공개특허 (19) 대한민국특허청 (KR) (12) 공개특허공보 (A) (11) 공개번호 (43) 공개일자 2012년04월09일 (51) 국제특허분류 (Int. Cl.) A61K 36/484 ( ) A6

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제훈 예
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1 (19) 대한민국특허청 (KR) (12) 공개특허공보 (A) (11) 공개번호 (43) 공개일자 2012년04월09일 (51) 국제특허분류 (Int. Cl.) A61K 36/484 ( ) A61K 31/05 ( ) A61P 27/02 ( ) (21) 출원번호 (22) 출원일자 2010 년 09 월 30 일 심사청구일자 전체청구항수 : 총 8 항 2010 년 09 월 30 일 (71) 출원인 강원대학교산학협력단 강원도춘천시강원대학길 1 ( 효자동 ) (72) 발명자 정명근 강원도삼척시중앙로 1 가강원대학교삼척캠퍼스 (74) 대리인 김정현 (54) 발명의명칭콩나물추출물을포함하는황반변성치료및예방용조성물 (57) 요약 본발명은콩나물추출물을포함하는황반변성치료및예방용조성물에관한것으로서, 더욱상세하게는콩나물에황반변성에대한억제및치료효과가있는것으로알려진루테인이다량존재함을확인하고, 이를황반변성예방및치료용으로적용하고자한것이다. 본발명에의하면황반변성예방및치료용으로적용가능한새로운루테인의원천으로서콩나물을제공할수있다. 대표도 - 도 2-1 -

2 특허청구의범위 청구항 1 콩나물추출물을포함하여이루어지는것을특징으로하는황반변성치료및예방용약제조성물. 청구항 2 청구항 1에있어서, 상기콩나물추출물은다음화학식 1로표시되는루테인을유효성분으로함유하는것을특징으로하는황반변성치료및예방용약제조성물 ; [ 화학식 1] 청구항 3 청구항 1 에있어서, 상기콩나물추출물은아세톤을추출용제로한것을특징으로하는황반변성치료및예방용약제조성물. 청구항 4 청구항 1에있어서, 상기콩나물추출물은콩나물의자엽, 하배축또는자엽과하배축을함께사용하는것을특징으로하는황반변성치료및예방용약제조성물. 청구항 5 청구항 1에있어서, 상기콩나물은발아후 20 일까지콩나물로재배된것임을특징으로하는황반변성치료및예방용약제조성물. 청구항 6 청구항 1에있어서, 상기콩나물추출물은루테인을 2 내지 100 μg /g 범위로포함하는것을특징으로하는황반변성치료및예방용약제조성물. 청구항 7-2 -

3 콩나물분말또는콩나물추출물을포함하여이루어지는것을특징으로하는황반변성개선및예방용 건강식품. 청구항 8 청구항 7 에있어서, 상기콩나물분말또는콩나물추출물은다음화학식 1로표시되는루테인을유효성분으로함유하는것을특징으로하는황반변성개선및예방용건강식품 ; [ 화학식 1] 명세서 [0001] 기술분야 본발명은루테인을유효성분으로하는콩나물추출물을함유하는황반변성예방및치료용조성물에관한것 이다. [0002] [0003] [0004] [0005] [0006] 배경기술황반 (macula lutea) 은눈의망막에서시세포가밀집되어있어빛을가장선명하고정확하게받아들이는부분이며, 여러가지원인에의해이황반부에변성이일어나시력장애를일으키는질환을황반변성 (macular degeneration) 이라고한다. 상기황반변성은녹내장, 당뇨망막증과함께실명의 3대원인중의하나이다. 황반변성을야기하는가장큰원인은연령증가이며, 그외가족력, 인종, 흡연등도원인으로알려져있으며, 황반이손상되면눈에작은활자체, 얼굴생김새또는작은물체와같은세부적인것을알아보는능력을상실하게된다. 이러한황반변성은비삼출성 ( 건성 ) 황반변성과삼출성 ( 습성 ) 황반변성의두유형이있으며, 황반변성을갖는사람중 90% 는건성형태의증상을갖는다. 건성황반변성에서, 노폐물이드루젠 (drusen) 이라고불리는황색침전물을형성하여황반아래조직에축적될수있다. 드루젠의존재는망막, 특히황반으로의혈류를방해하게되고, 혈류가감소되면황반으로의영양분공급을감소시켜서, 감광성세포의효율적작용을중지시키거나위축시킨다. 습성황반변성의경우, 새로운약한혈관이망막안또는그아래에서성장하여액체및혈액이황반아래의공간으로누액되게할수있다. 습성황반변성은때때로맥락막혈관신생이라고기술되기도하는데, 맥락막은망막아래혈관영역이고혈관신생은조직내새로운혈관성장을말하는것으로, 맥락막혈관신생이라는명칭에서유추할수있는바와같이습성황반변성의경우맥락막으로부터황반으로혈관이신생되어성장하게된다. 이러한황반변성은노인에게잘생기는질환으로여겨졌으나최근들어 4, 50대환자가급증하고있다고알려져있으며, 이러한황반변성발병연령층이낮아진주요원인으로는지방섭취의증가등식생활의서구화가지적되고있다. 루테인 (lutein) 은자연적으로생성되며비타민 A 활성을가지지않으면서자연상태로존재하는카로티노이드 (carotenoid) 로서, 녹황색채소에다량함유되어있다. 식품과인간의혈액속에가장많이존재하는카로티노이드중의하나인루테인은식물체내에서는항산화효과및식물체를자외선으로부터보호하는역할을수행하 - 3 -

4 는것으로알려져있고, 인간에게는눈의황반및수정체의주요성분으로, 눈의건강과시력증진에중요한역 할을하는성분으로알려져있다. [0007] [0008] [0009] [0010] [0011] [0012] [0013] [0014] [0015] 미국농림부자료에의하면현재미국인들의일일평균루테인섭취량은약 1.7mg, 유럽인들은약 2.2mg 인것으로알려져있는데, 이수치는백내장과노인성황반변성 (Age-related Macular Degeneration, AMD) 과같은눈질환의위험을줄이기위한수준에미치지못하는것으로보고되었으며, 최근식사보조제및특정식품과음료의성분에루테인을첨가하여활용하는형태가증가됨에따라미국과유럽에서루테인의섭취량을보다효과적인수준으로증가시키는데도움이될것이라고보고된바있다. 이러한루테인은브로콜리, 녹색콩, 아욱콩, 양배추, 케일, 시금치, 키위등의녹색채소및과일의주요성분으로알려져있으나, 상기녹색채소와과일에는루테인외에도대량의엽록소와베타카로틴및카로티노이드에폭시화합물이공존하고있어이들로부터루테인을분리정제하는것은고비용과복잡한절차가요구되는문제점이있으며, 특히유리상태의루테인보다상대적으로생리적활성이낮은루테인에스테르화합물로존재하는경우가많다. 또한, 루테인은망고, 파파야, 복숭아, 자두, 도토리, 호박, 서양호박및오렌지와같은많은황색 / 오렌지색과일과채소에도풍부하나, 이러한황색 / 오렌지색과일과채소에함유되어있는루테인은미리스트산 (myristic acid), 라우르산 (lauric acid) 및팔미트산 (palmitic acid) 과같은유기산혹은지방산으로에스테르화된형태로존재한다. 이또한유리상태의루테인보다상대적으로생리적활성이낮은데, 이들은음식으로섭취시루테인에스테르는가수분해되어유리된루테인으로재생되어야하고, 그다음체내에흡수되어대사되어야하는비효율성이있기때문이다. 그러므로이러한황색 / 오렌지색과일과채소에함유된루테인을효율적으로활용하기위해서는비누화반응 (saponification) 을통해유리상태로전환후분리및정제를하여야함으로상대적으로많은비용과시간소모를유발하며, 또한다른종류의카로티노이드들도역시고농도로함유하고있어상대적순도가낮은양상을나타낸다. 현재까지황반변성치료및개선을위한치료제는금잔화 (marigold) 추출물을사용한사례가대부분이다. 금잔화꽃잎의경우상당량의루테인과그리많지않은다른카로티노이드들을함유하고있어좋은루테인공급원으로여겨지고있다. 그러나, 금잔화에존재하는루테인도유리된루테인으로는존재하는것이아니라루테인에스테르화합물형태로존재하므로, 역시금잔화추출물도비누화반응 (saponification) 을통해루테인지방산에스테르를루테인으로전환시켜사용하고있으며, 비누화반응에도불구하고생성된루테인은여전히얼마간의화학적불순물로오염되어있는등의문제점이있다. 한편, 콩 (Glycine max L.) 은우리나라의주요식량작물로서단백질 ( 약 40%) 과지질 ( 약 20%) 을다량함유하여영양면에서우수한식품이며, 중요한식물성기름의원료이기도하다. 콩은발효제품 ( 된장, 청국장, 고추장, 간장등 ), 발아제품 ( 콩나물 ) 및기타가공제품 ( 두유, 두부, 식용유등 ) 등식품으로서의이용도가높고, 또한공업용 ( 의약품, 화장품, 비누등 ) 의원료로서도널리이용되고있다. 최근콩품질에관한다양한연구가활발히이루어지고있어각용도에맞는특성이계속밝혀지고있다. 콩나물은콩이발아된상태를의미하는것으로, 현재까지이런콩나물과관련된기술개발은콩나물의재배장치분야에서주로이루어져왔으며, 콩나물재배방법을개선하거나, 특정영양성분이강화된콩나물을재배하는방법개발등이대부분이었다. 즉, 콩나물에루테인이다량함유되었음은현재까지밝혀진바가없다. 발명의내용 [0016] [0017] 해결하려는과제본발명의발명자는황반변성에대한치료및예방효과가있는새로운식물자원을탐색하던중콩나물에루테인이다량함유되어있음을확인하고본발명을완성하였다. 따라서, 본발명은콩나물추출물을유효성분으로함유하는황반변성치료및예방용약제조성물을제공하는데그목적이있다

5 [0018] 또한, 본발명은콩나물분말또는콩나물추출물을유효성분으로함유하는황반변성개선및예방용건강식품 을제공하는데그목적이있다. [0019] [0020] 과제의해결수단상기한목적을달성하기위한일례로서본발명은, 콩나물추출물을포함하여이루어지는황반변성치료및예방용약제조성물을특징으로한다. 상기콩나물추출물은다음화학식 1로표시되는루테인을유효성분으로함유하는것을특징으로한다. 화학식 1 [0021] [0022] [0023] [0024] [0025] [0026] [0027] [0028] [0029] [0030] [0031] [0032] 상기한목적을달성하기위한다른일례로서본발명은, 콩나물분말또는콩나물추출물을포함하여이루어지는황반변성개선및예방용건강식품을특징으로한다. 이하, 본발명의콩나물추출물을포함하는황반변성치료및예방용조성물을구체적으로설명한다. 먼저, 본발명의명세서및특허청구범위에사용된 황반변성 은몇몇황반변성질환이특정한연령군에서더욱흔하지만, 환자의연령에관계없는모든형태의황반변성질환을포함하는것으로해석되어야할것이다. 황반변성의원인은유전성, 물리적외상, 당뇨, 영양실조같은질환, 세균성감염등을다양하게포함하나이에한정되지않는다. 본발명의콩나물추출물을제조하는방법은다음과같다. 먼저, 발아되어자엽과하배축으로구성되는콩나물을건조시키고분쇄하여분말을만들고, 이를아세톤에침지하고여과하여얻은여액을감압농축하여아세톤을제거한콩나물추출물을얻는다. 콩나물은콩이발아된것으로자엽과하배축을포함하여이루어진것으로, 콩이발아후자엽과하배축이분리된시점부터의콩나물을사용할수있으며, 바람직하기로는발아후 2일내지 20일경의콩나물을사용하는것이루테인수득측면에서바람직하다. 콩의품종에따라다소차이가있으나, 루테인은건조시킨콩나물 1g에 2 내지 60μg범위로포함되어있으며, 전체콩나물중자엽에 80 % 이상이함유되어있으며, 자엽에포함된루테인은통상 2 내지 100 μg /g 수준이다. 따라서, 본발명에서는콩나물의자엽이나하배축또는자엽과하배축을함께사용할수있으며, 자엽을분리하여사용할경우루테인을고효율로얻을수있을것이다. 상기콩나물은통상적인콩나물재배방법에의하여재배된것을사용할수있으며, 콩의종실을물에침지하고상온다습이유지되는암상태에서간헐살수하여발아시켜콩나물을얻는다. 루테인은탄소가 40개, 수소가 56개가결합되어있으나, 소수의하이드록실기 (OH) 만포함되어있는구조적특징에의하여지용성을나타낸다. 따라서, 물과같은완전극성용제에는전혀용해되지않으므로, 극성혹은비극성유기용제를추출용매로사용하는것이좋다. 상기한극성혹은비극성유기용제로는탄소수 2 내지 5의저급알콜, 아세톤, 아세토니트릴, 에칠아세테이트, 클로로포름, 디클로로메탄, 에칠에테르, 크실렌및헥산등과같은유기용제를사용할수있다. 상기유기용제로서알콜혹은아세토니트릴과같이극성이 5 내지 6 수준의극성유기용제에는비교적잘용해되는특성을나타내지만, 이들용제의경우당을포함한다양한극성물질에대한용해도가워낙뛰어나므로상기한극성유기용제를사용하는경우에는루테인외에당, 플라보노이드, 배당체및단백질을포함한다른극성 - 5 -

6 물질까지포괄적으로추출되는경향이다소있다. [0033] [0034] [0035] [0036] [0037] [0038] [0039] [0040] [0041] [0042] [0043] [0044] 또한상대적으로중간극성혹은비극성의특성을나타내는에칠아세테이트, 클로로포름, 부탄올, 프로판올, 디클로로메탄, 에칠에테르, 크실렌및헥산과같은유기용제를사용할경우지용성의특성을나타내는루테인도잘추출할수있지만, 루테인보다더낮은극성을나타내는클로로필화합물, 페오피틴유도체, 알파및베타카로틴을포함한카로틴화합물, 지질등과같이루테인보다더낮은극성을나타내는물질의용해도가극히증가되어비극성물질의혼입이커지는경향이있다. 한편, 아세톤은극성의측면에서알콜류와유사한 5.1 수준을나타내지만, 식물체내에다량으로존재하는당, 배당체및단백질성분들은아세톤에대해용해도가극히부족하여아세톤을용제로사용할경우추출이잘이루어지지않으며, 소량추출된다하더라도냉침을이용하면용해도가극히낮아져침전물형태로침전되므로여과에의해제거할수있어상대적으로고순도의루테인을추출할수있는잇점이있다. 용제는콩나물분말중량대비 5 내지 20 배의중량으로사용할수있으며, 상기추출은저온의암조건추출, 상온추출, 초음파추출등의다양한방법을응용할수있다. 상기아세톤을제거한콩나물추출물을농축시킨후컬럼크로마토그래피를수행하여루테인의분획을얻고각분획을농축건고하여재용해한다음분취 HPLC를사용하여순수분리한다. 얻어진루테인의구조는 NMR, MS 등의다양한분광분석법으로동정하였으며, 그결과상기화학식 1과같은구조를가지는루테인을얻었으며, 이는공지의물질이다. 상기루테인은식물체내에서는항산화효과및식물체를자외선으로부터보호하는역할을수행하며, 인간에게는눈의황반및수정체의주요성분으로눈의건강과시력을증진시키는물질로널리알려져있다. 또한, 루테인의섭취량에따라혈청내루테인의농도에따라황반색소의밀도가영향을받게되며, 루테인의섭취에의하여황반색소의밀도가증가될경우시력의개선은물론, 특히황반변성이진행된상태에서도식이로서루테인의함량을증가시킬경우황반색소의생성을자극하여황반변성의진행을저해시킬수있다는보고가있다. 한편, 본발명에서는콩나물에상기루테인이다량함유된사실이새롭게확인되었다. 특히, 콩나물에포함된루테인은체내에서활성형인유리형으로존재함을확인하였다. 이는기존의금잔화추출물에서에스테르염상태로존재하는루테인을추출하기위하여비누화등의공정을거쳐야하는것과는달리체내에서루테인활성이바로나타나는유리형태의활성형루테인을용제를사용한추출작업에의하여간단하게수득할수있다는잇점이된다. 따라서, 콩나물을황반변성의치료나예방, 개선을위한조성물의원료로서이용할수있을것이다. 상기콩나물추출물또는화학식 1의루테인을유효성분으로포함하는황반변성치료및예방용조성물은임상투여시에경구또는비경구로투여, 예를들어정맥및동맥내, 근육내, 피하, 복강내, 점막또는국소 ( 예, 점안 ), 안구, 경피등에적용될수있다. 상기조성물은경구투여용제형, 예를들면, 정제, 트로키제 (troches), 로진지 (lozenge), 수용성또는유성현탁액, 조제분말또는과립, 에멀젼, 하드또는소프트캅셀, 시럽또는엘릭실제 (elixirs) 등으로제제화된다. 정제및캡슐등의제형으로제제화하기위해락토오스, 사카로오스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아밀로펙틴, 셀룰로오스또는젤라틴과같은결합제 ; 디칼슘포스페이트와같은부형제 ; 옥수수전분또는고구마전분과같은붕괴제 ; 스테아린산마그네슘, 스테아린산칼슘, 스테아릴푸마르산나트륨또는폴리에틸렌글리콜왁스와같은윤활유가함유된다. 캡슐제형의경우는상기에서언급한물질이외에도지방유와같은액체담체를함유한다. 또한, 본발명의조성물은비경구로투여할수있으며, 비경구투여는피하주사, 정맥주사, 근육내주사, 흉부내주사주입방식과점막, 또는국소에적용되는데, 분산제, 좌제, 분제, 에어로졸 ( 비강스프레이또는흡입제 ), 점안제, 겔, 현탁액제 ( 수성, 또는비수성액상현탁액, 수중유에멀젼또는유중수에멀젼 ), 용액제등비경구투여에적합한액상투여형태등에의한다. 비경구투여용제형으로제제화하기위해서는상기조성물을안정제또는완충제와함께물에서혼합하여용액으로제조하고이는앰플또는바이알의단위투여형으로제제화될수있다. 본발명의콩나물추출물또는화학식 1의루테인의유효투입량은환자의나이, 신체적조건, 몸무게등에의해다양화될수있지만, 일반적으로성인환자체중 1 kg 당 1 내지 20 mg/ 일이고, 바람직하기로는 5 내지 10 mg/ 일이며, 의사또는약사의판단에따라일정시간간격으로 1 일수회, 바람직하기로는하루 2 회내지 3 회 - 6 -

7 분할투여될수있다. [0045] [0046] [0047] [0048] 또한, 본발명의콩나물추출물또는상기화학식 1로표시되는루테인은식용되는콩나물로부터분리동정되었으므로인체에안전하여식품에첨가하여사용하기에적합하다. 한편, 콩나물은황반변성개선및예방효과를갖는건강식품의원료로사용될수있으며, 이때콩나물은콩나물분말, 콩나물추출물의형태로사용될수있다. 상기콩나물분말또는콩나물추출물을건강식품중에포함시킬경우총중량중 0.01 내지 50 %(w/w), 바람직하기로는 1 내지 30 %(w/w) 범위로사용할수있을것이다. 즉, 통상적인기호성식품즉, 라면, 생면등의면류, 두부, 시리얼, 빵류, 츄잉껌, 사탕, 과자류등에첨가하여통상적으로알려진방법에의하여각종식품을제조할수있고, 식용가능한식품첨가물로서적용할수있으며, 또한, 정제, 과립제, 환제, 경질캅셀제, 연질캅셀제또는액제제형등일반적인제형으로제형화될수있으며, 생즙, 파우치, 음료, 또는다류로제조될수있고, 상기한성분이외에다른성분은제형에따라당업자가적의하게선택하여배합할수있다. [0049] [0050] 발명의효과상기한본발명에의하면, 콩의발아상태인콩나물을새로운루테인의원천으로사용할수있는효과를기대할수있다. 또한본발명에의하면, 콩을종자상태로서주요영양적기능으로사용하는것외에, 발아시킨콩나물상태로서인체에유익한다양한생리활성물질이포함된것을확인하고, 이를활용할수있으므로콩의용도를더욱다양화할수있는효과를기대할수있다. [0051] 도면의간단한설명 도 1 은콩을발아시킨콩나물의사진이다. 도 2는콩나물추출물의 HPLC 분석크로마토그램을나타낸것이다. 도 3은콩나물추출물에서분리한루테인화합물의 1 H-NMR 스펙트럼을나타낸것이다. 도 4는콩나물추출물에서분리한루테인화합물의질량분석스펙트럼을나타낸것이다. 도 5는콩나물추출물에서분리한루테인화합물의 UV-VIS. 스펙트럼을나타낸것이다. [0052] 발명을실시하기위한구체적인내용 이하, 본발명을실시예등에의하여구체적으로설명하겠는바, 본발명이다음실시예등에의하여한정되는 것은아니다. [0053] [0054] 실시예 1. 콩나물재배콩나물은콩을플라스틱콩나물재배용기에넣어 20 물에 4시간침지한후온도 20, 습도 80% 의암 ( 暗 ) 상태에서재배하였다. 콩나물을재배하는동안타이머가달린자동살수장치를이용하여물을 4시간마다 3분씩위에서살수하여콩나물을재배하였다. [0055] [0056] 실시예 2. 콩나물추출물의제조상기실시예 1의방법에의하여풍산나물콩 500g을시료로하여 10일동안콩나물로재배하고, 재배된콩나물은 -80 냉동고에넣어냉동시킨후동결건조하고, 분쇄한후 60 mesh 체로통과시켜분리통과된콩나물분쇄시료를이용하여추출하였다

8 [0057] [0058] 즉, 분쇄시료 100g에아세톤 1L를첨가한후 40 조건의초음파추출기에서 30분간추출하였고, 같은방법으로 3회반복추출하였다. 추출된용액은모두합쳐 Whatman No. 2 여지를이용하여여과하였고, -20 저온고에서 24시간동안정치하면서불용성침전물을재여과하였다. 여과된아세톤추출액은 40 감압농축장치에서농축하여아세톤용매가제거된황색의콩나물아세톤추출물을제조하였다. [0059] [0060] [0061] 실시예 3. 루테인의분리및구조동정상기실시예 2에의하여얻어진콩나물추출물일부를소량의아세톤에녹이고, 다시 0.45μm의실린지필터로여과한후 HPLC로분석하였고, HPLC 분석조건은다음표 1에나타내었으며, HPLC 분석결과는도 2에나타내었다. 또한상기콩나물추출물을대상으로분취 (preparative) HPLC(Agillent 1200 series, USA) 를이용하여분리를수행하였는데, 분취 HPLC의분리조건으로컬럼은 HiQ sil C18-10 ( mm, KYA TECH, Japan) 을이용하였고, 분석파장 430nm, 분당유속 10mL, 분석용매로 A용매는 75% 메탄올, B용매는에칠아세테이트를농도구배 (0분 : 70% A, 25분 : 15% A, 26분 : 70% A, 35분 : 70% A) 로사용하였고, 시료주입량은 2mL로조절하여고순도분리를실시하였다. 분리를수행한결과황색및녹색을나타내는수종의화합물이분리되었으며, 이들분리화합물중루테인에해당하는물질에대해서는 NMR, UV-VIS 스펙트럼분석및질량분석을수행하여완전한화학 구조를해석하였다. 루테인의 1 H-NMR(300MHz, CDCl 3 ) 결과의화학적이동치분석결과는표 2 에나타내었으며, 1 H-NMR 스펙트럼은도 3 에나타내었다. 표 1 [0062] 구분 조건 컬럼 YMC AM 303 ( mm) 이동상 ( 농도구배조건 ) A : 75% MeOH, B : 100% EtOAc 파장 430nm 유속 1.0mL 주입량 20μL 온도 30 [0063] 1 H-NMR(300MHz, CDCl3 ) 스펙트럼측정결과를살펴보면 1 H- 1 H 상관관계 (correlation) 를볼때 Me-18'(1.63ppm) 과 H-3'(4.25ppm) 이지환화합물영역의앞쪽 H-2'(eq, 1.86ppm 및 ax, 1.38ppm) 양성자와상관관계가있는것을추정해볼때 5.55ppm의피크는 H-4' 으로결정할수있었고, H-7'(5.44ppm) 은 H-8'(6.15ppm) 과 H-6'(2.42ppm) 피크의 1 H- 1 H 관련시그널 (correlation signal) 에의해동정할수있었다. 아울러 H-3과 H-3' 에해당하는 2개의 2차하이드록시그룹 (hydroxy group) 의양성자는각각 4.00ppm과 4.25ppm 영역에서확인할수있었으며, 1D selective NOESY에의해 H-16/H-2ax, H-16/H-17, H-18/H-17에해당하는피크가상관관계를나타내는것으로보아 CH 3-16, CH 3-18, H-2ax, H-3이모두동일한고리에존재함을알수있었다. 또한 H-19/H-7, H-19/H-10, H- 20/H-14 피크의 NOESY 상관관계에의해하이드로카본그룹에결합된 CH 3 를동정할수있었고, 동일한방법으로 H-19' 과 H-20' 을동정하였다. 올레핀그룹 (Olefin group) 의양성자피크는 5?7ppm사이에서확인할수있었고, 특히 6.65ppm까지의다중시그널 (multiplet signal) 은 H-15/H-15'(6.65ppm), H-11/H-11'(6.63ppm), H-7/H- 7'(6.44ppm), H-12/H-12'(6.36ppm), H-14/H-14'(6.25ppm), H-8/H-8'(6.12ppm) 양성자짝에의한피크로동정하였다. 표 2 [0064] Position δ H Position δ H 1 1' - 8 -

9 2 ax 1.48 (m) 2' ax 1.38 (dd, 13, 7) eq 1.79 (m) eq 1.86 (m) (m) 3' 4.25 (m, br) 4 ax 2.05 (m) 4' 5.55 (m, br) eq 2.38 (m) 5 5' 6 6' 2.42 (d, 9.5) ov a 7' 5.44 (dd, 15.5, 10.1) ov a 8' 9 9' ov a 10' 6.15 ov a 6.14 ov a (dd, 14.3, 11.4) 11' 6.61 (dd, 15.0, 11.4) (d, 14.7) 12' 6.36 (d, 14.7) 13 13' (m) 14' 6.25 (m) (m) 15' 6.65 (m) (s) 16' 1.00 (s) (s) 17' 0.85 (s) (s) 18' 1.63 (s) (s) 19' 1.91 (s) (s) 20' 1.97 (s) [0065] [0066] 한편 H-2(1.48ppm 및 1.79ppm) 와 H-2'(1.38ppm 및 1.86ppm) 의양성자가기타올레핀그룹의양성자와다른영 역에서확인된것은 H-2 및 H-2' 의양성자가올레핀그룹의양성자와짝지움하는대신에주위에있는메틸그룹 과짝지움하기때문에 1.3?1.8ppm 부근에서확인되었다. 기타메틸기 (CH 3, H-16?H-20, H-16'?H-20') 는전형적인 메틸피크가나타나는영역인 1?2ppm 부근에서확인할수있었다. [0067] [0068] [0069] 분리물질의질량분석 [ 도 4] 및 UV-VIS. 스펙트럼 [ 도 5] 을분석한결과로볼때 m/z = 569.3, UV-VIS. 흡광스펙트럼은 λ(nm) = 426, 448, 476을나타내었다. 이상 1 H-NMR, MS 및 UV-VIS. 스펙트럼을종합적으로해석한결과분리물질은노란색을나타내며, 화학식이 C 40 H 56 O 2 = 569.3인 (all-trans)-lutein으로동정되었으며, 이는공지의물질이다. [ 화학식 1] [0070] [0071] [0072] [0073] 실시예 4. 콩나물부위에따른루테인함량확인콩나물용콩으로널리사용되는풍산나물콩을원료로하고, 상기실시예 1의방법으로콩나물을 10일간재배한후, 루테인함량을측정한결과, 전체콩나물에서는루테인이 μg /g 수준으로포함되어있음을확인하였으며, 특히자엽부분만을선별하였을경우 μg /g, 하배축만을선별하였을경우 2.12 μg /g이포함되어있음을확인하였다. 상기한결과, 콩나물의하배축부분에도루테인이일부함유되어있으나, 상당부분의루테인이콩나물의자엽부위에함유되어있는양상을확인할수있다

10 [0074] 따라서이상의결과로볼때콩나물, 특히콩나물의자엽은새로운루테인의원천으로의적용가능성이상당할 것으로판단되며, 특히, 자엽이하배축보다극히높은루테인함량을나타내므로, 함유성분의효율적활용을 위해서는자엽만의선별적활용이유리할것이다. [0075] [0076] [0077] [0078] 제제예. 1) 시럽제의제조본발명에따른콩나물추출물을유효성분으로함유하는시럽은다음과같은방법으로제조하였다. 상기콩나물추출물 (2 중량 %), 사카린, 당을온수 80 g에녹인후냉각시키고, 여기에글리세린, 감미제, 향미제, 에탄올, 소르브산및증류수로이루어진용액을제조하여혼합하였으며, 여기에물을첨가하여 100 ml가되게하였다. [0079] [0080] [0081] 2) 정제의제조본발명에따른콩나물추출물을유효성분으로함유하는정제는다음과같은방법으로제조하였다 [ 유효성분 15 mg]. 상기콩나물추출물 250 g을락토오스 175.9g, 감자전분 180 g 및콜로이드성규산 32g과혼합하고, 여기에 10 % 젤라틴용액을첨가한후분쇄해서 14 메쉬체를통과시켰다. 이것을건조시키고여기에감자전분 160 g, 활석 50 g 및스테아린산마그네슘 5 g을첨가해서얻은혼합물로정제를제조하였다. [0082] [0083] 3) 음료의제조상기콩나물추출물 500 mg을적당량의물에녹인후비타민 C, 구연산, 구연산나트륨, 올리고당을적당량가하고, 보존제로서적당량의나트륨벤조에이트를가한후에물을가하여전량을 100 ml로만들어음료용조성물을제조하였다. [0084] [0085] [0086] [0087] 4) 건강기능식품의제조본발명에따른콩나물분말을유효성분으로함유하는건강기능식품은다음과같은방법으로제조하였다. 콩나물분말 1000 mg, 비타민혼합물적량, 비타민 A 아세테이트 70 μg, 비타민 E 1.0 mg, 비타민 B mg, 비타민 B mg, 비타민 B6 0.5 mg, 비타민 B μg, 비타민 C 10mg, 비오틴 10 μg, 니코틴산아미드 1.7 mg, 엽산 50 μg, 판토텐산칼슘 0.5 mg, 무기질혼합물적량, 황산제1철 1.75 mg, 산화아연 0.82 mg, 탄산마그네슘 25.3 mg, 제1인산칼륨 15 mg, 제2인산칼슘 55 mg, 구연산칼륨 90 mg, 탄산칼슘 100 mg, 염화마그네슘 24.8 mg을통상의건강식품제조방법에따라혼합하여제조하였다. 이상에서설명한본발명은전술한실시예및첨부된도면에의해한정되는것이아니고, 본발명의기술적사상을벗어나지않는범위내에서여러가지치환, 변형및변경이가능함은본발명이속하는기술분야에서통상의지식을가진자에게명백할것이다. [0088] 부호의설명 도면에서 Chl 은클로로필을의미한다

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최민지 / 세계무역기구과 / :16:24-2 -

최민지 / 세계무역기구과 / :16:24-2 - - 2 - - 3 - - 4 - - 5 - - 6 - - 7 - - 8 - - 9 - - 10 - - 11 - - 12 - - 13 - - 14 - - 15 - - 16 - - 17 - - 18 - 안식향산안식향산나트륨안식향산칼륨안식향산칼슘 파라옥시안식향산메틸파라옥시안식향산에틸 0.6 이하 ( 안식향산으로서, 파라옥시안식향산에틸또는파라옥시안식향산메틸과병용할때에는안식향산으로서사용량과파라옥시안식향산으로서사용량의합계가