을하였고, 그이후부터는실외사육을실시하였다. 사육시먹이는 artermia, zeus 3호 ( 사료 ), 장구벌레등을발생시기별로적절히공급하였고, 수온은 20.2~27.3 C( 실내 ), 7.2~27.0 C( 실외 ) 범위였다. 꼬치동자개인공종묘의성분화시기와발달과정을조사하기위한자 치어는부화후 30일까지는매일시료채취를실시하여 Bouin s solution에고정하였고, 그이후발생단계부터는 1개월간격으로실시하였다. 고정된시료의생식소는 Paraffin 절편법을이용하여 5 μm 두께로연속절편을제작한후 Hematoxylin-Eosin 염색 (Presnell and Schreibman, 1997) 을실시하였고 Axio Vision (Ver. 4.5) 을통해생식소발달정도를판별하였다. 생식소의분화및발달과정은 Nagahama (1983) 을따랐다. 결과 1. 성장인공종묘로얻은꼬치동자개자 치어의발육단계에따른성장을조사한결과 (Table 1) 부화후 3일째자어의전장은 6.87±0.13 mm, 체중은 0.01 g이었고, 부화후 131일째 ( 전장 49.73±2.19 mm, 체중 1.86±0.24 mm) 까지성장이빠르게진행되었다. 수온이 20 C 미만으로낮아진시기의치어성장은둔화되었으나부화후 334일째 ( 전장 48.79± 3.38 mm, 체중 1.82±0.36 mm) 부터성장이증가하기시작하였다. 2. 생식소분화 1) 원시생식세포의형성부화후 4~5일째자어에서생식융기 (genital ridge) 1쌍이장 (gut) 과중신관 (mesonephric duct) 사이에서뚜렷하게 Table 1. Change of body weight and total length of Pseudobagrus brevicorpus with days after hatching Sampling date Days after hatching (day) 관찰되었다 (Fig. 1). 이들은여러개의단일세포무리로구성된원시생식세포 (primordial germ cell) 를포함하고있으며, 중배엽성의간충조직 (mesenchyme) 에둘러싸여있었다. 부화후 6일째자어시기부터원시생식세포는유사분열 (mitosis) 이활발히진행됨에따라생식세포수가증가하기시작하였는데, 이러한증가는부화후약 2주일까지지속되었다 (Fig. 1). 2) 난소의성분화 Total length (mm) Weight (g) Water temperature ( C) 2007-06-12 3 6.87±0.13 0.01±0.00 22.2 2007-06-19 10 10.12±0.32 0.02±0.00 20.2 2007-06-26 17 12.35±0.71 0.04±0.00 21.5 2007-07-03 24 13.35±1.00 0.05±0.01 21.9 2007-07-19 40 24.20±1.69 0.30±0.05 23.8 2007-08-28 80 32.60±2.37 0.61±0.11 27.3 2007-09-17 100 41.93±2.92 1.38±0.22 23.6 2007-10-18 131 49.73±2.19 1.86±0.24 21.2 2007-11-29 173 46.53±3.09 1.39±0.27 12.5 2008-01-04 211 48.07±3.26 1.50±0.25 7.2 2008-02-04 242 48.91±2.89 1.51±0.29 8.0 2008-03-04 271 47.02±4.23 1.35±0.33 10.8 2008-04-08 306 47.16±3.22 1.44±0.25 15.8 2008-05-06 334 48.79±3.38 1.82±0.36 22.0 2008-06-04 363 57.54±6.50 2.80±0.87 20.5 2008-07-08 397 70.01±5.56 4.16±0.85 26.5 (1) 난소의분화및발달난형성 (oogenesis) 은크게증식기 (multiplication stage), 성장기 (growth stage), 난황물질형성기 (yolk material stage), 성숙기 (maturation stage) 로구분되었다. 1 증식기난형성의전구세포인핵과인을가지는난원세포 (Oogonium) 의출현은부화후 20일째치어에서나타났으며이시기에성장기 (growth stage) 에해당하는초기난모세포 (Early Oocyte) 가존재하였다 (Fig. 2A). 2 성장기부화후 30일째치어의난소는대부분성장기의난모세포의발달단계를보였다. 이시기는핵이비대해져배포 (genital vesicle) 가형성되는데가느다란염색체및다수의염색인이이배포주변에분포하는염색인기 (chromatinnucleolus) 의난모세포가출현하였다 (Fig. 2B). 또한유사분열을통해인이더욱가늘어져핵막의안쪽에배열하고세포는더욱커지면서세포질이강한호염기성을띠는주변인기 (peri-nucleolus) 의난모세포로성장한다. 이러한주변인기의난모세포는부화후 40일째더욱뚜렷하게나타났

꼬치동자개의성분화 257 Fig. 1. Transverse section of the undifferentiated gonad in Korean stumpy bullhead, Pseudobagrus brevicorpus. Hematoxylin-Eosin staining. (A) 5 days after hatching, (B) 6 days after hatching, (C) 10 days after hatching, (D) 15 days after hatching. G, gut; GR, genital ridge; M, mesenchyme; MD, mesonephric duct; PGC, premordial germ cell. Bars indicate 100 μm. 다 (Fig. 2C). 이시기에난모세포를둘러싸는여포세포 (follicular cell) 가뚜렷해지기시작하였다. 3 난황물질형성기성장기를거친난모세포는난황포 (yolk vesicle) 및난황구 (yolk granule) 의난황물질의축적으로난황형성이뚜렷해지면서난모세포가더욱성장하는시기이다. 난황포시기는세포질주변에 hematoxylin과 eosin에염색되지않는빈공포모양으로배열되는시기로서약부화후 80일에출현하였다 (Fig. 2D). 발생이진행될수록이러한세포는크기의증가와더불어난황포크기및수가증가하는특징을보였다. 부화후 100일째의난모세포는이러한난황포주변에 eosin에염색되는작은과립의난황구가나타나며그수와크기는난모세포가성장함에따라축적되기시작하였다 (Fig. 2E). 이러한난황구시기의난모세포들은부화후약 10개월째 ( 부화후 306일 ) 치어시기까지지속되었다 (Fig. 2G). 이시기에난모세포를둘러싸고있는난막 (zona radiata) 은 Hematoxylin-Eosin에거의염색이되지않고난포세포 (theca cell) 로구성되어있는여포세포층 (follicular layer) 으로둘러싸여있었다 (Fig. 2I). 그후난모세포는계속성장 하면서부화후 397일째치어기에난황구시기의작은과립들이서로융합하여소량의난황덩어리를형성하기시작하였다 (Fig. 2H). (2) 난소의외부형태난소는부화후약 40일째부터좌우 1쌍의가느다란관으로이루어져있어육안으로구분할수있으나부화후약 80일째 ( 전장 32.8 mm) 되는개체의난소는비교적발달된난소를형성하고있었다 (Fig. 4A). 이시기의난소는유백색을띠고있고, 좌우 1쌍으로구성되어있으며, 비뇨생식공부분에서서로융합되어있는정상적인외부형태를보여주었다. 이시기의난모세포의발달단계는난황물질인난황포와난황구가형성되는시기를보였다 (Fig. 2D-G). 부화후 397일째 ( 전장 67.8 mm) 의난소는상당히발달한모습을보였지만 (Fig. 4C) 성숙란을형성하기위한성분화가진행중이었다 (Fig. 2H). 3) 정소의성분화 (1) 정소의분화및발달정자형성 (spermatogenesis) 은크게증식기 (multiplication stage), 성숙분열기 (meiosis), 정자형성기 (spermiogenesis) 로

258 오민기 박종영 강언종 양상근 김응오 조용철 Fig. 2. Transverse section of the gonad (ovary) in Korean stumpy bullhead, Pseudobagrus brevicorpus. Hematoxylin-Eosin stainging. (A) 20 days after hatching (multiplication stage), (B) 30 days after hatching (chromatin-nucleolus stage), (C) 40 days after hatching (peri-nucleolus stage), (D) 80 days after hatching (yolk granule stage), (E) 100 days after hatching (yolk granule stage), (F) 173 days after hatching (yolk granule stage), (G) 306 days after hatching (yolk granule stage), (H) 397 days after hatching (late yolk granule stage). CN, chromatin-nucleolus stage; CP, cytoplasm; FC, follicular cell; GV, germinal vesicle; L, lumen; OG, oogonium; PN, peri-nucleolus stage; TC, theca cell; YG, yolk granule; YV, yolk vesicle; ZR, zona radiata. Bars indicate 100 μm.

꼬치동자개의성분화 259 Fig. 3. Transverse section of testis in Korean stumpy bullhead, Pseudobagrus brevicorpus. Hematoxylin-Eosin stainging. (A) 25 days after hatching (multiplication stage), (B) 40 days after hatching, (C) 100 days after hatching (meiosis stage), (D) 131 days after hatching (meiosis stage), (E) 173 days after hatching (meiosis stage), (F) 397 days after hatching (spermiogenesis stage). C, cyst; G, gut; MD, mesonephric duct; S, sertoli cell; SC, spermatocyte; SG, spermatogonium; SL, seminal lumen; ST, spermatid; SZ, spermatozoon. Bars indicate 100 μm. 구분할수있다. 정소의내부구조는정소엽형 (lobular type) 으로각각의정소엽은많은포낭 (cyst) 로구성되어있으며이곳에서정원세포 (spermatogonia), 정모세포 (spermatocyte), 정세포 (spermatid), 정자형성 (spermiogenesis) 등의발달이이루어지고있다. 1 증식기증식기는정원세포가유사분열을통해그수가증식되는시기로서초기의정원세포는원형의커다란핵과인을가진다. 부화후 25일째치어에서정원세포가나타나기시작 하였으며 (Fig. 3A), 부화 40일째치어에서는이러한정원세포들이유사분열을통해성장하면서정소엽구조및정원세포를둘러싸는포낭을형성하게된다 (Fig. 3B). 2 성숙분열기 (meiosis) 부화후 100일째치어에서는정원세포의수및포낭이급속히증가하고정소엽구조역시증가하면서핵과인은 Hematoxylin에의해매우진하게염색되는정모세포로분화하였다 (Fig. 3C). 이러한정모세포의발달단계는부화후 131일까지계속되었다 (Fig. 3D). 부화후 173일째치어의

260 오민기 박종영 강언종 양상근 김응오 조용철 A B C D Fig. 4. External morphology of gonads of Pseudobagrus brevicorpus. (A) ovary of 80 days after hatching (32.8 mm in TL), (B) testis of 131 days after hatching (48.7 mm in TL), (C) ovary of 397 days after hatching (67.8 mm in TL), (D) testis of 397 days after hatching (73.5 mm in TL). Bars indicate 0.5 mm. 정소에서는염기성 hematoxylin에진하게염색되며더욱치밀하게작은세포들로구성되어진정세포가발달하기시작하였다 (Fig. 3E). 부화후 7개월 (211일) 의정소에서는정자의발달단계가더욱진행되면서각각의정세포를포함하는포낭이커지면서정소엽은서로융합하기시작하였다. 3 정자형성기부화후만 1년이상 ( 부화후 397일 ) 의정소에서는정세포의포낭이터지면서주머니모양을형성하고있으며, 정 소엽의내강으로방출된소량의정자가출현하였다 (Fig. 3F). 정소엽의내강에방출된정자가많을수록정소엽의격벽이붕괴되면서서로융합, 확대되어망상구조를보이기도하였다. (2) 정소의외부형태정소의외부형태는부화초기좌우 1쌍의가느다란관으로이루어져있으나실제육안으로정소의구분은부화후약131일째 ( 전장 48.7 mm) 가되는개체에서가능하였

꼬치동자개의성분화 261 다. 이시기의정소는백색으로끝이뾰족한 cylinder 형으로써좌우 1쌍의아래는서로유합되어생식공과연결되어있다. 특히이러한정소는빗모양 (Comblike structure) 의형태적특징을보였다 (Fig. 4B). 이시기의정소의발달단계는대부분정모세포와소량의정세포로구성된정소의발달단계를보였다 (Fig. 3D). 부화후 397일째 ( 전장 73.5 mm) 의정소는비교적성숙한구조를갖추었다 (Fig. 4D). 고찰일반적으로어류의성분화는생식소의출현양상에따라자웅이체형 (gonochorism) 과자웅동체형 (hermaphroditism) 으로구분되고, 발달양상에따라자웅이체성미분화형 (undifferentiated), 분화형 (differentiated) 그리고자웅동체성자웅동시성숙 (synchronous), 자성선숙 (protogynous), 웅성선숙 (protoandrous), sequential로구분된다 ( 이와이, 1996; Moyle and Joseph, 2000; 곽등, 2006). 자웅동체는전세계경골어류 14과 (Family) 의어류에서나타나고있는현상으로 harem 계층을가지는어류에서매우특징적으로나타나는현상이다 (Shapiro, 1984). 그러나대부분의어류는정소와난소가발생초기구분되어성별을결정짓게되는데, 본연구대상종인꼬치동자개역시부화후 5일을전후하여원시생식세포가출현한이후약 1개월이내에성별이결정되어지는것으로볼때, 본종의성분화는자웅이체성분화형양상을보였다. 성분화는발생학적으로종특이성을갖는데원시생식세포의생식융기출현에의한초기생식소판별과생식소분화시기는대농갱이 (Leiocassis ussuriensis) 의경우각각부화후 5일과 20일전후였고 ( 박등, 2001), 미꾸라지 (Misgurnus mizolepis) 는부화후 4~5일과 8일이었다 (Kim et al., 1990). 한편버들치 (Rhynchocypris oxycephalus) 는부화후 8일에원시생식세포가출현하였고, 20일에생식융기가출현하였으며생식소분화는난소가 50일경, 정소가 100일경에출현하여생식소분화에대한시간적차이를보였다 ( 박등, 1998). 본연구대상종인꼬치동자개는부화후 5일경원시생식세포가출현한이후곧생식융기가출현하였고 20~25일경생식소분화가나타난점등으로볼때, 유연종인대농갱이와다소유사한성분화양상을보였다. 또한꼬치동자개의생식소분화시기에있어서난소 ( 부화후 20 일경 ) 가정소 ( 부화후 25일경 ) 보다다소빠르게분화된다는점은분화형자웅이체생식소의특성을나타내고있었다 ( 박등, 1998). 생식소성숙과성분화는여러환경요인에의해영향을받게된다 ( 곽등, 2006). 특히수온은성분화에직접적인영향을주는요인으로사료되었고 ( 이등, 2000), 심지어는성 전환에있어서도중요인자로써작용하였다 (Yamamoto, 1999). 이러한현상은꼬치동자개인공종묘의성장 (Table 1) 에있어서도성분화이후의성장에대한적당한환경인자로써작용하는것으로보이고, 또한수온이급감하는 11 월 ~4월 ( 동절기 ) 의생식소는분화보다는성장의모습을보이는것으로여겨진다. 한편부화후 397일째치어의난세포 (Ootid; Fig. 2H) 는성숙난자 (Ovum) 로분화중인과정에있는데, 이때의난세포직경 ( 장경 ) 은약0.4 mm로서산란기성숙된난경으로추정된 1.79±0.11 mm ( 환경부, 2008) 에도달하기위해서는약 90배정도의난구부피의증가가요구된다. 이때성숙란을가지는시기의체장범위는대략 7.3~8.7 cm로서체장빈도분석에의한만 2년생성어로조사되었다. 따라서꼬치동자개인공종묘역시만 2년의성장기간을통해비로소산란이가능한성숙한난자를생성할것으로사료되며, 김 (1997) 에의해산란기로추정된 6~7월에정상적인산란이이루어질것으로생각된다. 또한본연구에서확인된정자발달양상은안등 (1999) 에서처럼포낭에서정자변태가완료된성숙된정자가정소엽을거쳐정소낭내로이탈하여나오는과정과유사하여꼬치동자개종묘의정자발달역시정상적인성분화과정을거치고있다고사료된다. 본연구에쓰인발생단계별꼬치동자개자 치어는자연에서채집된친어로부터인공수정을통해획득한 F 2 세대개체군으로서현재정상적인발생과성장이이루어지고있다. 그러나본연구사업의근본취지인하천생태계로의방류를위해서는생식소의정상발달여부와함께방류지의서식처환경 ( 유등, 2003) 과인공종묘개체군의유전적다양성 ( 이등, 2008; 정과전, 2008) 등이함께고려되어야할것이다. 요약멸종위기야생동식물 1급으로지정된꼬치동자개, Pseudobagrus brevicorpus의종복원을위해인위적인교배를통하여획득한자치어를대상으로성분화과정을조사하여성적임성여부를확인하였다. 부화후 4~5일째자어에서생식융기 1쌍이장과중신관사이에서관찰되었고, 그후유사분열이활발히진행되었다. 부화후 20일째치어에서난원세포의출현으로난소분화가시작되었으며, 부화후 30~40일째를거치면서염색인기와주변인기의난모세포로성장하였다. 난황은부화후 80일째의자어에서생성되기시작하였고, 부화후 100일째가되어eosin에염색되는난황구가생성되었다. 이후난모세포는난황이지속적으로축적되면서세포의크기와수가증가하기시작하였고, 부화후약 10개월째에는난막과여포세포층에의해둘러싸여진난모세포로분화하였다.

262 오민기 박종영 강언종 양상근 김응오 조용철 한편정소는부화후 25일경치어에서분화되기시작하였고, 40일경유사분열을통해정원세포를둘러싸는포낭을형성하였다. 부화후 100일째가되면정소는정소엽구조를형성하였고 hematoxylin에매우진하게염색되는정모세포로분화하였다. 부화후 7개월째치어의정소엽내부에정세포가출현한이후, 부화후만 1년을경과한치어에서최초로성숙한정자가출현하였다. 위결과를바탕으로인공적으로부화된꼬치동자개자치어의성분화는다른종에서보이는것과같이정상적인발달을보인다고판단되었다. 인용문헌 강언종 양현 이흥헌 조용철 김응오 임상구 방인철. 2007. 꼬치동자개 (Pseudobagrus brevicorpus) 의생태와초기생활사. 환경생물, 25: 378-384. 곽은주 이경우 최낙현 박충국 한경호 이원교. 2006. 황점볼락 Sebastes oblongus 인공종묘의생식소발달과성비. 한국수산학회지, 39: 297-302. 김구환 이준일. 2003. 꼬치동자개 (Pseudobagrus brevicorpus) 정자의미세구조와계통적고찰 ( 경골어류, 메기목, 동자개과 ). 한국수산학회지, 36: 480-485. 김익수. 1997. 한국동식물도감제37권동물편 ( 담수어류 ). 교육부, 622pp. 김익수 최윤 이충렬 이용주 김병직 김지현. 2005. 한국어류대도감. 교학사, 615pp. 김정혜 방인철 박인석. 2002. 동자개 Pseudobagrus fulvidraco 의성분화. 수산관련학회춘계공동학술대회발표요지집, pp. 274-275. 문화재청. 2005. 국가지정문화재지정보고서 ; 천연기념물 명승. pp. 56-57. 박상용 이윤아 최경철 강언종 방인철. 2001. 대농갱이 (Leiocassis ussuriensis) 의초기생식소형성및성분화. 한국어류학회지, 13: 248-253. 박인석 김정혜 방인철 김동수. 1998. 버들치, Rhynchocypris oxycephalus 초기생식소발달과성분화에관한조직학적연구. 발생과생식, 2: 69-74. 안철민 이정식 허성회. 1999. 문치가자미 (Limanda yokohamae) 의정자형성에관한미세구조적연구. 한국전자현미경학회지, 29: 427-435. 유진형 황두진 윤양호 정관식 고현정. 2003. 가막만방류감성돔 (Acanthopagrus schlegeli) 치어의초기적응. 한국수산학회지, 36: 365-371. 이영돈 강법세 이정재. 1994. 감성돔, Acanthopagrus schlegeli (Bleeker) 의성분화. 한국어류학회지, 6: 237-243. 이영돈 노섬 장영진 백혜자 안철민. 1996. 조피볼락 (Sebastes schlegeli) 의성분화. 한국수산학회지, 29: 44-50. 이일로 이윤아 신현철 남윤권 김우진 방인철. 2008. AFLP 분석에의한멸종위기어류미호종개, Iksookimia choii 의유전다양성. 한국육수학회지, 41: 98-103. 이정식 이영돈. 1996. 태생경골어류, 망상어 (Ditrema temmincki) 의초기생식소형성및성분화. 한국수산학회지, 29: 35-43. 이충렬. 2004. 한국의멸종위기및희귀어류현황과보존. 한국어류학회추계학술발표대회심포지움발표요약집, pp. 17-27. 이충렬 김익수. 1987. 꼬치동자개 Coreobagrus brevicorpus 의골격에관한연구. 한국육수학회춘계학술발표요지록, p. 125. 이치훈 나오수 여인규 백혜자 이영돈. 2000. 성스테로이드호르몬과고수온처리가조피볼락, Sebastes schlegeli 성분화에미치는영향. 한국수산학회지, 33: 373-377. 정달상 전창영. 2008. 종묘방류에따른넙치, Paralichthys olivaceus 지역집단의유전학적구조. 한국어류학회지, 20: 156-162. 진영국 김치홍 이철우 김재원 이정식. 2008. 줄납자루, Acheilognathus yamatsutae 의성성숙에따른외부생식형질의변화. 한국어류학회지, 20: 13-20. 환경부. 2005. 야생동식물보호법시행규칙. 환경부령제 171 호. 환경부. 2008. 꼬치동자개증식 복원연구. 68pp. Kim, D.S., K.Y. Lee and T.Y. Lee. 1990. Gonadal sex differentiation in Misgurnus mizolepis. Korean J. Ichthyol., 2: 95-105. Meijide, F.J., F.L. Lo Nostro and G.A. Guerrero. 2005. Gonadal development and sex differentiation in the cichlid fish Cichlasoma dimerus (Teleostei, Perciformes): A light- and electron-microscopic study. J. Morphology, 264: 191-210. Moyle, P.B. and J.C. Joseph. 2000. Fishes: an introduction to ichthyology, 4th edition. Prentice-Hall Inc., 612pp. Nagahama, Y. 1983. The functional morphology of teleost gonads. In: Hoar W.S. and D.J. Randall (eds). Fish physiology (IX). Academic Press. New York. pp. 223-275. Park, I.S., D.W. Seol, S. Im, M.O. Park, W.J. Hur, S.W. Cho, Y.C. Song, J.S. Kim, H.J. Jo, S.H. Noh and H.J. Choi. 2007. Gonad ontogeny in relation to somatic growth in the brown croaker Miichthys miiuy (Basilewsky). Korean J. Ichthyol., 19: 107-111. Presnell, J.K. and M.P. Schreibman. 1997. Humanson s animal tissue techniques. The Johns Hopkins Univ. Press, London, 572pp. Shapiro, D.Y. 1984. Sex reversal and sociodemographic processes in coral reef fishes. Academic Press, London, pp. 103-116. Yamamoto, E. 1999. Studies on sex-manipulation and production of cloned populations in hirame, Paralichthys olivaceus (Temminck et Schlegel). Aquaculture, 173: 235-246.