Korean Society for Biotechnology and Bioengineering Journal 31(1): 73-78 (2016) http://dx.doi.org/10.7841/ksbbj.2016.31.1.73 ISSN 1225-7117 / eissn 2288-8268 연구논문 폐압축보드를이용한바이오에탄올생산 강양래 1, 황진식 1, 배기한 1, 조훈호 1, 이은정 2, 조영손 2, 남기두 1 * Bioethanol Production by using Wasted MDF Yang-Rae Kang 1, Jin-Sik Hwang 1, Ki-Han Bae 1, Hoon-Ho Cho 1, Eun-Jeong Lee 2, Young-Son Cho 2, and Ki- Du Nam 1 * Received: 15 December 2015 / Revised: 11 March 2016 / Accepted: 15 March 2016 2016 The Korean Society for Biotechnology and Bioengineering 1 일산실업 ( 주 ) 칠서에탄올공장부설기술연구소 1 Il San Institute, Chilseo Ethanol Factory, Il San Trading Co., Ltd., Haman 52001, Korea Tel: +82-55-586-8800, Fax: +82-55-586-8815 e-mail: kdn@ilsanalc.com 2 경남과학기술대학교식물자원학과 2 Department of Plant Resources, Gyeongnam National University of Science & Technology, Jinju 52725, Korea Abstract: The aim of this study attempted to verify the possibility of bioethanol production using wasted medium density fiberboard (wmdf). In order to produce bioethanol from wood cellulosic materials must be carried out the process of pretreatment, saccharification, fermentation and distillation. First, the wmdf was pretreated using sodium chlorite and pretreated wmdf was prepared to 8% slurry and then slurry was saccharified with the commercial enzyme (Cellic CTec3). The fermentable sugar and ph of saccharified substrate were about 5.5% glucose and 4.4, respectively. Herein we compared the results of ethanol yield according to the nutrients added or without addition to increase ethanol yield. Ethanol fermentation was finished in about 24 hours, but it was delayed in experimental group without nutrients. Ethanol content and fermentation ratio of the final fermented mash prepared by utilizing jar fermenter was 25.40 g/l and 86.64%, respectively. At this time, the maximum ethanol productivity was confirmed as 1.78 g/lh (ethanol content 21.38 g/l, 12 h), and the overall ethanol productivity was 1.05 g/lh (ethanol content 25.27 g/l, 24 h). Using fermented liquid we could produced bioethanol 95.37% by continuous distillator packed with copper element in laboratory scale. These results show that wmdf has a potential valuable for bioethanol production. Keywords: MDF, Bioethanol, Pretreatment, Saccharification, Fermentation 1. INTRODUCTION 세계경제의지속적인발전과더불어기후변화와자원고갈이라는문제가대두되었으며, 각나라마다이를해결하기위해고민하고있다. 우리나라도대표적인에너지소비국으로서기후변화대처를위해탄소배출을줄이는자발적인노력이필요하며, 앞으로국제사회로부터온실가스감축의무국가로의압박이높아질것으로사료된다 [1]. 기후변화문제를해결하기위한하나의방안으로써바이오연료가부각되어 2000 년이후세계적으로바이오에탄올과같은수송용바이오연료사용이급증하였으나 2010 년부터는증가가둔화되고있는추세이다. 이는국제유가하락과더불어바이오에탄올을생산하기위해사용하는원재료가옥수수, 사탕수수, 카사바등의식량자원으로써원료부족과곡물가상승이라는문제에직면하였기때문이다. 이를해결하기위해초본계또는목본계등의비식용자원을활용하여바이오에탄올을생산하는것으로관심이집중되었다. 하지만이들바이오매스로부터바이오에탄올을생산하기위해서는전처리, 당화및발효등의기술개발과안정적인원료수급이라는해결과제를안고있다 [2-6]. 비식용자원으로바이오에탄올을생산하기위해전처리, 당화등의기술개발이지속적으로진행되었으나무엇보다도원료의안정적수급이가장현실적인문제이다. 그런측
74 Korean Society for Biotechnology and Bioengineering Journal 31(1): 73-78 (2016) 면에서버려지는폐자원을활용한다면안정적인원료수급과동시에폐자원을처리할환경처리비용을절감하는효과가있을것으로예상된다 [7,8]. 압축보드 (medium density fiberboard, MDF) 는목재를 fiber 로분해한후수지를도포하여열압및성형한밀도 0.4~0.8 g/cm 3 의목질판상으로목질판상재중에서가장가공성이뛰어나 2000 년대에수요가증가하였다. MDF 의 fiber 길이는 20~30 mm 로재활용을위해해리하면길이가 10 mm 이하로짧아져 MDF 로재활용하기에적합하지않아전량폐기되고있다. 이와같은특성으로우리나라에서는매년 200 만m3정도의폐 MDF 가발생하고있으며, 버려지는 MDF 는생산공장의집중화와폐가구의시스템적수집으로효과적인수거가가능하기때문에자원으로재활용하는측면에서잠재적가치가높을것으로평가된다. 따라서버려지는 MDF 를활용하여바이오에탄올을생산한다면비식용자원을사용하면서안정적인원료수급이가능하다는장점과더불어폐기물을효과적으로재활용하는측면등여러가지긍정적인효과가있을것으로판단된다 [9-12]. 본연구에서는폐기되는 MDF 를이용하여바이오에탄올생산가능성을확인하기위해아염소산나트륨으로전처리한다음효소당화, 발효및증류과정을거쳐에탄올함량 95% 이상의바이오에탄올을생산하였다. 2. MATERIALS AND METHOD 2.1. 실험재료본연구의재료인폐 MDF 는 2013 년에동화기업 (Incheon, Korea) 에서생산한것을사용하였으며, 폐 MDF 를분쇄기 (Cutting mill, Fritsch, Germany) 로분쇄하여 sieve size 1,000 µm 를통과한분체를실험에사용하였다. 전처리에는아염소산나트륨 (Daejung, Korea) 을사용하였고, 효소당화에는상업용당화효소 Cellic CTec3 (Novozymes, Denmark) 를사용하였다. 그리고발효실험은 jar fermenter (ST-M3-05, Fermentec, Korea) 를활용하였으며, 증류는 lab. scale 의연속식증류장치 (Alc95-1.5L, Segang, Korea) 로에탄올을농축하였고, 에탄올함량은밀도비중계 (DMA 4500, Anton Paar, Austria) 로분석하였다. 2.2. 균주및배양조건발효에사용한균주는일산실업 칠서에탄올공장에서주정생산용으로사용하는효모 (Saccharomyces cerevisiae IFO- M-07) 를사용하였다. 그리고효모의배양은 YPD 액체배지 [yeast extract (Difco, USA) 5 g/l, peptone (Difco, USA) 10 g/ L, glucose (Junsei, Japan) 100 g/l, MgSO 4 7H 2 O (Junsei, Japan) 1 g/l, FeSO 4 7H 2 O (Junsei, Japan) 1 mg/l] 에접종한후 32 o C 에서 24시간배양한것을 starter로사용하였고, starter 10 vol% 를폐MDF 당화액에혼합하여 32 o C에서 96시간발효하였다. 2.3. 폐 MDF 전처리및당화액제조목질섬유소의효과적인전처리를위해분쇄한폐 MDF 를증류수에침지하여 121 o C 에서 25 분동안열수처리로합성수지를제거한다음건조한것을시료로하였다. 삼각플라스크에시료 300 g 과 0.5 M acetic acid buffer 3,000 ml 을넣고아염소산나트륨 120 g 과아세트산수용액 24 ml 을첨가후전처리를하였다 [13]. 최적의전처리조건을설정하기위해아염소산나트륨농도, 반응온도와시간등을비교하여아염소산나트륨농도 3.3%, 온도 80 o C 조건에서 5~6 시간반응시켜전처리를하였다. 전처리한폐 MDF 에 0.1N acetate buffer (ph 5.0) 와증류수를가한다음 ph 4.5~5.5 로조절하여전처리폐 MDF 기질농도를 4, 8 및 10% 로조제하였다. 당화에는당화효소 Cellic CTec3 를사용하였고, 효소사용량은기질농도대비 10% 를첨가후진탕배양기에서 50 o C, 140 rpm 조건으로 120 시간동안당화하여폐 MDF 당화액을제조하였다. 2.4. 폐 MDF 당화액을이용한발효전처리폐 MDF 당화액의기질농도 (4, 8, 12%) 를비교한결과 8% 로제조한폐 MDF 당화액이적합하였으며, 이를기질로발효실험을하기위해영양원첨가유무에따른결과를비교하였다. 영양원을첨가한실험은 yeast extract 2 g/l, peptone 5 g/l, MgSO 4 7H 2 O 1 g/l 을첨가한다음 autoclave 를이용하여 100 o C 에서 60 분동안살균한후 32 o C 로냉각하였고, 영양원을첨가하지않은실험은영양원첨가없이동일한조건으로살균및냉각하여실험에사용하였다. 그리고발효실험은플라스크실험결과를토대로 scale up 하여 jar fermenter 에서실험을병행하였다. 2.5. 발효액의증류발효가종료된폐 MDF 발효액을농축하기위해증류장치를활용하였다. 발효액을여과 (200 mesh) 한다음일산실업 부설기술연구소에설치된연속식에탄올증류장치를이용하여 95% 이상의에탄올로농축하였다. 폐 MDF 로바이오에탄올을생산하기위한전체공정은 Fig. 1 과같다. 2.6. 당분석방법당화액의당농도를분석하기위해 syringe filter (0.2 µm) 로여과한후 HPLC (High Performance Liquid Chromatography, Agilent 1260 series, USA) 를이용하였다. Column은 ZORBAX Carbohydrate Analysis (Agilent Technologies, 4.6 150 mm, 5 µm), 검출기는 RID (Refractive index detector) 를사용하였다. Column 온도는 30 o C, 샘플의주입량은 10 µl, 이동상의유속은 0.8 ml/min로설정하였고, 이동상은 75% acetonitrile 용액을사용하였다. 2.7. 에탄올분석방법당화액의당이에탄올로전환되는것은주정산업에서주로활용하는경시적발효패턴분석법을활용하였다. 발효액이
폐압축보드를이용한바이오에탄올생산 75 Fig. 1. Diagram of bioethanol production process using wmdf. 들어있는삼각플라스크의무게를시간별로측정하여이론적으로당이에탄올로전환될때함께발생된 CO 2 의무게를계산하여간접적으로생성된에탄올함량을측정하는방법이다. (i) C 6 H 12 O 6 2C 2 H 5 OH + 2CO 2 180g 92g 88g (ii) 에탄올함량 (g/l) = CO 2 (g) 에탄올분자량 (g/mol) CO 2 분자량 (g/mol) 발효액부피 (L) 그리고최종적으로발효가끝난발효액과 jar fermenter 실험의발효액은단식증류방법 ( 국세청주류분석규정 ) 으로증류한다음이를밀도비중계로에탄올농도를측정하였으며, 95% 이상으로증류한증류액은밀도비중계로직접측정하였다. 2.8. 기타분석방법기질농도증가에따른점도변화를분석하기위해점도계 (DV2T, Brookfield, USA) 로측정하였으며, ph 를측정하기위해 ph meter (Orion 3 star, Thermo, Singapore) 를사용하였다. 그리고발효액의효모개체수는특정슬라이드 (Heamacytometer, Marienfeld, Germany) 를사용하여일정량의시료를주입한다음현미경 (BX40, Olympus, Japan) 으로조류나효모와같은개체수를직접계수하는 heamacytometer 로측정하 였다. 2.9. 통계처리모든분석결과는 5 회반복측정한분석치를평균값으로계산하여나타내었다. 3. RESULTS AND DISCUSSION 3.1. 당화액분석폐 MDF 당화액의적합한기질농도를확인하기위해 4, 8 및 10% 농도로각각제조한다음효소당화를실시하였다. 이들당화액의당조성, 점도및 ph 등을분석하여발효기질로의특성을비교하였으며, 결과는 Table 1 과같다. 먼저, 당분석결과효모가이용가능한 glucose 가가장높은함량을보였으며, 그리고 xylose 가검출되었다. 그외 rhamnose, arabinose, galactose 및 cellobiose 는흔적이하였다. 그리고기질농도증가에따라 glucose 와 xylose 함량은증가하였으나기질농도대비분해된당함량은점차감소하였다. 또한, 기질농도증가에따라점도가급격히증가하였고, 특히 10% 기질농도에서는점도가 13.2 cp 로높았다. 그리고효모의생육및증식에적합한 ph 는통상적으로 ph 4.0~5.5 이며, 당화액 ph 가 4.2~4.5 이기때문에 ph 조절은불필요한것으로확인되었다. 분석결과당화율, 점도등발효하기에적합한기질농도는 8% 로확인되어이를사용하여발효실
76 Korean Society for Biotechnology and Bioengineering Journal 31(1): 73-78 (2016) Table 1. Analysis results of enzymatic saccharification liquid using wmdf Sugar (mg/l) Viscosity DS 1) Glucose Xylose Rhamnose Arabinose Galactose Cellobiose (cp/19 o C) ph 4% 27,530 5,554 ND 2) ND ND ND 2.1 4.45 8% 55,368 8,063 ND ND ND ND 6.2 4.40 10% 68,089 10,594 ND ND ND ND 13.2 4.25 1) Dry substance. 2) Not detected. 험을진행하였다. 3.2. 영양원무첨가발효폐 MDF 당화액에별도의영양원첨가없이살균및냉각을한다음배양해둔효모 (Saccharomyces cerevisiae IFO-M-07) 를접종하여 96 시간동안발효를하면서경시적인분석을하였다. 실험결과는 Fig. 2 와같이발효시간이지속될수록에탄올함량과발효비율이증가하는것으로나타났으며, 최종발효비율은약 83~84% 인것으로확인되었다. 영양원을첨가하지않았기때문에발효의진행이다소늦었으나폐 MDF 당화액의 glucose 는대부분에탄올로전환되는것으로분석되며, 약 56 시간경에발효가종료되는것이확인되었다. 에탄올발효가다소지연되는것은폐 MDF 당화액에는효모의생장에필요한질소원, 무기물등의영양원이부족하기때문인것으로분석된다. 따라서속성발효를유도하고발효수율을최적화하기위해서는영양원을보충하여효모의생장조건을개선할필요성이있을것으로판단된다. 3.3. 영양원첨가발효폐 MDF 당화액에는효모의생장에필요한영양원이부족하기때문에영양원 (yeast extract 2 g/l, peptone 5 g/l, MgSO 4 7H 2 O 1 g/l) 을첨가하고살균및냉각을하였다. 여기에배양해둔효모를접종한다음발효를하면서경시적으로분석하였다. 실험결과는 Fig. 3 과같이발효시간이지속될수록에탄올 함량과발효비율이급격히증가하였으며, 최종발효비율은약 85~86% 에이르는것으로확인되었다. 영양원을첨가하지않은것과비교하면발효의진행속도가월등히빨랐으며, 약 24 시간경에발효가종료되는것으로나타났다. 최종실험결과는 Table 2 와같으며, 영양원을첨가한것이영양원을첨가하지않은것보다발효비율은약 1% 높았으며, 효모개체수는영양원을첨가한실험에서약 2 배이상으로많았다. 발효속도는영양원을첨가한실험에서월등히빨랐으나최종발효비율의차이가작은것은초기발효기질농도가낮기때문인것으로판단된다. 그러나기질농도를 8% 보다높일경우급격한점도상승으로오히려당화율이감소하였으므로이후실험에서기질농도를 8% 로유지하였다. 3.4. Jar fermenter 발효플라스크발효실험결과를바탕으로 scale up 하여 jar fermenter 를이용하여발효실험을하였다. 당화액에효모의생장에필요한영양원 (yeast extract 2 g/l, peptone 5 g/l, MgSO 4 7H 2 O 1 g/l) 을첨가하고살균및냉각을실시하여효모를접종한다음발효를하였다. 발효는 96 시간동안진행하면서 glucose 함량, 에탄올함량, 효모개체수및 ph 등을분석하였다. Jar fermenter 에서실험한결과는 Table 3 과같이최종에탄올함량은 25.40 g/l, 발효비율은 86.64%, 총잔존환원당 (residual total sugar, RTS) 은 0.2 g/l 로분석되어대부분의 glucose 가에탄올로전환된것이확인되었다. 이는주정산업에서주로사용하는전분질원료 ( 타피오카및쌀, 발효비율 : Fig. 2. Results of fermentation profiles when the nutrients were not added. Fig. 3. Results of fermentation profiles when the nutrients were added.
폐압축보드를이용한바이오에탄올생산 77 Table 2. Results of fermentation experiments using wmdf Strain TS 1) (g/l) RTS 2) (g/l) Alcohol (g/l) FR 3) (%) YN 4) (cells/ml) ph Not added nutrients 59.90 0.6 26.30 85.82 20 10 6 3.85 Added nutrients 59.90 0.8 26.54 86.60 45 10 6 4.10 1) Total sugar (glucose content before fermentation). 2) Residual total sugar (glucose content after fermentation). 3) Fermentation ratio = [alcohol (g/l) TS (g/l) 0.6439 (factor) 0.7947 (density)] 100. 4) Yeast number. Table 3. Results of jar fermenter fermentation experiments using wmdf Strain TS 1) (g/l) RTS 2) (g/l) Alcohol (g/l) FR 3) (%) MPD 4) (g/lh) OPD 5) (g/lh) YN 6) (cells/ml) ph Fermenter 57.29 0.2 25.40 86.64 1.78 1.05 30 10 6 4.01 1) Total sugar (glucose content before fermentation). 2) Residual total sugar (glucose content after fermentation). 3) Fermentation ratio = [alcohol (g/l) TS (g/l) 0.6439 (factor) 0.7947 (density)] 100. 4) Maximum ethanol productivity (ethanol 21.38 g/l, 12 h). 5) Overall ethanol productivity (ethanol 25.27 g/l, 24 h). 6) Yeast number. 85~86%) 와비교하더라도발효비율이떨어지지않는것으로나타났다. 그리고발효액중의효모개체수는 30 10 6 cells/ml 로분석되어일반적인주정산업에서회분식발효공정의대수증식기와비교하면 50% 정도인것으로나타났다 [14]. 그러나효모개체수가적어도발효비율에영향이없는것은초기발효기질의발효성당함량이낮기때문인것으로사료된다. Fig. 4 와같이영양원첨가로속성발효가이뤄져 24 시간경에발효가종료되는것으로확인되었다. 최적발효조건에서최대에탄올생산성은 1.78 g/lh ( 에탄올함량 21.38 g/l, 12 h) 이었으며, 전체에탄올생산성은 1.05 g/lh ( 에탄올함량 25.27 g/l, 24 h) 로분석되었다. 일반적으로주정산업에서사용하는전분질원료의에탄올생산성은현미 0.68 g/lh, 쌀보리 1.03 g/lh, 타피오카 1.28 g/lh 로보고되고있으며, 그리고통상적으로는 0.58~0.64 g/lh 로알려져있다 [14,15]. 실험결과에서보듯이전분질원료를사용한에탄올생산성과비교하더라도폐 MDF 당화액의발효생산성이뒤지지않는것이확인되었다. 그리고이후 96 시간동안발효를진행하였으나에탄올증가량은미미하였으므로 24 시간내에발효를완료할수있을것으로판단된다. 따라서폐 MDF 당화액을이 용한최적발효조건은교반속도 100~150 rpm, ph 4.0~5.0 그리고발효시간 24 시간발효하면충분하다는것이확인되었다. 따라서폐 MDF 를활용하여회분식발효공정으로 scale up 실험 (pilot plant, demo scale) 을위해서는경제적인발효조용량을결정하여야한다. 상기결과로에탄올발효가완료된 24 시간을기준으로생산성을평가하여발효조를설계한다면기존의회분식주정발효와비교하여 1.6 (1.05/0.64) 배의생산성이향상되어실질적으로약 40% 의발효조용량을줄일가능성을확인하였다 [14]. 3.5. 폐 MDF 발효액의증류폐 MDF 발효액에는약 3~4% 의에탄올이함유되어있어바이오에탄올로사용하기위해서는농축하는공정이필요하다. 이는일산실업 부설기술연구소에설치된증류장치를이용하여 Table 4 와같이에탄올함량 95.37% 의바이오에탄올로농축하였으며, 이때증류폐액의에탄올함량은 0.03% 로분석되어정상적인증류가진행된것을확인하였다. 4. CONCLUSION 본연구는해마다폐기물로버려지는 200 만 m 3 의 MDF 를이용하여바이오에탄올생산가능성을검토하기위해전처리, 효소당화, 발효및증류과정을거쳐최종적으로에탄올함량 95% 이상의바이오에탄올을제조하였다. 먼저, 아염소산나트륨으로폐 MDF 를전처리한다음 4, 8 및 10% 의 slurry 를제조하여효소당화를하였으며, 전체적으로당화가원활하게이뤄졌으나점도등을감안하여 8% 당화액을발효기질로선정하였다. 8% 폐 MDF 당화액에는 glucose 는 5.5%, xylose Fig. 4. Results of fermentation profiles in jar fermenter when the nutrients were added. Table 4. Ethanol contents after distillation Strain Ethanol contents (%) Remarks Bioethanol 95.37 Distiller stillage 0.03
78 Korean Society for Biotechnology and Bioengineering Journal 31(1): 73-78 (2016) 는 0.8% 로분석되었고 ph 는 4.4 로측정되었다. 이당화액으로발효실험을실시한결과영양원을첨가하지않은실험에서는 56 시간경에발효가종료되었으며, 영양원을첨가한실험에서는 24 시간경에종료되었다. 따라서속성발효를위해서는영양원을첨가하면 24 시간내에발효를종료할수있어시설비용을절감할수있을것으로판단된다. 영양원을첨가후 jar fermenter 에서의발효실험결과최대에탄올생산성은 1.78 g/lh ( 에탄올함량 21.38 g/l, 12 h) 였으며, 전체에탄올생산성 1.05 g/lh ( 에탄올함량 25.27 g/l, 24 h) 로분석되었다. 그리고최종에탄올함량은 25.40 g/l, 발효비율은 86.64% 로분석되어정상적인발효가이뤄진것으로확인되었다. 또한발효액을농축하기위해증류를하였으며, 이때에탄올함량 95.37% 의바이오에탄올을생산할수있었다. 이연구결과를통해폐기되는 MDF 로바이오에탄올생산이가능하다는것을확인하였고, 자원이절대적으로부족한우리나라에서폐자원을활용한다는측면에서긍정적인효과가클것으로판단된다. Acknowledgements 본연구는중소기업청기술혁신개발사업 ( 과제번호 : S20860 42) 의연구비지원으로수행되었습니다. REFERENCES 1. Lee, J. S. (2013) Status and prospects of cellulosic ethanol R&D. KIC News 16: 2. 2. Jang, H. S., J. H. Chung, and G. S. Kwon (2008) Development of transportation bio-energy and its future. J. Microbiol. Biotechnol. 36: 1-5. 3. Kim, N. H. and G. J. Kwon (2009) Trend on technology development of bioenergy from woody biomass. J. Forest Sci. 25: 131-138. 4. Nam, K. D. (2013) The development of biomass for bioethanol production, fermentation, distillation technology and its utilization. BT News 20: 2. 5. Park, Y. C., J. W. Kim, and J. S. Kim (2011) Pretreatment characteristics of ammonia soaking method for cellulosic biomass. Korean J. Chem. Eng. 49: 292-296. 6. Seo, H. B., J. G. Han, W. S. Choi, O. K. Lee, S. M. Lee, S. H. Choi, H. Y. Lee, and K. H. Jung (2008) Bioethanol production from wood biomass hydrolysate with supercritical water treatment. Biotechnol. Bioprocess Eng. 23: 494-498. 7. Kim, J. S. (2013) The characteristics of alkaline pretreatment methods of cellulosic biomass. Korean J. Chem. Eng. 51: 303-307. 8. Kim, Y. R., A. N. Yu, B. W. Chung, M. H. Han, and G. W. Choi (2009) Lignin removal from barley straw by ethanosolv pretreatment. Biotechnol. Bioprocess Eng. 24: 527-532. 9. Bae, J. G., S. Y. Hong, E. H. Choi, J. K. Ahan, D. R. Jeon, and O. Y. Yang (2012) Waste wood recycling scheme established advanced research institutions. p. 156. Ministry of Environment, Korea. 10. Choi, G. W., H. J. Jeon, B. O. Lee, K. W. Kang, J. S. Jeong, and B. W. Chung (2011) Production of bioethanol by using beverage waste. Biotechnol. Bioprocess Eng. 26: 417-421. 11. Kim, Y. J. and S. M. Jeong (2013) Bioethanol fermentation of cellulosic food wastes by pichia stipitis. Korea Society of Waste Management 30: 478-485. 12. Lee, S. M., J. Y. Park, S. B. Park, B. D. Park, and H. H. Jung (2011) Industry status and trends of international standardization plate wood products. pp. 22-23. Korea Forest Research Institute, Korea. 13. Wise, L. E., M. Murphy, and A. A. Addieco (1946) Isolation of holocellulose from wood. Paper Trade Journal 122: 35-43. 14. Nam, K. D. (2004) Alcohol fermentation technology. Alcohol Industry 24: 30-48. 15. Choi, G. W., H. W. Kang, Y. R. Kim, and B. W. Chung (2008) Comparison of ethanol fermentation by Saccharomyces cerevisiae CHY1077 and Zymmomonas mobilis CHZ2501 from starch feedstocks. Korean J. Chem. Eng. 46: 977-982.