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Korean Society for Biotechnology and Bioengineering Journal 32(4): 293-299 (2017) http://dx.doi.org/10.7841/ksbbj.2017.32.4.293 ISSN 1225-7117 / eissn 2288-8268 Research Paper 국내산대나무줄기에서추출한실리카의주름개선효과 최문희, 김다송, 신현재 * Wrinkle Improvement Effect of Silica Extracted from Domestic Bamboo Stems Moon-Hee Choi, Da-Song Kim, and Hyun-Jae Shin* Received: 23 October 2017 / Revised: 24 November 2017 / Accepted: 24 November 2017 2017 The Korean Society for Biotechnology and Bioengineering Abstract: Bamboo stems extract containing porous silica has been used for medicine, food, paper and craft industry. Bamboo silica is known to support absorbing essential minerals such as calcium, potassium, and magnesium in skin, nail and hair. In this study, extract of domestic bamboos containing silica from two species of Phyllostachys nigra var. Enonis Stapf. and Phyllostachys bambusoides was prepared to prepare the bamboo silica materials. Physicochemical properties have been determined with XRD, FT-IR, FE-SEM and EDX. In addition, enzyme inhibition assay of collagenase and elastase has been performed. Phyllostachys nigra var. Enonis Stapf. silica (PNS) and Phyllostachys bambusoides silica (PBS) inhibited collagenase with IC 50 value of 174.14 μg/ml and 292.60 μg/ml, respectively. While, positive control groups of retinol and α-tocopherol were shown to be IC 50 values of 49.43 μg/ ml and 63.70 μg/ml, respectively. Furthermore, PNS and PBS elastase inhibition rate was 179.46 μg/ml and 377.03 μg/ml. These results suggest that PNS and PBS could be used as a candidate for anti-wrinkle new cosmetic ingredients. Keywords: bamboo stem, silica, collagenase, elastase, antiwrinkle, cosmetic ingredients 조선대학교대학원화학공학과 Department of Chemical Engineering, Graduate School of Chosun University, Gwangju 61452, Korea Tel: +82-62-230-7518, Fax: +82-62-230-7226 e-mail: shinhj@chosun.ac.kr 1. INTRODUCTION 우리나라에주로자생하고있는대나무종류중에서가장대표적인죽종은왕대 (Phyllostachys bambusoides) 및솜대 (Phyllostachys nigra var. Enonis Stapf.) 이다 [1]. 대나무잎과줄기에는 flavone glycosides, phenolic acids, coumarin lactones, anthraquinones, amino acids 등의활성성분이다량으로함유되어있어항산화, 항노화및항균활성이높은것으로알려져있다 [2,3]. 지금까지대나무추출물에대한연구는주로잎에관한연구가대부분으로국내산왕대, 솜대, 맹종죽및조릿대추출물의항산화, 항비만, 대사증후군억제효과에관한연구가진행되었다 [4,5]. 대나무줄기에다량함유되어있는실리카 (silica) 는피부, 머리카락, 손톱, 콜라겐을형성하는필수무기성분으로서, 피부에탄력성증진및뼈의건강증진에도움을주는물질로알려져있다 [6]. 실리카와같은미량원소는콜라겐섬유의응집력을높이기위해콜라겐섬유사이에연결고리를형성한다. 따라서실리카를복용하면세포들간의연결을지지하며피부와근육을구성하는성분인콜라겐이풍부해지고, 피부노화를방지할수있다 [7]. 또한실리카는화장품의구성성분중주로백색안료로서, 피부의발림성및부착성을높여화장품의커버력을유지시키는분체 (powder) 로사용되고있다 [8]. 피부의외적노화 (extrinsic aging) 는태양광선등누적된외부스트레스로인해발생하는것이며, 특히태양광의자외선 (ultraviolet rays; UV) 은잘알려진노화원인의하나로장시간자외선에노출된피부는각질층이두꺼워지고피부의주요구성요소인콜라겐과엘라스틴이변성되어피부의탄력성을잃어가게된다 [9]. 콜라겐과엘라스틴은여러가지요인에의해서조절되는데, 콜라게나아제 (collagenase) 와엘라스타아제 (elastase) 같은메탈로

294 Korean Society for Biotechnology and Bioengineering Journal 32(4): 293-299 (2017) 프로테아제 (matrix metallo protease) 의발현으로인하여생성된콜라겐과엘라스틴이분해되어결과적으로피부내의콜라겐함량이줄어드는현상이나타나게된다 [10]. 이러한탄력감소의원인이되는콜라겐및엘라스틴의감소를억제하려는목적으로여러가지물질들이개발되어사용되고있는데, 그중레티놀과레티노익산등이탄력개선효과를나타내고레구미노사종자 (leguminosae seeds) 에서얻어진단백질분획도탄력증대효과를나타내는데응용되고있다 [11]. 그러나레티노이드들은극소량만을피부에적용해도피부자극및알러지에민감하다는단점이있다. 최근화장품성분트렌드를살펴보면기존의화학성분들을대체할수있는천연소재의화장품소재들이각광을받고있으며, 천연유래의소재에대한관심이높다. 기존의대나무줄기추출물에관한연구들은대부분폴리페놀성분을기반으로한항산화연구및항암연구가주류를이룬다. 본연구에서는대나무의주성분중의하나인대나무줄기에서추출한실리카의생리활성에관해조사하고자하였으며, 국내산대나무줄기에서실리카를추출하여결정구조및구성성분을확인하고기존의화학성분을대체할수있는노화방지및주름개선용천연화장품소재로서가능성에대해서조사하고자한다. 2. MATERIALS AND METHOD 2.1. 대나무, 대나무줄기, 시약본연구에서는전라남도담양군담양읍에서 2016 년 4~6 월경에채취한왕대 (Phyllostachys bambusoides) 및솜대 (Phyllostachys nigra var. Enonis Stapf.) 줄기를자연건조하여사용하였다. 대조군으로사용한실리카는중국산대나무에서유래된순도 70% 의상업용대나무실리카 (commercial bamboo silica) 를사용하였다 (Bamboo leaf organic silicon, Shaanxi Ciyuan Biotech Co., Ltd., China). 2.2. 실리카추출건조된왕대와솜대줄기를분쇄한후전기로 (FUW232PA, ADVANTEC, Japan) 를이용하여 900 o C 에서 7 시간동안연소하였다. 연소된왕대, 솜대줄기 5 g 을 6 N HCl 을사용하여 70 o C 에서 1.5 시간동안교반하여여과하고 ph 7.0 이되도록세척후필터하였다 [12,13]. 고체여과물을중화시킨후 2.5 N NaOH 로 80 o C 에서 2 시간동안교반하여액상의조실리카 (Na 2 SiO 3 ) 를추출하였다. 이액체를 3,000 rpm 에서 10 분동안원심분리하여상등액을수거한후 6 N H 2 SO 4 를사용하여 ph 2.5 로맞추면 Si(OH) 4 와 Na 2 SO 4 가생성된다. 이를원심분리하여침전물을증류수로세척하면 Na 2 SO 4 는용해되고 Si(OH) 4 는침전된다. 침전된 Si(OH) 4 를 60 o C 에서 36 시간동안건조시킨후 450 o C 에서 2 시간동안하소 (calcination) 시켜 H 2 O 를제거하고최종적으로실리카를수거하였다. 왕대줄기에서추출한실리카는 PBS (P. bambusoides silica) 로솜대줄기에서추출한실리카는 PNS (P. nigra var. Enonis Stapf. Fig. 1. Schematic representation of bamboo silica extraction from domestic bamboo stems (PNS: Phyllostachys nigra vqr. Enonis Stapf. silica, PBS : Phyllostachys bambusoides silica, *: After washing, **: SiO 2 ). silica) 로명명하였다 (Fig. 1). 2.3. XRD 분석본연구에서는 XRD 를사용하여 PBS, PNS 의결정구조를분석하였으며, 결정구조는다기능 X- 선회절분석기 (X'Pert PRO MPD, PANalytical, Nederland) 를사용하여분석하였다. 분석조건은 40 Kv/30 ma, 10~60 o 2θ 구간에서주사간격 0.02 o, 주사시간 1 s 로설정하였다. 2.4. FT-IR 분석본연구에서는 PBS, PNS의작용기와순도를분석하기위해 Fourier transform infrared (IRAffinity-1S FT-IR, SHIMADZU, Japan) 를이용하여, 4000-400 cm -1 범위의파장에서 4 cm -1 의분해능으로스펙트럼을기록하였다. 2.5. FE-SEM EDS 분석 FE-SEM 는전자빔을표면에집중하여표면에서발생된이차전자를수집하여그신호를형상화시키는현미경으로 EDS 가부착되어있어표면성분에대한연구를수행할수있다.

국내산대나무줄기에서추출한실리카의주름개선효과 295 본연구에서는 PBS, PNS 의표면과조성을분석하기위하여주사전자현미경 (S-4800, Hitachi, Japan) 및에너지분산분석기 (Energy dispersive X-ray spectroscopy, Oxford, England) 를이용하여관찰하였다. 2.6. Collagenase 저해활성 PBS, PNS의피부주름억제효과를확인하기위해 collagenase 저해활성을측정하였다 [14]. Collagenase 저해활성은 0.1 M Tris-HCl buffer (ph 7.5) 에 4 mm CaCl 2 를첨가하여, 4- phenylazobenzyloxycarbonyl-pro-leu-gly-pro-darg (0.3 mg/ ml) 를녹인기질액 0.5 ml 및시료용액 0.2 ml의혼합액에 200 units/ml의농도로제조한 collagnease type I 효소 (C 0130, Sigma, USA) 용액 0.3 ml를첨가하여실온에서 20분간방치한후 5% citric acid 0.5 ml을넣어반응을정지시킨뒤, ethyl acetate 1 ml을첨가하여 320 nm 에서흡광도를측정하였다. Collagenase 저해활성은시료용액의첨가구와무첨가구의흡광도감소율로나타내었다. Collagenase inhibition rate (%) = absorbance ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- of control absorbance of sample 100 absorbance of control 2.7. Elastase 저해활성피부주름개선효과를확인하기위해 Kwak 등 [15] 의방법을변형하여실험하였으며, 기질로서 N-succinyl-(L-Aal) 3 -p-nitroanilide를사용하여 37 o C에서 30분간 p-nitroanilide의생성량을측정하였다. 각시험용액을 100 μg/ml씩시험관에취하고 pancreatic solution (Type I: from porcine pancreas 유래, 0.6 unit/ml, Sigma Aldrich, USA) 용액 50 μg/ml을가한후기질로 50 mm Tris-HCl buffer (ph 8.6) 에녹인 N-succinyl-(L- Ala)3-p-nitroanilide(1mg/mL) 을 100 μg/ml을첨가하여 30분간반응시키고 microplate reader를이용하여 410 nm에서흡광도를측정하였다. Elastase 저해활성은시료용액의첨가구와무첨가구의흡광도감소율로나타내었다. Elastase inhibition rate (%) = absorbance ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- of control absorbance of sample 100 absorbance of control 2.8. 세포배양 (B16F10 melanoma cell line) B16F10 cell line은한국세포주은행에서분양받았으며, 10% fetal bovine serum (FBS, Gibco BRL, USA), 0.2% sodium bicarbontate를첨가한 Dulbecco s modified Eagle s medium (DMEM; Sigma, USA) 를배지로사용하였고, 37 o C 온도에서 4% CO 2, 37 o C 상태로배양하였으며, 세포가바닥면적의 90% 정도까지자란상태에서계대배양하여실험을진행하였다. 2.9. 세포독성평가 (MTT assay) B16F10 cell suspension 을 6 well 에 1 10 5 cells/well 농도로 200 µl 씩분주하여배양기에서 24 시간동안안정화를시킨후시료를농도별로단독혹은다른항산화제들과함께병용 처리한후 24 시간동안배양하였다. Vistica 의방법 [16] 에따라 2.5 mg/ml MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 용액을 well 당 100 µl 씩넣어 1 시간동안배양기에방치한다. 이후상등액을제거하고 DMSO 를 well 당 200 µl 씩가하고 1 분간 shaking 하여 formazan 을완전히용해시킨후 ELISA Bio-Tek instrument Inc. (Winooski, VT, USA) 을사용하여 540 nm 에서흡광도를측정하였다. 본실험에사용한 MTT, DMSO 는 Sigma-Aldrich (USA) 사에서구입하였다. 2.10. 통계처리모든결과값은세번반복실험후통계처리하였으며, 실험에의해얻어진값들의평균 ± 표준편차로나타내었다. 대조군과실험군사이의통계학적유의성검증은 SPSS 23 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) 를이용하여 t-test 를실시하였으며, p<0.05 이하경우유의하다고판정하였다. 3. 대나무유래실리카의구조분석 3.1. 추출수율실리카의추출수율은건조된대나무줄기를분쇄하여전기로에연소한후재 (ash) 의무게를기준으로계산하였다. PBS 와 PNS 의추출수율은각각 32.54%, 30.81% 였다. 한편, 대나무잎의실리카추출수율은약 50.20% 로서대나무줄기의추출수율보다높았다. 이는대나무줄기보다잎에실리카의함량이높다는기존연구결과와일치한다 [17,18]. 또한, 대나무의종, 성장기간및환경등에따라서구성성분의차이가발생하기때문에추출수율에차이가발생한것으로보인다. 3.2. XRD 측정 XRD 분석결과 PBS, PNS 에서 2θ 가 22 o 일때광범위한피크 (peak) 가관찰되었는데이는추출된실리카가비정질구조인것을의미한다 (Fig. 2). Palanivelu 등 [19] 은왕겨 (rice hull) 를산처리후전기로에서 3 시간동안 650, 700, 750 o C 에서하소시켜실리카를추출하여 XRD 로구조분석을하였다. 그결과 2θ 가 22 o 일때광범위한피크가가지고있었으며추출한실리카는비정질구조를가지고있는것을확인하였다 [20]. 3.3. FT-IR 측정 FT-IR 의흡수스펙트럼으로실리카의작용기와순도를측정할수있다. 대조군으로사용된상용대나무실리카, PBS, PNS 모두약 1060, 802, 472 cm -1 에서피크를보였다. 이중에서 1060 cm -1 의강하고광범위한피크는 Si-O-Si 의 asymmetric stretching vibration 을의미하는데, 이는 Si 와 O 원자의결합구조배열이입자크기 (particle size) 가더작아지도록변화했기때문이다. 그리고 802 cm -1 의 sharp 한피크는 Si-O bending vibration 을의미하며 472 cm -1 의피크는 Si-O-Si bending vibration 을의미한다 (Fig. 3). 선행연구에서인도자생대나무

296 Korean Society for Biotechnology and Bioengineering Journal 32(4): 293-299 (2017) Fig. 2. XRD patterns of commercial bamboo silica, Phyllostachys nigra vqr. Enonis Stapf. silica (PNS) and Phyllostachys bambusoides silica (PBS). Fig. 3. FT-IR spectra of commercial bamboo silica, Phyllostachys nigra vqr. Enonis Stapf. silica (PNS) and Phyllostachys bambusoides silica (PBS). 인 Dendrocalamus strictus (Roxb.) Nees의 잎에서 실리카를 추출하여 FT-IR 분석 결과 1093, 809, 467 cm-1에서 피크를 가 진다는 보고가 있었으며, 이는 본 연구 결과와 매우 유사하다 [21,22]. 한편 실리카의 추출과정에서 완벽한 정제과정이 이 루어지지 않으면 OH의 작용기를 가지는 silanol이 남아있거 나, H2O가 존재하여 3200~3600 cm-1에서 광범위한 피크를 갖 게된다. PNS, PBS의 FT-IR 측정결과 3200~3600 cm-1에서 피 크가 존재하지 않아 추출된 실리카의 순도가 높은 것으로 판 단된다. 3.4. FE-SEM EDS 측정 상용 대나무 실리카, PBS, PNS의 입자크기는 각각 80.17± 45.38 μm, 53.94±30.22 μm, 70.77±48.92 μm였다 (Fig. 4). 이 입자들은 응집성을 가지는 것을 확인하였다. EDX 분석 결과 Fig. 4. SEM and EDX analysis of silica: (A, B) SEM and (C) EDX of commercial bamboo silica; (D, E) SEM and (F) EDX of Phyllostachys nigra vqr. Enonis Stapf. silica (PNS); (G, H) SEM and (I) EDX of Phyllostachys bambusoides silica (PBS).

국내산대나무줄기에서추출한실리카의주름개선효과 297 Fig. 5. (A) Collagenase inhibition activity and (B) elastase inhibition activity of Phyllostachys nigra vqr. Enonis Stapf. silica (PNS) and Phyllostachys bambusoides silica (PBS). 시중에서판매되고있는대나무실리카는 C, O, Si 로구성되어있으며 O 함량은 55.85 wt%, Si 함량은 36.91 wt% 이었다. PBS 는 C, O, Si, S 로구성되어있고 O 함량은 49.01 wt%, Si 함량은 40.58 wt% 로확인되었다. PNS 는 O, Si 로만구성되어있으며 O 함량은 52.55 wt%, Si 함량은 47.45 wt% 로서순도가가장높게분석되었다 (Fig. 4). 3.5. Collagenase 및 elastase 저해활성주름개선의효과는콜라겐을분해하는 collagenase, 젤라틴을분해하는 gelatinase 의작용, 탄력섬유를분해하는 elastase 의작용을기본으로한다 [23,24]. Collagen 은피부의 fibroblast 에서합성되며, 피부의기계적견고성, 결합조직의저항력과조직의결합력, 세포접착의지탱, 세포분할과분화의유도등의기능이알려져있다 [25]. 본연구의결과 PBS 의 collagenase 저해활성실험결과 IC 50 값은 292.60 µg/ml 확인되었 으며 PNS 의 IC 50 값은 174.14 µg/ml 이었다. 한편양성대조군으로사용한 retinol 과 tocopherol 의 IC 50 값은각각 49.43 µg/ ml, 63.70 µg/ml 로측정되었다. 또한 PBS 의 elastase 저해활성실험결과 IC 50 값은 377.03 µg/ml 으로확인되었고 PNS 의 IC 50 값은 179.46 µg/ml 이었다. 양성대조군으로사용한 retinol 과 tocopherol 의 IC 50 값은각각 54.82 µg/ml, 89.44 µg/ml 로측정되었다 (Fig. 5). 이와같은결과로보았을때대나무줄기유래실리카는매우높은 collagenase 저해활성및 elastase 저해활성이있음을알수있다. Jeon [26] 의연구에서는대나무죽여추출물 3T3-L1 cell 에처리하였을때세포의증식및분화시기저막단백질인 type IV collagen 및 BM 40 의합성에미치는영향을조사하였는데죽여추출물이세포증식을촉진한다는결과를보고하였다. 추후세포수준에서대나무실리카의콜라겐합성및관련단백질발현에관한추가연구가필요하다고사료된다. Fig. 6. Cytotoxicity of (A) Phyllostachys nigra vqr. Enonis Stapf. silica (PNS) and (B) Phyllostachys bambusoides silica (PBS). MTT assay was performed using B16F10 cell line.

298 Korean Society for Biotechnology and Bioengineering Journal 32(4): 293-299 (2017) 3.6. 세포독성측정결과대나무줄기유래실리카의세포독성을측정하기위해각각 25 µg/ml, 50 µg/ml, 100 µg/ml 농도범위에서세포독성을측정하였다. 실험한농도전체에서 24 시간이지난후세포독성은나타나지않았다 (Fig. 6). 이와같은결과는기존의연구에서간암세포주 (HepG2) 에실리카를처리했을때, 200 µg/ ml 이하의농도에서세포독성을나타내지않았던연구결과와유사하다 [27]. 추후실험시간을각각달리하거나피부에관련된다양한세포에서의생존성도조사할필요가있다고판단된다. 대한화장품산업연구원에서제시한화장품성분중에서생리활성성분의기준은 5~8% 미만이며, 본연구에서실험한실리카의농도기준으로환산해보았을때, 0.01% 이므로화장품소재적용시매우안전하다고판단된다. 4. CONCLUSION 본연구에서는 2 가지종류 ( 왕대, 솜대 ) 의대나무줄기에서실리카를추출하여실리카의결정상태및순도를확인하였으며, 세포수준에서 collagenase 및 elastase 의저해활성을확인하였다. 앞으로피부각질세포등을이용하여세포수준에서주름개선효과를좀더확인할필요가있고인체적용실험결과가추가된다면대나무줄기유래실리카는주름개선화장품소재로적합하다고사료된다. Acknowledgements 본연구는산림청 ( 한국임업진흥원 ) 산림과학기술연구개발사업 (2016015B10-1719-AB02) 의지원에의하여이루어진것입니다. REFERENCES 1. Luo, J. Y. and X. Y. Chen (2003) Study on extracting tea polyphenols from leaf of Indocalamus. Chem. Ind. Forest Prod. 37: 15-19. 2. Choi, M. H., Y. J. Seo, and H. J. Shin (2017) Application of domestic bamboo stems mainly for inner beauty product development. KSBB J. 32: 1-8. 3. Lu, Z. K. and W. Liao (2003) Preliminary determination of chemical components for leaves of Phllostachys pubescens. J. Shanxi Univ. Nat. Sci. Ed. 26: 46-48. 4. Kim E. Y. (2007) Effect of the Sasa borealis leaves extract on cytokine levels in C57/BL6J mice. MS Thesis. Chonnam National University, Gwangju, Korea. 5. Hwang, J. Y. and J. S. Han (2007) Inhibitory effects of Sasa borealis leaves extracts on carbohydrate digestive enzymes and postprandial hyperglycemia. J. Korean Soc. Food Sci. Nutr. 36: 989-994. 6. Shin, D. S., K. S. Kim, O. S. Lee, and S. H. Lee (1999) Preparation of SiO 2 /TiO 2 composite particles with planarized SiO 2 particles. J. Soc. Cosmet. Sci. Korea 25: 37-54. 7. An, B. J., J. H. Kwak, J. M. Park, J. Y. Lee, T. S. Park, J. T. Lee, J. H. Son, C. Jo, and M. W. Byun (2005) Inhibition of enzyme activities and the antiwrinkle effect of polyphenol isolated from the persimmon leaf (Diospyros kaki folium) on human skin. Dermatol. Surg. 31: 848-855. 8. Thring, T. S., P. Hili, and D. P. Naughton (2009) Anti-collagenase, anti-elastase and anti-oxidant activities of extracts from 21 plants. BMC Complement. Altern. Med. 9: 1-11. 9. Aslam, M. N., E. P. Lansky, and J. Varani (2006) Pomegranate as a cosmeceutical source: pomegranate fractions promote proliferation and procollagen synthesis and inhibit matrix metalloproteinase-1 production in human skin cells. J. Ethnopharmacol. 103: 311-318. 10. Aslam, M. N., H. Fligiel, H. Lateef, G. J. Fisher, I. Ginsburg, and J. Varani (2005) PADMA 28: A multi-component herbal preparation with retinoid-like dermal activity but without epidermal effects. J. Invest. Dermatol. 124: 524-529. 11. Kang, S. (1998) Photoaging and tretinoin. Dermatol. Clin. 16: 357-364. 12. Yuvakkumar, R., V. Elango, V. Rajendran, and N. Kannan (2014) High-purity nano silica powder from rice husk using a simple chemical method. J. Exp. Nanosci. 9: 272-281. 13. Cai, X., R. Y. Hong, L. S. Wang, X. Y. Wang, H. Z. Li, Y. Zheng, and D. G. Wei (2009) Synthesis of silica powders by pressured carbonation. Chem. Eng. J. 151: 380-386. 14. Park, S. M., S. I. Park, M. D. Huh, and Y. K. Hong (1999) Inhibitory effect of green tea extract on collagenase activity and growth of fish pathogenic bacteria. Fish Pathol. 12: 83-88. 15. Kwak, Y. J., D. H. Lee, N. M. Kim, and J. S. Lee (2005) Screening and extraction condition of anti-skin aging elastase inhibitor from medicinal plants. Korean Soc. Med. Crop. Sci. 13: 213-216. 16. Vistica, D. T., P. Skehan, D. Scudiero, A. Monks, A. Pittman, and M. R. Boyd (1991) Tetrazolium-based assays for cellular viability: a critical examination of selected parameters affecting formazan production. Cancer Res. 51: 2515-2520. 17. Rodier, L., K. Bilba, C. Onésippe, and M. A. Arsène (2017) Study of pozzolanic activity of bamboo stem ashes for use as partial replacement of cement. Mater. Struct. 50: 1-14. 18. Frías, M., H. Savastano, E. Villar, M. I. S. de Rojas, and S. Santos (2012) Characterization and properties of blended cement matrices containing activated bamboo leaf wastes. Cem. Concr. Compos. 34: 1019-1023. 19. Palanivelu, R., P. Padmanaban, S. Sutha, and V. Rajendran (2014) Inexpensive approach for production of high-surface-area silica nanoparticles from rice hulls biomass. IET Nanobiotechnol. 8: 290-294. 20. Jakhmola, A., R. Vecchione, D. Guarnieri, V. Belli, D. Calabria, and P. A. Netti (2015) Bioinspired oil core/silica shell nanocarriers with tunable and multimodal functionalities. Adv. Healthc. Mater. 4: 2688-2698. 21. Rangaraj, S. and R. Venkatachalam (2017) A lucrative chemical processing of bamboo leaf biomass to synthesize biocompatible amorphous silica nanoparticles of biomedical importance. Appl. Nanosci. 7: 145-153. 22. Darvizeh, A., A. Luzi, A. A. Amin, A. Oliveira-Ogliari, F. A. Ogliari, V. P. Feitosa, and S. Sauro (2015) In-situ nano-silica deposition

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