대한피부미용학회지제 8 권제 1 호 111 울금의항산화및미백효과 박은영 허선정 * 김경영 * 황완균 * 양기숙 숙명여자대학교약학대학 중앙대학교약학대학 * Ⅰ. 서론 Ⅱ. 본론 1. 재료및실험방법 2. 실험결과및통계처리 < 목차 > Ⅲ. 결과및고찰 1.DPPH 를이용한항산화능측정 2.Tyrosinase 억제능측정 3. 멜라닌생성억제효과및세포독성 Ⅳ. 결론 참고문헌 초록 화장품에응용가능한소재를찾기위한목적으로울금을메탄올로추출하여헥산, 디클로로메탄, 에칠아세테이트, 부탄올, 물층의 5 개분획을하여총 6 개의시료로 DPPH 를이용한항산화능을측정하였고,Tyrosinase 억제능과 B16F10 멜라닌생성세포의사멸효과,MTT 시험법을이용한세포의독성을측정하였다. 그결과에틸아세테이트분획 > 메탄올추출 > 부탄올분획 > 디클로로메탄분획 > 헥산분획 > 물분획순으로항산화능을나타내었고, 에틸아세테이트분획은 IC 50 8.01μg/mL (ascorbicacid 의 IC 50 10.76μg/mL) 로가장우수한항산화활성을나타내었다. 에틸아세테이트분획에서 Tyrosinase 저해활성은에틸아세테이트의 IC 50 31.40 μg/ml(ascorbic acid 의 IC 50 16.06 μg/ml) 로나타났으며, B16F10 멜라닌생성세포의사멸효과또한우수하였다. 따라서울금에틸아세테이트분획은항산화및미백효과면에서기능성화장품천연성분으로의사용이우수할것으로사료된다. 주제어 : 울금, 항산화, 미백,Tyrosinase,B16F10 멜라닌생성세포 교신담당저자 : 박은영 E-mail : pk9498@korea.kr Tel : 010-3016-9489 접수일자 : 2009 년 12 월 21 일 수정일자 : 2010 년 1 월 30 일 게재확정일자 : 2010 년 2 월 8 일
112 Ⅰ. 서론 울금은 (CurcumalongaL.) 생강과 Zingiberaceae 의근경으로 phenol 류및그배당체,monoterpene 배당체,tannin, 기타 sucrose 등의성분으로항염 증작용, 항알레르기작용, 항균작용, 중추억제, 위 액분비억제, 진경작용등이보고되어있다. 1) 기미, 주근깨, 거친피부, 반점, 아토피성피부염 등은활성산소과잉으로인한피부증상이라해도 과언이아니다. 산소는호흡에의해몸속에서생 명체를유지하는에너지를발생시켜인간의생명 을보존시키는역할을한다. 몸속에들어온산소 의일부가화학반응으로 " 활성산소 " 로변하고이 것은우리몸에들어온세균이나이물질을격퇴시 키고백혈구의손에든무기역할을담당하는이로 운물질이기도하다. 그러나이활성산소가과잉 발생하면우리의정상세포마저도무차별공격하 여세포를죽이거나상하게한다. 따라서반응성 산소대사물에의한생체내프리라디칼반응을 억제시키는항산화물질은노화관련질환을예방 하는일종의약물이될수있다. 이러한항산화능 확인실험으로 DPPH 라디칼소거작용등을이용 한다. 2) 또한멜라닌은흑갈색알갱이의색소로서피부, 털, 눈등에존재한다. 일정량이상의자외선을흡 수하여인체를보호하는역할을한다. 그러나멜 라닌의과잉생성은얼굴의탈색과점, 주근깨, 과 색소침착과같은피부노화를가져온다. 3) 1) W.S. Kang, Antioxidative property of Tumeric (Curcumae Rhizoma) Ethanol Extract, Korean Journal of Food Science Technology. 30(2), 266-271(1998) 2) J. C. Ju, Antioxidative Activity of Hot Water Extracts from Medicinal Plants, Journal of the Korean society of food science and nutrition, 36(1), 7-14(2006) Tyrosinase 는멜라닌생합성과정의 key enzyme 으로 melanocyte 내의 melanosome 에서연 속적인산화반응을일으켜멜라닌을생성하는것 으로알려져있다. 현재미백제로서멜라닌생성 의억제에이용되고있는 ascorbicacid 및그유 도체,kojicacid,arbutin 등은모두 tyrosinase 저 해제로밝혀졌다. 4) 최근에는천연물유래의미백 제에관한연구가활발히진행되고있는데, 고 삼 5), 녹차 6), 감초 7), 뽕나무 8) 등에서보고된바 있다. 울금추출물이라디칼소거활성을갖고있 다고보고되어있고, 기능성화장품소재로서울금 추출물의항산화활성이조사된바있어 9) 이를토대 3) K. H. Wang, Cosmetic applications of selected traditional Chinese herbal medicines, Journal of Ethnopharmacology, Volume 106, Issue 3, 3593-359 (2006). 4) J. B. Seo, Functional Characterization of the Human Resistin Promoter with Adipocyte Determination- and Differentiation-Dependent Factor 1/Sterol Regulatory Element Binding Protein 1c and CCAAT Enhancer Binding Protein - α, Molecular Endocrinology, 17 (8), 1522-1533(2003). 5) K. B. Kwon, Anti-oxidant Effect of the Ethyl Acetate Souble Fraction of Sophorae Radix in H9c2 Cells, Korean Journal of Oriental Physiology & Pathology, 18(3), 893-899(2004) 6) H. J. Lee, A Medicinal Herbal Tea Increases Success Rate and Reduces Withdraw Symptoms of Smoking Cessation in Men, Journal of food science and nutrition, 8(4), 372-376(2003). 7) S. J. Kim, Investigation of Antioxidative Activity and Stability of Ethanol Extracts of Licorice Root(Glycyrrhiza grabra), Korean Journal of Food Science Technology, 38(4), 584-588(2006). 8) P. Lee, Effects of Interleukin-12 on the Immune Response to a Multipeptide Vaccine for Resected Metastatic Melanoma, Journal of Clinical Oncology, 19(18), 3836-3847(2001). 9) N. J. An, Antioxidant Activity and Whitening Effect of Extraction Condition in Curcuma longa L., Korean Journal of Medicinal Crop Science, 14(3), 168-172(2006)
대한피부미용학회지제 8 권제 1 호 113 로본연구에서는울금메탄올추출물과 5개분획물 (hexane, dichloro-methane, ethylacetate, butanol,water) 을이용하여항산화활성이뛰어난분획를확인하고항산화활성이 tyrosinase 활성에미치는영향을비교분석하고울금분획물의기능성화장품원료로서의가능성을검토하고자하였다. Ⅱ. 본론 1. 재료및실험방법 Germany), FL spectrofluorometer (FL 600, Bio-Tek,USA),waterbath (C-WB,CHANG SHIN ScientificCo.,Korea) 를사용하였다. (2) 추출및분획울금의분말 30g 을메탄올로초음파추출후여과하고, 감압농축하여메탄올추출물을얻었다. 이메탄올추출물을증류수에현탁시키고헥산을가하여진탕반복추출하고분액깔때기에서분획하여수층을분취한후차례로디클로로메탄과에틸아세테이트, 부탄올로분획한다음각각을감압농축하여헥산분획, 디클로로메탄분획, 에틸아세테이트분획, 부탄올분획및물분획을얻었다. 1) 실험재료본실험에사용한울금시료는중앙대학교약학대학약품자원식물학실에서국내유통품중중국산으로수집하여검증받아사용하였다. 2) 실험방법 (1) 기기및시약자유라디칼소거효과측정용액인 DPPH (1-diphenyl-2-picrylhydroazyl), ascorbic acid, 미백활성을위한 tyrosinase 억제능을위한시료로 Tyrosinase, L-DOPA, 세포독성실험을위한 MTT (3-[4,5-dimethyl-2-thiazolyl]-2,5 diphenyltetrzolium bromide) 모두 Sigma chemicalco.,(st.louis,mo,usa) 에서구입하여사용하였다.B16melanomacel 는숙명여자대학교약학대학에서세포배양하여사용하였다. 이실험에서사용한주요기기는 hotplate Magnetic stirer (HMS-10,YoungJiHANA Tech.Korea),CO2incubator(MCO 175,Sanyo ElectricCo.,Japan), 세포수의계산은 Turk 형혈구계산기 (Marienfeld Co., Mergentheim, Figure 1. Extraction and Fractionation of Curcuma longa L. (3)DPPH 를이용한항산화능측정 DPPH 라디칼은매우안정한자유라디칼 (free radical) 이다. 이라디칼을소거하는정도로서항산 화작용을평가하였다.96welplate 에 0.1mM 1,1-diphenyl-2-picryl- hydrazyl (DPPH) 용액 180μl 을가한후메탄올에녹인울금추출물과헥
114 산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트, 부탄올, 물분획을농도별 (62.5 1000μg/mL) 로 20μL 씩가하고차광상태에서 37 에서 10 분간배양하였다. 배양후 FL 600 spectrofluorometer (Bio-Tek, U.S.A.) 를이용하여 515nm 에서흡광도를측정하였다 [10]. 양성대조약물로 ascorbicacid 을농도별 (62.5 1000μg/mL) 로용시조제하여사용하였다. 시료의항산화효과를측정하기위하여산화를억제한정도를 inhibitionrate 로서항산화능을표시하였고, 각시료의항산화능을비교검토하기위해서 inhibitionrate 가 50% 에이르도록하는데필요한시료의양인 IC50 을측정하였다. (4)Tyrosinase 억제능측정 Tyrosinase 활성측정시기질은 L-DOPA 를사용하였다.L-DOPA 를기질로사용할때반응이신속하게일어나므로효소의양을줄여서실험하였다. 울금메탄올추출물및각각의분획물을증류수로희석하여 62.5 1000μg/mL 농도로준비하였다. 기질농도로 L-DOPA 는 1 mg/ml 을 sodium phosphatebufer(0.5m,ph 6.0) 로완전히녹이고 tyrosinase 는 0.5mL 당 100units 의농도로준비하였다. sodium phosphatebufer(0.5m,ph 6.0) 을 140 μl,l-dopa 1mg/mL 을 30μL, 각각의시료 10 μl,tyrosinase 를 20μL 를 96welplate 에순서대로분주한후 37 에서 10 분간반응시킨후 475 nm 에서흡광도를측정하였다. 대조군으로 kojic acid 는 sodium phosphate bufer(0.5m,ph 6.0) 로단계적으로희석하여 6.25 50 μg/ml 농도로실험군과동일하게첨가하였다. (5)B16F10 멜라닌생성세포 (melanomacel) 의사멸효과 B16F10 멜라닌생성세포의시료에의한사멸효 과를 LDH 를통해서측정하였다.LDH 는세포질에존재하는효소로통상은세포막을통과하지않으나세포막이손상되면세포외, 즉배지중으로방출한다.LDH 는젖산의탈수소화를촉매하고 pyruvate 와 NADH 를생성한다. 이 NADH 는 diaphorase 의촉매에의해 tetrazolinm salt 를환원하고,490nm 의흡수를갖는적색의 formazan 색소를형성한다. 따라서,LDH 활성을 490nm 흡광도의증대로측정할수있다.1-2 시간후에농도별로시료를처리하고,48 시간경과후배지에 diaphorase/nad 혼합액과 INT/Na-lactate 액을넣어흡광도를측정하였다. 이때대사활동을하고있는세포의경우 NADH 와 NADPH 의작용으로인한환원반응으로 formazan 색소를 ELISA reader 를이용하여사멸효과를측정하였다. (6)MTT 시험법을이용한세포의독성측정각 wel 을 PBS 로두번세척한후 MTT 의농도가 0.5mg/ml 가되도록 10% FBSDMEM 에녹인후 200 μl씩가하였다. 이때대사활동을하고있는세포의경우 NADH 와 NADPH 의작용으로인한환원반응으로 MTT (yelow tetrazolium salt) 가 formazancrystal(purple) 로변하였다.3 7,5% CO2 incubator 에서 4시간배양한후 solubilization 용액을 200 μl씩넣어밤새실온에놓아용해시켰다.formazancrystal 이완전히용해되면다음날대조파장을 650nm 로하고측정파장을 570nm 로하여 ELISA reader 를이용하여흡광도를측정하였다. 3) 실험결과및통계처리실험결과에서얻은값은평균표준편차로나타내었다. 통계적유의적차이의정도는 Student s t-test 를사용하여 p<0.01 인값에대해유의적인것으로처리하였다.
대한피부미용학회지제 8 권제 1 호 115 Ⅲ. 결과및고찰 1. DPPH 를이용한항산화능측정 울금메탄올추출물을용매분획하여얻은헥 산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트, 부탄올및물 분획을농도별로 (62.5 1000μg/mL) 조제하여실 험한결과에틸아세테이트분획, 에탄올추출, 부 탄올분획의 radicalscavengingactivity 가우수 하였으며, 에틸아세테이트분획 > 메탄올추출 > 부탄올분획 > 디클로로메탄분획 > 헥산분획 > 물분획순으로농도의존적으로 radical scavengingactivity 가증가하였다. 그중에서에 틸아세테이트분획은 IC 50 8.01μg/mL (ascorbic acid 의 IC 50 10.76μg/mL) 로가장우수한항산화 활성을나타내었다.(Figures.2& 3). Figure 2. Anti-oxidant activity of Curcma longa L. extract and fractions in the DPPH radical scavenging activity assay. A solution of 180 μl of 100 μm DPPH solution in ethanol was gently mixed with 20 μl of Curcma longa L. extract and fractions for 10 min and the absorbance was measured at 515 nm. Results are means±sd from 3 separate experiments. * Significantly different from SW at the same concentration (p<0.05). Figure 3. IC 50 values of Curcma longa L. extract and fractions on DPPH radical scavenging activity ( IC 50 is the concentration of inhibition on oxidizing 50% DPPH radical scavenging activity ) 2. Tyrosinase 억제능력측정 멜라닌색소는피부에서자외선을흡수, 산란시 키는기능을가지고자외선에대한방어에있어 중요한역할을한다. 멜라닌생성과정중 tyrosinase 는멜라닌의생합성과정에서중추적역 할을하기때문에 tyrosinase 생성을억제하는미 백물질의탐색에있어서 tyrosinase 를통한미백 활성의연구가중요하다. 본연구에서는 L-DOPA 를기질로사용하여울 금메탄올추출물과각분획물의 tyrosinase 활성 을관찰하였다. 울금의메탄올추출물과각분획물 의 tyrosinase 저해활성은 Figure.3 과같다. 1000μg/mL 의고농도의에틸아세테이트분획 에서약 80% 의 tyrosinase 활성억제율을나타내 었으며, 그외의다른분획은고농도에서부탄올 분획과디클로로메탄분획이 30% 의억제율을보 인외에다른분획은저해율이낮아유의미한차 이를나타내지못했다. 특히메탄올추출물의경 우저농도에서 tyrosinase 활성을촉진하는것을 확인할수있었다 (Figure.4)Tyrosinase 활성은 에틸아세테이트의 IC 50 가 31.40 μg/ml(ascorbic
116 acid 의 IC 50 16.06 μg/ml) 로우수하게나타났 다.(Figure.5). Figure 4. Effect of Curcma longa L. extract and fractions on purified tyrosinase activity. Purified tyrosinase was mixed with Curcma longa L. extract and fractions and incubated with 1mg/ml L-DOPA for 10min at 3 7. Results are means±sd from 4 separate experiments. 는기작으로나눌수있다.melanocyte 에대한세포독성에의한멜라닌생성억제작용으로하이드로퀸모노벤질에테르와 4- 이소프로필카테콜등이알려지고있으며 melanocyte 내에서멜라닌생성을저해하고억제하는것으로는페닐티오우레아와같은 tyrosinaseinhibitor 가알려지고있다. 알부틴의멜라닌생성억제작용은 melanocyte 에대한독성이아니라멜라닌생성저해에의한것으로보고되고있다. 본연구에서울금메탄올추출물과각분획의정상적인멜라닌세포 (B16F10) 의사멸효과를 MTT 를통하여측정한결과세포독성을보이지않았고, 멜라닌생성을감소시켰다 (Figure6& 7). MSH 를처리한 vehicle 과비교할때, 농도의존적이진않았지만, 모든시료에서 80% 이상의멜라닌생성감소를보였다. Figure 5. IC 50 values of Curcma longa L. extract and fractions on tyrosinase inhibitory activities. ( IC 50 is the concentration of inhibition on oxidizing 50% tyrosinase inhibitory activities) 4. B16F10 melanoma 세포에서 melanin 생성억제율측정과세포독성 Melanocyte 에대해세포독성의결과로멜라닌 생성을억제하는기작과 melanocyte 내에서멜라 닌생성을저해하는것으로멜라닌생성을억제하 Figure 6. Inhibition of melanin synthesis by solvent fractions of Curcuma longa. B16F10 cells (1.5 105 cells/ ml ) were incubated 20hrs after MSH(400 nm) and sample(5, 10 μg / ml ) treatment. Melanin released into the cell culture medium was measured by ELISA after 4 days. (M: methanol, H: hexane, D:dichloromethane, E: ethylacetate, B: butanol, W: H2O). Each value represents the mean±s.d (n=3). Significantly different from MSH control, * p<0.01
대한피부미용학회지제 8 권제 1 호 117 이상의결과를종합하여볼때울금에틸아세테 이트분획은항산화및미백효과면에서우수한 기능성화장품천연성분이될것으로기대된다. 참고문헌 P.A. Hammerschmidt, Phenolic antioxidants of Figure 7. Effects of solvent fractions of Curcuma longa on the viability of B16F10 cells with MSH (400 nm). B16F10 cells (1.5 105 cells/ ml ) were incubated for 1-2 hrs in DMEM containing 10% FBS and were treated for 4 days with MSH (400 nm) and solvent fractions(5, 10 μg / ml ). Results were expressed as % negative control. (M: methanol, H: hexane, D:dichloromethane, E: ethylacetate, B: butanol, W: H2O). Each value represents the mean±s.d (n=3). Ⅳ. 결론 울금의메탄올추출물과용매분획물의항산화 작용과미백효과를측정하였다. 메탄올추출물과 각분획을비교하였을때메탄올추출물과에틸아 세테이트분획이항산화및미백효과가강하게 나타났다. 울금에틸아세테이트분획은 DPPH radical 소거작용을유의하게억제하는작용으로 미루어보아,freeradical 을소거하는항산화작용 이뛰어난것으로사료된다. 또한,L-DOPA 를사 용하여유의성있는농도의존적 tyrosinase 억제 작용을보였다.B16F10 세포를이용한실험에서 는메탄올추출물및모든분획에서멜라닌생성 세포사멸효과를나타냈다. 이러한결과를토대 로울금에틸아세테이트분획은피부에항산화및 미백효과가있을것으로사료된다. dried soybeans. Journal of Food Science, 43,556-559,1978 W.S. Kang, Antioxidative property of Tumeric(Curcumae Rhizoma) EthanolExtract, Korean JournalofFood Science Technology. 30(2),266-271,1998 J. C. Ju, Antioxidative Activity of Hot WaterExtractsfrom MedicinalPlants,Journalof thekoreansocietyoffoodscienceandnutrition, 36(1),7-14,2006 K.H.Wang, CosmeticapplicationsofselectedtraditionalChineseherbalmedicines,Journalof Ethnopharmacology, Volume 106, Issue 3,3593-359,2006 J. B. Seo, Functional Characterization of the Human Resistin Promoter with Adipocyte Determination- and Diferentiation-Dependent Factor 1/Sterol Regulatory Element Binding Protein 1c and CCAAT Enhancer Binding Protein - α,molecularendocrinology,17 (8), 1522-1533,2003 P.Lee,EfectsofInterleukin-12on theimmune ResponsetoaMultipeptideVaccineforResected MetastaticMelanoma,JournalofClinicalOncology, 19(18),3836-3847,2001 H.J.Lee,A MedicinalHerbalTea Increases
118 SuccessRateandReducesWithdraw Symptoms ofsmoking Cessation in Men,Journaloffood scienceandnutrition,8(4),372-376,2003 S.J.Kim,InvestigationofAntioxidativeActivity and Stability ofethanolextracts oflicorice Root(Glycyrhiza grabra), Korean Journal of FoodScienceTechnology,38(4),584-588,2006 K.B.Kwon,Anti-oxidantEfectofthe Ethyl AcetateSoubleFraction ofsophoraeradix in H9c2 Cels, Korean Journal of Oriental Physiology& Pathology,18(3),893-899,2004 N.J.An,Antioxidant Activity and Whitening EfectofExtractionConditioninCurcumalonga L.,Korean Journalof MedicinalCrop Science, 14(3),168-172,2006 D.E.PRATT,C.D.PIETRO,W.L.PORTER,J. W. GIFFEE, Phenolic Antioxidants of Soy Protein Hydrolyzates,JournalofFood Science, Volume47Issue1,24-35,2006 J.B.Seo,M.J.Noh,E.J.Yoo,Functional Characterization of the Human Resistin Promoterwith Adipocyte Determination- and Diferentiation-Dependent Factor 1/Sterol Regulatory Element Binding Protein 1c and CCAAT Enhancer Binding Protein - α, MolecularEndocrinology,17(8):1522-1533,2003 P.Lee,F.Wang,J.Kuniyoshi,V.Rubio,T. Stuges,EfectsofInterleukin-12ontheImmune ResponsetoaMultipeptideVaccineforResected Metastatic Melanoma, Journal of Clinical Oncology,Vol19,Issue18,2001 K.H.Wang,R.D.Lin,F.L.Hsu,Y.H.Huang, Cosmetic applications of selected traditional Chinese herbal medicines, Journal of Ethnopharmacology, Volume 106, Issue 3, 3593-359,2006 Y.M.Jeong,Y.G.Choi,D.S.Kim,Cytoprotective Efect of Green Tea Extract and Quercetin against Hydrogen Peroxide-Induced Oxidative Stress,Arch Pharm ResVol28,No 11,1251-1256,2005 H.J.Lee,S.H.Hur,M.S.Hur,A Medicinal HerbalTeaIncreasesSuccessRateandReduces Withdraw Symptoms of Smoking Cessation in Men,JournalofFood Science and Nutrition, Vol.8,p.372-376,2003 S.J.Kim,K.H.Son,H.W.Chang,Tyrosinase Inhibitory Prenylated Flavonoidsfrom Sophora flavescens, Biological & Pharmaceutical Buletin,Vol.26,2003 S.RHO,H.S.CHUNG,M.KANG,Inhibitionof Production of Reactive Oxygen Species and Gene Expression Profile by Treatment of EthanolExtractofMoutan Cortex Radicis in Oxidative Stressed PC12 Cels,Biological& PharmaceuticalBuletinVol.28,No.4661,2005 S. C. Chun, S. Y. Jee, S. G. Lee, Anti-Inflammatory Activity of the Methanol Extract of Moutan Cortex in LPS-Activated Raw264.7Cels,eCAM 2007;4(3)327-333,2007 X. Cai, H. Zhou, Y. F. Wong, Their Anti-Inflammatory Activities in Rat Synoviocytes,eCAM 6(1):57-63,2009 C.H.Ko,K.Li,K.P.Fung,Pro-oxidativeefects ofchinese herbalmedicine on G6PD-deficient erythrocytes in vitro, Toxicology in Vitro Volume22,Issue5,2007 Jong-EonChin,Inhibitoryefects ofsomemedic-
대한피부미용학회지제 8 권제 1 호 119 inalplantextractson thetyrosinasepromoter activity on B16 mouse melanoma cels, InternationalJournalofOrientalMedicine2000 1(2),6-13,2000 Y. Shoyama, Y. Yamada, I. Nishioka, Depigmentationandinhibitionofcelgrowthof B-16 melanoma cels by compounds isolationfrom Paeoniasufruticosacalus,PlantCel Reports8:711-713,1990 참고사이트 www.google.co.kr www.sciencedirect.com www.pubmed.com www.riss4u.net
120 Anti-oxidantandWhitening EffectsofCurcumalongaL. Park,Eun-young Hur,Sun-jung* Kim,Kyoung-young* Whang,Wan-kyun* Yang,Ki-sook ColgeofPharmacy,SookmyungWomen'sUniversity ColgeofPharmacy,Chung-AngUniversity* Abstract Tosearchfornew skin-lightingagents,theinhibitorypropertyofcurcumalongaextractandfive fractions(hexane,dichloromethane,ethylacetate,butanol,water)on melanogenesis and antioxidative activitieswereinvestigated.theinhibitoryactionofcurcumalongaextractsandfractionsonmushroom tyrosinasewasrevealed.toexploretheactionofextractsandfractionsonmelanogenesis,the inhibition oftyrosinase and melanin contents were measured in B16F10 melanoma cels.results show thatethylacetate>methanol>butanol>dichloromethane>hexane fractions ofcurcuma longa has strong antioxidativeactivities,ic 50 was8.01 μg/ml (ascorbicacid IC 50 10.76 μg/ml).inhibition of tyrosinaseactivity,ethylacetatefraction ofcurcumalongawasic 50 31.40μg/mL(ascorbicacid IC 50 16.06μg/mL).Also,ethylacetatefractionofCurcumalongareducedmelanincontentsinB16F10cels. Therefore,thisdataindicateCurcumalongaasapotentialpigmentationreagents. Keywords:Curcumalonga,antioxidant,tyrosinase,melanomacel