The Koren Journl of Pthology 2007; 41: 176-82 위샘암환자의예후인자로서 Thymosin- 4 의유용성 김루시아 김예지 최석진 박인서한지영 주영채 김준미 인하대학교의과대학병리학교실 Prognostic Significnce of Thymosin- 4 in Gstric Adenocrcinom Ptients Luci Kim, Ye Ji Kim, Suk Jin Choi, In Suh Prk, Jee Young Hn, Young Che Chu nd Joon Mee Kim Deprtment of Pthology, Inh University College of Medicine, Incheon, Kore 접수 : 2007 년 4 월 4 일게재승인 : 2007 년 5 월 28 일 책임저자 : 김준미우 400-711 인천광역시중구신흥동 3가 7-206 인하대병원병리과전화 : 032-890-3984 Fx: 032-890-3464 E-mil: jmkpth@inh.c.kr * 이연구는 2004년도한국학술진흥재단의지원을받아이루어졌음 (KRF-2004-003- E00023). Bckground : Thymosin- 4 is n ctin-sequestering protein tht regultes ctin polymeriztion. It is known to be ssocited with cell migrtion, ngiogenesis nd wound heling, s well s with tumor metstsis. Methods : We immunohistochemiclly evluted the thymosin- 4 expression in gstric denocrcinom specimens, the reltionship between this protein nd the pthologic fetures nd other tumor-relted proteins, nd its influence on the ptient outcome. Results : We demonstrted tht 40 specimens (26.3%) of 152 gstric denocrcinoms showed positivity for thymosin- 4. The thymosin- 4 expression ws sttisticlly ssocited with dvnced tumor stge (p=0.010), the nodl stge (p=0.029), the TNM stge (p= 0.008), nd the presence of lymphovsculr invsion (p=0.009). The thymosin- 4 protein expression ws closely relted to the positivity for VEGF (p=0.000), c-myc (p=0.007), nd cyclin D1 (p=0.005), but it ws not ssocited with the E-cdherin (p=0.861) or -ctenin (p= 0.640) expressions. The medin survivl nd disese relpse time of ptients showing thymosin- 4 immunorectivity were sttisticlly shorter thn those of ptients without expression. Multivrite nlysis showed tht the tumor stge (p=0.003), nodl stge (p=0.005), thymosin- 4 expression (p=0.019) nd Luren s clssifiction (p=0.037) were sttisticlly importnt prognostic fctors for gstric denocrcinoms. Conclusions : The thymosin- 4 expression might be ssocited with disese progression of gstric denocrcinoms nd it should be regrded s n importnt prognostic fctor for estimting ptient survivl. Key Words : Stomch cncer; Thymosin-bet4; Metstsis; Survivl 위암은세계적으로두번째로많이발생하는암으로, 1 우리나라에서는남녀를통틀어가장흔히발생하는암이며, 암으로인한사망률에서도수위를차지하고있다 ( 한국중앙암등록사업연례보고서 [2002]). 최근에는조기검진프로그램이발달하여위암을초기에발견하는비율이높아지고장기간생존하는환자가늘었지만아직도진행암은생존율이낮다. 특히림프절을비롯한다른장기로전이한위암은예후가매우나빠서 4기위암은 5년생존율이 0% 인실정이다. 2 그러므로위암의전이를일으키는병인을명확히이해하려는노력은환자의치료방침을결정하고예후를예측하는데꼭필요하다. 암세포가전이능력을얻기위해서는복잡한여러단계를거쳐야하는데, 암세포가주변기질내로이동하고침습하며, 혈관을형성하고새로운곳에서세포가생존하고성장해야한다. 그러므로종양세포의운동성증가는암이전이능력을얻는데중요한역할을한다. 3 Clrk 등 4 은전이능력이높은흑색종세포에서액틴세포뼈대의조직화를조절하는 thymosin- 4와같은유전자가많이발현되었다고보고하면서세포뼈대유기체가암의전이에중요한역할을할것이라고가정하였다. Thymosin- 4는세포내의액틴을격리하는역할을하는단백질로서, 거의모든종류의세포에존재한다. Thymosin- 4는단량체 G-액틴과일대일로복합체를형성하여액틴미세섬유의형성을억제한다. 또액틴중합반응에필요한액틴단량체풀을제공하여액틴세사의결합과분해작용을조절하는역할을함으로써, 세포의이동과형태의변화, 세포내미세기관들의이동에관여한다. 5-9 Thymosin- 4는이러한역할을통해조직의재형성, 세포의분화, 상처치유에관여하며최근에는암종의형성과암세포의전이와도연관성이있는것으로알려지고있다. 다양한암종에서 -thymosin의발현이비정상적으로증가하는것 176
위샘암에서 Thymosin- 4 의발현 177 으로보고되었으며, 10-14 암세포에서 thymosin- 4의과도한발현이암의침습과전이에필수적인암세포의이동과혈관형성을유도하고, 4,10 암세포의성장능력에변화를일으키는것을관찰할수있었다. 10,15 그러나지금까지이루어진연구는대부분실험실에서진행된것으로환자에게서직접적출한암종에서 thymosin- 4의발현이어떻게나타나는지, 환자의예후와어떤상관관계가있는지, 그리고다른병리소견이나분자생물학적인인자와어떤관계가있는지에대한연구는미비한실정이다. 그러므로본연구에서는수술로치료한위암환자 152명의수술조직에서채취한위샘암검체로조직미세배열블록을제작하여 thymosin- 4, VEGF, c-myc, cyclin D1, E-cdherin, - ctenin 에대한면역조직화학염색을시행하였고그결과와병리소견의관계, 그리고예후와의연관성을살펴보았다. 재료와방법연구재료 2002년 12월부터 2004년 8월까지인하대병원에서위샘암으로위절제술을받은환자 152명의수술조직에서채취한포르말린고정 -파라핀블록을대상으로하였다. 남자가 98명, 여자가 54명이었으며평균연령은 62세였다 ( 범위, 33-86 세 ). 수술전에항암치료를받은환자는없었고수술후항암치료를받은환자는 105명이었다. 슬라이드는헤마톡실린-에오신염색을시행하여병리소견을검색하였다. 각각의종양은 Luren 분류에따라장형과미만형으로분류하였고, 암종의분화정도에따라고분화암, 중등도분화암, 미분화암으로나누었다. Luren 분류에따른미만형암종은미분화암에포함시켰다. 종양의병기는미국암위원회암병기지침서에서권고하는 TNM 병기를이용하여분류하였다. 환자의예후를판정하기위하여병리결과지, 환자의임상자료등을검토하였다. 효소를차단하였다. 인산염완충액으로 10분간씻은다음 1차항체를실온에서 1시간동안반응시킨후바이오틴 (Cp-plus kit, Zymed) 이부착된 2차항체를 30분간적용시켰다. 그런다음인산염완충액으로씻어낸후스트렙트아비딘-과산화효소시약 (Cp-plus kit, Zymed) 으로처리하고다시인산염완충액으로씻었다. 다이아미노벤지딘으로발색한다음헤마톡실린으로대조염색을하고수세과정을거친후봉입하여현미경으로관찰하였다. Thymosin- 4는종양세포주변의염증세포와혈관내피세포의세포질에염색되는것을양성대조군으로보고종양세포의세포질또는세포질과핵에양성대조군과같은정도로염색되는세포가전체의 10% 이상일때양성으로판독하였다. VEGF의경우종양세포의세포질에염색되는세포가 10% 이상일때, 그리고 c-myc과 cyclin D1은핵에염색되는세포가 10% 이상일때양성으로판독하였다. E-cdherin과 -ctenin은 80% 이상의세포에서세포막을따라분명하게염색되는경우를정상으로판독하였고 E-cdherin은세포막을따라염색되지않거나세포질에염색되었을때비정상으로판독하였으며 -ctenin은염색되지않거나종양세포의핵또는핵과세포질에염색된경우에비정상으로판독하였다 (Fig. 1). 통계분석모든통계는 SPSS version 12.0 (Chicgo, IL, USA) 을이용하였다. 종양의임상소견과면역조직화학염색결과를분석할때는 2 검사를이용하였다. 생존분석은 Kpln-Meier 방법을이용하여생존곡선을그렸고 thymosin- 4에대한면역조직화학검사결과에따른환자의생존여부와재발여부차이를비교할때는 log-rnk 검사를시행하였다. 위암환자의예후를예측할수있는가장중요한예후인자를찾기위해서 Cox regression model을이용한다변량분석을시행하였다. 유의수준은 p< 0.05로하였다. 조직미세배열블록제작및면역조직화학염색 결 과 환자의위암조직에병리검사를시행하여종양의대표부위에서조직미세배열블록제작기구로 2 mm 두께의조직을절제하였다. 그런다음그조직을새로운파라핀블록에배열하여조직미세배열블록을제작하였다 (Petgen, Kore). 이블록으로 Cp Plus kit (Zymed, USA) 를이용하여 thymosin- 4 (Biodesign, USA), VEGF (Phrmingen, USA), E-cdherin (Zymed, USA), -ctenin (Phrmingen, USA), c-myc (Snt Cruz, USA), cyclin D1 (Neomrker, USA) 에대한면역조직화학염색을시행하였다. 먼저만든조직미세배열블록을 4 m 두께로연속절편하여자일렌으로파라핀을제거하고알코올로씻어낸후 30분간 0.3% 과산화수소로처리하여내인성과산화 임상소견및병리소견전체위샘암환자 152명중에서조기위암환자는 22명, 진행위암환자는 130명이었다. 전체대상환자를종양의병기에따라분류하면 45명이 1기, 39명이 2기, 32명이 3기, 36명이 4기였다. 전체환자중에서 29명이 T1, 71명이 T2, 45명이 T3, 7명이 T4 에속하였고, 46명이 N0, 53명이 N1, 25명이 N2, 28명이 N3였다. 추적관찰기간중에암이다른장기로전이한경우는 46예였고전이한장기는각각복막 (17예 ), 간 (16예), 폐 (3예), 복강내림프절 (3예), 뇨관 (2예), 췌장 (1예), 비장 (1예), 배곧은근 (1 예 ) 이었으며수술부위에재발한경우는 7예였다. 조직소견에
178 김루시아 김예지 최석진외 4 인 A B C D E F Fig. 1. Immunohistochemicl stining for gstric denocrcinoms demonstrted tht thymosin- 4 shows diffuse cytoplsmic nd nucler positivity in the tumor cells (A). Peritumorl inflmmtory cells nd some stroml cells re lso rective for the thymosin- 4. The tumor cells demonstrte cytoplsmic rectivity for VEGF (B), nucler stining pttern for the c-myc (C) nd cyclin D1(D). Some cses demonstrte berrnt nucler nd cytoplsmic positivity for -ctenin(e) nd complete stining loss for E-cdherin (F). 따라분류하면고분화암은 11예, 중등도분화를보이는암은 50 예, 미분화암은 91예였고 Luren 분류에따라장형으로분류된암이 88예, 미만형으로분류된암은 64예였다. 종양내부나주변조직의림프관과혈관을침범한암은 103예였고암주변으로림프구가과도하게침윤한경우가 77예였다. Thymosin- 4, VEGF, c-myc, cyclin D1, E-cdherin, -ctenin 의발현과병리소견의상관관계 위샘암조직에서 thymosin- 4에대한면역조직화학염색을시행한결과전체 152예중 40예 (26.3%) 가 thymosin- 4에양성을보였다. Thymosin- 4의발현여부와여러임상소견사이 의관계를살펴본결과암세포가 thymosin- 4에양성을보이는예가음성을보인예보다 T 병기 (p=0.010), N 병기 (p= 0.029), TNM 병기 (p=0.008) 가높은경향을보였고, 진행위암인경우가많았으며 (p=0.012), 종괴주변림프관과혈관침범이있는경우가많았다 (p=0.009). 그러나 Luren 분류 (p=0.170) 와종양주변으로과도하게침윤한염증세포 (p=0.541), 그리고조직분화도 (p=0.548) 와는상관관계가없었다 (Tble 1). VEGF, cyclin D1, c-myc, E-cdherin, -ctenin의발현과 thymosin- 4의발현의상관관계를살펴본결과 thymosin- 4 는 VEGF (p=0.000), c-myc (p=0.007), cyclin D1 (p= 0.005) 과통계적으로의미있는상관관계를보였으나 E-cdherin (p=0.861), -ctenin (p=0.268) 과는뚜렷한연관성을
위샘암에서 Thymosin- 4 의발현 179 Tble 1. Pthologic findings nd thymosin- 4 expression in gstric denocrcinoms Vribles No. of cses 보이지않았다 (Tble 2). Thymosin- 4 (-) Thymosin- 4 (+) Thymosin- 4 의발현과위샘암환자의예후 p-vlue TNM stge I 45 42 (93.3%) 3 (6.7%) p=0.008 II 39 26 (66.7%) 13 (33.3%) III 32 19 (59.4%) 13 (40.6%) IV 36 25 (69.4%) 11 (30.6%) T sttus T1 29 28 (96.6%) 1 (3.4%) T2 71 49 (69.0%) 22 (31.0%) p=0.010 T3 45 31 (68.9%) 14 (31.1%) T4 7 4 (57.1%) 3 (42.9%) N sttus N0 46 41 (89.1%) 5 (10.9%) N1 53 36 (67.9%) 17 (32.1%) p=0.029 N2 25 16 (64.0%) 9 (36.0%) N3 28 19 (67.9%) 9 (32.1%) EGC/AGC EGC 22 21 (95.5%) 1 (4.5%) p=0.012 AGC 130 91 (70.0%) 39 (30.0%) LVI Absent 49 43 (87.8%) 6 (12.2%) p=0.009 Present 103 69 (67.0%) 34 (33.0%) PTLI Absent 60 46 (76.7%) 14 (23.3%) p=0.541 Present 77 52 (67.5%) 25 (32.5%) Differentition Well 11 10 (90.9%) 1 (9.1%) p=0.548 Modertely 50 31 (62.0%) 19 (38.0%) Poorly 91 71 (78.0%) 20 (22.0%) Luren clssifiction Intestinl 88 60 (68.2%) 28 (31.8%) p=0.170 Diffuse 64 52 (81.3%) 12 (18.8%), sttisticlly significnt. LVI, lymphovsculr invsion; No., number; PTLI, peritumorl lymphocytic infiltrtion. 전체위샘암환자의추적관찰기간은평균 26개월이었으며 ( 범위 : 1-49 개월 ) 이중에서 41명의환자가사망하였고 111명의환자가생존해있었다. 사망한환자들이수술을받은후사망까지의평균기간은 13개월이었고범위는 3개월에서 44개월까지였다. Kpln-Meier 생존분석과 log-rnk 검사를시행한결과 thymosin- 4 면역조직화학염색에서양성을보인위암환자의평균생존기간은 32개월로 (95% confidence intervl [CI]: 26-37개월 ) thymosin- 4에음성인환자 ( 평균생존기간 : 40개월 ; 95% CI: 37-43 개월 ) 보다통계적으로유의하게짧았다 (p=0.014)(fig. 2A). VEGF 단백의발현 (p=0.045), E-cdherin의비정상적인발현 (p=0.019), Luren 분류에따른미만성암종 (p=0.015), T3-4 병기 (p<0.0001), N2-3 병기 (p<0.0001) 등이환자의나쁜 Tble 2. Results of immunohistochemicl study in gstric denocrcinoms grouped ccording to thymosin- 4 expression Antibodies Negtive Thymosin- 4 Positive p-vlue VEGF Negtive 92 (82.1%) 20 (50.0%) p=0.000 Positive 20 (17.9%) 20 (50.0%) c-myc Negtive 77 (70.6%) 16 (41.1%) p=0.007 Positive 32 (29.4%) 23 (58.9%) Cyclin D1 Negtive 84 (75.7%) 21 (52.5%) p=0.005 Positive 27 (24.3%) 19 (47.5%) E-cdherin Norml 91 (81.3%) 33 (82.5%) p=0.861 Abnorml 21 (18.8%) 7 (17.5%) -ctenin Norml 57 (50.9%) 25 (62.5%) p=0.268 Abnorml 55 (49.1%) 15 (37.5%), sttisticlly significnt. Tble 3. Reltionship between clinicopthologic fetures of gstric denocrcinoms nd survivl nd relpse Antibodies Deth/totl Survivl p-vlue Relpse Relpse/totl p-vlue T ctegory T1-T2 13/100 p<0.0001 b 20/100 p<0.0001 b T3-T4 28/52 32/52 N ctegory N0 14/99 p<0.0001 b 17/99 p<0.0001 b N1-3 27/53 35/53 Luren s clssifiction Intestinl 18/88 p=0.015 b 27/88 p=0.187 Diffuse 23/64 25/64 Differentition Well/Moderte 13/61 p=0.126 14/61 p=0.028 b Poor 28/91 38/91 Thymosin- 4 Absent 24/112 p=0.014 b 32/112 p=0.011 b Present 17/40 20/40 VEGF Absent 25/112 p=0.045 b 35/112 p=0.160 Present 16/40 17/40 Cyclin D1 Absent 27/105 p=0.449 33/105 p=0.197 Present 14/46 19/46 c-myc Absent 22/93 p=0.340 28/93 p=0.219 Present 18/55 23/55 E-cdherin Norml 29/124 p=0.019 b 40/124 P=0.223 Abnorml 12/28 12/28 -ctenin Norml 20/82 p=0.628 25/81 p=0.457 Abnorml 21/70 27/70, log-rnk test; b, sttisticlly significnt.
180 김루시아 김예지 최석진외 4 인 1.2 Thymosin- 4 expression nd survivl 1.2 Thymosin- 4 nd tumor recurrence 1.0 p=0.014 1.0 p=0.011 Cumultive survivl rte 0.8 0.6 0.4 0.2 Thymosin-B4 Positive Negtive Cumultive recurrence rte 0.8 0.6 0.4 0.2 Thymosin-B4 Positive Negtive 0.0 0 10 20 30 40 50 0.0 0 10 20 30 40 50 Time since opertion (months) A Recur period (months) B Fig. 2. Kpln-Meier survivl plots for gstric denocrcinom ptients, grouped ccording to the thymosin- 4 expression in tumor cells. The survivl (A) nd relpse times (B) of thymosin- 4 positive group re sttisticlly shorter thn tht of negtive group (p=0.014 nd p=0.011, log-rnk test). Tble 4. Multivrite nlysis with Cox regression model for ptient survivl 95% CI of Vribles B SE Exp (B) p-vlue Exp (B) Tumor stge -1.030 0.361 0.346 0.171-0.703 0.003 Nodl stge -1.018 0.359 0.361 0.179-0.731 0.005 Thymosin- 4-0.781 0.333 0.458 0.239-0.879 0.019 Luren s -0.692 0.333 0.500 0.261-0.960 0.037 Clssifiction, sttisticlly significnt. B, regression coefficient; SE, stndrd error of B; Exp (B), exponent of B; CI, coefficient intervl. 예후와통계적으로연관이있었다. 그러나 cyclin D1의발현 (p= 0.449), c-myc의발현 (p=0.340), -ctenin의비정상적인발현 (p=0.628), 암종의분화도 (p=0.126) 는환자의예후와관련이없었다 (Tble 3). 위절제술후에재발여부도 thymosin- 4의발현과연관성이있었다. Thymosin- 4에양성인환자의평균재발기간은 25개월 (95% CI: 20-31 개월 ) 로음성인환자의평균재발기간인 37 개월 (95% CI: 33-41 개월 ) 보다통계적으로짧았다 (p=0.011) (Fig. 2B). T3-4 병기 (p<0.0001), N2-3 병기 (p<0.0001) 그리고미분화조직소견 (p=0.028) 등이환자의나쁜예후와관련이있었다. 그러나다른인자들은재발기간과연관성을보이지않았다 (Tble 3). Cox regression model을이용해다변량분석을한결과, 위샘암환자의예후와밀접한관련이있는인자는 T 병기 (p=0.003), N 병기 (p=0.005), thymosin- 4의발현 (p=0.019), 그리고 Luren 분류 (p=0.037) 로나타났고 (Tble 4), 환자의나이나 VE- GF, cyclin D1, c-myc, E-cdherin, -ctenin의발현등은관련이없었다. 위샘암환자의재발여부를예측할수있는예후 인자로는 T 병기 (p=0.000), N 병기 (p=0.012) 만이통계적으로의미가있었다. 고찰수술은위암을치료하는가장중요한방법으로알려져있지만수술절제후에재발하는비율이높아서예후에미치는영향이만족스럽지않다. 특히림프절을비롯한다른장기로전이한경우예후가매우나쁘다. 그러므로위암의전이와재발에관한생물학적특성을연구하는것은환자의예후와치료에대한반응을예측하는데많은도움을줄수있다. 본연구에서는 thymosin- 4가위샘암환자의예후를예측할수있는예후인자로서얼마나유용한지, 그리고위암의병리소견과어떤관계를보이는지알아보았다. Thymosin- 4에양성을보인위샘암은음성을보인위샘암과비교했을때종양의침습과림프절전이가더진행되어있었고, 암세포의림프관과혈관침범이더많이관찰되었다. 또종양에서 thymosin- 4가발현된환자군의생존기간과재발기간이 thymosin- 4가발현되지않은군보다통계적으로짧았다. -thymosin은 G-액틴을격리하는물질로서세포내액틴의기능에중요한역할을하며조직의재형성, 상처치유, 혈관형성과정에필요한세포의이동에관여한다. 5-9 뿐만아니라최근연구에따르면다양한종양에서 -thymosin이비정상적으로과다하게발현되어이단백질이암발생, 진행과관계가있을것이라는가정이대두되었다. Thymosin- 10은신세포암, 대장암, 생식세포암, 유방암, 난소암, 자궁암, 식도암등여러종류의종양에서높게발현되었고, 피부의양성병변에서피부암으로진
위샘암에서 Thymosin- 4 의발현 181 행하는과정에관여할것이라고하였으며, 12 유방암의진행정도를나타내주는인자의역할을할수있을것이라는연구가있었다. 13 또 thymosin- 15는전립샘암에서전이를일으킬위험이높은환자를찾는데유용한인자라고하였다. 16,17 최근 thymosin- 4의발현이암세포에서증가하고종양의전이와관련이있다는보고가나오고있다. 4,10,11,14,15,18-20 Hll 등 14 은 thymosin- 4 mrna의수치가정상조직보다신세포암, 신경모세포종등의암조직에서더높게나타났다고보고하였고, Clrk 등 4 과Ko- byshi 등 11 은잘전이되지않는종양보다잘전이되는흑색종과섬유육종세포에서 thymosin- 4의발현이증가해있었다고하였다. 또원발대장암세포보다간으로전이된대장암세포에서 thymosin- 4 mrna의발현이높게나타났다. 15 본연구에따르면위암환자의 26.3% 에서 thymosin- 4가발현되었고, thymosin- 4가발현된암은그렇지않은암보다종양의침습과림프절전이가더진행된상태를보여 thymosin- 4가위암의진행과관련이있을것으로생각한다. 그렇다면 thymosin- 4가위암의침습과전이에관여하는기전은무엇일까? 최근발표된연구에따르면 thymosin- 4의과도한발현이암의침습과전이에필수적인암세포의이동과혈관형성을유도한다고한다. 4,11,18 흑색종에서 thymosin- 4의발현증가는암세포의이동성을증가시키고내피세포의이동과 VEGF 의발현을촉진하여혈관형성을유도하는역할을한다. 18 섬유육종에서는 thymosin- 4의발현증가로암세포의이동성이촉진되었고실험쥐에주입했을때다른장기로많이전이되었다. 11 이러한연구들을토대로보면 thymosin- 4가세포내의액틴을재편성하여암세포와기질사이의상호작용을변화시키고세포의이동성과 VEGF의발현을증가시켜혈관형성을촉진함으로써암세포의전이능력을변화시키는데영향을미치는것으로생각된다. 본연구에서는위암에서 thymosin- 4의발현이 VEGF의발현과상관관계를보였고두단백의발현이위암환자의나쁜예후와관련이있었다. 위암에서 VEGF의발현은혈관침범, 간전이, 림프절전이와관련이있고, 21,22 종양세포에서 VEGF의발현이증가한환자가그렇지않은환자보다훨씬나쁘다는보고가있다. 23,24 이러한결과를종합해볼때위암에서 thymosin- 4가 VEGF의발현과연관되어위암의진행과전이과정에관여할것으로생각한다. 대장암세포주를이용한연구에따르면, 암세포에서 thymosin- 4가과발현되면 thymosin- 4를발현하지않은대장암세포보다 E-cdherin의발현이감소하고 -ctenin과 c-myc의발현은증가하였다. 10,15 또원발대장암세포에서보다간으로전이한대장암세포에서 thymosin- 4 mrna와 c-myc, MMP- 7의발현이높게나타났고 E-cdherin의발현은낮게나타났다. 15 이러한결과는대장암과같은상피세포암에서 thymosin- 4의발현이증가하여엑틴세포골격이파괴되고 E-cdherin과같은세포부착물질이분해되면 -ctenin의세포질내침착을유발하고 -ctenin이핵내의전사작용을변화시킴으로서 c-myc 과 Cyclin D1과같은성장촉진인자들의발현을증가시켜 25 암세포의성장을촉진하고침습성과전이성을변화시킬것이라는가정을가능하게한다. 본연구에서는위암의경우 thymosin- 4가 c-myc, cyclin D1과통계적으로의미있는연관관계를보인반면 E-cdherin, -ctenin과는관련성을보이지않았다. 이와같이 thymisin- 4가 cyclin D1과 c-myc의발현과상관관계를보이는것으로미루어볼때위암에서발현된 thymosin- 4가암세포의증식에도관여하고여기에는 cyclin D1, c-myc과같은성장촉진인자의발현증가가관련되어있을것으로생각한다. 본연구에서 thymosin- 4와 E-cdherin, -ctenin 사이에상관관계가나타나지않은이유는이들유전자의신호전달체계가복잡하여여러유전자들이관여하고여러가지유전자변형이일어날수있어이들유전자의이상과단백질의발현을단순비교하기어려웠기때문이라고생각한다. 또본연구에서는단백질을정량한것이아니라면역조직화학염색을통해비정상적인발현여부를확인하였기때문에그럴수도있다. Thymosin- 4와암환자의예후를연구한논문은거의없다. 1병기비소세포폐암환자의경우수술후에전이하지않은환자보다전이한환자에게서 thymosin- 4의발현율이높았고, thymosin- 4의발현율이높은군의생존율이통계적으로낮게나타나, 낮은병기의비소세포폐암에서 thymosin- 4가생존을예 측할수있는예후인자의역할을한다고하였다. 26 본연구에서는위샘암환자의수술후재발기간과생존기간이 thymosin- 4가발현된군에서유의하게짧았고다변량분석에서도독립적인예후인자로서역할을하는것으로나타났다. 그러므로 thymosin- 4에대한면역조직화학검사가위샘암환자의예후를예측하는데유용한인자가될수있을것이라고생각한다. 최근 thymsin- 4의발현과항암치료와의관계에대한연구가일부이루어지고있다. 이에따르면 thymosin- 4의발현이종양에대한화학예방효과가거의없는 NSAID 에유도되었고화학예방효과를보이는 NSAID에는유도되지않았으며, NSAID 에유도된 thymosin- 4는대장암세포에서세포골격유기체를변화시켜종양을형성하도록하여, thymosin- 4의발현이 NS- AID의화학예방효과를경감시켰다고한다. 27 또 thymosin- 4를과발현하는대장암세포는발현하지않는세포보다 doxorubicin과 etoposide에내성을보였고이러한항암제내성은 survivin의과 발현과관련이있다는연구도있다. 28 이러한결과로미루어보건대 thymosin- 4의발현이항암치료에대한암세포의반응과연관성이있을것으로예상되므로이에대해앞으로더연구하여야할것이다. 본연구결과를정리해보면, thymosin- 4는위샘암의진행과밀접한관련이있고, 위샘암환자의예후를예측하는예후인자가될수있을것으로생각한다. 그러므로향후위샘암의진행과전이과정에서 thymosin- 4와다른종양관련유전자와의상호 관계를명확하게밝힐수있는분자생물학적연구가더필요할
182 김루시아 김예지 최석진외 4 인 것이고 thymosin- 4와항암치료의관계에도관심을기울여야할것이다. 참고문헌 1. Fenoglio-Preiser C, Munoz N, Crneiro F, et l. Tumors of the stomch. In: Hmilton SR, Altonen LA, eds. World helth Orgniztion Clssifiction of Tumors, Pthology nd genetics of tumours of the digestive system. 1st ed. Lyon: IARCPress 2000; 39-52. 2. Fenoglio-Preiser CM, Noffsinger AE, Stemmermnn GN, Lntz PE, Listrom MB. The neoplstic stomch. In: Fenoglio-Preiser C ed. Gstrointestinl Pthology: n tls nd text. 2nd ed. Phildelphi: Lippincott-Rven 1998; 237-74. 3. Hosk S, Suzuki M, Goto M, nd Sto H. Motility of rt scites heptom cells, with reference to mlignnt chrcteristics in cncer metstsis. Gnn 1978; 69: 273-6. 4. Clrk EA, Golub TR, Lnder ES, Hynes RO. Genomic nlysis of metstsis revels n essentil role for RhoC. Nture 2000; 406: 532-5. 5. Sfer D, Goll R, Nchmis VT. Isoltion of 5-kilodlton ctin-sequestering peptide from humn blood pltelets. Proc Ntl Acd Sci USA 1990; 87: 2536-40. 6. Sfer D, Elzing M, Nchmis VT. Thymosin 4 nd Fx, n ctinsequestering peptide, re indistinguishble. J Biol Chem 1991; 266: 4029-32. 7. Cssimeris L, Sfer D, Nchmis VT, Zigmond SH. Thymosin 4 sequesters the mjority of G-ctin in resting humn polymorphonucler leukocytes. J Cell Biol 1992; 119: 1261-70. 8. Mlind KM, Sidhu GS, Mni H, et l. Thymosin bet4 ccelertes wound heling. J Invest Dermtol 1999; 113: 364-8. 9. Mlind KM, Goldstein AL, Kleinmn HK. Thymosin bet4 stimultes directionl migrtion of humn umbilicl vein endothelil cells. FASEB J 1997; 11: 474-81. 10. Wng WS, Chen PM, Hsio HL, Ju SY, Su Y. Overexpression of the thymosin bet4 gene is ssocited with mlignnt progression of SW480 colon cncer cells. Oncogene 2003; 22: 3297-306. 11. Kobyshi T, Okd F, Fujii N, et l. Thymosin-bet4 regultes motility nd metstsis of mlignnt mouse fibrosrcom cells. Am J Pthol 2002; 160: 869-82. 12. Sntelli G, Clifno D, Chippett G, et l. Thymosin 10 gene overexpression is generl event in humn crcinogenesis. Am J Pthol 1999; 155: 799-804. 13. Verghese-Nikolkki S, Apostoliks N, Livniou E, et l. Preliminry findings on the expression of thymosin bet-10 in humn brest cncer. Br J Cncer 1996; 74: 1441-4. 14. Hll A. Differentil expression of thymosin genes in humn tumours nd in the developing humn kidney. Int J Cncer 1991; 48: 672-7. 15. Wng WS, Chen PM, Hsio HL, Wng HS, Ling WY, Su Y. Overexpression of the thymosin 4 gene is ssocited with incresed invsion of SW40 colon crcinom cells nd the distnt metstsis of humn colorectl crcinom. Oncogene 2004: 23: 6666-71. 16. Bo L, Lod M, Jnmey PA, Stewrt R, Annd-Apte B, Zetter BR. Thymosin bet 15: A novel regultor of tumor cell motility upregulted in metsttic prostte cncer. Nt Med 1996; 2: 1322-8. 17. Bo L, Lod M, Zetter BR. Thymosin bet15 expression in tumor cell lines with vrying metsttic potentil. Clin Exp Metstsis 1998; 16: 227-33. 18. Ch HJ, Jeong MJ, Kleinmn HK. Role of thymosin 4 in tumor metstsis nd ngiogenesis. J Ntl Cncer Inst 2003; 95: 1674-80. 19. Grnt DS, Rose W, Yen C, Goldstein A, Mrtinez J, Kleinmn H. Thymosin bet4 enhnces endothelil differentition nd ngiogenesis. Angiogenesis 1999; 3: 125-35. 20. Ch HJ, Jeong MJ, Kleinmn HK. Role of thymosin bet4 in tumor metstsis nd ngiogenesis. J Ntl Cncer Inst 2003; 95: 1674-80. 21. Tkhshi Y, Clery KR, Mi M, Kitdi Y, Bucn CD, Ellis LM. Significnce of vessel count nd vsculr endothelil growth fctor nd its receptor (KDR) in intestinl-type gstric cncer. Clin Cncer Res 1996; 2: 1679-84. 22. Med K, Chung YS, Ogw Y, et l. Prognostic vlue of vsculr endothelil growth fctor expression in gstric crcinom. Cncer 1996; 77: 858-63. 23. Fondevil C, Metges JP, Fuster J, et l. p53 nd VEGF expression re independent predictors of tumor recurrence nd survivl following curtive resection of gstric cncer. Br J Cncer 2004; 90: 206-15. 24. Kido S, Kitdi Y, Httori N, et l. Interleukin 8 nd vsculr endothelil growth fctor-prognostic fctors in humn gstric crcinom? Eur J Cncer 2001; 37: 1482-7. 25. Bright-Toms RM, Hrgest R. APC, -ctenin nd htcf-4; n unholy trinity in the genesis of colorectl cncer. Eur J Surg Oncol 2003; 29: 107-17. 26. Ji P, Diederichs S, Wng W, et l. Mlt-1, novel noncoding RNA, nd thymosin 4 predict metstsis nd survivl in erly-stge nonsmll cell lung cncer. Oncogene 2003; 22: 6087-97. 27. Jin AK, Moore SM, Ymguchi K, Eling TE, Bek SJ. Selective nonsteroidl nti-inflmmtory drugs induce thymosin 4 nd lter ctin cytoskeletl orgniztion in humn colorectl cncer cells. J Phrmcol Exp Ther 2004; 311: 885-91. 28. Hsio H, Wng W, Chen P, Su Y. Overexpression of thymosin 4 renders SW480 colon crcinom cells more resistnt to poptosis triggered by FsL nd two topoisomerse II inhibitors vi downregulting Fs nd upregulting Survivin expression, respectively. Crcinogenesis 2006; 27: 936-44.